Особенности биорегуляции конидиогенеза в условиях глубинного культивирования элитного инфекционного материала спорыньи: Claviceps purpurea (Fr.)Tul тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Савин, Павел Сергеевич

• Савин, Павел Сергеевич
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Савин, Павел Сергеевич

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Цикл развития спорыньи пурпуровой (Claviceps purpurea), распространение эргоалкалоидов в природе.

1.2. Спорынья как продуцент биологически активных веществ. Алкалоиды спорыньи.

1.3. Биологическое действие эргоалкалоидов и их применение в медицине.

1.4. Выращивание паразитарной спорыньи в системе гриб-растение, традиционная технология сапрофитного культивирования инфекционного материала спорыньи на твердых питательных средах.

1.5. Сапрофитное выращивание и кинетика роста микроорганизмов в условиях глубинного культивирования.

1.6. Влияние состава питательной среды на алкалоидообразование, рост и развитие микроорганизмов в условиях глубинного культивирования

1.7. Влияние других факторов на процессы развития микроорганизмов.

1.8. Масштабирование процесса выращивания микробиологических объектов.

Глава 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1 Получение мицелиально растущей культуры гриба спорыньи эргокриптинового штамма.

2.2.Морфофизиологические исследования.

2.3. Биохимические исследования.

2.4. Фиторегуляторы.

2.5. Условия асептики.

2.6. Масштабирование процесса.

2.7. Планирование экспериментов и методы статистической обработки данных.

Глава 3. ПОЛУЧЕНИЕ МИЦЕЛИАЛЬНОЙ ФОРМЫ ГРИБА СПОРЫНЬИ

ЭРГОКРШТГИНОВОГО ШТАММА И ИЗУЧЕНИЕ МОРФО

ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЕЕ РОСТА И

ИНТЕНСИВНОСТИ КОНИДИОГЕНЕЗА.

3.1. Получение мицелиальной культуры гриба Claviceps purpurea традиционным и предлагаемым способами.

3.2. Морфологическая характеристика гриба спорыньи в сапрофитных условиях культивирования на твердом питательном субстрате.

3.3. Морфологическая характеристика гриба спорыньи в искусственных условиях культивирования в жидкой питательной среде.

3.4. Изучение динамики нарастания мицелиальной формы гриба спорыньи в условиях глубинного культивирования.

Глава 4. ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ ВЫРАЩИВАНИЯ

МИЦЕЛИАЛЬНОЙ СУСПЕНЗИОННОЙ КУЛЬТУРЫ ГРИБА

СПОРЫНЬИ ЭРГОКРИПТИНОВОГО ШТАММА.

4.1 Влияние объема и возраста инокулюма на рост и конидиогенез спорыньи.

4.2 Влияние рН питательного субстрата на рост и конидиогенез спорыньи.

4.3 Оптимизация минеральной части питательной среды.

4.4. Оптимизация питательной среды по углеводному компоненту.

4.5 Влияние экзогенных фиторегуляторов на конидиогенез и рост мицелиальной кулыуры гриба спорыньи.

4.5.1 Влияние на продуктивность культуры регуляторов роста БАП и кинетина- представителей группы цитокининов.

4.5.2 Влияние регуляторов роста НУК и ИУК-представителей ауксиновой группы.

4.5.3.Влияние гиббереллина (ГК).

4.5.4. Влияние фиторегуляторов ретардантного действия (ССС и 2-ХЭФК).

Глава 5. ИЗУЧЕНИЕ ЗАВИСИМОСТИ ПРОЦЕССОВ

КОНИДИОГЕНЕЗА И РОСТА МИЦЕЛИАЛЬНОЙ СУСПЕНЗИОННОЙ КУЛЬТУРЫ ГРИБА СПОРЫНЬИ ЭРГОКРИПТИНОВОГО ШТАММА В ОПТИМИЗИРОВАННЫХ УСЛОВИЯХ

КУЛЬТИВИРОВАНИЯ.

5.1. Характеристика роста и конидиогенеза мицелиальной суспензионной культуры гриба спорыньи эргокриптинового штамма.

5.2. Изучение поглощения углеводного компонента из питательного субстрата мицелиальной суспензионной культурой гриба спорыньи эргокриптинового штамма.

5.3. Изучение потребления кислорода мицелиальной суспензионной культурой гриба спорыньи эргокриптинового штамма.

Глава 6. ИЗУЧЕНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ПРОЦЕССОВ

МАСШТАБИРОВАНИЯ РОСТА МИЦЕЛИАЛЬНОЙ СУСПЕНЗИОННОЙ КУЛЬТУРЫ ГРИБА СПОРЫНЬИ

ЭРГОКРИПТИНОВОГО ШТАММА.

6.1. Определение объемного коэффициента массопередачи, характеризующего обеспечение популяции микроорганизмов кислородом.

6.2 Выращивание инфекционного материала спорыньи эргокриптинового штамма в лабораторном ферментаторе.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности биорегуляции конидиогенеза в условиях глубинного культивирования элитного инфекционного материала спорыньи: Claviceps purpurea (Fr.)Tul»

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Осуществление целенаправленной биорегуляции продукционного процесса с использованием двух биологических систем: растения и культуры гриба, является уникальным этапом во всей производственной схеме получения лекарственных препаратов на основе эргоалкалоидов.

В настоящее время ВИЛАР является единственным в России и странах СНГ учреждениемг обладающим комплексной технологией от создания селекционных штаммов спорыньи Claviceps purpurea (Fr) Tul до промышленного производства лекарственных препаратов.

В коллекции ВИЛАР имеются штаммы эрготаминового (ВКМР-2641Д), эрготоксинового (ВКМР-2450Д), эргокриптинового (ВКМР-3602Д) и эргокристинового (ВКМР-3401Д) типов. На основе всех перечисленных штаммов созданы ценные лекарственные препараты, находящие широкое применение в разных областях медицины.

Традиционное получение элитного инфекционного материала селекционных штаммов поверхностным способом на твердой питательной среде является трудоемким и длительным элементом во всей технологической схеме производства сырья спорыньи. Его продолжительность составляет около шести месяцев.

Для получения инфекционного материала необходимо разработать новые технологии, позволяющие ускорить и технологически усовершенствовать этот процесс, обеспечивающие сохранение конидиообразующих способностей мицелия. Одним из таких современных технологических разработок является способ глубинного культивирования.

Мицелиальная культура спорыньи является сложной биологической системой двух взаимозависимых процессов: роста мицелия и конидиогенеза. Непременным условием проводимых исследований является повышение продуктивности репродуктивных процессов мицелия, выращиваемого в контролируемых условиях, так как источником инфицирования растений ржи служит суспензия конидий.

Представленная работа является частью исследований, связанных с решением данной проблемы.

Особая актуальность проводимых исследований очевидна в отношении селекционного штамма эргокриптинового типа, который является основой получения сырья для производства препарата Абергин нейрогормонального действия. Продуктивность конидиогенеза этого штамма существенно уступает штаммам других типов: эрготаминовому, эргокристиновому и эрготоксиновому

ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Разработка способа получения инфекционного материала эргокриптинового штамма методом глубинного культивирования в виде мицелиально растущей культуры гриба спорыньи с высоким потенциалом конидиогенеза.

ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ РАБОТЫ. Поставленная цель достигается решением следующих задач:

- изучить кинетику роста и конидиогенеза мицелиально растущей культуры гриба спорыньи;

- изучить действие на рост мицелия и процесс конидиогенеза объема и возраста инокулята, рН питательной среды, минерального состава и углеводной составляющей питательной среды;

- исследовать действие на процесс конидиогенеза и рост мицелия экзогенных фиторегуляторов;

- изучить кинетику поглощения углеводного компонента питательной среды и скорости потребления кислорода культурой в процессе роста;

- отработать условия культивирования мицелия и конидиоспор гриба в лабораторном ферментаторе;

- проверить в полевых условиях жизнеспособность конидиоспор гриба, выращенных в условиях глубинного культивирования;

-разработать инструкцию по получению инфекционного материала гриба спорыньи при глубинном способе выращивания.

НА ЗАЩИТУ ВЫНОСЯТСЯ СЛЕДУЮЩИЕ ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ:

1. На основе изучения биологических особенностей сапрофитной культуры гриба спорыньи эргокриптинового штамма, разработаны условия глубинного культивирования, обеспечивающие высокий уровень конидиогенеза с менее интенсивными темпами нарастания мицелия, что является важным при производственном получении инфекционного материала.

2. Установлены параметры экзогенной биорегуляции конидиогенеза сапрофитного штамма Claviceps purpurea (Fr) Tul в условиях глубинного культивирования. Оптимизирован состав питательной среды, позволяющий увеличить продуктивность конидиогенеза в 12 раз, сократить цикл максимальной репродукции мицелия до 10 суток.

3. Предложена технология получения инфекционного материала спорыньи эргокриптинового штамма, не уступающего по своим характеристикам инфекционному материалу, полученному традиционным способом, с сокращением времени цикла производства в 3 раза.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые предлагается глубинный способ получения элитного инфекционного материала (BKMF-3602J3) эргокриптиновой спорыньи для инфицирования посевов ржи. Впервые изучена сопряженность роста мицелия и конидиогенеза при глубинном культивировании инфекционного материала эргокриптинового штамма спорыньи.

Изучено влияние ряда технологических показателей (объем и возраст инокулюма, рН питательной среды, коэффициент массопередачи) на рост и конидиогенез мицелия гриба спорыньи эргокриптинового штамма.

Показана возможность получения инфекционного материала промышленного штамма гриба спорыньи в ферментаторах.

Впервые показана существенная зависимость конидиогенеза и роста от экзогенного гормонального фактора на культуре промышленного штамма гриба спорыньи, выращиваемой в условиях глубинного культивирования.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. На основании проведенных исследований разработана «Инструкция по получению элитного инфекционного материала спорыньи глубинным способом в колбах на качалке» (И-04868244-005-2006). Полученный материал служит основой для составления регламента на получение суспензии конидиоспор из мицелия гриба спорыньи, выращенного глубинным способом.

Разработанная технология позволяет усовершенствовать и ускорить процесс получения элитного инфекционного материала спорыньи для инфицирования посевов ржи спорыньей с использованием промышленных ферментаторов.

Инфекционный материал, полученный глубинным способом, обладает такой же активностью по инфицированию посевов ржи, как инфекционный материал, полученный традиционным поверхностным способом.

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 4 статьи.

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены на 3-й Российской научно-практической конференции «Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов (г.Москва, 2005г) , на VI Международном симпозиуме «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования» (Москва -Пущино, 2005г), на юбилейной научной конференции, посвященной 75-летаю ВИЛАР (г.Москва, 2006г.)

Работа выполнена в лаборатории отдела биотехнологии ГУ ВИЛАР.

Основные результаты получены лично автором.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Савин, Павел Сергеевич

выводы

1. На основе изучения биологических особенностей сапрофитной культуры гриба спорыньи эргокриптинового штамма, разработаны условия глубинного культивирования, обеспечивающие высокий уровень конидиогенеза с менее интенсивными темпами нарастания мицелия, что является важным при производственном получении инфекционного материала.

2. Биологически обоснованными для условий инициации процесса конидиогенеза и накопления мицелия являются использование инокулюма в объеме 1мл с плотностью конидий не менее (20-30)-105 шт/мл на 100 мл питательной среды и начальные значения рН среды в пределах 5,0-6,0.

3. Определены возможности экзогенной регуляции процесса конидиогенеза за счет изменения концентрации сахарозы в питательной субстрате до 6% и замены дрожжевого экстракта на минеральный азот в форме NH4 NO3 в концентрации 1000 мг/л питательной среды.

4. В целях обеспечения экзогенной регуляции процесса конидиогенеза и роста мицелия в состав питательной среды необходимо вносить фиторегулятор ГК в концентрации 0,1 мг/л питательной среды, которая инициировала активизацию продуктивности конидиогенеза в 12 раз, удельной продуктивности конидий в 30 раз, а так же способствовала сокращению цикла максимальной репродукции мицелия до 10 суток.

5. Установлено, что фиторегуляторы, ингибирующие ростовые процессы ССС и 2-ХЭФК, блокируют процесс конидиогенеза. При их внесении в питательный субстрат происходит изменение биосинтетической активности культуры.

6. Впервые установлена взаимосвязь процессов поглощения из питательного субстрата сахарозы и кислорода с процессами конидиогенеза и нарастания мицелия гриба спорыньи эргокриптинового штамма.

7. Определены оптимальные параметры условий глубинного культивирования гриба спорыньи эргокриптинового штамма, которым соответствует коэффициент массопередачи по кислороду в пределах 20-30 ч*1.

8. Показана возможность роста мицелиальной культуры гриба спорыньи эргокриптинового штамма с активизированным процессом конидиогенеза в лабораторных ферментаторах.

9. Предложена технология получения инфекционного материала спорыньи эргокриптинового штамма, не уступающего по своим характеристикам инфекционному материалу, полученному традиционным способом, с сокращением времени цикла производства в 3 раза.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время инфекционный материал спорыньи выращивают поверхностным способом на твердом питательном субстрате, представляющим собой сваренное зерно. Нами получена мицелиальная культура гриба спорыньи эргокриптинового штамма, растущая в условиях глубинного культивирования. Полученный штамм характеризовался активным ростом мицелия, но низким процессом конидиогенеза. При получения данной формы спорыньи использовали различные питательные среды, в результате чего была отмечена отзывчивость данного штамма на их компонентный состав. Проведенный первичный морфологический и физиологический анализ полученной культуры показал длительный во времени цикл ее развития.

Изучаемые питательные среды обеспечивали процесс развития культуры до конидиогенеза, но при этом репродуктивные и ростовые процессы были недостаточно синхронизированы. Поэтому процесс выращивания полученной суспензионной культуры мицелия спорыньи в дальнейших исследованиях следовало усовершенствовать с целью получения большого количества инфекционного материала для инфицирования посевов ржи.

Следует отметить, что результаты исследования ростовых и репродуктивных процессов мицелиальной культуры гриба спорыньи эргокриптинового штамма для подобного использования представлены впервые.

Большое внимание было уделено оптимизации условий выращивания культуры гриба. Ростовые и репродуктивные процессы полученного штамма зависимы от плотности посадочного материала. Задавая необходимое значение начального рН питательной среды, можно управлять процессами роста и конидиогенеза.

При поиске оптимального состава питательной среды, мы были вправе ожидать, что определенная коррекция ее состава будет полезной для нашего конкретного объекта. Так, вполне оправдала себя замена дрожжевого экстракта минеральным азотом. Изменением концентрации сахарозы были достигнуты положительные результаты по инициации конидиогенеза. Установлено, что концентрация сахарозы, равная 6%, являлась начальной при создании в питательном субстрате оптимальных для развития конидиогенеза условий.

Впервые отмечено существенное влияние на процесс конидиогенеза гормональных эффекторов. Наиболее эффективным в отношении конидиогенеза и роста являлось включение в питательную среду гиббереллина (ПС). Продуктивность культуры по конидиям при этом возрастала более, чем в 12 раз. Показано, что изменением концентрации ГК можно регулировать во времени начало процесса конидиогенеза без снижения продуктивности по конидиям. Проведенная корректировка и дополнения состава питательной среды позволили инициировать процесс конидиогенеза, синхронизировать процессы конидиогенеза и нарастания мицелия, а также сократить цикл репродукции мицелия до 10 суток. Последнее особенно важно, поскольку сокращение цикла выращивания позволяет повысить продуктивность процесса в расчете на конечный продукт (конидий) и существенно снизит вероятность инфицирования мицелиальной массы посторонними микроорганизмами, опасность которого весьма высока при культивировании мицелия в ферментаторах.

Изучение интенсивности процессов метаболизма позволило более полно охарактеризовать этапы развития мицелиальной культуры гриба спорыньи. Установлено, что активность дыхания и потребления сахарозы из среды совпадали с фазой активного конидиогенеза. На основе анализа связи процессов роста мицелия, конидиогенеза с дыхательной активностью и метаболизмом углевода стало возможным условно выделить в жизни культуры три основных периода, из которых в практических целях важны два первых. Первый период (7-9 дней) характеризуется активным ростом мицелия и подготовкой его к процессу конидиогенеза. Второй период (до 10 - 12 дня) характеризуется активным дыханием, усиленным потреблением сахарозы из субстрата и максимальным конидиогенезом. К концу этого периода содержание сахарозы в среде достигало 2-2,5%. Для третьего же периода характерно непродолжительное увеличение массы мицелия с последующим стабилизацией его роста на одном уровне и снижение концентрации конидий на 12-16 сутки. Этому периоду соответствует стабилизация на низком уровне процессов поглощения углевода и дыхания.

Следует отметить, что оптимизацией условий выращивания мицелия спорыньи мы добились существенного сдвига его вегетативного размножения в сторону инициации конидиогенеза.

Известно, что проблема масштабного перехода при выращивании микроорганизмов достаточно сложна и связана с целым комплексом факторов. Не останавливаясь на разработке критериев, с помощью которых можно проводить оценку значимости каждого фактора, по нашему мнению, наиболее простым и в то же время достаточно надежным способом является одновременное масштабирование культурального сосуда и какого-либо одного тест-параметра, достаточно полно характеризующего поведение культивируемых объектов. В качестве такого теста, определяющего поведение ткани, мы использовали дыхательную активность биообъекта.

На основе полученных данных, при расчете коэффициента массопередачи было установлено, что для вегетативного размножения гриба спорыньи путем разрастания мицелия необходим коэффициент массопередачи по кислороду в пределах 50-60 ч"1 ,а активный конидиогенез начинался при условиях выращивания, которым соответствовал коэффициент массопередачи по кислороду, не превышающий 30 ч"1.

Выращивание мицелиальной культуры гриба спорыньи эргокриптинового штамма в лабораторном ферментаторе при соблюдении установленных оптимальных условий роста показала возможность получения инфекционного материала спорыньи глубинным способом.

Согласно нормативным документам «Концентрация конидиоспор промышленных штаммов спорыньи на зерновой питательной среде (элитный инфекционный материал)» ( ТУ 9729-146-04868244-02) в рабочем растворе на 1 га плотность конидий должна быть в пределах (5-6) -106 спор в мл.

Если учитывать те результаты, которые были достигнуты при отработке режимов выращивания культуры в колбах на качалке, то при плотности щ инокулята, равной 4,0-10* шт/мл, можно получить на качалке 30 л суспензии, что соответствовало бы тому количеству инфекционного материала спорыньи, которое необходимо при инфицировании спорыньей одного гектара посевов ржи.

По традиционной технологии выращивания инфекционного материала спорыньи на твердых питательных средах только процессы размножения инфекционного материала продолжаются в течении 90-120 суток (см. схему №1). С учетом наших разработок весь цикл получения инфекционного материала в условиях сапрофитного культивирования состоит из 4 основных этапов общей продолжительностью 45-75 суток - (схема №2).

При этом следует отметить, что работы по получению инфекционного материала спорыньи связаны со сроками готовности растений ржи к проведению работ по инфицированию посевов. В зависимости от метеорологических условий, не поддающихся прогнозированию, эти сроки могут варьировать от 5 до 10 суток, а весь цикл длится 5 месяцев. Традиционный способ получения инфекционного материала на твердых питательных средах более трудоемкий и продолжительный во времени, но позволяет нивелировать варьирование сроков заражения ржи спорыньей, благодаря длительной сохранности инфекционного материала.

Однако с учетом запросов производства разработанная нами технология выращивания инфекционного материала спорыньи в условиях глубинного культивирования позволяет быстро развернуть работы с частичным использованием элементов традиционной технологии (пункт 1 и 2 технологической схемы №1).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Савин, Павел Сергеевич, 2007 год

1. Безбородое A.M. Биотехнология продуктов микробного синтеза. Москва. ВО «Агропромиздат» . 199I.e. 210-218.

2. Васильев Н.Н., Амбросов В.А., Складнев А.А. Моделирование процессов микробиологического синтеза. Из-во. «Лесная промышленность». М., 1975.

3. Винокурова Н.Г., Решетилова ТА., Козловский А.Г. Биосинтез алкалоидов у Penicillium palitans при различных условиях роста. //Прикл. Биохимия и микробиология. 1992. Т28. №6. С.875-879.

4. Виестур У.Э., Кристапсонс М.Ж., Былинкина Е.С. Культивирование микроорганизмов. Пищевая промышленность. Москва. 1980.231 с.

5. Виестур У.Э., Шмите И. А., Жилевич А.В. Биотехнология.Биологические агенты,технология, аппаратура. Рига «Зинатне». 1987.263с.

6. Волошина Д.А., Монахова Т.Е., Шаин С.С. Флуориметрическое определение эргокриптиновых алкалоидов в склероциях спорыньи //Хим.-фарм. журнал 1985 . №4. С. 445-447.

7. Государственная фармакопея СССР. 10-е изд. М.: Медицина,1968.

8. Грегер Д., Ерге Д. Образование производных лизергиновой кислоты в глубинной культуре Clavlceps paspali Stevens et Hall: пер.с нем. // Микробиология. -1966. -Т. 35, N 4.-е. 606-610.

9. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта. Москва, «Колос», 1979. 415с.

10. Егоров Н.С., Олескин А.В., Самуилов В.Д. Биотехнология. Проблемы и перспективы. Москва. «Высшая школа» , 1987, с. 53-58.

11. И. Заболотная Е.С. Алкалоиды спорыньи // Сборник научныхтрудов ВИЛАР. М.: Медгиз, 1950. - вып. X. - С. 189-246.

12. Звонкова Е. Н., Шаин С. С., Сайбель Е. С. Пути получения нейро-гормональных препаратов эргопептидного рядаУ/ Журнал Российского химического общества им. ДА. Менделеева, т. XLIX, № 1,2005. с. 125-134.

13. Козловский А.Г., Веприцкая И.Г. Влияние источника углерода на биосинтез эргоалкалоидов и активность ферментов углеродного обмена у Pinicillium sizovae. // Микробиология. 1987.Т.56.№4.С.587-592.

14. Козловский А.Г., Соловьева Т.Ф., Сахаровский В.Г. Аданин В.М. Биосинтез «необычных» эргоалкалоидов грибом Penicillium aurantio-virens. // ДАН СССР. 1981.Т.260.№1.С.230-233.

15. Козловский А.Г. Стефанова-Аврамова JI.H., Решетилова Т.А. Влияние возраста культуры и состава среды на биосинтез алкалоидов Penicillium gorlenkoanum.// Микробиология. 1981 .Т.50.№6.С. 1046-1050.

16. Краснопольская JI.M., Белицкий И.В., Федорова Г.Б., Катруха Г.С. Pleurotus djamor: способы культивирования и антимикробные свойства.// Микология и фитопатология, 2001. Т.35. Вып.1. с.82-67.

17. Комарова E.JL, Шаин С.С. Идентификация селекционных штамов спорыньи по алкалоидному составу индивидуальных склероциев. //Хим.фарм.журнал. 1998.№8. с.34-37.

18. Комарова E.JI., Толкачев О.Н. Химия пептидных алкалоидов спорыньи. //Хим.фарм.журнал .2001.Т.35. №9. с. 37-45.

19. Лебедев С.И. Физиология растений. М.: Агропромиздат, 1988г.

20. Межиня Г.Р.,Кристапсонс М.Ж. Управляемое получение инокулята при глубинном культивировании мшфоорганизмов. М.: ОНТИТЭИмикробиопром, 1977.42 с.

21. Мир растений. / Под ред. A. JI. Тахтаджяна. М.: Просвещение, 1991. Т. 2. е. 159-164.

22. Нейроэндокринология. Под ред. Е.И. Маровой. Ярославль: «Диа-пресс», 1999, 506 с.

23. Никифорова Т.А., Сухаревич В.И. Повышение эффективности биосинтеза лимонной кислоты при культивировании продуцента Aspergillus niger в глубинных условиях. Биотехнология, М. 1985, №1. с 68-72.

24. Орешкин В. Н., Давыдов В. Н., Орловский В.И. Технология микробиологических средств защиты растений, бактериальных удобрений, кормовых витаминов и антибиотиков. М.,1985.108 с.

25. Плешков Б.П. Практикум по биохимии растений. Москва, «Колос», 1976.

26. Перт С.Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. М.:Изд-во «Мир». 1978. 331 с.

27. Полярографическое определение кислорода в биологических объектах. Материалы П Всесоюзного симпозиума. Киев, 1972.Из-во «Наукова Думка», Киев, 1974.

28. Решетилова Т.А., Козловский А.Г. Биосинтез алкалоидов мицелиальными грибами. // Прикладная биохимия микробиология, 1990. Т.26. №3. с.291-306.

29. Решетилова Т.А., Козловский А.Г. Успехи микробиологии, 1988. Т. 23. с. 133-169.

30. Ржехачек 3. Физиологические аспекты образования алкалоидов спорыньи: Пер. с англ. // Прикладная биохимия и микробиология, 1983. Т. 19. вып. 2., с. 267-269.

31. Решетник О.А., Мингалаева З.Ш., Победимский Д.Г. Влияние антиоксидантоа на рост дрожжей рода Candida при различных способах культивирования. Биотехнология .М., 1986,№2 (8), с.60-63.

32. Склизков В.Г. и др. Тракторы и сельскохозяйственные машины. 1982. №4.с.23-25.

33. Скляр В.И., Карякина Е.Е., Медман Д.Я., Чан Динь Тоай, Калюжный С.В., Варфоломеев С.Д. Кинетические закономерности роста и метаболизма термофильной водородобразующей культуры. Биотехнология, М., 1986, №3, с. 16-23.

34. Соломко Э.Ф., Аре Р.Ю., Стеганцева Е.М. Продуктивность базидиального гриба Pleurotus ostreatus (Jacg.Fr) Kummer при глубинном кльтивировании на комплексных средах. Биотехнология, М., 1988, том 4, №5, с. 629-633.

35. Старостина Н.Г. Сузина Н.Е., Фихте Б.А. Ингибирование бактериолизиса метанотрофных бактерий в смешанных популяциях в процессе их культивирования. Прикладная биохимия и микробиология, 1991, Т. 27.Выпуск 5. «Наука» с.748-750.

36. Трумпе Т.Е., Колхир O.K., Омельницкий П.П. и др. Тр. ВИЛАР, Химия, технология, медицина, М., 2000, с. 200—209.

37. Химический анализ лекарственных растений. М.: Высшая школа. 1983.175 с.

38. Шаин С.С. Биологические основы производства сырья спорыньи (Claviceps purpurea (Fr.) Tul.) в ботехнологической системе гриб-растение. // Прикл. Биохимия и микробиология. 1996. Т.32. №3. с. 275-279.

39. Шаин С.С. Возделывание спорыньи на ржи// Обзорная информация «Лекарственное растениеводство». М.: ЦБНТИ Минмедбиопром, 1987. Вып. 4. 50 с.

40. Шаин С.С., Кузнецова Г.К., Русское Ю.А. и др. О возможности заражения ржи спорыньей в солнечную и дождливуюпогоду.// Обзорная информация «Лекарственное растениеводство». М.: ЦБНТИ Минмедбиопром, 1987.-Вып. 9-50 с

41. Шаин С.С., Первушина Л.В., Русское Ю.А., Семенихин И.Д., Климахин Г.И. Рекомендации по возделыванию спорыньи на ржи. М. ВИЛР, 1983.

42. Шаин С.С. Биорегуляция продуктивности растений .// Ред. В.А.Быков . М. Изд-во «0верлей».2005.228 с.

43. Шталь Э. Хроматография в тонких слоях. М.: «Мир». 1965.508 с.

44. Энциклопедия лекарств РЛС. Вып.9. Под ред. Вышковского ГЛ., ООО «РЛС», 2002.

45. Abe М. Researches on ergot fungus. Separation of an active substances and its properties, // J. Agric. Chem, Soc. Japan. 1948, V.22. P.2-11.

46. Anderson J.A., In-Soo Kim., Lentonen P., Floss H.G. Conversion of dihydrolysergic Acid to dihydroergotamine in an ergotamin producing strain of Clavlceps purpurea // J. Natur. Prod. -1979. - V.42, N 3. - P. 271-273.

47. Arcatone F, Chain E.B., Ferretti A., Mnghetti A. Pennela P., Tonolo A., Vero L. Production of a new lysergic acid derivative in submerged culture by a strain of Claviceps paspali Stevens & Hall. // ProcR.Soc.Lond. (Biol). 1961. V.I55. P.26-54.

48. Bach N.J. Hall D.A., Kornfeld E.G. Descarboxylyserglc Acid (9,10-Didehydro-6-methyl-ergoline)// J. Med. Chem.- 1974,-V.17, N P. 312315.

49. Beran M., Krepelka J. Soucasny stav vyzkumu namelovych alkaloidu // Gesk. Farm. 1985. - V. 34, N 5. - S. 194-198, N 6.-S. 232-236.

50. Berde B, Schild HO (eds) (1978) Ergot alkaloids and related compounds. Springer, Berlin Heidelberg New York. Berlin, Neid, New-York: Springer Verlag, 1978. V. 1. -420 p., V. 2. -1003 p.

51. Bianchi M. L., Crespi Perellino N., Gioia В., Minghetti A. Production by Claviceps purpurea of two new peptide ergot alkaloids belonging to a new series containing a-aminobutyric acid // J.Natur.Prod. -1982.-V.45.-P. 191-196.

52. Bove F.J. The story of ergot. I. The pharmacology of ergot. Basel. N. Y., 1970. P.3-73.

53. Brady L.R., Tyler V.E. Jr. A note on biosynthesis of clavine alkaloids in Claviceps pvrpurea strain 15B, //J. Amer. Pharm. Assoc. Sci Ed. 1960. V.49. P.332.

54. Crespi-Perellino N., Ballabio M., Gioia В., Mingnetti A. Two unusual ergopeptines produced by a saprophytic culture of Claviceps purpurea // J. Natur. Prod. 1987. - V. 50, N 6. - P. 1065-1074.

55. Drugs of the future, 1989, v. 14, № 4, p. 397.

56. Flieger M., Wurst M., Shelby R. Ergot alkaloids — sources, structures and analytical methods. // Folia microbiol. 1997. V.42. N.l. P. 3-30.

57. Floss H. G., Hornemann U., Schilling N. et all. Biosynthesis Ergot Alkaloids. Evidence of Two Isomerizations in The Isoprenoid Moiety during the Formation of Tetracyclic Ergolines // J. Amer. (Chem. Soc. 1968. - V. 90, N23.-P. 6500-6506.

58. Floss H.G., Basmadian G. P., Tcheng M. et all. Biosynthesis of Peptide-type Ergot Alkaloids Ergocornine and Ergocryptine // J. Natur. Prod. -1973.-V.34.-P. 446-449.

59. Floss H.G., Cassajdy J.M.,Robbers J.E. Influence of Ergot Alkaloids on Pituitaiy Prolactin and Prolactin-Dependent Processes// J. Pharm. Sci. 1973. - v. 62, N 5. - P. 699-715.

60. Floss H.G. Biosynthesis of Ergot Alkaloids and Related Compounds // Tetrahedron. 1976. - V. 32. - P. 873-896.

61. Giudici В., Zaccheo T. Drugs of the Future, 1987, v. 12, № 9, p. 842-844.

62. Hofmann A., Ott H., Griot R. et all. Die Synthese und Stereocheme des Ergotamine // Helv. Chim. Acta. 1963. - Bd.46, N.6. - S. 2306-2328.

63. Jacobs W.A.t Gould R. G. // J. Biol, Chem. 1937. V, 120. P. 141145.

64. Kfen V., Harazim P., Malinka Z. X Claviceps purpurea (Ergot): Culture and Bioproduction of ergot alkaloids // Biotehnology in Agriculture and Forestry, Vol. 28, Medicinal and Aromatic Plants VII . Springer-Verlag Berlin Heidelberg, 1994.

65. Kfen V., Mehta P., Rylko V., Flieger M., Kozova J., Rehacek Z. Substrate regulation of elymoclavine formation by some saccharides. Zentralbl Mikrobiol, 1987. P. 71-85.

66. Mantegani S,, Brambilla E., Varasi M. Ergoline derivatives: receptor affinity and selectivity. // Farmaco 1999. V.54. N.5. P.288-296.

67. Martin J.F. Control of antibiotic synthesis by phosphate. Adv Biochem Eng, 1977. P. 105-127.

68. Maiy N.Y., Kelleher W.J., Schwarting A.E. Production of lysergic acid derivatives in submerged culture. 111. Strain selection on defined media. // Lloydia. 1965. V.28. P.218-225.

69. Menge M., Mukherjee J., Scheper T. Application of oxygen vectors to Claviceps purpurea cultivation. // AppL Microbiol Biotechnol 2001. V.55.N.4. P.411-416.

70. Pazoutova S., Rehacek Z. Phosphate regulation of phosphatases in submerged cultures of Claviceps purpurea 129 producing clavine alkaloids. Appl Microbiol Biotechnol, 1984. P. 389-392.

71. Pfaetfli P. Patent CH № 652719,1985.

72. Porilock D.E., Ghosh A.C., Schwazzel W.E. et all. Cyclol (1,2) Derivatives Related to Ergocornine // J. Heterocyclic Chem. -1976. V. 13. - P. 781-784.

73. Puc A., Socic H. Carbohydrate nutrition of Claviceps purpurea for alkaloid production, related to die osmolarity of media. // Europ. J. Appl. Microbiol. 1972. V.4. P.283-290.

74. Robbers J.E., Eggert W.W., Floss H.G. Physiological studies on ergot. Time factor influence on the inhibitory effect of phosphate and the induction effect of tryptophan on alkaloid production. Lloydia, 1978. P. 120129.

75. Rehacek Z., Sajdl P., Kozova J., Rictcova A. Physiological activities of ergoline alkaloids in submerged cultures of Claviceps paspali and Claviceps purpurea. // Folia Microbiol. 1972, V.l 7. P.306-313.

76. Rehacek Z., Sajdl P. Ergot alkaloids. Chemistry, biological effect, biotechnology. Praha: Academia, 1990. 383p.

77. Sandoz AG, Annual Drug Data Report, 1989, XI, № 6, p.452.

78. Schlientz W., Brunner R., Hofmann A. d-Lysergyl-L-Valin-methylester, ein neues naturliches Mutterkornalkaloid //Experientia. 1963. - V.19.-P. 397-840.

79. Seif-El-Nasr M.M., Rizk A.M. Ergot Alkaloids (production, characterization and determination ) // Herba Hungarica. 1985. -V. 24, N 2-3. -P. 197-212.

80. Stadler P. A., Frey A. J., Hofmann A. Herstellung der optisch activen Methyl-benzyloxy-malonsaure-halbester und Bestimmung ihrer absoluten Konfiguration // Helv. Chim. Acta. 1963. - Bd.46. -S. 2300-2305.

81. Stadler P. A., Stutz P. The Ergot Alkaloids // The Alkaloids. Chemistry and Physiology/ By ed.R. H. F.Manske. -Mew York, San Francisco,1.ndon:, Academic Press, 1975. V. 15. - P. 1 - 40.

82. Stadler P. A., Stiitz P., Stunner E. Completition of the Natural Groups of Ergot Alkaloids: Syntheses and Pharmacological Profiles of B-Ergosine and B-Ergoptlne // Experientia. 1977. -V.33. - P. 1552-1554.

83. Stadler P. A. Neuere Ergebnisse der Mutterkornalkaloid -Forschuhg // Planta medlca. 1982. - V.46. - P. 131-143.

84. Stoll A (1942) Altes und Neues fiber Mutterkorn. Mitt Naturforsch Ges Bern 1942: 45-80.

85. Stoll A., Brack A. (1944). Zum feldmassgen Anbau von muttercorn. Pharm Acta Helv 19:118 -123.

86. Stoll A., Hofmann A. Die Alkaloide der Ergotoxingruppe: Ergocristin, Ergocryptin und Ergocornin // Helv. Chim. Acta. -1943. Bd.26. -S. 1570-1579.

87. Stoll A., Hofmann A., Becker B. Die Spaltstucke von Ergocristin, Ergocryptin und Ergocornin // Helv. Chim. Acta. 1943. Bd.26. - S. 16021613.

88. Stoll A., Hofmann A., Troxler F. Uber die Isonerie von Lysergsaure und Isolysergsaure // Helv. Chim. Acta. 1949.-Bd.32.-S. 19471954.

89. Stoll A., Hofmann A. Amide der stereoisomeren Lysergsauren und Dihydro-Lysergsauren // Helv. Chim. Acta. 1955. - Bd. 38, N.2. - S. 421-433.

90. Stoll A., Hofinann A. The Ergot Alkaloids // The Alkaloids. Chemistry and Physiology / By ed. R.H.F. Manske. New York, London: Academic press, 1965. - V.8. - P. 725-783.

91. Taber W.A., Vining L.C. The influence of certain factors on the in vitro production of ergot alkaloids by Claviceps purpurea (Fr.) Tul. // Can, J. Microbiol. 1958. V.45. P.611-620.

92. Tanner J.R. St. Anlhony's fire, then and now: a case report and historical review. // Can. J. Surg, 1987. V.30. N4 P.291-293.

93. Tonollo A., Udvardy-Nagy E. Production of clavine-alkaloids by Claviceps fusiformis (Loveles) in submerged culture. // Acta Microbiol Acad. Sci Hong. 1968. V.15. P.29-33.

94. Tscherter H., Hauth H. Drei neue Mutterkornalkaloide aus saprophytischen Kulturen von Claviceps paspali Stevens et Hall // Helv. Chim. Acta. 1974. - Bd. 57, N.l. - S. 113 -121.

95. Troxler F. Beitrage zur chemie der 6-Methyl-8-ergolen-8--carbonsaure // Helv.Chim.Acta. 1968. -Bd.51,N.6. - S. 1372-1381.

96. Tyler V.E. Jr. Some factors influencing the saprophytic production of clavine alkaloids by Claviceps purpurea. //J .Am.Pharm, Assoc. Sci. Ed. 1958. V.47. P.787-791.

97. Van Dam L.G., Rolland R. En. J. Obstet. Reprod. Biol., 1981, v. 12, p. 323.

98. Van Dongen P. W., de Groot A.N. History of ergot alkaloids from ergotism to ergometrine. // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 1995. V.60. N.2. P.109-116.

99. Yates S. G., Fenster J.C, Barlet RJ. Assay of tall fescue seed extracts, fractions, and alkaloids using the large milkweed bug // J. Agric. Food Chem. 1989. V. 37. P.354-357.