Исследование противоопухолевой активности аутологичных вакцин на основе белков теплового шока in vivo тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Косенков, Дмитрий Александрович

• Косенков, Дмитрий Александрович
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Косенков, Дмитрий Александрович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Белки теплового шока. Открытие семейства.

1.2. Характеристика семейства белков теплового шока.

1.3. Индукция синтеза белков теплового шока.

1.4. Структура основных белков теплового шока.

1.5. Функции белков теплового шока.:.

1.6. Особенности биологических активностей белков теплового шока в опухолевой и неопухолевой клетках.

1.7. Участие белков теплового шока в регуляции иммунного ответа.

1.7.1. Стимуляция HSP неспецифического иммунного ответа.

1.7.2. Стимуляция HSP специфического иммунного ответа.

1.8. Методы лечения онкологических заболеваний.

1.8.1. Основные виды противоопухолевых вакцин.

1.9. Белки теплового шока как объекты , для иммунотерапии онкологических заболеваний.

1.10. Использование вакцин на основе белков теплового шока в клинической практике.•.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование противоопухолевой активности аутологичных вакцин на основе белков теплового шока in vivo»

Современная медицинская наука располагает широким арсеналом средств лечения опухолевых заболеваний. Наиболее традиционным подходом к 1 противоопухолевой терапии является сочетание хирургического и терапевтического методов лечения. Однако при удалении материнской опухоли риск развития метастазов многократно увеличивается, особенно у пациентов со слабым иммунным статусом. Поэтому стимуляция как общего, так и специфического иммунного ответа должна быть неотъемлемой частью лечения опухолей. Стоит отметить, что опухолевые клетки, являющиеся частью организма пациента, не распознаются иммунной системой человека. Это результат их слабой иммуногенности. В этой связи наиболее рациональным подходом к решению данной проблемы является разработка вакцин, вызывающих специфический иммунитет против конкретного вида опухоли.

В настоящее время существует множество разработок противоопухолевых вакцин на основе самых разнообразных подходов. Однако все они обладают рядом недостатков, наиболее проблемным из которых является необходимость в индукции иммунного специфического ответа достаточной силы. Наиболее перспективным подходом к решению данной проблемы является использование аутологичных вакцин, материалом для изготовления которых является опухолевая ткань пациента. Согласно литературным данным, наибольшую противоопухолевую эффективность проявляют аутологичные вакцины на основе белков теплового шока (HSP, от англ. heat shock protein). Шаперонная функция, которую они выполняют по отношению к множеству опухолевых антигенов, позволяет выделять комплексы, состоящие из белков теплового шока с этими антигенами.

Однако до сих пор остается нерешенным вопрос о том, как, при наличии специфического иммунологического стимулятора, повысить иммуногенность опухоли (либо ее метастазов). Другим важным недостатком является ограниченное количество сырья, т.е. того количества опухоли, из которой готовится вакцина. Следовательно, необходимо искать подходы как для 8 повышения иммуногенности опухоли (и ее метастазов), так и для повышения количества антигенного материала, составляющего основу данной вакцины.

В данной работе предложена попытка решить указанные проблемы с целью повышения противоопухолевой эффективности аутологичных вакцин. Эта задача решалась двумя способами. Во-первых, основу получаемой вакцины составляют не один, как в оригинальных исследованиях, а три HSP: hsp70, hsp90 и grp94 (далее hsp96). Это позволяет существенно увеличить набор антигенного материала и расширить его спектр, поскольку указанные белки функционируют в различных компартментах клетки. Во-вторых, до хирургического удаления опухоли пациенту проводилась терапия препаратом «Онкофер™», радиоактивное железо 59Fe (0,8 fiKu), которое избирательно накапливается в опухолевой ткани за счет транспортных систем железа и трансферриновых рецепторов и вызывает образование тромбозов в микроциркуляторном русле. Это, в свою очередь, вызывает гипоксический стресс в опухолевой ткани, что способствует усилению экспрессии HSP, - стрессовых антиапоптотических белков, пополняющих пул объектов, составляющих основу вакцины. Цель и задачи исследования

Цель исследования: изучение противоопухолевой активности продукта на основе антиапоптотических аутологичных HSP в комплексе с опухолевыми антигенами, а также их комбинации с внешним стрессовым фактором in vivo. Задачи исследования:

1. Разработать методику выделения и очистки комплексов «HSP+опухолевый антиген» из опухолевой ткани.

2. Оценить цитотоксичность полученного продукта in vitro.

3. Изучить влияние полученного продукта на неспецифический иммунный ответ ex vivo.

4. Оценить возможность использования внешнего стрессового фактора для повышения продукции HSP, как источника иммуногенного материала.

5. Провести сравнительную оценку противоопухолевой активности аутологичных HSP (монопрепарат), внешнего стрессового фактора, а также их сочетания.

Научная новизна

Впервые разработана методика единовременного выделения и очистки пептидных комплексов на основе трех белков теплового шока, показана цитотоксическая безопасность данных комплексов in vitro. Продемонстрирована способность полученного продукта активировать неспецифический иммунный ответ ex vivo в зависимости от используемой дозы и времени. Впервые исследована возможность применения Fe59, как внешнего стрессового фактора, с целью повышения содержания белков теплового шока в опухолевой ткани, и впервые доказано, что эффективность комбинации полученного продукта с исследуемым стрессовым фактором in vivo является более высокой по сравнению с использованием монопрепаратов. Практическая значимость работы

Результаты представленной работы позволяют повысить эффективность использования аутологичных противоопухолевых вакцин на основе белков теплового шока за счет одновременного увеличения количества иммуногенного материала в вакцине и повышения иммуногенности самой опухолевой ткани. Основные положения, выносимые на защиту

1. Предложена методика единовременного выделения и очистки аутологичной вакцины на основе трех белков теплового шока.

2. Аутологичные белки теплового шока в комплексе с опухолевыми антигенами не обладают цитотоксической активностью по отношению к клеткам линии MCF7.

3. Полученный продукт дозо- и времязависимо увеличивает продукцию TNF-a в крови больных животных, то есть обладает способностью к активации неспецифического иммунного ответа.

4. Применение 59Fe, как внешнего стрессового фактора, позволяет добиться повышения уровня эндогенных белков теплового шока - материала для аутологичных вакцин.

5. Сравнительная оценка противоопухолевой активности аутологичных комплексов на основе HSP (монопрепарат), 59Fe,a также их сочетания показала, что наибольшей противоопухолевой активностью обладает комбинированное применение.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Косенков, Дмитрий Александрович

выводы

1. Разработана методика единовременного выделения и очистки аутологичной вакцины на основе трех белков теплового шока. Конечный продукт характеризуется высокой степенью очистки (согласно электрофоретическому исследованию и вестерн-блоту) и низким содержанием эндотоксина

2. Аутологичные белки теплового шока в комплексе с опухолевыми антигенами не обладают цитотоксичностью по отношению к клеткам иммунной системы, а также нормальным клеткам. При проведении МТТ-теста показано, что статистически достоверных отличий от контроля по гибели клеток нет. Согласно тесту на стимуляцию синтеза ДНК, включение 14С-тимидина статистически достоверно не отличается от контроля

3. Полученный продукт обладает способностью активации неспецифического иммунного ответа. В эксперименте ex vivo показано, что данный продукт дозо-и времязависимо увеличивает продукцию TNF-a в крови больных животных

4. Применение внешнего стрессового фактора позволяет добиться повышения уровня эндогенных белков теплового шока - материала для аутологичных вакцин, что доказано методом иммуногистохимического определения содержания белка hsp70 в опухолевой ткани молочной железы

5. Использование внешнего стрессового фактора вносит дополнительный вклад в цитотоксическую и противоопухолевую активность аутологичных вакцин на основе белков теплового шока. В ходе эксперимента in vivo на экспериментальных животных (мышах линии C57B16/J) доказано, что комбинация аутологичной вакцины с внешним стрессовым фактором (радиоактивным железом 59Fe) обладает наибольшей противоопухолевой активностью и при этом намного меньше влияет на качество жизни экспериментальных животных

Благодарности

В первую очередь хочу выразить искреннюю благодарность доктору медицинских наук, Кешелаве Виктору Владимировичу; Обуховой Варваре Владимировне и Коваленко Наталье Аркадьевне за помощь в освоении и разработке методик выделения и очистки белков. Выражаю глубокую признательность Савватеевой Марии Владимировне, Розову Федору Николаевичу и Кузнецовой Екатерине Михайловне за терпение, моральную поддержку и помощь в освоении методик проведения экспериментов in vivo и in vitro; Абакумовой Ольге Юрьевне за помощь в работе с клеточными культурами; Барсегяну Геворку Гайковичу за предоставление вивария и возможность проведения эксперимента in vivo. Хочу поблагодарить за обучение работе с лабораторными животными Каршиеву Сайду, а также за неоценимый вклад в работу профессора кафедры патологической анатомии ММА им. И.М.Сеченова Коган Евгению Александровну.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, в ходе проведения исследования на основе данных из литературных источников и проведенных экспериментов нам удалось разработать методику получения продукта, обогащенного «HSP-пептидными» комплексами на основе одновременно трех антиапоптотических HSP. Полученная вакцина содержала низкое количество эндотоксина, то есть была апирогенной, и при этом содержала высокую концентрацию целевых белков.

Цитотоксические свойства выделенных белковых фракций оценивались in vitro на линиях опухолевых клеток. В ходе исследования было доказано отсутствие цитотоксичности получаемой вакцины в отношении как опухолевых, так и нормальных клеток. Параллельно было показано отсутствие влияния «HSP-пептидных» комплексов на стимуляцию пролиферации клеток, т.к. синтеза ДНК не отличался от контроля.

Для исследования иммунологических свойств вакцины на основе HSP был проведен эксперимент по оценке влияния выделенных белков на неспецифический иммунный ответ. В качестве показателя индукции неспецифического иммунного ответа был выбран один из основных цитокинов, играющих ключевую роль в данном иммунном ответе, - TNF-a. Было показано, что вакцина вызывает более значительную активацию синтеза TNF-a, чем известный иммуномодулятор и активатор неспецифического иммунного ответа Полиоксидоний™. Более того, была доказана зависимость данного эффекта вакцины от времени и используемой дозы белков при прочих равных условиях.

Для повышения иммуногенности опухолевой ткани и, как следствие, для усиления эффективности воздействия аутологичных вакцин на опухолевые клетки, был проведен эксперимент по исследованию радиоактивного железа 59Fe, как внешнего стрессового фактора, способного повысить содержание индуцибельных форм HSP в клетках опухоли. Было показано, что воздействие радиоактивного железа 59Fe в виде химиотерапевтического препарата Онкофер™ на опухолевую ткань вызывает значительную активацию синтеза HSP. Это, в свою очередь, должно способствовать увеличению представления опухолевых антигенов на поверхности клеток и приводить к повышению иммуногенности опухолей.

Поскольку реализованный подход позволяет получить аутологичную вакцину, являющуюся безопасной и апирогенной, это дает основания для использования ее в оценке противоопухолевой активности in vivo. В связи с этим был поставлен эксперимент по исследованию эффективности комбинации аутологичной вакцины с внешним стрессовым фактором, повышающим уровни HSP в опухоли, и, как следствие, - ее иммуногенность.

Эксперимент проводился на лабораторных животных в соответствии с требованиями Руководства по проведению доклинических исследований [Хабриев Р.У., 2005] и правил Надлежащей Лабораторной Практики GLP. В ходе исследования экспериментальных животных делили на 5 групп: отрицательный контроль (норма), положительный контроль (нелеченые животные), группа, получавшая монопрепарат вакцину (HSP), группа, получавшая монопрепарат Онкофер™ (59Fe) и группа, получавшая комбинированную терапию (HSP+59Fe).

В ходе исследования было показано, что наиболее эффективной противоопухолевой комбинацией является аутологичная вакцина на основе HSP, используемая совместно с внешним стрессовым фактором, повышавшим уровень HSP в опухолевой ткани. Показано, что в данной группе к окончанию эксперимента наблюдались самые низкие темпы роста опухоли (Рис. 3.15), в течение эксперимента смертность в группе была низкой, - такой же, как в группе, получавшей только 59Fe. Кроме того, максимальная противоопухолевая активность комбинации вакцины с Онкофером™ также была подтверждена как при гистологическом исследовании образцов опухолевой ткани, так и при исследовании дополнительных показателей противоопухолевой активности (Табл. 16).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Косенков, Дмитрий Александрович, 2008 год

1. Авцын А.П., Кондакова Л.И., Халанский А.С. и др. Новая клеточная линия невриномы гассерова узла крысы НГУК-1 // Цитология.-1989.-Т.31, №1.-С. 97-101.

2. Бейум А. Выделение лимфоцитов, гранулоцитов и макрофагов. В кн. Лимфоциты: выделение, фракционирование и характеристика. Под ред. Дж. Б. Натвига, П. Перлманна, X. Вигзелля: пер. с англ. М.: Медицина, 1980, С. 9-19.

3. Беляков И.М. Основы ветеринарии. М.: Издательство «КолосС». -2004. 560 с.

4. Вербенко В.Н., Калинин В.Л. Рост радиоустойчивости бактериофагов как результат усиления экспрессии стрессовых систем клетки-хозяина // Генетика.- 1995.-Т. 32, № 12.-С. 1636-1630.

5. Кешелава В.В. Новые аспекты применения 59Fe в уроонкологии // Материалы научной конференции «Хирургия 2000». 2000. - С. 436438.

6. Кешелава В.В. Новые лечебно-диагностические средства в онкологии// Int. Med. J. 2000. - Vol. 5. - P.457-459.

7. Кешелава B.B. Патент 2053776 РФ 1994 г.

8. Кешелава В.В. Рак молочной железы: новые аспекты диагностики // Материалы I все российской научной конференции с международным участием «Актуальные вопросы маммологии». 2001. - С. 3.

9. Коваленко Н.А., Обухова В.В., Косенков Д.А. и др. Выделение и очистка белков теплового шока из опухолевой ткани молочной железы человека // Иммунология. 2007. - Т. 28, №2. - С. 86-89.

10. Косенков Д.А., Ляшенко А.А., Кешелава В.В., Северин Е.С. Основные виды противоопухолевых вакцин // Вопр.биол.,мед.и фармацевт.химии. -2007. — N. З.-С. 3-9.

11. Моисеенко В.М. Возможности вакцинотерапии меланомы кожи // Практ. онкол. -2001. -№ 4 (8). С. 58-64.110

12. Обухов А.А., Зыкова Е.С., Косенков Д.А. Белки теплового шока и апоптоз // Вопр.биол.,мед.и фармацевт.химии. 2007. - N. 2. - С. 52-56.

13. Остерман JI.A. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. М.: Наука, 1985.- 536 с.

14. Руденко Е.Д., Косенков Д.А. Противоопухолевые вакцины XXI века // Вопр.биол.,мед.и фармацевт.химии. -2007. -N. 1. С. 44-48.

15. Ситникова А.Г. и др. JIAJI-тест. Современные подходы к определению пирогенности / Ситникова А.Г., Глазова Н.В., Травина Л.А., Багирова В.Л.-СПб, 1994.- 105 с.

16. Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Медицина. - 2005. -832 с.

17. Abakumova O.Yu., Podobed O.V., Tsvetkova Т.A. et al. Modulation of glutamate neurotoxicity in the transformed cell culture by monoamine oxidase inhibitors, clorgyline and deprenyl // J. Neural. Transm.-1998.-Vol.52.-C. 8791.

18. Abravaya K., Myers M.P., Murphy S.P. et al. The human heat shock protein hsp70 interacts with HSF, the transcription factor that regulates heat shock gene expression // Genes Dev. 1992. - Vol. 6. - P. 1153-1164.

19. Akalin A., Elmore L.W., Forsythe H.L. et al. A novel mechanism for chaperone-mediated telomerase during prostate cancer progression // Cancer Res. 2001. - Vol. 61. - P. 4791-4796.

20. Ali A., Bharadwaj S., O'Carroll R. et al. HSP90 interacts with and regulates the activity of heat shock factor 1 in Xenopus oocytes // Mol. Cell. Biol. -1998. Vol. 18. - P. 4949-4960.

21. Arnold D., Faath S., Rammensee И. et al. Cross-priming of minor histocompatibility antigen-specific cytotoxic T cells upon immunization with the heat shock protein gp96 // J. Exp. Med. 1995. - Vol. 182. - P. 885-889.

22. Acsadi G., Dickson G., Love D.R. et al. Human dystrophin expression in mdx mice after intramuscular injection of DNA constructs // Nature. 1991. -Vol. 352.-P. 815-818.

23. Asea A., Kraeft S.K., Kurt-Jones E.A. et al. Hsp70 stimulates cytokine production through a CD-14-dependent pathway, demonstrating its dual role as a chaperone and cytokine // Nat. Med. 2000. - Vol. 6. - P. 435-442.

24. Asea A., Rehli M., Kabingu E. et al. Novel signal transduction pathway utilized by extracellular hsp70: role of toll-like receptor (TLR) 2 and TLR4 // J. Biol. Chem. 2002. - Vol. 277. - P. 15028-15034.

25. Bardwell J.C.A., Craig E.A. Major heat shock gene of drosophila and Escherichia coli heat-inducible DNA gene are homologous // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1984.-Vol. 81.-P. 848-852.

26. Basu S., Srivastava P.K. Calreticulin, a peptide-binding chaperone of the endoplasmic reticulum, elicits tumor- and peptide-specific immunity // J. Exp. Med.-1999.-Vol. 189, № 5.-C. 797-802.

27. Bayerl C., Dorfner В., Rzany B. et al. Heat shock protein HSP 27 is expressed in all types of basal cell carcinoma in low and high risk UV exposure groups // Eur. J. Dermatol. 1999. - Vol. 9, N. 4. - P. 281-284.

28. Beere H.M., Green D.R. Stress management-heat shock protein-70 and the regulation of apoptosis // Trends Cell. Biol. -2001,- Vol. 11. P. 6-10.

29. Bevan M.J. Minor H antigens introduced on H-2 different stimulating cells cross-react at the cytotoxic T cell level during in vivo priming // J. Immunol. -1976. Vol. 117. - P. 2233-2238.

30. Bharadwaj S., Ali A., Ovsenek N. Multiple components of the HSP90 chaperone complex function in regulation of heat shock factor 1 in vivo // Mol. Cell. Biol. 1999.-Vol. 19.-P. 8033-8041.

31. Blachere N.E., Srivastava P.K. Heat shock protein-based cancer vaccines and related thoughts on immunogenicity of human tumors // Semin. Cancer Biol. 1995. - Vol. 6 (6). - P. 349-355.

32. Borges L., Miller R.E., Jones J. et al. Synergistic action of fms-like tyrosine kinase 3 ligand and CD40 ligand in the induction of dendritic cells and generation of antitumor immunity in vivo // J. Immunol. 1999. - Vol. 163. -P. 1289-1297.

33. Bork P., Sander C., Valencia A. An ATPase domain common to prokaryotic cell cycle proteins, sugar kinases, actin, and hsp 70 heat shock proteins // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. - Vol. 89. - P. 7290-7294.

34. Bulut Y., Faure E., Thomas L. et al. Chlamydial heat shock protein 60 activates macrophages and endothelial cells through Toll-like receptor 4 and MD2 in a MyD88-dependent pathway // J. Immunol. 2002. - Vol. 168. - P. 1435-1440.

35. Cala S.E., Jones L.R. GRP94 resides within cardiac sarcoplasmic reticulum vesicles and is phosphorylated by casein kinase II // J. Biol. Chem. 1994. -Vol. 269.-P. 5926-5931.

36. Cancer Vaccine Antigenics // Biodrugs. - 2002. - Vol. 16, N. 1. - P. 7274.

37. Caplan A.J., Cyr D.M., Douglas M.G. Eukaryotic homologues of Escherichia coli dnaj: a diverse protein family that functions with hsp70 stress proteins // Mol. Biol. Cell. 1993. - Vol. 4. - P. 555-563.

38. Chen H.C., Guh J.Y., Tsai J.H. et al. Induction of heat shock protein 70 protects mesangial cells against oxidative injury // Kidney Int. 1999. - Vol. 56, N. 4. -P. 1270-1273.

39. Cheung R.K., Dosch H.M. The growth transformation of human В cells involves super induction of hsp 70 and hsp 90 // Virology. 1993. - Vol. 193. -P. 700.

40. Chiosis G., Vilenchik M., Kim J. et al. Hsp90: the vulnerable chaperone // Drug Discov. Today. 2004. - Vol. 9, N. 20. - P. 881 -888.

41. Collins P.L., Hightower L.E. Newcastle disease virus stimulates the cellular accumulation of stress (heat shock) mRNAs and proteins // J. Virol. 1982. -Vol. 44.-P. 703.

42. Craig E.A., Weissman J.S., Horwich A.L. Heat shock proteins: mediators of protein conformation and turnover in the cell // Cell. 1994. - Vol. 78. - P. 375.

43. Csermeley P., Schnaider Т., Soti C. et al. The 90-kDa molecular chaperone family: structure, function, and clinical applications. A comprehensive review // Pharmacol. Ther. 1998. - Vol. 79. - P. 129-168.

44. Del Giudice G. Hsp70: a carrier molecule with built-in adjuvanticity // Experientia. 1994. -Vol. 50 (11-12).-P. 1061-1066.

45. Delpino A., Falcioni R., Ferrini U. Modulation of heat shock protein synthesis in two human melanoma cell lines // Tumori. 1984. - Vol. 70, N. 5.-P. 393-398.

46. Denisenko O., Yarchuk O. Heat shock translational control in cell-free system // Antonie van Leeuwenhoek. — 1990. — Vol. 58. — P. 163-168.

47. Donnelly J.J., Ulmer J.B., Shiver J.W. et al. DNA Vaccines // Annu. Rev. Immunol. 1997. - Vol. 15. - P. 617-648.

48. Dyakonova V.A., Dambaeva S.V., Pinegin B.V. et al. Study of interaction between the polyoxidonium immunomodulator and the human immune system cells // International Immunopharmacology. 2004. - Vol. 4. - P. 1615-1623.

49. Dybdahl В., Wahba A., Lien E. et al. Inflammatory response after open heart surgery: release of heat shock protein 70 and signaling through Toll-like receptor-4 // Circulation. 2002. - Vol. 105. - P. 685-690.

50. Engvall E., Perlman P. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin G // Immunochemistry. 1971. - Vol. 8 (9).-P. 871-874.

51. Facciponte J.G., Wang X.Y., MacDonald I.J. et al. Heat shock proteins HSP70 and GP96: structural insights // Cancer Immunol. Immunother. -2006. Vol. 55 (3). - P. 339-346.

52. Feige U., van Eden W. Infection, autoimmunity and autoimmune disease // EXS. 1996. - Vol. 77. - P. 359-373.

53. Flaherty K.M., Deluca-Flaherty C., McKay D.B. Three-dimensional structure of the ATPase fragment of a 70kDa heat-shock cognate protein // Nature. 1990. - Vol. 346. - P. 623-628.

54. Fujita J. Cold shock response in mammalian cells // J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 1999. - Vol. 1, N. 2. - P. 243-255.

55. Furlini G., Vignoli M., Re M.C. et al. Human immunodeficiency virus type 1 interaction with the membrane of CD4+ cells induces the synthesis and nuclear translocation of 70K heat shock protein // J. Gen. Virol. 1994. -Vol. 75.-P. 193.

56. Garrido C., Gurbuxani S., Ravagnan L. et al. Heat shock proteins: Endogenous modulators of Apoptotic Cell Death // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. - Vol. 286 (3). - P. 433-442.

57. Garry R.F., Ulug E.T., Bose H.R. Jr. Induction of stress proteins in Sindbis virus- and vescicular stomatitis virus-infected cells // Virology. 1983. - Vol. 129.-P. 319.

58. Gibbons N.B., Watson R.W., Coffey R.N. et al. Heat-shock proteins inhibit induction of prostate cancer cell apoptosis // Prostate. 2000. - Vol. 45, N. 1. -P. 58-65.

59. Grenert J.P., Sullivan W.P., Fadden P. et al. The amino-terminal domain of heat shock protein 90 (hsp90) that binds geldanamycin is an ATP/ADP switch domain that regulates hsp90 conformation // J. Biol. Chem. 1997. - Vol. 272.-P. 23843-23850.

60. Hall T.J. Role of hsp70 in cytokine production // Experientia. 1994. - Vol. 50 (11-12).-P. 1048-1053.

61. Harada M., Kimura G., Nomoto K. Heat shock proteins and the antitumor T cell response // Biotherapy. 1998. - Vol. 10, N. 3. - P. 229-235.

62. Hettinga J.V., Lemstra W., Meijer C. et al. Heat-shock protein expression in cisplatin-sensitive and -resistant human tumor cells // Int. J. Cancer. 1996. -Vol. 67, N. 6.-P. 800-807.

63. Hightower L.E., Sadis S.E., Takenaka I.M. Interactions of vertebrate hsc70 and hsp70 with unfolded proteins and peptides / The Biology of Heat Shock Proteins and Molecular Chaperones. 1994, Plainview. - P. 179-207.

64. Hilf N., Singh-Jasuja H., Schild H. The heat shock protein Gp96 links innate and specific immunity // Int. J. Hyperthermia. 2002. - Vol. 18, N. 6. - P. 521-533.

65. Hoos A., Levey D.L. Vaccination with heat shock protein-peptide complexes: from basic science to clinical applications // Expert Rev. Vaccines. 2003. - Vol. 2 (3). - P. 369-379.

66. Ishii T. Isolation of MHC class I-restricted tumor antigen peptide and its precursors associated with heat shock proteins hsp70, hsp90 and hsp96 // J. of Immunology.-1999.-Vol. 162, №3.-C. 1303-1309.

67. Janetzki S., Palla D., Rosenhauer V. et al. Immunization of cancer patients with autologous cancer-derived heat shock protein gp96 preparations: a pilot study // Int. J. Cancer. 2000. - Vol. 88. - P. 232-238.

68. Janeway С.A., Medzhitov R. Innate immune recognition // Annu Rev. Immunol. 2002. - Vol. 20. - P. 197-216.

69. Kiang J.G., Tsokos G.C. Heat shock protein 70 kDa: Molecular biology, biochemistry and physiology // Pharmacol. Ther. 1998. - Vol. 80, N. 2. - P. 183-201.

70. Kim D., Kim S.H., Li G.C. Proteasome inhibitors MG132 and lactacystin hyperphosphorylate HSF1 and induce hsp70 and hsp27 expression // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999. - Vol. 254. - P. 264-268.

71. Kim D., Li G.C. Proteasome inhibitors lactacystin and MG132 inhibit the dephosphorylation of HSF1 after heat shock and suppress thermal induction of heat shock gene expression // Biochem. Biophys. Res. 1999. - Vol. 264. -P. 352-358.

72. Koch G., Smith M., Macer D. Et al. Endoplasmic reticulum contains a common, abundant calcium-binding glycoprotein, endoplasmin // J. Cell. Sci. 1986. - Vol. 86. - P. 217-232.

73. Kopnin B.P. Targets of oncogenes and tumor suppressors: key for understanding basic mechanisms of carcinogenesis // Biochemistry (Mosc). -2000.-Vol. 65 (l).-P. 2-27.

74. Kroeger P.E., Sarge K.D., Morimoto R.I. Mouse heat shock transcription factors 1 and 2 prefer a trimeric binding site but interact differently with the HSP70 heat shock element // Mol. Cell. Biol. 1993. - Vol. 13. - P. 33703383.

75. Kuznetsov G., Chen L.B., Nigam S.K. Multiple molecular chaperones complex with misfolded large oligomeric glycoproteins in the endoplasmic reticulum // J. Biol. Chem. 1997. - Vol. 272. - P. 3057-3063.

76. La Thangue N.B., Shriver K., Dawson C. et al. Herpes simplex virus infection causes the accumulation of a heat shock protein // EMBO J. 1984. -Vol. 3.-P. 267.

77. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. 1970. - Vol. 227. - P. 680-685.

78. Lee A.S., Bell J., Ting J. Biochemical characterization of the 94- and 78-kilodalton glucose-regulated proteins in hamster fibroblasts // J. Biol. Chem. -1984. Vol. 259. - P. 4616-4621.

79. Lee H.-J., Lee Y.-J., Kwon H.-C. et al. Radioprotective effect of heat shock protein 25 on submandibular glands of rats // Am. J. of Pathol. 2006. - Vol. 169,N. 5.-P. 1601-1611.

80. Leung S.-M., Hightower L.E. Mammalian Hsc70 and Hsp70 proteins / Guidebook to Molecular Chaperones and Protein Folding Catalysts. 1997, Oxford.-P. 52-58.

81. Li G.C., Yang S.-H., Kim D. et al. Suppression of heat-induced hsp 70 expression by the 70-kDa subunit of the human Ku autoantigen // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. - Vol. 92. - P. 4512-4516.

82. Li W.X., Chen C.H., Ling C.C. et al. Apoptosis in heat-induced cell killing: the protective role of hsp-70 and the sensitization effect of the c-myc gene // Radiat. Res. 1996. - Vol. 145, N. 3. - P. 324-330.

83. Liu F.F., Miller N., Levin W. et al. The potential role of HSP70 as an indicator of response to radiation and hyperthermia treatments for recurrent breast cancer // Int. J. Hyperthermia. 1996. - Vol. 12, N. 2. - P. 197-208.

84. Lynch D.H., Andreasen A., Maraskovsky E. et al. Flt3 ligand induces tumor regression and antitumor immune responses in vivo // Nat. Med. 1997. -Vol. 3.-P. 625-631.

85. Mackey M.F., Gunn J.R., Maliszewsky C. et al. Dendritic cells require maturation via CD40 to generate protective antitumor immunity // J. Immunol. 1998. - Vol. 161. - P. 2094-2098.

86. Melcher A., Todryk S., Hardwick N. et al. Tumor immunogenicity is determined by the mechanism of cell death via induction of heat shock protein expression//Nat. Med. 1998. - Vol. 4 (5). - P. 581-587.

87. Melnick J., Aviel S., Argon Y. The endoplasmic reticulum stress protein GRP94, in addition to BiP, associates with unassembled immunoglobulin chains // J. Biol. Chern. 1992. - Vol. 267. - P. 21303-21306.

88. Meng S.-D., Song J., Rao Z. et al. Three-step purification of gp96 from human liver tumor tissues suitable for isolation of gp96-bound peptides // Journal of Immunological Methods.-2002.-Vol. 264.-C. 29-35.

89. Menoret A., Bell G. Purification of multiple heat shock proteins from a single tumor sample // Journal of Immunological Methods.-2000.-Vol. 237.-C.l 19-130.

90. Morales A., Eidinger D., Bruce A.W., Intracavitary Bacillus Calmette-Guerin in the treatment of superficial bladder tumors // J. Urol. 1976. - Vol. 116.-P. 180-183.

91. Morshauser R.C., Wang H., Flynn G.C. et al. The peptide-binding domain of the chaperone protein hsc70 has an unusual secondary structure topology // Biochemistry. 1995. - Vol. 34. - P. 6261-6266.

92. Morton D.L., Barth A. Local therapy with biologic agents. In: DeVita V.T. Jr, Hellman S., Rosenberg S.A., editors. Biologic therapy of cancer. 2nd ed. Philadelphia: Lippincott. 1995. - P. 691-704.

93. Mossman T. Rapid colorimetric, assay for cellular growth and cytotoxity assays // J. Immunol. Meth. 1983! - Vol. 65. - C. 55-63.

94. Nabel E.G., Plautz G., Nabel G.J. Site-specific gene expression in vivo by direct gene transfer into the arterial wall // Science. 1990. - Vol. 249. - P. 1285-1288.

95. Nicchitta C.V. Re-evaluating the role of heat-shock protein-peptide interactions in tumor immunity // Nat. Rev. Immunol. 2003. - Vol. 3. - P. 427-432.

96. Noessner E., Gastpar R., Milani V. et al. Tumor-derived heat shock proteins 70 peptide complexes are cross-presented by human dendritic cells // J. of Immunology.-2002.-Vol. 169, №10.-C. 5424-5432.

97. Nylandsted J., Rohde M., Brand K. et al. Selective depletion of heat shock protein 70 (Hsp70) activates a tumor-specific death program that is independent of caspases and bypasses Bcl-2 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2000. Vol. 97. - P. 7871-7876.

98. Panaretou В., Prodromou C., Roe S.M. et al. ATP binding and hydrolysis are essential to the function of the Hsp90 molecular chaperone in vivo // EMBO J. 1998. - Vol. 17. - P. 4829-4836.

99. Pearl L.H., Prodromou C. Structure and in vivo function of Hsp90 // Curr. Opin. Struct. Biol.-2000.-Vol. 10, N. l.-P. 46-51.

100. Peng P., Menoret A., Srivastava P.K. Purification of immunogenic heat shock protein 70-peptide complexes by ADP-affinity chromatography // J. of Immunol. Methods. 1997.-Vol. 204.-C. 13-21.

101. Poola I., Lucas J.J. Purification and characterization of an estrogen-inducible membrane glycoprotein. Evidence that it is a transferring receptor // J. Biol. Chem. 1988. - Vol. 263. - P. 19137-19146.

102. Price B.D., Calderwood S.K. Ca is essential for multistep activation of the heat shock factor in permeabilized cells // Mol. Cell. Biol. 1991. - Vol. 11. -P. 3365-3368.

103. Prodromou C., Roe S.M., O'Brien R. et al. Identification and structural characterization of the ATP/ADP binding site in the Hsp90 molecular chaperone // Cell. 1997. - Vol. 90. - P. 65-75.

104. Prohaszka Z., Fust G. Immunological aspects of heat shock proteins the optimum stress of life // Mol. Immunol. - 2004. - Vol. 41 (1). - P. 29-44.

105. Prohaszka Z., Singh M., Nagy K. et al. Heat shock protein 70 is a potent activator of the human complement system // Cell Stress & Chaperones. — 2002.-Vol. 7, N. 1. P. 17-22.

106. Pulendran В., Banchereau J., Burkeholder S. et al. Flt3 ligand and granulocyte colony-stimulating factor mobilize distinct human dendritic cell subsets in vivo // J. Immunol. 2000. - Vol. 165. - P. 566-572.

107. Pulendran В., Smith J.L., Jenkins M. et al. Prevention of peripheral tolerance by a dendritic cell growth factor: flt3 ligand as an adjuvant // J. Exp. Med. 1998. - Vol. 188. - P. 2075-2082.

108. Qu D., Mazzarella R.A., Green M. Analysis of the structure and synthesis of GRP94, an abundant stress protein of the endoplasmic reticulum // DNA Cell. Biol. 1994.-Vol. 13.-P. 117-124.

109. Ritossa F. A new puffing pattern induced by temperature shock and DNP in Drosophila//Experientia. 1962. -Vol. 18.-P. 571-573.

110. Robert J. Evolution of heat shock protein and immunity // Developmental and Comparative Immunology. 2003. - Vol. 27. - P. 449-464.

111. Samali A., Cotter T.G. Heat shock proteins increase resistance to apoptosis //Exp. Cell Res.- 1996.-Vol. 223, N. l.-P. 163-170.

112. Sato K., Torimoto Y., Tamura Y. et al. Immunotherapy using heat shock protein preparations of leukemia cells after syngeneic bone marrow transplantation in mice // Immunobiology.-2001.-Vol. 98 (6).-C. 1852-1857.

113. Schlesinger M.J. Heat shock proteins // J. Biol. Chem. 1990. - Vol. 265. -P.12111-12114.

114. Schlesinger MJ. How the cell copes with stress and the function of heat shock proteins // Pediatr. Res. 1994. - Vol. 36. - P. 1-6.

115. Soti C., Racz A., Csermely P. A nucleotide-dependent molecular switch controls ATP binding at the C-terminal domain of Hsp90. N-terminal nucleotide binding unmasks a C-terminal binding pocket // J. Biol. Chem. -2002. Vol. 277. - P. 7066-7075.

116. Soti C., Sreedhar A.S., Csermely P. Apoptosis, necrosis and cellular senescence: chaperone occupancy as a potential switch // Aging Cell. 2003. -Vol. 2.-P. 39-45.

117. Srivastava P.K. Heat shock proteins in immune response to cancer: the Fourth Paradigm // Experientia. 1994. - Vol. 50 (11-12). - P. 1054-1060.

118. Srivastava P.K., Menoret A., Basu S. et al. Heat shock protein come of age: primitive functions acquire new roles in an adaptive world // Immunity. -1998.-Vol. 8.-P. 657-665.

119. Srivastava P.K., Udono H. Heat shock protein-peptide complexes in cancer immunotherapy // Curr. Opin. Immunol. 1994. - Vol. 6 (5). - P. 728-732.

120. Tatu U., Helenius A. Interactions between newly synthesized glycoproteins, calnexin and a network of resident chaperones in the endoplasmic reticulum // J. Cell. Biol. 1997. - Vol. 136. - P. 555-565.

121. Teshima S., Rokutan K., Takahashi M. et al. Induction of heat shock proteins and their possible roles in macrophages during activation by macrophage colony-stimulating factor // Biochem. J. 1996. - Vol. 315. - P. 497-504.

122. Tissieres A., Mitchell H.K., Tracy U. Protein synthesis in salivary glands of Drosophila melanogaster: relation to chromosome puffs // J. Mol. Biol. -1974.-Vol. 84.-P. 389-398.

123. Todryk S.M., Gough M.J., Pockley A.G. Facets of heat shock protein 70 show immunotherapeutic potential // Immunology.-2003.-Vol.110.-C. 1-9.

124. Trautinger F., Kindas-Mugge I., Knobler R.M. et al. Stress proteins in the cellular response to ultraviolet radiation // J. Photochem. Photobiol. B. 1996. -Vol. 35 (3).-P. 141-148.

125. Tsan M.-F., Gao B. Cytokine function of heat shock proteins // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2004. - Vol. 286. - P. C739-C744.

126. Udono H., Levey D.L., Srivastava P.K. Cellular requirement for tumor-specific immunity elicited by heat shock proteins: tumor rejection antigen gp96 primes CD8+ T cells in vivo // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. -Vol. 91.-P. 3077-3081.

127. Udono H., Srivastava P.K. Heat shock protein 70-associated peptides elicit specific cancer immunity // J. Exp. Med. 1993.-Vol. 178.-P. 1391-1395.

128. Vabulas R.M., Ahmad-Nejad P., Ghose S. et al. HSP70 as endogenous stimulus of the Toll/Interleukin-1 receptor signal pathway // J. Biol. Chem.2002.-Vol. 277, N. 17.-P. 15107-15112.

129. Wallin R.P., Lundqvist A., More S.H. et al. Heat-shock proteins as activators of the innate immune system // Trends Immunol. 2002. - Vol. 23. -P. 130-135.

130. Wang X.-Y., Manjili M.H., Park J., Chen X., Repasky E., Subjeck J.R. Development of cancer vaccines using autologous and recombinant high molecular weight stress proteins // Methods. 2004. - Vol.32. - C. 13-20.

131. Wang H.H., Mao C.Y., Teng L.S. et al. Recent advances in heat shock protein-based cancer vaccines // Hepatobiliary Pancreat. Dis. Int. 2006. -Vol. 5 (l).-P. 22-27.

132. Wearsch P.A., Nicchitta C.V. Endoplasmic reticulum chaperone GRP94 subunit assembly is regulated through a defined oligomerization domain // Biochemistry. 1996.-Vol. 35.-P. 16760-16769.

133. Wei Y.Q., Zhao X., Kariya Y. et al. Inhibition of proliferation and induction of apoptosis by abrogation of heat-shock protein (HSP) 70 expression in tumor cells // Cancer Immunol. Immunother. 1995. - Vol. 40, N. 2. - P. 7378.

134. Welch W.J., Garrels J.I., Thomas G.P. et al. Biochemical characterization of the mammalian stress proteins and identification of two stress proteins as glucose- and Ca21-ionophore-regulated proteins // J. Biol. Chem. 1983. -Vol. 258.-P. 7102-7111.

135. Wolff J.A., Malone R.W., Williams P. et al. Direct gene transfer into mouse muscle in vivo // Science. 1990. - Vol. 247. - P. 1465-1468.

136. Yu Z., Theoret M.R., Touloukian C.E. et al. Poor immunogenicity of a self/tumor antigen derives from peptide-MHC-I instability and is independent of tolerance // J. Clin. Invest. 2004. - Vol. 114 (4). - P. 551-559.

137. Zou J., Guo Y., Guettouche T. et al. Repression of heat shock transcription factor HSF1 activation by HSP90 (HSP90 complex) that forms a stress-sensitive complex with HSF1 // Cell. 1998. - Vol. 94. - P. 471-480.