Оценка эффективности персонализированной иммунотерапии при хирургическом лечении пародонтита тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.14, кандидат наук Балыкин Роман Анатольевич

• Балыкин Роман Анатольевич
• кандидат наук
• 2019

Оглавление диссертации кандидат наук Балыкин Роман Анатольевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Современное состояние проблемы

1.1. Роль факторов врожденного иммунитета в развитии пародонтита

1.1.1. То11-подобные рецепторы эпителия десны в развитии пародонтита

1.1.2. Дефензины эпителиальных клеток при пародонтите

1.1.3. Роль цитокинов в патогенезе пародонтита

1.2. Современные подходы к лечению пародонтита

1.2.1. Регуляция активности факторов врождённого иммунитета

1.2.2. Тканевая инженерия при пародонтите

1.2.3. Применение комплекса аутологичных иммунопептидов при

хирургическом лечении пародонтита

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Характеристика обследованных клинических групп

2.2. Клинические методы исследования больных пародонтитом

2.3. Иммунологические методы исследования

2.3.1. Определение экспрессии гена ТЬЯ4 и ЪВЭ-З в эпителии десны методом ПЦР - диагностики в реальном времени

2.3.2. Определение цитокинов ИЛ-6, ТФРр-1 в десневой жидкости

2.4. Этапы комплексного лечения больных с хроническим генерализованным пародонтитом

2.5. Применение аутологичного комплекса иммунопептидов (АКИ)

2.6. Статистическая обработка результатов исследования

ГЛАВА 3. ПОКАЗАТЕЛИ ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ

ПАРОДОНТИТОМ. Собственные исследования

3.1. Показатели экспрессии гена ТЬЯ4 в клетках эпителия десны у больных пародонтитом

3.2. Показатели экспрессии гена КВЭ-З в клетках эпителия десны у больных пародонтитом

3.3. Изменение уровня цитокинов 1Ь-6 и ТОЕр1 в десневой жидкости у

больных пародонтитом

ГЛАВА 4. ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ АУТОЛОГИЧНОГО КОМПЛЕКСА ИММУНОПЕПТИДОВ ПРИ ХИРУРГИЧЕСКОМ ЛЕЧЕНИИ БОЛЬНЫХ ПАРОДОНТИТОМ

4.1. Клиническая оценка эффективности применения аутологичного комплекса иммунопептидов при хирургическом лечении больных пародонтитом

4.2. Показатели экспрессии гена ТЬЯ4 в клетках эпителия десны после проведения хирургического лечения с применением аутологичного комплекса иммунопептидов

4.3. Показатели экспрессии гена ЪВЭ-З в клетках эпителия десны после проведения хирургического лечения с применением аутологичного комплекса иммунопептидов

4.4. Показатели цитокинов 1Ь-6 и ТОБр1 в десневой жидкости после проведения хирургического лечения с применением аутологичного комплекса

иммунопептидов

ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОД

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Список сокращений

А.а. - Aggregatibacter actinomycetemcomitans ß-TCP - бета-трикальцийфосфат BMSCs - стромальные клетки костного мозга BMP - костный морфогенетический белок ЕСМ - внеклеточным матриксом ES - эмбриональных стволовых клеток ES - плюропотентные стволовые клетки EMD - производное эмаль матрикса GBR - направленная костная регенерация GTR - направленная тканевая регенерация HGEC - десневые эпителиальные клетки

hBD- противомикробный пептид ß-дефензин hGF - Human Gingival Fibroblasts IL - интерлейкин

IPS - индуцированные плюропотентные стволовые клетки

LPS - липополисахарид Porphyromonas gingivalis

MSCs - мезенхимальные стволовые клетки

ММР - матриксная металлопротеиназа

OPG - остеопротегерин

P.g. - Porphyromonas gingivalis

P.i. - Prevotells intermedia

PD - пародонтальный карман

PDL - периодонтальные волокна

PRP - обогащенный тромбоцитами плазмо-гель

RANK - поверхностные рецепторы остеокластов

RANKL - лиганды поверхностных рецепторов остеокластов

rhFGF-2 - человеческий рекомбинантный фактор роста фибробластов-2

rhGDF-5 - человеческий рекомбинантный фактор роста фибробластов-5

rhPDGF-BB - рекомбинантный человеческий тромбоцитарный фактор роста-

ВВ

TGF - трансформирующий фактор роста

TLR - Toll-подобные рецепторы

TNF - фактор некроза опухолей

VEGF - фактор роста эндотелиальных сосудов

ВЗП - воспалительные заболевания пародонта

ИФА - иммуноферментный анализ

МСК - мезенхимальные стволовые клетки

ПК - пародонтальный карман

ПМП - противомикробные пептиды

ПЦР - полимеразная цепная реакция

ХГП - хронический генерализованный пародонтит

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Оценка эффективности персонализированной иммунотерапии при хирургическом лечении пародонтита»

Актуальность темы

Заболевания пародонта среди взрослого населения представляют одну из актуальных проблем стоматологии во всем мире. Благодаря внедрению в практику современных технологий, удалось выявить основные механизмы развития данного заболевания на молекулярно-генетическом уровне [3,4,10,11,12,13,14,15.16,17,18,20,31,60, 82,87,102, 119,140,142, 148,155,164].

Взаимодействие пародонтопатогенов с иммунными факторами противомикробной защиты организма лежит в основе воспаления тканей пародонта и в дальнейшем приводит к деструкции альвеолярной кости [31,87]. Эпителиальные клетки слизистой оболочки десны вместе с гуморальными и клеточными факторами слюны и десневой жидкости образуют первую линию защиты организма от инфекции и играют решающую роль в отношении пародонтопатогенных бактерий [45,133]. Эпителий слизистой оболочки десны экспрессирует ТоП-подобные-рецепторы (TLR), которые распознают липополисахариды анаэробных бактерий, способны к выработке провоспалительных цитокинов, хемокинов и других медиаторов, регулирующих воспаление [45,101,140,141,142]. Наряду с цитокинами эпителий продуцирует противомикробные пептиды в-дефензины (ИВЭ), которые обладают широким спектром антимикробной активности, вызывая гибель микроорганизмов вследствие нарушения целостности их мембран [24,25,36,63,64,105].

Факторы врожденного иммунитета играют роль не только в противомикробной защитете, они также поддерживают условия, необходимые для заживления и регенерации тканей пародонта. Поэтому различные лечебные подходы, влияющие на факторы врождённого иммунитета, рассматриваются как эффективные и перспективные [123]

Восстановлению тканей пародонта способствует дополнение хирургических методов лечения использованием факторов роста и биоактивных материалов [66,106,159].

На современном этапе лечения пародонтита предпринимают попытки восстановления одновременно всех структур пародонта и активно внедряют методы тканевой инженерии и направленной регенерации тканей [60,61].

При пародонтите в крови больных и локальном уровне в тканях был выявлен дисбаланс про- и противовоспалительных цитокинов. Для его коррекции предложен принцип с использованием иммунотерапии гетерологичных и аутологичных комплексов иммунопептидов [19,26 ].

Однако число исследований, посвященных влиянию факторов врожденного иммунитета на процессы регенерации тканей пародонта в настоящее невелико. Одно из направлений стимуляции репаративной регенерации предполагает влияние на пролиферацию и дифференцировку клеток тканей цитокинами и факторами роста, синтезируемыми аутологичными клетками иммунной системы [26,27].

Необходимо детальное исследование возможности использования аутологичных низкомолекулярных пептидов крови в регенерации тканей пародонта, что позволит разработать новые, более эффективные схемы лечения.

Степень разработанности темы исследования

На сегодняшний день разработаны ряд тест-систем и налажен выпуск коммерческих наборов для определения То11-рецепторов и цитокинов в биологических жидкостях человека. Определение факторов врождённого иммунитета позволяет совершенствовать методы диагностики воспалительных заболеваний различной этиологии. Благодаря этим методам изучена роль факторов врождённого иммунитета в патогенезе пародонтита.

Цитокинотерапию активно используют во многих областях медицины: офтальмологии, гинекологии, хирургии. Метод применения аутологичного комплекса цитокинов разработан в нашей стране. Медицинская технология "Метод персонифицированной иммунотерапии" основана на локальном применении индивидуальной композиции иммунопептидов, полученных при

культивировании лейкоцитов крови пациента. В зарубежной литературе подобных работ нам не встретилось.

Применение комплекса иммунопептидов при хирургическом лечении пародонтита позволяет повысить его эффективность, за счет влияния на репарацию тканей.

Цель: Повышение эффективности хирургического лечения пародонтита путем применения аутологичного комплекса иммунопептидов. Задачи:

1. Исследовать экспрессию гена To11-подобного-рецептора TLR4 и в-дефензина hBD-3 в эпителии десны у больных с хроническим генерализованным пародонтитом и оценить зависимость этих показателей от степени пародонтита.

2. Определить уровень провоспалительного цитокина 1Ь-6 и противовоспалительного цитокина - TGFpl в десневой жидкости у больных пародонтитом

3. Разработать алгоритм применения аутологичного комплекса иммунопептидов с активностью TNFа, TGFpl и противомикробного фактора а-дефензина (ИМ?) при хирургическом лечении больных пародонтитом.

4. Оценить клиническую эффективность персонализированной иммунотерапии при хирургическом лечении больных пародонтитом.

5. Рассмотреть уровень факторов врождённого иммунитета после хирургического лечения с применением аутологичного комплекса иммунопептидов.

Научная новизна

Впервые проведено комплексное исследование факторов врожденного иммунитета, экспрессии гена То11-подобного-рецептора (TLR4) и Р-дефензина (КВО-З) эпителием десны, цитокинового состава десневой жидкости (1Ь-6 и TGFpl) для обоснования локального применения аутологичного комплекса иммунопептидов при хирургическом лечении пародонтита.

Впервые обоснован способ иммунотерапии пародонтита, заключающийся в локальном применении аутологичного комплекса иммунопептидов, состоящего из противомикробного иммунопептида а-дефензин-НЫР, и набора цитокинов - ФНОа, ТОБр1, стимулирующего регенерацию тканей пародонта.

Впервые разработан алгоритм применения аутологичного комплекса иммунопептидов (АКИ), при хирургическом лечении пародонтита.

Впервые установлено, что с помощью аутологичного комплекса иммунопептидов сокращаются сроки достижения лечебного эффекта, за счет быстрого снятия симптомов воспаления и ускорения репаративных процессов. Одновременно нормализуются показатели врожденного иммунитета, и достигается высокая концентрация ТОБр1 в десневой жидкости.

Теоретическая и практическая значимость работы

Обоснована целесообразность изучения состояния иммунной защиты при воспалительных заболеваний пародонта для обоснования применения персонализированной иммунотерапии

Разработан информативный комплекс методов клинико-иммунологического обследования тканей пародонта, позволяющего решать вопрос о включении иммунотерапии с использованием аутологичного комплекса иммунопептидов в хирургическом лечении пародонтита.

Разработан алгоритм применения аутологичного комплекса иммунопептидов, содержащего цитокины и противомикробные пептиды, при хирургическом лечении пародонтита.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Комплексное исследование экспрессии гена TLR4 и в-дефензина ИВО-3 эпителием десны, и цитокинов (1Ь-6 и ТОБр1) в десневой жидкости, является информативным подходом оценки состояния врожденной иммунной защиты пародонта и обоснованием целесообразности применения персонализированной иммунотерапии в хирургическом лечении пародонтита.

2. Применение аутологичного комплекса иммунопептидов, содержащего цитокины (TNFа, TGFßl) и противомикробный пептид (а-дефензин), при хирургическом лечении пародонтита сокращает сроки достижения лечебного эффекта за счет быстрого снятия симптомов воспаления и ускорения репаративных процессов. Одновременно нормализуются показатели врожденного иммунитета, и достигается высокая концентрация TGFßl в десневой жидкости.

Внедрение результатов исследования

Результаты исследования внедрены в практику терапевтического отделения ЦНИИС и ЧЛХ, и в учебный процесс кафедры иммунологии МБФ ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова МЗ РФ.

Личный вклад автора

Автор принимал участие в выборе направления исследования и проведении анализа современной научной литературы. Автором лично выполнены осмотр, лечение и наблюдение 85 пациентов с пародонтитом и 30 условно здоровых добровольцев. Лично обработан весь массив данных клинико-лабораторного исследования больных, самостоятельно выполнен статистический анализ этих данных. Автор участвовал на всех этапах исследования от постановки задач до обсуждения результатов в научных публикациях и докладах и их внедрении в практику.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 118 страницах и включает следующие главы: введение, обзор литературы, материал и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, заключение, выводы и практические рекомендации. Диссертация содержит 9 таблиц и 31 рисунок. Список литературы включает 163 источника (37 - на русском, 126 -на иностранном языке).

Степень достоверности апробации результатов

Достоверность определяется достаточным количеством пациентов группы исследования (85 пациентов с пародонтитом и здоровых добровольцев-30

человек), современными методами исследования факторов врожденной иммунной защиты ротовой полости (ПЦР-диагностика в реальном времени экспрессии генов эпителия десны и иммуно-ферментный анализ содержания цитокинов в десневой жидкости), применением оптимальных методов статистической обработки данных.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на:

8-й Научно-практической конференции молодых учёных «Актуальные проблемы стоматологии и челюстно-лицевой хирургии» (г. Москва, 19 мая 2017г.)

На совместном заседании сотрудников отделения терапевтической стоматологии, отделения эндодонтии и кариесологии, отделения пародонтологии ФГБУ «Центрального научно-исследовательского института стоматологии и челюстно-лицевой хирургии» Минздрава России.

Публикации по теме диссертации

По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ в журналах, рекомендованных ВАК для защиты по специальности «Стоматология».

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

В патогенезе хронического генерализованного пародонтита важную роль отводят взаимодействию пародонтопатогенной микрофлоры и факторам врождённого иммунитета. Многими авторами показано, что хроническое воспаление тканей пародонта является результатом сдвига бактериального симбиотического сообщества к агрессивному дисбиотическому, которое способно подавить врожденную иммунную систему. Поэтому работы, посвященные оценке состояния иммунной системы у больных пародонтитом и исследованию роли клеточного иммунитета в патогенезе пародонтита, многочисленны [6,7,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,30,31,41,48,63,82,87,104, 109,118,120,122,130,139,141,143,144,146,147,150,154,163].

Общепризнаным считается, что патогенная микрофлора десневой борозды, в первую очередь РогрИугошопаБ §т§1уаНв, оказывает повреждающее воздействие на ткани пародонта. Первую линию защиты от микробных агентов выполняют локальные факторы врожденного иммунитета, роль которых в патогенезе пародонтита активно изучают [3,4,14,15,40,49,62,63,73, 98,99, 108, 111,121].

Эпителий десны играет важную роль в ограничении проникновения патогенов в подлежащую соединительную ткань, так и в индукции иммунного ответа против них [46,68,83,85,97,100,132, 143, 153]. То11-подобные рецепторы эпителиальных клеток (ТЬЯб), которые распознают патогенные микроорганизмы, являются важными компонентами во врожденных и адаптивных системах иммунитета [41,49,77,100,118,140,141].

Восстановлению тканей пародонта способствуют хирургические методы лечения с использованием факторов для регенерации костной ткани [8,29,34,52,58,66,67,74,84,89,105,136,145,148,155].

Однако полное восстановление структуры и функции пораженного пародонта пока является нерешенной задачей [61,81,101,126].

Влияние факторов врожденного иммунитета на процессы репарации тканей пародонта активно изучают. Особый интерес представляет рассмотрение роли аутологичных факторов как стимуляторов процессов репарации тканей [26,27,52].

В обзоре литературы нами проведён анализ роли факторов врождённого иммунитета в патогенезе ХГП и современные подходы к его лечению.

1.1.Роль факторов врожденного иммунитета в патогенезе пародонтита

Пародонтит представляет собой хроническое воспалительное заболевание, в патогенезе которого первостепенную роль отводят бактериям. Многими исследованиями показано, что действие пародонтопатогенов на механизмы врожденного иммунитета вызывает воспаление тканей пародонта и в дальнейшем приводит к деструкции альвеолярной кости [3,4,13,31, 41,42,62,63,69,76,87,104, 132, 140,141, 98,99,100,107,120,129,146, 144,150, 154].

Защиту организма от различных патогенов обеспечивают две взаимосвязанные системы врожденного и адаптивного иммунитета. Механизмы врожденного иммунитета относят к первой линии защиты от патогенов. Они обеспечивают моментальную реакцию на инфекцию, создавая быструю элиминацию патогенов, в то время как механизмы адаптивного иммунитета формируются на 7-14 день. Обе системы реализуют свое защитное действие через гуморальные и клеточные механизмы. К клеткам эффекторам врожденного иммунитета относятся макрофаги, нейтрофилы, дендритные клетки и натуральные киллеры. Макрофаги и нейтрофилы осуществляют фагоцитоз. К гуморальным факторам врожденного иммунитета относятся противомикробные пептиды, провоспалительные цитокины, комплемент, белки острой фазы воспаления, белки теплового шока и другие [25,33, 37].

1.1.1. Toll-подобные рецепторы эпителия десны в развитии пародонтита

Пародонтопатогены, обитающие на слизистой оболочке десны, встречаются с факторами, которые служат барьером на пути проникновения патогенов во внутреннюю среду. Повреждение эпителиального барьера и микробная агрессия приводят к активации эпителиальных клеток и экспрессии ими Toll-подобных рецепторов (TLR) [45,47,49,86,100,104,106,129,132, 140,141]. Toll-подобные рецепторы распознают молекулярные структуры, присущие только патогенам. Эти структуры сокращенно называют-РАМР (pathogen-associated molecular patterns) - ассоциированные молекулярные образцы. К РАМР, в частности, относится липополисахарид - компонент бактериальной стенки - Porphyromonas gingivalis, грамотрицательных бактерий, обнаруживаемых в поддесневой бляшке и десневой жидкости у больных пародонтитом.

В настоящее у человека время идентифицировано 10 Toll-подобных рецепторов, участвующих в реализации врожденного иммунитета.

Взаимодействие Toll-подобных рецепторов эпителиальных клеток с РАМР микроорганизмов стимулирует синтез эпителиоцитами цитокинов, кислородных радикалов, противомикробных пептидовф-дефензинов), что приводит к развитию воспалительной реакции, направленной на уничтожение патогенов [24,25,33].

TLR4 является первым идентифицированным Toll-подобным рецептором. Он экспрессирован на поверхности клеток и распознает LPS грамотрицательных бактерий. Увеличение экспрессии гена TLR4 ассоциируется с экспрессией большого количества провоспалительных цитокинов и хемокинов. Противовоспалительные цитокины (IL-10 и TGF01) угнетают экспрессию гена TLR4 [24,25,33].

В ряде работ показано, что Toll-подобные рецепторы представленные на поверхности антиген-представляющих клеток, таких как дендритные клетки и макрофаги, распознают липополисахарид (LPS) клеточной стенки

пародонтопатогенов и индуцируют врожденные и адаптивные иммунные реакции при пародонтите, что в конечном итоге приводит к резорбции альвеолярной кости [32,99,63,87,100,118,139,140,141, 144].

В работах Garlet G.P.( 2010) и Cochran D.L.(2008) показано, что TLRs, присутствующие на поверхности эпителиальных клеток, распознают PAMPs, и включают транскрипцию ядерных факторов-kB (NFkB) и активатора белка1 (AP-1) [60,78,86]. Они, в свою очередь, активируют механизмы врождённого иммунитета, в том числе выработку цитокинов и хемокинов, а так же механизмы адаптивного иммунитета, что приводит к распространению воспаления и разрушению мягких и костных тканей пародонта[60,78,86].

В экспериментальных работах показано, что в резорбции альвеолярной костной ткани важную роль играют TLR2 и TLR4. Стимуляция этих рецепторов ПАМР Porphyromonas gingivalis ведет к увеличению фактора некроза опухоли альфа (TNF-а) и снижению уровня противовоспалительных цитокинов (экспрессии гена IL-10) [100,140,141].

Хорошо известно, что Toll-подобные рецепторы экспрессируют не только клетки эпителия, но и многие клетки тканей пародонта: макрофаги, нейтрофилы, естественные киллеры, дендритные клетки, фибробласты десны. В ответ на стимуляцию липополисахаридом (LPS) Porphyromonas gingivalis макрофаги и фибробласты десны (GFS) продуцируют провоспалительные цитокины - интерлейкин-6 (IL-6) и фактор некроза опухоли альфа (TNF-alpha) [77,87,91,118,120]. Поэтому регулирование уровня экспрессии TLR2 и TLR4 пародонтопатогенами являются важным фактором, определяющим воспалительную реакцию в пародонте [41,102,132,139 ].

Для определения роли TLR4 в развитии пародонтита, изучали изменение экспрессии генов TLR4 в клетках периодонтальной связки (HPDLCs) в ответ на липополисахарид клеточной стенки пародонтопатогенов. Обработка липополисахаридом повышала экспрессию генов TLR4, TLR5, TLR7 в два раза, а также IL-6. Методом ПЦР в реальном времени были подтверждены изменения экспрессии генов TLR4 и IL-6. Было показано, что индукция

выработки IL-6 зависела от экспресии TLR4. LPS пародонтопатогенов вызывают экспрессию гена TLR4 и таким образом участвует в развитии воспаления в пародонте. Предполагается, что манипулирование экспрессией генов TLR4 потенциально может стать одним из признанных методов лечения пародонтита [45,104,132,141].

Одним из возможных механизмов влияния LPS пародонтопатогенов на регулирование метаболизма костной ткани пародонта продемонстрировано в работе по исследованию экспрессии костного сиалопротеина и IL-8. Сиалопротеин кости является ранним маркером дифференцировки остеобластов. Провоспалительный цитокин, интерлейкин-8 (IL-8), индуцирует дифференцировку остеокластов и поддержание активности резорбции кости [63,99].

В своих исследованиях Li X. (2015) и Curtis M.A.(2011) изучали роль LPS Porphyromonas gingivalis и TLR2, TLR4 и MAPKs пути в регуляции продукции костного сиалопротеина и IL-8 фибробластами периодонтальной связки (hPDLFs). Это исследование показало, что фибробласты hPDLFs, LPS Porphyromonas gingivalis подавляют продукцию костного сиалопротеина и повышают экспрессию гена IL-8 через действие TLR2 и ERK1/2 или сигнального пути р38 МАРК [63,98].

1.1.2. Дефензины эпителиальных клеток при пародонтите

Противомикробные пептиды (ПМП) относятся к классу регуляторных молекул. Их секрецию инициирует связывание То11-подобных рецепторов с патогеном. Они представляют группу катионных белков, способных поражать бактерии, вирусы, грибы, поэтому их называют естественными эндогенными антибиотиками. Кроме того ПМП также являются сигнальными молекулами, вовлеченными в процессы активации клеток иммунной системы и репарации тканей. Известны альфа-дефензины, которые присутствуют в гранулах нейтрофилов (HNP1-4) и бета-дефензины, которые синтезируют

эпителиальные клетки слизистых (HBD1-4). HNP1-4 вовлечены в системные иммунные механизмы, а HBD1-4 в процессах, протекающих в слизистых

оболочках. Дефензины оказывают прямое противомикробное действие и активируют механизмы врожденного и адаптивного иммунного ответа. Существует взаимосвязь ПМП с цитокинами, они взаимно индуцируют друг друга [ 25,28,32 ].

Липополисахарид Porphyromonas gingivalis является основными фактором вирулентности бактерий и активно участвует в развитии хронического пародонтита. LPS P. gingivalis влияет на врожденные иммунные ответы в десневом эпителии, влияет на выработку бета-дефенсинов (hBDs) эпителием десны [43,99,103,151].

Дефензины являются антимикробными пептидами, которые обладают прямой бактерицидной активностью. Дефензины и другие антимикробные пептиды, которые присутствуют в тканях пародонта имеют решающее значение в антимикробнй защите от пародонтопатогенов. Регуляция экспрессии генов дефензинов имеет решающее значение для новых диагностических, профилактических и лечебных методов [64,72,98].

1.1.3. Роль цитокинов в патогенезе пародонтита

Цитокины являются регуляторными молекулами, которые играют важную роль в осуществлении реакций врожденного и адаптивного иммунитета, таких как воспаление, заживление ран, ангиогенез и другие. Они вырабатываются клетками иммунной системы в ответ на активирующий стимул и участвуют в иммунных и воспалительных реакциях, регулируя их силу и продолжительность. Цитокины относят к классу растворимых белковых медиаторов иммунной системы, необходимых для ее развития, функционирования и взаимодействия с другими системами организма. Цитокины продуцируются и действуют преимущественно на клетки-мишени, находящиеся в непосредственной близости от клетки продуцента. Цитокины рассматривают как самостоятельную систему регуляции, обеспечивающую поэтапное развитие защитных реакций на патоген, вначале его локализацию и

удаление, а затем восстановление поврежденных структур тканей [21,22,23,24,25,26,28,33, 35,37,79].

Макрофаги представляют собой важный источник цитокинов. Они играют центральную роль в воспалительной реакции. После стимуляции цитокинами, наивные CD4 + Т-клетки активируются, пролиферируют и дифференцируются в эффекторные клетки хелперы первого и второго типов(ТЫ и Th2), которые вырабатывают свои специфические цитокины. Т-клетки Th1 характеризуются секрецией TNF-а . TNF-a оказывает прямое воздействие на остеокласты, а также на остеобласты путем ингибирования их дифференцировки, что влияет на резорбцию альвеолярной кости [101].

В работе Murakami T. (2016) рассматриваются молекулярные механизмы патогенеза заболеваний пародонта. Длительное воспаление характеризуется непрерывной инфильтрации макрофагами тканей пародонта, которые индуцирует продукцию провоспалительных цитокинов, таких как TNF и IL-1. В тканях пародонта, эти воспалительные цитокины усиливают дифференциацию и активность остеокластов, которые вызывают разрушение альвеолярной кости. По мнению автора ингибирование продукции провоспалительных цитокинов приведет к профилактике или лечению заболеваний пародонта [115].

Макрофаги реагируют на Porphyromonas gingivalis более высокой экспрессией TNF-а, интерлейкина-6, хемоаттрактанта моноцитов белка-1, макрофагального воспалительного белка-1а [119].

Yu T. et all ( 2016) макрофагам отводят центральную роль в патогенезе пародонтита. Решающим механизмом в опосредованном повреждении тканей пародонта считается изменение соотношения макрофагов фенотипов M1 / M2, которое остается неопределенным до настоящего времени. Важное значение отводят балансу цитокинов IL-6 / IL-10, которые вырабатываются этими фенотипами макрофагов [160].

Важный вклад макрофагов в последующее развитие клеточного иммунного ответа на Porphyromonas gingivalis (Pg) и Aggregatibacter

actinomycetemcomitans (Аа) в патогенезе пародонтита изучалось в механизме Th17 / IL-17 [57].

По мнению Zenobia C., et all, (2015) в патогенезе ХГП играет роль интерлейкин-17. Он является ключевым цитокином, c которым связывают активацию Т-клеток и мобилизацию нейтрофилов в зону воспаления. Интерлейкин-17 так же способствует развитию заболевания в пародонте, обладая мощным стимулирующим эффектом на остеокласты. Системное лечение с анти-интерлейкин-17 биопрепаратами показало обнадеживающие результаты в клинических исследованиях. Клинические исследования, с использованием локально управляемых блокаторов интерлейкина-17, может явиться эффективным дополнительным методом лечения этого заболевания [162].

В целом имеющиеся данные указывают на то, что IL-17 играет решающую роль в защите против внеклеточных патогенов и оказывает двойной эффект: усиливает контроль за патогенами с одной стороны и в то же время играет важную роль в резорбции альвеолярной кости. Кроме того, IL-17 вносит свой вклад в местное воспаление путем активации клеток иммунной системы, что приводит к выделению огромного количества провоспалительных цитокинов, таких как IL-1 и TNF-alpha и RANKL.

Интерлейкин 33 — цитокин, принадлежащий к семейству IL-1, обладает сходством с IL-1 и фактором роста фибробластов. Экспрессируется многими клетками организма, его уровень строго коррелирует с уровнем воспаления в ткани. В отличие от провоспалительного IL-1, IL-33 обладает иммунорегуляторными свойствами. В развитии хронического воспаления тканей пародонта отводят важную роль активации иммунного ответа на Porphyromonas gingivalis через инфламмасому NLRP3, за которым следует ответ, опосредованный другими цитокинами этого семейства [154].

Экспрессия цитокина IL-33 эпителиальными клетками усиливает выработку цитокинов хелперами Th2 типа. Porphyromonas gingivalis повышает экспрессию IL-33 десневыми эпителиальными клетками [143].

В ряде исследований установлено, что при пародонтите определяется повышенное содержание 1Ь-б в десневой жидкости [88].

Данный цитокин относят к группе основных медиаторов воспаления, задействованных в противомикробной защите, он секретируется Т-лимфоцитами, фибробластами, моноцитами, эндотелиальными и другими клетками.

По многообразию клеточных источников продукции и количеству мишеней биологического действия 1Ь-б может является типичным интерлейкином, осуществляющим связь между различными типами клеток, участвующих в реализации воспалительной реакции организма [32,11б].

Несмотря на то, что биологический смысл цитокинов заключается в регуляции защитных противоинфекционных механизмов, нарушение соотношения про- и противовоспалительных групп цитокинов может являться причиной прогрессирования воспалительно-деструктивного процесса в пародонте и приводить к резорбции альвеолярной кости. При избыточном накоплении в очаге воспаления, провоспалительные цитокины вызывают целый комплекс патологических реакций, действуя на различные типы клеток [32].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Балыкин Роман Анатольевич, 2019 год

Список литературы

1. Ганковская О.А., Зверев В.В., Лавров В.Ф., Блинкова Л.П., Ганковская Л.В., Кузнецов П.А. Изменение уровня экспрессии сигнальных рецепторов врожденного иммунитета при инфекции, вызванной Candida albicansin vitro и in vivo. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2009; 3:60-64.

2. Ганковская О.А, Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Лавров В.Ф., Романовская В.В., Карташов Д.Д., Фензелева В.А. Роль Toll-подобных рецепторов и дефенсинов в противомикробной защите урогенитального тракта женщин. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2008;1:46-50.

3. Ганковская Л.В., Хелминская Н.М., Свитич О.А., Молчанова Е.А., Греченко В.В., Соколова Е.В., Русанова К.В. Изучение роли факторов врождённого иммунитета (TLR2, HBD-2, TNF-a, TGF- р) в патогенезе пародонтита. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2015; 6:93-97.

4. Ганковская Л.В., Хелминская Н.М., Молчанова Е.А., Свитич О.А. Роль факторов врождённого иммунитета в патогенезе пародонтита. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2016; 2:100-107.

5. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: «Практика», 1999, 459

С.

6. Григорович Э.Ш. Особенности клинического течения хронического генерализованного пародонтита и полиморфизм генов ключевых воспалительных цитокинов IL-1B, IL-1RN, TNFA, IL-4. Уральский медицинский журнал. 2015; 6(129):36-32.

7. Григорович Э.Ш., Черкашин Д.С. Механизмы иммунной регуляции персистенции воспалительного инфильтрата в тканях десны больных хроническим генерализованным пародонтитом. // Дальневосточный медицинский журнал. - 2010. - №1. - С.86-89.

8. Грудянов А.И., Ерохин А.И. Хирургические методы лечения заболеваний пародонта. -М.-2006.-120с.

9. Грудянов А.А., Зорина А.И., Зорин В.Л., Переверзев Р.В. Использование аутофибробластов при хирургическом лечении пародонтита. - Стоматология. -2013. - №5. - с.19-21.

10. Грудянов А.И., Овчинникова В.В. Частота выявления различных представителей пародонтопатогенной микрофлоры при пародонтите разной степени тяжести. - Стоматология. -2009. - №3. - С.34-37.

11. Грудянов А.И., Фролова О.А., Исаджанян К.Е., Попова В.М. Клинико-лабораторное изучение эффективности применения бактериофагов в пародонтологии. Стоматология для всех. 2017; 3:34-39

12. Грудянов А.И., Фролова О.А., Исаджанян К.Е., Попова В.М. Состав микрофлоры полости рта у пациентов с начальными формами воспалительных заболеваний пародонта.- Стоматология. 2016. Т.6.№2.С.67.

13. Зорина О.А. Взаимосвязь качественного и количественного состава биоценозов ротовой полости и индивидуального генетического профиля на фоне воспалительных заболеваний пародонта: автореф. дис. д.м.н: 2011. - 278 с.

14. Зорина О.А., Аймадинова Н.К., Басова А.А., Ребриков Д.В. Взаимосвязь молекулярно-генетических маркеров с клиническими признаками и факторами риска развития пародонтита. - Стоматология. 2016; 95(5): 12-18.

15. Зорина О.А., Аймадинова Н.К., Борискина О.А., Басова А.А., Ребриков Д.В. Основные изменения нормальной микрофлоры пародонта при хроническом генерализованном пародонтите, выявленные с помощью метагеномного секвенирования. - Российская стоматология. 2017; 10(2):41-48.

16. Зорина О.А., Аймадинова Н.К., Борискина О.А., Шевелев А.Б. Исследование регуляции экспрессии ФНОА и матриксных металлопротеиназ ММР8 и ММР9 в ткани пародонта в норме и при хроническом пародонтите. -Российский стоматологический журнал. 2016; 20(3): 125-130.

17. Зорина О.А., Аймадинова Н.К., Ребриков Д.В. Гендерный анализ микробиома пародонтальных карманов у пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом. - Российский стоматологический журнал. 2016; 20(1): 19-22.

18. Зорина О.А., Кулаков А.А., Ребриков Д.В. // Количественная оценка соотношения патогенных представителей микробиоценоза полости рта в норме и при пародонтите. - Стоматология. - 2011. - №3. - С.40-42.

19. Иванюшко Т.П. Роль иммунных механизмов в патогенезе пародонтита и обоснование методов локальной иммунотерапии. Автореф. дис. д.м.н. 2002. 46 с.

20. Иванюшко Т.П., Тумбинская Л.В., Донников А.Е. // Исследование условно-патогенных микроорганизмов методом ПЦР в реальном времени у больных с пародонтитом. - Стоматология. - 2011. - №5. - С.43-47.

21. Кетлинский С.А Роль Т-хелперов типов 1и 2 в регуляции клеточного и гуморального иммунитета. - Иммунология. -2002. -т.23. -№2. -с.77.

22. Кетлинский С.А., Симбирцев А.С., Воробьев А.А. Эндогенные иммуномодуляторы. - СПб., Гиппократ. -1992. -256с.

23. Кетлинский С.А., Симбирцев А.С. Цитокины. - С-Петербург. - 2008. -550с.

24. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Мешкова Р.Я. Клиническая иммунология и аллергология, М.: «Практика», "Гэотар-Медиа", 2011.

25. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Мешкова Р.Я. Клиническая иммунология и аллергология с основами общей иммунологии.М.-2011.-639с.

26. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В. Иммуноцитокины и локальная иммунокоррекция. Иммунология, 1995, № 1, с. 4-7.

27. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Рубакова Э.И. Система цитокинов. -Учебное пособие. - Москва «Янус- К». - 2000. - 64.

28. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Хорева М.В., Соколова Е.В. Система цитокинов, комплемента и современные методы иммунного анализа. - Москва. - 2001. -158с.

29. Коэн Э. С. Атлас косметической и реконструктивной хирургии пародонта, М.:Практическая медицина, 2011.-512с.

30. Кулаков А.А., Ребриков Д.В., Зорина О.А., Борискина О.А. Метод ПЦР «в реальном времени» для анализа количественного и качественного соотношений микробиоценоза пародонтального кармана. - Стоматология. -2011. -№3. -С.31-33.

31. Кулаков А.А, Зорина О.А., Борискина О.А. Роль защитных факторов организма в патогенезе воспалительных заболеваний пародонта. -Стоматология. - 2010, - №6. - С.72-76.

32. Ламонт, Р.Дж. Микробиология и иммунология для стоматологов.; пер. с англ. В.К. Леонтьева. / Р.Дж. Ламонт, М.С. Лантц, Р.А. Берне и др.-М.: Практическая медицина, 2010. -504 с.

33. Макаров О.В., Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Бахарева И.В., Ганковская О.А. Невынашивание беременности, инфекция, врожденный иммунитет.-М.-2007.-175с.

34. Перова М.Д. Ткани пародонта: норма, патология, пути восстановления.-Триада.-2005.-312с.

35. Симбирцев А.С. Цитокины: Классификация и биологические функции. -Цитокины и воспаление. - 2004. - с.16-22.

36. Хабриев Р.У., Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Долгина Е.Н. - Метод персонифицированной иммунотерапии (Медицинская технология) - Москва 2011. - 21с.

37. ЯрилинА.А.Иммунология.-2010.-748с.

38. Aida Y., Kurihara H., Kato K. Wnt3a promotes differentiation of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells into cementoblast-like cells.- In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2018 Jun;54(6):468-476.

39. Al-Attar A., Alimova Y., Kirakodu S., Kozal A., Novak M.J., Stromberg A.J., Orraca L., Gonzalez-Martinez J., Martinez M., Ebersole J.L., Gonzalez O.A. Activation of Notch-1 in oral epithelial cells by P. gingivalis triggers the expression

of the antimicrobial protein PLA2-IIA.- Mucosal Immunol. 2018 Jul;11(4): 10471059.

40. Alvarez Echazu M.I., Olivetti C.E., Anesini C., Perez C.J., Alvarez G.S., Desimone M.F. Development and evaluation of thymol-chitosan hydrogels with antimicrobial-antioxidant activity for oral local delivery. Mater Sci Eng C Mater Biol Appl. 2017 Dec 1;81:588-596.

41. Andrukhov O., Ertlschweiger S., Moritz A., Bantleon H.P., Rausch-Fan X. Different effects of P. gingivalis LPS and E. coli LPS on the expression of interleukin-6 in human gingival fibroblasts. - Acta Odontol Scand. 2014 Jul;72(5):337-45.

42. Aung W.P., Chotjumlong P., Pata S., Montreekachon P., Supanchart C., Khongkhunthian S., Sastraruji T., Krisanaprakornkit S. Inducible expression of A Disintegrin and Metalloproteinase 8 in chronic periodontitis and gingival epithelial cells. - J Periodontal Res. 2016 Nov 17.

43. Bedi T., Mahendra J., Ambalavanan N. Defensins in periodontal health. -Indian J Dent Res. 2015 Jul-Aug;26(4):340-4.

44. Behdin S., Monje A., Lin G.H., Edwards B., Othman A., Wang H.L. Effectiveness of Laser Application for Periodontal Surgical Therapy: Systematic Review and Meta-Analysis.-J Periodontol. 2015 Dec;86(12): 1352-63.

45. Beklen A., Sarp A.S., Uckan D., Tsaous Memet G. The function of TLR4 in interferon gamma or interleukin-13 exposed and lipopolysaccharide stimulated gingival epithelial cell cultures. - Biotech Histochem. 2014 Oct;89(7): 505-12.

46. Belibasakis G.N., Kast J.I., Thurnheer T., Akdis C.A., Bostanci N. The expression of gingival epithelial junctions in response to subgingival biofilms. Virulence. 2015;6(7):704-9.

47. Benakanakere M., Kinane D. F. Innate cellular responses to the periodontal biofilm. - Frontiers of Oral Biology. - 2012. vol. 1, pp. 41-55.

48. Benedetto A. D., Gigante I., Colucci S., Grano M. Periodontal Disease: Linking the Primary Inflammation to Bone Loss. Clinical and Developmental Immunology. - 2013, Article ID 503754, 1-7 p.

49. Blasi I., Korostoff J., Dhingra A., Reyes-Reveles J., Shenker B.J., Shahabuddin N., Alexander D., Lally E.T., Bragin A., Boesze-Battaglia K. Variants of Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide alter lipidation of autophagic protein, microtubule-associated protein 1 light chain 3, LC3. Mol Oral Microbiol. 2016 Dec;31(6):486-500.

50. Bostanci N., Belibasakis G. N. Porphyromonas gingivalis: an invasive and evasive opportunistic oral pathogen. - 2012. - FEMS Microbiology Letters, vol. 333, no. 1, pp. 1-9.

51. Bottino M.C., Thomas V. Membranes for Periodontal Regeneration—A Materials Perspective.-Front Oral Biol. 2015;17:90-100.

52. Cai X., Yang F., Walboomers X.F., Wang Y., Jansen J.A., van den Beucken J.P., Plachokova A.3. Periodontal regeneration via chemoattractive constructs.- J Clin Periodontol. 2018 Jul;45(7):851-860.

53. Chaves de Souza J.A., Frasnelli S.C., Curylofo-Zotti F.A., Ávila-Campos M.J., Spolidório L.C., Zamboni D.S., Graves D.T., Rossa C. Jr. NOD1 in the modulation of host-microbe interactions and inflammatory bone resorption in the periodontal disease model. - Immunology. 2016 Dec;149(4):374-385.

54. Chen F.M., An Y., Zhang R., Zhang M. New insights into and novel applications of release technology for periodontal reconstructive therapies. J Control Release 2011;149:92-110.

55. Chen F.M., Gao L.N., Tian B.M., Zhang X.Y., Zhang Y.J., Dong G.Y., Lu H., Chu Q., Xu J., Yu Y., Wu R.X., Yin Y., Shi S., Jin Y. Treatment of periodontal intrabony defects using autologous periodontal ligament stem cells: a randomized clinical trial.-Stem Cell Res Ther. 2016 Feb 19;7:33.

56. Chen F.M. Periodontal tissue engineering and regeneration. - Zhonghua Kou Qiang Yi Xue Za Zhi. 2017 Oct 9;52(10):610-614.

57. Cheng W.C., Van Asten S.D., Burns L.A., Evans H.G., Walter G.J., Hashim A., Hughes F.J., Taams L.S. Periodontitis-associated pathogens P. gingivalis and A. actinomycetemcomitans activate human CD14(+) monocytes leading to enhanced Th17/IL-17 responses. Eur J Immunol. 2016 Sep;46(9):2211-21.

58. Cho Y.D., Kim K.H., Ryoo H.M., Lee Y.M., Ku Y., Seol Y.J. Recent advances of useful cell sources in the periodontal regeneration. -Curr Stem Cell Res Ther. 2018 Aug 15.

59. Coburn B.W., Sayles H.R., Payne J.B., Redman R.S., Markt J.C., Beatty M.W., Griffiths G.R., McGowan D.J., Mikuls T.R. Performance of Self-Reported Measures for Periodontitis in Rheumatoid Arthritis and Osteoarthritis.- . Journal of Periodontology January 2015, Vol. 86, No. 1, P. 16-26

60. Cochran D. L. Inflammation and bone loss in periodontal disease. - Journal of Periodontology. - 2008. - vol. 79, no. 8, pp. 1569-1576.

61. Cochran D.L., Cobb C.M., Bashutski J.D., Chun Y.P., Lin Z., Mandelaris G.A., McAllister B.S., Murakami S., Rios H. F. Emerging Regenerative Approaches for Periodontal Reconstruction: A Consensus Report From the AAP Regeneration Workshop.- Journal of Periodontology.-February 2015, Vol. 86, No. 2-s, P. S153-S156

62. Cortes-Vieyra R., Rosales C., Uribe-Querol E. Neutrophil Functions in Periodontal Homeostasis. - J Immunol Res. 2016;2016:1396106.

63. Curtis M.A., Percival R.S., Devine D., Darveau R.P., Coats S.R., Rangarajan M., Tarelli E., Marsh P.D. Temperature-dependent modulation of Porphyromonasgingivalis lipid A structure and interaction with the innate host defenses. - Infect Immun. 2011 Mar;79(3):1187-93.

64. Cui D., Lyu J., Li H., Lei L., Bian T., Li L., Yan F. Human ß-defensin 3 inhibits periodontitis development by suppressing inflammatory responses in macrophages. Mol Immunol. 2017 Nov; 91:65-74.

65. da Silva M.A., Oliveira R.N., Mendonfa R.H., Lourenfo T.G., Colombo A.P., Tanaka M.N., Tude E.M., da Costa M.F., Thire R.M.. Evaluation of

metronidazole-loaded poly(3-hydroxybutyrate) membranes to potential application in periodontitis treatment.- J Biomed Mater Res B Appl Biomater. 2016 Jan;104(1):106-15.

66. Dabra S., Chhina K., Soni N., Bhatnagar R. Tissue engineering in periodontal regeneration: A brief review.-DentResJ (Isfahan). 2012 Nov;9(6):671-80.

67. Deng L., Hong H., Zhang X., Chen D., Chen Z., Ling J., Wu L. Down-regulated lncRNA MEG3 promotes osteogenic differentiation of human dental follicle stem cells by epigenetically regulating Wnt pathway. - Biochem Biophys Res Commun. 2018 Aug 10. pii: S0006-291X(18)31664-4.

68. Delitto A.E., Rocha F., Decker A.M., Amador B., Sorenson H.L., Wallet S.M. MyD88-mediated innate sensing by oral epithelial cells controls periodontal inflammation. - Arch Oral Biol. 2018 Mar;87:125-130.

69. Ding P.H., Jin L. The role of lipopolysaccharide-binding protein in innate immunity: a revisit and its relevance to oral/periodontal health. J Periodontal Res. 2014 Feb;49(1):1-9.

70. Dogan G.E., Aksoy H., Demir T., Laloglu E., Ozyildirim E., Saglam E., Akfay F. Clinical and biochemical comparison of guided tissue regeneration versus guided tissue regeneration plus low-level laser therapy in the treatment of class II furcation defects: A clinical study. J Cosmet Laser Ther. 2016;18(2):98-104.

71. Dogan G.E., Demir T., Orbak R. Effect of low-level laser on guided tissue regeneration performed with equine bone and membrane in the treatment of intrabony defects: a clinical study.- Photomed Laser Surg. 2014 Apr;32(4):226-31.

72. Dommisch H., Jepsen S. Diverse functions of defensins and other antimicrobial peptides in periodontal tissues. Periodontol 2000. - 2015; 0ct;69(1):96-110.

73. Drury J.L., Chung W.O. DNA methylation differentially regulates cytokine secretion in gingival epithelia in response to bacterial challenges. Pathog Dis. 2015 Mar;73(2):1-6.

74. Du J1, Li M2. Functions of Periostin in dental tissues and its role in periodontal tissues' regeneration. Cell Mol Life Sci. 2017 Dec;74(23):4279-4286.

75. Duan X., Lin Z., Lin X., Wang Z., Wu Y., Ji M., Lu W., Wang X., Zhang D. Study of platelet-rich fibrin combined with rat periodontal ligament stem cells in periodontal tissue regeneration. J Cell Mol Med. 2018 Feb;22(2): 1047-1055.

76. Gankovskaya L.V., Khelminskaya N.M., Molchanova E.A., Svitich O.A. Role of innate immunity factors in periodontitis pathogenesis. - Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. 2016 Mar-Apr;(2):100-7.

77. Gao H., Zhang X., Zheng Y., Peng L., Hou J., Meng H. S100A9-induced release of interleukin (IL)-6 and IL-8 through toll-like receptor 4 (TLR4) in human periodontal ligament cells. - MolImmunol. 2015 Oct;67(2 Pt B):223-32.

78. Garlet G. P. Destructive and protective roles of cytokines in periodontitis: a re-appraisal from host defense and tissue destruction viewpoints. Journal of Dental Research. - 2010. - vol. 89, no. 12, pp. 1349-1363.

79. Garlet G. P., Cardoso C. R., Silva T. A. et all. Cytokine patterndetermines the progression of experimental periodontal diseaseinduced by Actinobacillus actinomycetemcomitans throughthe modulation of MMPs, RANKL, and their physiological Inhibitors.-OralMicrobiology and Immunology. - 2006. - vol. 21, № 1, pp. 12-20.

80. Giacomelli C., Natali L., Nisi M., De Leo M., Daniele S., Costa B., Graziani F., Gabriele M., Braca A., Trincavelli M.L., Martini C. Negative effects of a high tumour necrosis factor-a concentration on human gingival mesenchymal stem cell trophism: the use of natural compounds as modulatory agents.- Stem Cell Res Ther. 2018 May 11 ;9(1): 135.

81. Giannobile W.V. and McClain P.K. Enhancing Periodontal Health Through Regenerative Approaches.- Journal of Periodontology. February 2015, Vol. 86, No. 2-s, P. S1-S3.

82. Gokyu M., Kobayashi H., Nanbara H., Sudo T., Ikeda Y., Suda T., Izumi Y.. Thrombospondin-1 production is enhanced by Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide in THP-1 cells. PLoS One. 2014 Dec 12;9(12):e115107.

83. Groeger S.E., Meyle J. Epithelial barrier and oral bacterial infection. Periodontol 2000. 2015 Oct;69(1):46-67.

84. Guazzo R., Gardin C., Bellin G., Sbricoli L., Ferroni L., Ludovichetti F.S., Piattelli A., Antoniac I., Bressan E., Zavan B. Graphene-Based Nanomaterials for Tissue Engineering in the Dental Field.- Nanomaterials (Basel). 2018 May 20;8(5). pii: E349.

85. Fujita T., Yoshimoto T., Kajiya M., Ouhara K., Matsuda S., Takemura T., Akutagawa K., Takeda K., Mizuno N., Kurihara H. Regulation of defensive function on gingival epithelial cells can prevent periodontal disease.- Jpn Dent Sci Rev. 2018 May;54(2):66-75.

86. Hans M., Hans V. M. Toll-like receptors and their dual role in periodontitis: a review. - Journal of Oral Science. - 2011. - vol. 53, no. 3, pp. 263-271.

87. Hutcherson J.A., Bagaitkar J., Nagano K., Yoshimura F., Wang H., Scott D.A. Porphyromonasgingivalis Rag B is a proinflammatory signal transducer and activator of transcription 4 agonist. Mol Oral Microbiol. 2015 Jun;30(3):242-52.

88. Ionel A., Lucaciu O., Täbäran F., Berce C., Toader S., Hurubeanu L., Bondor C., Campian R.S. Histopathological and clinical expression of periodontal disease related to the systemic inflammatory response. HistolHistopathol. 2017 Apr;32(4):379-384.

89. Iwata T., Yamato M., Ishikawa I., Ando T., Okano T. Tissue engineering in periodontal tissue.-Anat .Rec. (Hoboken). 2014.- Jan;297(1):16-25.

90. Jin Y., Wang L., Liu D., Lin X. Tamibarotene modulates the local immune response in experimental periodontitis. Int Immunopharmacol. 2014 Dec;23(2):537-45.

91. Jung Y.J., Choi Y.J., An S.J., Lee H.R., Jun H.K., Choi B.K. Tannerella forsythia GroEL induces inflammatory bone resorption and synergizes with interleukin-17. Mol Oral Microbiol.2016 Aug 3.

92. Kao R.T., Nares S., Reynolds M.A. Periodontal regeneration - intrabony defects: a systematic review from the AAP Regeneration Workshop.- J Periodontol. 2015 Feb;86(2 Suppl):S77-104.

93. Katz J. Goulfschin. The interleukin consept and the periodontal diseases. Medical Hypothses, 1989. 29, 251-254.

94. Kawamoto K., Miyaji H., Nishida E., Miyata S., Kato A., Tateyama A1, Furihata T., Shitomi K., Iwanaga T., Sugaya T. Characterization and evaluation of graphene oxide scaffold for periodontal wound healing of class II furcation defects in dog.- Int J Nanomedicine. 2018 Apr 18;13:2365-2376.

95. Keskiner I., Alkan A., Acikgoz G., Arpak N., Kaplan S., Arslan H. Platelet-rich plasma and autogenous bone graft combined with guided tissue regeneration in periodontal fenestration defects in dogs.- Int J Periodontics Restorative Dent. 2014 Nov-Dec;34(6):e112-20.

96. Kothiwale S.V. The evaluation of chorionic membrane in guided tissue regeneration for periodontal pocket therapy: a clinical and radiographic study. Cell Tissue Bank. 2014 Mar;15(1):145-52.

97. Li C., Li B., Dong Z., Gao L., He X., Liao L., Hu C., Wang Q., Jin Y. Lipopolysaccharide differentially affects the osteogenic differentiation of periodontal ligament stem cells and bone marrow mesenchymal stem cells through Toll-like receptor 4 mediated nuclear factor kB pathway. - Stem Cell Res Ther. 2014 May 27;5(3):67.

98. Li X., Duan D., Yang J., Wang P., Han B., Zhao L., Jepsen S., Dommisch H., Winter J., Xu Y. The expression of human P-defensins (hBD-1, hBD-2, hBD-3, hBD-4) in gingival epithelia. Arch Oral Biol. 2016 Jun;66:15-21.

99. Li X., Wang X., Zheng M., Luan Q.X. Mitochondrial reactive oxygen species mediate the lipopolysaccharide-induced pro-inflammatory response in human gingival fibroblasts. - Exp Cell Res. 2016 Sep 10;347(1):212-21.

100. Lin J., Bi L., Yu X., Kawai T., Taubman M.A., Shen B., Han X.. Porphyromonasgingivalis exacerbates ligature-induced, RANKL-dependent alveolar

bone resorption via differential regulation of Toll-like receptor 2 (TLR2) and TLR4.- Infectlmmun. 2014 0ct;82(10):4127-34.

101. Lin Z., Rios H.F., Cochran D.L. Emerging regenerative approaches for periodontal reconstruction: A systematic review from the AAP regeneration workshop. JPeriodontol 2015;86(Suppl.):S134-S152.

102. Liu H.J., Liu X.Y., Jing D.B. Icariin induces the growth, migration and osteoblastic differentiation of human periodontal ligament fibroblasts by inhibiting Toll-like receptor 4 and NF-kB p65 phosphorylation.- Mol Med Rep. 2018 Sep;18(3):3325-3331.

103. Lombardo Bedran T.B., Feghali K., Zhao L., Palomari Spolidorio D.M., Grenier D. Green tea extract and its major constituent, epigallocatechin-3-gallate, induce epithelial beta-defensin secretion and prevent beta-defensin degradation by Porphyromonas gingivalis.- J Periodontal Res. 2013 Nov 9.

104. Lu Q., Darveau R.P., Samaranayake L.P., Wang C.Y., Jin L. Differential modulation of human {beta}-defensins expression in human gingival epithelia by Porphyromonasgingivalis lipopolysaccharide with tetra- and penta-acylated lipid A structures.InnateImmun.-2009. - Dec;15(6):325-35.

105. Maeda H., Wada N., Tomokiyo A., Monnouchi S., Akamine A. Prospective potency of TGF-P1 on maintenance and regeneration of periodontal tissue.- Int Rev Cell Mol Biol. 2013;304:283-367.

106. Mahanonda R., Pichyangkul S. Toll-like receptors and their role in periodontal health and disease. - Periodontology2000. - 2007. - vol. 43, no. 1, pp. 41-55.

107. Marchesan J., Jiao Y.Z., Schaff R.A., Hao J., Morelli T., Kinney J.S., Gerow E., Sheridan R., Rodrigues V., Paster B.J., Inohara N., Giannobile W.V.

TLR4, NOD1 and NOD2 mediate immune recognition of putative newly identified periodontal pathogens. - Mol Oral Microbiol.2015 Jul 14.

108. Marchesan J., Jiao Y.Z., Schaff R.A., Hao J., Morelli T., Kinney J.S., Gerow E., Sheridan R., Rodrigues V., Paster B.J., Inohara N., Giannobile W.V.

TLR4, NOD1 and NOD2 mediate immune recognition of putative newly identified periodontal pathogens. - Mol Oral Microbiol. 2016 Jun;31(3):243-58.

109. Meyle J., Chapple I. Molecular aspects of the pathogenesis of periodontitis. Periodontol 2000. 2015 Oct;69(1):7-17. doi: 10.1111/prd.12104.

110. Mitani A., Takasu H., Horibe T., Furuta H., Nagasaka T., Aino M., Fukuda M., Fujimura T., Mogi M., Noguchi T. Five-year clinical results for treatment of intrabony defects with EMD, guided tissue regeneration and open-flap debridement: a case series.- J Periodontal Res. 2015 Feb;50(1):123-30.

111. Mizraji G., Nassar M., Segev H., Sharawi H., Eli-Berchoer L., Capucha T., Nir T., Tabib Y., Maimon A., Dishon S., Shapira L., Nussbaum G., Wilensky A., Hovav A.H. Porphyromonas gingivalis Promotes Unrestrained Type I Interferon Production by Dysregulating TAM Signaling via MYD88 Degradation.- Cell Rep. 2017 Jan 10;18(2):419-431.

112. Mopur J.M., Devi T.R., Ali S.M., Srinivasa T.S., Gopinath V., Salam A.R. Clinical and radiographic evaluation of regenerative potential of GTR membrane (Biomesh®) along with alloplastic bone graft (Biograft®) in the treatment of periodontal intrabony defects.-J Contemp Dent Pract. 2013 May 1;14(3):434-9.

113. Mudda J.A., Bajaj M. Stem cell therapy: A challenge to periodontist. Indian J Dent Res 2011;22:132-139.

114. Munchow E.A., Albuquerque M.T., Zero B., Kamocki K., Piva E., Gregory R.L., Bottino M.C. Development and characterization of novel ZnO-loaded electrospun membranes for periodontal regeneration. - Dent Mater. 2015 Sep;31(9):1038-51.

115. Murakami T1. Understanding and treatment strategy of the pathogenesis of periodontal disease based on chronic inflammation. Clin Calcium. 2016 May;26(5):766-72.

116. Naruishi K., Nagata T. Biological effects of interleukin-6 on Gingival Fibroblasts: Cytokine regulation in periodontitis.- J Cell Physiol. 2018 Sep;233(9):6393-6400.

117. Ohlrich E. J., Cullinan M. P., Seymour G. J. The immunopathogenesis of periodontal disease. - AustralianDentalJournal. - 2009. - vol. 54, supplement 1, pp. S2-S10.

118. Palm E., Demirel I., Bengtsson T., Khalaf H. The role of toll-like and protease-activated receptors in the expression of cytokines by gingival fibroblasts stimulated with the periodontal pathogen Porphyromonasgingivalis. - Cytokine.2015 Aug 26.pii: S1043-4666(15)30052-1.

119. Papadopoulos G., Shaik-Dasthagirisaheb Y.B., Huang N., Viglianti G.A., Henderson A.J., Kantarci A., Gibson F.C. 3rd. Immunologic environment influences macrophage response to Porphyromonas gingivalis. Mol Oral Microbiol.2016 Jun 27.

120. Park S.R., Kim D.J., Han S.H., Kang M.J., Lee J.Y., Jeong Y.J., Lee S.J., Kim T.H., Ahn S.G., Yoon J.H., Park J.H. Diverse Toll-like receptors mediate cytokine production by Fusobacterium nucleatum and Aggregatibacteractinomycetemcomitans in macrophages. - Infect Immun. 2014 May;82(5): 1914-20.

121.PadialMolina M., Marchesan J.T., Taut A.D., Jin Q., Giannobile W.V., Rios H. F. Methods to validate tooth-supporting regenerative therapies. Methods Mol Biol 2012;887:135-148.

122. Payne J. B., Golub L. M. Using tetracyclines to treat osteoporotic/osteopenic bone loss: from the basic science laboratory to the clinic. - Pharmacological Research. - 2011. - vol. 63, no. 2, pp. 121-129,.

123. Qasim S.B., Delaine-Smith R.M., Fey T., Rawlinson A., Rehman I.U. Freeze gelated porous membranes for periodontal tissue regeneration.- Acta Biomater. 2015 Sep;23:317-28.

124. Qasim S.B., Najeeb S., Delaine-Smith R.M., Rawlinson A., Ur Rehman I. Potential of electrospun chitosan fibers as a surface layer in functionally graded GTR membrane for periodontal regeneration. - Dent Mater. 2017 Jan;33(1):71-83.

125. Reddi A.H. Bone morphogenetic proteins: from basic science to clinical applications. J. Bone Joint Surg. Am. 2001. - 83-A. -Suppl. 1: S1-S6.

126. Reynolds M.A., Kao R.T., Camargo P.M., Caton J.G., Clem D.S., Fiorellini J.P., Geisinger M.L., Mills M.P., Nares S., Nevins M.L. Periodontal regeneration -intrabony defects: a consensus report from the AAP Regeneration Workshop.- J Periodontol. 2015 Feb;86(2 Suppl):S105-7.

127. Rezende M.L., Cunha Pde O., Damante C.A., Santana A.C., Greghi S.L., Zangrando M.S. Cyanoacrylate Adhesive as an Alternative Tool for Membrane Fixation in Guided Tissue Regeneration.- JContemp Dent Pract. 2015.- Jun 1;16(6):512-8.

128. Rios H.F., Lin Z., Oh B., Park C.H., Giannobile W.V. Cell- and gene-based therapeutic strategies for periodontal regenerative medicine. JPeriodontol 2011;82:1223-1237.

129. Ruby J., Martin M., Passineau M.J., Godovikova V., Fenno J.C., Wu H. Activation of the Innate Immune System by Treponema denticola Periplasmic Flagella through Toll-like Receptor 2. Infect Immun. 2017 Oct 30. pii: IAI.00573-17.

130. Sampath T.K., Maliakal J.C., Hauschka P.V. et. all. Recombinant human osteogenic protein-1 (hOP-1) induces new bone formation in vivo with a specific activity comparable with natural bovine osteogenic protein and stimulates osteoblast proliferation and differentiation in vitro. J. Biol. Chem. 1992; 267: 20352-62).

131. Sánchez-Torres A., Sánchez-Garcés M.Á., Gay-Escoda C. Materials and prognostic factors of bone regeneration in periapical surgery: a systematic review.-Med Oral Patol Oral Cir Bucal. 2014 Jul 1;19(4):e419-25.

132. Savitri I.J., Ouhara K., Fujita T., Kajiya M., Miyagawa T., Kittaka M., Yamakawa M., Shiba H., Kurihara H. Irsogladine maleate inhibits Porphyromonasgingivalis-mediated expression of toll-like receptor 2 and interleukin-8 in human gingival epithelial cells. J Periodontal Res. 2015 Aug;50(4):486-93.

133. Schwinté P., Mariotte A., Anand P., Keller L., Idoux-Gillet Y., Huck O., Fioretti F., Tenenbaum H., Georgel P., Wenzel W., Irusta S., Benkirane-Jessel N. Anti-inflammatory effect of active nanofibrous polymeric membrane bearing

nanocontainers of atorvastatin complexes. Nanomedicine (Lond). 2017 Nov 2. ;223-237.

134. Sheikh Z., Khan A.S., Roohpour N., Glogauer M., Rehman I.U. Protein adsorption capability on polyurethane and modified-polyurethane membrane for periodontal guided tissue regeneration applications.- Mater Sci Eng C Mater Biol Appl. 2016 Nov 1;68:267-75.

135. Shuai Y., Ma Y., Guo T., Zhang L., Yang R., Qi M., Liu W., Jin Y. Dental Stem Cells and Tooth Regeneration. - Adv Exp Med Biol.- 2018.- Jul 27.

136. Shue L.,Yufeng Z., Mony U. Biomaterials for periodontal regeneration: a review of ceramics and polymers.- Biomatter. 2012 Oct-Dec;2(4):271-7.

137. Song B., Zhang Y., Chen L., Zhou T., Huang W., Zhou X., Shao L. The role of Toll-like receptors in periodontitis. - Oral Dis. 2016 Feb 29.

138. Souza J.A., Medeiros M.C., Rocha F.R., de Aquino S.G., Ávila-Campos M.J., Spolidorio L.C., Zamboni D.S., Graves D.T., Rossa C. Junior. Role of NOD2 and RIP2 in host-microbe interactions with Gram-negative bacteria: insights from the periodontal disease model. - Innate Immun. 2016 Nov;22(8):598-611.

139. Sun Y., Li H., Sun M.J., Zheng Y.Y., Gong D.J., Xu Y. Endotoxin tolerance induced by lipopolysaccharides derived from Porphyromonasgingivalis and Escherichia coli: alternations in Toll-like receptor 2 and 4 signaling pathway. -Inflammation. 2014 Feb;37(1):268-76.

140. Sun Y., Shu ., Li C.L., Zhang M.Z. Gram-negative periodontal bacteria induce the activation of Toll-like receptors 2 and 4, and cytokine production in human periodontal ligament cells. - J Periodontol. 2010 0ct;81(10): 1488-96.

141. Sun Y., Shu R., Zhang M.Z., Wu A.P. Toll-like receptor 4 signaling plays a role in triggering periodontal infection. - FEMS Immunol Med Microbiol. 2008 Apr;52(3):362-9.

142. Sunandhakumari V.J., Vidhyadharan A.K., Alim A., Kumar D., Ravindran J., Krishna A., Prasad M. Fabrication and In Vitro Characterization of Bioactive Glass/Nano Hydroxyapatite Reinforced Electrospun Poly(e-Caprolactone)

Composite Membranes for Guided Tissue Regeneration.- Bioengineering (Basel). 2018 Jul 15;5(3). pii: E54.

143. Tada H., Matsuyama T., Nishioka T., Hagiwara M., Kiyoura Y., Shimauchi H., Matsushita K. Porphyromonas gingivalis Gingipain-Dependently Enhances IL-33 Production in Human Gingival Epithelial Cells. - PLoS One. 2016 Apr 8;11(4):e0152794.

144. Tang L., Zhou X.D., Wang Q., Zhang L., Wang Y., Li X.Y., Huang D.M. Expression of TRAF6 and pro-inflammatory cytokines through activation of TLR2, TLR4, NOD1, and NOD2 in human periodontal ligament fibroblasts. - Arch Oral Biol. 2011 Oct;56(10): 1064-72.

145. Tansriratanawong K., Wongwan P., Ishikawa H., Nakahara T., Wongravee K. Cellular responses of periodontal ligament stem cells to a novel synthesized form of calcium hydrogen phosphate with a hydroxyapatite-like surface for periodontal tissue engineering.- J Oral Sci. 2018 Aug 12.

146. Thurnheer T., Belibasakis G.N., Bostanci N. Colonisation of gingival epithelia by subgingival biofilms in vitro: role of "red complex" bacteria. Arch Oral Biol. 2014 Sep;59(9):977-86.

147. Uriarte S.M., Edmisson J.S., Jimenez-Flores E. Human neutrophils and oral microbiota: a constant tug-of-war between a harmonious and a discordant coexistence. -Immunol Rev. 2016 Sep; 273(1):282-98.

148. Wang Y., Papagerakis S., Faulk D., Badylak S.F., Zhao Y., Ge L., Qin M., Papagerakis P. Extracellular Matrix Membrane Induces Cementoblastic/Osteogenic Properties of Human Periodontal Ligament Stem Cells.- Front Physiol. 2018 Jul 18;9:942.

149. Weaver C. T., Hatton R. D. Interplay between the TH17 and TReg cell lineages: a (co-) evolutionary perspective. - NatureReviews Immunology. - 2009. -vol. 9, no. 12, pp. 883-889.

150. Wilensky A., Chaushu S., Shapira L. The role of natural killer cells in periodontitis.-Periodontol 2000. 2015 Oct;69(1):128-41.

151. Wilson S.S., Wiens M.E., Smith J.G. Antiviral mechanisms of human defensins. J Mol Biol. 2013 Dec 13;425(24):4965-80.

152. Wu S., Xiao Z., Song J., Li M., Li W. Evaluation of BMP-2 Enhances the Osteoblast Differentiation of Human Amnion Mesenchymal Stem Cells Seeded on Nano-Hydroxyapatite/Collagen/Poly(l-Lactide).- Int J Mol Sci. 2018 Jul 25; 19(8). pii: E2171.

153. Yamada M., Takahashi N., Matsuda Y., Sato K., Yokoji M., Sulijaya B., Maekawa T., Ushiki T., Mikami Y., Hayatsu M., Mizutani Y., Kishino S., Ogawa J., Arita M., Tabeta K., Maeda T., Yamazaki K. A bacterial metabolite ameliorates periodontal pathogen-induced gingival epithelial barrier disruption via GPR40 signaling. Sci Rep. 2018 Jun 13;8(1):9008.

154. Yamaguchi Y., Kurita-Ochiai T., Kobayashi R., Suzuki T., Ando T. Regulation of the NLRP3 inflammasome in Porphyromonas gingivalis-accelerated periodontal disease.Inflamm Res. 2017 Jan;66(1):59-65.

155. Yan B., Wei K., Hou L., Dai T., Gu Y., Qiu X., Chen J., Feng Y., Cheng H., Yu Z., Zhang Y., Zhang H., Li. D. Receptor-Interacting Protein 3/Caspase-8 May Regulate Inflammatory Response and Promote Tissue Regeneration in the Periodontal Microenvironment. - Med Sci Monit. 2018 Jul 29;24:5247-5257.

156. Yang W.H., Deng Y.T., Hsieh Y.P., Wu K.J., Kuo M.Y. NADPH Oxidase 4 Mediates TGFß1-induced CCN2 in Gingival Fibroblasts. J Dent Res. 2015 Jul;94(7):976-82.

157. Yang X.T., Yang B., Tian W.D. Development of new technology in periodontal tissue engineering.- Zhonghua Kou Qiang Yi Xue Za Zhi. 2018 Jul 9;53(7):490-494.

158. Yen C.C., Tu Y.K., Chen T.H., Lu H.K. Comparison of treatment effects of guided tissue regeneration on infrabony lesions between animal and human studies: a systematic review and meta-analysis. J Periodontal Res. 2014 Aug;49(4):415-24.

159. Yoshimoto T., Fujita T., Kajiya M., Matsuda S., Ouhara K., Shiba H., Kurihara H.. Involvement of smad2 and Erk/Akt cascade in TGF-ß1-induced apoptosis in human gingival epithelial cells. Cytokine. 2015 Sep;75(1): 165-73.

160. Yu T., Zhao L., Huang X., Ma C., Wang Y., Zhang J., Xuan D. Enhanced Activity of the Macrophage M1/M2 Phenotypes and Phenotypic Switch to Ml in Periodontal Infection. J. Periodontol. 2016 Sep;87(9):1092-102.

161. Zhang T., Wu J., Ungvijanpunya N., Jackson-Weaver O., Gou Y., Feng J., Ho T.V., Shen Y., Liu J., Richard S., Jin J., Hajishengallis G., Chai Y., Xu J. Smad6 Methylation Represses NFkB Activation and Periodontal Inflammation.- J Dent Res. 2018 Jul;97(7):810-819.

162. Zenobia C., Hajishengallis G. Basic biology and role of interleukin-17 in immunity and inflammation. - J. Periodontol 2000. - 2015 Oct;69(1):142-59.

163. Zouali M. The emerging roles of B cells as partners and targets in periodontitis. - Autoimmunity. - 2017 Feb;50(1):61-70.