Биологическое обоснование создания микогербицида на основе фитопатогенного гриба Stagonospora cirsii тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.12, кандидат биологических наук Сокорнова, Софья Валерьевна

• Сокорнова, Софья Валерьевна
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Сокорнова, Софья Валерьевна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Бодяк полевой как объект исследования.

1.2. Современные способы борьбы с бодяком полевым.

1.3. Методология создания микопестицидов.

1.4. Потенциальные микогербициды для борьбы с бодяком полевым.

1.5. Токсины грибов-патогенов бодяка полевого.

1.6. Способы и условия культивирования продуцентов микогербицидов.

1.7. Препаративные формы микогербицидов.

1.8. Повышение эффективности микогербицидов в полевых условиях.

Глава 2. Объекты и методы исследований.

2.1. Stagonospora с1гзИ.

2.2. Бодяк полевой.

2.3. Культурные растения.

2.4. Подготовка конидиального инокулюма.

2.5. Подготовка мицелиального инокулюма.

2.5.1 Твердый субстрат.

2.5.2 Жидкая питательная среда.

2.6. Стабилизация мицелия 8.Ыгбп.

2.7. Приготовление композиций.

2.7.1 Композиции на основе конидий «У.сггаг.

2.7.2 Композиции на основе мицелия 5\cirsii.

2.8. Инокуляция листовых высечек.

2.9. Инокуляция растений в контролируемых условиях.

2.10. Учет развития болезни.

2.11. Световая и электронная сканирующая микроскопия.

2.12. Выделение фитотоксинов и оценка фитотоксической активности.

2.13. Оценка патогенности мицелия Б.сггзп в полевых условиях.

2.14. Статистическая обработка экспериментальных данных.

Глава 3. Патогенные свойства мицелия З.тгБп.

3.1. Влияние температуры и периода увлажнения листьев на патогенные свойства мицелия & Ыгбп.

3.2. Развитие инфекционных структур гриба б'.сггаи.

3.2.1 Инокуляция листьев бодяка полевого конидиями З.ЫгбН.

3.2.2 Инокуляция листьев бодяка полевого мицелием Б-Ыгви.

3.2.3 Сравнение динамики развития инфекционных структур при заражении конидиями и фрагментами мицелия З.Ыгзи.

3.3. Определение специализации Б.Ыгзи.

3.4. Роль токсинов при инокуляции бодяка полевого мицелием Б.сжп

3.5. Обсуждение результатов.

Глава 4. Способы получения мицелия £с/т7.

4.1. Оптимизация твердофазной ферментации по выходу мицелия и патогенности в отношении бодяка полевого.

4.2. Оптимизация жидкофазной ферментации по выходу мицелия и патогенности в отношении бодяка полевого.

4.2.1 Выбор источника углерода.

4.2.2 Выбор источника азота.

4.2.3 Оценка устойчивости мицелия к сушке.

4.2.4 Выбор длительности культивирования Б.Ыгзп.

4.2.5 Выбор концентраций источников углерода и азота.

4.3. Стабилизация мицелия S.cirsii.

4.3.1 Стабилизация мицелия S.cirsii, полученного при помощи твердофазной ферментации.

4.3.2 Стабилизация мицелия S.cirsii, полученного при помощи жидкофазной ферментации.

4.4. Обсуждение результатов.

Глава 5. Композиции на основе мицелия S.cirsii.

5.1. Добавки к композициям на основе мицелия S.cirsii, полученного при помощи твердофазной ферментации.

5.2. Добавки к композициям на основе мицелия S.cirsii, полученного при помощи жидкофазной ферментации.

5.3. Влияние композиционных добавок на морфологию и развитие инфекционных структур S.cirsii.

5.3.1 Кукурузное масло.

5.3.2 Ксантан с глицерином.

5.4. Обсуждение результатов.

Глава 6. Применение композиций на основе мицелия. S.cirsii в полевых условиях.

6.1. Композиции на основе мицелия S.cirsii, полученного при помощи твердофазной ферментации.

6.2. Композиции на основе мицелия S.cirsii, полученного при помощи жидкофазной ферментации.

6.3. Обсуждение результатов.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биологическое обоснование создания микогербицида на основе фитопатогенного гриба Stagonospora cirsii»

Бодяк полевой (Asteraceae: Cirsium arvense L. Scop.) - многолетнее сорное растение, хорошо размножающееся семенами и вегетативным путем. Механические способы борьбы с бодяком трудоемки и малоэффективны. Применение большинства химических гербицидов ограничено невысокой избирательностью их действия и значительными- нормами расхода (Государственный каталог., 2010; Белан и др., 2001; Спиридонов и др., 2006). Для снижения химической нагрузки на экосистему применяют биологические средства защиты. Например, в Канаде и США для борьбы с бодяком применяют насекомых-фитофагов (Moore, 1975; Peschken et al., 1982). Для подавления трудноискоренимых и доминирующих видов сорняков также предложено использовать микогербициды (TeBeest, 1996; Гасич, Берестецкий, 2007). К их достоинствам относят высокую специфичность, длительное последействие, а также возможность использования совместно с некоторыми фитофагами (Kruess, 2002) и химическими препаратами в сублетальной дозе (Gressel et al., 1997). Несмотря на то, что поиск и первичная оценка патогенов бодяка ведется давно, микогербицидов, разрешенных к применению для борьбы с этим сорным растением, в настоящее время не имеется. Таким образом; актуальность данной работы обусловлена, ограниченным выбором эффективных и экологически безопасных биологических средств борьбы с бодяком полевым.

Stagonospora cirsii J.J. Davis (анаморфная, стадия гриба Didymella sp., Pleosporales, Ascomycota) — возбудитель пятнистости листьев бодяка полевого с узкой специализацией, преимущественно поражающий растения семейства Asteraceae (Kungurtseva et al., 2006). Благодаря высокой агрессивности в отношении бодяка этот фитопатоген рассматривается как потенциальный микогербицид. Однако для успешного заражения конидиями этого гриба требуется длительный период повышенного увлажнения листьев и высокая температура воздуха. Конидии S.cirsii образует только при периодическом облучении в УФ диапазоне (Berestetskiy et al., 2005), что значительно усложняет их получение. В тоже время, успех разработки и реализации микогербицида во многом определяется наличием простой технологии производства инфекционного материала, обладающего высокой жизнеспособностью и патогенностью, а также устойчивостью к неблагоприятным факторам (Jackson, 1997). Поэтому в работе рассматривалась возможность использования мицелия S.cirsii в качестве инфекционной основы микогербицида для биологической борьбы с бодяком.

Цель работы - обосновать возможность создания микогербицида на основе мицелия фитопатогенного гриба Stagonospora cirsii.

Задачи исследования:

1. определить патогенные свойства мицелия S. cirsii;

2. разработать способы получения- вирулентного мицелия S.cirsii при помощи твердофазной и жидкофазной ферментации;

3. оценить возможность стабилизации и хранения мицелия S.cirsii;

4. подобрать композиционные добавки, повышающие патогенность мицелия S.cirsii, и оценить селективность наиболее эффективных композиций;

5. оценить в полевых условиях,патогенность мицелия S.cirsii в отношении бодяка полевого.

Научная новизна данной работы состоит в том, что впервые доказана способность фрагментов мицелия пикнидиального гриба S.cirsii заражать бодяк полевой в контролируемых и полевых условиях. Выявлены особенности процесса инфицирования бодяка различными типами инокулюма (конидии и фрагменты мицелия) S.cirsii. Показана временная динамика развития инфекционных структур гриба на поверхности листьев растения-хозяина. Выявлены места проникновения инфекционных гиф в ткань листа. Тип действия композиций на основе фрагментов мицелия S.cirsii определен, как инфекционный. Установлено, что композиционные добавки (кукурузное масло, глицерин с ксантаном) могут влиять на место и интенсивность проникновения инфекционных структур в ткань листьев бодяка полевого и некоторых культурных растений.

Практическая значимость работы заключается в том, что определены оптимальные параметры твердофазной и жидкофазной глубинной ферментации (продолжительность ферментации, влажность зернового субстрата, природа и концентрация источника азота для жидкой среды и т.д.) для получения мицелия S.cirsii, обладающего высокой агрессивностью в отношении бодяка полевого. В качестве способа стабилизации мицелия S.cirsii, полученного на зерновом субстрате (пшено) и на жидкой сахарозо-соевой среде, предложена сушка проточным воздухом. На основе фрагментов мицелия S.cirsii разработаны композиции, применение которых в контролируемых лабораторных и полевых условиях приводит к существенному поражению наземной части растений бодяка, определена селективность этих композиций.

Основные результаты исследований были представлены на 13 Симпозиуме EWRS (Италия, Бари, 2005), на Международной конференции "Development of Environmentally Friendly Plant Protection" (Pühajärve, Эстония, 2006), Школе НАТО для молодых ученых (NATO Advanced Institute) «Novel biotechnologies for biocontrol agent enhancement and management» (Gualdo Tadina, Италия, 2006), XV Конгрессе микологов Европы (Санкт-Петербург, 2007), Втором Съезде микологов России (Москва, 2008) и Междисциплинарном микологическом форуме (Москва, 2009).

Работа выполнена при финансовой поддержке Шестой рамочной программы Европейского союза (проект № FOOD-CT-2003-001687 "Enhancement and Exploitation of soil Biocontrol Agent for Bio-Constraint Management in Crops", 2004-2006 гг.), МНТЦ (проект № 2939 "Development of Biological Preparation Based on Natural Microorganisms Strains for Control of

Perennial Weeds", 2005-2008 гг.), грантов Санкт-Петербурга в сфере научной и научно-технической деятельности: 2009 г., проект «Изучение инфекционного процесса при заражении бодяка полевого фитопатогенным грибом Stagonospora cirsii»; 2010 г., проект «Разработка новых подходов для получения и хранения экологически безопасного микогербицида на основе фитопатогена Stagonospora cirsii для борьбы с бодяком полевым».

Заключение диссертации по теме «Микология», Сокорнова, Софья Валерьевна

Выводы

• Для искусственного заражения бодяка полевого мицелием &с/т7 оптимальными являются температура 24°С, период повышенного увлажнения листьев 24 ч, а также концентрация около 9,6x104 КОЕ/г для мицелия, полученного с помощью твердофазной ферментации, и около 5х104 КОЕ/г для мицелия, полученного с помощью жидкофазной ферментации.

• Тип действия мицелия З.Ыгяи определен, как инфекционный, так как токсины в процессе инфицирования бодяка полевого 3-х суточным мицелием не участвуют. Независимо от типа инокулюма проникновение гиф гриба в ткани листьев бодяка отмечено на границах эпидермальных клеток листьев.

• Вирулентный мицелий ¿>. с/гаи может быть получен с помощью как твердофазной, так и жидкофазной ферментации.

• Оптимальными по патогенным свойствам и выходу мицелия ^.с/гаи являются следующие параметры твердофазной ферментации: влажность пшена 35%, время культивирования 10 суток.

• Оптимальными по патогенным свойствам и выходу мицелия 5". с/га и являются следующие параметры жидкофазной ферментации: сахароза как источник углерода в концентрации 40 г/л, соевая мука как источник азота в концентрации 15 г/л, продолжительность ферментации 3 суток.

• Мицелиальный инокулюм может быть стабилизирован высушиванием. Неизмельченный мицелий, полученный на зерновом субстрате, хранится 3 месяца при 24°С без потерь своих свойств. Мицелий, полученный на жидкой питательной среде, не теряет в процессе сушки с аэросилом патогенность и жизнеспособность, и выдерживает краткосрочное хранение в течение 2 недель.

• Патогенные свойства мицелия S.cirsii могут быть улучшены композиционными добавками, стимулирующими процесс проникновения гиф в листовые ткани. Добавка ксантана (0,05%) с глицерином (0,2%) повышает эффективность глубинного мицелия в 4 раза без снижения селективности композиции.

• В сочетании с различными композиционными добавками патогенность мицелия S.cirsii подтверждена в полевых условиях.

• Максимальное развитие симптомов поражения бодяка (до 95%) достигнуто при использовании глубинного мицелия в смеси с сублетальной (пониженной в 4 раза) дозой гербицида Лонтрел Гранд.

На основании проведенных исследований можно сделать заключение, что мицелий целомицета Stagonospora cirsii J J. Davis может служить основой микогербицида для борьбы с бодяком полевым (Cirsium arvense).

Практические рекомендации

1. Для многих фитопатогенных грибов (например, из родов Alternaria, Ascochyta, Sclerotinia и другие), не образующих конидий без облучения УФ или в глубинной культуре, в качестве инфекционного материала при разработке микогербицидов может быть рекомендован мицелий, как это было показано на примере S.cirsii.

2. Для получения в лабораторных условиях патогенного и жизнеспособного мицелиального инокулюма S. cirsii предложены основные параметры твердофазного и жидкофазного глубинного культивирования. Одним из критических факторов является возраст мицелия, на что следует обращать особенное внимание при использовании мицелия фитопатогенных грибов в качестве инфекционного материала.

3. Дневная температура, при обработке растений бодяка композициями на основе мицелиального инокулюма S. cirsii, должна быть не ниже 20°С (оптимум 24°С).

4. При подборе композиционных добавок для повышения эффективности микогербицидов на основе мицелия следует обращать внимание на то, что они могут изменить специализацию патогена.

5. В качестве добавки к мицелиальному инокулюму S. cirsii рекомендуется использовать ксантан (0.05%) и глицерин (0.2%).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Сокорнова, Софья Валерьевна, 2011 год

1. Артохин К.С. Атлас сорных растений / К.С. Артохин. Ростов на Дону: Книга, 2004. - 144 с.

2. Барыкина Р.П. Справочник по ботанической микротехнике (основы и методы) / Р.П. Барыкина, Т.Д. Веселова, А.Г. Девятов, Х.Х. Джалилова, Г.М. Ильина, Н.В. Чубатова. — М.: Изд. Московского университета, 2004.-311 с.

3. Бекер М. Е. Введение в биотехнологию / М. Е. Бекер. — Рига: Наука, 1974.-232 с.

4. Бекер М. Е. Обезвоживание микробной биомассы / М. Е. Бекер. Рига: Зинатне, 1967. — 361 с.

5. Белан С. Р. Новые пестициды: Справочник / С. Р. Белан, А. Ф. Грапов, Г. М. Мельникова; ВНИИ хим. средств защиты растений (ВНИИ ХСЗР). — М.: ИД Грааль, 2001.-196 с.

6. Берестецкий А.О. Микобиота бодяка полевого и родственных ему видов на территории европейской части России / А.О. Берестецкий // Микология и фитопатология. 1997. - Т. 31, № 4. - С. 39-45.

7. Берестецкий О. А. Микробные фитотоксины — модели для синтеза новых гербицидов / O.A. Берестецкий, A.B. Боровков // Труды ГНУ ВНИИСХМ. Л:, 1985. - Т. 55: Микробиологические способы повышения эффективности сельскохозяйственного производства. - С. 5-Ю;

8. Берестецкий А.О. Получение и хранение биопестицидов на основе микромицетов / А.О. Берестецкий, C.B. Сокорнова // Микология и фитопатология. 2009. - Т. 43, № 6. - С. 473-489

9. Берестецкий А.О. Фитотоксины грибов: от фундаментальных исследований — к практическому использованию (Обзор) / А.О. Берестецкий // Прикладная биохимия и микробиология. — 2008. Т. 44, №5.-С. 501-514.

10. Гасич EJL, Берестецкий А.О. Влияние долговременного хранения на стабильность штаммов микромицетов, перспективных для биологической борьбы с Cirsium arvense / Е.Л. Гасич, А.О. Берестецкий // Микология и фитопатология. 2007. - Т.41, № 4. - С. 342-347.

11. Государственный каталог пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации / Минсельхоз России. — По состоянию на 11 марта 2010 г. — М., 2010. 801 с.

12. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта / Б.А. Доспехов. М.: Агропромиздат, 1985. — 352 с.

13. Дьяков Ю.Т. Общая и молекулярная фитопатология: учеб. пособие / Ю.Т. Дьяков, О.Л. Озерецковская, В.Г. Джавахия, С.Ф. Багирова. М.: Общество фитопатологов, 2001. — 301 с.

14. Дьяков Ю.Т. Популяционная биология фитопатогенных грибов / Ю.Т. Дьяков. М.: Муравей, 1998. - 377 с.

15. Методы экспериментальной микологии. Справочник / ред. В.И. Билай. — Киев: Наукова Думка, 1982. 550 с.

16. Павлов С.И. Стратегия и1 механизмы питания личинок листоедов-щитоносок {Coleóptera, Chrysomelidae, Cassidinaé) / С.И. Павлов // Вестник СамГУ. Естественнонаучная серия. 2006. - №7(47). — С. 143147.

17. Поллард Дж. Справочник по вычислительным методам статистики: пер. с анг. / Дж. Поллард. М.: Финансы и статистика, 1982. - 344 с.

18. Семыкина А.Г. Некоторые биологические особенности осота розового и меры борьбы с ним / А.Г. Семыкина // Сб. науч. работ Курганского СХИ.-Курган, 1967.-Вып. 10.

19. Соколова Т.Д. Динамика сообщества сорных растений в посеве ячменя под влиянием длительного применения гербицида Ларен / Т.Д. Соколова, H.H. Лунева // Вестник защиты растений. 2009. - № 3. - С. 64-66.

20. Спиридонов Ю.А. Как ослабить остаточное действие сульфонилмочевинных гербицидов / Ю.А. Спиридонов, В.Г. Шестаков, Г.Е. Ларина, Г.С. Спиридонова // Защита и карантин растений. 2006. — №2.-С. 59-61.

21. Тюрин Ю.Н. Статистический анализ данных на компьютере / Ю.Н. Тюрин, A.A. Макаров. М.: ИНФА-М, 1998. - 528 с.

22. Ульянова Т.И. Сорные растения во флоре России и других стран СНГ / Т.И. Ульянова. СПб: ВИР, 1998. - 344 с.

23. Фишер P.A. Статистические методы для исследователей: пер. с анг. / P.A. Фишер. М.: Госстатиздат, 1958. — 267 с.

24. Хохряков М.К. Методические указания по экспериментальному изучению фитопатогенных грибов / М.К. Хохряков. Л.: ВИЗР, 1974. -69 с.

25. Черепанов С. К. Сосудистые растения СССР / С. К. Черепанов. Л.: Наука, 1981.-510 с.

26. Abbas H.K. Influence of unrefined corn oil and surface-active agents on the germination and infectivity of Alternaría helianthi / H.K. Abbas, G.H. Egley // Biocontrol Sci. Technol. 1996. - Vol. 6, Iss. 4. - P. 531-538.

27. Abbas H.K. Solid substrate formulations of the mycoherbicide Colletotrichum truncatum for Hemp Sesbania {Sesbania exaltata) Control / H.K. Abbas, C.D. Boyette // Biocontrol Sci. Technol. 2000. - Vol.10, Iss. 3. - P. 291-300

28. Akutsu K. Role of conidial fusion in infection by Botrytis cinerea on cucumber leaves / K. Akutsu, K. Ko, T. Misato // Ann. Phytopathol. Soc., Japan.-1981.-Vol. 47, Iss. l.-P. 15-23.

29. Amsellem Z. Abolition of selectivity of the mycoherbicidal organisms and' enhanced' virulence of avirulent fungi by an invert emulsion / Z. Amsellem, A. Sharon, J. Gressel // Phytopathology. 1991. - Vol. 81, Iss. 9. - P. 985988.

30. Amsellem; Z. Long-term dry preservation of viable mycelia of two mycoherbicidal organisms / Z. Amsellem, N. K. Zidack, P. C. Quimby Jr. Sharon, J. Gressel // Crop Protection. 1999. - Vol.18, Iss. 10. - P. 643-649.

31. Auld B.A. Emerging technologies in plant protection — bioherbicides / B.A. Auld, C. McRae // Proc. N.Z. Plant Protection Conf. 1997. - Vol. 50. -P. 191-194.

32. Bailey K.L. An organic option for broadleaved weed control in cereals using a microbial bioherbicide: Interim report to OSMDI, Canadian Wheat Board / K.L. Bailey; AAFC Saskatoon Research Centre. 2009. - 7 p.

33. Bailey B.A. Influence of adjuvants on disease development by Pleospora papaveracea on opium poppy {Papaver somniferum) / B.A. Bailey, N.R. O'Neill, J.D. Anderson // Weed Sci. 2004. - Vol. 52, No. 3. - P; 424-432.

34. Barlett M.C. Mass production of entomogenous fungi for biological control of insects / M.C. Barlett, S.T. Jaronski // Fungi in biological control systems / ed. M.N. Burge. NY: Manchester University Press, 1988. - P. 61-88.

35. Bithell S.L. Evaluation of the pathogenicity of Phoma exigua var. exigua on Californian thistle / S.L. Bithell, A. Stewart // N. Z. Plant Protection. 2001. -Vol. 54.-P. 179-183.

36. Boerema G.H. Phoma identification manual: differentiation of specific and infra-specific taxa in culture / G.H. Boerema, J J de Gruyter, M.E. Noordeloos, M.E.C. Hamers. CABI Publishing, 2004. - 448 p.

37. Bourdöt G.W. Demographic and biomass consequences of inundative treatment of Cirsium arvense with Sclerotinia sclerotiorum / G.W. Bourdöt, I.C. Hervey, G.A. Hurrel, D.J. Saville // Biocontrol Sei. Technol. 1995. -Vol. 5, Iss. l.-P. 11-25.

38. Bourdöt G.W. Impacts of applied Sclerotinia sclerotiorum on the dynamics of a Cirsium arvense population / Bourdöt G.W., Hurrell G.A., Saville D.J., Leathwick D.M. // Weed Research. 2006. - Vol. 46, Iss. l.-P. 61-72.

39. Boyette C.D. Interaction of a bioherbicide and glyphosate for controlling hemp sesbania in glyphosate-resistant soybean /C.D. Boyette, R.E. Hoagland, M.A. Weaver // Weed Biology and Management 2008. - Vol. 8. - P. 18-24.

40. Brosten B.S. Field trials of Sclerotinia sclerotiorum to control Canada* thistle (Cirsium arvense) / B.S. Brosten, D.C. Sands // Weed Sei. 1986. - Vol. 34, No. 3.-P. 377-380;

41. Cimmino A. Production of Phytotoxins by Phoma exigua var. exigua, potential mycogerbicide against perennial thistles / A. Cimmino, A. Andolfi, A. Berestetskiy, A. Evidente // J. Agric. Food Chem. 2008. - Vol. 56, Iss. 15.-P. 6304-6309.

42. Connick W.J. Formulation of mycoherbicides using a pasta-like process / W.J. Connick, C.D. Boyette, J.R. McAlpine // Biological Control. — 1991. — Vol. l,Iss. 4.-P. 281-287

43. Daigle D.J. Formulating atoxigenic Aspergillus flavus for field release / D. J. Daigle, P. J. Cotty // Biocontrol Sei. Technol. 1995. - Vol. 5, Iss. 2. -P. 175-184.

44. Daigle D.J. Invert emulsions: carrier and water source for the mycoherbicide, Alternaria cassia / D.J. Daigle, W.J. Connick, P.C. Quimby, J. Evans, B. Trask-Morrell, F.E. Fulgham // Weed Technol. 1990. - Vol. 4, No. 2. - P. 327-331.

45. Daigle D. J. Production of conidia of Alternaria cassiae with alginate pellets / D. J. Daigle, P. J. Cotty // Biological Control. 1992. - Vol. 2, Iss. 4. - P. 278-281.

46. Egley G.H. Water corn oil emulsion enhances conidia germination and mycoherbicidal activity of Colletotrichum truncatum /G.H. Egley, C.D. Boyette //Weed Sci. 1995. - Vol. 43. - P. 312-317.

47. Evidente A. Stagonolides B. — F, a potential mycoherbicide of Cirsium arvense / A. Evidente, A. Cimmino, A. Berestetskiy, G. Mitina, A. Andolfi, A. Motta // J. Nat. Prod. 2008. - Vol.71, Iss. 1. - P. 31-34.

48. Frantzen J. The role of clonal growth in the pathosystem Cirsium arvense — Puccinia punctiformis / Frantzen J. I I Can. J. Bot. — 1994. — Vol. 72, No. 6. — P: 832-836.

49. Gasich E.L. Evaluation of the fungus Ascochyta sonchi for biological control of Cirsium arvense and Sonchus arvensis / E.L. Gasich, L.B. Khlopunova, M.M. Levitin // Proc. 14th EWRS Symposium; Hamar, Norway; 17-21 June, 2007.-2007.-P. 29.

50. Greaves M.P. A proposed mode of action of oil-based formulations of a microbial herbicide / M.P. Greaves, R.J. Pring, J. Lawrie // Biocontrol Sci. Technol. 2001. - Vol. 11, Iss. 2. - P. 273-281.

51. Greaves M. P. Formulations of microbial herbicides / M. P. Greaves, L. Dutton, J. Lawrie // Asp. Appl. Biol. 2000. - No. 57. - P. 171-178.

52. Green S. Effects of leaf maturity, infection site, and application rate of Alternaría cirsinoxia conidia on infection of Canada Thistle (Cirsium arvense) / S. Green, K. L. Bailey // Biological Control. 2000. - Vol. 19, Iss. 2.-P. 167-174.

53. Green S. Influence of Moisture and Temperature on Infection of Canada Thistle by Alternaría cirsinoxia / S. Green, K. L. Bailey // Plant Disease. — 2000.-Vol. 84, No. 10.-P. 1126-1132.

54. Gressel J. Herbicides as Synergists for Mycoherbicides, and Vice Versa / J. Gressel // Weed Sci. Vol. 58, Iss. 3. - 2010. - P. 324-328.

55. Guske S. Biocontrol options for Cirsium arvense with indigenous fungal pathogens / Guske S., Schulz B., Boyle C. // Weed Research. 2004. - Vol. 44, Iss. 2.-P. 107-116.

56. Hamdoun A. M. Regenerative capacity of plants of Cirsium arvense / Hamdoun A. M. // Weed Research. 1972. - Vol. 12, Iss. 2. - P. 128-136.

57. Hershenhorn J. Septoria cirsii a potential biocontrol agent of Canada thistle and its Phytotoxins /?-nitropropionic acid / J. Hershenhorn, M. Vurro, M. C. Zonno, A. Stierle, G. Strobel // Plant Sei. - 1993. - Plant Sei. - Vol. 94, Iss. 1-2.-P. 227-234.

58. Hölker U. Biotechnological advantages of laboratory-scale solid-state fermentation with fungi / Hölker U., Höfer M., Lenz J. // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2004. - Vol. 64, No. 2. - P. 175-186.

59. Höhl B. Histology of disease development in resistant and susceptible cultivars of chickpea (Cicer arietinum L.) inoculated with spores of Ascochyta rabiei. / B. Höhl, M. Pfautsch, W. Barz // J. Phytopath. 1990. -Vol. 129, No. 1.-P. 31-45.

60. Jackson M.A. Liquid culture production of microsclerotia of Colletotrichum truncatum for use as bioherbicidal propagules / M.A. Jackson, D.A. Schisler // Mycol. Res. 1995. - Vol. 99, Iss 7. - P. 879-884.

61. Jackson M.A. Optimizing nutritional conditions for the liquid culture production of effective fungal biological control agents / M.A. Jackson // J. Industrial Microbiol. Biotechnol. 1997. - Vol. 19, No. 3. - P. 180-187.

62. Kluth S. Effects of two pathogens on the performance of Cirsium arvense in a successional fallow / S. Kluth, A. Kruess, T. Tscharntke // Weed Research. — 2005. Vol. 45, Iss. 4. - P. 261-269.

63. Kluth S. Insects as vectors of plant pathogens: mutualistic and antagonistic interactions / S. Kluth, A. Kruess, T. Tscharntke // Oecologia. — 2002. — Vol. 133,No. 2.-P. 193-199.

64. Kropp B. R. The effect of surfactants and some herbicides on teliospore viability in Puccinia thlaspeos (Schub.) / Kropp, B. R., H. Darrow // Crop Protection. 2006. - Vol. 25, Iss. 4. - P. 369-374.

65. Kruess A. Indirect interaction between a fungal plant pathogen and a herbivorous beetle of the weed Cirsium arvense / A. Kruess // Oecologia. — 2002. Vol. 130, No. 4. - P. 563-569.

66. Leathers T.D. Mycopesticides: status, challenges and potential / T.D. Leathers, S.C. Gupta, N.J. Alexander // J. Ind. Microbiol. 1993. - Vol. 12, No: 2, P. 69-75.

67. Leth, V. Phomopsis cirsii: a potential biocontrol agent of Cirsium arvense / V. Leth, J. Netland, C. Andreasen // Weed Research. 2008. - Vol. 48, Iss. 6. -P. 533-541.

68. Mahuku G.S. Influence of sucrose, mucin and xanthan gum on spore germination often different fungi / G.S. Mahuku; P.H. Gudwin // Eur. J. Plant Pathol. 1998. - Vol. 104, No. 8. - P. 849-852.

69. Montesinos E. Development, registration and commercialization of microbial pesticides for plant protection / E. Montesinos // International Microbiology. -2003. Vol. 6, No. 4. - P. 245-252.

70. Moore, R. J. The biology of Canadian weeds.:13. Cirsium arvense (L.) Scop. / R. J. Moore // Can. J. Plant Sci. 1975. - Vol. 55, No. 4. - P. 1033-1048.

71. Onions A.H.S. Preservation of fungi / A.H.S. Onions // The filamentous fungi. Vol. IV. Fungal technology. / eds. J.E. Smith, D.R. Berry, B. Kristiansen. -L.: Edward Arnold, 1983. P. 373-389.

72. Pat. 4753670 (US), Int. CI.4 A01N 63/04. Herbicide / V. Leth; Novo Industry A/S (Denmark). 647609; Filed Sep 6, 1984; Date of Pat. Jun 26, 1988; Foreign Priority Sep 7, 1983, 4059/83 (Denmark). - 8 p.

73. Pat. 5074902 (US), Int. CI.5 AO IN 63/04. Granular products containing fungi encapsulated in a wheat gluten matrix for biological control of weeds / W.J. Connick, C.D. Boyette. 560791; Filed Jun 30, 1990; Date of Pat. Dec 24, 1991.-5 p.

74. Pat. US 2003/01039944 Al, Int. CI.7 A01N 63/00. Sprayable formulations of mycelium-based biological control agents produced by solid* state fermentation / W. Hintz: 10/286884; Filed Nov 4, 2002; Pub. Date Jun 5, 2003. - 7 p.

75. Raimbault M. General and microbiological aspects of solid substrate fermentation / M. Raimbault // Electronic Journal of Biotechnology. — 1998. — Vol. 1, No.3. URL: http://eib.ucv.cl/content/vol 1 /issue3/full/9/index.html

76. Rosskopf E.N. Influence of epidemiological factors on the bioherbicidal efficacy of Phomopsis amaranthicola on Amaranthus spp. / E.N. Rosskopf, C.B. Yandoc, R. Charudattan, J.T. De Valerio // Plant Dis. 2005. - Vol. 89, No. 12.-P. 1295-1300.

77. Schisler D.A. Germination of soil-incorporated microsclerotia of Colletotrichum truncatum and colonization of seedlings of the weed Sesbania exaltata / D.A.Schisler, M.A. Jackson // Can. J. Microbiol. 1996. — Vol. 42, No. 10. — P. 1032-1038.

78. Shabana Y.M. An evaluation of hydrophilic polymers for formulating the bioherbicide agents Alternaría cassiae and A. eichhorniae / Y.M. Shabana, R. Charudattan, J.T. Devalerio, M.A. Elwakil // Weed Technol. 1997. - Vol. 11, No. 2.-P. 212-220.

79. Shabana Y.M. The use of oil emulsions for improving efficacy of Alternaría eichhorniae as a mycoherbicide for waterhyacinth (.Eichhornia crassipes) / Y.M. Shabana//Biological Control. 2005. - Vol. 32, Iss. 1. - P. 78-89.

80. Silman R.W. Comparison of culture methods for production of Colletotrichum truncatum spores for use as a mycoherbicide / R.W. Silman, T.C. Nelsen, R.J. Bothast // FEMS Microbiology Letters. 1991. - Vol. 79, Iss. l.-P. 69-74.

81. Singh J. Effect of temperature and storage time on shelf life of mycoherbicidal products of Colletotrichum dematium / J. Singh, A.K. Pandey // American Journal of Agricultural and Biological Sciences. 2010. - Vol. 5, Iss. 3.-P. 315-320.

82. Winder R.S. Evaluation of Colletotrichum sp. and Fusarium spp. as potential biological control agents for marsh reed grass (Calamagrostis canadensis) / R.S. Winder// Can. J. Plant Pathol. 1999. - Vol. 21, Iss.l. - P. 8-15.

83. Winder R.S. Microencapsulation: a strategy for formulation of inoculum / R.S. Winder, J.J. Wheeler, N. Conder, I.S. Otvos, R. Nevill, L. Duan // Biocontrol Sci. Technol. 2003. - Vol. 13, Iss. 2. - P. 155-169.

84. Womack J.G. A vegetable oil-based invert emulsion for mycoherbicide delivery / J.G. Womack, G.M; Eccleston, M.N. Burge // Biological control. -1996. Vol» 6, Iss. 1. - P. 23-28.

85. Womack J.G. Mycoherbicide formulation and' the potential for bracken control / J.G. Womack, M.N. Burge // Pestic. Sci. 1993. - Vol. 37, Iss. 4. -P. 337-341.

86. Yuzikhin O. Herbicidal potential of stagonolide, a new phytotoxic nonenolide from Stagonospora cirsii / O. Yuzikhin, G. Mitina, A. Berestetskiy // J. Agric. Food Chem. 2007. - Vol. 55, Iss. 19.-P. 7707-7711.