Разработка систем доставки биологически активных веществ на основе наночастиц хитозана и его производных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат химических наук Зубарева, Анастасия Александровна

• Зубарева, Анастасия Александровна
• кандидат химических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат химических наук Зубарева, Анастасия Александровна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1.Хитин и хитозан - перспективные полимеры биомедицинского назначения

1.1.1. Источники выделения, структура, основные физико-химические свойства хитина и хитозана

1.1.2. Хитозан: взаимосвязь «структура - свойства»

1.1.3.Химическая модификация хитозана и использование производных хитозана в биомедицинской области

1.1.4. Биобезопасность хитина и хитозана: токсичность, биосовместимость, биодеградируемость

1.2. Нано и микроструктур на основе хитозана для биомедицинского применения

1.2.1. Методы получения наночастиц хитозана

1.2.2. Физико-химические параметры наночастиц на основе хитозана

1.2.3. Влияние физико-химических параметров наночастиц на их взаимодействие с биологическими системами

1.3. Наночастицы хитозана как полимерные системы доставки лекарств

1.3.1. Введение биологически активных веществ (БАВ) в наночастицы

1.3.2. Контролируемое высвобождение БАВ из частиц

1.3.3. Наносистемы на основе хитозана для доставки доксорубицина

1.3.4. Наносистемы на основе хитина, хитозана и его производных для доставки

белков и пептидов

Глава 2.ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. Реагенты и растворители

2.2. Лабораторное оборудование

2.3. Подготовка коммерческого хитозана к работе

2.3.1. Очистка хитозана переосаждением

2.2.2. Определение степени дезацетилирования хитозана (СД)

2.2.3. Определение средневязкостной молекулярной массы хитозана

2.3. Кислотный гидролиз высокомолекулярного хитозана

2.4. Синтез ацилированных производных хитозана

2.4.1. Синтез гексаноил-хитозана

2.4.2. Карбоксиацилирование хитозана

2.5. Получение наночастиц на основе хитозана и его производных

2.5.1.Получение наночастиц хитозана и его производных методом ионотропного гелеобразования

2.5.2. Получение наночастиц сукциноил-хитозана (С3=80 %) методом солевого осаждения

2.5.3. Получение наночастиц, меченных флуоресцеином изотиоцианатом

2.5.4. Получение наночастиц, меченных коммерческими флуоресцентными красителями Lightning-Link Atto 488 и Link Atto 547

2.6. Введение БАВ в наночастицы

2.6.1. Теоретический расчет заряда белков и пептидов

2.6.2 Сорбция белков на наночастицы ГХ и СХ

2.6.3. Сорбция пептидов на наночастицы ГХ и СХ

2. 6.4. Введение доксорубицина в НЧГХ и НЧСХ путем сорбции

2.6.5. Включение ДОКС в процессе формирования частиц

2.7. Контролируемое высвобождение ДОКС из наночастиц СХ

2.8. Физико-химические методы исследования

Определение размеров наночастиц методом конфокальной микроскопии

Определение количества белка по методу Бредфорд

2.9. Исследование биологической активности наночастиц in vitro

2.9. 1. Анализ цитотоксичности

2.9.2. Флуоресцентное окрашивание и анализ клеток методом конфокальной микроскопии

2.9.3. Метод проточной цитометрии

2.9.4.0пределение эффективности поглощения препаратов ДОКС методом флуоресцентной спектрофотометрии

2.9.5. Разделение клеток крови в градиенте плотности

2.9.6. Гемолиз эритроцитов

2.9.7. Взаимодействие наночастиц с плазмой крови

2.10. Биологическая активность НЧСХ-ДОКС in vivo

2.11. Биораспределение систем доставки доксорубицина

2.12. Фиксация тканей и приготовление криосрезов

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Глава III Получение и физико-химические свойства наночастиц на основе хитозана и его производных

3.1.Получение наночастиц хитозана методом ионотропного гелеобразования

3.2. Стабилизация наночастиц хитозана

3.2.1. Формирование наночастиц на основе ацилированных производных хитозана методом ионотропного гелеобразования

3.2.2. Получение наночастиц из сукциноил-хитозана с различной степенью замещения

3.2.3. Физико-химические характеристики наночастиц

Определение размера наночастиц методом динамического светорассеяния

Определение размеров частиц методом атомно-силовой микроскопии

Определение размеров НЧ методом анализа траектории наночастиц (АТН)

Стабильность наночастиц

3.4.2. Взаимодействие наночастиц с кровью

3.4.2.1. Взаимодействие НЧ с белками плазмы крови

3.4.2.2. Гемолиз эритоцитов

3.4.2.3. Взаимодействие НЧСХ с лимфоцитами периферической крови

7

ГЛАВА IV. Взаимодействие наночастиц хитозана с белками и пептидами

4.1. Сорбция модельных белков на НЧГХ и НЧСХ

4.2. Сорбция модельных пептидов на НЧГХ и НЧСХ

4.3.Физико-химическая характеристика комплексов наночастиц хитозана с белками

4.3.1. Определение размера и дзета - потенциала комплексов белков с наночастицами методом ДСР

ГЛАВА У. Разработка системы доставки противоопухолевого препарата доксорубицина на основе наночастиц хитозана

5.1. Формирование комплексов наночастиц гексаноил и сукциноил хитозана с доксорубицином

5.2. Анализ противоопухолевой активности доксорубицина в составе наночастиц хитозана в условиях in vitro

5.2.1. Цитотоксическая активность доксорубицина в составе наночастиц сукциноилхитозана

5.2.2. Кинетика высвобождения ДОКС в условиях in vitro

5.2.3. Эффективность связывания НЧСХ-ДОКС с клетками различных опухолевых линий

5.2.4. Прохождение наночастиц сукциноилхитозана с доксорубицином в клетки и внутриклеточный трафик

5.3. Изучение противоопухолевой активности комплекса доксорубицина с хитозаном в модели in vivo на мышах с раком молочных желез

5.4. Биораспределение ДОКС и НЧСХ - ДОКС in vivo

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

БЛАГОДАРНОСТИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Приложение 1

Приложение 2

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка систем доставки биологически активных веществ на основе наночастиц хитозана и его производных»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы Конец XX - начало XXI века отмечены новым направлением в создании лекарственных препаратов, связанным с разработкой адресных систем доставки лекарств. На протяжении последних десятилетий активно ведутся работы по созданию систем доставки препаратов, позволяющих увеличить время циркуляции лекарства в крови, защитить его от ферментных систем организма, включить молекулы, обеспечивающие целевую доставку, что потенциально приведет к созданию лекарств нового поколения. В качестве матриц для создания таких систем используют различные материалы, главным образом биополимеры небелковой природы, поскольку они характеризуются низкой иммуногенностью. Одним из перспективных материалов для создания систем доставки лекарств является хитозан -дезацетилированное производное природного полисахарида хитина. Хитозан совместим с тканями млекопитающих, низкотоксичен, деградируется гидролазами организма до олигосахаридов и глюкозамина. Значительным преимуществом хитозана по сравнению с прочими полисахаридами является наличие реакционноспособных (гидроксо - и аминогрупп), что позволяет получать производные с необходимыми характеристиками. В полимерную матрицу на основе хитозана и его производных могут быть включены вещества различной природыбелки, пептиды, нуклеиновые кислоты, витамины, противоопухолевые препараты и др. Кроме того, в зависимости от молекулярной массы и степени модификации полимера различными заместителями, могут быть получены наночастицы с различным размером и зарядом.

Целью данной работы является получение и характеристика систем доставки биологически активных веществ на основе наночастиц модифицированного хитозана.

Для достижения данной цели нами были определены следующие основные задачи:

1) синтезировать ацилированные производные хитозана с различными характеристиками;

2) получить стабильные наночастицы на основе синтезированных производных и изучить их физико-химические свойства;

3) исследовать сорбцию модельных белков и пептидов наночастицами;

4) провести анализ биологических свойств полученных частиц;

5) разработать систему доставки противоопухолевого препарата доксорубицина на основе наночастиц модифицированного хитозана;

6) исследовать биораспределение и противоопухолевую активность доксорубицина в составе наночастиц in vitro и in vivo.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Зубарева, Анастасия Александровна

выводы

1. Синтезирован и охарактеризован ряд N - ацилированных производных хитозана с различными физико-химическими характеристиками (молекулярной массой, степенью замещения, степенью дезацетилирования).

2. Оптимизированы условия получения стабильных наночастиц на основе синтезированных производных хитозана, имеющих размер от 100 до 400 нм и дзета -потенциал от —25 до +40 мВ.

3. Исследован процесс сорбции белков и пептидов на сформированных наночастицах. Показано, что основной вклад в процесс сорбции вносят электростатические взаимодействия.

4. Изучена токсичность и гемосовместимость полученных частиц in vitro. Установлено, что наночастицы на основе хитозана и его производных являются нетоксичными и не вызывают гемолиза эритроцитов и агрегации клеток периферической крови.

5. Впервые получены и охарактеризованы системы доставки доксорубицина путем сорбции на наночастицах гексаноил - хитозана и сукциноил-хитозана). Показано in vitro, что доксорубицин сохраняет токсичность и специфическое накопление в ядрах опухолевых клеток при введении в составе наночастиц хитозана.

6. В ходе исследования in vivo получены новые данные, показывающие возможность внутривенного введения наночастиц гексаноил-хитозана и наночастиц сукциноил-хитозана. На модели рака молочных желез Wnt-1 мышей изучены биораспределение и противоопухолевая активность доксорубицина, в составе системы доставки на основе наночастиц сукциноил - хитозана. Обнаружено более эффективное накопление наночастиц, нагруженных доксорубицином, в опухолевой ткани по сравнению с контролем антибиотика.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Список работ, опубликованных по теме диссертации

Статьи:

1. Zubareva A.A., Ilyina A.V., Levov A. N., Zueva V. S., Svirshchevskaya E.V., Varlamov V. P. Protein delivery by nanoparticles formed by chitosan -N-acyl derivatives // Progress in the Chemistry and Application of Chitin and its Derivatives. 2011. V.XVI. P.61-70.

2. Свирщевская E.B., Зубарева A.A., Гриневич P.C., Решетов П.Д., Прохоров A.B., Варламов В.П., Зубов В.П. Характеристика систем доставки вакцин и лекарств на основе наночастиц N - гексаноил-хитозана // Современные вопросы дерматовенерологии, иммунологии и врачебной косметологии.2011 .Т.19. №6. С.21-28.

3. Ильина A.B., Зубарева A.A., Курек Д.В., Левов А.Н., Варламов В.П. Наночастицы на основе сукцинилированного хитозана с доксорубицином: формирование и свойства // Российские нанотехнологии. 2012 .Т.7. № 1-2 .С.46-51.

4. Свирщевская Е.В., Гриневич P.C., Решетов П.Д., Зубов В.П., Зубарева

A.A., Ильина A.B., Варламов В.П. Наноносители лекарств на основе хитозана // Биотехносфера. 2012. Т.19. №1. С. 13-20.

5. Зубарева A.A., Курек Д.В., Сизова C.B., Свирщевская Е.В., Варламов

B.П. Определение физико-химических параметров наночастиц модифицированного хитозана // Российские нанотехнологии. 2012 .Т.7. № 7-8. С.102-106.

Патент:

6. Патент РФ на изобретение № 2460532 от 10 сентября 2012 года «Препарат ускоряющий ранозаживление» авторов Богословской O.A., Рахметовой

A.A., Глущенко H.H., Овсянниковой М.Н., Ольховской И.П., Варламова

B.П., Левова А.Н., Ильиной A.B., Зубаревой A.A.

Тезисы докладов:

7. Ilyina A.V., Levov A.N., Zubareva A.A., Svirshchevskaya E.V., Zueva V.S., Tikhonov V.E.,. Varlamov V.P Protein delivery by nanoparticles formed by tVi chitosan-N-acyl derivatives // Materials of the 11 International Conference on Chitin and Chitosan & The 8th Asia-Pacific Chitin and Chitosan Symposium.Taipei.Taiwan.2009. C.71.

8. Свирщевская E.B., Зубарева A.A., Ильина A.B., Алексеева Л.Г., Решетов П.Д., Зуева B.C., Варламов В.П. Доставка белков в клетки наночастицами хитозана // Материалы конференции Bionano'09 Химическая биология фундаментальные проблемы бионанотехнологии. Новосибирск. 2009. С.123.

9. A.A. Zubareva, A.V. Ilyina, E.V. Svirshevskaya, L.G. Alekseeva, A.V. Prokhorov, V.P. Varlamov Chitosan nanoparticles form complexes with proteins // European Journal of Immunology. Supplement. 2009.Vol. 39.V. SI. PD 04/11.

Ю.Зубарева A.A., Ильина A.B., Свирщевская Е.В., Алексеева Л.Г., Прохоров A.B., Варламов В.П.Формирование комплексов белков с наночастицами модифицированного хитозана // Материалы IV Российского симпозиума Белки и пептиды. Казань, 23-27 июня 2009. С. 150.

11.Zueva V.S., Zubareva A., Zubkov D., Par'igina N., Il'ina A.V., Svirshchevskaya E.V. Chitosan nanoparticles form complexes with proteins via electrostatic interaction. Abstracts of 14th International Congress of Immunology. Kobe. Japan. August 22-27. 2010.

12.Зубарева A.A., Зуева B.C., Парыгина H.A., Зубков Д.А., Ильина A.B. Свирщевская Е.В. Наночастицы хитозана как перспективный вектор для доставки белков в клетки эпителиальной природы // Материалы Десятой международной конференции Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана РосХит 2010. Нижний Новгород. 29 июня-2 июля 2010 года. С. 191-195.

13.Zubareva A.A. Preparation of N- Hexanoyl Chitosan Nanoparticles and Their Interaction With Protein // Materials of XVI Seminar and Workshop New Aspects of the Chemistry and Applications of Chitin and its Derivatives. Poland. Zakopane. 22-24 September 2010. P. 1-4.

14.Zubareva A.A., Zueva V.S., Parygina N.A., Il'ina A.V., Svirshchevskaya E.V., Varlamov V.P. FITC labeling of proteins increase binding capacity of chitosan nanoparticles. Abstracts of ESF-UB Conference: Nanomedicine: Reality Now and Soon. Sant Feliu de Guixols. Spain. 23-28 October 2010.

15.Зубарева A.A., Ильина A.B., Овчинникова E.B., Свирщевская Е.В., Варламов В.П. Формирование наночастиц хитозана с доксорубицином // Тезисы XXIII международной зимней школы "Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии". Москва 710 февраля 2011 года. С. 146.

16.Svirshchevskaya Е., Alekseeva L., Prokhorov A., Dementieva D., Zubareva A., Brovman G., V.Zubov. Synthetic Peptide Vaccines Combining B-cell Epitopes from the Target Antigen and Universal Human T-cell Epitopes from Enzluenza Virus: Application for Allergy and Autoimmunity// Abstracts of 3 rd Annual World Vaccine Congress (WCV-2011) in Beijing. China. March 23-25. 2011. P.210.

17.Zubareva A.A., Il'ina A.V., Svirshchevskaya E.V., Varlamov V.P. N-Hexanoyl-chitosan nanoparticles: size analysis // Materials of 10 th International conference of the European chitin society.EUCHIS'l 1. Saint-Petersburg .Russia. May 20-24.2011. P. 169.

18.Svirshchevskaya E.V., Zubareva A.A., Il'ina A.V., Varlamov V.P. Structure and functions of nanogels based on differently charged chitosan derivatives// Materials of 10 th International conference of the European chitin society.EUCHIS'l 1. Saint-Petersburg .Russia. May 20-24.2011. P.37.

19.Прохоров A.B., Зубарева A.A., Свирщевская E.B. Индукция гуморального ответа к аутоантигену с помощью В-эпитопа аутоантигена и Т-эпитопа чужеородного антигена // Материалы XIV всероссийского научного форума «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге». Санкт-Петербург.23-26 мая 2011. С.331.

20.Зубарева А.А., Свирщевская Е.В., Парыгина Н.А., Варламов В.П. Исследование взаимодействия наночастиц на основе модифицированного хитозана с белком Asp f2 и его пептидами// Материалы пятого всероссийского симпозиума « Белки и пептиды». Петрозаводск.8-12 августа 2011 года. С. 303.

21.Зубарева А.А., Овчинникова Е.В., Ильина А.В., Генералов А.А., Зайцев С.Ю., Свирщевская Е.В., Варламов В.П. Разработка систем доставки доксорубицина на основе модифицированных хитозанов // Материалы 2-ой Международной школы «Наноматериалы и нанотехнологии в живых системах. Безопасность и наномедицина». Пансионат «Заря». Московская область. 19-24 сентября, 2011 г., С.76.

22.Зубарева А.А., Ильина А.В., Решетов П.Д., Гриневич P.C., Таций О.А. ,Меерович. И.Г., Свирщевская Е.В. Анализ биораспределения систем доставки доксорубицина на основе модифицированного хитозана // X чтения памяти академика Юрия Анатольевича Овчинникова. 14-17 ноября 2011 года. С.67.

23.Зубарева А.А., А.В. Ильина, Свирщевская Е.В., Варламов В.П. Исследование высвобождения доксорубицина из наночастиц сукциноил-хитозана // Материалы Международной научно-практической конференции «Фармацевтические и медицинские биотехнологии». Москва. 20-22 марта 2012 г.С.266-267.

24.Varlamov V.P., Il'ina A.V, Lopatin S.A., Levov A.N., Kurek D.V., Zubareva A.A. Chitin and chitosan new prospects and old problems // Bionanotox 2012 "Biomaterials and bionanomaterials: recent problems and safety issues». Heraclion. Crete. Greece 6-13 may. 2012. P.24.

25.Зубарева A.A., Свирщевская E.B., Меерович И.Г., Ильина А.В., Прохоров А.В., Варламов В. П. Исследование функциональной активности и биораспределения системы доставки доксорубицина на основе наночастиц сукциноил - хитозана // Материалы XI международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана», Мурманск 25-30 июня 2012, С. 332-339.

26.Zubareva A., Grinevich R., .Il'ina A.V, Svirshchevskaya E.V., Varlamov V.P.Biodegradation and functional activity of doxorubicin loaded on succinoyl chitosan nanoparticles // Colloids and Nanomedicine 2012. Amsterdam. Netherlands. 15-17 July 2012. P.125.

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор выражает искреннюю благодарность научным руководителям к.б.н. Свирщевской Е.В., к.х.н. Ильиной A.B. за ценные советы и помошь в проведении и планировании экспериментов, директору Центра «Биоинженерия» РАН академику Скрябину К. Г. и д.х.н., профессору Варламову В.П. за предоставленную возможность сделать свои первые шаги в науке, к.х.н. Лопатину С.А, к.х.н. Левову А.Н., к.х.н. Курек Д.В., аспирантам Щербининой Т.С., Прохорову A.B., Зубкову Д.А. за поддержку и оказанное внимание, к.х.н. Сизовой С.В, к.б.н. Никитину Н. А. и аспиранту Трифоновой Е.А. за помощь и предоставленную возможность анализировать размер частиц методами динамического светорассеяния и анализа траектории наночастиц.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Природные полисахариды хитин и хитозан называют биологически активными соединениями XXI века. За последние годы исследование хитина и хитозана стало отдельной отраслью науки, называемой «хитинологией». Важной особенностью этих биополимеров является практически неограниченные возможности направленной модификации, что позволяет получать структуры любого молекулярного веса путем гидролиза (химического или ферментативного) с разнообразными функциями с изменением заряда, гидрофобности и др.

Данное исследование посвящено наноструктурированным хитозанам, которые, несомненно, можно назвать одной из форм модификации хитозановой молекулы. Данные структуры являются широко изучаемыми, прежде всего из-за возможности получения направленных систем доставки (НСД) лекарств с контролируемыми параметрами (размером, дзета-потенциалом, гидрофобностью), в результате чего в такие системы могут быть загружены различные биологически активные вещества (БАВ) с высокой эффективностью. На основе хитозана возможно получение НСД с рН-зависимым высвобождением БАВ, что может быть использовано для разгрузки препаратов в месте целевого действия.

Получение стабильных наночастиц является одной из основных проблем при разработке НСД на основе хитозана. Показано, что склонные к агрегации хитозановые наночастицы могут быть стабилизированы при введении гидрофобных заместителей. Установлено, что среди различных ацилированных производных стабильные наночастицы формируются из ГХ, характеристики которых можно варьировать при изменении молекулярной массы полимера, а также степени замещения гидрофобным заместителем. Наночастицы с высоким поверхностным зарядом обладают более выраженными мукоадгезивными свойствами, что имеет преимущество для доставки лекарств мукозальным путем. С другой стороны, известно, что для парентерального введения такие частицы представляют группу повышенного риска и способствуют агрегации форменных элементов крови.

В данной работе частицы нагружали препаратом доксорубицином с помощью сорбции с целью избежать использование токсичных сшивающих агентов (глутаровый альдегид, карбодиимид). Эффективность сорбции БАВ была различной для двух типов частиц, полученных на основе гексаноил- и сукциноил-хитозана. Мы установили, что ведущий вклад в процесс сорбции БАВ на наночастицы вносят электростатические взаимодействия. Это особенно ярко выражено в случае молекул с небольшой молекулярной массой (доксорубицина, коротких пептидов), взаимодействие с белками носит более сложный характер и обусловлено комплексом взаимодействий (гидрофобных, электростатических, водородных связей).

Следующая задача состояла в выяснении влияния включения БАВ в наночастицы на биологическую активность. Модельной молекулой служил противоопухолевый препарат ДОКС. В тестах in vitro на токсичность и методом проточной цитометрии показано, что токсичность ДОКС заключенного в носитель и его захват опухолевой клеткой, незначительно снижается, что связано с более медленным высвобождением БАВ из НЧСХ. Также было продемонстрировано, что высвобождение ДОКС из носителя более эффективно при кислом рН, что является подходом к более селективной доставке в опухоль, рН которой ниже, чем в здоровых тканях.

Мы показали, что сорбция ДОКС на наночастицы не приводит к длительному удержанию ДОКС в составе частиц. ДОКС высвобождается, по-видимому, в результате гидролиза хитозана и попадает в ядра клеток уже после 2-х часов инкубации с клетками в культуре in vitro. Аналогичная картина локализации ДОКС в ядрах клеток нами была выявлена на криосрезах ткани опухоли мышей, получавших ДОКС в составе частиц. Высокая активность ДОКС, заключенного в НЧСХ, а так же его рН-зависимое высвобождение явились предпосылками для дальнейших испытаний in vivo.

Нами были проведены исследования эффективности ДОКС при доставке наночастицами СХ на мышах с перевиваемой опухолью молочной железы, вызванной гиперэкспрессией гена Wnt-1. В ходе испытаний ш vivo не было обнаружено статистически достоверных различий между действием свободного ДОКС и ДОКС в составе наночастиц. Как свободный ДОКС, так и ДОКС в составе носителя оказывали сравнимый положительный противоопухолевый эффект, регистрируемый по уменьшению объема опухоли. Острая токсичность ДОКС, определяемая по весу экспериментальных животных, была низкой и сравнимой для ДОКС и НЧСХ-ДОКС, что, вероятно, связано с низкой дозой вводимого противоопухолевого препарата.

Согласно литературным данным, лекарства заключенные в НЧ размером от 100 до 400 нм ,способны избирательно накапливаться в опухоли благодаря эффекту повышенной проницаемости сосудов и нарушению лимфатического дренажа опухоли (EPR-эффект). Для исследования биораспределения полученных нами НЧСХ-ДОКС использовали метод экстракции ДОКС из органов (печени, почек, опухоли, селезенки). Количество ДОКС в экстрактах органов оценивали по флуоресценции при длине волны возбуждения 490 нм и рассчитывали в нанограммах ДОКС на орган и на грамм ткани органа. По распределению ДОКС в тканях препарат накапливался преимущественно в печени и опухоли. Из достоверных отличий обнаружили также большее содержание ДОКС в почках при доставке в составе наночастиц. Полученные данные показывают, что использование системы доставки может способствовать накоплению лекарства в опухоли, но основным очагом локализации является печень.

Наличие функциональных групп в молекуле хитозана делает возможным присоединение различных целевых молекул (фолиевой кислоты, гликозилированнных белков, антител). Работы по созданию такой НСД с направляющими вектором будут проведены в дальнейшем.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Зубарева, Анастасия Александровна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Хитин и хитозан: природа, получение и применение / Пер. с испанского; под ред. В.П.Варламова, С.В. Немцева, В.Е. Тихонова. М.:РХО. 2010. 292 с.

2. Хитин и хитозан. Получение, свойства и применение / под ред. К.Г. Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П. Варламова. М.: Наука, 2002. 368 с.

3. Комплексная технология хитина и хитозана из панциря ракообразных / С.В. Немцев. М. ВНИР0.2006.-134 с.

4. Erlich Н., Maldonado М., Spindler K.D., Eckert С., Hanke Т., Born R., Goebel С., Simon P., Heinemann S., Worch H. First evidence of chitin as a component of the skeletal fibers of marine sponges. Part I. Verongidae (demospongia: Porifera) // J. Exp. Zool. (Mol.Dev.Evol.). 2007. V.308B. P.347-356.

5. Erlich H., Shiaparelli S., Ereskovsky A., Schupp P., Born R., Worch H., Bazhenov V.V. , Kurek D., Varlamov V., Vyalikh D., Kummer K., Sivkov V.V., Molodtsov S.L., Meissner H., Richter G., Steck E., Richter W., Hunoldt S., Kammer M., Paasch S., Krasokhin V., Patzke G., Brunner E. Tree dimensional chitin-based scaffords from Verongida sponges (Demospongiae: porifera). Part I. Isolation and Identification of Chitin // International Journal of Biological Macromolecules. 2010. V.47. P. 132-140 .

6. Tolaimate A., Desbrieres J., Rhazi M., Alagui A., Vincendon M., Votteron P. On the influence of deacetilation process on the physicochemical characteristics of chitosan from squid chitin // Polymers. 2001. V.41. №7. P. 2463-2469.

7. Rinaudo M. Chitin and chitosan: Properties and applications // Prog. Polym. Sci. 2006. V.31 P. 603-632.

8. Zhang M., Haga A., Seriguchi H., Hirano S. Structure of insect chitin isolated from beetle larva cuticle and silkworm {Bomyx mori) pupa exuvia // Biological Macromolecules. 2000. V.27. №1. P.99-105.

9. No H.K., Meyers S.P., Muzzarelly R.A.A., Peter M.M.G. Preparation of chitin and chitosan // Chitin handbook. Italy: Atec.1997. P.475^189.

10. Chang К. L.B., Tsai G., Lee J., Fu W.R. Heterogeneous N - deacetylation of chitin in alkaline solution // Carbohydrate Research. V. 303. №3. P. 327-332.

11. I.Tsigos, A. Martinou , K.Varum Enzymatic deacetylation of chitinos substrates employing chitin deacetylases // Advan. Chitin. 1995. V.100. P.59-69.

12. Tokuyasu K.; Ohnishi-Kameyama M.; Hayashi K. Purification and characterization of extracellular chitin deacetylase from Colletotrichum lindemuthianum. //Biosci. Biotech. Biochem. 1996. V. 60. P. 1598-1603.

13. Blair D.E.; Hekmat O.; Schuttelkopf A.W.; Shrestha В.; Tokuyasu K.; Withers S.G.; van Aalten D.M.F. Structure and mechanism of chitin deacetylase from the fungal pathogen Colletotrichum lindemuthianum. Biochemistry. 2006 № 45. P. 9416-9426.

14. Zhao Y., Park R.-D., Muzzarelli R. A.A. Chitin deacetylases: properties and applications // Mar. Drugs. 2010. № 8. P. 24-46.

15. Немцев C.B., Ильина A.B., Шинкарев С.М., Албулов А.И., Варламов В.П. Получение низкомолекулярного водорастворимого хитозана // Биотехнология. 2001. №6. С.37^42.

16. Alameh М., DeJesus D., Jean М., Darras V., Thibault М., Lavertu М. D Buschmann M., Merzouki A. Low molecular weight chitosan nanoparticulate system at low N:P ratio for nontoxic polynucleotide delivery // International Journal of Nanomedicine. 2012. №7. P.1399-1414.

17. Duy N. N., Phu D.V., Anh N. T. ,Hien N.Q. Synergistic degradation to prepare oligochitosan by g-irradiation of chitosan solution in the presence of hydrogen peroxide // Radiation Physics and Chemistry. 2011. V. 80.P.848-853.

18. Kasaai M. R., Arul J., Charlet G. Fragmentation of chitosan by ultrasonic irradiation // Ultrasonics Sonochemistry 2008.V.15 P.1001-1008.

19. Holme H.K., Foros H., Pettersen H., Dornish M., Smidsrod O. Thermal depolymerization of chitosan chloride // Carbohydrate Polymers.2001 .V.46. № 3. P. 287-294.

20. Kasaai M.R., Chin S.L., Arul J. Kinetic aspects of chitosan fragmentation by femtosecond laser // Journal of photochemistry and photobiology A: Chemistry. 2003. V.159. №.3. P.207-211.

21. Hai L., Deip Т., Nagasawa N., Yoshii F., Kume T. Radiation depolimerization of chitosan to prepare oligomers // Nuclear instruments and methods in physics research B. 2003.V.208. P.466^170.

22. Chen Q., Xiao W., Zhou L., Wu Т., Wu Y. Hydrolysis of chitosan under microwave irradiation in ionic liquids promoted by sulfonic acid-functionalized ionic liquids // Polymer Degradation and Stability. 2012.V.97. P.49-53

23. Luo W.bo., Han Z., Zeng X.-an, Yu S.-J., Kennedy J. F. Study on the degradation of chitosan by pulsed electric fields treatment // Innovative Food Science and Emerging Technologies. 2010. V.ll.P. 587-591.

24. Prasertsung I., Damrongsakkul S., Terashima C., Saito N., Takai O. Preparation of low molecular weight chitosan using solution plasma system // Carbohydrate Polymers .2012.V.87. P. 2745-2749.

25. Ильина A.B., Ткачева Ю. В., Варламов В.П. Деполимеризация высокомолекулярного хитозана ферментным препаратом Целловеридин Г20х // Прикладная биохимия и микробиология. 2002. Т.38. №2. С132-135 .

26. Xia W., Liu P., Li J. Advance in chitosan hydrolysis by non-specific cellulases // Bioresource Technology. 2008 V.99. P. 6751-6762.

27. Черкасова E. И., Алексеева M. Ф., Пастухов M.O. Деструкция хитозана ферментным комплексом из Carica papaya II Биотехнология. 2005. №2. С.73-81 .

28. Н.В.Журавлева, П.А.Лукьянов Хитинолитические ферменты: источники, характеристика и применение в биотехнологии //Вестник ДВО РАН. 2004. № 3 С.76-86.

29. Kim К., H.-S. Ji Effect of chitin sources on production of chitinase and chitosanase by Streptomyces griseus HUT 6037 II Biotechnol. Bioprocess Eng. 2001.№6.P. 18-24.

30. Sini T.K., Santhosh S., Mathew P.T. Study on the production of chitin and chitosan from shrimp shell by using Bacillus subtilis fermentation // Carbohydr. Res. 2007.V.342 (16) P.2423-2429.

31. Cho Y.W., Jang J., Park C.R., Ko S.W. Preparation and solubility in acid and water of partially deacetylated chitins // Biomacromolecules. 2000.№ 1.609614.

32. Pillai C.K.S., Paul W., Sharma C. P. Chitin and chitosan polymers: Chemistry, solubility and fiber formation // Progress in Polymer Science.2009. V. 34 .№7. P. 641-678

33. Chatelet C., Damour O., Domard A. Influence of the degree of acetylation on some biological properties of chitosan films // Biomaterials. 2001. № 22.P. 261-268.

34. Khan T.A., Peh K.K., Chang H.S. Reporting degree of deacetylation values of chitosan: the influence of analytical methods // J. Pharm. Sci. 2002.№ 5.P. 205212.

35. Aranaz I., Mengibar M., Harris R., Panos I., Miralles B., Acosta N., Galed G., Heras A. Functional characterization of chitin and chitosan // Curr. Chem. Biol. 2009. № 3.P.203-230.

36. Kurita K., Kaji Y., Mori T., Nishiyama Y.. Enzymatic degradation of betachitin: susceptibility and the influence of deacetylation // Carbohydr. Polym. 2000 V. 42.P. 19-21.

37. Ren D., Yi H., Wang W., Ma X.The enzymatic degradation and swelling properties of chitosan matrices with different degrees of N-acetylation // Carbohydr. Res. 2005.V.340.№i5.p. 2403-2410.

38. Aiba S. Studies on chitosan: 4. Lysozymic hydrolysis of partially N-acetylated chitosans // Int. J. Biol. Macromol. 1992 № 14. P.225-228.

39. Huang M., Khor E., Lim L.Y. Uptake and cytotoxicity of chitosan molecules and nanoparticles: effects of molecular weight and degree of deacetylation // Pharm. Res. 2004. №21. P.344-353.

40. Tomihata К., Ikada Y. In vitro and in vivo degradation of films of chitin and its deacetylated derivatives // Biomaterials.1997. №18. P.567-575.

41. Kofuji K., Qian C.-J., Nishimura M., Sugiyama I., Murata Y., Kawashima S. Relationship between physicochemical characteristics and functional properties of chitosan // Eur. Polym. J. 2005.V.41. P. 2784-2791.

42.Kean T., Thanou M. Biodégradation, biodistribution and toxicity of chitosan //Advanced Drug Delivery Reviews. 2010 .V.62. P. 3-11.

43. Dong W., Han В., Feng Y.,Song F., Chang J., Jiang H., Tang Y., Liu W. Pharmacokinetics and Biodégradation Mechanisms of a Versatile Carboxymethyl Derivative of Chitosan in Rats: in vivo and in vitro evaluation // Biomacromolecules.2010.№ 11.P. 1527-1533

44. Lehr C.M., Bouwstra J.A, Schacht E.H., Junginger H.E. In vitro evaluation of mucoadhesive properties of chitosan and some other natural polymers // Int. J. Pharm. 1992. V.78. P.43-48.

45. He P., Davis S.S., Ilium L. In vitro evaluation of the mucoadhesive properties of chitosan microspheres // Int. J. Pharm. 1998. V. 166. P. 75-88.

46. Куликов С. Н.Тюрин Ю. А., Фассахов Р. С., Варламов В. П Антибактериальная и антимикотическая активность хитозана: механизмы действия и роль структуры : обзор // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.2009.№5.С.91-97.

47. Герасименко Д. В. Ферментативное получение низкомолекулярного хитозана и изучение его антибактериальных свойств // Дис. канд. биол. наук по специальности 03.00.23 «Биотехнология» . 2005 .133 с.

48. Park P.J., Je J.Y., Kim S.K. Free radical scavenging activities of differently deacetylated chitosans using an ESR spectrometer // Carbohydr. Polym. 2004 V.55.P. 17-22.

49. Xing R., Liu S., Guo Z., Yu H., Wang P., Li C., Li Z., Li P. Relevance of molecular weight of chitosan and its derivatives and their antioxidant activities in vitro //Bioorg. Med. Chem. 2005.№ 13. P.1573-1577.

50. Бакулин А.В. Получение и исследование комплексов хитозана и его производных с белками и меланинами // Дис. канд. техн. наук по специальности 03.00.23 «Биотехнология» .2011 .131 с.

51. Park P.J., Je J.Y., Jung W.K., Ahn C.B., Kim S.K. Anticoagulant activity of heterochitosans and their oligosaccharide sulfates // Eur. Food Res. Technol. 2004 V.219 P.529-533.

52. Rao S.B., Sharma C.P. Use of chitosan as a biomaterial: studies on its safety and hemostatic potential // J. Biomed. Mater. Res. 1997. V.34.P.21-28.

53. Klokkevold P.R., Fukayama H., Sung E.C., Bertolami C.N. The effect of chitosan (poly-N-acetyl glucosamine) on lingual hemostasis in heparinized rabbits // J. Oral Maxillofac. Surg. 1999.V.57. P.49-52.

54. Ильина A.B., Варламов В.П., Ермаков Ю.А., Орлов В.Н., Скрябин К.Г. Хитозан - природный полимер для формирования наночастиц // Доклады Академии Наук, 2008.Том 421.№2.С.1-3.

55. Xu Y., Du Y. Effect of molecular structure of chitosan on protein delivery properties of chitosan nanoparticles // International Journal of Pharmaceutics. 2003. V. 250. P. 215-226

56. Zhang J., Guang X., Gang C, Sun. Z., Huang L., Cheng X. J. Effect of molecular weight on the oleoyl-chitosan nanoparticles as carriers for doxorubicin // Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 2010.V.77 P. 125-130

57. M.J. Santander-Ortega, J.M. Peula-Garcíac, F.M. Goycoolea, J.L. Ortega-Vinues Chitosan nanocapsules: effect of chitosan molecular weight and acetylation degree on electrokinetic behaviour and colloidal stability // Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 2011. V.82 P.571-580.

58. Harish Prashanth K.V., Tharanathan R.N. Chitin/chitosan: modifications and their unlimited application potential - an overview // Trends in Food Science & Technology .2007. V. 18. №. 1. P. 117-131.

59. Mourya V.K., Inamdar N.N. Chitosan-modifications and applications: opportunities galore // Reactive& Functional Polymers.2008. Vol. 68. P. 10131051.

60. Cooney M.J., Petermann J., Lau, C., Minteer S.D. Characterization and evaluation of hydrophobically modified chitosan scaffolds: towards design of enzyme immobilized flow-through electrodes // Carbohydr. Polym. 2009. V. 75. P. 428-435.

61.Klotzbach T., Watt M.; Ansari Y., Minteer S.D. Effects of hydrophobic modification of chitosan and Nafion on transport properties, ion-exchang capacities, and enzyme immobilization // J. Membr. Sci. 2006.V. 282 P. 276-283.

62. Huang M., Liu L., Zhang G., Yuan G. , Fang Y. Preparation of chitosan derivative with polyethylene glycol side chains for porous structure without specific processing technique // Int. J. Biol. Macromol. 2006. V. 38 P.191-196.

63. Liu L., Xu X., Guo S., Han W. Synthesis and self-assembly of chitosan based copolymer with a pair of hydrophobic/hydrophilic grafts of polycaprolactone and polyethylene glycol) // Carbohydr. Polym. 2009 V.75 P. 401-407.

64. Opanasopit P., Ngawhirunpat T., Chaidedgumjora A., Rojanarata T. , Apirakaramwong A. , Phongying S. Incorporation of camptothecin into N-phthaloyl chitosan-g-mPEG self-assembly micellar system // Eur. J. Pharm.2006. V.64. № 3. P.269-276.

65. Yao Z., Zhang C., Ping Q., Yu L. A series of novel chitosan derivatives: Synthesis, characterization and micellar solubilization of paclitaxel // Carbohydr. Polym. 2007. V.68. P. 781-792.

66.Ke W.Y., Xin R.L. , Zhuo L.Y. , Ping Z.L. , Wang F., Liu Y. Novel polyion complex micelles for liver-targeted delivery of diammonium glycyrrhizinate: In vitro and in vivo characterization // J. Biomed. Mater. Res A. 2009. V.88. P. 140-148.

67.Jeong Y.I. , Kim S.H. , Jung T.Y. , Kim I.Y. , Kang S.S. , Jin Y.H. Polyion complex micelles composed of all-trans retinoic acid and poly (ethylene glycol)-grafted-chitosan // J. Pharm. Sci. 2006.V. 95.P. 2348-2360 .

68.Bae K.H., Moon C.W. , Lee Y. , Park T.G. Intracellular delivery of heparin complexed with chitosan-g-poly(ethylene glycol) for inducing apoptosis // Pharm. Res. 2009. V. 26 .P. 93-100.

69.Kim D.G. , Jeong Y.I. , Nah J.W. All-trans retinoic acid release from polyion-complex micelles of methoxy poly(ethylene glycol) grafted chitosan // Journal of Applied Polymer Science.2007. V. 105. № 6. P. 3246-3254.

70.Rojanarata T., Petchsangsai M. , Opanasopit P., Ngawhirunpat T. , Ruktanonchai U. ,Sajomsang W. Methylated N-(4-N,N-dimethylaminobenzyl) chitosan for novel effective gene carriers // Eur. J. Pharm. Biopharm.2008.V. 70. P. 207-214.

71.Opanasopit P., Petchsangsai M., Rojanarata T., Ngawhirunpat T., Sajomsang W., Ruktanonchai U. Methylated N-(4-N,N-dimethylaminobenzyl) chitosan as effective gene carriers: Effect of degree of substitution // Carbohyd. Polym. 2009. V.75.P.143-149.

72.Chae S.Y., Son S., Lee M., Jang M.K. , Nah J.W. Deoxycholic acidconjugated chitosan oligosaccharide nanoparticles for efficient gene carrier // J. Control. Release. 2005. V. 109. P.330-344.

73.Hu F.Q., Zhao M.D., YuanH. , You J., Du Y.Z., Zeng S. A novel chitosan oligosaccharide-stearic acid micelles for gene delivery: Properties and in vitro transfection studies // Int. J. Pharm. 2006 V. 315. P. 158-166.

74.Chan P., Kurisawa M., Chung J.E., Yang Y.Y. Synthesis and characterization of chitosan-g-poly(ethylene glycol)-folate as a non-viral carrier for tumor -targeted gene delivery // Biomaterials.2007. V. 28.P. 540-549.

75.Lin W.J., Chen M.H. Synthesis of multifunctional chitosan with galactose as a targeting ligand for glycoprotein receptor // Carbohydr. Polym. 2007. V. 67.P. 474-480.

76.B. Sayin, S. Somavarapu, X.W. Li, M. Thanou, D. Sesardic, H.O. Alpar, S. Senel Mono-N-carboxymethyl chitosan (MCC) and N-trimethyl chitosan (TMC) nanoparticles for non-invasive vaccine delivery // Int. J. Pharm. 2008.V. 363.P.139-148.

77.Svirshchevskaya E.V., Alekseeva L.G., Reshetov P.D., Phomicheva N.N.,

Parphenyuk S., A Ilyina., A.V., Zueva V.S., Lopatin S.A., Levov A.N., Varlamov i V.P. Mucoadjuvant properties of lipo- and glycoconjugated derivatives of

oligochitosans // European Journal of Medicinal Chemistry. 2009. V.44. P. 20302037.

78.Bal S. M., Slutter B., Verheul R., Bouwstra J., Jiskoot W. Adjuvanted antigen loaded N-trimethyl chitosan nanoparticles for nasal and intradermal vaccination: adjuvant- and site-dependent immunogenicity in mice // European Journal of Pharmaceutical Sciences. 2012 .V. 45 P. 475-481.

79.Sliittera B., Christiaan Soema P., Dinga Z., Verheul R., Hennink W., Jiskoota W. Conjugation of ovalbumin to trimethyl chitosan improves immunogenicity of the antigen // Journal of Controlled Release. 2010. V. 143. №2. P. 207-214.

80.Van der Lubben I.M, Verhoef J.C, Borchard G, Junginger H.E Chitosan for mucosal vaccination // Advanced Drug Delivery Reviews. 2001. V.52 .P. 139— 144.

81.Zhao X., Yin L., Ding J., Tang C., Gu S., Yin C., Mao Y. Thiolated trimethyl chitosan nanocomplexes as gene carriers with high in vitro and in vivo transfection efficiency //Journal of Controlled Release. 2010. V.144. P. 46-54.

82.Mao Z., Ma L., Yana J., Yan M., Gao C., Shena J. The gene transfection efficiency of thermoresponsive N,N,N-trimethyl chitosan chloride-g-poly(N-isopropylacrylamide) copolymer// Biomaterials . 2007 V.28. P. 4488-4500.

83.Xiangyang X., Ling L., Jianping Z., Shiyue L., Jie Y., Xiaojin Y, JinshengR. Preparation and characterization of N-succinyl-N-octyl chitosan micelles as doxorubicin carriers for effective anti-tumor activity. // Colloid. Surf. B.2007.V. 55. P. 222-228.

84.Zhang C., Qineng P., Zhang H. Self-assembly and characterization of paclitaxel-loaded N-octyl-O-sulfate chitosan micellar system. Colloid Surf.B // 2004. V.39. P. 69-75.

85. Zhang C., Qu G., Sun Y., Wu X., Yao Z., Guo Q. Pharmacokinetics, biodistribution, efficacy and safety of N-octyl-O-sulfate chitosan micellesloaded with paclitaxel // Biomaterials. 2008. V. 29. P.1233-1241.

86.Rojanarata T., Petchsangsai M., Opanasopit P., Ngawhirunpat T., Ruktanonchai U., Sajomsang. W. Methylated N-(4-N,N-dimethylaminobenzyl)chitosan for

127

novel effective gene carriers // Eur. J. Pharm. Biopharm. 2008. V. 70. P. 207214.

87. Opanasopit P., Petchsangsai M., Rojanarata Т., Ngawhirunpat T. ,Sajomsang W., Ruktanonchai U. Methylated N-(4-N,N-dimethylaminobenzyl)chitosan as effective gene carriers: Effect of degree of substitution // Carbohyd. Polym. 2009. V. 75. P.143-149.

88.Zhang C., Ding Y., Yu L., Ping Q. Polymeric micelle systems of hydroxycamptothecin based on amphiphilic N-alkyl-N-trimethyl chitosan derivatives // Colloid Surf. B. 2007. V. 55 P. 192-199.

89.Zhang C., Ding Y., Ping Q., Yu L. Novel chitosan-derived nanomaterialsand their micelle-forming properties // J. Agric. Food Chem. 2006 V. 54. P. 8409841.

90.Ильина A.B., Левов A.H., Местечкина H.M., Дрозд Н.Н., Орлов В.Н., Макаров В.А., Щербухин В.Д., Варламов В.П., Скрябин К.Г.Получение наночастиц на основе сульфатированных полисахаридов и исследование их антикоагулянтной активности // Российские нанотехнологии .2009.Т. 4 №3-4 . С. 146-154.

91.Huang R., Du Y., Yang J., Fan L. Influence of functional groups on the in vitro anticoagulant activity of chitosan sulfate // Carbohydrate Research . 2003.V. 338.№ 6.P. 483^189.

92. Jayakumar R., Nwe N., Tokura S., Tamura H. Sulfated chitin and chitosan as novel biomaterials // International Journal of Biological Macromolecules. 2007. V.40. P. 175-181.

93. Vikhoreva G., Bannikova G., Stolbushkina .P, Panov A., Drozd N. ,Makarov V ,Varlamov V., Gal'braikh L. Preparation and anticoagulant activity of a low-molecular-weight sulfated chitosan // Carbohydrate Polymers. 2005. V.62. P. 327-332.

94.Win P.P., Shin-ya Y.,. Hong K.-J., Kajiuchi T. Formulation and characterization of pH sensitive drug carrier based on phosphorylated chitosan (PCS) // Carbohydrate Polymers. 2003. V.53. P. 305-310.

95. Wang X., Ma J., Wang Y., Hea B. Bone repair in radii and tibias of rabbits with phosphorylated chitosan reinforced calcium phosphate cements // Biomaterials. 2002. V.23. P.4167-4176.

96.Jordan J. L., Henderson S., Elson С. M., Zhou J., Kydonieus A., Downie Timothy J., Lee D.G Use of a sulfated chitosan derivative to reduce bladder inflammation in the rat // Urology. 2007. V. 70. № 5 P. 1014-1018.

97. Baldrick P. The safety of chitosan as a pharmaceutical excipient // Regulatory Toxicology and Pharmacology 2010.V. 56. P. 290-299.

98. Комаров Б.А., Албулов А.И. Фитохитодезы в восстановительной медицине, биорегуляции и геронтологии // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Мат. X междунар. конференции. Н.Новгород, 2010. С 200-203.

99. Алексеева М.Ф., Нистратов В.П., Шилова Е.В., Цыбко К.В., Александрова Е.А. VEGETABS - продукт нового поколения// Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Мат. VIII междунар. конференции. Ставрополь, 2008, С 204-206.

100. Быканова О.Н., Максимова С.Н., Тарасенко Г.А. Перспективы использования хитозана в качестве БАД к пище // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Мат. VIII междунар. конференции. Казань, 2006, С 275-276.

101. ГОСТ 12.1.007-76 «Классификация и общие требования безопасности»

102. Wedmore I, Мс. Manus J.G., Pusateri А.Е., Holcomb J.B. A special report on the chitosan-based hemostatic dressing: experience in current combat operations. // J Trauma. 2006 V.60. P.655-658.

103. Domb A. J., Kumar N. Biodegradable Polymers in Clinical Use and Clinical Development/ John Wiley & Sons, Inc.,2011

104. Minami S., Ohoka M., Okamoto Y., Miyatake K., Matsuhashi A., Shigemasah Y. , Fukumoto Y. Chitosan-inducing hemorrhagic pneumonia in dogs // Charbohydrate Polymers. 1996. V.29.P. 241-246.

105. HamidiM., AzadiA., RafieiP. Hydrogel nanoparticles in drug delivery 11 Advanced Drug Delivery Reviews. 2008. № 60. P. 1638-1649.

106. Lee D.H., Kang I.G. Drug Delivery System Using Biodegradable nanoparticles carrier//KONA. 2006. №24. P.159-166.

107. Li L., Dong C., Zhang Y., DengZ., et.al Magnetic and fluorescent multifunctional chitosan nanoparticles as a smart drug delivery system // Nanotechnology. 2007. № 18. P. 1-6.

108. Agnihotri S.A., Mallikarjuna N.N., Aminabhavi T.M. Recent advances on chitosan-based micro- and nanoparticles in drug delivery // J Control Release. 2004.V.100 №1.P.5-28.

109. Mohanraj V.J., et.al. Nanoparticles - a review // Tropical Journal of Pharmaceutical Research. 2006. № 5 (1). V. P. 561-573 .

110. Dasha M., Chiellini F., Ottenbriteb R.M., Chiellini E. Chitosan—A versatile semi-synthetic polymer in biomedical applications// Progress in Polymer Science. 2011 .V.36 P. 981-1014.

111. De Kruif G.G. Complex coacervation to proteins and anionic polysaccharide//Current opinion in Colloid & Interface Science. 2004.V.9. P.340-349.

112. Mao H.Q., Roy K., Troung-Le V.L., Janes K.A., Lin K.Y., Wang Y. August J. T., Leong K.W. Chitosan-DNA nanoparticles as gene carriers: synthesis, characterization and transfection efficiency // J. Control Release. 200l.V. 70 P. 399^421.

113. Kumbar S.G., Kulkarni A.R., Aminabhavi T.M. Crosslinked chitosan microspheres for encapsulation diclofenac sodium: effect of crosslinking agent // Journal of Microencapsulation. 2002. V.19. № 2. P. 173-180.

114. Tokumitsu H., Ichikawa H., Fukumori Y. Chitosan-gadopentetic acid

complex nanoparticles for gadolinium neutron-capture therapy of cancer:

preparation by novel emulsion-droplet coalescence technique and characterization

//Pharm. Res. 1999. V. 16. P. 1830-1835.

115. Agnihotri S.A., Aminabhavi T.M. Controlled release of clozapine through chitosan microparticles prepared by a novel method // J. Control Release. 2004. V.96. P. 245-259.

116. Bhattarai N., Gunn J., Zhang M. Chitosan-based hydrogels for controlled, localized drug delivery // Advanced Drug Delivery Reviews. 2010 V.62. P. 8399.

117. Shu X.Z., Zhu K.J. Controlled drug release properties of ionically cross-linked chitosan beads: the influence of anion structure // International Journal of Pharmaceutics. 2002. V. 233. P.217-225.

118. Calvo P., Remun an Lopez C., Vila-Jato J.L., Alonso M.J., Novel hydrophilic chitosan-polyethylene oxide nanoparticles as protein carriers // Journal of Applied Polymer Science. 1997. V.63. №1. P. 125-132.

119. X.Z. Shu, K.J. Zhu The influence of multivalent phosphate structure on the properties ionically cross-linked chitosan films for controlled drug release European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics .2002.V.54 P.235-243.

120. Songsurang K., Praphairaksit N., Siraleartmukul K., Muangsin N. Electrospray fabrication of doxorubicin-chitosan-tripolyphosphate nanoparticles for delivery of doxorubicin // Arch Pharm Res. 2011 .V. 34.№ 4.P. 583-592.

121. Gaponik N., Radtchenko I.L., Gerstenberger M.R., Fedutik Y.A., Sukhorukov G.B., Rogach A.L Labeling of biocompatible polymer microcapsules with near-infrared emitting nanocrystals // Nano Letters. 2003. V.3. (3). P.369-372.

122. Antipov A.A., Shchkin D., Fedutik Y., Petrov A.I., Sukhorukov G.B., Mohwald H. Carbonate microparticles for hollow polyelectrolyte capsules fabrication // Colloid and Sufaces: A Physicochemical and Engineering Aspects 2003. V. 224. P. 175-184.

123. Sukhorukov G.B., Donath E., Davis S., Lichtenfeld H., Caruso F., Popov V.I., Mohwald H. Stepwise polyelectrolyte assembly on particles surface: a

novel approach to colloid design // Polymers for Advanced Technologies. 1998. V. 9. № 10-1 l.P.759-767 .

124. Балабушевич Н.Г., Ларионова Н.И Получение и характеристика полиэлектролитных микрочастиц с белком // Биохимия. 2004. Т. 69.-вып.7. С.930-936 .

125. Балабушевич Н.Г., Печенкин М.А., Зоров И.Н., Ларионова Н.И. Перспективы использования хитозансодержащих микрочастиц для пероральной доставки белков // Материалы IX Международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИР0.2008. С. 135-138.

126. Не С., Ни., Yin L., Tang С., Yin С. Effects of particle size and surface charge on cellular uptake and biodistribution of polymeric nanoparticles // Biomaterials. 2010 V. 31. P. 3657-3666.

127. Dobrovolskaia M.A., Aggarwal P., Hall J.B., Mc Neil S.E. Preclinical studies to understand nanoparticle interaction with the immune system and its potential effects on nanoparticle biodistribution // Mol. Pharm. 2008. V. 5. № 4. P. 487-495.

128. Owens D.E., Peppas N.A. Opsonization, biodistribution, and pharmacokinetics of polymeric nanoparticles // Int. J. of Pharm. 2006. V. 307. P. 93-102.

129. Taib H., Sorrella C.C. Assessment of Particle Sizing Methods Applied to Agglomerated Nanoscale Tin Oxide (Sn02) // Journal of the Australian Ceramic Society. 2008. V. 44. №2. P. 47-51.

130. Kanao M., Matsuda Y., and Sato T. Characterization of polymer solutions containing a small amount of aggregates by static and dynamic light scattering. // Macromolecules. 2003. V. 36. P. 2093-2102.

131. Lee S., Rao P., Нее Moon M., Calvin Giddings J. Determination of mean diameter and particle size distribution of acrylate latex using flow field-flow fractionation, photon correlation spectroscopy, and electron microscopy // Anal. Chem. 1996. V. 68. P. 1545-1549.

132. Kocuna M., Grandboisb M., Cucciaa L.A. // Single molecule atomic force microscopy and force spectroscopy of chitosan. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 2011. V. 82. P. 470-476.

133. Heimer S., Tezak D. Structure of polydispersed colloids characterised by light scattering and electron microscopy // Advances in Colloid and Interface Science. 2002 V. 98. P. 1-23.

134. Nell A. E., Madler L., Velegol D., Xia T., Hoek E. M. V., Somasundaran P., Klaessig F., Castranova V., Thompson M. Understanding biophysicochemical interactions at the nano-biointerface // Nature Materials. 2009.№ 8. P. 543557.

135. Yue Z.-G., Wei W., P.P. Lv, Yue H., Wang L.-Y., Su Z.-G., Ma G.-H. Surface charge affects cellular uptake and intracellular trafficking of chitosan-based nanoparticles //Biomacromolecules. 2011. V.12. № 7. P. 2440-2446

136. He C., Hua Y., Yin L., Tang C., Yin C. Effects of particle size and surface charge on cellular uptake and biodistribution of polymeric nanoparticles // Biomaterials. 2010. V. 31 P. 3657-3666

137. Chiu Y.-L., Ho Y.-C., Chen Y.-M., Peng S.-F., Ke C.-J., Chen K.-J. , Mi F.-L., Sung H.-W. The characteristics, cellular uptake and intracellular trafficking of nanoparticles made of hydrophobically-modified chitosan // Journal of Controlled Release. 2010 V.146. P. 152-159.

138. Hoven V. P. , Tangpasuthadol V., Angkitpaiboon Y. , Vallapa N. , Kiatkamjornwong S. Surface-charged chitosan: Preparation and protein adsorption // Carbohydrate Polymers 2007.V.68.P.44-53

139. Guan J., Cheng P., Huang S.J., Wua J.M. ,Li Z.H., You X.D.,. Hao L.M, Guo Y., Lia R.X., Zhang H. Optimized Preparation of Levofloxacin-loaded Chitosan Nanoparticles by Ionotropic Gelation // Physics Procedia. 2011 V.22. P.163-169

140. Alishahi A., Mirvaghefi A., Tehrani M.R. , Farahmand H., Shojaosadati S.A. , Dorkoosh F.A., Elsabee M. Z. Shelf life and delivery enhancement of vitamin C using chitosan nanoparticles // Food Chemistry. 2011.V.126.P. 935-940

141. De Britto D., De Moura M. R., Aouada F. A., Mattoso L.H.C., Assisa O. B.G. N,N,N-trimethyl chitosan nanoparticles as a vitamin carrier system // Food Hydrocolloids. 2012.V.27.P.487-493

142. Wang S., Jiang Т., Ma M., Hu Y., Zhang J. Preparation and evaluation of anti-neuroexcitation peptide (ANEP) loaded N-trimethyl chitosan chloride nanoparticles for brain-targeting // International Journal of Pharmaceutics. 2010 V.386. P.249-255.

143. Liang N., Sun S., Li X., Piao H., Piao H., Cui F. a-Tocopherolsuccinate-modifiedchitosan as a micellar delivery system for paclitaxel: Preparation, characterization and in vitro/in vivo evaluations // International Journal of Pharmaceutics. 2012. V. 423. №2.P. 480-488.

144. Duhem N., Rolland J., Riva R., Guillet P., Schumers J.-M., Jeromec C., J.-F. Gohyb, Preata V. Tocol modified glycol chitosan for the oral delivery of poorly soluble drugs // International Journal of Pharmaceutics.2012. V. 423, № 2. P. 452^460

145. Colineta V., Dulonga G., Mocanub L., Pictona D. Le Cerfa Effect of chitosan coating on the swelling and controlled release of a poorly water-soluble drug from an amphiphilic and pH-sensitive hydrogel // International Journal of Biological Macromolecules. 2010 .V.47. P. 120-125.

146. Kabanov A. V., Vinogradov S. V. Nanogels as Pharmaceutical Carriers: Finite Networks of Infinite Capabilities // Angew Chem Int Ed Engl. 2009. V. 48(30).P. 5418-5429

147. Валуев JI.И., Валуева Т. А., Валуев И. Л., Платэ Н. А. Полимерные системы для контролируемого высвобождения биологически активных соединений // Успехи биологической химии. 2003. т.43. с.307-328.

148. Chaudhury A., Das S. Recent Advancement of chitosan-based nanoparticles for oral controlled delivery of insulin and other therapeutic agents // AAPS PharmSciTech. 2011 .№1. P. 10-20.

149. Pavlukhina S., Sukhishvili S. Polymer assemblies for controlled delivery of bioactive molecules from surfaces // Advanced Drug Delivery Reviews 2011. V.63 P. 822-836

150. Sanoj Rejinold N., Chennazhi K.P., Nair S.V., Tamura H., Jayakumar R. Biodegradable and thermo-sensitive chitosan-g-poly(N-vinylcaprolactam)nanoparticles as a 5-fluorouracil carrier // Carbohydrate Polymers .201 l.V. 83. P. 776-786

151. Jiang J., Hua D., Tang J. One-pot synthesis of pH- and thermo-sensitive chitosan-based nanoparticles by the polymerization of acrylic acid/chitosan with macro-RAFT agent // International Journal of Biological Macromolecules . 2010 V.46 .P. 126-130

152. Arcamone, F. Doxorubicin — London: Academic Press, 1981,369 c.

153. Fan L., Li F., Zhang H., Wang Y., Cheng C., Li X., Gu C. -H., Yang Q.,H. Wu, Zhang S. Co-delivery of PDTC and doxorubicin by multifunctional micellar nanoparticles to achieve active targeted drug delivery and overcome multidrug resistance // Biomaterials. 2010. V.31 P. 5634-5642

154. Wang F., Zhang D., Duan C., Jia L., Feng F., Liu Y., Wang Y. ,L. Hao, Q. Zhang Preparation and characterizations of a novel deoxycholicacid-O-carboxymethylated chitosan-folic acid conjugates and self-aggregates// Carbohydrate Polymers. 2011. V. 84. P. 1192-1200

155. Lee J.-Y., Choi Y.-S., Suh J.-S., Kwon Y.-M., Yang V. C., Lee S.-J., C.-P. Chung, Y.-J. Park Cell-penetrating chitosan/doxorubicin/TAT conjugates for efficient cancer therapy // International Journal of Cancer. 2011. V.128, № 10. P. 2470-2480

156. Dufes C., Muller J.-M., Couet W. , Olivier J.-C., Uchegbu I. F., Schatzlein A. G. Anticancer Drug Delivery with Transferrin Targeted Polymeric Chitosan Vesicles // Pharmaceutical Research. 2004. V. 21.№1. P.101-107.

157. Jain N. K., Jain S. K. Development and In Vitro Characterization of Galactosylated Low Molecular Weight Chitosan Nanoparticles Bearing Doxorubicin // AAPS PharmSciTech. 2010. V.l 1. №. 2. P. 687-696.

158. Vongchan P., Wutti-In Y., Sajomsang W., Gonil P., Kothan S., Linhardt R.J. N,N,N-Trimethyl chitosan nanoparticles for the delivery of monoclonal antibodies against hepatocellular carcinoma cells // Carbohydrate Polymers. 2011. V.85. P. 215-220

159. Maeda H., Wu J., Sawa T., Matsumura Y., Hori K. Tumor vascular permeability and the EPR effect in macromolecular therapeutics: a review // Journal of Controlled Release. 2000. V. 65.P. 271-284.

160. Torchilin V. Tumor delivery of macromolecular drugs based on the EPR effect // Advanced Drug Delivery Reviews. 2011. V. 63.P. 131-135.

161. Duncan R. Polymer conjugates for tumour targeting and intracytoplasmic delivery. The EPR effect as a common gateway? // PSTT 1999 .V. 2. P.441-449.

162. Zhang L., Gu F.X., Chan J.M., Wang A.Z., Langer R.S., Farokhzad O.C. Nanoparticles in medicine: therapeutic applications and developments. // Clin. Pharmacol Ther. 2008. V.83. №5. P 761-769 .

163. Jayakumar R., Nair A., Sanoj Rejinold N., Maya S., Nair S.V. Doxorubicin-loaded pH-responsive chitin nanogels for drug delivery to cancer cells // Carbohydrate Polymers. 2012 V. 87. P.2352-2356

164. Tan Y.-L., Liu C.-G Self-aggregated nanoparticles from linoleic acid modified carboxymethyl chitosan: Synthesis, characterization and application in vitro // Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 2009. V.69 P. 178-182.

165. Du Y.-Z., Wang L., Yuan H., Hu F.-Q. Linoleic acid-grafted chitosan oligosaccharide micelles for intracellular drug delivery and reverse drug resistance of tumor cells // International Journal of Biological Macromolecules. 2011 V.48. P. 215-222.

166. Zhang J., Chen X. G., Peng W. B, Liu C. S. Uptake of oleoyl-chitosan nanoparticles by A549 cells // Nanomedicine: Nanotechnology, Biology, and Medicine. 2008 № 4. P. 208-214.

167. Zhang J., Chen X. G., Li Y. Y., Liu C. S. Self-assembled nanoparticles based on hydrophobically modified chitosan as carriers for doxorubicin //

136

Nanomedicine: Nanotechnology, Biology, and Medicine. 2007. № 3. P.258-265

168. Hu F.-Q., Liu L.-N., Du Y.-Z., Yuan H. Synthesis and antitumor activity of doxorubicin conjugated stearic acid-g-chitosan oligosaccharide polymeric micelles // Biomaterials. 2009. V. 30 .P. 6955-6963.

169. . Hu F.-Q, Wu X.-l., Du Y.-Z., Yuan H. Cellular uptake and cytotoxicity of shell crosslinked stearic acid-grafted chitosan oligosaccharide micelles encapsulating doxorubicin // European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 2008. V. 69 .P.l 17-125

170. Wang F., Zhang D., Duan C., Jia L., Feng F., Liu Y., Wang Y., L. Hao, Zhang Q. Preparation and characterizations of a novel deoxycholic acid-O-carboxymethylated chitosan-folic acid conjugates and self-aggregates // Carbohydrate Polymers. 201 l.V. 84 P. 1192-1200.

171. Jin Y.-H., Hu H.-Y., Qiao M.-X., Zhu J., Qi J.-W., Hu C.-J., Zhang Q., Chen D.-W. pH-sensitive chitosan-derived nanoparticles as doxorubicin carriers for effective anti-tumor activity: preparation and in vitro evaluation // Colloids and Surfaces B: Biointerfaces in press

172. Naruphontjirakul P. and Kwanchanok Viravaidya-Pasuwat Development of Doxorubicin - Core Shell O-succinyl Treat Human Cancer // International Journal of Bioscience, Biochemistry and Bioinformatics. 2011 .V. 1, №. 1. P.131-136.

173. Kato Y., Onishi H., Machida Y. Biological characteristics of lactosaminated N-succinyl-chitosan as a liver-specific drug carrier in mice // Journal of Controlled Release. 200l.V. 70. P. 295-307

174. Aiping Z., Tian C., Lanhua Y., Hao W., Ping L Synthesis and characterization of N-succinyl-chitosan and its self-assembly of nanospheres // Carbohydrate Polymers. 2006 V. 66 .P. 274-279

175. Parka J. H., Kwon S., Lee M., Chung H., Kim J.-H., Kim Y.-S., R.-W. Park, Kim I.-S., Seo S. B., Kwona I. C., Jeong S. Y. Self-assembled nanoparticles

based on glycol chitosan bearing hydrophobic moieties as carriers for doxorubicin: In vivo biodistribution and anti-tumor activity // Biomaterials. 2006 .V.27 P. 119-126.

176. Zhao L., Zhu L., Liu F., Liu C., Shan-Dan, Wang Q., Zhang C., Li J., Liu J., Qu X., Yang Z. pH triggered injectable amphiphilic hydrogel containing doxorubicin and paclitaxel // Int J Pharm. 2011 V.410 №1-2. P. 83-91.

177. Janes K. A., Fresneau M. P., Marazuela A., Fabra A. , Alonso M. J. Chitosan nanoparticles as delivery systems for doxorubicin // Journal of Controlled Release. 2001. V. 73. P. 255-267.

178. Mitra S., Gaur U., Ghosh P.C., Maitra A.N. Tumour targeted delivery of encapsulated dextran-doxorubicin conjugate using chitosan nanoparticles as carrier // Journal of Controlled Release 2001.V.74. P. 317-323.

179. Qi J., Yao P., He F., Yu C., Huang C. Nanoparticles with dextran/chitosan shell and BSA/chitosan core—Doxorubicin loading and delivery // International Journal of Pharmaceutics. 2010. V.393. P. 176-184

180. Sahu S.K, Maiti S., Maiti T.K., Ghosh S.K., Pramanik P. Folate-Decorated Succinylchitosan Nanoparticles Conjugated with Doxorubicin // Macromol. Biosci. 2011. V. 11 P. 285-295

181. Vllasaliu D., Exposito-Harris R., Heras A., Casettari L. ,M.Garnett, L. Ilium, S. Stolnik Tight junction modulation by chitosan nanoparticles: Comparison with chitosan solution // International Journal of Pharmaceutics 2010. V.400. P. 183-193.

182. Zhang Y. Wei W. Lv P. Wang L., Ma G. Preparation and evaluation of alginate-chitosan microspheres for oral delivery of insulin // European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 2011. У .11. P. 11-19.

183. Jose S., Fangueiro J.F., Smitha J., Cinu T.A., Chacko A.J., Premaletha K., Souto E.B. Cross-linked chitosan microspheres for oral delivery of insulin: Taguchi design and in vivo testing // Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 2012. V. 92. P.175-179

184. Yin L., Ding J., He C., Cui L., Tang C, Yin C. Drug permeability and mucoadhesion properties of thiolated trimethyl chitosan nanoparticles in oral insulin delivery // Biomaterials. 2009. V. 30 .P. 5691-5700.

185. Rekha M.R., Sharma C. P. Synthesis and evaluation of lauryl succinyl chitosan particles towards oral insulin delivery and absorption // Journal of Controlled Release .2009 .V.135 .P. 144-151.

186. Takeuchi H., Matsui Y., Sugihara H., Yamamoto H., Y. Kawashima Effectiveness of submicron-sized, chitosan-coated liposomes in oral administration of peptide drugs // International Journal of Pharmaceutics 2005 V.303.P. 160-170.

187. Rengel R. G., Barisic K., Pavelic Z., Grubisvic T.Z. , Cepelaka I., J. Filipovic - Grcic High efficiency entrapment of superoxide dismutase into mucoadhesive chitosan-coated liposomes // European Journal of Pharmaceutical Sciences. 2002. V. 15. P. 441^148.

188. Suzuki K., Okawa Y., Hashimoto K., Suzuki S., Suzuki M. Protecting effect of chitin and chitosan on experimentally induced murine candidiasis // Microbiol Immunol. 1984. V. 28(8). P. 903-912.

189. Nishimura K., Nishimura .S, Nishi N, Saiki I, Tokura S, Azuma I. Immunological activity of chitin and its derivatives // Vaccine. 1984. № 1. P.93-99.

190. Nishimura S, Nishi N, Tokura S, Nishimura K, Azuma I. Bioactive chitin derivatives. Activation of mouse-peritoneal macrophages by O-(carboxymethyl)chitins // Carbohydr Res. 1986.V. 146(2). P.251-258.

191. Shibata Y., Foster L.A., Metzger W.J., Myrvik Q.N. Alveolar macrophage priming by intravenous administration of chitin particles, polymers of N-acetyl-D-glucosamine, in mice // Infect Immun. 1997. V. 65(5). P.1734-1741.

192. Shibata Y., Metzger W.J., Myrvik Q.N. Chitin particle-induced cellmediated immunity is inhibited by soluble mannan: mannose receptor-mediated phagocytosis initiates IL-12 production // J. Immunol. 1997. V.159 (5). P. 2462 -2467.

193. Bourbouze R., Raffi F., Dameron G., Hali-Mirafta H., Loko F., Vilde J.L. N-acetyl-beta-D-glucosaminidase (NAG) isoenzymes release from human monocyte-derived macrophages in response to zymosan and human recombinant interferon-gamma // Clin .Chim Acta. 1991. V. 199 (2). P. 185-194.

194. Tokura S., Tamura H., Azuma I. Immunological aspects of chitin and chitin derivatives administered to animals. In Chitin and Chitinases, Jolles P, Muzzarelli R.A.A., Eds., Birkhauser Verlag: Basel, Switzerland. 1999. P. 279292.

195. Lee C.G. Chitin, chitinases and chitinase-like proteins in allergic inflammation and tissue remodeling // Yonsei Med J. 2009. V. 50(1). P. 22-30.

196. Shibata Y., Foster L.A., Bradfield J.F., Myrvik Q.N. Oral administration of chitin down-regulates serum IgE levels and lung eosinophilia in the allergic mouse // J. Immunol. 2000. V.164 (3). P. 1314-1321.

197. Shibata Y., Honda I., Justice J.P., Van Scott M.R., Nakamura R.M., Myrvik Q.N. Thl adjuvant N-acetyl-D-glucosamine polymer up-regulates Thl immunity but down-regulates Th2 immunity against a mycobacterial protein (MPB-59) in interleukin-10-knockout and wild-type mice // Infect Immun. 2001. V. 69(10). P.6123-6130.

198. Hamajima K., Kojima Y., Matsui K., Toda Y., Jounai N., Ozaki T., Xin K.Q., Strong P., Okuda K. Chitin Micro-Particles (CMP): a useful adjuvant for inducing viral specific immunity when delivered intranasally with an HIVDNA vaccine // Viral Immunol. 2003 V.16 (4). P. 541-547.

199. Strong P., Clark H., Reid K. Intranasal application of chitin microparticles down-regulates symptoms of allergic hypersensitivity to Dermatophagoides pteronyssinus and Aspergillus fumigatus in murine models of allergy // Clin. Exp. Allergy. 2002 V.32 (12).P. 1794-1800.

200. Riccardo A. A. Muzzarelli Chitins and Chitosans as Immunoadjuvants and Non-Allergenic Drug Carriers //Mar. Drugs 2010 V. 8. P. 292-312 .

201. Rauw F., Gardin Y., Palya V., Anbari S., Gonze M., Lemaire S., Van den Berg T., Lambrecht B. The positive adjuvant effect of chitosan on antigenic

specific cell-mediated immunity after chickens vaccination with live Newcastle disease vaccine // Veterinary Immunology and Immunopathology. 201 O.V.I34. P. 249-258.

202. Boonyo W., Junginger H. E., Waranuch N., Polnok A., Pitaksuteepong T. Chitosan and trimethyl chitosan chloride (TMC) as adjuvants for inducing immune responses to ovalbumin in mice following nasal administration // Journal of Controlled Release. 2007 V. 121. P. 168-175.

203. Zaharoff D. A., Rogers C. J., Hance K. W., Schlom J., Greiner J. W. Chitosan solution enhances both humoral and cell-mediated immune responses to subcutaneous vaccination // Vaccine. 2007. V. 25. P. 2085-2094.

204. Xie Y., Zhou N.-J., Gong Y.-F., Zhou X.-J., Chen J., S.-J. Hu, N.-H. Lu, Hou X.-H. Th immune response induced by H. pylori vaccine with chitosan as adjuvant and its relation to immune protection // World J Gastroenterol. 2007. V. 13(10). P.1547-1553.

205. Borges O., Silva M., De Sousa A., Borchard G. , Junginger H. E., A. Cordeiro-da-Silva Alginate coated chitosan nanoparticles are an effective subcutaneous adjuvant for hepatitis B surface antigen // International Immunopharmacology .2008. №8 P. 1773-1780 .

206. Wen Z.-S., Xu Y.-L., Zou X.-T. , Z.- R. Xu Chitosan Nanoparticles Act as

an Adjuvant to Promote both Thl and Th2 Immune Responses Induced by Ovalbumin in Mice // Mar. Drugs. 2011.№ 9. P. 1038-1055.

207. Kang M. L., Cho C. S., Yoo H. S. Application of chitosan microspheres for nasal delivery of vaccines // Biotechnology Advances. 2009. V.27. P. 857-865

208. Giinbeyaz M., Faraji A., Ozkulb A., Purali N., Senel S. Chitosan based delivery systems for mucosal immunization against bovine herpesvirus 1 (BHV-1) // European Journal of Pharmaceutical Sciences 2010. V. 41. P.531-545.

209. Zhu B., Qie Y., Wang J., Zhang Y., Wang Q., Xu Y., Wang H. Chitosan microspheres enhance the immunogenicity of an Ag85B-based fusion protein

141

containing multiple T-cell epitopes of Mycobacterium tuberculosis // European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 2007. V. 66 P. 318-326.

210. Nagamoto Т., Hattori Y., Takayama K. , Maitani Y. Novel Chitosan Particles and Chitosan-Coated Emulsions Inducing Immune Response via Intranasal Vaccine Delivery // Pharmaceutical Research. V.21. №. 4. P.671-674.

211. Гамзазаде А.И., Шлимак B.M., Скляр A.M., Штыкова Э.В., Павлова С.А., Рогожин С.В.Исследование гидродинамических свойств растворов хитозана // Acta Polymerica. - 1985. - Т. 36. - № 8. - С. 420^24.

212. Laemmli U. К. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4. Nature, 1970; V.227, P.680 — 68

213. Bradford M. M. A Rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 1976. V.72. P.248-254.

214. Mosmann T: Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: Application to proliferation and cytotoxicity assays. // J Immunol. Methods. 1983. V. 65. №1-2. P. 55- 63.

215. Gabizon A., Shiota R., Papahadjopoulos D. Pharmacokinetics and tissue distribution of doxorubicin encapsulated in stable liposomes with long circulation times. J. Natl. Cancer Inst. (Bethesda) // 1989. V.81. P. 1484 - 1488.

216. Dash ВС, Rethore G, Monaghan M, Fitzgerald K, Gallagher W, Pandit A. The influence of size and charge of chitosan/polyglutamic acid hollow spheres on cellular internalization, viability and blood compatibility. // Biomaterials.

217. Svirshchevskaya E.V., Mariotti J., Wright M.H., Viskova N.Y., Telford W., Fowler D.H., Varticovski L. Rapamycin delays growth of Wnt-1 tumors in spite of suppression of host immunity. BMC Cancer, 2008.V.8, P.176—188.

218. Wu L., Zhang J., Watanabe W. Physical and chemical stability of drug nanoparticles // Advanced Drug Delivery Reviews 2011.V.63 P. 456^469.

219. Murphy R.M. Static and dynamic light scattering of biological macromolecules: what can we learn? // Current Opinion in Biotechnology. 1997. V. 8. № l.P. 25-30.

220. Феофанов A.B. Спектральная лазерная сканирующая конфокальная микроскопия в биологических исследованиях. // Успехи биологической химии. 2007. Т. 47. С. 371 -410.

221. Nanosight: [Electronicre source]. UK, 2002-2013| URL:http://www.nanosight.com (Дата обращения: 01.09.2013).

222. Mazzarino L., Travelet С., Ortega-Murillo S., Otsuka I., Pignot-Paintrand I., Lemos-Senna E., Borsali R. Elaboration of chitosan-coated nanoparticles loaded with curcumin for mucoadhesive applications //Journal of Colloid and Interface Science 2012. V.370.P. 58 - 66.

223. Tang E.S.K., Huang M., Lim L.Y. Ultrasonication of chitosan and chitosan nanoparticles.//International Journal of Pharmaceutics 2003.V. 265. P. 103 -114.

224. Anthonsen M.W., Varum K.M., Hermansson A.M., Smidsred O., Brant D.A. Aggregates in acidic solutions of chitosans detected by static laser light scattering. // Carbohydrate Polymers. 1994. V. 25. P. 13-23.

225. Y. Okamoto, R. Yano, K. Miyatake, I. Tomohiro, Y. Shigemasa, S. Minami Effects of chitin and chitosan on blood coagulation // Carbohydrate Polymers. 2003. V. 53. P. 337-342.

226. Rekha M.R., Chandra P. Sharma Blood compatibility and in vitro transfection studies on cationically modified pullulan for liver cell targeted gene delivery // Biomaterials. 2009. V.30. P. 6655-6666.

227. Fernandesa J. C.,Borges M. ,.Nascimento H, Bronze-da-Rocha E., Ramosa O.S., Pintado M. E., Xavier Malcata F., Santos-Silva A. Cytotoxicity and genotoxicity of chitooligosaccharides upon lymphocytes //International Journal of Biological Macromolecules. 2011. V.49.P. 433-438.

228. Hoven V. P., Tangpasuthadol V., Angkitpaiboon Y., Vallapa N., Suda Kiatkamjornwong Surface-charged chitosan: Preparation and protein adsorption // Carbohydrate Polymers. 2007. V. 68.P. 44-53.

229. Chen F., Zhang Z.-R., Huang Y. Evaluation and modification of N-trimethyl chitosan chloride nanoparticles as protein carriers // International Journal of Pharmaceutics. 2007. V.336 .P. 166-173.

230. Wang S., Jiang T., Ma M., Hu Y., Zhang J. Preparation and evaluation of anti-neuroexcitation peptide (ANEP) loaded N-trimethyl chitosan chloride nanoparticles for brain-targeting // International Journal of Pharmaceutics. 2010 V.386. P.249-255.

231. Kim J.-H., Kim Y-S, Park K., Kang E., Lee S., Hae Y. N. , Kim K., Park J.H., Chi D. Y., Park R.W., Kim I.-S., Choi K., Kwon I. C. Self-assembled glycol chitosan nanoparticles for the sustained and prolonged delivery of antiangiogenic small peptide drugs in cancer therapy// Biomaterials. 2008. V.29.P. 1920-1930.

232. Park J. H., Kwon S., Nam J-O, Park R-W, Chung H., Seo S.B., Kim I.-S., Kwon I. C., Jeong S. Y. Self-assembled nanoparticles based on glycol chitosan bearing 5h-cholanic acid for RGD peptide delivery // Journal of Controlled Release. 2004. V. 95. P.579- 583.

233. Trapani A., Lopedota A., Franco M., Cioffi N., leva E., Fuentes M. G.-, Alonso M. J. A comparative study of chitosan and chitosan/cyclodextrin nanoparticles as potential carriers for the oral delivery of small peptides // European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 2010.V.75 .P. 2632.

234. Kapoor K. N., Barry D. T., Rees R. C., Dodi I. A., Me Ardle S. E.B., Creaser C.S.,. Bonner P. L.R Estimation of peptide concentration by a modified bicinchoninic acid assay// Analytical Biochemistry. 2009.V.393 .P. 138-140

235. Tian L.., Bae Y.H. Cancer nanomedicines targeting tumor extracellular pH // Colloids Surf. B Biointerfaces. 2012. V.99.P.116-126.

236. Yua J.-M., Li Y.-J., Qiua L.-Y., Jina Yi. Polymeric nanoparticles of cholesterol-modified glycol chitosan for doxorubicin delivery: preparation and in-vitro and in-vivo characterization //Journal of Pharmacy and Pharmacology 2009.V. 61.P. 713-719.

413 шУ

8

и ы

Сй

А1

Т-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1 I-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1-г

1 і і 4 £ 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 т

Высокоэффективная гель - проникающая хроматография хитозана

ММ= 10 кДа, СД=98 %

РЕЗУЛЬТАТЫ РАСЧЕТА Для образца с К = 1.000000 Альфа = 0.000000 М№ 7184.45 М\¥: 9731.37

М\У/МК: 1.3545 (Индекс полидисперсности) Ыг: 13279.6 мг+1: 17504.9

МР: 6937.14 (Молекулярная масса для наибольшего пика) Квант времени, использованный при расчетах: 9.988 сек.

'Н- ЯМР спектры

Хитозан ММ= 200 кДа, СД= 85 %

i11 ■ i.......—i' i ■ i' i ■ i ■ i ■ i ■ i ■ i ■ i ■ i' i ■ i' i'—......i ■ i ■ i ■ i ■ i ■ i' i ■ т ■ i ■ i ■ i ■ i ■ i ■ i'

5.4 5.2 5.0 4.8 4.6 4.4 4.2 4.0 3.8 3.6 3.4 3.2 3.0 2.8 2.6 2.4 2.2 2.0 1.8

fl(Mfl)