Морфофункциональная характеристика одиночных опухолевых клеток при раке молочной железы и их роль в прогрессии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, доктор наук Таширева Любовь Александровна

• Таширева Любовь Александровна
• доктор наук
• 2022

Оглавление диссертации доктор наук Таширева Любовь Александровна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Биологические характеристики прогрессии рака молочной железы

1.2 Метастатический каскад: современные представления

1.2.1 Инвазия

1.2.1.1 Индивидуальная миграция опухолевых клеток

1.2.1.2 Коллективная миграция опухолевых клеток

1.2.1.3 Пластичность режимов инвазивного движения опухолевых клеток

1.2.2 Интравазация

1.2.3 Циркулирующие опухолевые клетки

1.2.4 Экстравазация

1.3 Концепция преметастатических ниш: качественно новый взгляд на роль микроокружения в метастазировании

1.4 Участие микроокружения в прогрессии карциномы молочной железы

1.4.1 Лимфоциты врожденной иммунной системы

1.4.2 Лимфоциты адаптивной иммунной системы

1.5 Морфологические признаки инвазии: морфологическая гетерогенность и феномен «Tumor budding»

1.6 Современные подходы к прогнозированию исходов рака молочной железы: от организменного до молекулярного уровня... 45 Заключение

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Характеристика групп исследования

2.2 Методы исследования

2.2.1 Материал исследования

2.2.2 Морфологическое исследование опухоли

2.2.3 Иммуногистохимическое исследование морфологического типа одиночных опухолевых клетках

2.2.4 Иммунофлуоресцентное исследование экспрессии белков, характеризующих стволовость и состояние эпителиально-мезенхимального перехода в одиночных опухолевых клетках

2.2.5 ТБЛ-ассоциированное иммунофлуоресцентное исследование популяционного состава микроокружения одиночных опухолевых клеток

2.2.6 Многоцветный цитофлуориметрический анализ экспрессии белков, характеризующих стволовость и состояние эпителиально-мезенхимального перехода в циркулирующих опухолевых клетках

2.2.7 Лазерная микродиссекция микроокружения одиночных опухолевых клеток

2.2.8 Секвенирование микроокружения одиночных опухолевых клеток

2.2.9 Статистический анализ

ГЛАВА 3. СВЯЗЬ НАЛИЧИЯ ОДИНОЧНЫХ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК С КЛИНИКО-ПАТОЛОГИЧЕСКИМИ ПАРАМЕТРАМИ БОЛЬНЫХ ИКНТ

3.1 Клинико-патологические характеристики больных ИКНТ в зависимости от наличия в ткани первичной опухоли одиночных опухолевых клеток

3.2 Связь одиночных опухолевых клеток с прогрессированием и выживаемостью у больных ИКНТ различных молекулярно-генетических подтипов

3.3 Оценка безметастатической и безрецидивной выживаемости у больных ИКНТ в зависимости от наличия одиночных опухолевых клеток в ткани первичной опухоли

ГЛАВА 4. МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ГЕТЕРОГЕННОСТЬ ОДИНОЧНЫХ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ИНВАЗИВНОЙ КАРЦИНОМЫ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОГО ТИПА

4.1 Морфологическое разнообразие одиночных опухолевых клеток

4.2 Связь ООК различной морфологии с развитием гематогенных метастазов

4.3 Оценка безметастатической выживаемости у больных ИКНТ в зависимости от морфологии одиночных опухолевых клеток в ткани первичной опухоли

ГЛАВА 5. ФЕНОТИПИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ ОДИНОЧНЫХ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК РАЗЛИЧНОЙ МОРФОЛОГИИ ПО ПРИЗНАКАМ СТВОЛОВОСТИ И ЭПИТЕЛИАЛЬНО-МЕЗЕНХИМАЛЬНОГО ПЕРЕХОДА У БОЛЬНЫХ ИКНТ

5.1 Фенотипическое разнообразие морфологически различных одиночных опухолевых клеток у больных ИКНТ

5.2 Частота встречаемости эпителиоподобных одиночных опухолевых клеток с различным сочетанием признаков стволовости и ЭМП и их количество у больных в зависимости от статуса гематогенного метастазирования

5.3 Математическая модель, позволяющая прогнозировать риск развития гематогенных метастазов у больных ИКНТ на основе оценки порогового уровня доли эпителиоподобных одиночных опухолевых клеток в состоянии ЭМП и без признаков стволовости

5.4 Оценка безметастатической выживаемости у больных ИКНТ в зависимости от доли эпителиоподобных одиночных опухолевых клеток в состоянии ЭМП и без признаков стволовости

5.5 Частота встречаемости лимфоцитоподобных одиночных опухолевых клеток с различным сочетанием признаков стволовости и ЭМП и их количество у больных в зависимости от статуса гематогенного метастазирования

5.6 Частота встречаемости фибробласто-подобных одиночных опухолевых клеток с различным сочетанием признаков стволовости и ЭМП и их количество у больных в зависимости от статуса гематогенного метастазирования

ГЛАВА 6. ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРООКРУЖЕНИЯ ОДИНОЧНЫХ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК

6.1 Выраженность воспалительной инфильтрации и тип ИВР вблизи ООК в зависимости от статуса гематогенного метастазирования у больных ИКНТ

6.2 Экспрессионный анализ клеточного состава микроокружения ООК у больных ИКНТ с наличием и отсутствием гематогенных метастазов

6.3 Анализ дифференциально экспрессирующихся генов в ближайшем микроокружении ООК больных ИКНТ с наличием и отсутствием гематогенных метастазов

6.4 Сопоставление клеточного состава и активированных сигнальных путей в микроокружении ООК с подобными характеристиками других морфологических структур ИКНТ

6.5 Анализ Топ 10 гипер- и гипоэкспрессированных генов в микроокружении ООК у больных ИНКТ в зависимости от статуса

гематогенного метастазирования и их связь с безметастатической

выживаемостью

ГЛАВА 7. ОДИНОЧНЫЕ ЦИРКУЛИРУЮЩИЕ ОПУХОЛЕВЫЕ КЛЕТКИ У БОЛЬНЫХ ИКНТ

7.1 Характеристика частоты встречаемости и количества циркулирующих опухолевых клетках у больных в зависимости от наличия в первичной опухоли ООК

7.2 Характеристика стволовых свойств и проявлений эпителиально-мезенхимального перехода в циркулирующих опухолевых клетках у больных в зависимости от наличия в первичной опухоли ООК

7.3 Взаимосвязь фенотипического разнообразия одиночных опухолевых клеток первичной опухоли и циркулирующих опухолевых клеток

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Морфофункциональная характеристика одиночных опухолевых клеток при раке молочной железы и их роль в прогрессии»

Актуальность работы

Рак молочной железы является преобладающим в структуре онкологической заболеваемости женского населения (21,4%). В 2020 году в России впервые в жизни рак молочной железы был выявлен у 64951 человек, при этом средний возраст составил 61 год. В структуре смертности женщин наибольший удельный вес также имеет рак молочной железы [3]. Причиной смертельного исхода примерно в 90% случаев, при этом, является гематогенное метастазирование, которое остается наиболее важной формой прогрессии рака молочной железы [151].

Гематогенные метастазы при раке молочной железы чаще всего манифестируют метахронно с основным заболеванием в промежутке от 12 месяцев до десятков лет [84]. Как правило, это происходит после оперативного удаления первичной опухоли, следовательно, источником метастатической опухоли являются опухолевые клетки, ранее колонизировавшие места будущих метастазов - преметастатические ниши (согласно концепции Д. Лайдена [22]), но находящиеся в неактивном состоянии. Длительность безметастатического периода зависит от способности покоящихся клеток (клеток в состоянии «dormancy») быть активированными под влиянием различных промоторных сигналов [110].

К наиболее значимым характеристикам паренхиматозного компонента опухоли прежде всего относятся молекулярный тип, признаки стволовости, ЭМП, лиганд-рецепторный интерфейс опухолевых клеток, обеспечивающий их способность к интра- и экстравазации, и взаимодействию с компонентами преметастатических ниш. Известно, что люминальный подтип РМЖ имеет относительно хороший прогноз, но, поскольку он составляет около 70% случаев, абсолютное количество случаев метастазирования при люминальном подтипе РМЖ значительно больше, чем в других подтипах, особенно в

долгосрочной перспективе [209]. Это делает особо актуальным поиск прогностических критериев для люминальных форм РМЖ.

Наряду с этим, важной характеристикой паренхиматозного компонента опухоли является морфофункциональная гетерогенность кластеров опухолевых клеток и одиночных клеток, располагающихся вне многоклеточных структур. Определенные аспекты морфологической гетерогенности инвазивной карциномы молочной железы неспецифического типа (ИКНТ) и ее связь с опухолевой прогрессией изучаются в коллективе НИИ онкологии Томского НИМЦ более пятнадцати лет. В 2006 году была описана ассоциация альвеолярных структур инвазивного компонента с лимфогенным метастазированием [1]. Позднее был введен термин «фенотипический дрейф», означающий цепочку событий, ведущих к морфологическому разнообразию инвазивной карциномы молочной железы. Изучение морфологической гетерогенности показало, что ее развитие связано с менопаузальным статусом, размером опухоли и гистологическим типом рака молочной железы [236]. Следующим шагом в изучении стал полногеномный и полнотранскриптомный анализ морфологических структур. Показаны значительные различия между структурами по количеству экспрессирующихся генов эпителиального и мезенхимального фенотипа, а также по количеству сигнальных путей, вовлеченных в инвазию [50]. Интересно, что на хромосомном уровне между структурами различий не было. Обнаружена также гетерогенность разных морфологических структур ИКНТ по доле опухолевых стволовых клеток (ОСК) в них [50]. Тем не менее, на сегодняшний день остаются не охарактеризованными одиночные опухолевые клетки, отделившиеся от многоклеточных структур опухоли.

Неопределенной остается прогностичекая значимость одиночных опухолевых клеток. Несмотря на убедительные данные о возможности метастазирования кластерами опухолевых клеток [8], по-видимому, такой механизм реализуется лишь в части случаев и скорее присущ для лимфогенного метастазирования [77]. Парадоксальная локализация

метастазов, которую нельзя объяснить задержкой опухолевого эмбола (согласно концепции Дж. Юинга [40]), описывается теорией «семян и почвы» С. Педжета (Paget, S. 1889) и, очевидно, обусловлена диссеминацией одиночных опухолевых клеток.

В последнее время опубликовано значительное количество работ, посвященных анализу «single cell» у больных раком молочной железы, однако в качестве образцов используются отдельные клетки, выделенные из многоклеточных кластеров, без учета морфологической гетерогенности. Феномен, косвенно подтверждающий возможную связь одиночных клеток опухоли с прогрессией, называется tumor budding («почкование опухоли») [132]. Для колоректальной карциномы показано, что формирование на фронте инвазии скоплений от одной до четырех опухолевых клеток ассоциировано с неблагоприятным прогнозом [131]. Таким образом, накопленные к настоящему времени факты позволяют предположить, что одиночные опухолевые клетки являются вероятными кандидатами на роль «семян», тем не менее, очевиден значительный пробел в знаниях относительно их характеристик и прогностической значимости in vivo.

Наличие одиночных опухолевых клеток в ткани инвазивной карциномы молочной железы является проявлением внутриопухолевой морфологической гетерогенности и следствием коллективно-индивидуального перехода, в основе которого могут лежать разные механизмы. Многочисленные эксперименты показывают, что свойствами, обеспечивающими способность клеток опухоли к колонизации отдаленных органов, являются ЭМП и стволовость [143, 217, 39, 210]. ЭМП происходит в результате активации транскрипционных факторов TWIST1, Snail, Slug, ZEB1/2 и характеризуется, выраженной в разной степени утратой маркеров эпителиальности с приобретением признаков мезенхимности. Одним из признаков ЭМП является снижение экспрессии E-кадгерина и увеличение экспрессии N-кадгерина на поверхности клетки [85, 18]. В процессе полного ЭМП опухолевые клетки, приобретая мезенхимальный фенотип, отделяются от опухолевого массива и

движутся мезенхимоподобно. Кроме мезенхимального механизма одиночные клетки опухоли могут двигаться амебовидным способом [203]. Каким образом это отражается на морфологии клеток, в настоящий момент, однозначно не определено.

Известно, что наличие в опухоли ОСК связывают с метастазированием, а также с неблагоприятным исходом болезни [37, 240]. Существует несколько маркеров ^133, CD166, CD44, CD24 и ALDH1), показавших свою состоятельность для идентификации ОСК во многих солидных опухолях [139]. Так, показано, что опухоли с высоким содержанием CD44+/CD24-клеток имеют плохой прогноз [32], в том числе при раке молочной железы [180].

Вариант паренхиматозно-стромальных отношений в опухоли может являться ключевым и для интравазации опухолевых клеток. Наличие ЦОК не всегда сопровождается формированием метастазов, по всей видимости, потому что не все опухолевые клетки, попавшие в циркуляцию, обладают достаточными для формирования метастаза свойствами. Известно, что популяция ЦОК гетерогенна. Часть клеток являются ОСК, часть - находятся в состоянии ЭМП, часть - сочетает признаки ЭМП и стволовости, и, наконец, большая часть ЦОК не имеют признаков стволовости и ЭМП [79; 140; 179]. Из всей массы ЦОК только 1 клетка из 40 может достигать преметастатической ниши, и не более 0,01% циркулирующих опухолевых клеток дают начало метастазам [239], при этом время жизни в циркуляции опухолевых клеток равняется нескольким часам. Мета-анализ 24 исследований (3701 пациентов), посвященных определению прогностической значимости ЦОК у больных РМЖ, среди которых 13 проспективных и 11 ретроспективных, показал, что большее количество ЦОК сопряжено с более плохим ответом на лечение, укорочением сроков общей и безрецидивной выживаемости у больных [133]. Однако из проведенных исследований не ясно, с какими субпопуляциями ЦОК связан плохой прогноз.

Но не только внутренние факторы опухолевых клеток могут влиять на течение и исход рака молочной железы. Нет сомнений, что микроокружение опухоли может быть вовлечено в механизмы ее прогрессирования [197]. В настоящее время разрабатывается множество прогностических панелей на основе иммунно-опосредованных генных сигнатур [147]. Накапливается все больше фактов в пользу классических представлений о роли типа иммуновоспалительной реакции в исходе заболевания. Т регуляторные лимфоциты, ТИ2 лимфоциты и М2 макрофаги ассоциированы с неблагоприятным исходом, в то время как СБ8+ Т-лимфоциты, ТЫ лимфоциты и М1 макрофаги сопряжены с более продолжительной общей выживаемостью у больных РМЖ [12]. Хотя существуют данные о том, что В-лимфоциты, инфильтрирующие опухоль, также секретируют антитела класса IgG, индуцирующие апоптоз, и могут действовать как антиген-презентирующие клетки для примирования CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов [150]. В свою очередь, известно, что истощенные CD8+ Т-лимфоциты ассоциированы с неблагоприятным исходом [134]. Такие противоричивые сведения не позволяют ответить на вопрос о том, какой тип иммуновоспалительной реакции является способствующим развитию гематогенного метастазирования.

Таким образом, несмотря на обилие теоретических данных, все же остается много открытых вопросов. Существует пробел в знаниях о значимости одиночных опухолевых клеток, их фенотипическом разнообразии, микроокружении и связи с вариантами циркулирующих опухолевых клеток. До сих пор нет четких представлений о факторах и механизмах формирования условий, способствующих диссеминации опухолевых клеток, воздействие на которые позволило бы осуществлять патогенетически обоснованную профилактику отдаленного метастазирования. Основная научная проблема, на решение которой направлено исследование, состоит в определении роли различных популяций одиночных клеток опухоли и их микроокружения в гематогенном метастазировании рака молочной железы.

Степень разработанности темы

Гематогенные метастазы развиваются не у всех пациентов, что диктует необходимость поиска маркеров, позволяющих формировать как группы высокого риска, которые в последствие будут получать более агрессивную химиотерапию с целью профилактики отдаленного метастазирования, так и группу низкого риска метастазирования, в которой адъювантная терапия могла быть менее агрессивной. К сожалению, на сегодняшний день имеющиеся методы для прогнозирования риска прогрессии заболевания могут применяться только для ограниченного контингента больных. Например, Oncotype DX используется для оценки риска развития рецидивов, эффективности химиотерапии, в том числе гормональной [183], однако, применяться может только для пациентов с ранней стадией эстроген-позитивного Нег2-негативного рака молочной железы. Breast Cancer Index test, позволяющий прогнозировать риск развития отдаленных метастазов, может применяться только для пациентов с гормон-позитивным раком молочной железы, не имеющих лимфогенных метастазов. Существуют и групповые прогностические маркеры, такие как четыре и более пораженных лимфатических узлов, степень злокачественности опухоли равная трём, низкая экспрессия рецепторов к эстрогену и прогестерону и др. [82]. Клиническое значение одиночных опухолевых клеток остается не определенным. В настоящее время продолжается активный поиск маркеров риска развития гематогенных метастазов, однако вопрос о наиболее эффективных прогностических признаках при раке молочной железы до сих пор остается актуальным.

Цель исследования

Изучение морфофункциональных характеристик одиночных

опухолевых клеток первичной опухоли, а также их микроокружения, и поиск

ассоциации с прогрессией люминальных форм инвазивной карциномы

молочной железы неспецифического типа.

Задачи исследования

1. Оценить связь наличия одиночных опухолевых клеток в ткани первичной опухоли с клинико-патологическими параметрами больных ИКНТ.

2. Оценить безметастатическую и безрецидивную выживаемость у больных ИКНТ в зависимости от наличия одиночных опухолевых клеток в ткани первичной опухоли.

3. Охарактеризовать морфологическое разнообразие одиночных опухолевых клеток и его связь с развитием гематогенных метастазов у больных ИКНТ.

4. Изучить фенотипическое разнообразие одиночных опухолевых клеток различной морфологии по признакам стволовости и ЭМП у больных ИКНТ и оценить их связь с гематогенным метастазированием.

5. Оценить выраженность воспалительной инфильтрации, субпопуляционный состав хелперных лимфоцитов и тип ИВР в микроокружении ООК в зависимости от наличия гематогенных метастазов у больных ИКНТ.

6. Определить транскрипционный профиль микроокружения ООК у больных ИНКТ в зависимости от статуса гематогенного метастазирования и связь дифференциально экспрессирующихся генов с безметастатической выживаемостью.

7. На основе оценки признаков стволовости и ЭМП изучить связь между характеристиками одиночных опухолевых клеток первичной опухоли и популяционным составом ЦОК у больных ИКНТ.

8. Предложить наиболее эффективные прогностические маркеры гематогенного метастазирования у больных ИКНТ на основе определения параметров одиночных опухолевых клеток.

Научная новизна

Впервые показано, что морфологическое разнообразие инвазивной карциномы молочной железы неспецифического типа ассоциировано с гематогенным метастазированием у больных люминальными подтипами ИКНТ, не получавших в предоперационном периоде неоадъювантной химиотерапии.

Впервые показано, что наличие ООК, определенное в препаратах, окрашенных гематоксилином и эозином, является независимым прогностическим фактором риска развития гематогенных метастазов и более короткой безметастатической выживаемости у больных ИКНТ. Впервые установлено отсутствие ассоциации наличия ООК с частотой развития рецидивов и безрецидивной выживаемостью у больных ИКНТ люминальных молекулярно-генетических подтипов.

Впервые в ткани ИКНТ описано существование трех морфологических типов ООК, которые охарактеризованы по наличию признаков стволовости и ЭМП. Продемонстрировано, что среди ООК, подобных эпителиальным клеткам и фибробластам, преобладают клетки с моноэкспрессией Ерсат или моноэкспрессией СК7 без признаков стволовости по экспрессии CD44/CD24 и ЭМП по экспрессии К- кадгерина. Показано, что лимфоцитоподобные ООК с равной частотой экспрессируют маркеры эпителиальности СК7 и Ерсат.

Впервые частоты встречаемости и количество эпителиоподобных, лимфоцитоподобных и фибробластоподобных ООК, с учетом наличия в них признаков стволовости и ЭМП, были соотнесены со статусом гематогенного метастазирования больных ИКНТ.

Впервые создана математическая модель, позволяющая прогнозировать риск развития гематогенных метастазов у больных ИКНТ на основе оценки порогового уровня доли эпителиоподобных ООК в состоянии ЭМП без признаков стволовости по экспрессии CD44/CD24.

Впервые проведена интегральная характеристика микроокружения ООК с определением типа иммуновоспалительной реакции (как по экспрессии маркерных генов в микроокружении, так и при фенотипировании клеток микроокружения) у больных ИКНТ с отсутствием и наличием гематогенных метастазов.

Впервые показаны различия ИВР в микроокружении ООК в сравнении с многоклеточными структурами опухоли. Впервые обнаружено, что для прогноза гематогенного метастазирования имеет значение определение благоприятного ТЫ и не благоприятного ^2 типов ИВР только в микроокружении ООК.

Впервые показано, что снижение экспрессии гена СЭ52 и повышение экспрессии гена ЬРСЛТ1 в микроокружении ООК у больных ИНКТ имеет связь со статусом гематогенного метастазирования, а также с безметастатической выживаемостью.

Впервые охарактеризованы частоты встречаемости и количества ЦОК у больных ИКНТ в зависимости от наличия в первичной опухоли ООК. Показано, что субпопуляционный состав ЦОК (учитывая признаки стволовости и проявления эпителиально-мезенхимального перехода) у больных ИКНТ не зависит от наличия в первичной опухоли ООК.

Впервые показано, что уровень ЦОК, по фенотипу схожих с ООК, ассоциированными с риском развития гематогенных метастазов, т.е. нестволовых (по экспрессии CD44/CD24) с моноэкспрессией Ерсат и признаками ЭМП, расположенных в гейте гранулоцитов, находится в прямой зависимости от количества аналогичных ООК в первичной опухоли.

Теоретическая и практическая значимость работы

Полученные в ходе исследования результаты позволяют расширить представления о функциональной характеристике морфологической гетерогенности инвазивной карциномы молочной железы неспецифического типа.

Фундаментальную значимость работы составляют новые знания об ассоциации ООК с гематогенным метастазированием ИКНТ, об их морфологическом разнообразии и ассоциации морфологии клеток с признаками стволовости и ЭМП. Кроме того, фундаментальных характер имеют полученные результаты об особенностях микроокружения ООК, ассоциированных с гематогенным метастазированием, обусловленные соотношением ТЫ - и -подобных иммуновоспалительных реакций вблизи ООК. Полученные данные могут быть использованы при разработке новых эффективных терапевтических подходов, включая иммунотерапию, для профилактики гематогенного метастазирования и улучшения отдаленных результатов лечения.

Практическую значимость работы обусловливают данные о независимости прогностической ценности доли нестволовых (по экспрессии CD44/CD24) эпителиальных Ерсат+СК7- ООК с признаками ЭМП при определении риска развития гематогенных метастазов у больных люминальными подтипами ИКНТ, не получавших в предоперационном периоде неоадъювантной химиотерапии. При этом доля нестволовых эпителиальных Ерсат+СК7- одиночных опухолевых клеток с признаками ЭМП, превышающая 4,91% является независимым прогностическим критерием не только риска развития гематогенных метастазов, но и безметастатической выживаемости.

Методология и методы исследования

В исследование включены 230 пациенток с ИКНТ в возрасте 29-80 лет. Стадия и распространенность опухолевого процесса - 1А - ША - Т1-3Ш-3М0, люминальные молекулярно-генетические подтипы. Пациентам по показаниям проведена послеоперационная химио-, гормонотерапия, дистанционная лучевая терапия. Адъювантная химиотерапия проводилась в соответствии с показаниями. Интраоперационная лучевая терапия в дозе 10 Гр проводилась при выполнении органосохраняющих операций. В исследуемой группе произведена оценка основных клинико-патологических параметров: размер опухоли, степень злокачественности, наличие рецидива, лимфогенных и гематогенных метастазов, менопаузальный статус. У всех обследованных лиц было получено добровольное информированное согласие на проведение необходимых для исследования манипуляций в соответствии с требованиями локального этического комитета НИИ онкологии Томского НИМЦ (протокол №5 от 24.04.2015 года).

Материал исследования: для проведения молекулярно-генетических исследований были использованы свежезамороженные образцы опухолевой и прилегающей неизмененной ткани молочной железы. Материалом для иммуногистохимического и мультиплексного 7-цветного

иммунофлуоресцентного исследования служили фрагменты опухоли (операционный материал), фиксированные в формалине и заключенные в парафин. Стабилизированная венозная кровь, взятая за 1-2 дня до оперативного лечения, была использована для оценки ЦОК.

ПОЛОЖЕНИЯ ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Морфофункциональная гетерогенность опухолевых элементов при люминальных формах инвазивной карциномы молочной железы неспецифического типа ассоциирована с гематогенным

метастазированием. Наличие одиночных опухолевых клеток в ткани первичной опухоли, не зависимо от их морфологии, ассоциировано с высокой частотой развития гематогенных метастазов и более короткой безметастатической выживаемостью, но не связано с безрецидивной выживаемостью.

2. Гематогенное метастазирование ассоциировано с отсутствием в одиночных опухолевых клетках эпителиальной морфологии стволовых свойств (по экспрессии CD44/CD24) и наличием гибридного фенотипа эпителиально-мезенхимального перехода.

3. Фактором, определяющим метастатические потенции одиночных опухолевых клеток, является преобладание в их микроокружении иммуновоспалительной реакции -подобного типа.

4. Низкая экспрессия гена СЭ52 и гиперэкспрессия гена ЬРСЛТ1 в микроокружении одиночных опухолевых клеток являются индикатором риска развития гематогенных метастазов.

Степень достоверности результатов

Высокая достоверность полученных результатов подтверждается достаточным объемом клинического материала, а также использованием адекватных поставленным задачам методологий и современных методов статистического анализа.

Апробация материалов диссертации

Материалы диссертации были доложены и обсуждены на следующих научно-практических конференциях: конференции ЕМВО «Клеточные и молекулярные механизмы взаимоотношения опухоли и микроокружения» (Томск, 2015); международной конференции «Физика рака: трансдисциплинарные проблемы и клинические применения» (Томск); 1-й

конференции EACR-MRS "Семена и почва: in vivo модели метастазирования" (Берлин, 2017), 22-й Международной конференции им. Чарльза Хайдельберга (Томск, 2018); IV, V и VI Петербургском международном онкологическом форуме «Белые ночи» (Санкт-Петербург, 2018, 2019, 2020); Научно-практической конференции «Фундаментальная и клиническая онкология: достижения и перспективы развития» (Томск, 2019); конференции EACR -ESMO по жидкостной биопсии (Бергамо, 2019); 44-ом конгрессе ESMO (Барселона, 2019); конференции EACR-AACR по трансляционным исследованиям микроокружения опухоли (Лиссабон, 2020).

Диссертационная работа была выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда (№ 14-15-00318 "Клонально-инвазивная архитектоника опухоли как новая исследовательская платформа для разработки предиктивных и прогностических критериев рака молочной железы", № 16-15-10221 "Условия и особенности рекрутирования в циркуляцию различных субпопуляций опухолевых клеток, включая стволовые и в состоянии эпителиально-мезенхимального перехода, как платформа для прогнозирования развития метастазов"). Диссертационная работа выполнена с использованием оборудования ЦКП «Медицинская геномика» Томского НИМЦ.

Публикации результатов исследования

По теме диссертации опубликовано 29 печатных работ, в том числе 1 монография, 18 статей в журналах, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией РФ, получен 1 патент на изобретение.

Внедрение результатов исследования в клиническую практику

Научные положения и практические рекомендации, сформулированные в диссертации, в настоящее время используются в процессе обучения

студентов и аспирантов кафедры патологической анатомии Сибирского государственного медицинского университета. Результаты исследования внедрены в клиническую работу отделения общей и молекулярной патологии НИИ онкологии Томского НИМЦ.

Личный вклад автора

Диссертационная работа является самостоятельным научным трудом, выполненным на нескольких научных базах, в частности, раздел морфологических исследований выполнялся в отделении общей и молекулярной патологии НИИ онкологии; раздел молекулярно-генетических исследований в отделении молекулярной онкологии и иммунологии, а также лаборатории биологии опухолевой прогрессии НИИ онкологии. Выполнение клинического блока диссертации осуществлялось на базе отделения общей онкологии НИИ онкологии Томского НИМЦ.

Все разделы диссертации выполнены лично автором. Автором осуществлялись планирование и проведение морфологических, иммуногистохимических и молекулярно-генетических исследований, а также анализ результатов, полученных в ходе работ. Автором самостоятельно проводилась работа с амбулаторными картами пациентов для отслеживания отдаленных результатов лечения, анализ фактического материала, статистическая обработка и интерпретация полученных результатов.

Автором лично написаны все главы диссертации, а также оформлены полученные результаты в виде статей и патента, отражающих сведения по клиническим, иммуногистохимическим и молекулярно-генетическим исследованиям.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 193 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследования, 5 глав собственных исследований с обсуждением полученных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций, включает список сокращений и список литературы. Работа иллюстрирована 29 рисунками и 38 таблицами. Список литературы содержит 241 источника, из которых 6 отечественных и 235 зарубежных.

Соответствие диссертации паспортам научных специальностей

Основные результаты работы, научные положения и выводы, описанные в диссертационной работе, соответствуют паспорту специальности «3.1.6 -Онкология, лучевая терапия» («медицинские науки»).

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Биологические характеристики прогрессии рака молочной железы Рак молочной железы является преобладающим в структуре онкологической заболеваемости женского населения. В 2020 году в России впервые в жизни рак молочной железы был выявлен у 64951 человек, при этом средний возраст составил 61 год. В структуре смертности женщин наибольший удельный вес также имеет рак молочной железы [3]. Люминальный подтип РМЖ имеет относительно хороший прогноз, но, поскольку он составляет около 70% случаев, абсолютное количество случаев метастазирования при люминальном подтипе РМЖ значительно больше, чем в других подтипах, особенно в долгосрочной перспективе. Например, в исследовании Maaren et al. (2019), которые представили десятилетнюю частоту метастазирования для разных подтипов РМЖ, количество пациентов с отдаленными метастазами в люминальных подтипах достигло около 10%, тогда как в других подтипах достигло только 4% от всех пациентов в исследовании, несмотря на значительную более низкую частоту метастазирования в люминальных подтипах [209].

Список литературы диссертационного исследования доктор наук Таширева Любовь Александровна, 2022 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Завьялова М.В. Сопряженность лимфогенного метастазирования и гистологического строения инфильтративного компонента протокового рака молочной железы / М.В. Завьялова, В.М. Перельмутер, Е.М. Слонимская [и др.] // Сибирский онкологический журнал. - 2006. - № 1. - С. 32-35.

2. Имянитов Е.Н. Биология рака молочной железы / Е.Н. Имянитов / Практическая онкология. - 2017. - № 3. - С. 221-231.

3. Каприн А.Д. Злокачественные новообразования в России в 2020 году (заболеваемость и смертность) / А.Д. Каприн, В.В. Старинский, А.О. Шахзадова - М.: МНИОИ им. П.А. Герцена - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, - 2021. - 252 с.

4. Перельмутер В.М. Прениша как отсутствующее звено концепции метастатических ниш, объясняющее избирательное метастазирование злокачественных опухолей и форму метастатической болезни / В.М. Перельмутер, В.Н. Манских // Биохимия. — 2012. — Т. 77. - № 1. — С. 130-139.

5. Стенина М.Б. Изменения в нео- и адъювантном лечении рака молочной железы за последние 5 лет / М.Б. Стенина, М.А. Фролова, Д.З. Купчан [и др.] // Практическая онкология. - 2017. - № 3. - С. 256-264.

6. Стенина М.Б. Практические рекомендации по лекарственному лечению инвазивного рака молочной железы / М.Б. Стенина, Л.Г. Жукова, И.А. Королева [и др.] // Злокачественные опухоли: практические рекомендации RUSSCO. - 2018. - Т. 8. - С. 113-144.

7. Abreu M. Looking for a Better Characterization of Triple-Negative Breast Cancer by Means of Circulating Tumor Cells / M. Abreu, P. Cabezas-Sainz, T. Pereira-Veiga [и др.] // J Clin Med. - 2020. - Vol. 9(2). - Р.

8. Aceto N. Circulating tumor cell clusters are oligoclonal precursors of breast cancer metastasis / N. Aceto, A. Bardia, D.T. Miyamoto [h gp.] // Cell. - 2014.

- Vol. 158(5). - P. 1110-1122.

9. Aktas B. Stem cell and epithelial-mesenchymal transition markers are frequently overexpressed in circulating tumor cells of metastatic breast cancer patients / B. Aktas, M. Tewes, T. Fehm [h gp.] // Breast Cancer Res. BCR. -2009. - Vol. 11. - R46.

10.Al-Hajj M. Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells. / M. Al-Hajj, M.S. Wicha, A. Benito-Hernandez [h gp.] // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. - 2003. - Vol. 100. - P. 3983-3988.

11.Al-Hajj M. Self-renewal and solid tumor stem cells. / M. Al-Hajj, M Clarke. // Oncogene. - 2004. - Vol. 23. - P. 7274-7282.

12.Ali H.R. Patterns of Immune Infiltration in Breast Cancer and Their Clinical Implications: A Gene-Expression-Based Retrospective Study / H.R. Ali, L. Chlon, P.D.P. Pharoah [h gp.] // PLoS Med. - 2016. - Vol. 13(12). - P. e1002194.

13.Altman D.G. Prognostic models: a methodological framework and review of models for breast cancer / D.G. Altman // Cancer Investig. - 2009. - Vol. 27(3). - P. 235-43.

14.Amgad M. International Immuno-Oncology Biomarker Working Group. Report on computational assessment of Tumor Infiltrating Lymphocytes from the International Immuno-Oncology Biomarker Working Group / M. Amgad, E.S. Stovgaard, E. Balslev [h gp.] // NPJ Breast Cancer. - 2020. - Vol. 12(6).

- P. 16.

15.Anderberg C. Deficiency for endoglin in tumor vasculature weakens the endothelial barrier to metastatic dissemination / C. Anderberg, S.I. Cunha, Z. Zhai [h gp.] // J. Exp. Med. - 2013. - Vol. 210. - P. 563-579.

16.Anderson R.L. A framework for the development of effective anti-metastatic agents / R.L. Anderson, T. Balasas, J. Callaghan [h gp.] // Nat Rev Clin Oncol.

- 2019. - Vol. 16(3). - P. 185-204.

17.Andre F. Use of Biomarkers to Guide Decisions on Adjuvant Systemic Therapy for Women with Early-Stage Invasive Breast Cancer: ASCO Clinical Practice Guideline Update-Integration of Results from TAILORx / F. Andre, N. Ismaila, N.L. Henry [h gp.] // J Clin Oncol. - 2019. - Vol. 37(22). - P. 1956-1964.

18.Armstrong A.J. Circulating tumor cells from patients with advanced prostate and breast cancer display both epithelial and mesenchymal markers / A.J. Armstrong, M.S. Marengo, S. Oltean [h gp.] // Mol Cancer Res. - 2011. -Vol. 9(8). - P. 997-1007.

19.Arwert E.N. A unidirectional transition from migratory to perivascular macrophage is required for tumor cell intravasation / E.N. Arwert, A.S. Harney, D. Entenberg [h gp.] // Cell Rep. - 2018. - Vol. 23. - P. 1239-1248.

20.Bando J.K. Innate lymphoid cell function in the context of adaptive immunity / J.K. Bando, M. Colonna // Nat Immunol. - 2016. - Vol. 17(7). - P. 783-9.

21.Barbazan J. Liver metastasis is facilitated by the adherence of circulating tumor cells to vascular fibronectin deposits / J. Barbazan, L. Alonso-Alconada, N. Elkhatib [h gp.] // Cancer Res. - 2017. - Vol. 77(13). - P. 343141.

22.Barcellos-Hoff M.H. The evolution of the cancer niche during multistage carcinogenesis / M.H. Barcellos-Hoff, D. Lyden, T.C. Wang // Nat Rev Cancer. - 2013. - Vol. 13(7). - P. 511-8.

23.Bassani B. Natural Killer Cells as Key Players of Tumor Progression and Angiogenesis: Old and Novel Tools to Divert Their Pro-Tumor Activities into Potent Anti-Tumor Effects / B. Bassani, D. Baci, M. Gallazzi [h gp.] // Cancers. - 2019. - Vol. 11(4). - P.

24.Bersini S. A combined microfluidic-transcriptomic approach to characterize the extravasation potential of cancer cells / S. Bersini, A. Miermont, A. Pavesi [h gp.] // Oncotarget. - 2018. - Vol. 9(90). - P.36110.

25.Bhat-Nakshatri P. Identification of FDA-approved drugs targeting breast cancer stem cells along with biomarkers of sensitivity / P. Bhat-Nakshatri, C.P. Goswami, S. Badve [h gp.] // Sci Rep. - 2013. - Vol. 3. - P. 2530.

26.Bidard F.C. Circulating Tumor Cells in Breast Cancer Patients Treated by Neoadjuvant Chemotherapy: A Meta-analysis / F.C. Bidard, S. Michiels, S. Riethdorf [h gp.] // J Natl Cancer Inst. - 2018. - Vol. 110(6). - P. 560-567.

27.Boral D. Molecular characterization of breast cancer CTCs associated with brain metastasis / D. Boral, M. Vishnoi, H.N. Liu [h gp.] // Nat Commun. -2017. - Vol. 8(1). - P. 196.

28.Bronsert P. Cancer cell invasion and EMT marker expression: a three-dimensional study of the human cancer-host interface / P. Bronsert, K. Enderle-Ammour, M. Bader [h gp.] // J. Pathol. - 2014. - Vol. 234. - P. 410422.

29.Bruchard M. Deciphering the Roles of Innate Lymphoid Cells in Cancer / M. Bruchard, F. Ghiringhelli // Front Immunol. - 2019. - Vol. 10. - P. 656.

30.Bruno A. Angiogenin and the MMP9-TIMP2 axis are up-regulated in proangiogenic, decidual NK-like cells from patients with colorectal cancer / A. Bruno, B. Bassani, D.G. D'Urso [h gp.] // FASEB J Off Publ Fed Am Soc Exp Biol. - 2018. - Vol. 32(10). - P. 5365-77.

31.Bruno A. The proangiogenic phenotype of natural killer cells in patients with non-small cell lung cancer / A. Bruno, C. Focaccetti, A. Pagani [h gp.] // Neoplasia. - 2013. - Vol. 15(2). - P. 133-42.

32.Buess M. Tumor-endothelial interaction links the CD44(+)/CD24(-) phenotype with poor prognosis in early-stage breast cancer / M. Buess, M. Rajski, B.M. Vogel-Durrer [h gp.] // Neoplasia. - 2009. - Vol. 11(10). - P. 987-1002.

33.Bulfoni M. Dissecting the Heterogeneity of Circulating Tumor Cells in Metastatic Breast Cancer: Going Far Beyond the Needle in the Haystack / M. Bulfoni, M. Turetta, F. Del Ben [h gp.] // Int J Mol Sci. - 2016. - Vol. 17(10). - P.

34.Burr M.L. CMTM6 maintains the expression of PD-L1 and regulates anti-tumour immunity / M.L. Burr, C.E. Sparbier, Y.C. Chan [h gp.] // Nature. -2017. - Vol. 549. - P. 101-105.

35.Candido Dos Reis F.J. An updated PREDICT breast cancer prognostication and treatment benefit prediction model with independent validation / F.J. Candido Dos Reis, G.C. Wishart, E.M. Dicks [h gp.] // Breast Cancer Res. -2017. - Vol. 19. - P.58.

36.Carragher N.O. Calpain 2 and Src dependence distinguishes mesenchymal and amoeboid modes of tumour cell invasion: a link to integrin function / N.O. Carragher, S.M. Walker, L.A. Scott Carragher [h gp.] // Oncogene. - 2006. -Vol. 25. - P. 5726-5740.

37.Carrasco E. Cancer stem cells and their implication in breast cancer / E. Carrasco, P.J. Alvarez, J. Prados [h gp.] // Eur J Clin Invest. - 2014. - Vol. 44(7). - P. 678-87.

38.Chabottaux V. Membrane-type 4 matrix metalloproteinase (MT4-MMP) induces lung metastasis by alteration of primary breast tumour vascular architecture / V. Chabottaux, S. Ricaud, L. Host [h gp.] // J. Cell. Mol. Med. - 2009. - Vol. 13. - P. 4002-4013.

39.Chaffer C.L. A perspective on cancer cell metastasis / C.L. Chaffer, R.A. Weinberg // Science. - 2011. - Vol. 331(6024). - P. 1559-64.

40.Chambers A.F. Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites / A.F. Chambers, A.C. Groom, I.C. MacDonald // Nat Rev Cancer. - 2002. -Vol. 2(8). - P. 563-72.

41.Chang J. Beyond proteases: basement membrane mechanics and cancer invasion / J. Chang, O. Chaudhuri // J. Cell Biol. - 2019. - Vol. 218. - P. 2456-2469.

42.Chiang S.P.H. Tumor cell intravasation, Am. J. Physiol / S.P.H. Chiang, R.M. Cabrera, J.E. Segall // Cell Physiol. - 2016. - Vol. 311. - P. 1-14.

43.Chitty J.L. Recent advances in understanding the complexities of metastasis Cox / J.L. Chitty, E.C. Filipe, M.C. Lucas [h gp.] // Paul Timpson Version 2. F1000Res. - 2018. - Vol. 7. - P. 1169.

44.Choi P.W. Loss of E-cadherin disrupts ovarian epithelial inclusion cyst formation and collective cell movement in ovarian cancer cells / P.W. Choi, J. Yang, S.K. Ng [h gp.] // Oncotarget. - 2015. - Vol. 7. - P. 4110-4121.

45.Chuai M. Collective epithelial and mesenchymal cell migration during gastrulation / M. Chuai, D. Hughes, C.J. Weijer // Current genomics. - 2012. - Vol. 13. - P. 267-277.

46.Clark A.G. Modes of cancer cell invasion and the role of the microenvironment / A.G. Clark, D.M. Vignjevic // Curr. Opin. Cell Biol. -2015. - Vol. 36. - P. 13-22.

47.Contreras H.R. Cancer stem cell and mesenchymal cell cooperative actions in metastasis progression and hormone resistance in prostate cancer: Potential role of androgen and gonadotropin-releasing hormone receptors (Review) / H.R. Contreras, F. López-Moncada, E.A. Castellón // Int J Oncol. - 2020. -Vol. 56(5). - P. 1075-1082.

48.Dawson H. The apoptotic and proliferation rate of tumour budding cells in colorectal cancer outlines a heterogeneous population of cells with various impacts on clinical outcome / H. Dawson, V.H. Koelzer, E. Karamitopoulou [h gp.] // Histopathology. - 2014. - Vol. 64(4). - P. 577-84.

49.Dawson H. Molecular and pathogenetic aspects of tumor budding in colorectal cancer / H. Dawson, A. Lugli // Front Med (Lausanne). - 2015. -Vol. 2. - P. 11

50.Denisov E.V. Clinically relevant morphological structures in breast cancer represent transcriptionally distinct tumor cell populations with varied degrees of epithelial-mesenchymal transition and CD44+CD24-stemness / E.V. Denisov, N.A. Skryabin, T.S. Gerashchenko [h gp.] // Oncotarget. - 2017. -Vol. 8(37). - P. 61163-61180.

51.Denisov E.V. Invasive and drug resistant expression profile of different morphological structures of breast tumors / E.V. Denisov, T.S. Gerashchenko, M.V. Zavyalova [h gp.] // Neoplasma. - 2015. - Vol. 62. - P. 405-411.

52.Denisov E.V. Intratumoral morphological heterogeneity of breast cancer: neoadjuvant chemotherapy efficiency and multidrug resistance gene expression / E.V. Denisov, N.V. Litviakov, M.V. Zavyalova [h gp.] // Sci Rep.

- 2014. - Vol. 4. - P. 4709

53.Denkert C. Tumour-infiltrating lymphocytes and prognosis in different subtypes of breast cancer: a pooled analysis of 3771 patients treated with neoadjuvant therapy / C. Denkert, G. von Minckwitz, S. Darb-Esfahani [h gp.] // Lancet Oncol. - 2018. - Vol. 19. - P. 40-50

54.Deryugina E.I. Intratumoral Cancer Cell Intravasation can occur Independent of Invasion into the Adjacent Stroma Kiosses / E.I. Deryugina, B. William // Cell Rep. - 2017. - Vol. 19(3). - P. 601-616.

55.Di Lorenzo A. Toll-Like Receptor 2 at the Crossroad between Cancer Cells, the Immune System, and the Microbiota / A. Di Lorenzo, E. Bolli, L. Tarone [h gp.] // Int J Mol Sci. - 2020. - Vol. 21(24).

56.Dobin A. STAR: ultrafast universal RNA-seq aligner / A. Dobin, C.A. Davis, F. Schlesinger [h gp.] // Bioinformatics. - 2013. - Vol. 29(1). - P. 15-21.

57.Dragoi D. Twist1 induces distinct cell states depending on TGFBR1-activation / D. Dragoi, A. Krattenmacher, V.K. Mishra [h gp.] // Oncotarget.

- 2016. - Vol. 7. - P. 30396-30407.

58.Dudeck A. Mast cells are key promoters of contact allergy that mediate the adjuvant effects of haptens / A Dudeck., J. Dudeck, J. Scholten [h gp.] // Immunity. - 2011. - Vol. 34. - P. 973-984.

59.Ebbo M. Innate lymphoid cells: major players in inflammatory diseases / M. Ebbo, A. Crinier, F. Vely [h gp.] // Nat Rev Immunol. - 2017. - Vol. 17(11).

- P. 665-78.

óü.Eberl G. Innate lymphoid cells. Innate lymphoid cells: a new paradigm in immunology / G. Eberl, M. Colonna, J.P. Di Santo // Science. - 2015. - Vol. 348(6237). - P. aaa6566.

61.Eberl G. The brave new world of innate lymphoid cells / G. Eberl, J.P. Di Santo, E. Vivier // Nat Immunol. - 2015. - Vol. 16(1). - P. 1-5.

62.Eichinger L. The genome of the social amoeba Dictyostelium discoideum / L. Eichinger, J.A. Pachebat, G. Glöckner [h gp.] // Nature. - 2005. - Vol. 435. - P. 43-57.

63.Enderle-Ammour K. Form follows function: Morphological and immunohistological insights into epithelial-mesenchymal transition characteristics of tumor buds / K. Enderle-Ammour, M. Bader, T.D. Ahrens [h gp.] // Tumour Biol. - 2017. - Vol. 39. - P. 1010428317705501

64.Engler A.J. Carcinoma-associated fibroblasts lead the invasion of salivary gland adenoid cystic carcinoma cells by creating an invasive track / A.J. Engler, J. Li, Z. Jia [h gp.] // PLoS One. - 2016. - Vol. 11. - P.

65.Eyre R. Microenvironmental IL1ß promotes breast cancer metastatic colonisation in the bone via activation of Wnt signalling / R. Eyre, D.G. Alférez, A. Santiago-Gómez [h gp.] // Nat Commun. - 2019. - Vol. 10. - P. 5016.

66.Farmaki E. A CCL8 gradient drives breast cancer cell dissemination / E. Farmaki, I. Chatzistamou, V. Kaza [h gp.] // Oncogene. - 2016. - 35. - P. 6309-6318.

67.Friedl P. Cancer invasion and the microenvironment: plasticity and reciprocity / P. Friedl, S. Alexander // Cell. - 2011. - Vol. 147. - P. 992-1009.

68.Friedl P. Amoeboid leukocyte crawling through extracellular matrix: lessons from the Dictyostelium paradigm of cell movement / P. Friedl, S. Borgmann, E.B. Bröcker // J. Leukoc. Biol. - 2001. - Vol. 70. - P. 491-509.

69.Frohlich C. ADAM12 is expressed in the tumour vasculature and mediates ectodomain shedding of several membrane-anchored endothelial proteins / C.

Fröhlich, M. Klitgaard, J.B. Noer // Biochem. J. - 2013. - Vol. 452. - P. 97109.

70.Gaggioli C. Fibroblast-led collective invasion of carcinoma cells with differing roles for RhoGTPases in leading and following cells / C. Gaggioli, S. Hooper, C. Hidalgo-Carcedo [h gp.] // Nat. Cell Biol. - 2007. - Vol. 9. -P. 1392-1400.

71.Galván J.A. TWIST1 and TWIST2 promoter methylation and protein expression in tumor stroma influence the epithelial-mesenchymal transitionlike tumor budding phenotype in colorectal cancer / J.A. Galván, M. Helbling, V.H. Koelzer [h gp.] // Oncotarget. - 2015. - Vol. 6. - P. 874-885.

72.García-Teijido P. Tumor-infiltrating lymphocytes in triple-negative breast cancer: the future of immune targeting / P. García-Teijido, M.L. Cabal, I.P. Fernández // Clin Med Insights Oncol. - 2016. - Vol. 10. - P. 31-39.

73.Gavert N. Nuclear factor-kappaB signaling and ezrin are essential for L1-mediated metastasis of colon cancer cells / N. Gavert, A. Ben-Shmuel, V. Lemmon [h gp.] // J Cell Sci. - 2010. - Vol. 123. - P. 2135-2143

74.Ge H. Overview of advances in vasculogenic mimicry - a potential target for tumor therapy / H. Ge, H. Luo // Cancer Manag Res. - 2018. - Vol. 10. - P. 2429-2437.

75.Gerashchenko T.S. Different morphological structures of breast tumors demonstrate individual drug resistance gene expression profiles / T.S. Gerashchenko, E.V. Denisov, N.M. Novikov [h gp.] // Exp Oncol. - 2018. -Vol. 40(3). - P. 228-234.

76.Gerashchenko T.S. Intratumoral morphological heterogeneity in breast cancer as a reflection of metastatic potential and tumor chemosensitivity / T.S. Gerashchenko, M.V. Zavyalova, E.V. Denisov [h gp.] // Acta Naturae. -2017. - Vol. 9. - P. 56-67.

77.Giampieri S. Localized and reversible TGFbeta signalling switches breast cancer cells from cohesive to single cell motility / S. Giampieri, C. Manning, S. Hooper [h gp.] // Nat. Cell Biol. - 2009. - Vol. 11. - P. 1287-1296.

78.Ginter P.S. Tumor Microenvironment of Metastasis (TMEM) Doorways Are Restricted to the Blood Vessel Endothelium in Both Primary Breast Cancers and Their Lymph Node Metastases / P.S. Ginter, G.S. Karagiannis, D. Entenberg [h gp.] // Cancers (Basel). - 2019. - Vol. 11(10). - P. 1507.

79.Giordano A. CTCs in metastatic breast cancer / A Giordano, M. Cristofanilli // Recent Results Cancer Res. - 2012. - Vol. 195. - P. 193-201.

80.Gkretsi V. Cell adhesion and matrix stiffness: coordinating cancer cell invasion and metastasis / V. Gkretsi, T. Stylianopoulos // Front Oncol. - 2018. - Vol. 8. - P. 145.

81.Gligorijevic B. N-WASP-mediated invadopodium formation is involved in intravasation and lung metastasis of mammary tumors / B. Gligorijevic, J. Wyckoff, H. Yamaguchi // J. Cell Sci. - 2012. - Vol. 125. - P. 724-734.

82.Gnant M. St. Gallen/Vienna 2015: A Brief Summary of the Consensus Discussion / M. Gnant, C. Thomssen, N. Harbeck // Breast Care (Basel). -2015. - Vol. 10(2). - P. 124-30.

83.Golle L. Bone marrow-derived cells and their conditioned medium induce microvascular repair in uremic rats by stimulation of endogenous repair mechanisms / L. Golle, H.U. Gerth, K. Beul [h gp.] // Sci Rep. - 2017. - Vol. 7. - p. 9444

84.Gomis R.R. Tumor cell dormancy / R.R. Gomis, S. Gawrzak // Mol Oncol. -2017. - Vol. 11(1). - P. 62-78.

85.Gravdal K. A switch from E-cadherin to N-cadherin expression indicates epithelial to mesenchymal transition and is of strong and independent importance for the progress of prostate cancer / K. Gravdal, O.J. Halvorsen, S.A. Haukaas // Clin Cancer Res. - 2007. - Vol. 13(23). - P. 7003-11.

86.Gray E. Independent validation of the PREDICT breast cancer prognosis prediction tool in 45,789 patients using Scottish Cancer Registry data / E. Gray, J. Marti, D.H. Brewster [h gp.] // Br J Cancer. - 2018. - Vol. 119. - P. 808-814.

87.Gu-Trantien C. CD4+ follicular helper T cell infiltration predicts breast cancer survival / C. Gu-Trantien, S. Loi, S. Garaud [h gp.] // J Clin Invest. -2013. - Vol. 123. - P. 2873-92

88.Gui P. The protease-dependent mesenchymal migration of tumor-associated macrophages as a target in cancer immunotherapy / P. Gui, M. Ben-Neji, E. Belozertseva [h gp.] // Cancer immunology research. - 2018. - Vol. 6. - P. 1337-1351.

89.Gui P. Rho/ROCK pathway inhibition by the CDK inhibitor p27(kip1) participates in the onset of macrophage 3D-mesenchymal migration / P. Gui, A. Labrousse, E. Van Goethem [h gp.] // J. Cell Sci. - 2014. - Vol. 127. - P. 4009-4023.

90.Gujam F.J. The relationship between tumour budding, the tumour microenvironment and survival in patients with invasive ductal breast cancer / F.J. Gujam, D.C. McMillan, Z.M. Mohammed [h gp.] // Br. J. Cancer. -2015. - Vol. 113. - P. 1066-1074.

91.Guo L. Induction of breast cancer stem cells by M1 macrophages through Lin-28B-let-7-HMGA2 axis / L. Guo, X. Cheng, H. Chen // Cancer Lett. - 2019. - Vol. 452. - P. 213-225.

92.Gwark S. Analysis of the serial circulating tumor cell count during neoadjuvant chemotherapy in breast cancer patients / S. Gwark, J. Kim, NJ. Kwon [h gp.] // Sci Rep. - 2020. - Vol. 10. - P. 17466.

93.Gyorki D. Resident macrophages influence stem cell activity in the mammary gland / D. Gyorki, M. Asselin-Labat, N. van Rooijen [h gp.] // Breast Cancer Res. - 2009. - Vol. 11. - P. R62

94.Haeger A. Collective cancer invasion forms an integrin-dependent radioresistant niche / A. Haeger, S. Alexander, M. Vullings [h gp.] // The Journal of Experimental Medicine. - Vol. 217.

95.Hamilton M.A. Cancer stemness, intratumoral heterogeneity, and immune response across cancers / M.A. Hamilton, P.T. Zhang, A.W. Pattnaik [h gp.] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2019. - Vol. 116. - P. 9020-9029.

96.Haybittle J.L. A prognostic index in primary breast cancer / J.L. Haybittle, R.W. Blamey, C.W. Elston [h gp.] // Br J Cancer. - 1982. - Vol. 45. - P. 361366.

97.Helvert S. Strain stiffening of fibrillar collagen during individual and collective cell migration identified by AFM nanoindentation / S. Helvert, P. Friedl // ACS Appl. Mater. Interfaces. - 2016. - Vol. 8. - P. 21946-21955.

98.Holle A.W. Cancer cells invade confined microchannels via a self-directed mesenchymal-to-amoeboid transition / A.W. Holle, N. Govindan Kutty Devi, K. Clar [h gp.] // Nano letters. - 2019. - Vol. 19. - P. 2280-2290.

99.Hou A. Targeting myeloid- derived suppressor cell, a promising strategy to overcome resistance to im- mune checkpoint inhibitors / A. Hou, K. Hou, Q. Huang [h gp.] // Front. Immunol. - 2020. - Vol. 11. - P. 783.

100. Houzé de l'Aulnoit A. Metastasis-free interval in breast cancer patients: Thirty-year trends and time dependency of prognostic factors. A retrospective analysis based on a single institution experience / A. Houzé de l'Aulnoit, B. Rogoz, C. Pinçon [h gp.] // Breast. - 2018. - Vol. 37. - P. 80-88.

101. Hynes W. Examining metastatic behavior within 3D bioprinted vasculature for the validation of a 3D computational flow model / W. Hynes, M. Pepona, C. Robertson [h gp.] // Sci Adv. - 2020. - Vol. 6(35). - P. eabb3308.

102. Irshad S. RORgammat(+) Innate Lymphoid Cells Promote Lymph Node Metastasis of Breast Cancers / S Irshad, F Flores-Borja, K. Lawler [h gp.] // Cancer Res. - 2017. - Vol. 77(5). - P. 1083-96.

103. Jackson H.W. The single-cell pathology landscape of breast cancer / H.W. Jackson, J.R. Fischer, V.R.T. Zanotelli [h gp.] // Nature. - 2020. - Vol. 578(7796). - P. 615-620.

104. Jain S. Incremental increase in VEGFR1+ hematopoietic progenitor cells and VEGFR2+ endothelial progenitor cells predict relapse and lack of tumor response in breast cancer patients / S. Jain, M.M. Ward, J. O'Loughlin [h gp.] // Breast Cancer Res Treat. - 2012. - Vol. 132(1). - P. 235-42.

105. Jakabova A. Molecular characterization and heterogeneity of circulating tumor cells in breast cancer / A. Jakabova, Z. Bielcikova, E. Pospisilova [h gp.] // Breast Cancer Res. Treat. - 2017. - Vol. 166:695. - P. 700.

106. Jang N. Prognostic value of tumor-infiltrating lymphocyte density assessed using a standardized method based on molecular subtypes and adjuvant chemotherapy in invasive breast Cancer / N. Jang, H.J. Kwon, M.H. Park [h gp.] // Ann Surg Oncol. - 2018. - Vol. 25. - P. 937-46.

107. Jovanovic I.P. Interleukin-33/ST2 axis promotes breast cancer growth and metastases by facilitating intratumoral accumulation of immunosuppressive and innate lymphoid cells / I.P. Jovanovic, N.N. Pejnovic, G.D. Radosavljevic [h gp.] // Int J Cancer. - 2014. - Vol. 134(7). -P. 1669-82.

108. Kalluri R. The basics of epithelial-mesenchymal transition / R. Kalluri, R.A. Weinberg // J Clin Invest. - 2009. - 119(6). - P. 1420-8.

109. Kaplan R.N. VEGFR1-positive haematopoietic bone marrow progenitors initiate the pre-metastatic niche / R.N. Kaplan, R.D. Riba, S. Zacharoulis [h gp.] // Nature. - 2005. - Vol. 438(7069). - P. 820-7.

110. Kleffel S. Tumor dormancy and cancer stem cells: two sides of the same coin? / S. Kleffel, T. Schatton // Adv Exp Med Biol. - 2013. - Vol. 734. - P. 145-79.

111. Kosla J. Metastasis of aggressive amoeboid sarcoma cells is dependent on Rho/ROCK/MLC signaling / J. Kosla, D. Pankova, J. Plachy [h gp.] // J Cell Commun Signal. - 2013. - Vol. 11. - P. 51.

112. Kotoula V. Tumors with high-density tumor infiltrating lymphocytes constitute a favorable entity in breast cancer: a pooled analysis of four prospective adjuvant trials / V Kotoula, K Chatzopoulos, S. Lakis [h gp.] // Oncotarget. - 2016. - Vol. 7.

113. Kumar S. Proteolytic and non-proteolytic regulation of collective cell invasion: tuning by ECM density and organization / S. Kumar, A. Kapoor, S. Desai [h gp.] // Sci. Rep. - 2016. - Vol. 6. - P. 19905.

114. Laedrach C. Immunophenotypic profile of tumor buds in breast cancer / C. Laedrach, B. Salhia, N. Cihoric [h gp.] // Pathol. Res. Pract. - 2018. -Vol. 214. - P. 25-29.

115. Lakhani S.R., Ellis I.O., Schnitt S.J. [h gp.] World Health Organization (WHO) classification of tumours of the breast. Lyon, France: IARC Press.

116. Lapeyre-Prost A. Immunomodulatory Activity of VEGF in Cancer / A. Lapeyre-Prost, M. Terme, S. Pernot [h gp.] // Int Rev Cell Mol Biol. - 2017.

- Vol. 30. - P. 295-342.

117. Lee A.H. The Nottingham prognostic index for invasive carcinoma of the breast / A.H. Lee, I.O. Ellis // Pathol Oncol Res. - 2008. - Vol. 14. - P. 113-115.

118. Lehmann S. Hypoxia induces a HIF-1-dependent transition from collective-to-amoeboid dissemination in epithelial cancer cells / S. Lehmann, V. Te Boekhorst, J. Odenthal [h gp.] // Current biology. - 2017. - Vol. 27. -P.392-400.

119. Leong H.S. Invadopodia are required for cancer cell extravasation and are a therapeutic target for metastasis / H.S. Leong, A.E. Robertson, K. Stoletov [h gp.] // Cell Rep. - 2014. - Vol. 8(5). - P. 1558-70.

120. Levi I. Characterization of tumor infiltrating natural killer cell subset / I. Levi, H. Amsalem, A. Nissan [h gp.] // Oncotarget. - 2015. - Vol. 6(15). -P.13835-43.

121. Li J. Adhesion receptors as therapeutic targets for circulating tumor cells / J. Li, M.R. King // Front Oncol. - 2012. - Vol. 2. - P. 79.

122. Liang F. The prognostic value of tumor budding in invasive breast cancer / F. Liang, W. Cao, Y. Wang // Pathol. Res. Pract. - 2013. - Vol. 209.

- P. 269-275.

123. Liao W.T. Metastatic cancer stem cells: from the concept to therapeutics / W.T. Liao, Y.P. Ye, Y.J. Deng [h gp.] // Am J Stem Cells. -2014. - Vol. 3(2). - P. 46-62.

124. Liao Y. featureCounts: an efficient general-purpose program for assigning sequence reads to genomic features / Y. Liao, G.K. Smyth, W. Shi // Bioinformatics. - 2014. - Vol. 30(7). - P. 923-930.

125. Loi S. Tumor-infiltrating lymphocytes and prognosis: a pooled individual patient analysis of early-stage triple-negative breast cancers / S. Loi, D. Drubay, S. Adams [h gp.] // J Clin Oncol. - 2019. - Vol. 37. - P. 559569.

126. Loi S. Prognostic and predictive value of tumor-infiltrating lymphocytes in a phase III randomized adjuvant breast Cancer trial in node-positive breast Cancer comparing the addition of Docetaxel to doxorubicin with doxorubicin-based chemotherapy: BIG 02-98 / S. Loi, N. Sirtaine, F. Piette [h gp.] // J Clin Oncol. - 2013. - Vol. 31. - P. 860-867.

127. Lorentzen A. An ezrin-rich, rigid uropod-like structure directs movement of amoeboid blebbing cells / A. Lorentzen, J. Bamber, A. Sadok [h gp.] // J. Cell Sci. - 2011. - Vol. 124. - P. 1256-1267.

128. Lu S. Cytokeratin 7-negative and GATA binding protein 3-negative breast cancers: Clinicopathological features and prognostic significance / S. Lu, E. Yakirevich, L.J. Wang [h gp.] // BMC Cancer. - 2019. - Vol. 19(1). -P.1085.

129. Lu X. Organotropism of breast cancer metastasis / X. Lu, Y. Kang // J Mammary Gland Biol Neoplasia. - 2007. - Vol. 12. - P. 153-162.

130. Luen S.J. Tumour-infiltrating lymphocytes in advanced HER2-positive breast cancer treated with pertuzumab or placebo in addition to trastuzumab and docetaxel: a retrospective analysis of the CLEOPATRA study / S.J. Luen, R. Salgado, S. Fox [h gp.] // Lancet Oncol. - 2017. - Vol. 18. - P. 52-62.

131. Lugli A. Recommendations for reporting tumor budding in colorectal cancer based on the international tumor budding consensus conference

(ITBCC) 2016 / A. Lugli, R. Kirsch, Y. Ajioka [h gp.] // Mod. Pathol. - 2017. - Vol. 30. - P. 1299-1311.

132. Lugli A. Tumour budding in solid cancers / A. Lugli, I. Zlobec, M.D. Berger [h gp.] // Nat Rev Clin Oncol. - 2021. - Vol. 18. - P. 101-115.

133. Lv Q. Prognostic value of circulating tumor cells in metastatic breast cancer: a systemic review and meta-analysis / Q. Lv, L. Gong, T. Zhang [h gp.] // Clin Transl Oncol. - 2016. - Vol. 18(3). - P. 322-330.

134. Ma J. PD1Hi CD8+ T cells correlate with exhausted signature and poor clinical outcome in hepatocellular carcinoma / J. Ma, B. Zheng, S. Goswami [h gp.] // J Immunother Cancer. - 2019. - Vol. 29. - 7(1). - P. 331.

135. Mahmoud S.M.A. Tumor-infiltrating CD8+ lymphocytes predict clinical outcome in breast Cancer / S.M.A. Mahmoud, E.C. Paish, D.G. Powe [h gp.] // JCO. - 2011. - Vol. 29. - P. 1949-55

136. Majidpoor J. Steps in metastasis: an updated review / J. Majidpoor, K. Mortezaee // Med Oncol. - 2021. - Vol. 38. - P. 3.

137. Markl B. Circulating cytokeratin-positive cells and tumor budding in colorectal cancer / B. Markl, N. Wilhelms, M. Anthuber [h gp.] // World J Clin Oncol. - 2016. - Vol. 7(6). - P. 433-440.

138. Mayor R. The front and rear of collective cell migration / R. Mayor, S. Etienne-Manneville // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. - 2016. - Vol. 17. - P. 97109.

139. Medema J.P. Cancer stem cells: the challenges ahead / J.P. Medema // Nat Cell Biol. - 2013. - Vol. 15(4). - P. 338-344.

140. Mego M. Prognostic value of EMT-circulating tumor cells in metastatic breast cancer patients undergoing high-dose chemotherapy with autologous hematopoietic stem cell transplantation / M. Mego, H. Gao, B.N. Lee [h gp.] // J Cancer. - 2012. - Vol. 3. - P. 369-380.

141. Mehraj U. Tumor microenvironment promotes breast cancer chemoresistance / U. Mehraj, A.H. Dar, N.A. Wani [h gp.] // Cancer Chemother Pharmacol. - 2021. - Vol. 87. - P. 147-158.

142. Melaiu O. Influence of the Tumor Microenvironment on NK Cell Function in Solid Tumors / O. Melaiu, V. Lucarini, L. Cifaldi [h gp.] // Front Immunol. - 2019. - Vol. 10. - P. 3038.

143. Meyer A.K. Auditory late effects of chemotherapy / A.K. Meyer, N.M. Young // Cancer Treat Res. - 2009. - Vol. 150. - P. 195-213.

144. Mine T. Breast cancer cells expressing stem cell markers CD44+ CD24 lo are eliminated by Numb-1 peptide-activated T cells / T. Mine, S. Matsueda, Y. Li [h gp.] // Cancer Immunol. Immunother. - 2009. - Vol. 58. - P. 11851194

145. Montagna E. Unfavorable prognostic role of tumor-infiltrating lymphocytes in hormone-receptor positive, HER2 negative metastatic breast cancer treated with metronomic chemotherapy / E. Montagna, A. Vingiani, P. Maisonneuve [h gp.] // Breast. - 2017. - Vol. 34. - P. 83-88.

146. Moons K.G. Prognosis and prognostic research: what, why, and how? / K.G. Moons, P. Royston, Y. Vergouwe [h gp.] // BMJ. - 2009. - Vol. 338. -P. b375.

147. Mu G. Immune-related gene data-based molecular subtyping related to the prognosis of breast cancer patients / G. Mu, H. Ji, H. He [h gp.] // Breast Cancer. - 2021. - Vol. 28(2). - P. 513-526.

148. Munger J.S. The integrin alpha v beta 6 binds and activates latent TGF beta 1: a mechanism for regulating pulmonary inflammation and fibrosis / J.S. Munger, X. Huang, H. Kawakatsu [h gp.] // Cell. - 1999. - Vol. 96. - P. 319328.

149. Nagai T. Tactics of cancer invasion: solitary and collective invasion / T. Nagai, T. Ishikawa, Y. Minami [h gp.] // J. Biochem. - 2020. - v162. - P. 347-355.

150. Nelson M.A. Prognostic and therapeutic role of tumor-infiltrating lymphocyte subtypes in breast cancer / M.A. Nelson, W. Ngamcherdtrakul, S.W. Luoh [h gp.] // Cancer Metastasis Rev. - 2021. - Vol. 40(2). - P. 519536.

151. Nguyen D.X. Metastasis: from dissemination to organ-specific colonization / D.X. Nguyen, P.D. Bos, J. Massagué // Nat Rev Cancer. - 2009.

- Vol. 9(4). - P. 274-84.

152. Oldford S.A. Mast cells as targets for immunotherapy of solid tumors / S.A. Oldford, J.S. Marshall // Mol Immunol. - 2015. - Vol. 63. - P. 113-124.

153. Onstenk W. Improved Circulating Tumor Cell Detection by a Combined EpCAM and MCAM CellSearch Enrichment Approach in Patients with Breast Cancer Undergoing Neoadjuvant Chemotherapy / W. Onstenk, J. Kraan, B. Mostert [h gp.] // Mol Cancer Ther. - 2015. - Vol. 14(3). - P. 821827.

154. Osmani N. Metastatic tumor cells exploit their adhesion repertoire to counteract shear forces during intravascular arrest / N. Osmani, G. Follain, M.J. García León [h gp.] // Cell Rep. - 2019. - Vol. 28(10). - P. 2491-500.

155. Padmanaban V. E-cadherin is required for metastasis in mul- tiple models of breast cancer / V. Padmanaban, I. Krol, Y. Suhail [h gp.] // Nature.

- 2019. - Vol. 573(7774). - P. 439-44.

156. Paluch E.K. The role and regulation of blebs in cell migration / E.K. Paluch, E. Raz // Curr. Opin. Cell Biol. - 2013. - Vol. 25. - P. 582-590.

157. Paluskievicz C.M. T Regulatory Cells and Priming the Suppressive Tumor Microenvironment / C.M. Paluskievicz, X. Cao, R. Abdi [h gp.] // Front Immunol. - 2019. - Vol. 10. - P. 2453.

158. Pasqualato A. Shape in Migration / A. Pasqualato, V. Lei, A. Cucina [h gp.] // Cell Adh Migr. - 2013. - Vol. 5. - P. 450-459.

159. Pasqualato A. Quantitative Shape Analysis of Chemoresistant Colon Cancer Cells: Correlation between Morphotype and Phenotype / A. Pasqualato, A. Palombo, A. Cucina [h gp.] // Exp Cell Res. - 2012. - Vol. 318 (7). - P. 835-846

160. Pearson G.W. Control of invasion by epithelial-to-mesenchymal transition programs during metastasis / G.W. Pearson // Journal of Clinical Medicine. - 2019. - Vol. 8.

161. Peinado H. Pre-metastatic niches: organ-specific homes for metastases / H. Peinado, H. Zhang, I. Matei [h gp.] // Nat Rev Cancer. - 2017. - Vol. 17.

- P. 302-317.

162. Phung M.T. Prognostic models for breast cancer: a systematic review / M.T. Phung, S. Tin Tin, J.M. Elwood // BMC Cancer. - 2019. - Vol. 19. - P. 230.

163. Piconese S. Mast cells counteract regulatory T-cell suppression through interleukin-6 and OX40/OX40L axis toward Th17-cell differentiation / S. Piconese, G. Gri, C. Tripodo [h gp.] // Blood. - 2009. - Vol. 114. - P. 26392648.

164. Plou J. From individual to collective 3D cancer dissemination: roles of collagen concentration and TGF-beta / J. Plou, Y. Juste-Lanas, V. Olivares [h gp.] // Sci. Rep. - 2018. - Vol. 8. - P. 12723.

165. Pollard JW. Macrophages define the invasive microenvironment in breast cancer / JW. Pollard // J Leukocyte Biol. - 2008. - Vol. 84. - P. 62330.

166. Qiao X. Association of human breast cancer CD44-/CD24- cells with delayed distant metastasis / X. Qiao, Y. Zhang, L. Sun [h gp.] // Elife. - 2021.

- Vol. 10. - P. e65418.

167. Rack B. SUCCESS Study Group. Circulating tumor cells predict survival in early average-to-high risk breast cancer patients / B. Rack, C. Schindlbeck, J. Jückstock [h gp.] // J Natl Cancer Inst. - 2014. - Vol. 106(5).

- P. dju066.

168. Ren Z.X. Suitable Parameter Choice on Quantitative Morphology of A549 Cell in Epithelial-Mesenchymal Transition / Z.X. Ren, H.B. Yu, J.S. Li [h gp.] // Biosci Rep. - 2015. - Vol. 35 (3). - P. e00202.

169. Rey-Barroso J. Switching between individual and collective motility in B lymphocytes is controlled by cell-matrix adhesion and inter-cellular interactions / J. Rey-Barroso, D.S. Calovi, M. Combe [h gp.] // Sci. Rep. -2018. - Vol. 8. - P. 5800.

170. Roberts S. Temporal analysis of CTC-endothelium interactions during early metastasis / S. Roberts, N. Agrawal // In 2015 41st Annual Northeast Biomedical Engineering Conference (NEBEC). - 2015. IEEE. - P. 1-2.

171. Roussos E.T. Mena invasive (MenalNV) promotes multicellular streaming motility and transendothelial migration in a mouse model of breast cancer / E.T. Roussos, M. Balsamo, S.K. Alford [h gp.] // J. Cell Sci. - 2011.

- Vol. 124. - P. 2120-2131.

172. Ruffell B. Coussens Leukocyte composition of human breast cancer / B. Ruffell, A. Au, H.S. Rugo [h gp.] // Proc Natl Acad Sci U S A. - 2012. -Vol. 109. - P. 2796-2801

173. Sabeh F. Protease-dependent versus independent cancer cell invasion programs: three-dimensional amoeboid movement revisited / F. Sabeh, R. Shimizu-Hirota, S.J. Weiss [h gp.] // J. Cell Biol. - 2009. - v185. - P. 11-19.

174. Sadok A. Rho GTPases: masters of cell migration / A. Sadok, C.J. Marshall // Small GTPases. - 2014. - Vol. 5.

175. Salhia B. High tumor budding stratifies breast cancer with metastatic properties / B. Salhia, M. Trippel, K. Pfaltz [h gp.] // Breast Cancer Res. Treat.

- 2015. - Vol. 150. - 363-371.

176. Salimi M. Activated innate lymphoid cell populations accumulate in human tumour tissues / M. Salimi, R. Wang, X. Yao [h gp.] // BMC Cancer.

- 2018. - Vol. 18(1). - P. 341.

177. Sanz-Moreno V. Rac activation and inactivation control plasticity of tumor cell movement / V. Sanz-Moreno, G. Gadea, J. Ahn [h gp.] // Cell. -2008. - Vol. 135. - P. 510-523.

178. Sanz-Moreno V. The plasticity of cytoskeletal dynamics underlying neoplastic cell migration / V. Sanz-Moreno, C.J. Marshall // Curr. Opin. Cell Biol. - 2010. - Vol. 22. - P. 690-696.

179. Savelieva O.E. Heterogeneity of Stemlike Circulating Tumor Cells in Invasive Breast Cancer / O.E. Savelieva, L.A. Tashireva, E.V. Kaigorodova [h gp.] // Int J Mol Sci. - 2020. - Vol. 21(8). - P. 2780

180. Schmitt F. Cancer stem cell markers in breast neoplasias: their relevance and distribution in distinct molecular subtypes / F. Schmitt, S. Ricardo, A.F. Vieira [h gp.] // Virchows Arch. - 2012. - Vol. 460(6). - P. 545-53.

181. Segovia-Mendoza M. Immune Tumor Microenvironment in Breast Cancer and the Participation of Estrogen and Its Receptors in Cancer Physiopathology / M. Segovia-Mendoza, J. Morales-Montor // Front Immunol. - 2019. - Vol. 10. - P. 348.

182. Sejben A. Comparison of Nottingham Prognostic Index, PREDICT and PrognosTILs in Triple Negative Breast Cancer - a Retrospective Cohort Study / A. Sejben, T. Nyari, T. Zombori [h gp.] // Pathol. Oncol. Res. - 2020.

- Vol. 26. - P. 2443-2450.

183. Senkus E. Primary breast cancer: ESMO Clinical Practice Guidelines for diagnosis, treatment and follow-up.; ESMO Guidelines Committee / E. Senkus, S. Kyriakides, S. Ohno [h gp.] // Ann Oncol. - 2015. - Vol. 26 Suppl.

- P. 8-30.

184. Serrels B. FAK and talin: who is taking whom to the integrin engagement party? / B. Serrels, M.C. Frame // J. Cell Biol. - 2012. - Vol. 196.

- P. 185-187.

185. Shou J. Worse outcome in breast cancer with higher tumor-infiltrating FOXP3+ Tregs: a systematic review and meta-analysis / J. Shou, Z. Zhang, Y. Lai [h gp.] // BMC Cancer. - 2016. - Vol. 16.

186. Slattum G.M. Tumour cell invasion: an emerging role for basal epithelial cell extrusion / G.M. Slattum, J. Rosenblatt // Nat Rev Cancer. -2014. - Vol. 14(7). - P. 495-501.

187. Smid M. Martens Subtypes of breast cancer show preferential site of relapse / M. Smid, Y. Wang, Y. Zhang [h gp.] // Cancer Res. - 2008. - Vol. 68(9). - P. 3108-3114.

188. Spano D. Molecular networks that regulate cancer metastasis / D. Spano, C. Heck, P. De Antonellis [h gp.] // Semin. Cancer Biol. - 2012. -Vol. 22. - P. 234-249.

189. Stein R.G. Cognate nonlytic interactions between CD8+ T cells and breast cancer cells induce cancer stem cell-like properties / R.G. Stein, S. Ebert, L. Schlahsa [h gp.] // Cancer Res. - 2019. - Vol. 79. - P. 1507-1519.

190. Steyerberg EW. Clinical prediction models: a practical approach to development, validation, and updating / E.W. Steyerberg // New York: Springer Science & Business Media. - 2008.

191. Strilic B. Intravascular survival and extravasation of tumor cells / B. Strilic, S. Offermanns // Cancer Cell. - 2017. - Vol. 32(3). - P. 282-293.

192. Sun Y. Prognostic value of poorly differentiated clusters in invasive breast cancer / Y. Sun, F. Liang, W. Cao [h gp.] // World J. Surg. Oncol. -2014. - Vol. 12. - P. 310.

193. Suriyamurthy S. Epigenetic Reprogramming of TGF-beta Signaling in Breast Cancer / S. Suriyamurthy, D. Baker, P. Ten Dijke [h gp.] // Cancers. -2019. - Vol. 11(5).

194. Tallerico R. NK cells control breast cancer and related cancer stem cell hematological spread / R. Tallerico, L. Conti, S. Lanzardo [h gp.] // Oncoimmunology. - 2017. - Vol. 6(3). - P. e1284718.

195. Tashireva L.A. Intratumoral heterogeneity of macrophages and fibroblasts in breast cancer is associated with the morphological diversity of tumor cells and contributes to lymph node metastasis / L.A. Tashireva, E.V. Denisov, T.S. Gerashchenko [h gp.] // Immunobiology. - 2017. - Vol. 222. -P. 631-640.

196. Tashireva L.A. Types of Immune-Inflammatory Responses as a Reflection of Cell-Cell Interactions under Conditions of Tissue Regeneration and Tumor Growth / L.A. Tashireva, V.M. Perelmuter, V.N. Manskikh [h gp.] // Biochemistry (Mosc). - 2017. - Vol. 82(5). - P. 542-555.

197. Terceiro L.E.L. The Breast Tumor Microenvironment: A Key Player in Metastatic Spread / L.E.L. Terceiro, C.A. Edechi, N.M. Ikeogu [h gp.] // Cancers (Basel). - 2021. - Vol. 13(19). - P. 4798.

198. Teschendorff A.E. Improved prognostic classification of breast cancer defined by antagonistic activation patterns of immune response pathway modules / A.E. Teschendorff, S. Gomez, A. Arenas [h gp.] // BMC Cancer. -2010. - Vol. 10. - P. 604.

199. Thankamony A.P. Cancer Stem Cell Plasticity - A Deadly Deal / A.P. Thankamony, K. Saxena, R. Murali [h gp.] // Front Mol Biosci. - 2020. - Vol. 7. - P. 79.

200. The TNM Classification of Malignant Tumours / J.D. Brierley, M.K. Gospodarowicz, C. Wittekind // 8th Edition. - 2016. - P. 272.

201. Thery L. Circulating Tumor Cells in Early Breast Cancer / L. Thery, A. Meddis, L. Cabel [h gp.] // JNCI Cancer Spectrum. - 2019. - Vol. 3(2). -pkz026.

202. Thuroff F. Bridging the gap between single-cell migration and collective dynamics / F. Thuroff, A. Goychuk, M. Reiter [h gp.] // eLife. -Vol. 8.

203. Tolde O. Quantitative phase imaging unravels new insight into dynamics of mesenchymal and amoeboid cancer cell invasion / O. Tolde, A. Gandalovicova, A. Krizova [h gp.] // Sci Rep. - 2018. - Vol. 8(1). - P. 12020.

204. Truong H.H. Beta1 integrin inhibition elicits a prometastatic switch through the TGFbeta-miR-200-ZEB network in E-cadherin-positive triple-negative breast cancer / H.H. Truong, J. Xiong, V.P. Ghotra, [h gp.] // Science signaling. - 2014. - Vol. 7. - P. ra15.

205. Tsuji T. Epithelial-mesenchymal transition and cell cooperativity in metastasis / T. Tsuji, S. Ibaragi, G.F. Hu // Cancer Res. - 2009. - Vol. 69(18). - P. 7135-7139.

206. Turdo A. Meeting the Challenge of Targeting Cancer Stem Cells / A. Turdo, V. Veschi, M. Gaggianesi [h gp.] // Front Cell Dev Biol. - 2019. -Vol. 7. - P. 16.

207. Tveitaras M.K. Single factors alone can induce mesenchymal-like morphology, but not promote full EMT in breast cancer cell lines with different hormone statuses / M.K. Tveitaras, I. Reigstad, L. Leiss [h gp.] // Exp Cell Res. - 2017. - Vol. 359(1). - P. 257-265.

208. Uhr J.W. Controversies in clinical cancer dormancy / J.W. Uhr, K. Pantel // Proc Natl Acad Sci U S A. - 2011. - Vol. 108(30). - P. 12396-400.

209. Van Maaren M.C. Ten-year recurrence rates for breast cancer subtypes in the Netherlands: A large population-based study / M.C. Van Maaren, L. de Munck, L.J.A. Strobbe [h gp.] // Int. J. Cancer. - 2019. - Vol. 144. - P. 263272.

210. van Vlerken L.E. EZH2 is required for breast and pancreatic cancer stem cell maintenance and can be used as a functional cancer stem cell reporter / L.E. van Vlerken, C.M. Kiefer, C. Morehouse [h gp.] // Stem Cells Transl Med. - 2013. - Vol. 2(1). - P. 43-52.

211. van Zijl F., Initial steps of metastasis: Cell invasion and endothelial transmigration / F. van Zijl, G. Krupitza, W. Mikulitsa. // Mutat Res. - 2011. - Vol. 728(1-2). - P. 23-34.

212. Vivier E. Innate Lymphoid Cells: 10 Years On / E Vivier, D Artis, M. Colonna [h gp.] // Cell. - 2018. - Vol. 174(5). - P. 1054-66.

213. Voutsadakis I.A. Prognostic role of tumor budding in breast cancer / I.A. Voutsadakis // World J Exp Med. - 2018. - Vol. 8(2). - P. 12-17.

214. Wang J. CD52 Is a Prognostic Biomarker and Associated With Tumor Microenvironment in Breast Cancer / J. Wang, G. Zhang, Y. Sui [h gp.] // Front Genet. - 2020. - Vol. 11. - P. 578002.

215. Wang X. Girdin/GIV regulates collective cancer cell migration by controlling cell adhesion and cytoskeletal organization / X. Wang, A. Enomoto, L. Weng [h gp.] // Cancer Sci. - 2018. - Vol. 109. - P. 3643-3656.

216. Weijer C.J. Collective cell migration in development / C.J. Weijer // J. Cell Sci. - 2009. - Vol. 122. - P. 3215-3223.

217. Wendt M.K. Deconstructing the mechanisms and consequences of TGF-ß-induced EMT during cancer progression / M.K. Wendt, M. Tian, W.P. Schiemann // Cell Tissue Res. 2012 Jan;347(1):85-101.

218. Werner S. Expression of Epithelial Mesenchymal Transition and Cancer Stem Cell Markers in Circulating Tumor Cells / S. Werner, A. Stenzl, K. Pantel [h gp.] // Adv Exp Med Biol. - 2017. - Vol. 994. - P. 205-228.

219. Williams K.C. Invadopodia are chemosensing protrusions that guide cancer cell extravasation to promote brain tropism in metastasis / K.C. Williams, M.A. Cepeda, S. Javed [h gp.] // Oncogene. - 2019. - Vol. 38(19).

- P. 3598-615.

220. Wishart G.C. PREDICT: a new UK prognostic model that predicts survival following surgery for invasive breast cancer / G.C. Wishart, E.M. Azzato, D.C. Greenberg [h gp.] // Breast Cancer Res. - 2010. - Vol. 12. - R1.

221. Wolf K. Multi-step pericellular proteolysis controls the transition from individual to collective cancer cell invasion / K. Wolf, Y.I. Wu, Y. Liu [h gp.] // Nat. Cell Biol. - 2007. - Vol. 9. - P. 893-904.

222. Wu J.S. The role of tumor microenvironment in collective tumor cell invasion / J.S. Wu, S.R. Sheng, X.H. Liang [h gp.] // Future oncology. - 2017.

- Vol. 13. - P. 991-1002.

223. Wu J.S. Plasticity of cancer cell invasion: Patterns and mechanisms / J.S. Wu, J. Jiang, B.J. Chen [h gp.] // Transl Oncol. - 2021. - Vol. 14(1). - P. 100899.

224. Xie Z. Gene Set Knowledge Discovery with Enrichr / Z. Xie, A. Bailey, M.V. Kuleshov [h gp.] // Curr Protoc. - 2021. - Vol. 1(3). - P. e90.

225. Xu Y. Sox2 Communicates with Tregs through CCL1 to promote the stemness property of breast cancer cells / Y. Xu, X. Dong, P. Qi [h gp.] // Stem Cells. - 2017. - Vol. 35. - P. 2351-2365.

226. Yan S. MMP inhibitor Ilomastat induced amoeboid-like motility via activation of the Rho signaling pathway in glioblastoma cells / S. Yan, H. Xue, P. Zhang [h gp.] // Tumour biology. - 2016. - Vol. 37. - P. 1617716186.

227. Yang W. A novel microfluidic platform for studying mammalian cell chemotaxis in different oxygen environments under zero-flow conditions / W. Yang, C. Luo, L. Lai [h gp.] // Biomicrofluidics. - 2015. - Vol. 9.

228. Yap Y-S. Detection and prognostic relevance of circulating tumour cells (CTCs) in Asian breast cancers using a label-free microfluidic platform / Y-S. Yap, M.C. Leong, Y.W. Chua [h gp.] // PLoS ONE. - 2019. - 14(9). -P.e0221305.

229. Yersal O. Biological subtypes of breast cancer: Prognostic and therapeutic implications / O. Yersal, S. Barutca // World J Clin Oncol. - 2014. - Vol. 5(3). - P. 412-424.

230. Yin L.L. A suppressor of multiple extracellular matrix-degrading proteases and cancer metastasis / L.L. Yin, C.M. Chung, J. Chen [h gp.] // J. Cell. Mol. Med. - 2009. - Vol. 13. - P. 4034-4041.

231. Yoneyama M.S. Vimentin intermediate filament and plectin provide a scaffold for invadopodia, facilitating cancer cell invasion and extravasation for metastasis / M.S. Yoneyama, S. Hatakeyama, T. Habuchi [h gp.] // Eur J Cell Biol. - 2014. - Vol. 93(4). - P. 157-69.

232. Yousefi M. Organ-specific metastasis of breast cancer: molecular and cellular mechanisms underlying lung metastasis / M. Yousefi, R. Nosrati, A. Salmaninejad [h gp.] // Cell Oncol. - 2018. - Vol. 41. - P.123-140.

233. Yu M. Circulating breast tumor cells exhibit dynamic changes in epithelial and mesenchymal composition / M. Yu, A. Bardia, B.S. Wittner [h gp.] // Science. - 2013. - Vol. 339(6119). - P. 580-584.

234. Yu T. Heterogeneity of CTC contributes to the organotropism of breast cancer / T. Yu, C. Wang, M. Xie [h gp.] // Biomed Pharmacother. - 2021. -Vol. 13. - P. 111314.

235. Zaiss D.M.W. Emerging functions of amphiregulin in orchestrating immunity, inflammation, and tissue repair / D.M.W. Zaiss, W.C. Gause, L.C. Osborne [h gp.] // Immunity. - 2015. - Vol. 42(2). - P. 216-26.

236. Zavyalova M.V. The presence of alveolar structures in invasive ductal NOS breast carcinoma is associated with lymph node metastasis / M.V. Zavyalova, V.M. Perelmuter, S.V. Vtorushin [h gp.] // Diagn Cytopathol. -2013. - Vol. 41. - P. 279-82.

237. Zhang R. Novel molecular regulators of breast cancer stem cell plasticity and heterogeneity / R. Zhang, J. Tu, S. Liu // Semin Cancer Biol. -2021. - Vol. 15. - P. S1044-579.

238. Zhao T. Elevated expression of LPCAT1 predicts a poor prognosis and is correlated with the tumour microenvironment in endometrial cancer / T. Zhao, Y. Zhang, X. Ma [h gp.] // Cancer Cell International. - 2021. - Vol. 21(1). - P. 269.

239. Zhe X. Circulating tumor cells: finding the needle in the haystack / X. Zhe, M.L. Cher, R.D. Bonfil // Am J Cancer Res. - 2011. - Vol. 1(6). - P. 740-751.

240. Zheng Z. Heterogeneous expression of Lgr5 as a risk factor for focal invasion and distant metastasis of colorectal carcinoma / Z. Zheng, H. Yu, Q. Huang [h gp.] // Oncotarget. - 2018. - Vol. 9(53). - P. 30025-30033.

241. Zoccoli A. Premetastatic niche: ready for new therapeutic interventions? / A. Zoccoli, M. Iuliani F. Pantano [h gp.] // Expert Opinion on Therapeutic Targets. - 2012. - Vol. 16. - P. S119-29.