Морфофункциональные особенности культивируемых эндотелиальных клеток и мезенхимальных стволовых клеток человека в условиях измененной силы тяжести тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.32, кандидат биологических наук Мерзликина, Наталья Викторовна

• Мерзликина, Наталья Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Мерзликина, Наталья Викторовна

f Список использованных сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Влияние микрогравитации на культивируемые клетки

1.2. Влияние клиностатирования на культивируемые клетки

1.3. Морфофункциональные характеристики эндотелия

1.4. Морфофункциональные характеристики мезенхимальных стволовых клеток человека

1.5. Цитоскелет, структура и функции. Изменения цитоскелета в условиях измененной силы тяжести

1.6. Цитокины и их функция в организме 50 ' V 1.7. Молекулы клеточной адгезии

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Культуры клеток

1.1. Химические реактивы, культуральные среды и пластик

1.2. Приготовление сыворотки пуповинной крови

1.3. Выделение и культивирование эндотелиальных клеток пупочной вены человека

1.4. Культивирование мезенхимальных стволовых клеток костного мозга человека

1.5. Криоконсервация мезенхимальных стволовых клеток человека

2. Исследование свойств клеточных культур в условиях измененного вектора гравитации

2.1. Моделирование гипогравитации

2.2. Анализ пролиферативной активности эндотелиальных и мезенхимальных стволовых клеток человека

2.3. Выявление актиновых филаментов методом флуоресцентной микроскопии

2.4. Определение количественного содержания цитокинов в культуральной среде мезенхимальных стволовых клеток и эндотелиальных клеток человека

2.5. Исследование экспрессии молекул клеточной адгезии

2.6. Проточная цитофлуориметрия

2.6.1. Фенотипирование МСК костного мозга человека

2.6.2. Оценка жизнеспособности клеток после криоконсервации

2.7. Статистический анализ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ г* I

1. Исследование влияния клиностатирования на культуру эндотелиальных клеток пупочной вены человека

1.1. Характеристика эндотелиальных клеток пупочной вены человека

1.2. Пролиферативная активность эндотелиальных клеток пупочной вены человека при клиностатировании

1.3 Ремоделирование актиновых филаментов культивируемых эндотелиальных клеток человека в условиях клиностатирования

1.4. Определение количественного содержания цитокинов

Ja в культуральной среде ЭК человека

1.5. Исследование экспрессии молекул клеточной адгезии при клиностатировании

2. Мезенхимальные стволовые клетки костного мозга человека в условиях клиностатирования

2.1. Культивирование мезенхимальных стволовых клеток костного мозга человека

2.2. Оценка жизнеспособности МСК человека после криоконсервации

2.3. Анализ пролиферативной активности мезенхимальных стволовых клеток человека при клиностатировании

2.4. Ремоделирование актиновых филаментов мезенхимальных стволовых клеток человека в условиях клиностатирования

2.5. Определение количественного содержания цитокинов в культуральной среде МСК человека

2.6. Иммунофенотипирование МСК после клиностатирования 128 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 134 ВЫВОДЫ 141 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВСК - взрослые стволовые клетки

ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота

ИЛ — интерлейкин

ИФН—интерферон

МКА — молекулы клеточной адгезии

МСК — мезенхимальные стволовые клетки

СК - стволовые клетки

ФБД — фосфатный буфер Дюльбекко

ФБД-БСА — бычий сывороточный альбумин, приготовленный на фосфатном буфере Дульбекко

ФНО-а - фактор некроза опухолей - альфа ФИТЦ - флуоресцеина изотиоционат цАМФ - циклический аденозин-монофосфат ЭК — эндотелиальные клетки ЭСК - эмбриональные стволовые клетки a-SMA - alfa-smooth muscle actin - альфа-актин гладкомышечных клеток BFGF - base fibroblast growth factor -основной фактор роста фибробластов EGF — epidermal growth factor — фактор роста эпидермальных клеток EF-2 - elongation factor-2 - фактор элонгации

1САМ - intercellular adhesion molecule — молекула межклеточной адгезии IgM — иммуноглобулин М IgG — иммуноглобулин G

GM-CSF - granulocyte-macrophage colony stimulating factor - гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор LPS - липополисахарид МНС

PDGF - platelet-derived growth factor — тромбоцитарный фактор роста TGF-p - transforming growth factor- beta - трансформирующий фактор роста- р VEGF - vascular endothelial growth factor — фактор роста сосудистого эндотелия VCAM-1 - vascular cell adhesion molecule — молекула адгезии сосудистых клеток VPF - vascular permeability factor — фактор сосудистой проницаемости

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Морфофункциональные особенности культивируемых эндотелиальных клеток и мезенхимальных стволовых клеток человека в условиях измененной силы тяжести»

Гравитация является фундаментальной основой, определяющей нормальное функционирование и морфологию организмов на протяжении всего существования органического мира. Развитие жизни на Земле происходило в условиях постоянного гравитационного поля, и как следствие, структура и функции органов, тканей и всего организма в течение длительной эволюции многих поколений приспосабливались к этим условиям.

Одним из основных факторов космического полета, изменяющим привычное существование человека, является невесомость. В настоящее время существует большое количество данных, демонстрирующих влияние измененной силы тяжести на состояние физиологических систем живых организмов [Газенко, 1984; Григорьев, Егоров, 1997; Kozlovskaya et al, 1981; Oganov et al, 2000]. Исследования, проведенные в условиях космического полета и в модельных экспериментах, свидетельствуют, что вряд ли найдется система, неизменно функционирующая в условиях гипогравитации и невесомости. И хотя клеточные механизмы наблюдаемых изменений до настоящего времени остаются не до конца ясными, совершенно очевидно, что на один из основных вопросов гравитационной биологии - о возможности влияния измененной силы тяжести на клетку, однозначно можно ответить положительно. Большое число экспериментальных данных, выполненных на разных типах клеток в условиях космического полета и моделируемой гипогравитации, неоспоримо свидетельствуют, что клетка является структурой, чувствительной к гравитационному стимулу и отвечает на него изменением структуры и функциональной активности [Таирбеков, 2002; Gmimder, Cogoli, 1988; Cogoli et al, 1989; Cogoli, Gmimder, 1991; Buravkova, Romanov, 2000].

Одним из наиболее перспективных направлений исследований в космической биологии и медицине должно стать изучение клеточных механизмов, определяющих изменения, происходящие в живом организме в условиях измененной силы тяжести, и определение компонентов, обуславливающих взаимосвязь клеточного и iv^ организменного уровня организации живой системы. Накопленный к настоящему времени экспериментальный материал о структурно-функциональной организации и морфологических характеристиках различных типов клеток в условиях измененной силы тяжести дает основание выдвинуть ряд предположений о путях и способах адаптации живых систем к условиям гипогравитации на клеточном уровне [Романов, Буравкова, 2000; Таирбеков, 2002; Cogoli et al, 1990; Lewis, 1999; Lewis, 2002]. Тем не менее, вопрос о механизмах влияния гравитационного фактора на функционирование организма человека на уровне клеточной организации крайне сложен и до сих пор остается открытым. Несомненно, что его решение важно как для формирования представлений о процессах, лежащих в основе перестроек живых организмов в условиях микрогравитации, и в первую очередь, человека, так и для использования результатов исследований в практике космической биологии и медицины с целью совершенствования систем жизнеобеспечения и разработки космических биотехнологий.

Актуальность исследования. Исследования, проведенные с использованием различных клеточных моделей в условиях реальной и моделируемой микрогравитации выявили разнообразные морфофункциональные изменения культивируемых клеток [Cogoli, Tschopp, 1984; Genty, 1993, Hammond et al, 2000;

Papaseit et al, 2000]. При этом различия в выявленных эффектах могут быть объяснены Г f как различной гравичувствительностью клеток, так и методами моделирования и исследуемыми параметрами. Концепция о гравитационной индифферентности клеток, выдвинутая в 1970ых - 1980ых годах прошлого столетия [Парфенов, 1981; Таирбеков,

Парфенов, 1981], в настоящее время существенно скорректирована [Cogoli, 1996; Schmitt et al, 1996; Lewis et al, 1998; Hughes-Fulford, 2001; Романов, Буравкова, 2000; Таирбеков, 2002].

Несмотря на широкий спектр используемых в гравитационной биологии клеточных культур, чувствительность эндотелиальных клеток к гравитационному стимулу не изучалась, хотя результаты фундаментальных исследований говорят о непосредственном участии клеточных элементов сосудистой стенки в формировании ответа организма на микрогравитацию [Convertino et al, 1997]. Например, в экспериментах с моделированием измененной силы тяжести была выявлена реорганизация структуры сосудов крыс [Мао et al, 1998]. В основе регистрируемых эффектов микрогравитации, таких как снижение объема циркулирующей крови, нарушение регуляции сосудистого тонуса, ортостатическая неустойчивость, могут лежать изменения реактивности сосудов и модификация составных компонентов сосудистой стенки, в том числе, и эндотелия [Zhang, 2001].

К тому же известно, что именно эндотелий, обладая механочувствительностью, регулирует сосудистый тонус через взаимодействие с гладкомышечными клетками [Ткачук, 1998; Tkachuk, Voyno-Yasenetskaya, 1991; Ivanov et al, 2001; Vanhoutte, Mombouli, 1996] и, следовательно, может играть важную роль в функционировании сердечно-сосудистой системы в условиях измененной гравитации. Немаловажным фактором, привлекающим внимание к исследованию свойств эндотелия, является его биологическая активность, а также участие в воспалительных и иммунных реакциях организма, регуляции кроветворения и процессов свертывания крови [Becker et al, 2000].

Снижение пролиферативной активности разных типов клеток, ингибирование митогенных сигналов в условиях микрогравитации [Rucci et al, 2002; Hughes-Fulford, Lewis, 1996], а также атрофические перестройки опорно-двигательного аппарата

Oganov et al, 1991; Шенкман, 2002], изменение способности к восстановлению и самообновлению тканей в условиях космического полета [Mitashov et al, 1996] позволяют предположить, что в основе действия механических факторов (в том числе микрогравитации) на опорно-двигательный аппарат могут лежать морфофункциональные модификации мезенхимальных стволовых клеток (МСК), точнее перестройка их функциональной активности, и способности диффреренцировки в тканевые элементы. Возможно, именно такие изменения могут приводить к нарушению процессов физиологической регенерации тканей, особенно костной и мышечной, преобразованию их клеточного, белкового и минерального состава, так как известно, что обновление тканей организма человека и их репарация в случае повреждения осуществляются при непосредственном участии низкодифференцированных клеток-предшественников, так называемых «стволовых клеток».

Основным источником стволовых клеток у взрослых организмов является костный мозг, способный генерировать как гемопоэтические, так и мезенхимальные клетки, которые могут дифференцироваться в большинство известных клеточных типов, таких как остеобласты, хондроциты, адипоциты, а также другие типы клеток. Недавно несколькими исследовательскими группами описано получение эндотелиальных клеток и их предшественников из мезенхимальных стволовых клеток костного мозга [Reyes et al, 2002; Pittenger, Martin, 2004; Oswald et al, 2004]. Это открывает широкие перспективы для использования костномозговых клеток в терапевтических целях. МСК могут являться источником эндотелиальных клеток и участвовать в ангиогенезе трансплантированных органов, ишемических тканей и восстановлении поврежденных сосудов [Kassem et al, 2004; Tateishi-Yuyama et al, 2001; Pittenger, Martin, 2004].

Таким образом, исследования свойств низкодифференцированных мезенхимальных стволовых клеток — элемента слаженной системы функционирования органов человека в условиях измененной силы тяжести становится необходимым и важным наряду с изучением другого ее значимого компонента, тесно связанным с МСК -дифференцированным сосудистым эндотелием.

Цель и задачи исследования. Целью работы являлось изучение морфофункциональных особенностей эндотелиальных клеток и мезенхимальных стволовых клеток человека в модельных условиях измененной силы тяжести in vitro. В соответствии с поставленной целью решались следующие основные задачи:

- исследование пролиферативной активности эндотелиальных клеток человека при длительном клиностатировании;

- изучение особенностей организации актинового цитоскелета ЭК человека в условиях измененного вектора гравитации; определение продукции цитокинов и экспрессии молекул адгезии эндотелиальными клетками при клиностатировании;

- отработка методов культивирования мезенхимальных стволовых клеток костного мозга человека, изучение пролиферативной активности и экспрессии маркеров МСК при длительном клиностатировании; исследование особенностей организации актинового цитоскелета мезенхимальных стволовых клеток человека в условиях измененного направления вектора гравитации;

- определение продукции цитокинов МСК при длительном изменении вектора гравитации in vitro.

Научная новизна. Получены первые доказательства высокой чувствительности культивируемых ЭК пупочной вены человека и МСК костного мозга человека к изменению гравитационного окружения. Впервые выявлено угнетение пролиферативной активности культивируемого эндотелия при длительном воздействии измененного направления вектора гравитации. Впервые установлено, что реорганизация архитектуры актиновых филаментов эндотелия начинается уже в первые часы клиностатирования, при этом ремоделирование в ответ на изменение гравитационного окружения носит обратимый характер и протекает быстрее, чем его восстановление. Выявленное увеличение концентрации «стрессового» провоспалительного цитокина ИЛ-6 (интерлейкина-6) в культуральной среде эндотелиальных клеток после кратковременного клиностатирования также указывает на их чувствительность к гравитационному стимулу.

Впервые показано снижение пролиферативной активности культивируемых МСК человека при длительном клиностатировании, которое является обратимым и восстанавливается при возвращении клеток в стандартные условия культивирования. Выявлена реорганизация структуры актинового цитоскелета как в первые часы изменяющегося вектора гравитации, так и при более длительном воздействии. Установлено повышение концентрации ИЛ-6 в культуральной среде МСК человека при кратковременном клиностатировании. Впервые показано изменение экспрессии клеточных маркеров a-SMA (a-актина гладкомышечных клеток), CD 105, HLA class I при длительном культивировании под воздействием измененного гравитационного микроокружения.

Научно-практическая значимость работы. Представленные экспериментальные данные являются важным шагом на пути к пониманию механизмов действия гравитационного сигнала на клетку. Результаты исследования способствуют расширению сложившихся представлений о клеточной биологии эндотелия и мезенхимальных стволовых клеток человека в условиях измененного гравитационного окружения. Полученные данные позволяют приблизиться к более глубокому пониманию влияния измененной гравитации на низкодифференцированные стволовые и дифференцированные эндотелиальные клетки человека. Результаты работы необходимо учитывать при анализе функциональных изменений сердечно-сосудистой системы и процессов регенерации в условиях микрогравитации.

Положения, выносимые на защиту:

1. Экспериментально доказана гравитационная чувствительность культивируемых эндотелиальных и мезенхимальных стволовых клеток человека.

2. Условия измененной силы тяжести (клиностатирование) приводят к реорганизации элементов цитоскелета (F-актин) ЭК и МСК, при этом перестройка структуры актиновых филаментов носит обратимый характер.

3. При одновременном действии клиностатирования и активации клеток провоспалительным цитокином ФНО-а модифицируется экспрессия молекул клеточной адгезии (Е-селектина, VCAM-1, ICAM-1) на поверхности ЭК, что может приводить к изменению взаимодействия «клетка - субстрат» и «клетка - клетка».

4. Различные типы культивируемых клеток человека: дифференцированные (ЭК) и низкодифференцированные (МСК) демонстрируют сходные ответные реакции, проявляющиеся в снижении пролиферативной активности, увеличении продукции ИЛ-6 и перестройке актинового цитоскелета.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на VI Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2003 г.), Конференциях молодых специалистов, аспирантов и студентов, посвященных Дню космонавтики (Москва, 2003,2004, 2005 г.), 54th International Astronautical Congress (Bremen, Germany, 2003 г.), Международном симпозиуме «Биологическая подвижность», посвященном памяти академика Г.М. Франка (Пущино, Россия, 2004), 25th International Gravitational Physiology Meeting (Moscow, 2004), Международном симпозиуме «Стволовые клетки, регенерация, клеточная терапия» (Санкт-Петербург, 2004), VII Всероссийской конференции по патологии клетки (Москва, 2005).

Диссертация апробирована на заседании секции Ученого совета ГНЦ РФ - ИМБП РАН «Космическая биология и физиология».

Заключение диссертации по теме «Авиационная, космическая и морская медицина», Мерзликина, Наталья Викторовна

выводы

1. Моделируемое изменение гравитационного окружения с помощью клиностатирования приводит к снижению пролиферации ЭК и МСК in vitro. После возвращения клеток в стандартные условия культивирования пролиферативная активность восстанавливается до нормального уровня.

2. Актиновый цитоскелет ЭК и МСК человека является структурой, восприимчивой к постоянному изменению направления вектора гравитации, и его реорганизация начинается уже в первые часы клиностатирования и завершается через 24 ч. Изменение структуры актиновых филаментов ЭК сохраняется при увеличении времени воздействия до 144 часов.

3. Ремоделирование актинового цитоскелета ЭК человека в ответ на изменение гравитационного окружения носит обратимый характер. Восстановление структуры актиновых филаментов протекает несколько медленнее, чем ее перестройка, вызываемая постоянным изменением вектора гравитации.

4. Клиностатирование неактивированных ЭК в течение 24 ч приводило к увеличению экспрессии ICAM-1. Добавление провоспалительного цитокина ФНО-а при клиностатировании не вызывало выраженного увеличения экспрессии Е-селектина и VCAM-1, но повышало выработку ICAM-1. Регистрируемые изменения экспрессии молекул клеточной адгезии свидетельствуют о нарушениях процессов межклеточного взаимодействия в условиях измененного направления вектора гравитации.

5. В условиях клиностатирования происходит увеличение продукции «стрессового» провоспалительного цитокина ИЛ-6 ЭК и МСК человека in vitro уже в первые часы воздействия, которое сохраняется в течение 24 часов клиностатирования.

6. Экспрессия клеточных маркеров CD 105 и HLA class I мезенхимальных стволовых клеток человека снижается в условиях длительного воздействия измененного вектора гравитации, а экспрессия a-SMA незначительно увеличивается, что свидетельствует об изменениях фенотипа и функциональной активности МСК. Различные типы культивируемых клеток, к которым относятся дифференцированные ЭК и низкодифференцированные МСК человека, обладают способностью воспринимать гравитационный стимул и демонстрируют сходные ответные реакции, проявляющиеся в снижении пролиферативной активности, увеличении продукции интерлейкина-6 и перестройке актинового цитоскелета.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Многочисленные исследования свидетельствуют о серьезных перестройках живых систем в условиях реальной и моделируемой микрогравитации, механизмы которых реализуются на клеточном уровне. Восприятие гравитационного стимула и формирование ответной реакции клеткой является основополагающим фактором, запускающим сложный комплекс изменений. Несмотря на растущее число публикаций о влиянии микрогравитации на морфофункциональные характеристики различных типов клеток in vitro, механизмы наблюдаемых эффектов до сих пор остаются неизвестными. В то же время, ряд наблюдаемых клеточных изменений при действии микрогравитации аналогичен в различных клеточных культурах, что заставляет предположить вовлечение общих механизмов, независимо от клеточной сигнализации. С другой стороны, вариации в выраженности регистрируемых сдвигов и изменение экспрессии специфичных генов указывает на различную чувствительность клеток к изменению гравитационного сигнала.

Исследование свойств, эндотелия, одного из главных компонентов регуляции сердечно-сосудистой системы, является важным для формирования современных представлений о процессах, происходящих в клетке в условиях измененной силы тяжести.

Значительное снижение пролиферативной активности ЭК in vitro, выявленное уже на вторые сутки клиностатирования и сохраняющееся в течение всего времени воздействия, свидетельствует о гравитационной чувствительности эндотелия, что согласуется с данными, полученными в экспериментах с другими типами клеток [Lewis et al, 1998; Hammond etal, 1999,2000; Gubano, Lewis,2000].

Следует отметить, что исследования, проводимые в космических полетах и при клиностатировании, показывают, что в условиях измененной силы тяжести часто наряду с измененем пролиферации клеток наблюдается и модификация цитоскелета [Gruener et al, 1993; Piepmeier et al, 1997; Hughes-Fulford, Gilbertson, 1999; Vassy et al, 2001]. Сходные данные были получены нами при клиностатировании ЭК человека. Результаты наших экспериментов демонстрируют, что перестройка сети актиновых филаментов культивируемого эндотелия начинается уже в первые часы воздействия и сохраняется при длительном изменении гравитационного стимула. Следует отметить, что выявленные изменения носят обратимый характер. Полученные данные свидетельствуют о том, что цитоскелет культивируемых ЭК является структурой, чувствительной к изменению гравитационного стимула. Результаты наших экспериментов дополняют информацию о механочувстительности эндотелия и механизмах ее реализации.

Интересно, что участие цитоскелета в сигнальной трансдукции и переходе клеток из стадии покоя к стадии активной пролиферации, его чувствительность к изменениям гравитации, были показаны в работе Ингбера [Ingber, 1999]. Было отмечено, что группа высокоаффинных рецепторов ростовых факторов концентрируется на комплексах фокальной адгезии, тесно связанных с актиновыми филаментами [Ingber, 1999]. Микрофиламенты, связанные с ними Rho GTPa3bi и интегрины, по данным ряда исследователей, оказывают значительное влияние на процессы клеточного цикла и клеточную пролиферацию [Boyd et al, 1995; Ingber et al, 1995; Iwig, 1995; Ridley, 1995].

Таким образом, приведенные данные позволяют предположить тесную взаимосвязь между выявленными нами реорганизацией актинового цитоскелета и снижением пролиферативной активности ЭК и выдвинуть гипотезу, что изменения актиновой сети являются одним из важных компонентов перестройки клеточной структуры, приводящей к снижению скорости пролиферации в условиях измененного вектора гравитации.

К тому же, рядом авторов показано, что дестабилизация микрофиламентов цитохалазинами приводит к ингибированию синтеза ДНК и процессов роста [Iwing, Glaesser, 1985; McPherson, Ramachanddran, 1990; Fasshauer et al, 1998], что также подтверждает важную роль актиновых фибрилл в регуляции процессов роста и пролиферации клеток.

Не менее важную роль играет реорганизация цитоскелета в реализации процессов апоптоза, что было отмечено во многих случаях его проявления [Janmey, 1998]. Все типы филаментов, в том числе и актиновые фибриллы, реорганизуются и деградируют в процессе апоптоза [Janmey, 1998]. Выявленная нами реорганизация актинового цитоскелета свидетельствует о нарушении процессов нормальной клеточной пролиферации и, вероятно, о возможности активации апоптотических реакций в клетке. На это может указывать и значительное снижение пролиферативной активности в условиях клиностатирования. Нельзя исключить также и открепление некоторых клеток от поверхности флакона в этих условиях. В пользу этой гипотезы свидетельствуют сходные изменения в структуре актинового цитоскелета, обнаруженные при клиностатировании остеобластов, которые, по мнению исследователей, являлись причиной открепления и последующего апоптоза суспензионных клеток, вызываемых изменением вектора гравитации [Sarkar et al, 2000].

Возможно, разные типы клеток обладают общими путями механочувствительности, которые определяют, будет ли механическое воздействие индуцировать или подавлять апоптоз [Graf et al, 2003]. Вероятно, различные клетки используют общий молекулярный механизм регуляции апоптотических процессов [Graf et al, 2003]. В связи с этим интересно отметить предположение ряда исследователей, что клетки, стимулированные разными способами и обладающие разными путями механотрансдукции, проводят сигнал через сходные механизмы на молекулярном уровне [Huang, 2003]. Способность механического воздействия, например, циклического растяжения или shear stress, вызывать открепление эндотелиальных клеток человека и апоптоз активацией различных каспаз была недавно показана в работе Michel [2003], что также позволяет предполагать возможность негативного влияния самых разных механических воздействий, в том числе и измененного вектора гравитации на процессы роста и гибели клеток.

Данную гипотезу поддерживает выявленная повышенная продукция цитокина ИЛ-6 эндотелиальными клетками, экспрессия которого является чувствительной к механическому, в том числе и гравитационному стрессу [Kumei et al, 1996]. Необходимо отметить тот факт, что индукция выработки ИЛ-6 под воздействием механического стимула осуществляется по сигнальному пути, включающему в себя интегрины и протеинкиназу С [Samasoto et al, 2004].

В условиях клиностатирования наблюдается изменение экспрессии МКА на поверхности культивируемого эндотелия. Сходные ответные реакции ЭК регистрировались при воздействии потока жидкости in vitro [Nagel et al., 1994; Sheikh et al., 2003]. Интересно, что МКА структурно связаны с белками актинового цитоскелета [Mimura, Asano, 1987; Gimbrone et al., 1997], участвуют в сигнальных путях клеток, в том числе, вероятно, и в каскаде различных ростовых факторов [Lampugnani, Dejana, 1997]. Выявленные изменения, а также отмеченное в литературе участие молекул клеточной адгезии в процессах механотрансдукции [Chiu et al., 2004], позволяют предположить важную роль регистрируемого эффекта в реакциях межклеточного взаимодействия ЭК, а также в проведении гравитационного стимула в клетку.

Таким образом, регистрируемые при клиностатировании снижение пролиферативной активности, перестройка структуры актинового цитоскелета, повышенная продукция ИЛ-6 и изменения экспрессии МКА ЭК человека свидетельствуют о гравитационной чувствительности данного типа клеток. Полученные данные позволяют предположить, что в сложный процесс восприятия гравитационного стимула и формирования ответной реакции вовлечены интегрины и протеинкиназа С. Участие данных компонентов механотрансдукции в перестройке цитоскелета, процессах пролиферации, регуляции формы клеток и экспрессии большого количества молекул делает их ключевыми элементами основных биохимических реакций клетки. Это позволяет выдвинуть гипотезу, что ответ клетки на изменившиеся условия существования является комплексным и в него вовлечены все клеточные процессы и функции. Показанные изменения морфофункциональных характеристик ЭК, вероятно, могут носить приспособительный характер.

Эндотелиальные клетки являются механочувствительными клетками и, следовательно, могут быть способны к восприятию гравитационного стимула, являющегося разновидностью механического воздействия. Высокая чувствительность МСК к сигналам, поступающим из их микроокружения, а также из внешней среды, позволяет также предполагать восприимчивость данного типа клеток к механическому стимулу. Недавно было показано, что механическое растяжение регулирует экспрессию маркеров гладкомышечных клеток сосудов на мезенхимальных стволовых клетках человека и коллагена I и способно индуцировать диффренцировку в гладкомышечные клетки сосудов, что служит доказательством механочувствительности данного типа клеток [Park et al, 2004]. Способность МСК воспринимать механический стимул позволяет предположить и гравитационную чувствительность клеток. Реорганизация структуры и функциональной активности МСК и ЭК человека может лежать в основе сложного комплекса негативного влияния невесомости на организм человека или его адаптации к новым условиям существования.

Выявленное значительное снижение скорости пролиферации МСК при клиностатировании позволило предположить гравитационную чувствительность данного типа клеток. Следует отметить, что уменьшение пролиферативной активности МСК и незначительное восстановление скорости пролиферации при возвращении клеток в стандартные условия культивирования указывает на функциональные изменения в клетках и может быть связано с процессами дифференцировки.

Показанное изменение структуры актинового цитоскелета в первые часы и сутки клиностатирования также свидетельствует о чувствительности МСК к изменению гравитационного стимула.

Изучение свойств низкодифференцированных клеток позволило предположить, что реорганизации клеточной структуры мезенхимальных стволовых клеток могут быть связаны с модификацией их статуса «стволовости». Данные, представленные в литературе, свидетельствуют, что изменения экспрессии интегринов, кадгеринов и цитоскелетных белков во время коммитирования стволовых клеток определяют дальнейшую морфологию и судьбу клеток [Gumbiner, 1996]. Следует также отметить, что состояние сети актиновых филаментов по-разному действует на процессы дифференцировки клеток. Так, разрушение актинового цитоскелета способствует адипогенной дифференцировке [Fernandez, Ben-Ze'ev, 1989; Spiegelman, Ginty, 1983]. Остеогенная дифференцировка требует присутствия неповрежденного, интактного цитоскелета [Pavalko et al, 1998; Toma et al, 1997]. Сходные результаты были получены с МСК человека, в которых разрушенный химическими реагентами актин усиливал адипогенез и ослаблял процессы остеогенеза [McBeath et al, 2004]. В то же время было показано, что быстрое разрушение актинового цитоскелета является важным компонентом индуцирования нейрональной дифференцировки стромальных клеток костного мозга [Neuhuber et al, 2004]. Таким образом, приведенные данные предполагают важную роль организации актинового цитоскелета в процессах коммитирования клеток.

Регистрируемая повышенная продукция ИЛ-6 мезенхимальными стволовыми клетками в первые часы клиностатирования свидетельствует о протекании стрессовых реакций и изменении функциональной активности клеток и подтверждает гравитационную чувствительность МСК.

Выявленное увеличение секреции ИЛ-6 в совокупности с показанными функциональными и структурными перестройками стромальных клеток костного мозга позволило предположить изменение экспрессии и некоторых клеточных маркеров. Было показано, что в условиях длительного клиностатирования происходит некоторое повышение выработки a-SMA, а также более выраженное снижение экспрессии CD 105 и HLA class I. Некоторые исследователи считают, что экспрессия a-SMA находится в зависимости от стадии роста культуры [Blank et al, 1990]. Данное утверждение позволяет предположить, что некоторое увеличение экспрессии a-SMA в клиностатируемых культурах может быть связано с регистрируемым снижением пролиферативной активности МСК. Кроме этого, существуют экспериментальные данные о том, что экспрессия клеточных маркеров может изменяться под воздействием механического стимула [Park et al, 2004].

Уменьшение экспрессии CD 105, HLA class I также может указывать на перестройки фенотипа культуры МСК при клиностатнровании. Снижение выработки CD 105, являющегося рецептором трансформирующего фактора роста-p, участвующего в процессах адгезии и пролиферации, может быть связано с угнетением пролиферативной активности клиностатированных культур. Обнаруженные изменения экспрессии HLA class I позволяют предположить снижение способности «узнавания» МСК клетками иммунной системы.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о гравитационной чувствительности МСК, выраженной в виде перестроек структуры и функциональной активности клеток. Реорганизация актинового цитоскелета, изменение экспрессии клеточных маркеров, снижение пролиферативной активности и повышенная продукция ИЛ-6 могут указывать на вероятную модификацию статуса мезенхимальных стволовых клеток.

Изменения морфофункциональных характеристик дифференцированных ЭК и низкодифференцированных МСК человека в условиях постоянно изменяющегося вектора гравитации демонстрируют сходный характер ответных реакций. Можно предположить, что восприятие гравитационного стимула и реакции, формируемые данными типами клеток в ответ на изменение гравитационного окружения, протекают с вовлечением аналогичных сигнальных путей. Вероятно, ключевыми регуляторами данных процессов, приводящими к перестройкам физиологических и биохимических реакций в ЭК и МСК, являются комплексы, включающие интегрины и протеинкиназу С. Выявленные преобразования, возможно, являются приспособительными и могут быть важными компонентами системы адаптации клеток к измененным условиям существования.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Мерзликина, Наталья Викторовна, 2005 год

1. Антонов А.С., Крушинский А.В., Николаева М.А., Флегель Х.Г., Репин B.C. Первичная культура эндотелиальных клеток из пупочной вены человека: идентификация и характеристик растущей и конфлуэнтной культуры // Цитология. 1981.T.XXIII. №10. С. 1154-1159.

2. Васильев Ю.М., Гельфанд И.М. Взаимодействие нормальных и неопластических клеток со средой. Москва. 1981. 128 с.

3. Васильев Ю.М. Клетка как архитектурное чудо. 1. Живые нити // Соросовский образовательный журнал. 1996. №2. С. 36 43.

4. Вермель А.Е. Стволовые клетки: общая характеристика и перспективы применения в клинической практике // Клиническая медицина. 2004. №1. С. 5 — 11.

5. Гансбурский А.Н., Павлов А.В. Сосудистый эндотелий. Руководство по гистологии. Под ред. Данилова Р.К. и Быкова В.Л. Санкт-Петербург, Специальная литература. 1998. 102 с.

6. Глазер Р.Г. Очерк основ биомеханики. Москва. Мир. 1988.128 с.

7. Турин А.В. Ингибиторы протеиназ и цитокины крови в механизмах гипертермии при стрессе. Минск. 2003. 124 с.

8. Газенко О.И. Человек в космосе // Косм, биология и авикосм. мед . 1984. Т. 18. №1. С. 3 8.

9. Григорьев А.И., Егоров А.Д. Длительные космические полеты. В кн.: Человек в космическом полете. Москва, Наука. 1997. Т. III. Кн. 2. С. 368-447.

10. Долгов В.В., Зайкина О.Э., Бондаренко М.Ф., Репин B.C. Гетерогенность эндотелия аорты и артерий человека: количественное изучение с помощью растровой электронной микроскопии // Кардиология. 1983. №8. С. 92 — 95.

11. Егоров А. М., Осипов А. П., Дзантиев Б. Б., Таврилова Е. М. Теория и практика иммуноферментного анализа. Москва. Высшая школа. 1991. 235 с.

12. Караганов Я.Л., Миронов В.А., Миронов А.А. Общая морфология сосудистого эндотелия. В кн.: Сосудистый эндотелий. Под ред. Куприянова В.В., Бородина И.И. Караганова Я.Л. Киев. Здоров'я. 1986.С. 78-121.

13. Парфенов Г.П. Репродукция и мутабельность мучного хрущика в условиях невесомости (эксперименты на орбитальной станции Салют-6) // Косм. биол. и авиакосм. мед. 1981. Т.15.№4. С. 66-70.

14. Романов Ю.А., Кабаева Н.В., Дорменева Е.В., Пронин А.Г. Индукция молекул клеточной адгезии, Е-селектина, VCAM-1 и 1САМ-1в совместной культуре эндотелиальных и гладкомышечных клеток человека // Цитология. Т.40. №12. 1998. С. 1045-1049.

15. Романов Ю.А., Кабаева Н.В., Буравкова Л.Б. Гравичувствительность эндотелия человека // Авиакосм, и эколог, мед. 2000. Т.34. №4. С. 23 — 26.

16. Романов Ю.А., Кабаева Н.В., Буравкова Л.Б. Изменения актинового цитоскелета и скорости репарации механически поврежденного эндотелия человека в условиях клиностатирования // Авиакосм, и эколог, мед. 2001. Т.35. №1. С. 37 40.

17. Таирбеков М.Г., Парфенов Г.П. Биологические исследования в космосе // Косм, биол. и авиакосм. мед. 1981. Т. 15. №2. С. 51 60.

18. Таирбеков М.Г. Гравитационная биология клетки (теория и эксперимент). Москва. 1997. 128 с.

19. Таирбеков М.Г. Молекулярные и клеточные основы гравитационной чувствительности. //Москва. 2002. 104.С.

20. Ткачук В.А. Гормональная регуляция транспорта Са2+ в клетках крови и сосудов // Российский физол. ж-л им. И.М. Сеченова. 1998. Т.84. №10. С. 1006 1018.

21. Шенкман Б.С. Структурально-метаболическая пластичность скелетных мыщц млекопитающих в гипокинезии и невесомости. // Авиакосм, и эколог, мед. 2002. Т.36. №3. С. 3 14.

22. Andus Т., Gieger Т., Hirano T. Recombinant human В cell stimulatory factor 2 (BSF-2/IFN-P2) regulates P-fibrinogen and albumin mRNA levels in Fao-9 cells // Febs. Lett. 1987.221. P. 18-22.

23. Azizi S.A., Stokes D., Augelli B.J., DiGirolamo C., Prockop D.J. Engraftment and migration of human mesenchymal stem cells implanted in the brains of albino rats — similarities to astrocyte grafts // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. 95. P. 3908 3913.

24. Baroja M.L. Ceuppens J.L. Van Damme J., Billiau A. Cooperation between an anti-T cell (anti-CD28) monoclonal antibody and monocyte-produced IL-6 in the induction of T cell responsiveness to IL-2 //J. Immunol. 1988. P. 141. P. 1502 1507.

25. Bassenge E. Endothelial function in different organs. // Prog. Cardiovasc. Dis. 1986. Vol. 39. P. 209-228.

26. Beaure d'Augeres С., Arnoult J., Bureau J. Masson C., Prestmal M., Bouteille M. Effect of microgravity on mammalian cell polarisation at the ultrastructural level // Naturwiss. 1986. 73. P.407 409.

27. Bechler В., Cogoli A., Cogoli-Greuter M., Muller O., Hunzinger E., Criswell S.B. Activation of microcarrier-attached lymphocytes in microgravity // Biotech. Bioeg.1992. 40. P. 991 -996.

28. Bechler В., Hunzinger E., Muller O., Cogoli A. Culture of Friend leukemia virus transformed cells in microgravity — Spacelab IML 1 Mission. // Biol. Cell. 1993. 79. P. 45-50.

29. Becker B.F., Heindl В., Kupatt C., Zahler S. Endothelial function and hemostasis // Z. Kardiol. 2000. Vol.89. №3. P 160 167.

30. Bennet J.E. Adipocytic cells cultured from marrow have osteogenic potential // J. Cell Sci. 1991.99. P. 131-139.

31. Berezovskaia O.P., Rodionova N.V. The effect of microgravity on osteogenic cells in culture // Tsitol. Genet. 1998. Vol.32. №4. p.3 -8.

32. Berry L., Grant M.E., McClure J. Bone-marrow-derived chondrogenesis in vitro // J.Cell Sci. 1992. 101. P.333 —342.

33. Beutler В., Tkacenko V., Milsark I. Effect of gamma interferon on cachectin expression by mononyclear phagocytes. Reversal of the lpsd (endotoxin resistance) phenotype // J. Exp. Med. 1986.164. P. 1791 1796.

34. Bianco P., Robey P. G. Marrow stromal stem cells // J.Clin. Invest. 2000.Vol. 105. №12. P. 1663- 1668.

35. Bianco P., Riminucci M., Gronthos S., Robey P. G. Bone marrow stromal stem cells: nature, biology and potential applications // Stem Cells. 2001.19. P. 180 192.

36. Buravkova L.B., Romanov Yu. A. The role of cytoskeleton in cell changes under conditions of simulated microgravity // Acta astronautica, 2001, vol.48, №5-12, P647-650.

37. Buravkova L.B., Rykova M.P., Grigorieva O.Yu., Antropova E.N. Cell interactions in microgravity: cytotoxic effects of natural killer cells in vitro // The Abstracts of 25th International Gravitational Physiologe Meeting, Moscow.2004. P. 101.

38. Caplan A.I.Osteogenesis imperfecta, rehabilitation medicine and fundamental research // Conn. Tissue Res. 1995. 31. S9 S14.

39. Caplan A.I., Bruder S.P. Mesenchymal stem cells: building blocks for molecular medicine in the 21st century // Trends in Mol. Med. 2001.Vol. 7. №6. P.259 264.

40. Castro-Malaspina H., Gay R.E., Resnick G., Kapoor N., Meyers P., Chiarieri D., McKenzie S., Broxmeyer H.E., Moore M.A. // Characterization of human bone marrow fibroblast colony forming cells (CFU-F) and their progeny // Blood. 1980.56. P.289 -301.

41. Carswell E.A., Old L.J., Kassel R.L. An endotoxin-induced serum factor that causes necroses of tumors // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1975. 72. P. 3666.

42. Carlos T.M., Harlan J.M. Leukocyte-endothelial adhesion molecules // Blood. 1994. Vol.84. №7. P. 2068-2101.

43. Carlsson S.I.M., Bertilaccio M.T.S., Ballabio E., Maier J.A.M. Endothelial stress by gravitational unloading: effects on cell growth and cytoskeletal organization // Biochimica et Biophisica Acta. 2003. 1642. P. 173 179.

44. Chang Y.S., Yaccino J.A., Lakshminarayanan S. Shear induced increase in hydraulic conductivity in endothelial cells is mediated by nitric oxide - dependent mechanism // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2000.20. P. 35 - 42.

45. Cines B.D., Pollak E.S.,Buck C.A., Loscalzo J., Konkle B.A., Schwartz B.S., Bamathan E.S., McCrae K.R., Hug B.A., Schmidt A.M., Stern D.M. Endothelial cells in pgysiology and in the pathophysiology of vacsular disorders // Blood. 1998. 91. P.3527 3561.

46. Clarke D., Frisen J. Differentiation potential of adult stem cells // Curr. Opin. in Gen. Develop. 2001.11 . P.575 580.

47. Cogle Ch.R., Guthrie S.M., Sanders R.C., Allen W.A., Scott E.W., Petersen B.E. An overview of stem sell research and regulatory issues // Mayo Clin. Proc. 2003. 78. P.993 -1003.

48. Cogoli A., Valluchi-Morf M., Muller m., Briegleb W. The effect of hypogravity on human lymphocyte activation // Aviat., Space and Environ.Med.1980. 51. P.29 34.

49. Cogoli A., Tschopp A., Fuchs-Bislin P. Cell sensitivity to gravity // Science. №225. 1984. P.228 230.

50. Cogoli A., Bechler В., Muller O., Hunzinger E. Effect of microgravity on lymphocyte activation. В кн.: Biorack on Spacelab D 1.1988. Ed. by Longton N. David V. ESTEC.ESA Publications Division. P. 89-100.

51. Cogoli A., Inversen Т.Н., Johnsson A., Mesland D., Oster H. Cell biology // В кн.: Life Sciences Research in Space. Ed. By Oser H., Battrick B. Paris, European Space Agency. 1989. P. 49-64.

52. Cogoli A., Bechler В., Lorenzi. G. Response of cells to microgravity. В кн. «Fundamentals of Space Biology». Ed. by Asashima M., Malacinsky G.M. Tokyo, Berlin, Japan Sci. Soc. Press, Springer. 1990. P. 97 111.

53. Cogoli A., Bechler В., Cogoli-Greuter M., Criswell S.V., Joller H., Joller P., Hunzinger E., Miiller O. Mitogenic signal transduction in T lymphocytes in microgravity // J. Leukocyte Biol. 1993. Vol. 53. P.569 575.

54. Cogoli A., Gmiinder F.K. Gravity effects on single cells: techniques, findings and theory //Adv. Space Biol. Med. 1991. Vol. 1. P. 183-248.

55. Cogoli A Gravitational physiology of human immune cells: a review of iv vivo, ex vivo and in vitro studies // J. Gravitational Physiol. 1996. Vol.3. P 1- 9.

56. Convertino V.A., Polet J.L., Engelke K.A. et al. Evidence for increased beta-adrenoreceptor resposiveness induced by 14 days of simulated microgravity in humans // Amer. J. Physiol. 1997. 273. R93 -R99.

57. Deans R.J., Moseley A.B. Mesenchymal stem cells: biology and potential clinical uses // Exp. Hematol.2000.28. P. 875 884.

58. De Groot R.P., Rijken P.J., Den Hertorg J. De Laat S.W., Kruijer W. Microgravity decreases c-fos induction and serum response element activity.// J. Cell. Sci. 1990. 97. P.87-90.

59. Demets R. Biobox experiments indicate: in vitro bone formation is suppressed under microgravity conditions // Microgravity News from ESA. 1993.6. P. 20 23.

60. Deng W., Obrocka M., Fischer I., Prockop D.J. In vitro differentioation of human marrow stromal cells into early progenitors of neural cells by conditions that increase intracellular cyclic AMP //Biochem. Biophys. Res. Commun.2001. 282. P. 148 152.

61. De Souza E.B. Neurobiology of cytokines, Parts A and B. Methods in Neurosciences. San Diego. Academic Press. 1993. 127 P.

62. Di Nicola M., Carlo-Stella C., Madni M., Milanesi M., Longoni P.D., Matteucci P., Gianni A.M. Human bone marrow stromal cells supress T-lymphocyte proliferation induced by cellular or nonspecific mitogenic stimuli // Blood. 2002. Vol.99. P. 3838 -3843.

63. Dinarello C.A. Biologic basis for interleukin-1 in disease // Blood. 1996. Vol. 87. P. 2095 -2147.

64. Dinarello C.A. Cytokines as endogenous pyrogens // В KH.:Fever: Basic mechanisms and management. 2nd Edition . Ed by Mackowiak . Philadelphia. Lippincott-Raven Publishers. 1997. P.87-116.

65. Dintenfass L., Osman P., Maguire В., Jedrzejczyk H. Experiment on aggregation of red cells under microgravity on STS 51-C // Adv. Space Res. 1986. 6 (5). P.81 84.

66. Dintenfass L. Effect of zero gravity on blood cell and viscosity // Lancet. 1990. 335. P. 239 240.

67. Emilie D., Crevon M.C., AufFerdou M.T., Galanaud P. Glucocorticosteroid synergy between interleukin 1 and interleukin 6 for human В lymphocyte differentiation // Eur. J. Immunol. 1988.18. P. 2043-2047.

68. Ferrara N., Davis-Smyth T. The biology of vascular endothelial growth factor //Endocrine Rev. 1997. Vol. 18. №1. P.4 25.

69. Filshie R.J., Zannettino A.C., Makrynikola V. MUC-18, a member of the immunoglobulin superfamily, is expressed on bone marrow fibroblasts and a subset of hematological malignances // Leukemia. 1998. 12. P. 414 421.

70. Friedenstein A.J., Gorskaja J.F., Kulagina N.N. Fibroblast precursors in normal and irradiated mouse hamatopoietic organs // Exp.Hematol. 1976.4.P.267 274.

71. Forrester J.S., Price M.J., Makkar R.R. Stem cell repair of infarcted myocardium // Circulation. 2003.108. P. 1139 1145.

72. Gallery G., Meloni M.A., Camboni M.C. Signal transduction in T-lyphocytes under simulatrd microgravity conditions: involvement of PKC isoforms // J. Gravit. Physiol. 2002. V.9. №1. P.289 — 290.

73. Galloto M., Campanile G., Robino G. Hypertrothic chondrocytes undergo further differentiation to osteoblast-like cells and participate in the initial bone formation in developing chick embryo // J. Bone Miner. Res. 1994. 9. P. 1239 1249.

74. Gauldie J., Richards C., Harnish D. Interferon-2/BSF-2 shares identify with monocyte-derived hepatocyte stimulating factor (HSF) and regulates the major acute phase protein response in liver cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. 84. P. 7251 7255.

75. Genty C., Palle S., Alexandre C. First osteoblast culture in spaces: cellular responses to unloading. //J. Bone Miner. Res. 1993. Vol.8. S367.

76. Gimbrone M.A., Cotran R., Folkman J. Human vascular endithelial cells in culture. Growth and DNA synthesis // J. Cell. Biol. 1974. 60. P. 673 684.

77. Ginsberg M.H., Loftus J.C., Plow E.F. Cytoadhesins, integrins and platelets // Thromb. Haemostas. 1988. 59. P.l -6.

78. Gmunder F.K., Cogoli A. Cultivation of single cells in space. Appl. Micrograv. Technol. 1988. Vol.1. P.115- 122.

79. Griendling K.K., Alexander R.W. Endothelial control of the cardiovascular system: recent advances // FASEB J. 1996.10. P.283 292.

80. Cgonthos S., Graves S.E., Ohta S. The Stro-l+ fraction of adult human bone marrow contains the osteogenic precursors // Blood. 1994. 84. P. 4164 4173.

81. Gronthos S., Simmons P.J. The biology and application of human bone marrow stromal cell precursors //J. Hematother. 1996. 5. P. 15 23.

82. Gubano L.A., Lewis M.L. Fas/APO-1 protein is increased in spaceflown lymphocytes (Jurkat). // Exp. Gerontol. 2000. 35. P.389 400.

83. Guignandon A., Genty C., Vico L., Lafage-Proust M.N., Palle S.,Alexandre C. Demonstration of feasibility of automated osteoblastic line culture in space flight // Bone. 1997. Vol.20. №2. P.109-116.

84. Guignandon A., Lafage-Proust M.-H., Usson Y., Alexandre C., Vico L. Cell cycling determines integrin-mediated adhesion in osteoblastic ROS 17/ 2.8 cells exposed to space -related conditions // FASEB J. 2001. 10. P. 1096 1102.

85. Graf R., Apenberg S., Freyberg M., Friedl P. A common mechanism for mechanosensitive regulation of apoptosis in different cell types and for different mechanical stimuli // Apoptosis. 2003. 8. P. 531 538.

86. Gruener R., Hoeger G. Vector-free gravity disrupts synapse formation in cell culture // Am. J. Physiol. 1990. 258. (Cell. Physiol. 27) C489 C494.

87. Gruener R., Roberts R.," Reitstetter R. Exposure to microgravity altres properties of cultured muscle cells // ASGSB Bulletin 7. 1993. P.65.

88. Harris S.A., Zhang M., Kidder L.S., Evans G.L., Spelsberg T.C., Turner R.T. Effects of orbital spaceflight on human osteoblastic cell physiology and gene expression. // Bone. 2000.26. P.325 -331.

89. Haynesworth S.E., Baber M.A., Caplan A.I. Cell surface antigens on human marrow-derived mesenchymal cells are detected by monoclonal antibodies // Bone. 1992. 13. P. 69-80.

90. Helmke B.P., Goldman R.D., Davies P.F. Rapid displacement of vimentin intermediate filaments in living endothelial cells exposed to flow// Circ. Res. 2000. 86. P. 745 — 752.

91. Herbertson A., Aubin J.E. Cell sorting enriches osteogenic populations in rat bone marrow stromal cell cultures // Bone.1997.21. P.491 500.

92. Horwitz E.M. Transplantabillity and therapeutic effects of bone marrow-derived mesenchymal cells in children with osteogenesis imperfecta // Nat. Med. 1999. 5. P.309 -313.

93. Houssiau F., Coulie P., Olive D., Van Snick J. Synergic activation of human T cells by interleukin I and interleukin 6 // Eur. J. Immunol. 1988. P. 653 656.

94. Hu J., Gao Y., Lacolley K. The effect of shear stress and flow pattern on proliferation of vascular endothelail cells // J. Biomech.Res. 2003.36. P. 643 645.

95. Huang S., Chen C.S., Ingber D. Control of cyclin DI, p27Kipl and cell cycle progression in human capillaryendothelial cells by cell shape and cytoskeletal tension // Mol. Biol. Cell.1998.9. P. 3179 3193.

96. Huang H., Kamm R.D., Lee R.T. Cell mechanics and mechanotransduction: pathways, probes and physiology // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2004.287. CI CI 1.

97. Hughes-Fulford M., Lewis M.L. Effect of microgravity on osteoblast growth activation // Exp. Cell Res. 1996. Vol. 224. №1. P. 103 109.

98. Hughes-Fulford M., Gilbertson V. Osteoblast fibronectin mRNA, protein syntesis, and matrix are unchanged after exposure to microgravity. // FASEB J. 1999. 13. S121-S127.

99. Hughes Fulford M. Changes in gene expression and signal transduction in microgravity// J. Gravit. Physiol. 2001. Vol.8. №1. P. 1 - 4.

100. Hughes Fulford M. Function of the cytoskeleton in the gravisensing during spaceflight //Adv. Space Res. 2003. Vol. 32. №8. P. 1585 - 1593.

101. Iiyyama K., Nagano M., Yo T. Impared endothelial function with essential hypertansion assassed by ultrasonography // Am. Heart J. 1996. Vol.132. P.779 782.

102. Ingber D., Prusty D., Sun Z., Betensky H., Wang N. Cell shape, cytoskeletal mechanics, and cell cycle control in angiogenesis // J. BioMechanics. 1995. 28. P. 1471 -1484.

103. Ingber D. How cells (might) sense microgravity // FASEB J. 1999.13. S3 S15.

104. Ivanov D., Philippova M., Antropova J., Gubaeva F., Iljinskaya O., Tararak E., Bochkov V., Erne P., Resnik Т., Tkachuk V. Expression of cell adgesion T-cadherin in the human vasculature // Histochem. Cell. Biol. 2001. Vol. 115. № 3. P. 231 242.

105. Janmey P.A. The cytoskeleton and cell signaling: component localization and mechanical coupling // J. Physiol. Rev. 1998. Vol.78. №3. P. 763 781.

106. Jansen R.-P. RNA cytoskeletal associations // FASEB J. 1999. V.13. P. 455 -466.

107. Jessup J.M., Brown K., Ishii S., Ford R., Goodwin T.J., Spaulding G. Simulated microgravity does not alter epithelial cell adhesion to matrix and other molecules. Adv. Space Res. 1994. Vol.14 .№8. P. 71 76.

108. Jiang Y., Vaessen B. Lenvik T. Multipotent progenitor cells can be isolated from postnatal murine bone marrow, muscle and brain // Exp. Hematol. 2002. 30. P. 896 -904.

109. Jo H., Dull R.O., Hollis T.M. Endothelial albumin permeability is shear dependent, time dependent, and reversible // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 1991. 260. HI992-HI996.

110. Jorgensen C., Gordeladze J., Noel D. Tissue engineering through autologous mesenchymal stem cells // Cur. Opin. In Biotech. 2004. 15. P. 406 410.

111. Joyner C.J., Bennet A., Triffitt J.T. Identification and enrichment of human osteoprogenitor cells by using differentiation stsge-specific monoclonal antibodies // Bone. 1997.21. P. 1-6.

112. Kahn A.J., Simmoms D.J. Chondrocyte -to-osteocyte transformation in grafts of perichondrium-free epiphyseal cartilage // Clin. Orthop. Rel. Res. 1977. 129. P 299 — 304.

113. Kishimoto Т.К., Hirano T. Molecular regulation of В lymphocyte response // Ann. Rev. Immunol. 1988.6. P. 485 512.

114. Кос. O.N. Rapid hematopoietic recovery after co-infusion of autologous blood stem cells and culture expanded marrow mesenchymal stem cells in advanced breast cancer patients receiving high dose chemotherapy // J. Clin. Oncol. 2000. 18. P.307 -316.

115. Kohase S., May L.T., Tamm I. A cytokine network in human diploid fibroblasts: interaction of P-interferons, tumor necrosis factor. Plateled-derived growth factor, and interleukin-1 //Mol. Cell. Biol. 1987. 7. P.273 -280.

116. Kotton D,N., Ma B.Y., Cardoso W.V. Bone marrow — derived cells as progenitors of lung alveolar epithelium // Development. 2001. 128. P. 5181 5188.

117. Kozlovskaya I.B., Kreidich Yu. V., Oganov V.S., Koserenko O.P. Pathophysiology of motor functions in prolonged manned space flights. // Acta Astronaut. 1981. Vol.8. №9 10. P. 1059 - 1072.

118. Kulesh D.A., Anderson L.H., Wilson В., Barker M.J., Mehm W.J., Kearney G.P. Space-shuttle flight (STS-45) of L8 myoblast cells results in the isolation of a nonfusing cell-line variant//J. Cell. Biochem. 1994. 55. P. 530-544.

119. Khaoustov V.I., Risin D., Pellis N.R., Yoffe B. Microarray analysis of genes differentially exptessed in HepG2 cells cultured in simulated microgravity: preliminary report. In Vitro Cell Dev. Biol. Anim. 2001.37. P,84 88.

120. Kobayashi S., Nagino M., Komatsu S., Naruse K., Nimura Y. Nakanishi M., Sokabe M. Stretch-induced IL-6 secretion from endothelial cells requires NF-kappaB activation // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2003. 308. P. 306 312.

121. Koch A.E., Harlow L., Haines G.K., Amento E.P., Unemori E.N., Wong W.-L., Pope R.M., Ferrara N. Vascular endothelial growth factor: a cytokine modulating endothelial function in rheumatoid arthritis // J. Immunol. 1994.152. P. 4149 4155.

122. Koj A. Definition and classification of acute phase proteins. В кн.: The acute phase response to injury and infection. Ed. by Gordon A.H., Koj A. Amsterdam. Elseiver. 1985. Vol.10. P.139-232.

123. Kopen G.C., Prockop D.J., Phinney D.G. Marrow stromal cells migrate throughout forebrain and cerebellum, and they differentiate into astrocytes after injection into neonatal mouse brains // Proc. Natl.Acad. Sci. USA. 1999. 96. P. 10711 10716.

124. Krause D.S. Plasticity of marrow-derived stem cells I I Gene Therapy. 2002. 9. P.754 — 758.

125. Kunisada Т., Kawai A., Inoue H., Namba M. Effect of simulated microgravity on human osteoblast-like cells in culture // Acta Med. Okayama. 1997. Vol. 51. №3. P. 135 -140.

126. Lampugnani M.G., Dejana E. Interendothelial junctions: structure, signalling and functional roles // Current opinion in Cell Biology. 1997. 9. P.674 682.

127. Langille B.L., Adamson .S.L. Relationship between blood flow direction and endothelial cell orientation at arterial branch sites in rabbits and mice // Circ. Res. 1981. 48. P. 481 -488.

128. Le Blanc K., Tamminik C., Rosendahl K., Zetterberg E. Ringden O. HLA expression and immunologic proprties od differentiated and undifferentiated mesenchymal stem cells // Exp. Hematol, 2003.31. P. 890 896.

129. Lee R.H., Kim В., Choi I., Kim H., Choi H.S., Suh K., Bae Y.Ch., Jung J.S. Characterization and expression analysis of mesenchymal stem cells from human bone marrow and adipose tissue // Cell Physiol. Biochem.2004.14. P. 311 324.

130. Lewis M.L., Reynolds J.L., Cubano L.A., Hatton J.P. Lawless B.D., Piepmeier E.H. Spaceflight altres microtubules and increases apoptosis in human lymphocytes (Jurkat) // FASEB J. 1998. Vol 12. P. 1007 -1018.

131. Lorenzi G., Gmunder F.K., Cogoli A. Cultivation of hamster kidney cells in a dynamic cell culture system in space (Spacelab IML-1 mission) // Microgravity Sci. Technol. 1993.6. P. 34-38.

132. Lotz M., Jirik F., Kabouridis R. В cell stimulating factor 2/ interleukin 6 is a costimulant for human thymocytes and T lymphocytes // J. Exp. Med. 1988.167. P. 1253 1258.

133. Majumar M.K., Keane-Moore M., Buyaner D. Hardy W.B. , Mcintosh K.R., Mosca J.D. Characterization and functionality of cell surface molucules on human mesenchymal stem cells //J. Biome. Sci. 2003.10. P.228 -241.

134. Malek A.M. Jiang L., Lee I. Induction of nitric oxide synthase mRNA by shear stress requires intracelular calcium and G-protein signals and is modulated by PI 3 kinase // Biochem. Biophys Res Commun. 1999.254 P.231 -242.

135. Mannel D.N., Moore R.N., Mergenhager S.E. Macrophages as a major source of tumoricidal activity (tumor necrosis factor) // Infect. Immunol. 1980. 30. P.523.

136. Matthews N. Production of an anti-tumor cytotoxin by human monocytes // Immunology. 1981.44. P.35.

137. McBeath R., Pirone D.N., Neison C.M., Bhadriraju K., Chen C.S. Cell shape, cytoskeletal tension. And RhoA regulate stem cell lineage commitment // Dev. Cell.2004. Vol 6. P. 483-495.

138. McCue S., Nona S., Langille B.L. Shear induced reorganization of endothelial cell cytoskeleton and adhesion complexes // Trends Cardiovasc. Med. 2004. 14. P.143 -151.

139. Mcintosh K.R., Bartholomew A. Stromal cell modulation of immune system: apotential role for mesenchymal stem cells // Graft. 2000.3. P.324 328.

140. Minguell J J., Erices A., Cinget P. Mesenchymal stem cells // Exp. Biol. Med. 2001. Vol. 226 .№6. P.507 520.

141. Mitashov V.I., Brushlinskaya N.V., Grigoryan E.V., Tuchkova S.Ya. Anton HJ. Regeneration of organs and tissues in lower vertebrates during and after space flight // Adv. Space Res. 1996.17 (6 7). P. 241 - 255.

142. Montgomery PO'B., Cook J.E., Reynolds R.C., Thirolf R.G., Rogers Т., Campbell D. The response of single human cells to zero gravity // In Vitro. 1978. 14. P.165 -173.

143. Moore D. Perception and response to gravity in higher fungi a critical appraisal. // New Phytol. 1991.117. P.3-23.

144. Moore D., Cogoli A. Gravitational and space biology at the cellular level. В кн.: Biological and Medical Research in Space. Ed. by Moore D., Bie P., Oser H. Berlin, New York, Barcelona, Budapest, London. Milan, Paris, Singapore. Springer. 1996.

145. Nash P.V., Bour B.A., Mastro A.M. Effect of hindlimb suspension simulation of microgravity on in vitro immunological responses // Exp. Cell Res. 1991. 195. P. 353 — 360.

146. Noria S., Cowan D.B., Gotlieb A.I. Transient ane steady state effects of shear stress on endothelial cell adherens junctions. // Circ. Res. 1999. 85. P. 504 - 514.

147. Noria S., Xu F., McCue S. Assembly and reorientation of stress fibers drives morphologic changes to endothelial cells exposed to shear stress // Am. J. Pathol. 2004. 165. P. 1211-1223.

148. Oganov V.S., Rakhmanov A.S., Novikov V.E., Zatsepin S.T., Rodionova S.S., Cann C. The state of human bone tissue during space flight // Acta Astronaut. 1991. 23. P. 129-133.

149. Oganov V.S., Bakulin A.V., Novikov V.E., Murashko L.M. Change and recovery of bone mass and acoustic properties of rhesus monkeys after Bion 11 spaceflight. // J. Gravit. Physiol. 2000. Vol.7. №1. SI63 168.

150. Okada M., Kitahara M., Kishimoto S. IL-6/BSF-2 functions as a killer helper factor in the vitro induction of cytotoxic T cells // J. Immunol. 1988. 141. P. 1543 1549.

151. Olave I.A., Reek-Peterson S.L., Crabtree G.R. Nuclear actin and actin-related proteins in chromatin remodeling // Ann. Rev. Biochem. 2002. V. 71. P. 755 — 781.

152. Oswald J., Boxberger S., Jorgensen В., Feldmann S., Ehninger G., Bornhauser M., Werner C. Mesenchymal stem cells can be diferentiated into endothelial cells in vitro // Stem Cells. 2004.22. P. 377 384.

153. Ortiz L.A., Gambelli F., McBride C. Mesenchymal stem cells engraftment in lung is enhanced in response to bleomycin exposure and ameliorates its fibrotic effects // Proc. Natl. Acad. Sci.USA. 2003. 100. P. 8407 8411.

154. Owen M. Marrow stromal stem cells // J.Cell Sci. Suppl. 1988.10. P.63 76.

155. Park J.S., Chu J.S.F., Cheng C., Chen F., Chen D., Li S. Differential effects ofequiaxial and uniaxial strain on mesnchymal stem cells // Biotech. Bioeng. 2004. Vol. 88. № 3. P.359 -368.

156. Papaseit C., Pochon N., Tabony J. Microtubule self-organization is gravity-dependent. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. P. 8364 8368.

157. Pereira R. Marrow stromal cells as a source of progenitor cells for nonhematopoietic tissues in transgenic mouse with a phenotype of osteogenesis imperfecta // Proc. Natl. Acad. Sci. USA .1998. 95. P. 1142 1147.

158. Piepmeier E.H., Kalns J.E., MCIntyre k.M., Lewis M.L. Prolonged weightlessness f affects promyelocyte multidrug resistance // Exp. Cell Res. 1997.237. P. 410 — 418.

159. Pittenger M.F.,Mackay A.M., Beck S.C., Jaiswal R.K., Douglas R., Mosca J.D.,j

160. Moorman M.A., Simonetti D.W. Craig . Marshak D.R. Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells // Science. 1999.284. P. 143 147.

161. Pittenger M.F., Mosca J.D., Mcintosh K.R. Human mesencymal stem cells: progenitor cells for cartilage, bone, fat and stroma // Curr. Top. Microbiol. Immunol. 2000.251. P. 3-11.

162. Pittenger M.F., Martin B.J. Mesenchymal stem cells and their potential as cardiac therapeutics // Circ. Res. 2004.95. P. 9 20.

163. Preston S.L., Alison M.R., Forbes S.J., Direkze N.C., Poulsom R., Wright N.A. * The new stem cell biology: something for everyone // J. Clin. Pathol.: Mol. Pathol. 2003.56. P.86-96.

164. Poulsom R.,Forbes S.J., Hodivala-Dilke K. Bone marrow contributes to renal parenchymal turnover and regeneration // J. Phatol. 2001. 195. P. 229 235.

165. Rajotte D., Arap W., Hagedorn M., Koivunen E., Pasqualini R., Ruoslahti E.

166. Molecular heterogenety of the vascular endithelium revealed by in vivo phage display // f J. Clin. Invest. 1998.102. P.430 437.

167. Resnick N., Yahav H., Shay-Salit A. Fluid shear stress and the vascular endothelium: for better and for worse // Prog. Biophys. Mol. Biol. 2003. 81. P. 177 199.

168. Reyes M., Lund Т., Aguiar D., Koodie L., Verfaillie C.M. Purification and ex vivo expansion of postnatal human marrow mesodermal progenitor cells // Blood. 2001. Vol.98. №9. P.2615 -2625.

169. Riminucci M., Bradbeer J.N. Corsi A. Vis -a-vis cells and the priming of bone formation //J. Bone Miner. Res. 1998.13. P. 1852 1861.

170. Rijken P.J., De Groot R.P., Briegleb W,. Kruijer W., Verleij A.J., Boonstra J., De , Laat S.W. Epidermal growth factor-induced cell rounding is sensitive to stimulatedmicrogravity. Aviat., Space and Environ. Med. 1991. 62. P.32 36.ч

171. Rijken P.J., De Groot R.P., Kruijer W., De Laat S.W., Verleij A.J., Boonstra J. Identification of specific gravity sensitive signal transduction pathways in human A431 carcinoma cells // Adv. Space Res. 1992.Vol.12. №1. P.145 152.

172. Roberts W.C., Palade G. Increased microvascular permeability and endothelial fenestration induced by vascular endothelial growth factor // J. Cell Sci. 1995. 108. P. 2369-2379.

173. Romanov Yu. A., Balyasnikova I.V., Bystrevskaya V.B., Byzova T.V., Ilyinskaya O.P., Krushinsky A.V., Latsis R.V., Soboleva E.L. Tararak E.M., Smirnov V.N.

174. Endothelial heterogenety and intimal blood-borne cells. Relation to humanatherosclerosis // Proc. N.Y. Acad. Sci. 1995. Vol. 748. P. 12 37.

175. Romanov Yu. A., Svintsitskaya A., Smirnov V.N. Searching for alternative sources of postnatal humal mesenchymal stem cells: candidate MSC-like cells from umbilical cord // Stem Cells. 2003.21. P.105 110.

176. Rothwell N.J. Cytokines-killers in the brain? // J. Physiol. 1999. Vol. 514. №1. P. 3-17.

177. Rucci N., Migliaccio S., Zani B.M., Taranta A., Teti A. Characterization of the osteoblast-like cell phenotype under microgravity conditions in the NASA approved rotating wall vessel bioreactor (RWV) // J. Cell. Biochem. 2002. 85. P. 167 - 179.

178. Sanceay J., Beranger F., Gaudelet C., Wietzerbin J. IFN-y is an essential cosignal for triggering IFN-P2/BSF-2 gene expression in human monocytic cell lines // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1989.557. P.130- 143.

179. Sanchez-Ramos J., Song S., Cardozo-Pelaez F. Adult bone marrow stromal cells differentiate into neural cells in vitro // Exp. Neurol. 2000. 164. P.247 256.

180. Sato A., Nakajima Т., Kumei Y., Hongo Т., Ozawa K. Gravitational effects on mammalian cells // The Physiologist. 1992. 35. S43 46.

181. Saito T. Myogenic expession of mesenchymal stem cells within myotubes of mdx mice in vitro and in vivo // Tissue Eng. 1995.1. P.327 343.

182. Sarkar d., Nagaya Т., Koga K., Nomura Y., gruener R., Seo. H. Culture in vector-averaged gravity under clinostat rotation results in apoptosis of osteoblastic ROS 17/2.8 cells.// J. Bone Mineral. Res. 2000.15. p. 489 498.

183. Seebach J., Dieterich P., Luo F. Endothelial barrier function under laminar fluid shear stress // Lab. Invest. 2000. 80. P. 1819 -1831.

184. Seitzer U., Bodo.M., Muller P.K., Acil Y., Batge B. Microgravity and hypergravity effects on collagen biosynthesis of human dermal fibroblasts // Cell Tissie Res. 1995. Vol.282. №3. P.513 607.

185. Schmitt D.A., Hatton J.P., Emond C., Chaput D., Paris H., LevadeT., Cazenave J.P., Schaffar L. The distribution of protein kinase С in human leukocytes is altered in microgravity // FASEB J. 1996.10. P. 1627 1634.

186. Shalaby M.R., Waage A., Espevik T. Cytokine regulation of interleukin 6 production by human endothelial cells // Cell Immunol. 1989. Vol. 121. P. 372 382.

187. Shirinsky V.P., Antonov A.S., Birukov R.G. Mechano-chemical control of human endothelium orientation and size // J. Cell. Biol. 1989. Vol. 109. P. 331 339.

188. Stenvinkel P. Endothelial dysfunction and inflammination — is there a link? // Nephrol. Dial. Transplant. 2001.16. P. 1968 1971.

189. Stevens Т., Rosenberg R., Aird W., Quertermous Т., Johnson F., Garcia J.G., Hebbel R.P., Tuder R.M., Garfinkel S. NHLBI workshop report: endothelial cell phenotypes in heart, lung, and blood diseases // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 281. С1422 -C1433.

190. Syners 1., Fontaine V., Content J. Modulation of interleukin 6 - receptors in human cells // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1989. 557. P. 388 - 395.

191. Taga К., Kawanishi Y., Hardy R. Receptors for В cell stimulatory factor 2. Quantitation, specifity, distribution and regulation of their expression // J. Exp. Med. 1987. 166. P. 967-981.

192. Theise N.D., Nimmakayalu M., Gardner R. Liver from bone marrow in humans // Hepatology. 2000.32. P. 11 16.

193. Tkachuk V.A., Voyno-Yasenetskaya T.A. Two types of G proteins involved in regulation of phosphoinositide turnover in pulmonary endothelial cells // Am. J. Physiol. 1991. Vol.261. №1. P. 118-122.

194. Tomas K.A. Vascular Endothelial growth factor, a potent and selective angiogenic agent // J. Biol. Chem. 1996. Vol. 271. № 2. P. 603 606.

195. Tomita S., Li R.K.I., Weisel R.D. Autologous transplantation of bone marrow cells improves damaged heart function // Circulation. 1999.100. II247 — II256.

196. Topper J.N., Gimbrone M.A. Blood flow and vascular gene expression: fluid shear stress as a modulator of endothelial phenotype // Mol. Med. Today. 1999. 5. P.40 — 46.

197. Trepel M., Arap. W., Pasqualini R. Exploring vascular heterogeneity for gene therapy targeting // Gene Ther.2000.7. P. 2059 2060.

198. Tschopp A., Cogoli A., Lewis M.L., Morrison D.R. Bioprocessing in space: human cells attach to beads in microgravity // J. Biotechnol. 1984.1. P.287 293.

199. Tsuruta D., Jones J.C.R. The vimentin cytoskeleton regulates focal contact size and adhesion of endothelial cells subjected to shear stress // J. Cell Sci. 2003. 116. P. 4977-4984.

200. Unemori E.N., Ferrara N., Bauer E.A., Amento E.P. Vascular endothelial growth factor induces interstetitinal collagenase expression in human endothelial cells // J. Cell. Physiol. 1992.153. P. 557-562.

201. Vanhoutte P.M., Mombouli J.V. Vascular endothelium: vasoactive mediators // Progr. Cardiovasc. Dis. 1996.39. P.229-238.

202. Zukov-Verezhnikov N.N., Volkov M.N., Maisky I.N.,Kozlov V.A., Parfyonov G.P., Orlovsky V.I. Experiments with microorganisms and human cell cultures in the Zond 5 and Zond 7 flights // Life Sci. Space Res. 1971. 9. P.99 103.

203. Van Damme J., Opdenakker G., Simpson R.J. Identification of the human 26 kD protein, interferon P2 (IFN- P2), as а В cell hybridoma/plasmacytoma growth factor induced bt interleukin 1 and tumor necrosis factor / J. Exp. Med. 1987. 165. P. 914 — 919.

204. Vanhoutte P.M. Endothelium and the control of vascular tissue // NIPS. 1987. Vol. 2. P. 18-22.

205. Vassy J., Portet S., Beil M., Millot G., Fauvel-Lafeve F., Karniguan A., Calvo F., Rigaut J.P., Schoevaert D. The effect of weightlessness on cytoskeleton architecture and proliferation of human breast cancer cell line MCF-7. // FASEB J. 2001.

206. Vink A., Coulie P.G., Wauters P. В cell growth and differentiation activity of interleukin-HPl and related murine plasmacytoma growth factors. Synergy with interleukin-1 //Eur. J. Immunol. 1986.18. P. 607-612.

207. Waltner I., Pippia P., Meloni M.A., Turrini F., Mannu F., Cogoli A. Simulated microgravity inhibits the genetic expression of intrleukin-2 and its receptor in mitogen-activated T lymphocytes // FEBS Lett. 436. P. 1998.115 118.

208. Watt F.M. Epidermal stem cells: markers, pattering and the control of stem cell fate // Phil. Trans. R Soc. Lond. B. Biol. Sci. 1998.353. P. 831 837.

209. Weimann J.M., Charlton C.A., Btazelton T.R, Hackman R.C. Blau H.M. Contribution of transplanted bone marrow cells to Purkimje neurons in human adult brains // Proc/ Natl. Acad. Sci. USA. 2003.100. P. 2088 2093.

210. Wu G.D., Nolta J.A. Jin y.S. Migration of mesenchymal stem cells to heart allografts during chronic rejection // Transplantation. 2003.75. P.679 685.

211. Young R.G. The use of mesenchymal stem cells in a collagen matrix for achillies tendon repair//J. Orthop. Res. 1998. 16. P.406-413.

212. Yang R., Thomas G. R, Bunting S., Ко A., Keyt В., Ferrara N., Ross J., Jin H. Effect of VEGF on hemodinamics and cardiac performance // J. Cardiovasc. Pharmacol. 1996.27. P. 838-844.

213. Zhang Y., Lin J.X., Vilcek J. Synthesis of interleukin 6 (interferon (J2/B cell stimulatoiy factor 2) in human fibroblasts is triggered by an increase in intracellular cyclic AMP // J. Biol. Chem. 1988.263. P. 6177 6182.

214. Zhang L-F. Vascular adaptation to microgravity: what have we learned? // J. Appl.s.* Physiol. 2001.91. P. 2415 2430.ь