Роль белка теплового шока 70 КДА в активации натуральных киллеров тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Каневский, Леонид Михайлович

• Каневский, Леонид Михайлович
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Каневский, Леонид Михайлович

Список сокращений

Введение

1. Обзор литературы

1.1 Натуральные киллеры

1.1.1 Цитолитическое действие натуральных киллеров

1.1.2 Фенотипические маркеры и субпопуляции натуральных киллеров

1.1.3 Рецепторы, определяющие цитотоксическую реакцию NK-клеток

1.1.3.1 Рецепторы натуральной цитотоксичности (NCR)

1.1.3.2 Рецепторы семейства KIR

1.1.4 Пути активации натуральных киллеров

1.1.4.1 Активация NK-клеток интерлейкинами-2 и

1.1.4.2 Активация NK-клеток интерлейкином

1.1.5 Взаимодействия натуральных киллеров с дендритными клетками 27 крови и макрофагами

1.1.5.1 LPS-индуцированная активация NK-клеток

1.2 Белки теплового шока

1.2.1 Общая характеристика

1.2.2 Мембранные и внеклеточные белки теплового шока, их 33 иммунологическая роль

1.2.3 Белок Hsp70 и его иммуномодулирующие свойства

1.2.3.1 Общая характеристика

1.2.3.2 Внеклеточная и мембраноассоциированная формы Hsp

1.2.3.3 Иммуномодулирующие свойства внеклеточного Hsp

1.2.3.3.1 Рецепторы для Hsp70 на антигенпрезентирующих клетках

1.2.3.3.2 Сигнальный путь рецептора TLR4 и активация АПК

1.2.3.3.3 Взаимодействие HSP70 и LPS

1.2.3.3.4 Активация NK-клеток Hsp

2. Материалы и методы

2.1 Реагенты

2.2 Выделение мононуклеарных клеток периферической крови

2.3 Выделение NK-клеток методом магнитной сепарации

2.3.1 Магнитная сепарация мононуклеаров с негативной селекцией NK- 54 клеток

2.3.2 Выделение NK-клеток с фенотипом CD56bnght

2.4 Культивирование клеточных линий

2.5 Фенотипическое окрашивание клеток

2.6 Проточная цитофлуориметрия

2.7 Стимуляция NK-клеток и определение продукции IFN-y с помощью 57 внутриклеточного окрашивания

2.8 Оценка продукции IFN-y с помощью иммуноферментного анализа 58 (ELISA)

2.9 Оценка продукции TNF-a методом проточной цитометрии

2.10 Оценка опосредованной NK-клетками цитотоксичности

2.10.1 Колориметрический метод оценки цитотоксичности по выходу 59 лактатдегидрогеназы из клеток-мишеней

2.10.2 Оценка цитолитической активности NK-клеток с использованием 60 флуорогенного сустрата каспазы-6 методом проточной цитометрии

2.11 Пептидные фрагменты молекулы Hsp

2.12 Определение содержания LPS в препаратах Hsp

2.13 Клеточный сортинг 61 3. Результаты 63 3.1 Влияние рекомбинантного человеческого Hsp70 на продукцию 63 цитокинов NK-клетками

3.1.1 Влияние Hsp70 на продукцию IFN-y NK-клетками

3.1.1.1 Костимулирующее действие Hsp70 на продукцию IFN-y NK- 63 клетками в условиях активации IL

3.1.1.2 Влияние Hsp70 на продукцию IFN-y NK-клетками, 65 активированными IL-12, IL-15 и РМА с кальциевым ионофором А

3.1.1.3 Клетки линий NKL и NK-92 и NK-клетки, предварительно 68 активированные цитокинами, не отвечают на стимуляцию rhHsp

3.1.1.4 Различия в чувствительности субпопуляций натуральных киллеров к действию Hsp

3.1.2 Hsp70 стимулирует продукцию TNF-a NK-клетками

3.2 Hsp70 стимулирует цитотоксичность NK-клеток

3.3 Влияние Hsp70 на экспрессию поверхностных маркеров NK-клеток

3.4 Интернализация Hsp70 натуральными киллерами

3.5 Информационный анализ молекулы Hsp70. Стимуляция натуральных 76 киллеров пептидными фрагментами Hsp

3.5.1 Оценка влияния пептидных фрагментов Hsp70 на продукцию IFN-y 77 NK-клетками

3.5.2 Оценка влияния пептидных фрагментов Hsp70 на 78 цитотоксичность NK-клеток

3.6 Роль миелоидных дендритных клеток крови в опосредованной Hsp70 79 стимуляции NK-клеток

3.7 Роль LPS в активации NK-клеток

3.7.1 LPS индуцируют продукцию IFN-y

3.7.2 LPS индуцируют продукцию TNF-a

3.7.3 LPS повышают цитотоксичность NK-клеток

3.8 Выявление популяции клеток, отвечающих на стимуляцию LPS

3.9 Роль экзогенного мембраносвязанного Hsp70 в активации NK-клеток

3.9.1 Оценка влияния мембраносвязанного Hsp70 на продукцию IFN-y 86 NK-клетками

3.9.2 Оценка влияния мембраносвязанного Hsp70 на цитотоксичность, 88 опосредованную NK-клетками

4. Обсуждение

Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль белка теплового шока 70 КДА в активации натуральных киллеров»

Актуальность темы

Натуральные киллеры (NK-клетки) — это особая популяция лимфоцитов системы врожденного иммунитета, играющая важную роль в противоопухолевом и противовирусном иммунитете. NK-клетки способны оказывать прямое цитолитическое действие на опухолевые и вирус-инфицированные клетки и принимать участие в регуляции иммунного ответа. Две функционально различные субпопуляции NK-клеток, CD56dimCD16+ и CD56bnghtCD16 , могут быть активированы различными растворимыми медиаторами либо посредством прямого межклеточного контакта. В настоящее время интенсивно изучаются вещества, вызывающие активацию NK-клеток, в первую очередь для получения противовирусных и противоопухолевых средств. В то же время, выяснение механизмов активации и реализации эффекторных функций NK-клеток является актуальной фундаментальной научной проблемой.

В настоящее время предполагается, что нетипично локализованный белок теплового шока 70 кДа (Hsp70) выполняет стимулирующую роль в системе врожденного иммунитета. Уровень продукции этих белков, в норме выполняющих внутриклеточные шаперонные функции, сильно возрастает под действием различных стрессорных факторов - высокой температуры, гипоксии, низкого уровня глюкозы и многих других. При этом в организме появляются внеклеточные и ассоциированные с клеточной мембраной формы Hsp70. Описаны активирующие эффекты этого белка на макрофаги, дендритные клетки, Т-лимфоциты. В ряде работ показано, что как экспонированный на мембране, так и экзогенный Hsp70 может активировать цитотоксичность и пролиферацию натуральных киллеров, а также являться хемоаттрактантом, вызывающим положительный хемотаксис NK-клеток. В то же время, остается неясным, как влияет Hsp70 на цитокинпродуцирующую функцию NK-клеток, какая из субпопуляций NK-клеток является более чувствительной к действию Hsp70, в каких условиях реализуется действие Hsp70 на натуральные киллеры. Неясно также, какой вклад вносит в оказываемые Hsp70 эффекты способность, присущая этому белку, связывать вещества гидрофобной структуры.

Таким образом, изучение и расшифровка механизмов регуляции активности NK-клеток с участием Hsp70 представляет собой актуальную задачу медицинской иммунологии.

Цель исследования: изучение роли белка теплового шока 70 кДа в функционировании NK-клеток человека, а именно анализ влияния экзогенного и экспонированного на клеточной поверхности Hsp70, а также его пептидных фрагментов на основные эффекторные функции натуральных киллеров.

Задачи исследования:

1. Проанализировать изменение продукции цитокинов NK-клетками под действием экзогенного рекомбинантного белка Hsp70.

2. Охарактеризовать продукцию IFN-y в субпопуляциях NK-клеток CD56dimCD16+ и CD56brightCD16" в ответ на Hsp70.

3. Оценить влияние экзогенного Hsp70 на цитотоксичность и экспрессию поверхностных маркеров NK-клеток.

4. Исследовать влияние Hsp70, экспонированного на поверхности клеток-мишеней, на цитотоксичность NK-клеток и продукцию цитокинов.

5. Идентифицировать пептидные фрагменты молекулы Hsp70, способные активировать NK-клетки.

6. Изучить влияние Hsp70 на опосредованную липополисахаридами активацию NK-клеток.

Работа проведена с использованием NK-клеток, выделенных из периферической крови здоровых доноров.

Научная новизна работы

В работе показана способность Hsp70 стимулировать функциональную активность натуральных киллеров, и с помощью оригинального подхода идентифицирован пептидный фрагмент субстрат-связывающего домена Hsp70, способный усиливать продукцию цитокинов и цитолитическую функцию NK-клеток человека. Выявлены различия в действии Hsp70 на продукцию IFN-y (интерферон-у) и TNF-a (фактор некроза опухолей-а). Определена субпопуляция NK-клеток, наиболее чувствительная к активирующему действию Hsp70. Обнаружен феномен активации NK-клеток под действием бактериальных липополисахаридов (LPS). Выяснено, что Hsp70 способен ингибировать индуцированную LPS цитотоксичность и продукцию цитокинов NK-клетками. Уточнено, что LPS действуют непосредственно на NK-клетки, без участия иных клеток крови. Продемонстрировано активирующее действия мембраносвязанной формы Hsp70 на продукцию цитокинов и цитолитическую активность NK-клеток в оригинальных моделях.

Практическая значимость

К настоящему времени проблема поиска эффективных средств терапии рака и вирусных инфекционных заболеваний остаётся актуальной. В данной работе исследован эффективный способ стимуляции NK-клеток, лимфоцитов, способных оказывать противоопухолевое и противовирусное действие. Увеличение активности NK-клеток с помощью белка Hsp70 и его пептидного фрагмента может обеспечить, таким образом, основу для развития новых подходов к иммунотерапии опухолей и инфекционных болезней человека.

Одной из важных медицинских проблем является предупреждение и лечение сепсиса. В работе показано ингибирующее действие Hsp70 на вызываемую LPS индукцию секреции провоспалительных цитокинов, в частности, TNF-a, способного вызывать системную воспалительную реакцию. Результаты настоящей работы и ряд литературных данных [4-6] дают основу для разработки препаратов для предупреждения и терапии г* сепсиса на основе белка теплового шока 70.

Апробация работы

Диссертация апробирована на заседании научного коллоквиума отдела иммунологии ИБХ РАН и рекомендована к защите. Материалы диссертации доложены на летней научной школе по иммунологии им. Дж. Хамфри (г. Москва, 2005 г.), на XVI Европейском конгрессе по иммунологии (г. Париж, 2006 г.), на научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (2007 г.), на II Всемирной конференции по стрессу (г. Будапешт, 2007 г.), на конференции «Дни иммунологии в Сибири-2008» (г. Томск, 2008 г.), на научной конференции «VIII научная конференция иммунологов Урала» (г. Архангельск, 2009 г.).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 14 печатных работ.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы. Работа изложена на 109 страницах машинописного текста, раздел результатов содержит 23 рисунка и 1 таблицу. Список литературы включает 118 источников, из которых 105 иностранных.

1. Обзор литературы

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Каневский, Леонид Михайлович

Выводы

1. Экзогенный рекомбинантный белок Hsp70 оказывает костимулирующее действие на продукцию IFN-y в NK-клетках периферической крови человека, вызванную различными стимулами, и индуцирует продукцию TNF-a.

2. Установлено, что субпопуляция NK-клеток с фенотипом

CD56bright высокопродуцирующих цитокины, более чувствительна к стимулирующему действию экзогенного Hsp70 по сравнению с субпопуляцией CD56dim.

3. Экзогенный Hsp70 оказывает стимулирующее действие на цитолитическую активность и изменяет экспрессию поверхностных маркеров NK-клеток.

4. Мембраносвязанный Hsp70, экспонированный на поверхности клеток-мишеней увеличивает продукцию цитокинов и цитотоксичность NK-клеток.

5. Идентифицирован пептидный фрагмент аминокислотной последовательности субстратсвязывающего домена индуцируемого белка Hsp70, стимулирующий продукцию и цитотоксичность NK-клеток.

6. Продемонстрировано, что Hsp70 ингибирует активацию NK-клеток, индуцированную липополисахаридами.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Каневский, Леонид Михайлович, 2009 год

1. Multhoff G., Pfister К., Gehrmann M. et al. A 14-mer Hsp70 peptide stimulates natural killer cell activity. Cell Stress Chaperones, 2001, 6 (4): 337-344.

2. Gross C., Hansch D., Gastpar R., Multhoff G. Interaction of heat shock protein . 70 peptide with NK cells involves the NK receptor CD94. Biol Chem, 2003, 384:1560-1573.

3. Multhoff G. Activation of natural killer cells by heat shock protein 70. Int J Hyperthermia, 2002, 18 (6): 576-585.

4. Kustanova G.A., Murashev A.N., Karpov V.L. et al. Exogenous heat shock protein 70 mediates sepsis manifestations and decreases the mortality rate in rats. Cell Stress Chaperones, 2006, 11 (3): 276-286.

5. Yurinskaya M.M., Vinokurov M.G., Zatsepina O.G. et al. Exogenous heat shock proteins (HSP70) significantly inhibit endotoxin-induced activation of human neutrophils. Dokl Biol Sci, 2009, 426: 298-301.

6. Dokladny K, Lobb R., Wharton W. et al. LPS-induced cytokine levels are repressed by elevated expression of HSP70 in rats: possible role of NF-kappaB. Cell Stress Chaperones, 2009 Jun 24. Epub ahead of print.

7. Trinchieri G. Biology of Natural Killer Cells. Adv Immunol, 1989, 47: 187-376.

8. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. Пер. с англ. М.: Мир. 2000.

9. Kim S., Iizuka К., Aguila H.L. et al. In vivo natural killer cell activities revealed by natural killer cell-deficient mice. PNAS, 2000, 97 (6): 2731-2736.

10. Varma Т.К., Lin C.Y., Toliver-Kinsky Т.Е., Sherwood E.R. Endotoxin-induced gamma interferon production: contributing cell types and key regulatory factors. Clin Diagn Lab Immunol, 2002, 9 (3): 530-543.

11. Nguyen K.B., Biron C.A. Synergism for cytokine-mediated disease during concurrent endotoxin and viral challenges: roles for NK and T cell IFN-gamma production. J Immunol, 1999, 162 (9): 5238-5246.

12. Сепиашвили Р.И., Балмасова И.П. Физиология естественных киллеров. -М.: Медицина-Здоровье, 2005.

13. O'Connor G.M., Hart O.M. and Gardiner C.M. Putting the natural killer cells in its place. Immunology, 2005, 117: 1-10.

14. Fehniger T.A., Cooper M.A., Caliguri M.A. IL-2 and IL-15: immunotherapy for cancer. Cytokine Growth Factor Rev, 2002, 13: 169-183.

15. Cooper M.A. Fehniger T.A., Fuchs A. et al. NK cell and DC interactions. Trends Immunol, 2004, 25 (1): 47-52.

16. McVicar D.W., Burshtyn D.N. Intracellular signaling by the KIR and Ly49. Science, 2001, 75: 1-9.

17. Blery M., Olcese L., Vivier E. Early signaling via inhibitory and activating receptors. Hum Immunol, 2000, 61: 51-64.

18. Vales-Gomes M., Reyburn H., Strominger J. Interaction between the human NK receptors and their ligands. Crit Rev Immunol, 2000, 20: 223-244.

19. Lopez-Botet M., Bellon Т., Llano M. et al. Paired inhibitory and triggering NK cell receptors for HLA class I molecules. Hum Immunol, 2000, 61: 7-17.

20. Bryceson Y.T., March M.E., Ljunggren H.G., Long E.O. Synergy among receptors on resting NK cells for the activation of natural cytotoxicity and cytokine secretion. Blood, 2006, 107: 159-165.

21. Vales-Gomes M. Reyburn H., Strominger J. Molecular analyses of the interactions between human NK receptors and their HLA ligands. Hum Immunol, 2000,61:28-38.

22. Walzer Т., Dalod M., Robbins S.H. et al. Natural-killer cells and dendritic cells: "L"union fait la force". Blood, 2005, 106: 2252-2258.

23. Diefenbach A., Jensen E.R., Jamieson A.M., Raulet D.H. Rael and H60 ligands of the NKG2D receptor stimulate tumour immunity. Nature, 2001, 413 (6852): 165-71.

24. Gonzalez S., Groh V., Spies T. Immunobiology of human NKG2D and its ligands. CTMI, 2006, 298: 121-138.

25. Bahram S., Inoko H., Shiina Т., Radosavljevic M. MIC and other NKG2D ligands: from none to many. Curr Opin Immunol, 2005, 17: 505-509.

26. Nedvetzki S., Sowinski S., Eagle R.A. et al. Reciprocal regulation of human natural killer cells and macrophages associated with distinct immune synapses. Blood, 2007, 109 (9): 3776-3785.

27. Eagle R.A., Jafferji I., Barrow A.D. Beyond stressed self: evidence for NKG2D ligand expression on healthy cells. Curr Immunol Rev, 2009, 5 (1): 22-34.

28. Lee N., Llano M., Carretero M., et al. HLA-E is a major ligand for the natural killer inhibitory receptor CD94/NKG2A. PNAS, 1998, 95 (9): 5199-5204.

29. Белки иммунной системы. Под ред. В.Т. Иванова. М: Полиграфический участок ИБХ, 1997, с. 79-95.

30. Marmor M.D., Julius М. Role for lipid rafts in regulating interleukin-2 receptor signaling. Blood, 2001, 98 (5): 1489-1496.

31. Rao R., Logan В., Forrest K. et al. Lipid rafts in cytokine signaling. Cytokine Growth Factor Rev, 2004, 15: 103-110.

32. Gesbert F., Delespine-Carmagnat M., Bertoglio J. Recent advances in the understanding of IL-2 signal transduction. J Clin Immunol, 1998, 18 (5), 307-320.

33. Ortmann R., Cheng Т., Visconti R. et al. Janus kinases and signal transducers and activators of transcription: their role in cytokine signaling, development and immunoregulation. Arthritis Res, 2000, 2: 16-32.

34. Cacalano N., Johnston J. IL-2 signaling and inherited immunodeficiency. Am J Hum Genet, 1999, 65: 287-293.

35. Scott M.J., Godshall C.J., and Cheadle W.G. Jaks, STATs, cytokines and sepsis. Clin, and Diagn. Lab Immunol, 2002, 9 (6): 1153-1159.

36. Kisseleva Т., Bhattacharya S., Braunstein J., Shindler C.W. Signaling through the JAK/STAT pathway, recent advances and future challenges. Gene, 2002, 285: 1-24.

37. Bacon C.M., Petricoin III E.F., Ortaldo J.R. et al. Interleukin 12 induces tyrosine phosphorylation and activation of STAT4 in human lymphocytes. PNAS, 1995,92: 7307-7311.

38. Hodge D.L., Martines A., Julias J.G. et al. Regulation of nuclear Gamma Interferon gene expression by IL-12 and IL-2 represents a novel form of pоsttranscriptional control. Mol Cell Biol, 2002, 22 (6): 1742-1753.

39. Zhang X., Mosser D.M. Macrophage activation by endogenous danger signals. J Pathol, 2008, 214 (2): 161-178.

40. Gerosa F., Baldani-Guerra В., Nisii C. et al. Reciprocal activating interaction between natural killer cells and dendritic cells. J Exp Med, 2002, 195 (3): 327-333.

41. Sawaki J., Tsutsui H., Hayashi N. et al. Type 1 cytokine/chemokine production by mouse NK cells following activation of their TLR/MyD88-mediated pathways. Int Immunol, 2007, 19: 311-320.

42. Luque I., Reyburn H., Strominger J. Expression of the CD80 and CD86 molecules enhances cytotoxicity by human natural killer cells. Hum Immunol, 2000,61: 721-728.

43. Muzio M., Bosisio D., Polentarutti N. et al. Differential expression and regulation of Toll-like receptors (TLR) in human leukocytes: selective expression of TLR3 in dendritic cells. J Immunol, 2000, 164: 5998-6004.

44. Tu Z., Bozorgzadeh A., Pierce R.H. et al. TLR-dependent cross talk between human Kupffer cells and NK cells. J Exp Med, 2008, 205 (1): 233-244.

45. Goodier M.R., Londei M. Lipopolysaccharide stimulates the proliferation of human CD56+CD3" NK cells: a regulatory role of monocytes and IL-10. J Immunol, 2000, 165: 139-147

46. Hartl U. Molecular chaperones in protein folding. Nature, 1996, 381: 571-80.

47. Asea A., Rehli M., Kabingu E. et al. Novel signal transduction pathway utilized by extracellular HSP70. J Biol Chem, 2002, 277 (17): 15028-15034.

48. Schmitt E., Gehrmann M., Brunet M. et al. Intracellular and extracellular functions of heat shock proteins: repercussions in cancer therapy. J Leukoc Biol, 2007,81: 15-25.

49. Benjamin I.J., McMillan D.R. Stress (heat shock) proteins: molecular chaperones in cardiovascular biology and disease. Circ Res, 1998, 83 (2): 117-132.

50. Basu S., Binder J.R., Suto R. et al. Necrotic but not apoptotic cell death releases heat shock proteins, which deliver a partial maturation signal to dendritic cells and activate the NF-кВ pathway. Int. Immunol, 2000, 12 (11): 1539-1546.

51. Walsh R.C., Koukoulas I. Garnham A. et al. Exercise increases serum Hsp72 in humans. Cell Stress Chaperones, 2001, 6 (4): 386-393.

52. Fleshner M., Campisi J., Amiri L., Diamond D.M. Cat exposure induces both intra- and extracellular Hsp72: The role of adrenal hormones. Psychoneuroendocrinol, 2004, 29: 1142-1152.

53. Asea A. Heat shock proteins and Toll-like receptors. S. Bauer, G. Hartmann (eds.), Toll-like receptors and innate immunity. Handbook of Experimental Pharmacology.

54. Asea A. Initiation of the immune response by extracellular Hsp72: chaperokine activity of Hsp72. Curr Immunol Rev, 2006, 2 (3): 209-215.

55. Srivastava P. Roles of heat-shock proteins in innate and adaptive immunity. Nature reviews. Immunology, 2002, 2: 185-194.

56. Robert J. Evolution of heat shock protein and immunity. Dev Comp Immunol, 2003, 27: 449-464.

57. Tsan M.-F., Gao B. Cytokine function of heat shock proteins. Am J Physiol Cell Physiol, 2004, 286: 739-744.

58. Matzinger P. Tolerance, danger and the extended family. Annu Rev Immunol, 1994, 12:991-1045.

59. Beg A.A. Endogenous ligands of Toll-like receptors: implications for regulating inflammatory and immune responces. Trends Immunol, 2002, 23 (11): 509-512.

60. Matzinger P. The danger model: a renewed sense of self. Science, 2002, 296: 301-305.

61. Zylicz M., King F.W., Wawrzynow A. Hsp70 interactions with the p53 tumour suppressor protein. EMBO J, 2001, 20 (17): 4634-4638.

62. Arnold-Schild D., Hanau D., Spehner D. et al. Receptor-mediated endocytosis of heat shock proteins by professional antigen-presenting cells. J Immunol, 1999, 162:3757-3760.

63. Basu S., Binger R.J. Ramalingam Т., Srivastava P.K. CD91 is a common receptor for heat shock proteins gp96, hsp90, hsp70 and calreticulin. Immunity, 2001, 14: 303-313.

64. Creswell P., Ackerman A.L., Giodini A. et al. Mechanisms of MHC class I-restricted antigen processing and cross-presentation. Immunol rev, 2005, 207: 145157.

65. Rock K.L., Shen L. Cross-presentation: underlying mechanisms and role in immune surveillance. Immunol rev, 2005, 207: 166-183.

66. Brode S., Macary P.A. Cross-presentation: dendritic cells and macrophages bite off more than they can chew! Immunology, 2004, 112: 345-351.

67. Wakehama D.E., Ybe J.A., Brodsky F.M., Hwang P.K. Molecular structures of proteins involved in vesicle coat formation. Traffic, 2000, 1: 393-398.

68. Маргулис Б.А., Гужова И.В. Двойная роль шаперонов в ответе клетки и всего организма на стресс. Цитология, 2009, 51: 219-227.

69. Becker Т., Hartl F.U., Wieland F. CD40, an extracellular receptor for binding and uptake of Hsp70-peptide complexes. J Cell Biol, 2002, 158 (7): 1277-1285.

70. Johnson J.D. and Fleshner M. Releasing signals, secretory pathways, and immune function of endogenous extracellular heat shock protein 72. J Leukoc Biol, 2006, 79: 425-434.

71. Broadley S.A., Hartl F.U. The role of molecular chaperones in human misfolding diseases. FEBS Lett, 2009, 583: 2647-2653.

72. Евдонин А.Л., Медведева Н.Д. Внеклеточный белок теплового шока 70 и его функции. Цитология, 2009, 51 (2): 130-136.

73. Osterloh A., Breloer М. Heat shock proteins: linking danger and protein recognition. Med Microbiol Immunol, 2008, 197: 1-8.

74. Campisi J., Leem Т.Н., Fleshner M. Stress-induced extracellular Hsp72 is a functionally significant danger signal to the immune system. Cell Stress Chaperones, 2003, 8 (3): 272-286.

75. Thery C., Regnault A., Garin J. et al. Molecular characterization of dendritic cell-derived exosomes: selective accumulation of the heat shock protein hsc73. J Cell Biol, 1999, 147 (3): 599-610.

76. Mambula S.S., Stevenson M.A., Ogawa K., Calderwood S.K. Mechanisms of Hsp70 secretion: crossing membranes without a leader. Methods, 2007, 43: 168175.

77. Mambula S.S., Calderwood S.K. Heat shock protein 70 is secreted from tumor cells by a nonclassical pathway involving lysosomal endosomes. J Immunol, 2006, 177: 7849-7857.

78. Khashayar Farsad. Exosomes: novel organelles implicated in immunomodulation and apoptosis. Yale J Biol Med, 2002, 75: 95-101.

79. Alder G.M., Austen B.M., Bashford C.L. et al. Heat shock proteins induce pores in membranes. Biosci Rep, 1990, 10 (6): 509-18.

80. Arispe N., Doh M., Simakova O. et al. Hsc70 and Hsp70 interact with phosphatidylserine on the surface of PC 12 cells resulting in a decrease of viability. FASEBJ., 2004, 18: 1636-1645.

81. Vega V.L., Rodrigues-Silva M., Frey T. et al. Hsp70 translocates into the plasma membrane after stress and is released into the extracellular environment in a membrane-associated form that activates macrophages. J Immunol, 2008, 180: 4299-4307.

82. Casey D.G., Lysaght J., James T. et al. Heat shock protein derived from a non-autologous tumour can be used as an anti-tumour vaccine. Immunology, 2003, 110: 105-111.

83. Goldstein M.G., Li Z. Heat-shock proteins in infection-mediated inflammation-induced tumorigenesis. J Hematol Oncol, 2009, 2: 5.

84. Valentinas В., Capobianco A., Esposito F. et al. Human recombinant heat shock protein 70 affects the maturation pathways of dendritic cells in vitro and has an in vivo adjuvant activity. J Leukoc Biol, 2008, 84: 199-206.

85. Asea A. Chaperokine-induced signal transduction pathways. Exerc Immunol Rev, 2003, 9: 25-33.

86. Medzhitov R., Preston-Hurlburt P., Janeway C.A. A human homologue of the Drosophila Toll protein signals activation of adaptive immunity, Nature, 1997, 388: 394-397.

87. Palsson-Mcdermott E.M., O'Neill L.A. Signal transduction by the lipopolysaccharide receptor, Toll-like receptor-4. Immunology, 2004, 113: 153162.

88. Takeda K., Akira S. Roles of Toll-like receptors in innare immune responces. Genes Cells. 2001, 6: 733-742.

89. Raetz C.R., Whitfield C. Lipopolysaccharide endotoxins. Annu Rev Biochem, 2002, 71: 635-700.

90. Ferwerda В., McCall M.B., Verheijen K. et al. Functional consequences of Toll-like receptor 4 polymorphisms. Mol Med, 2008, 14 (5-6): 346-352.

91. Janeway C.A. How the immune system works to protect the host from infection: a personal view. PNAS, 2001, 98 (13): 7461-7468.

92. Bangen J.M. Schade F.U., Flohe S.B. Diverse regulatory activity of human heat shock proteins 60 and 70 on endotoxin-induced inflammation. Biochem and Biophys Res Commun, 2007, 359 (3): 709-715

93. Bausinger H., Lipsker D., Ziylan U. et al. Endotoxin-free heat-shock protein 70 fails to induce APC activation. Eur J Immunol, 2002, 32 (12): 3708-3713.

94. Triantafilou K., Triantafilou M., Ladha S. et al. Fluorescence recovery after photobleaching reveals that LPS rapidly transfers from CD 14 to hsp70 and hsp90 on the cell membrane. J Cell Sci, 2001, 114 (13): 2535-2545.

95. Wallin R.P., Lundqvist A., More S.H. et al. Heat-shock proteins as activators of the innate immune system. Trends Immunol, 2002, 23 (3): 130-135.

96. Chen H., Wu Y., Zhang Y. et al. Hsp70 inhibits lipopolysaccharide-induced NF-kB activation by interacting with TRAF6 and inhibiting its ubiquitinilation. FEBS Lett, 2006, 580: 3145-3152.

97. Davies E.L., Bacelar M.M., Marshall M.J. et al. Heat shock proteins form part of a danger cascade in response to lipopolysaccharide and GroEL. Clin Exp Immunol, 2006, 145: 183-189.

98. Aneja R., Odoms K., Dunsmore K. et al. Extracellular heat shock protein-70 induces endotoxin tolerance in THP-1 cells. J Immunol, 2006, 177: 7184-7192.

99. Multhoff G., Mizzen L., Winchester C.C et al. Heat shock protein 70 (Hsp70) stimulates proliferation and cytolytic activity of natural killer cells. Exp Hematol, 1999, 27: 1627-1636.

100. Лимфоциты. Методы. Под ред. Дж. Клауса. Пер. с англ. М.: Мир, 1990.

101. Nekrasov А. N. Entropy of protein sequences: an integral approach. J Biomol Struct Dyn, 2002, 20: 87-92.

102. Nekrasov A. N. Analysis of the information structure of protein sequences: a new method for analyzing the domain organization of proteins. J Biomol Struct Dyn, 2004,21: 615-623.

103. Robertson M.J., Cochran K.J., Cameron C. Characterization of a cell line, NKL, derived from an aggressive human natural killer cell leukemia. Exp Hematol, 1996, 24 (3): 406-415.

104. Gong J.H., Maki G., Klingemann H.G. Characterization of a human cell line (NK-92) with phenotypical and functional characteristics of activated natural killer cells. Leukemia, 1994: 8 (4): 652-658.

105. Guzhova I.V., Amholdt A.C.V., Darieva Z.A. et al. Effects of exogenous stress protein 70 on the functional properties of human promonocytes through binding to cell surface and internalization. Cell Stress Chaperones, 1998, 3 (1): 6777.

106. Alekseeva L., Nekrasov A., Marchenko A. et al. Cryptic B-cell epitope identification through informational analysis of protein sequenses. Vaccine, 2007, 25: 2688-2697.

107. Nekrasov A.N., Radchenko V.V., Shuvaeva T.M. et al. The novel approach to the protein design: active truncated forms of human 1-CYS peroxiredoxin. J Biomol Struct Dyn. 2007, 24 (5): 455-462.

108. Takai Y., Kaibuchi K., Tsuda Т., Hoshijima M. Role of protein kinase С in transmembrane signaling. J Cell Biochem, 1985, 29(2): 143-55.

109. Radons J., Multhoff G. Immunostimulatory functions of membrane-bound and exported heat shock protein 70. Exerc Immunol Rev, 2005, 11: 17-33.

110. Gross C., Schmidt-Wolf I.G., Nagaraj S. Heat shock protein 70-reactivity is associated with increased cell surface density of CD94/CD56 on primary natural killer cells. Cell Stress Chaperones, 2003, 8 (4): 348-360.

111. Wang Y., Kelly C.G., Singh M. et al. Stimulation of Thl-polarizing cytokines, C-C chemokines, maturation of dendritic cells, and adjuvant function by the peptide binding fragment of heat shock protein 70. J Immunol, 2002, 169: 2422-2429.

112. Wang Y., Whittall Т., McGowan E. et al. Identification of stimulating and inhibitory epitopes within the heat shock protein 70 molecule that modulate cytokine production and maturation of dendritic cells. J Immunol, 2005, 174: 3306-3316.

113. Qiao Y., Liu В., Li Z. Activation of NK cells by extracellular heat shock protein 70 through induction of NKG2D ligands on dendritic cells. Cancer Immun, 2008, 8: 12.

114. Eisner L., Fliigge P.F., Lozano J. et al. The endogenous danger signals HSP70 and MICA cooperate in the activation of cytotoxic effector functions of NK cells. J Cell Mol Med, 2009, Feb 4 Epub ahead of print.

115. Erbse A., Mayer M.P., Bukau B. Mechanism of substrate recognition by Hsp70 chaperones. Biochem Soc Trans, 2004, 32 (4): 617-621.

116. Donawho С., Kripke M.L. Immunogenicity and cross-reactivity of syngeneic murine melanomas. Cancer Commun, 1990; 2 (3): 101-107.

117. Croll A.D., Siggins K.W., Morris A.G., Pither J.M. The induction of IFN-gamma production and mRNAs of interleukin 2 and IFN-gamma by phorbol esters and calcium ionophore. Biochem Biophys Res Commun, 1987, 146 (3): 927-33.