Молекулярно-цитогенетическая характеристика Ph-позитивного клона у больных хроническим миелолейкозом при длительном воздействии ингибиторов тирозинкиназ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.21, кандидат наук Шухов Олег Александрович

• Шухов Олег Александрович
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Шухов Олег Александрович

Список сокращений

Введение

Актуальность исследования

Цель исследования

Задачи исследования

Научная новизна исследования

Основные положения, выносимые на защиту

Практическое значение работы

Публикации и апробация диссертации

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Механизм действия ингибиторов БСЯ-ЛВЬ

1.2 Редукция лейкемического клона у больных ХМЛ при длительном воздействии ингибиторов тирозинкиназ

1.3 БСЯ-ЛВЬ -зависимые механизмы резистентности

1.3.1 Вклад мутаций BCR-ABL в развитие резистентности к иматинибу

1.3.2 Клиническое значение мутаций при терапии ингибиторами тирозинкиназ второго поколения

1.3.3 Значение применения ингибиторов тирозинкиназ второго поколения в первую линию терапии для развития мутаций BCR-ABL

1.3.4 Гиперэкспрессия BCR-ABL

1.4 BCR-ABL -независимые механизмы резистентности

1.4.1 Дополнительные хромосомные аномалии

1.4.2 Нарушение лекарственного транспорта

1.4.3 Другие BCR-ABL -независимые механизмы резистентности

1.4.5 Покоящиеся стволовые клетки ХМЛ

1.5 Клинические характеристики резистентности и факторы риска неудачи терапии ингибиторами тирозинкиназ

1.6 Резюме

Глава 2 Пациенты и методы исследования

2.1 Характеристика группы пациентов

2.2 Методы исследования

2.3 Статистическая обработка данных

Глава 3 Результаты исследований

3. 1 Оценка результатов терапии иматинибом

3.1.1 Оценка цитогенетического ответа

3.1.2 Оценка молекулярного ответа

3.2 Прогрессия заболевания и выживаемость при терапии ингибиторами тирозинкиназ

3.3 Факторы резистентности к иматинибу у больных ХМЛ

3.3.1 Время до начала терапии иматинибом

3.3.2 Предшествующая иматинибу терапия

3.3.3 Клинические показатели на момент диагноза на основе существующих прогностических моделей Sokal, EURO, ГНЦ

3.3.4 Нарушение режима терапии

3.3.5 Скорость достижения цитогенетической ремиссии

3.3.6 Значение большого молекулярного ответа при терапии иматинибом

3.3.7 Мутации гена BCR-ABL

3.3.8 Сочетание мутаций и дополнительных хромосомных аномалий

3.4 Оценка результатов терапии ингибиторами тирозинкиназ второго поколения

3.5 Факторы низкой эффективности при терапии ингибиторами тирозинкиназ второго поколения

3.5.1 Группы риска Sokal, Euro, ГНЦ

3.5.2 Фаза на момент начала терапии

3.5.3 Тип резистентности при терапии иматинибом

3.5.4 Значение мутаций гена BCR-ABL

3.5.5 Эволюция клонов с мутациями BCR-ABL во время терапии ингибиторами тирозинкиназ второго поколения

Заключение

Выводы

Список литературы

Список сокращений

ELN European LeukemiaNet

FISH флуоресцентная in situ гибридизация

IC50 концентрация полумаксимального ингибирования

IRIS international randomized study of interferon and sti57

IS International scale (международная шкала оценки уровня

транскрипта BCR/ABL)

Ph-хромосома филадельфийская хромосома

БК бластный криз

БМО большой молекулярный ответ

ГО гематологический ответ

ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота

ДХА дополнительные хромосомные аномалии

ИМ иматиниб

ИТК ингибиторы тирозинкиназ

ИТК2 ингибиторы тирозинкиназ второго поколения

КД киназный домен

КМ костный мозг

МинЦО минимальный цитогенетический ответ

МЛУ множественная лекарственная устойчивость

МО4, МО4,5 молекулярный ответ со снижением BCR-ABL на 4 или 4,5 log

МЦО малый цитогенетический ответ

ОТ-ПЦР реакция обратной транскрипции - полимеразная цепная

реакция

ПГО полный гематологический ответ

ПМО полный молекулярный ответ

ПХФ поздняя хроническая фаза

ПЦО полный цитогенетический ответ

РНК рибонуклеиновая кислота

РХФ ранняя хроническая фаза

ФА фаза акселерации

ХМЛ хронический миелолейкоз

ХФ хроническая фаза

ЧЦО частичный цитогенетический ответ

Введение

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-цитогенетическая характеристика Ph-позитивного клона у больных хроническим миелолейкозом при длительном воздействии ингибиторов тирозинкиназ»

Актуальность исследования

Основным молекулярно-генетическим событием, приводящим к лейкемической трансформации стволовых клеток и развитию хронического миелолекоза (ХМЛ) является образование гена BCR-ABL, который возникает в результате обмена генетическим материалом между хромосомами 9 и 22 (Ph+ хромосома). Продукт гена BCR-ABL - онкобелок р210, является тирозинкиназой, играющей ключевую роль в патогенезе заболевания [52]. Изучение молекулярных основ ХМЛ привело к разработке препаратов - ингибиторов тирозинкиназ (ИТК), блокирующих патологический белок р210. Лечение ИТК первого поколения иматинибом изменило представление о возможности подавления Ph+позитивного гемопоэза. Больные, достигшие полного цитогенетического ответа, имеют достоверное преимущество в выживаемости по сравнению с больными, имеющими большую массу опухоли [21,4,12]. Вероятность достижения полного цитогенетического ответа (ПЦО) по результатам различных клинических исследований значительно варьирует и составляет от 60 до 82 % [21,24,54,1,4]. Вопросы стабильности цитогенетического ответа при длительной терапии иматинибом обсуждаются редко и наиболее полно отражены при анализе результатов международного исследования IRIS. Через 8 лет после начала терапии больных в ранней хронической фазе (РХФ) только 55 % из них продолжали прием иматинба [106]. Причинами прекращения являлись прогрессия ХМЛ, неэффективность или непереносимость. Полного цитогенетического ответа достигли 82 % больных, 17 % из них в дальнейшем потеряли ответ.

Ингибиторы тирозинкиназ второго поколения (ИТК2) (нилотиниб, дазатиниб и бозутиниб) за счет большей специфичности значительно более активно блокируют белок р210, в том числе и его мутантные формы. В литературе имеется большое число сообщений об эффективности ИТК2 по сравнению с иматинибом [29,192,76].

Вероятная продолжительность жизни пациентов, которые достигли полного цитогенетического ответа (ПЦО), практически достигает уровня общей популяции [Gugliotta et al 2013]. У пациентов с более глубоким ответом, таким как большой молекулярный ответ (БМО) или полный молекулярный ответ (ПМО, МО4 или МО4,5) не показано достоверного преимущества в выживаемости, по сравнению с больными, достигшими ПЦО. Достижение более глубокого ответа позволяет уменьшить вероятность цитогенетического рецидива и прогрессии заболевания, а длительный стабильный глубокий молекулярный ответ дает возможность ведения ремиссии без лечения у значительной доли пациентов [Mahon F. X. et al. 2010, Ross D. M. et al 2013]. В настоящее время нет полного понимания того, какая доля больных может достичь глубокого молекулярного ответа и каково влияние глубины ответа на отдаленные результаты терапии ИТК. На сегодняшний день недостаточно представлены отдаленные результаты терапии при последовательном применении иматиниба и ИТК2 во вторую и третью линии лечения. Представленные данные о значении исторически используемых прогностических моделей, клинических факторах, влияющих на эффективность терапии иматинибом и ИТК2 противоречивы [162, 1121].

Успех, достигнутый ингибиторами BCR-ABL, был несколько омрачен развитием резистентности у некоторых пациентов. Наиболее изученным и общим механизмом резистентности является появление различных мутаций киназного домена BCR-ABL во время лечения [6, 207]. Довольно много данных накопилось о роли мутаций в развитии приобретенной резистентности, при этом частота, спектр мутаций, их потенциальное значение в развитии первичной резистентности исследовано недостаточно, особенно у больных, длительно получающих иматиниб. Единичные публикации посвящены значению и частоте сочетаний мутаций и дополнительных хромосомных аномалий (ДХА) при терапии иматинибом и ИТК2.

Цель исследования

Оценить динамику изменения Ph+ клона у больных ХМЛ при длительной терапии ингибиторами тирозинкиназ, а также выявить молекулярные,

цитогенетические и клинические факторы, влияющие на редукцию лейкемического клона и выживаемость.

Задачи исследования

1. Оценить выживаемость больных в хронической фазе хронического миелолейкоза и ее взаимосвязь со степенью редукции лейкемического клона при длительной терапии ингибиторами тирозинкиназ.

2. Оценить вероятность достижения полного цитогенетического и глубокого молекулярного ответа при терапии иматинибом в зависимости от сроков начала терапии.

3. Оценить вероятность сохранения достигнутого полного цитогенетического ответа у больных в хронической фазе хронического миелолейкоза в зависимости от терапии и степени редукции лейкемического клона.

4. Оценить вероятность достижения полного цитогенетического и глубокого молекулярного ответа при применении ингибиторов тирозинкиназ второго поколения у больных с неудачей терапии иматинибом.

5. Проанализировать влияние клинических, молекулярных и цитогенетических факторов, ассоциированных с неэффективностью терапии ингибиторами тирозинкиназ.

Научная новизна исследования

Данное исследование позволило дополнить имеющееся на сегодняшний день представление об молекулярных и цитогенетических основах целенаправленной терапии ХМЛ ингибиторами тирозинкиназ. Впервые произведена оценка возможности достижения различных уровней снижения объема лейкемического клона у больных при длительном последовательном воздействии иматиниба и ИТК2. Представлены данные по выживаемости и вероятности прогрессии у больных в ранней и поздней ХФ ХМЛ, получающих терапию иматинибом и ИТК2 как во вторую, так и в третью линию при длительном наблюдении (Ме 123 мес.). Показана высокая прогностическая значимость цитогенетической и глубокой молекулярной

ремиссии вне зависимости от срока ее достижения, при этом отмечено снижение вероятности получения цитогенетической ремиссии с каждым последующим годом терапии иматинибом. Впервые представлена текущая кумулятивная частота цитогенетической ремиссии у больных ХМЛ во время терапии иматинибом и после перехода на ИТК2. Описана частота и спектр мутаций ВСЯ-ЛВЬ в зависимости от типа резистентности на терапии иматинибом, сочетание мутаций и ДХА, показано влияние мутаций ВСЯ-ЛВЬ на выживаемость, прогрессию, достижение цитогенетической и молекулярной ремиссии, а также динамика клонов с мутациями на терапии ИТК2.

Основные положения, выносимые на защиту

1. При длительной терапии иматинибом вероятность сохранения полного цитогенетического ответа достоверно больше у больных с большим и полным молекулярным ответом.

2. Достижение полного цитогенетического ответа на любом этапе терапии ХМЛ является ключевым благоприятным фактором общей выживаемости и выживаемости без прогрессии до фазы акселерации и бластного криза.

3. Позднее начало терапии иматинибом (более 12 месяцев) уменьшает вероятность достижения полного цитогенетического, большого и полного молекулярного ответов, увеличивает вероятность прогрессии заболевания.

4. Ингибиторы тирозинкиназ второго поколения позволяют восстановить, а также достигнуть впервые полный цитогенетический ответ у значительной части больных с неудачей на терапии иматинибом.

5. Мутации гена ВСЯ-ЛВЬ являются значимым фактором, влияющим на прогрессию и смерть у больных с неудачей терапии иматинибом и ИТК2.

Практическое значение работы

Показано, что риск прогрессии ХМЛ до фазы акселерации и бластного криза снижается при достижении полного цитогенетического ответа в не зависимости от срока его достижения. Установлено значение большого молекулярного ответа для

8

снижения риска потери полного цитогенетического ответа. Подтверждено, что время начала лечения (менее 12 мес. после установления диагноза ХМЛ) является ключевым фактором не только для достижения глубоких молекулярных ответов, но и для стабильного их сохранения. Показана высокая вероятность редукции опухолевого клона после переключения на ИТК2 у больных с неудачей терапии иматинибом. Продемонстрирована важность исследования мутаций гена BCR-ABL не только у больных с неудачей терапии иматинибом, но и при неэффективности ИТК2.

Публикации и апробация диссертации

Всего по теме диссертации опубликовано 15 научных работ, из которых - 3 в журналах, рекомендованных ВАК МОН РФ для опубликования основных научных результатов диссертации на соискание ученой степени кандидата и доктора медицинских наук.

Материалы диссертации представлены на I Конгрессе гематологов России (Москва, 2012), II Конгрессе гематологов России (Москва, 2014), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Генетика опухолей кроветворной системы» (Санкт-Петербург 2015 г), симпозиуме "Итоги и перспективы терапии ХМЛ в Российской Федерации" (Москва 2015 г.), Гематологический декадник (Москва 2013, 2014 г.г.), 20th Congress of European Hematology Association (Vienna, Austria 2015), "European Investigators on Chronic Myeloid Leukemia (EI-CML)" meeting (Italy, Bologna 2015).

Личный вклад автора

Автором лично проведены планирование диссертационного исследования и анализ литературных данных, выполнено молекулярно-генетическое исследование мутаций гена BCR-ABL у части пациентов, осуществлены статистический анализ, обобщение и интерпретация полученных данных.

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Механизм действия ингибиторов БСЯ-АБЬ

Ген ВСЯ-ЛВЬ играет ключевую роль в патогенезе ХМЛ [52]. В большинстве случаев данный ген образуется в результате реципрокной транслокации между хромосомами 9 и 22 и формирования Филадельфийской хромосомы ^^ (Рис 1).

9 22 9+ 22

Рисунок 1 Схема образования слитного гена BCR-ABL

В нормальных клетках белок ABL локализован в ядре и его тирозинкиназная активность строго контролируется, однако в клетках больных ХМЛ белок BCR-ABL локализуется в цитоплазме и находится в постоянно активном состоянии [79]. Исследования показали, что BCR-ABL обладает онкогенной активностью на кроветворные клетки, активирует пролиферацию лейкозных клеток и ингибирует апоптоз. [60,149]. Также было показано, что активность BCR-ABL может также стимулировать образование мутагенных активных форм кислорода и ингибировать механизмы репарации ДНК. [139,209,72,217]. Все вышеперечисленное может приводить к геномной нестабильности, проявляющейся мутациями, изменением числа копий BCR-ABL и дополнительными хромосомными аномалиями, которые, в свою очередь, могут явиться причиной прогрессии в продвинутые фазы ХМЛ. Эффективное ингибирование активности BCR-ABL является важным условием,

позволяющим сократить количество лейкозных клеток и уменьшить вероятность прогрессии заболевания.

Иматиниб, дазатиниб и нилотиниб ингибирует каталитическую активность BCR-ABL, связываясь с АТФ-связывающим участком (карманом) киназного домена ABL [195,74,215,226]. Иматиниб связывается с неактивной формой BCR-ABL, предотвращая конформационные изменения, необходимые для его активации, включая перемещение «активационной петли» (А-петли) [195]. Химическая структура нилотиниба представляет собой модифицированную структуру иматиниба, но обладает большей аффинностью за счет улучшения пространственного взаимодействия с молекулой BCR-ABL. Нилотиниб показал в 10-50 раз больший потенциал в ингибировании немутантной BCR-ABL-киназы in vitro, чем у иматиниба [226,176]. Дазатиниб был разработан независимо от иматиниба и имеет отличную от него химическую структуру. Дазатиниб связывается с другим регионом АТФ-связывающего кармана и не имеет таких строгих условий для связывания, как у иматиниба, т.е. имеет небольшое количество критичных для связывания с белком BCR-ABL участков. Дазатиниб связывает активную форму BCR-ABL, он в 325 раз сильнее, чем иматиниб и в 16 раз сильнее, чем нилотиниб (по уровню IC50) ингибирует не мутантную BCR-ABL-киназу in vitro [215,176]. В исследованиях с использованием рентген-моделирования была предложена гипотеза, что дазатиниб способен взаимодействовать с неактивной формой BCR-ABL-киназы, однако это не нашло подтверждения в исследованиях с использованием ядерного магнитного резонанса [216]. Различия в химическом строении нилотиниба и дазатиниба по сравнению с иматинибом объясняют разную чувствительность клинически значимых мутантных клонов к их воздействию.

1.2 Редукция лейкемического клона у больных ХМЛ при длительном воздействии ингибиторов тирозинкиназ

Изобретение и внедрение в клиническую практику ингибиторов BCR-ABL-тирозинкиназы (ИТК) для лечения ХМЛ произвело революцию в лечении данного заболевания. Иматиниб - первый препарат из этого класса, был утвержден в качестве терапии первой линии у больных ХМЛ по результатам 3 фазы исследования IRIS [59,95]. Отечественные исследования также подтвердили высокую эффективность иматиниба у больных ХМЛ после неудачи терапии интерфероном [4,12]. Опираясь на успехи иматиниба, были изобретены и одобрены к использованию у пациентов, получавших ранее иматиниб, два ИТК нового поколения: нилотиниб и дазатиниб [125,210]. Согласно рекомендациям Европейского сообщества по лечению лейкозов ELN (European LeukemiaNet) от 2009 года, нилотиниб и дазатиниб были рекомендованы к использованию у пациентов с неудачей или недостаточной эффективностью терапии иматинибом, а также при непереносимости иматиниба [21]. Дальнейшие исследования доказали лучшую по сравнению с иматинибом эффективность ИТК 2ого поколения при использовании в первой линии терапии [127,192]. В рекомендациях ELN 2013 нилотиниб и дазатиниб рекомендованы уже и как препараты первой линии терапии [24]. На сегодняшний день оба препарата зарегистрированы в России для лечения ХМЛ как при неудаче терапии иматинибом, так и в первой линии лечения. Аллогенная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (аллоТГСК) остается альтернативной терапевтической опцией у больных ХМЛ, особенно в продвинутых фазах, однако изначальная терапия ИТК предпочтительна в большинстве случаев. Бозутиниб - еще один ИТК 2ой генерации, который показал свою эффективность в качестве первой линии терапии у больных ХМЛ, а также у больных, получавших предшествующую терапию другими ИТК [131].

На сегодняшний день не так много публикаций, которые представляют

результаты долгосрочного наблюдения за больными ХМЛ в контексте оценки

глубины редукции опухолевого клона при длительном непрерывном воздействии

ИТК. Также мало данных о значении глубины и скорости уменьшения опухолевой

12

массы на отдаленные результаты терапии. Итоги 8 лет наблюдения за больными ХМЛ, получавших в качестве первой линии терапии иматиниб, были представлены итальянской исследовательской группой GIMEMA [82]. Общая выживаемость и выживаемость без прогрессии в продвинутые фазы ХМЛ составила 85% и 84% соответственно при медиане наблюдения 76 мес. Вероятность достижения ПЦО к 8 году терапии составила 88%. Также были опубликованы результаты международного рандомизированного исследования IRIS, в котором сравнивались безопасность и эффективность интерферона и иматиниба для лечения ХМЛ [56]. Результаты 8-летней ОВ и ВБП у больных с вновь диагностированным ХМЛ составили 85% и 92% соответственно. На сегодняшний день известно, что достижение полного цитогенетического ответа за 12 месяцев терапии иматинибом является благоприятным фактором, влияющим на выживаемость и уменьшающим вероятность прогрессии. [4,12,13,21,24]. В исследовании IRIS 6 летняя общая выживаемость в зависимости от цитогенетического ответа к 12 месяцу составила 92%, 89% и 63% у больных, достигших ПЦО, ЧЦО и не достигших МинЦО соответственно. Однако остается не до конца понятным значение позднего достижения цитогенетического ответа, его стабильности и влиянии на выживаемость и прогрессию. Возможность достижения глубокого молекулярного ответа, характеризующего максимальное подавление лейкемического клона, является на сегодняшний день основой безрецидивной выживаемости при длительной терапии иматинибом, а в ряде случаев позволяет продолжить наблюдение за больными без лечения при сохранении молекулярной ремиссии [150,191]. По данным Hehlmann [89], кумулятивная частота МО4.5 через 8 лет терапии иматинибом в различных дозах составила 66%, а МО4 77% у больных начавших терапию иматинибом сразу, после установления диагноза. Но истинная доля больных, которые могут добиться стойкой глубокой молекулярной ремиссии, на сегодняшний день неизвестна. Так же нет достоверных данных, что глубина молекулярного ответа у больных с цитогенетической ремиссией может иметь прогностическое значение на вероятность прогрессии и выживаемость. Очень важным фактором в оценке глубины молекулярного ответа становится достоверность результатов молекулярных исследований [48].

13

1.3 BCR-ABL -зависимые механизмы резистентности 1.3.1 Вклад мутаций BCR-ABL в развитие резистентности к иматинибу

Значительная часть больных ХМЛ не получают оптимального длительного ответа на терапию иматинибом в основном по причине резистентности. Резистентность к иматинибу можно разделить на первичную (изначальное недостижение оптимального ответа на терапию) и вторичную (потеря достигнутого ответа). Согласно рекомендациям ELN 2009 года, первичной резистентностью называют недостижение полного гематологического ответа к 3 месяцу терапии иматинибом, полное отсутствие цитогенетического ответа (Ph'+клеток более 95%) к 6 месяцу, частичного цитогенетического ответа (Ph'+ клеток более 35%) к 12 месяцу, полного цитогенетического ответа (ПЦО) к 18 месяцу терапии [21]. Под вторичной резистентностью подразумевают потерю полной гематологической и цитогенетической ремиссии или прогрессию заболевания в ФА или БК. Критерии гематологического, цитогенетического и молекулярного ответов представлены в табл.1

Исследования показали, что риск развития резистентности коррелирует с фазой заболевания. Наименьшему риску подвержены больные в ранней хронической фазе, наибольшему в бластном кризе. В исследовании IRIS в группе пациентов с впервые диагностированным ХМЛ и получающих терапию иматинибом (n=553) 31 и 24% больных не достигли ПЦО к 12 и 18 месяцу лечения соответственно. Ежегодные события (потеря ответа, прогрессия в ФА или БК, смерть) происходили у 3,3-7,5% больных в течение первых трех лет терапии [59,175]. У пациентов в ФА (n=181) или БК (n=229), 80 и 93% соответственно не достигли полного цитогенетического ответа за весь период терапии иматинибом, а медиана времени до прогрессии составила 23 мес. для ФА и 4 мес. для БК [201].

Таблица 1 Критерии ответов на терапию иматинибом

Полный гематологический ответ (ПГО) • селезенка не пальпируется • бластные клетки в костном мозге <5% • уровень лейкоцитов не выше 10 х109/л, в формуле крови отсутствуют миелоциты, промиелоциты, миелобласты • уровень тромбоцитов менее 450х109/л

Полный цитогенетический ответ (ПЦО) 0% РА+ клеток

Частичный цитогенетический ответ (ЧЦО) 1—35% РА+ клеток

Малый цитогенетический ответ (МЦО) 36—65% клеток

Минимальный цитогенетический ответ (МинЦО) 66—95% РИ+ клеток

Большой молекулярный ответ (БМО) <0,1% БСЯ-АБЬ/АБЬ по международной шкале (ТБ)

Мутации ВСЯ-ЛВЬ имеют большое значение в генезе резистентности к иматинибу. При анализе больных во всех фазах ХМЛ мутации были выявлены у 35 -45% пациентов с резистентностью к иматинибу [111,93,142,10], а по данным одноцентрового исследования, из 27 больных, у которых были выявлены мутации ВСЯ-ЛВЬ, 89% (п=24) были с резистентностью к иматинибу [31]. Мутации ВСЯ-ЛВЬ чаще обнаруживают у пациентов с вторичной резистентностью, чем с первичной резистентностью при терапии иматинибом. В исследовании у больных во всех фазах ХМЛ, а также с острым лимфобластным лейкозом и

резистентностью при терапии иматинибом (п=295), мутации были выявлены у 57% больных с вторичной резистентностью и у 30% больных с первичной резистентностью [206]. Кроме того, мутации ВСЯ-ЛВЬ у больных с резистентностью чаще выявляются в продвинутых фазах заболевания, чем в хронической фазе. Так, в исследовании мутации были выявлены у 27, 52 и 75% больных в ХФ (п=198), ФА (п=21) и БК (п=32) соответственно [206]. По другим данным, при исследовании 171

15

пациента с резистентность к иматинибу, мутации были выявлены у 24% больных ХФ ХМЛ, получавших иматиниб в качестве первой линии терапии, у 42% больных ХФ ХМЛ после неудачи терапии интерфероном альфа и у 50% больных в ФА ХМЛ [111]. При многофакторном анализе, независимыми факторами, ассоциированными с развитием мутаций, явились: пожилой возраст (р=0,005), предшествующая терапия альфа-интерфероном (р=0,026) и продвинутые фазы ХМЛ (ХФ и ФА р=0,001; ФА и БК р=0,092) [111].

Мутации могут быть обнаружены до того, как у пациента будет определена клиническая резистентность. При ретроспективном исследовании образцов крови пациентов с мутациями BCR-ABL , у которых случился рецидив заболевания, в большинстве случаев мутации были выявлены с использованием чувствительных методов задолго до рецидива. У 19% мутации удалось определить еще до начала терапии иматинибом. Временной интервал между выявлением мутации и рецидивом напрямую зависел от локализации мутации в ABL домене, косвенно отражая уровень устойчивости клонов с разными мутациями на воздействие иматиниба [67]. В то же время, прекращение терапии ИТК может влиять на количественный уровень клонов с мутациями. Описаны случаи, когда сохраняющийся на терапии иматинибом высокий уровень клона с мутацией сокращался после его отмены [84,28]. Данный феномен, видимо, вызван подавлением мутантного клона немутантным при условии отсутствия воздействия ИТК [94]. Очевидно, что исследование мутационного статуса у больных ХМЛ является необходимым компонентом мониторинга болезни.

ELN рекомендует исследование мутаций у пациентов с ХФ ХМЛ при

неудаче лечения или с субоптимальным ответом на лечение иматинибом (согласно

рекомендациям ELN 2009), в том числе при потере ПГО, ПЦО или БМО, а также

при переходе на другой ИТК [21]. Национальное Объединённое Онкологическое

Сообщество (NCCN, США) также рекомендует исследование мутаций у пациентов,

не достигших ПГО к 3 месяцу, МинЦО к 6 месяцу, ЧЦО к 12 месяцу терапии

иматинибом, а также при потере ранее достигнутых ответов на терапию [170].

Предполагается, что увеличение уровня BCR-ABL-транскрипта может приводить к

развитию мутаций в гене BCR-ABL. При исследовании 150 больных ХМЛ, из

16

которых у 53 были выявлены мутации, было отмечено, что более чем 2,6 кратное нарастание ВСЯ-ЛВЬ-транскрипта является предиктором развития мутаций в гене ВСЯ-ЛВЬ [183]. В ранних исследованиях сообщалось, что двукратное увеличение или постоянный последовательный рост уровня транскрипта ВСЯ-ЛВЬ является предрасполагающим фактором для развития мутаций [30,224].

В настоящее время нет стандартизованных методик, рекомендованных для исследования мутационного статуса. Для исследования мутаций используются следующие методики: метод прямого секвенирования, субклонирование с последующим секвенированием, денатурирующая высокоэффективная жидкостная хроматография, пиросеквенирование, двойной градиентный денатурирующий электрофорез, аллель-специфическая ПЦР, мультиплексный анализ однонуклеотидного полиморфизма и масс-спектрометрия. Каждый из этих методов отличается по чувствительности и гамме исследуемых мутаций [67,104]. Прямое секвенирования имеет чувствительность порядка 20% и в настоящее время является наиболее часто используемым методом выявления мутаций в гене ВСЯ-ЛВЬ [104]. Предполагается, что использование более чувствительных методов определения мутаций может быть полезным для выявления минимальных клонов еще до того момента, когда будет очевидно наличие резистентности к проводимому лечению и поможет заблаговременно принять решение о смене терапии [67,69,68,208]. Однако в нескольких исследованиях было показано, что выявление мутаций до начала терапии иматинибом или у больных со стабильным ПЦО не обязательно ведет к рецидиву [231,200]. Вероятнее всего, у больных с хорошим ответом на терапию клоны с мутацией не обладают достаточным пролиферативным потенциалом и могут существовать на низком уровне. В настоящее время нет однозначных рекомендаций для регулярного скрининга минимальных клонов с мутациями у больных без клинических признаков резистентности [21].

У больных в ХФ ХМЛ возникновение мутаций ВСЯ-ЛВЬ ассоциировано с высокой вероятностью прогрессии в продвинутые фазы болезни и меньшей выживаемостью [208,132]. В настоящее время известно более 90 различных мутаций, приводящих к более чем 55 аминокислотным заменам в молекуле БСЯ-АБЬ [32,6]. Мутации вызывают резистентность к иматинибу и другим ИТК,

17

нарушая точки связывания молекулы препарата и киназного домена ABL или приводят к изменению структуры, нарушая пространственное связывание белка с препаратом, при этом происходит дестабилизация неактивной формы или же стабилизация активной формы BCR-ABL [20]. При анализе мутаций у больных на разных фазах ХМЛ, выявленных во время терапии иматинибом, мутации в семи аминокислотах BCR-ABL составили 66% от всех мутаций (G250, Y253, E255, T315I, M351, F359, H396)[17]. При этом спектр мутаций варьировал в зависимости от фазы заболевания. В ХФ ХМЛ чаще встречались M244, М351 и G250, а в ФА и БК ХМЛ T315, E255 и Y253. [17]

В настоящее время хорошо изучено, что различные мутации BCR-ABL определяют различную степень резистентности к иматинибу in vitro [44,197,222]. Клоны с мутацией T315I оказались наиболее резистентными [80], также высокой резистентностью характеризовались клоны с мутациями 248V, Y253F/H, E255K/V, H396P/R и F486S [21] (табл.2). В рекомендациях ELN утверждается, что появление мутаций, снижающих чувствительность лейкозных клеток к иматинибу, является неудачей терапии, при этом, если чувствительность не нарушена, то это расценивается как субоптимальный ответ. Однако в исследованиях не было выявлено мутаций, при которых клоны сохраняли чувствительность к иматинибу [21]. Некоторые авторы утверждают, что возможно улучшить ответ на иматиниб при увеличении дозы при наличии определенных мутаций, при этом спектр этих мутаций в разных работах неодинаков [114,173,186]. Все мутации можно разделить на группы в зависимости от локализации в домене ABL (табл.2), включая АТФ-связывающий участок (P-петля, область 248-255), точки контакта с препаратом (T315/F317), каталитический домен (область 350-363) и А-петля (область 381-402), при этом мутации могут встречаться и в других регионах [199,20,197,168,169,156].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Шухов Олег Александрович, 2015 год

Список литературы

1. Виноградова О.Ю. Клиническая эволюция хронического миелолейкоза в процессе лечения ингибиторами тирозинкиназ Автореф. докт. мед. наук, 2011

2. Домрачева Е. В., Захарова А. Е., Асеева Е. А. Прогностическое значение дополнительных цитогенетических аномалий при хроническом миелолейкозе. Гематол. и трансфузиол. 2005; 50(4): 37—41.

3. Зарицкий А.Ю., Ломаиа Е.Г. и др. Факторы прогноза при терапии иматиниба мезилатом у больных в хронической фазе РИ-позитивного хронического миелолейкоза: данные многоцентрового нерандомизированного исследования в России. Терапевтический архив -2007-Т. 79 - №8 - с.17-22

4. Зарицкий А.Ю., Ломаиа Е.Г., Виноградова О.Ю. и др. Результаты многоцентрового исследования терапии гливеком больных хроническим миелолейкозом в хронической фазе // Гематол. и трансфузиол. - 2007. - Т.52, № 2. - С. 13-17.

5. Круглов С.С., Туркина А.Г., Хорошко Н.Д. и др. Резистентность при терапии Гливеком у больных хроническим миелолейкозом в фазе акселерации // Гематол. и трансфузиол. -2007. - №2. - С.17-24

6. Куцев С. И., Вельченко М. В. Значение анализа мутаций гена BCR-ABL в оптимизации таргетной терапии хронического миелолейкоза. Клин. онкогематол. 2008; 1(3): 190—199.

7. Куцев С.И., Морданов С.В., Амплификация гена Ьсг-аЬ1 у пациентов с хроническим миелоидным лейкозом, рефрактерных к иматинибу. Онкогематология.- 2009. - №3. - с.57-60

8. Ломаиа Е.Г., Огородникова Ю.С., Мартынкевич И.С. и др.Прогностические факторы эффективности терапии Гливеком больных хроническим миелолейкозом. Вестник гематологии. -2005. - Т. 1., №1. - С. 14-21.

9. Мартынкевич И. С., Мартыненко Л. С., Иванова М. П. и др. Дополнительные хромосомные аберрации у больных хроническим миелолейкозом. Гематол. и трансфузиол. 2007; 52(2): 28—35.

10. Мисюрин А. В., Аксенова Е. В., Крутов А. А. и др. Молекулярная диагностика хронического миелолейкоза. Гематол. и трансфузиол. 2007; 52(2): 35—40.

11. Туркина А.Г. Клиническое значение молекулярно-генетических и иммуно-фенотипических характеристик хронического миелолейкоза. Автореф.дисс. д-ра мед.наук, Москва, 1998

12. Туркина А.Г., Хорошко Н.Д., Дружкова Г.А. и др. Эффективность терапии Гливеком (иматиниб мезилат, STI 571) в поздней хронической стадии миелолейкоза (ХМЛ) при

неэффективности терапии интерфероном-альфа. Проблемы гематологии. - 2002. - № 1. - С. 88-89.

13. Туркина А.Г., Челышева Е.Ю. Цитогенетический и молекулярный ответ - ранние маркеры эффективности терапии Гливеком больных Ph+ хроническим миелолейкозом . Фарматека. -2004. - №18 (95). - С. 48-53

14. Челышева Е. Ю., Туркина А. Г., Мисюрин А. В. и др. Раннее выявление цитогенетического рецидива при динамическом исследовании уровня BCR-ABL транскрипта у больного хроническим миелолейкозом. Гематол. и трансфузиол. 2007; 52(2): 50—51

15. Albano F, Specchia G, Anelli L, et al. Genomic deletions on other chromosomes involved in variant t(9;22) chronic myeloid leukemia cases. Genes, Chromosomes and Cancer. 2003;36(4):353-360

16. Angelini S, Soverini S, Ravegnini G, Barnett M, Turrini E, Thornquist M et al. Association between imatinib transporters and metabolizing enzymes genotype and response in newly diagnosed chronic myeloid leukemia patients receiving imatinib therapy. Haematologica 2013; 98: 192-200.

17. Apperley JF Part I: Mechanisms of resistance to imatinib in chronic myeloid leukaemia. Lancet Oncol 2007; 8:1018-29.

18. Apperley JF. Part II: management of resistance to imatinib in chronic myeloid leukaemia. Lancet Oncol 2007;8:1116-1128.

19. Assef Y, Rubio F, Colo G, del Monaco S, Costas MA, Kotsias BA. Imatinib resistance in multidrug-resistant K562 human leukemic cells. Leuk Res 2009;33:710-716.

20. Azam M, Latek RR, Daley GQ. Mechanisms of auto-inhibition and STI-571/imatinib resistance revealed by mutagenesis of BCR-ABL. Cell 2003; 112:831-43.

21. Baccarani M, Cortes J, Pane F, Niederwieser D, Saglio G, Apperley J, et al."Chronic myeloid leukemia: an update of concepts and management recommendations of European LeukemiaNet. J Clin Oncol 2009; 27:6041-51.

22. Baccarani M, Hasford J, Hoffmann V, Guilhot J, Saussele S, Rosti G et al. A new prognostic score (EUTOS score) predicting cytogenetic response and progression-free survival in 2060 patients with chronic myeloid leukemia on imatinib treatment. Haematologica 2011; 96: 422 (EHA abstract no. 1010).

23. Baccarani M, Zaccaria A, Santucci MA, Bagnara GP, Ricci P, Gobbi M et al. A simultaneous study of bone marrow, spleen and liver in chronic myeloid leukemia: evidence for differences in cell composition and karyotypes. Ser Haematol 1975; 8: 81-112.

24. Baccarani M. et.al. European LeukemiaNet recommendations for the management of chronic myeloid leukemia: 2013 Blood, 2013; 122, 6:872-84

25. Barnes D.J., B. Schultheis, S. Adedeji, J.V. Melo, Dose-dependent effects of Bcr-Abl in cell line models of different stages of chronic myeloid leukemia, Oncogene 24 (2005) 6432 -6440.

26. Barnes DJ, Palaiologou D, Panousopoulou E, et al. Bcr-Abl expression levels determine the rate of development of resistance to imatinib mesylate in chronic myeloid leukemia. Cancer Res 2005;65:8912-8919.

27. Bazeos A, Marin D, Reid AG, et al. hOCTl transcript levels and single nucleotide polymorphisms as predictive factors for response to imatinib in chronic myeloid leukemia. Leukemia 2010;24:1243-1245.

28. Beel K, Janssens A, Verhoef G, Vandenberghe P Reduction of BCR-ABL1 mutant clones after discontinuation of TKI therapy. Leuk Res 2009; 33:1703-5

29. Bradeen HA, Eide CA, O'Hare T, Johnson KJ, Willis SG, Lee FY, et al. Comparison of imatinib mesylate, dasatinib (BMS-354825) and nilotinib (AMN107) in an N-ethyl-N-nitrosourea (ENU)-based mutagenesis screen: high efficacy of drug combinations. Blood 2006; 108:2332-8.

30. Branford S, Rudzki Z, Parkinson I, Grigg A, Taylor K, Seymour JF, et al. Real-time quantitative PCR analysis can be used as a primary screen to identify patients with CML treated with imatinib who have BCR-ABL kinase domain mutations. Blood 2004; 104:2926-32.

31. Branford S, Rudzki Z, Walsh S, Parkinson I, Grigg A, Szer J, et al. Detection of BCR-ABL mutations in patients with CML treated with imatinib is virtually always accompanied by clinical resistance and mutations in the ATP phosphate-binding loop (P-loop) are associated with a poor prognosis. Blood 2003; 102:276-83.

32. Branford S. Chronic myeloid leukemia: molecular monitoring in clinical practice. Hematology Am Soc Hematol Educ Program 2007; 2007:376-83.

33. Branford S. et al. Early molecular response and female sex strongly predict stable undetectable BCR-ABL1, the criteria for imatinib discontinuation in patients with CML //Blood. - 2013. - T. 121. - №. 19. - C. 3818-3824.

34. Breccia M, Finsinger P, Loglisci G, Latagliata R, Mancini M, Salaroli A et al. The EUTOS score identifies chronic myeloid leukaemia patients with poor prognosis treated with imatinib first or second line. Leuk Res 2012; 36: e209-e210.

35. Breedveld P, Pluim D, Cipriani G, et al. The effect of Bcrp1 (Abcg2) on the in vivo pharmacokinetics and brain penetration of imatinib mesylate (Gleevec): implications for the use of breast cancer resistance protein and P-glycoprotein inhibitors to enable the brain penetration of imatinib in patients. Cancer Res 2005;65:2577-2582.

36. Burger H, van Tol H, Boersma AW, et al. Imatinib mesylate (STI571) is a substrate for the breast cancer resistance protein (BCRP)/ABCG2 drug pump. Blood 2004;104:2940-2942.

37. Burger H, van Tol H, Brok M, et al. Chronic imatinib mesylate exposure leads to reduced intracellular drug accumulation by induction of the ABCG2 (BCRP) and ABCB1 (MDR1) drug transport pumps. Cancer Biol Ther 2005;4:747-752.

38. Castagnetti F, Breccia M, Levato L, Cortelezzi A, Abruzzese E, Albano F et al. B2A2 BCR-ABL fusion transcript is a candidate adverse prognostic factor in chronic myeloid leukemia patients treated frontline with imatinib mesylate. Haematologica 2011; 96: 205 (EHA abstract no. 0487).

39. Castagnetti F, Gugliotta G, Palandri F, Breccia M, Levato L, Stagno F et al. EUTOS score is predictive for survival and outcome in patients with early chronic phase chronic myeloid leukemia treated with nilotinib-based regimens. Haematologica 2012; 97: 76-77 (EHA abstract no. 193).

40. Castagnetti F, Gugliotta G, Palandri F, Breccia M, Stagno F, Levato L et al. The BCR-ABL1 transcript type does not influence the response and the outcome of chronic myeloid leukemia patients treated frontline with nilotinib. Blood 2012; 120: (ASH abstract no. 1680)

41. Castagnetti F, Testoni N, Luatti S, et al. Deletions of the Derivative Chromosome 9 Do Not Influence the Response and the Outcome of Chronic Myeloid Leukemia in Early Chronic Phase Treated With Imatinib Mesylate: GIMEMA CML Working Party Analysis. Journal of Clinical Oncology. 2010;28(16):2748-2754.

42. Copland M, Hamilton A, Elrick LJ, et al. Dasatinib (BMS-354825) targets an earlier progenitor population than imatinib in primary CML but does not eliminate the quiescent fraction. Blood 2006;107:4532-4539.

43. Copland M, Pellicano F, Richmond L, et al. BMS-214662 potently induces apoptosis of chronic myeloid leukemia stem and progenitor cells and synergizes with tyrosine kinase inhibitors. Blood 2008;111:2843-2853.

44. Corbin AS, La Rosée P, Stoffregen EP, Druker BJ, Deininger MW Several Bcr-Abl kinase domain mutants associated with imatinib mesylate resistance remain sensitive to imatinib. Blood 2003; 101:4611-4.

45. Cortes J, Jabbour E, Kantarjian H, Yin CC, Shan J, O'Brien S, et al. Dynamics of BCR-ABL kinase domain mutations in chronic myeloid leukemia after sequential treatment with multiple tyrosine kinase inhibitors. Blood 2007; 110:4005-11.

46. Cortes JE, Talpaz M, Giles F, et al. Prognostic significance of cytogenetic clonal evolution in patients with chronic myelogenous leukemia on imatinib mesylate therapy. Blood. 2003;101(10):3794-3800.

47. Cramer K, Nieborowska-Skorska M, Koptyra M, et al. BCR/ABL and other kinases from chronic myeloproliferative disorders stimulate single-strand annealing, an unfaithfull DNA double-strand break repair. Cancer Res 2008;68:6884- 6888.

48. Cross N. C. P. et al. Standardized definitions of molecular response in chronic myeloid leukemia //Leukemia. - 2012. - T. 26. - №. 10. - C. 2172-2175.

49. Crossman LC, Druker BJ, Deininger MW, Pirmohamed M, Wang L, Clark RE. hOCT 1 and resistance to imatinib.Blood 2005;106:1133-1134.

50. Crossman LC, Mori M, Hsieh YC, et al. In chronic myeloid leukemia white cells from cytogenetic responders and non-responders to imatinib have very similar gene expression signatures. Haematologica 2005;90:459-464.

51. Dai Y, Rahmani M, Corey SJ, Dent P, Grant S. A Bcr/Abl- ndependent, Lyn-dependent form of imatinib mesylate (STI-571) resistance is associated with altered expression of Bcl-2. J Biol Chem 2004;279:34227-34239.

52. Daley GQ, Van Etten RA, Baltimore D. Induction of chronic myelogenous leukemia in mice by the P210bcr/abl gene of the Philadelphia chromosome. Science 1990; 247:824-30.

53. Davies A, Jordanides NE, Giannoudis A, et al. Nilotinib concentration in cell lines and primary CD34+ chronic myeloid leukemia cells is not mediated by active uptake or efflux by major drug transporters. Leukemia 2009;23:1999-2006.

54. De Lavallade H, Apperley JF, Khorashad J, Milojkovic D, Reid AG, Bua M et al. Imatinib for newly diagnosed patients with chronic myeloid leukemia: incidence of sustained response in an intention-to-treat analysis. J Clin Oncol 2008; 26: 3358-3363.

55. Deininger MWN, Cortes J, Paquette R, et al. The prognosis for patients with chronic myeloid leukemia who have clonal cytogenetic abnormalities in philadelphia chromosome-negative cells. Cancer. 2007;110(7):1509-1519.

56. Deininger, Michael, et al. "International Randomized Study of Interferon vs STI571 (IRIS) 8-Year Follow up: sustained survival and low risk for progression or events in patients with newly diagnosed chronic myeloid leukemia in chronic phase (CML-CP) treated with imatinib." ASH Annual Meeting Abstracts. Vol. 114. No. 22. 2009.

57. Dohse M, Scharenberg C, Shukla S, et al. Comparison of ATP-binding cassette transporter interactions with the tyrosine kinase inhibitors imatinib, nilotinib, and dasatinib. Drug Metab Dispos 2010;38:1371-1380.

58. Donato NJ, Wu JY, Stapley J, et al. BCR-ABL independence and LYN kinase overexpression in chronic myelogenous leukemia cells selected for resistance to STI571. Blood 2003;101:690-698.

59. Druker BJ, Guilhot F, O'Brien SG, Gathmann I, Kantarjian H, Gattermann N, et al. Five-year follow-up of patients receiving imatinib for chronic myeloid leukemia. N Engl J Med 2006; 355:2408-17.

60. Druker BJ, Tamura S, Buchdunger E, Ohno S, Segal GM, Fanning S, et al. Effects of a selective inhibitor of the Abl tyrosine kinase on the growth of Bcr-Abl positive cells. Nat Med 1996; 2:561-6.

61. Drummond MW, Heaney N, Kaeda J, et al. A pilot study of continuous imatinib vs pulsed imatinib with or without G-CSF in CML patients who have achieved a complete cytogenetic response. Leukemia 2009;23:1199-1201.

62. Dulucq S, Bouchet S, Turcq B, Lippert E, Etienne G, Reiffers J et al. Multidrug resistance gene (MDR1) polymorphisms are associated with major molecular responses to standard-dose imatinib in chronic myeloid leukemia. Blood 2008; 112: 2024-2027.

63. Dumka D, Puri P, Carayol N, et al. Activation of the p38 Map kinase pathway is essential for the antileukemic effects of dasatinib. Leuk Lymphoma 2009;50:2017-2029.

64. Eadie L, Hughes TP, White DL. Nilotinib does not significantly reduce imatinib OCT-1 activity in either cell lines or primary CML cells. Leukemia 2010;24:855-857.

65. El-Zimaity MMT, Kantarjian H, Talpaz M, et al. Results of imatinib mesylate therapy in chronic myelogenous leukaemia with variant Philadelphia chromosome. British Journal of Haematology. 2004;125(2):187-195.

66. Engler JR, Frede A, Saunders VA, Zannettino AC, Hughes TP, White DL. Chronic myeloid leukemia CD34+cells have reduced uptake of imatinib due to low OCT-1 activity. Leukemia 2010;24:765-770.

67. Ernst T, Erben P, Müller MC, Paschka P, Schenk T, Hoffmann J, et al. Dynamics of BCR-ABL mutated clones prior to hematologic or cytogenetic resistance to imatinib. Haematologica 2008; 93:186-92.

68. Ernst T, Gruber FX, Pelz-Ackermann O, Maier J, Pfirrmann M, Müller MC, et al. A co-operative evaluation of different methods of detecting BCR-ABL kinase domain mutations in patients with chronic myeloid leukemia on second-line dasatinib or nilotinib therapy after failure of imatinib. Haematologica 2009; 94:1227-35.

69. Ernst T, Hoffmann J, Erben P, Hanfstein B, Leitner A, Hehlmann R, et al. ABL single nucleotide polymorphisms may masquerade as BCR-ABL mutations associated with resistance to tyrosine kinase inhibitors in patients with chronic myeloid leukemia. Haematologica 2008; 93:1389-93.

70. Fabarius A, Leitner A, Hochhaus A, Muller MC, Hanfstein B, Haferlach C et al. Impact of additional cytogenetic aberrations at diagnosis on prognosis of CML: long-term observation of 1151 patients from the randomized CML Study IV. Blood 2011; 118: 6760-6768.

71. Farag SS, Ruppert AS, Mrozek K, et al. Prognostic significance of additional cytogenetic abnormalities in newly diagnosed patients with Philadelphia chromosome-positive chronic myelogenous leukemia treated with interferon-alpha: A Cancer and Leukemia Group B study. International Journal of Oncology. 2004;25(1):143-151.

72. Fernandes MS, Reddy MM, Gonneville JR, DeRoo SC, Podar K, Griffin JD, et al. BCR-ABL promotes the frequency of mutagenic single-strand annealing DNA repair. Blood 2009; 114:1813-9.

73

74

75

76

77

78

79

80

81

82

83

84

85

86

Frank O, Brors B, Fabarius A, et al. Gene expression signature of primary imatinib-resistant chronic myeloid leukemia patients. Leukemia 2006;20:1400-1407.

Gambacorti-Passerini C, le Coutre P, Mologni L, Fanelli M, Bertazzoli C, Marchesi E, et al. Inhibition of the ABL kinase activity blocks the proliferation of BCR/ABL+ leukemic cells and induces apoptosis. Blood Cells Mol Dis 1997; 23:380-94.

Gambacorti-Passerini CB, Gunby RH, Piazza R, Galietta A, Rostagno R, Scapozza L. Molecular mechanisms of resistance to imatinib in Philadelphia-chromosome-positive leukaemias. Lancet Oncol 2003;4:75-85.

Garg, Ravin J., et al. "The use of nilotinib or dasatinib after failure to 2 prior tyrosine kinase inhibitors: long-term follow-up." Blood 114.20 (2009): 4361-4368.

Geahlen RL, Handley MD, Harrison ML. Molecular interdiction of Src-family kinase signaling in hematopoietic cells. Oncogene 2004;23:8024-8032.

Giannoudis A, Davies A, Lucas CM, Harris RJ, Pirmohamed M, Clark RE. Effective dasatinib uptake may occur without human organic cation transporter 1 (hOCT1): implications for the treatment of imatinib-resistant chronic myeloid leukemia. Blood 2008;112:3348-3354. Goldman JM, Melo JV. BCR-ABL in chronic myelogenous leukemia—how does it work? Acta Haematol 2008; 119:212-7.

Gorre ME, Mohammed M, Ellwood K, et al. Clinical resistance to STI-571 cancer therapy caused by BCR-ABL gene mutation or amplification. Science 2001;293:876-880.

Grosso S, Puissant A, Dufies M, et al. Gene expression profiling of imatinib and PD166326-resistant CML cell lines identifies Fyn as a gene associated with resistance to BCR-ABL inhibitors. Mol Cancer Ther 2009;8:1924-1933.

Gugliotta, Gabriele, et al. "Frontline Treatment With Imatinib Mesylate in Chronic Myeloid Leukemia Patients in Early Chronic Phase: a Very Long-Term Analysis by the GIMEMA CML Working Party." Blood 122.21 (2013): 258-258.

Haferlach C, Bacher U, Schnittger S, Weiss T, Kern W, Haferlach T. Similar patterns of chromosome abnormalities in CML occur in addition to the Philadelphia chromosome with or without tyrosine kinase inhibitor treatment. Leukemia . 2010;24(3):638-640. Hanfstein B, Müller MC, Kreil S, Schenk T, Lorentz C, Schwindel U, et al. Dynamics of mutant BCR-ABL positive clones after cessation of tyrosine kinase inhibitor therapy. Haematologica 2010; Epub December 6.

Hasford J, Baccarani M, Hoffmann V, Guilhot J, Saussele S, Rosti G et al. Predicting complete cytogenetic response and subsequent progression-free survival in 2060 patients with CML on imatinib treatment: the EUTOS score. Blood 2011; 118: 686-692.

Hasford J, Pfirrmann M, Hehlmann R, Allan NC, Baccarani M, Kluin-Nelemans JC et al. A new

prognostic score for survival of patients with chronic myeloid leukemia treated with interferon

101

alfa. Writing Committee for the Collaborative CML Prognostic Factors Project Group. J Natl Cancer Inst 1998; 90: 850-858.

87. Hatziieremia S, Jordanides NE, Holyoake TL, Mountford JC, Jorgensen HG. Inhibition of MDR1 does not sensitize primitive chronic myeloid leukemia CD34+ cells to imatinib. Exp Hematol 2009;37:692-700.

88. Hegedus T, Orfi L, Seprodi A, Varadi A, Sarkadi B, Keri G. Interaction of tyrosine kinase inhibitors with the human multidrug transporter proteins, MDR1 and MRP1. Biochim Biophys Acta 2002;1587:318-325.

89. Hehlmann R. et al. Deep molecular response is reached by the majority of patients treated with imatinib, predicts survival, and is achieved more quickly by optimized high-dose imatinib: results from the randomized CML-study IV //Journal of Clinical Oncology. - 2014. - T. 32. - №. 5. - C. 415-423.

90. Hiwase DK, Saunders V, Hewett D, et al. Dasatinib cellular uptake and efflux in chronic myeloid leukemia cells: therapeutic implications. Clin Cancer Res 2008;14:3881-3888.

91. Hiwase DK, White DL, Powell JA, et al. Blocking cytokine signaling along with intense Bcr-Abl kinase inhibition induces apoptosis in primary CML progenitors. Leukemia 2010;24:771-778

92. Hochhaus A, Ernst T, Erben P, Müller MC, Emig M, Kreil S, et al. Long term observation of CML patients after imatinib resistance associated with BCR-ABL mutations. Blood 2005; 106:1086.

93. Hochhaus A, Kreil S, Corbin AS, et al. Molecular and chromosomal mechanisms of resistance to imatinib (STI571) therapy. Leukemia 2002;16:2190-2196.

94. Hochhaus A, La Rosée P. Imatinib therapy in chronic myelogenous leukemia: strategies to avoid and overcome resistance. Leukemia 2004; 18:1321-31.

95. Hochhaus A, O'Brien SG, Guilhot F, Druker BJ, Branford S, Foroni L, et al. Six-year follow-up of patients receiving imatinib for the first-line treatment of chronic myeloid leukemia. Leukemia 2009; 23:1054-61.

96. Hochhaus A, Saglio G, Larson RA, Kim DW, Flinn IW, Goh YT, et al. Nilotinib lowers the incidence of BCR-ABL mutations and improves the molecular response kinetics compared with imatinib in patients with newly diagnosed chronic myeloid leukemia. Blood 2010; 3431.

97. Holtz M, Forman SJ, Bhatia R. Growth factor stimulation reduces residual quiescent chronic myelogenous leukemia progenitors remaining after imatinib treatment. Cancer Res 2007;67:1113-1120.

98. Holtz MS, Forman SJ, Bhatia R. Nonproliferating CML CD34 + progenitors are resistant to apoptosis induced by a wide range of proapoptotic stimuli. Leukemia 2005;19:1034-1041.

99. Holyoake T, Jiang X, Eaves C, Eaves A. Isolation of a highly quiescent subpopulation of primitive leukemic cells in chronic myeloid leukemia. Blood 1999;94:2056-2064.

102

100. Holyoake TL, Jiang X, Jorgensen HG, et al. Primitive quiescent leukemic cells from patients with chronic myeloid leukemia spontaneously initiate factor-independent growth in vitro in association with up-regulation of expression of interleukin-3. Blood 2001;97:720-728.

101. Houghton PJ, Germain GS, Harwood FC, et al. Imatinib mesylate is a potent inhibitor of the ABCG2 (BCRP) transporter and reverses resistance to topotecan and SN-38 in vitro. Cancer Res 2004;64:2333-2337.

102. Hu S, Franke RM, Filipski KK, et al. Interaction of imatinib with human organic ion carriers. Clin Cancer Res 2008;14: 3141-3148.

103. Hu Y, Swerdlow S, Duffy TM, Weinmann R, Lee FY, Li S. Targeting multiple kinase pathways in leukemic progenitors and stem cells is essential for improved treatment of Ph + leukemia in mice. Proc Natl Acad Sci USA 2006;103:16870-16875.

104. Hughes T, Deininger M, Hochhaus A, Branford S, Radich J, Kaeda J, et al. Monitoring CML patients responding to treatment with tyrosine kinase inhibitors: review and recommendations for harmonizing current methodology for detecting BCR-ABL transcripts and kinase domain mutations and for expressing results. Blood 2006; 108:28-37.

105. Hughes T, Saglio G, Branford S, Soverini S, Kim DW, Müller MC, et al. Impact of baseline BCR-ABL mutations on response to nilotinib in patients with chronic myeloid leukemia in chronic phase. J Clin Oncol 2009; 27:4204-10.

106. Hughes T. P. et al. Long-term prognostic significance of early molecular response to imatinib in newly diagnosed chronic myeloid leukemia: an analysis from the International Randomized Study of Interferon and STI571 (IRIS) //Blood. - 2010. - T. 116. - №. 19. - C. 3758-3765.

107. Illmer T, Schaich M, Platzbecker U, Freiberg-Richter J, Oelschlagel U, von Bonin M et al. P-Glycoprotein-mediated drug efflux is a resistance mechanism of chronic myelogenous leukemia cells to treatment with imatinib mesylate. Leukemia 2004; 18: 401-408.

108. Italian Cooperative Study Group On Chronic Myeloid Leukemia. Interferon alfa-2a as compared with conventional chemotherapy for the treatment of chronic myeloid leukemia. New England Journal of Medicine 1994;330(12):820-825.

109. Jabbour E, Cortes J, Nazha A, O'Brien S, Quintas-Cardama A, Pierce S et al. EUTOS score is not predictive for survival and outcome in patients with early chronic phase chronic myeloid leukemia treated with tyrosine kinase inhibitors: a single institution experience. Blood 2012; 119: 4524-4526.

110. Jabbour E, Kantarjian H, Jones D, Breeden M, Garcia-Manero G, O'Brien S, et al. Characteristics and outcomes of patients with chronic myeloid leukemia and T315I mutation following failure of imatinib mesylate therapy. Blood 2008; 112:53-5.

111. Jabbour E, Kantarjian H, Jones D, Talpaz M, Bekele N, O'Brien S, et al. Frequency and clinical significance of BCR-ABL mutations in patients with chronic myeloid leukemia treated with

103

imatinib mesylate. Leukemia 2006; 20:1767-73.

112. Jabbour E, Kantarjian H, O'Brien S, et al. Predictive factors for outcome and response in patients treated with second-generation tyrosine kinase inhibitors for chronic myeloid leukemia in chronic phase after imatinib failure. Blood 2011;117(6):1822-1827

113. Jabbour E, Kantarjian HM, Jones D, Reddy N, O'Brien S, Garcia-Manero G, et al. Characteristics and outcome of chronic myeloid leukemia patients with F317L BCR-ABL kinase domain mutation after therapy with tyrosine kinase inhibitors. Blood 2008; 112:4839-42.

114. Jabbour E, Kantarjian HM, Jones D, Shan J, O'Brien S, Reddy N, et al. Imatinib mesylate dose escalation is associated with durable responses in patients with chronic myeloid leukemia after cytogenetic failure on standard-dose imatinib therapy. Blood 2009; 113:2154-60.

115. Jabbour, Elias, et al. "Long-term outcome of patients with chronic myeloid leukemia treated with second-generation tyrosine kinase inhibitors after imatinib failure is predicted by the in vitro sensitivity of BCR-ABL kinase domain mutations." Blood 114.10 (2009): 2037-2043.

116. Jabbour, Elias, et al. "Predictive factors for outcome and response in patients treated with second-generation tyrosine kinase inhibitors for chronic myeloid leukemia in chronic phase after imatinib failure." Blood 117.6 (2011): 1822-1827.

117. Janousova, E., Pavlik, T., Hulek, R., Mayer, J., Dusek, L. Data analysis tool for the estimation of the current survival measures [online]. 2013. Available from: http://www.iba.muni.cz/data-analysis-tools/currentSurvival/

118. Jiang X, Zhao Y, Smith C, Gasparetto M, Turhan A, Eaves A, Eaves C. Chronic myeloid leukemia stem cells possess multiple unique features of resistance to BCR-ABL targeted therapies. Leukemia 2007;21:926-935.

119. Jordanides NE, Jorgensen HG, Holyoake TL, Mountford JC. Functional ABCG2 is overexpressed on primary CML CD34+ cells and is inhibited by imatinib mesylate. Blood 2006;108:1370-1373.

120. Jorgensen HG, Allan EK, Jordanides NE, Mountford JC, Holyoake TL. Nilotinib exerts equipotent anti-proliferative effects to imatinib and does not induce apoptosis in CD34 + CML cells. Blood 2007;109:4016-4019.

121. Jorgensen HG, Copland M, Allan EK, et al. Intermittent exposure of primitive quiescent chronic myeloid leukemia cells to granulocyte-colony stimulating factor in vitro promotes their elimination by imatinib mesylate. Clin Cancer Res 2006;12:626-633.

122. Jorgensen HG, Holyoake TL. Characterization of cancer stem cells in chronic myeloid leukaemia. Biochem Soc Trans 2007;35:1347-1351.

123. Kamath AV, Wang J, Lee FY, Marathe PH. Preclinical pharmacokinetics and in vitro metabolism of dasatinib (BMS-354825): a potent oral multi-targeted kinase inhibitor against SRC and BCR-ABL. Cancer Chemother Pharmacol 2008;61:365-376.

124. Kaneta Y, Kagami Y, Katagiri T, et al. Prediction of sensitivity to STI571 among chronic myeloid leukemia patients by genome-wide cDNA microarray analysis. Jpn J Cancer Res 2002;93:849-856.

125. Kantarjian H, Giles F, Wunderle L, Bhalla K, O'Brien S, Wassmann B, et al. Nilotinib in imatinib-resistant CML and Philadelphia chromosome-positive ALL. N Engl J Med 2006; 354:2542-51.

126. Kantarjian H, Sawyers C, Hochhaus A, et al. Hematologic and cytogenetic responses to imatinib mesylate in chronic myelogenous leukemia. N Engl J Med 2002;346:645-652.

127. Kantarjian H, Shah NP, Hochhaus A, Cortes J, Shah A_ S, Ayala M, et al. Dasatinib versus imatinib in newly diagnosed chronic-phase chronic myeloid leukemia. N Engl J Med 2010; 362:2260-70.

128. Kantarjian H, Smith T, McCredie K, et al. Chronic myelogenous leukemia: a multivariate analysis of the associations of patient characteristics and therapy with survival. Blood. 1985;66(6):1326-1335.

129. Kantarjian HM, Dixon D, Keating MJ. Characteristics of accelerated disease in chronic myelogenous leukemia. Cancer 1988; 61: 1141-1146.

130. Kantarjian HM, Keating MJ, Smith TL, Talpaz M, McCredie KB. Proposal for a simple synthesis prognostic staging system in chronic myelogenous leukemia. AmJMed. 1990;88(1):1-8.

131. Keller G, Schafhausen P, Brümmendorf TH. Bosutinib. Recent Results Cancer Res 2010; 184:119-27.

132. Khorashad JS, de Lavallade H, Apperley JF, Milojkovic D, Reid AG, Bua M, et al. Finding of kinase domain mutations in patients with chronic phase chronic myeloid leukemia responding to imatinib may identify those at high risk of disease progression. J Clin Oncol 2008; 26:4806-13.

133. Khorashad JS, Milojkovic D, Mehta P, Anand M, Ghorashian S, Reid AG, et al. In vivo kinetics of kinase domain mutations in CML patients treated with dasatinib after failing imatinib. Blood 2008; 111:2378-81.

134. Khorashad JS, Wagner S, Greener L, Marin D, Reid A, Milojkovic D et al. The level of BCR-ABL1 kinase activity before treatment does not identify chronic myeloid leukemia patients who fail to achieve a complete cytogenetic response on imatinib. Haematologica 2009; 94: 861-864.

135. Kim SH, Kim D, Kim DW, Goh HG, Jang SE, Lee J, et al. Analysis of Bcr-Abl kinase domain mutations in Korean chronic myeloid leukaemia patients: poor clinical outcome of P-loop and T315I mutation is disease phase dependent. Hematol Oncol 2009; 27:190-7.

136. Kim, Theo D., et al. "Impact of additional chromosomal aberrations and BCR-ABL kinase domain mutations on the response to nilotinib in Philadelphia chromosome-positive chronic myeloid leukemia." Haematologica 95.4 (2010): 582-588.

137. Konig H, Holtz M, Modi H, et al. Enhanced BCR-ABL kinase inhibition does not result in increased inhibition of downstream signaling pathways or increased growth suppression in CML progenitors. Leukemia 2008;22:748-755.

138. Koptyra M, Cramer K, Slupianek A, Richardson C, Skorski T. BCR/ABL promotes accumulation of chromosomal aberrations induced by oxidative and genotoxic stress. Leukemia 2008;22:1969-1972.

139. Koptyra M, Falinski R, Nowicki MO, Stoklosa T, Majsterek I, Nieborowska-Skorska M, et al. BCR/ABL kinase induces self-mutagenesis via reactive oxygen species to encode imatinib resistance. Blood 2006; 108:319-27.

140. Koren, Michowitz, Maya, et al. "Imatinib plasma trough levels in chronic myeloid leukaemia: results of a multicentre study CSTI571AIL11TGLIVEC." Hematological oncology 30.4 (2012): 200-205.

141. Lagas JS, van Waterschoot RA, van Tilburg VA, et al. Brain accumulation of dasatinib is restricted by P-glycoprotein (ABCB1) and breast cancer resistance protein (ABCG2) and can be enhanced by elacridar treatment. Clin Cancer Res 2009;15:2344-2351.

142. Lahaye T, Riehm B, Berger U, Paschka P, Müller MC, Kreil S, et al. Response and resistance in 300 patients with BCR-ABL-positive leukemias treated with imatinib in a single center: a 4.5 year follow-up. Cancer 2005; 103:1659-69.

143. Laneuville P, DiLea C, Yin OQ, Woodman RC, Mestan J, Manley PW. Comparative In vitro cellular data alone are insufficient to predict clinical responses and guide the choice of BCR-ABL inhibitor for treating imatinib-resistant chronic myeloid leukemia. J Clin Oncol 2010; 28:169-71.

144. Lavallade H, Finetti P, Carbuccia N, et al. A gene expression signature of primary resistance to imatinib in chronic myeloid leukemia. Leuk Res 2010;34:254-257.

145. Lee SE, Choi SY, Bang JH, et al. The long-term clinical implications of clonal chromosomal abnormalities in newly diagnosed chronic phase chronic myeloid leukemia patients treated with imatinib mesylate. Cancer Genet. 2012;205(11): 563-571.

146. Lippert E, Etienne G, Mozziconacci M-J, et al. Loss of the Y chromosome in Philadelphiapositive cells predicts a poor response of chronic myeloid leukemia patients to imatinib mesylate therapy.Haematologica. 2010;95(9):1604-1607.

147. Luatti S, Castagnetti F, Marzocchi G, Baldazzi C, Gugliotta G, Iacobucci I et al. Additional chromosome abnormalities in Philadelphia-positive clone: adverse prognostic influence on frontline imatinib therapy: a GIMEMA Working Party on CML analysis. Blood 2012; 120: 761767.

148. Lucas CM, Harris RJ, Giannoudis A, Davies A, Knight K, Watmough SJ et al. Chronic myeloid leukemia patients with the e13a2 BCR-ABL fusion transcript have inferior responses to imatinib compared to patients with the e14a2 transcript. Haematologica 2009; 94: 1362-1367.

106

149. Lugo TG, Pendergast AM, Muller AJ, Witte ON. Tyrosine kinase activity and transformation potency of bcr-abl oncogene products. Science 1990; 247:1079-82.

150. Mahon F. X. et al. Discontinuation of imatinib in patients with chronic myeloid leukaemia who have maintained complete molecular remission for at least 2 years: the prospective, multicentre Stop Imatinib (STIM) trial //The lancet oncology. - 2010. - T. 11. - №. 11. - C. 1029-1035

151. Mahon F-X, Augis V, Airiau K, Josselin M, Turc B, Belloc F. A single nucleotide polymorphism in the coding sequence of BIM is associated with poor prognostic in chronic myeloid leukemia treated by imatinib. Blood 2012; 120: (ASH abstract no. 1683).

152. Mahon F-X, Belloc F, Lagarde V, Chollet C, Moreau-Gaudry F, Reiffers J et al. MDR1 gene overexpression confers resistance to imatinib mesylate in leukemia cell line models. Blood 2003; 101: 2368-2373.

153. Mahon FX, Deininger MW, Schultheis B, et al. Selection and characterization of BCR-ABL positive cell lines with differential sensitivity to the tyrosine kinase inhibitor STI571: diverse mechanisms of resistance. Blood 2000;96:1070-1079.

154. Mahon FX, Hayette S, Lagarde V, et al. Evidence that resistance to nilotinib may be due to BCR-ABL, Pgp, or Src kinase overexpression. Cancer Res 2008;68:9809-9816.

155. Marin D, Ibrahim AR, Goldman J. European treatment and outcome study (EUTOS) score for chronic myeloid leukemia still requires more confirmation. J Clin Oncol 2011; 29: 3944-3955.

156. Martinelli G, Soverini S, Rosti G, Cilloni D, Baccarani ■ M. New tyrosine kinase inhibitors in chronic myeloid leukemia. Haematologica 2005; 90:534-41.

157. Marzocchi G, Castagnetti F, Luatti S, Baldazzi C, Stacchini M, Gugliotta G et al. Variant Philadelphia translocations: molecular-cytogenetic characterization and prognostic influence on frontline imatinib therapy, a GIMEMA Working Party on CML analysis. Blood 2011; 117: 67936800.

158. Marzocchi G, Castagnetti F, Luatti S, et al. Variant Philadelphia translocations: molecular-cytogenetic characterization and prognostic influence on frontline imatinib therapy, a GIMEMA Working Party on CML analysis. Blood. 2011;117(25):6793-6800.

159. McLean LA, Gathmann I, Capdeville R, Polymeropoulos MH, Dressman M. Pharmacogenomic analysis of cytogenetic response in chronic myeloid leukemia patients treated with imatinib. Clin Cancer Res 2004;10:155-165.

160. McWeeney SK, Pemberton LC, Loriaux MM, et al. A gene expression signature of CD34 + cells to predict major cytogenetic response in chronic-phase chronic myeloid leukemia patients treated with imatinib. Blood 2010;115: 315-325.

161. Melo JV, Barnes DJ. Chronic myeloid leukaemia as a model of disease evolution in human cancer. Nat Rev Cancer. 2007;7(6):441-453.

162. Milojkovic D, Nicholson E, Apperley JF, et al. Early prediction of success or failure of treatment with second-generation tyrosine kinase inhibitors in patients with chronic myeloid leukemia. Haematologica 2010;95(2):224-231

163. Mitelman F, Levan G, Nilsson PG, Brandt L. Non-random karyotypic evolution in chronic myeloid leukemia. International Journal of Cancer. 1976;18(1):24-30

164. Mitelman F. The Cytogenetic Scenario of Chronic Myeloid Leukemia. Leukemia & Lymphoma. 1993;11(s1):11-15.

165. Morinaga K, Yamauchi T, Kimura S, Maekawa T, Ueda T. Overcoming imatinib resistance using Src inhibitor CGP76030, Abl inhibitor nilotinib and Abl/Lyn inhibitor INNO-406 in newly established K562 variants with BCR-ABL gene amplification. Int J Cancer 2008;122:2621-2627.

166. Müller MC, Cortes JE, Kim DW, Druker BJ, Erben P, Pasquini R, et al. Dasatinib treatment of chronic-phase chronic myeloid leukemia: analysis of responses according to preexisting BCR-ABL mutations. Blood 2009; 114:4944-53.

167. Muller-Berat CN, Wantzin GL, Philip P, Baccarani M, Killmann S-A. Agar culture studies of bone marrow, blood, spleen, and liver in chronic myeloid leukemia. Leuk Res 1977; 1: 123-131.

168. Nagar B, Bornmann WG, Pellicena P, Schindler T, Veach DR, Miller WT, et al. Crystal structures of the kinase domain of c-Abl in complex with the small molecule inhibitors PD173955 and imatinib (STI-571). Cancer Res 2002; 62:4236-43

169. Nardi V, Azam M, Daley GQ. Mechanisms and implications of imatinib resistance mutations in BCR-ABL. Curr Opin Hematol 2004; 11:35-43.

170. National Comprehensive Cancer Network. Clinical Practice Guidelines in Oncology: Chronic Myelogenous Leukemia V.2.2011. Available at http://www.nccn.org/ professionals/physician_gls/PDF/cml.pdf (Accessed November 2010).

171. Ng KP, Hillmer AM, Chuah CTH, Juan WC, Ko TK, Teo ASM et al. A common BIM deletion polymorphism mediates intrinsic resistance and inferior responses to tyrosine kinase inhibitors in cancer. Nat Med 2012; 18: 521-528.

172. Nicolini FE, Corm S, Le QH, Roche-Lestienne C, Preudhomme C. The prognosis impact of BCR-ABL P-loop mutations: worse or not worse? Leukemia 2007; 21:193-4.

173. Nicolini FE, Corm S, Le QH, Sorel N, Hayette S, Bories D, et al. Mutation status and clinical outcome of 89 imatinib mesylate-resistant chronic myelogenous leukemia patients: a retrospective analysis from the French intergroup of CML (Fi(varphi)-LMC GROUP). Leukemia 2006; 20:1061-6.

174. Nicolini FE, Hayette S, Corm S, Bachy E, Bories D, Tulliez M, et al. Clinical outcome of 27 imatinib mesylate-resistant chronic myelogenous leukemia patients harboring a T315I BCR-ABL mutation. Haematologica 2007; 92:1238-41.

175. O'Brien SG, Guilhot F, Larson RA, Gathmann I, Baccarani M, Cervantes F, et al. Imatinib

108

compared with interferon and low-dose cytarabine for newly diagnosed chronic-phase chronic myeloid leukemia. N Engl J Med 2003; 348:994-1004.

176. O'Hare T, Walters DK, Stoffregen EP, Jia T, Manley PW, Mestan J, et al. In vitro activity of Bcr-Abl inhibitors AMN107 and BMS-354825 against clinically relevant imatinib-resistant Abl kinase domain mutants. Cancer Res 2005; 65:4500-5.

177. O'Dwyer ME, Mauro MJ, Blasdel C, et al. Clonal evolution and lack of cytogenetic response are adverse prognostic factors for hematologic relapse of chronic phase CML patients treated with imatinib mesylate. Blood. 2004;103(2):451-455.

178. O'Dwyer ME, Mauro MJ, Kurilik G, et al. The impact of clonal evolution on response to imatinib mesylate (STI571) in accelerated phase CML. Blood 2002;100(5):1628-1633.

179. Ozvegy-Laczka C, Hegedus T, Varady G, et al. High-affinity interaction of tyrosine kinase inhibitors with the ABCG2 multidrug transporter. Mol Pharmacol 2004;65:1485-1495.

180. Pagnano KB, Lorand-Metze I, Miranda ECM, O Duarte V, Delamain MT, O Duarte G et al. EUTOS score is predictive of event-free survival, but not for progression-free and overall survival in patients with early chronic phase chronic myeloid leukemia treated with imatinib: a single Institution experience. Blood 2012; 120: (ASH abstract no. 1681).

181. Palandri F, Castagnetti F, Testoni N, Luatti S, Marzocchi G, Bassi S, et al. Chronic myeloid leukemia in blast crisis treated with imatinib 600 mg: Outcome of the patients alive after a 6 year follow-up. Haematologica 2008; 93:1792-6.

182. Picard, Stephane, et al. "Trough imatinib plasma levels are associated with both cytogenetic and molecular responses to standard-dose imatinib in chronic myeloid leukemia." Blood 109.8 (2007): 3496-3499.

183. Press RD, Willis SG, Laudadio J, Mauro MJ, Deininger MW Determining the rise in BCR-ABL RNA that optimally predicts a kinase domain mutation in patients with chronic myeloid leukemia on imatinib. Blood 2009; 114:2598-605.

184. Raaijmakers MHGP. ATP-binding-cassette transporters in hematopoietic stem cells and their utility as therapeutical targets in acute and chronic myeloid leukemia. Leukemia 2007; 21: 20942102.

185. Radich JP, Martinelli G, Hochhaus A, Gottardi E, Soverini S, Branford S, et al. Response and outcomes to nilotinib at 24 months in imatinib-resistant chronic myeloid leukemia patients in chronic phase (CML-CP) and accelerated phase (CML-AP) with and without BCR-ABL mutations. Blood 2009; 114:1130.

186. Rajappa S, Mallavarapu KM, Gundeti S, Roshnipaul T, Jacob RT, Digumarti R. Kinase domain mutations and responses to dose escalation in chronic myeloid leukemia resistant to standard dose imatinib mesylate. Leuk Lymphoma 2010; 51:79-84.

187. Ray A, Cowan-Jacob SW, Manley PW, Mestan J, Griffin JD. Identification of BCR-ABL point

109

mutations conferring resistance to the Abl kinase inhibitor AMN107 (nilotinib) by a random mutagenesis study. Blood 2007; 109:5011-5.

188. Redaelli S, Piazza R, Rostagno R, Magistroni V, Perini P, Marega M, et al. Activity of bosutinib, dasatinib and nilotinib against 18 imatinib-resistant BCR/ABL mutants. J Clin Oncol 2009; 27:469-71.

189. Reid AG, Nacheva EP. A potential role for PRDM12 in the pathogenesis of chronic myeloid leukaemia with derivative chromosome 9 deletion. Leukemia. 2003;18(1):178-180.

190. Romo CG, Kantarjian HM, Luthra R, Quintas-Cardama A, Jabbour EJ, Borthakur J et al. Response to frontline therapy with second generation tyrosine kinase inhibitors in chronic myeloid leukemia: analysis of outcome for b3a2 vs b2a2 fusion transcripts. Blood 2012; 120: (ASH abstract no. 3781).

191. Ross D. M. et al. Safety and efficacy of imatinib cessation for CML patients with stable undetectable minimal residual disease: results from the TWISTER study //Blood. - 2013. - T. 122. - №. 4. - C. 515-522.

192. Saglio G, Kim DW, Issaragrisil S, le Coutre P, Etienne G, Lobo C et al. Nilotinib versus imatinib for newly diagnosed chronic myeloid leukemia. N Engl J Med 2010; 362: 2251-2259.

193. Saussele S, Lauseker M, Hoffmann V, Lindorfer D, Hanfstein B, Proetel U et al. The EUTOS high-risk population differs substantially from the EURO score high-risk group; the EUTOS score predicts molecular response in chronic phase CML patients: results of the German CML-Study IV. Haematologica 2012; 97(s1): 454 (EHA abstract no 1105).

194. Schemionek M, Spieker T, Kerstiens L, Elling C, Essers M, Trumpp A et al. Leukemic spleen cells are more potent than bone marrow-derived cells in a transgenic mouse model of CML. Leukemia 2011; 26: 1030-1037.

195. Schindler T, Bornmann W, Pellicena P, Miller WT, Clarkson B, Kuriyan J. Structural mechanism for STI-571 inhibition of abelson tyrosine kinase. Science 2000; 289:1938-42.

196. Schoch C, Haferlach T, Kern W, et al. Occurrence of additional chromosome aberrations in chronic myeloid leukemia patients treated with imatinib mesylate. Leukemia. 2003;17(2):461-463.

197. Shah NP, Nicoll JM, Nagar B, Gorre ME, Paquette RL, Kuriyan J, et al. Multiple BCR-ABL kinase domain mutations confer polyclonal resistance to the tyrosine kinase inhibitor imatinib (STI571) in chronic phase and blast crisis chronic myeloid leukemia. Cancer Cell 2002; 2:11725.

198. Shah NP, Skaggs BJ, Branford S, Hughes TP, Nicoll JM, Paquette RL, et al. Sequential ABL kinase inhibitor therapy selects for compound drug-resistant BCR-ABL mutations with altered oncogenic potency. J Clin Invest 2007; 117:2562-9.

199. Sherbenou DW, Hantschel O, Kaupe I, Willis S, Bumm T, Turaga LP, et al. BCR-ABL SH3-SH2 domain mutations in chronic myeloid leukemia patients on imatinib. Blood 2010;

110

116:3278-85.

200. Sherbenou DW, Wong MJ, Humayun A, McGreevey LS, Harrell P, Yang R, et al. Mutations of the BCR-ABL-kinase domain occur in a minority of patients with stable complete cytogenetic response to imatinib. Leukemia 2007; 21:489-93.

201. Silver RT, Cortes J, Waltzman R, Mone M, Kantarjian H. Sustained durability of responses and improved progression-free and overall survival with imatinib treatment for accelerated phase and blast crisis chronic myeloid leukemia: Long-term follow-up of the STI571 0102 and 0109 trials. Haematologica 2009; 94:743-4.

202. Skorski T. BCR/ABL, DNA damage and DNA repair: Implications for new treatment concepts. Leukemia & Lymphoma . 2008;49(4):610-614.

203. Sokal J, Gomez G, Baccarani M, et al. Prognostic significance of additional cytogenetic abnormalities at diagnosis of Philadelphia chromosome-positive chronic granulocytic leukemia. Blood. 1988;72(1):294-298.

204. Sokal JE, Baccarani M, Russo D. Staging and prognosis in chronic myelogenous leukemia. Semin Hematol 1988; 25: 49-61.

205. Sokal JE, Cox EB, Baccarani M, Tura S, Gomez GA, Robertson JE et al. Prognostic discrimination in "good-risk" chronic granulocytic leukemia. Blood 1984; 63: 789-799.

206. Soverini S, Colarossi S, Gnani A, Rosti G, Castagnetti F, Poerio A, et al. Contribution of ABL kinase domain mutations to imatinib resistance in different subsets of Philadelphia-positive patients: By the GIMEMA Working Party on Chronic Myeloid Leukemia. Clin Cancer Res 2006; 12:7374-9.

207. Soverini S, Gnani A, Colarossi S, Castagnetti F, Abruzzese E, Paolini S, et al. Philadelphiapositive patients who already harbor imatinib-resistant Bcr-Abl kinase domain mutations have a higher likelihood of developing additional mutations associated with resistance to second- or third-line tyrosine kinase inhibitors. Blood 2009; 114:2168-71.

208. Soverini S, Martinelli G, Rosti G, Bassi S, Amabile M, Poerio A, et al. ABL mutations in late chronic phase chronic myeloid leukemia patients with up-front cytogenetic resistance to imatinib are associated with a greater likelihood of progression to blast crisis and shorter survival: a study by the GIMEMA Working Party on Chronic Myeloid Leukemia. J Clin Oncol 2005; 23:4100-9.

209. Stoklosa T, Poplawski T, Koptyra M, Nieborowska-Skorska M, Basak G, Slupianek A, et al. BCR/ABL inhibits mismatch repair to protect from apoptosis and induce point mutations. Cancer Res 2008; 68:2576-80.

210. Talpaz M, Shah NP, Kantarjian H, Donato N, Nicoll J, Paquette R, et al. Dasatinib in imatinib-resistant Philadelphia chromosome-positive leukemias. N Engl J Med 2006; 354:2531-41.

211. Than H, Kuan L, Seow CH, Li W, Allen JC, Chuah C. The EUTOS score is highly predictive for clinical outcome and survival in Asian patients with early chronic phase chronic myeloid

111

leukemia treated with imatinib. Blood 2012; 120: (ASH abstract 3758).

212. Thomas J, Wang L, Clark RE, Pirmohamed M. Active transport of imatinib into and out of cells: implications for drug resistance. Blood 2004;104:3739-3745.

213. Tipping AJ, Deininger MW, Goldman JM, Melo JV. Comparative gene expression profile of chronic myeloid leukemia cells innately resistant to imatinib mesylate. Exp Hematol 2003;31:1073-1080.

214. Tiribelli M, Bonifacio M, Calistri E, Binotto G, Maino E, Marin L et al. EUTOS score identifies cases with poor outcome in patients with early phase chronic myeloid leukemia though not predictive for optimal response to imatinib. Blood 2012; 120: (ASH abstract 3778).

215. Tokarski JS, Newitt JA, Chang CY, Cheng JD, Wittekind M, Kiefer SE, et al. The structure of dasatinib (BMS-354825) bound to activated ABL kinase domain elucidates its inhibitory activity against imatinib-resistant ABL mutants. Cancer Res 2006; 66:5790-7.

216. Vajpai N, Strauss A, Fendrich G, Cowan-Jacob SW, Manley PW, Grzesiek S, et al. Solution conformations and dynamics of ABL kinase-inhibitor complexes determined by NMR substantiate the different binding modes of imatinib/nilotinib and dasatinib. J Biol Chem 2008; 283:18292302.

217. van der Kuip H, Moehring A, Wohlbold L, Miething C, Duyster J, Aulitzky WE. Imatinib mesylate (STI571) prevents the mutator phenotype of Bcr-Abl in hematopoietic cell lines. Leuk Res 2004; 28:405-8.

218. Verma D, Kantarjian H, Shan J, et al. Survival outcomes for clonal evolution in chronic myeloid leukemia patients on second generation tyrosine kinase inhibitor therapy. Cancer. 2010;116(11):2673-2681

219. Vigneri PG, Stagno F, Stella S, Cupri A, Forte S, Massimino M et al. High BCR-ABL levels at diagnosis are associated with unfavourable responses to imatinib mesylate. Blood 2012; 120: (ASH abstract no. 2790).

220. Villuendas R, Steegmann JL, Pollan M, et al. Identification of genes involved in imatinib resistance in CML: a gene-expression profiling approach. Leukemia 2006;20:1047-1054.

221. von Bubnoff N, Manley PW, Mestan J, Sanger J, Peschel C, Duyster J. Bcr-Abl resistance screening predicts a limited spectrum of point mutations to be associated with clinical resistance to the Abl kinase inhibitor nilotinib (AMN107). Blood 2006; 108:1328-33.

222. von Bubnoff N, Schneller F, Peschel C, Duyster J. BCR-ABL gene mutations in relation to clinical resistance of Philadelphia-chromosome-positive leukaemia to STI571: a prospective study. Lancet 2002; 359:487-91.

223. Wang L, Giannoudis A, Lane S, Williamson P, Pirmohamed M, Clark RE. Expression of the uptake drug transporter hOCTl is an important clinical determinant of the response to imatinib in chronic myeloid leukemia. Clin Pharmacol Ther 2008;83:258-264.

224. Wang L, Knight K, Lucas C, Clark RE. The role of serial BCR-ABL transcript monitoring in predicting the emergence of BCR-ABL kinase mutations in ima-tinib-treated patients with chronic myeloid leukemia. Haematologica 2006; 91:235-9.

225. Weisberg E, Griffin JD. Mechanism of resistance to the ABL tyrosine kinase inhibitor STI571 in BCR/ABL-transformed hematopoietic cell lines. Blood 2000;95:3498-3505.

226. Weisberg E, Manley PW, Breitenstein W, Bruggen J, Cowan-Jacob SW, Ray A, et al. Characterization of AMN107, a selective inhibitor of native and mutant Bcr-Abl. Cancer Cell 2005; 7:129-41.

227. White DL, Dang P, Engler J, et al. Functional activity of the OCT-1 protein is predictive of long-term outcome in patients with chronic-phase chronic myeloid leukemia treated with imatinib. J Clin Oncol 2010;28:2761-2767.

228. White DL, Radich J, Soverini S, Saunders VA, Frede A, Dang P et al. Chronic phase chronic myeloid leukemia patients with low OCT-1 activity randomised to high-dose imatinib achieve better responses, and lower failure rates, than those randomized to standard-dose. Haematologica 2012; 97: 907-914.

229. White DL, Saunders VA, Dang P, Engler J, Venables A, Zrim S et al. Most CML patients who have a suboptimal response to imatinib have low OCT-1 activity: higher doses of imatinib may overcome the negative impact of low OCT-1 activity. Blood 2007; 110: 4064-4072.

230. Widmer N, Colombo S, Buclin T, Decosterd LA. Functional consequence of MDR1 expression on imatinib intracellular concentrations. Blood 2003;102:1142.

231. Willis SG, Lange T, Demehri S, Otto S, Crossman L, Niederwieser D, et al. High-sensitivity detection of BCR-ABL kinase domain mutations in imatinib-naive patients: correlation with clonal cytogenetic evolution but not response to therapy. Blood 2005; 106:2128-37.

232. Wu J, Meng F, Kong LY, et al. Association between imatinib-resistant BCR-ABL mutationnegative leukemia and persistent activation of LYN kinase. J Natl Cancer Inst 2008;100:926-939.

233. Yahng S-A, Jang E-J, Choi SY, Bang J-H, Park J-E, Leon H-L et al. Comparison of Sokal, Hasford and EUTOS scores in term of long-term treatment outcome according to the risks in each prognostic model: a single center data analysed in 255 early chronic phase chronic myeloid leukemia patients treated with frontline imatinib mesylate. Blood 2012; 120: (ASH abstract no. 2794).

234. Yuan H, Wang Z, Gao C, et al. BCR-ABL gene expression is required for its mutations in a novel KCL-22 cell culture model for acquired resistance of chronic myelogenous leukemia. J Biol Chem 2010;285:5085-5096.