Лечение резистентных и осложненных форм множественной миеломы с учетом чувствительности опухолевых клето in vitro тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.29, кандидат медицинских наук Трифонова, Елена Викторовна

• Трифонова, Елена Викторовна
• кандидат медицинских наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Трифонова, Елена Викторовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. ХАРАКТЕРИСТИКА ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ ПРИ

МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЕ.

1.1 .Механизмы развития лекарственной устойчивости.

1.2. Пути преодоления лекарственной устойчивости.

ГЛАВА II. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ

ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ.

ГЛАВА III. ЛЕЧЕНИЕ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЫ,

ОСЛОЖНЕННОЙ ВНУТРИСПИНАЛЬНЫМ

ОПУХОЛЕВЫМ РОСТОМ, ИНТРАТЕКАЛЬНЫМИ ВВЕДЕНИЯМИ

ЦИТОЗАРА ПО ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ IN VITRO.

ГЛАВА IV. ТЕРАПИЯ РЕЗИСТЕНТНЫХ БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ С АРКОЛИЗИНОМ ПО ПРИНЦИПУ ДОЗОВОГО ПРЕИМУЩЕСТВА С УЧЕТОМ

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ IN VITRO.

ГЛАВА V. КЛИНИЧЕСКАЯ И ФАРМАКОДИНАМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТИ БИСФОСФОНАТОВ IN VITRO ПРИ

МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЕ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Лечение резистентных и осложненных форм множественной миеломы с учетом чувствительности опухолевых клето in vitro»

Актуальность проблемы

Наибольшую актуальность в проблеме повышения противоопухолевой эффективности химиотерапии множественной миеломы (ММ) представляют резистентные формы заболевания. Частота первичной резистентности ММ при оценке ответа на лечение по 50% редукции Pig составляет примерно 20% случаев, а вторичная резистентность после второго рецидива отмечается практически у всех больных (Андреева Н.Е., 1995, Голенков А.К., 1995). В настоящее время данная проблема разрабатывается по нескольким направлениям и включает в себя изучение клинической эффективности новых противоопухолевых препаратов с различными механизмами действия, создание более эффективных химиотерапевтических программ на основе их комбинаций, высокодозную химиотерапию с пересадкой аутологичных и аллогенных стволовых кроветворных клеток, а также лечение синдромов ММ, осложняющих течение заболевания.

Определение чувствительности опухолевых клеток при лейкозах к цитостатическим препаратам in vitro (Kaspers G.J.L., Veerman A.J.P., 1997) также можно рассматривать как актуальное направление в преодолении резистентности миеломных клеток к противоопухолевым препаратам. Причем функция этого подхода достаточно широкая и заключается в скрининговом поиске новых противоопухолевых препаратов с высокой активностью против миеломы (Yasui Н. et al, 2004; Mitsiades C.S. et al, 2004), создании эффективных комбинаций цитостатаков (детерминированный по чувствительности in vitro принцип), что значительно эффективнее, чем эмпирический подход. Это подтверждается работами Berenson J.R., 2004, показавшими in vitro, что комбинация триоксида мышяыса (АТО), мелфалана и аскорбиновой кислоты создает более глубокий противоопухолевый эффект, чем каждый препарат в отдельности или комбинация из двух препаратов.

Полученные результаты in vitro были подтверждены при клиническом исследовании данной комбинации препаратов у больных с рецидивной и рефрактерной ММ.

Бисфосфонаты широко используются в качестве синдромного лечения ММ. Включение их в программы противоопухолевой терапии ММ позволило значительно усилить избирательное воздействие на костнодеструктивный синдром и повысить клиническую результативность лечения. В последнее время появились экспериментальные исследования, свидетельствующие о том, что бисфосфонаты обладают противоопухолевой активностью при ММ (Clezardin P. et al, 2000, Kuroda J. et al, 2003]. Это очень важный для клинической гематологии научный факт, требующий дальнейшего экспериментального и клинического подтверждения.

Весьма актуальным является пересмотр с этих позиций того химиотерапевтического ресурса, который широко используется в настоящее время в противоопухолевой химиотерапии и редко применяется при ММ, а также переоценка эффективности известных комбинаций противоопухолевых препаратов с учетом геста in vitro. Результаты этих исследований обладают высокой актуальностью при лечении осложнений ММ, таких как внутриспинальный опухолевый рост и костнодеструктивный процесс.

Цель исследования: совершенствование противоопухолевой химиотерапии резистентных форм и осложнений множественной миеломы на основе детерминированного принципа по результатам чувствительности опухолевых плазмоцитов костного мозга in vitro к цитостатическим препаратам с использованием DiSC-метода.

Задачи исследования:

1. Выявить клиническую значимость теста определения чувствительности опухолевых плазмоцитов костного мозга к цитостатическим препаратам in vitro DiSC-методом в скришшге у рефрактерных больных множественной миеломой.

2. Провести фармакодинамическое моделирование in vitro опухолевых плазмоцитов костного мозга больных множественной миеломой, осложненной внутриспинальным опухолевым ростом, с различными концентрациями цитозара.

3. Разработать метод лечения больных множественной миеломой, осложненной внутриспинальным опухолевым ростом, интратекальной химиотерапией цитозаром с учетом чувствительности опухолевых клеток in vitro.

4. Изучить клиническую эффективность детерминированного по чувствительности in vitro лечения сарколизином резистентных форм множественной миеломы.

5. Определить противоопухолевую активность бисфосфонатов при множественной миеломе in vitro путем окрашивания ДНК апоптотических клеток пропидий йод ид ом и изучить их влияние на выживаемость больных.

Научная новизна

На основании проведенного скринингового исследования чувствительности опухолевых плазмоцитов костного мозга in vitro больных ММ к цитостатическим препаратам DiSC-методом выявлен высокий процент чувствительных больных к цитозару, который ранее не применялся при лечении данной нозологической формы. По результатам КТ и МРТ исследований дана подробная характеристика внутриспинального опухолевого роста, описаны его различные варианты. С учетом полученных in vitro данных разработан метод лечения больных ММ, осложненной внутриспинальным опухолевым ростом ИТ XT цитозаром (патент № 2213563 от 10.10.2003 г.).

Также DiSC-методом обнаружена сохранившаяся у 100% резистентных больных ММ чувствительность миеломных клеток костного мозга in vitro к сарколизину и алкерану, входящим в индукционные и противорецидивные ПХТ схемы, применение которых привело к формированию вторичной рефрактерности. Детерминированная по чувствительности in vitro терапия сарколизином с использованием принципа дозового преимущества позволила получить клинический ответ у рефрактерных больных ММ.

При изучении фармакодинамики бисфосфонатов - бонефоса и зометы в культуре миеломных клеток in vitro выявлен их дозозависимый противоопухолевый эффект.

Научно-практическая ценность

Полученные в исследованиях in vitro с использованием DiSC-метода данные чувствительности опухолевых штазмоцитов костного мозга к цитостатическим препаратам, содержат новые сведения, объясняющие механизмы рефрактерности при ММ.

Практическая ценность работы заключается в том, что полученные в исследованиях in vitro DiSC-методом результаты чувствительности опухолевых плазмоцитов костного мозга позволяют расширить спектр противоопухолевых препаратов или использовать традиционные в режиме монотерапии с дозовым преимуществом при лечении рефрактерных больных ММ.

Разработанный метод интратекального введения цитозара больным ММ, осложненной внутриспинальным опухолевым ростом, позволяет непосредственно воздействовать на опухоль и достигать неврологической ремиссии.

Положения, выносимые на защиту

1. Фармакодинамическое моделирование цитостатических препаратов in vitro в культуре миеломных клеток - важный преклинический этап совершенствования противоопухолевой химиотерапии резистентной ММ и ее осложнений.

2. Скрининг противоопухолевой активности 12 цитостатических препаратов в культурах миеломных клеток in vitro позволил выявить высокую противоопухолевую активность сарколизина (алкерана) и цитозара у больных ММ

3. Предложен метод интратекальной химиотерапии цитозаром с учетом данных in vitro при ММ, осложненной внутриспинальным опухолевым ростом, позволяющий добиться уменьшения объема внутриспинальной опухоли у данной категории больных.

4. Детерминированная по чувствительности in vitro терапия рефрактерных больных ММ сарколизином с использованием принципа дозового преимущества позволяет получить клинический эффект.

Внедрение

Результаты исследования внедрены в практику отделения клинической гематологии и иммунотерапии Московского областного научно-исследовательского клинического института им. М.Ф. Владимирского (МОНИКИ).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, из них 2 в зарубежной печати.

Апробация

Диссертация обсуждена на совместной научной конференции МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского с участием сотрудников отделений клинической гематологии и иммунотерапии, гастроэнтерологии, переливания крови; лабораторий: клинико-диагностической, клинической иммунологии МОНИКИ, лаборатории экспериментальной диагностики и биотерапии опухолей НИИ ЭД и ТО РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. Материалы диссертации доложены на Московском областном терапевтическом обществе (ноябрь 2003 г.) и на научно-практической конференции гематологов Московской области (декабрь 2003 г.).

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 124 страницах машинописного текста, иллюстрированного 25 таблицами и 11 рисунками. Состоит из введения, 5 глав, заключения и выводов. Библиографический указатель включает 134 источника.

Заключение диссертации по теме «Гематология и переливание крови», Трифонова, Елена Викторовна

выводы

1. Скрининговые исследования чувствительности опухолевых плазмоцитов костного мозга нелеченых и рефрактерных к программным курсам полихимиотерапии больных множественной миеломой к 12 цитостатическим препаратам (вепезид, рубомицин, цитозар, алкеран, сарколизин, доксорубицин, белустин, преднизолон, винкристин, цисплагин, метотрексат, дексаметазон) in vitro с использованием DlSC-метода по IC70 показали высокую чувствительность клеток опухоли к сарколизину в 80% и цитозару в 75,8% случаев.

2. В фармакодинамических моделях цитозара в культуре опухолевых клеток костного мозга in vitro больных множественной миеломой, осложненной внутриспинальным опухолевым ростом, выявлена его высокая противоопухолевая активность на малых концентрациях (от 0,04 до 0,63 мкг/мл) при 96-ти часовой экспозиции, характеризующаяся гибелью в среднем от 40 до 70% плазматических клеток соответственно.

3. Клиническая эффективность предложенной интратекальной химиотерапии цитозаром больных множественной миеломой, осложненной внутриспинальным опухолевым ростом, характеризуется уменьшением объема внутриспинальной опухоли в группе больных с резистентным корешковым синдромом в среднем на 70% и на 46% в группе больных с нижним парезом, что сопровождается уменьшением корешковых болей и повышением двигательной активности.

4. Терапия сарколизином рефрактерных больных множественной миеломой по принципу дозового преимущества по чувствительности in vitro приводит к достоверному снижению сывороточного парапротеина в среднем с 5,3±0,6 до 3,4±0,4 г/%.

5. Исследование фармакодинамики бонефоса в культурах миеломных клеток in vitro показало, что он обладает противоопухолевой активностью,

50% гибель опухолевых клеток получена на концентрации 1000 рМ (0,24 г/л), что не совпадает с зоной клинической эквивалентности.

6. В фармакодинамической модели зометы в 72 часовой культуре миеломных клеток in vitro получено достоверное повышение апоптоза до 21,3±3,5% при максимальной исследованной концентрации 60 рМ (0,016 г/л). Эта модель характеризуется клинической эквивалентностью в интервале между введениями препарата больному со 2-го по 21-й день.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Лечение резистентных форм и осложнений ММ представляет собой достаточно трудную задачу для клинической гематологии. Частота первичной резистентности ММ, определяемой по 50% редукции Pig составляет примерно 20%, а вторичная резистентность после первого или второго рецидива отмечается практически у всех больных [1,6]. В настоящее время данная проблема разрабатыается по нескольким направлениям. Она включает в себя изучение клинической эффективности новых противоопухолевых препаратов, создание более эффективных программ противоопухолевой химиотерапии, высокодозную химиотерапию с пересадкой аутологичных и аллогенных стволовых гемопоэтических клеток, а также разработку патогенетически обоснованных программ лечения осложнений ММ.

В настоящее время сформировалось еще одно направление, позволяющее существенно повысить эффективность противоопухолевой химиотерапии ММ. Речь идет об определении чувствительности опухолевых клеток к цитостатическим препаратам в культурах in vitro [65,66], которое выходит за рамки индивидуального подхода в подборе цитостатиков для преодоления резистентности.

В связи с этим целью наших исследований было совершенствование программ противоопухолевой химиотерапии резистентных форм и осложнений ММ с учетом результатов чувствительности опухолевых клеток in vitro к цитостатическим препаратам. Перед исследованиями были поставлены следующие задачи:

-выявить клиническую значимость теста определения чуствительности опухолевых плазмоцитов костного мозга in vitro DISC- методом к цитостатическим препаратам в скрининге у рефрактерных больных ММ.

-провести фармакодинамическое моделирование in vitro различных концентраций цитозара с опухолевыми клетками костного мозга больных

ММ, осложненной внутриспинальным опухолевым ростом, для определения его противоопухолевой активности.

-разработать метод лечения больных ММ, осложненной внутриспинальным опухолевым ростом, интратекальной химиотерапией цитозаром с учетом чувствительности опухолевых клеток in vitro.

-изучить клиническую эффективность детерминированного по чувствительности in vitro лечения сарколизином резистентных форм ММ.

-определить противоопухолевую активность бисфосфонатов при MM in vitro путем окрашивания ДНК апоптотических клеток пропидий йод ид ом и изучить их влияние на выживаемость больных.

Исследовано 70 больных, из которых у 69 диагностирована MM III стадии, а у одного - солитарная плазмоцитома Th 9.10 позвонков. Возраст больных был в пределах 37-75 лет, из них 38 женщин и 32 мужчин. Класс и тип легких цепей Pig был определен у 62 больных. Иммунохимическая характеристика Pig установила: Pig G/к - у 33, Pig G/A. - у 12, Pig А/к - у 6, Pig Afk - у 5, изолированная Bj/к протеинурия - у 4, BjA. - у 2 больных. У 19 больных ММ осложнилась внутриспинальным опухолевым ростом с развитием резистентных радикулопатий - у 7 и нижних парезов — у 12.

Диагноз ММ устанавливали с использованием всех общепринятых критериев диагностики этого заболевания. При резистентном корешковом синдроме (радикулопатии) или симптомах нижнего пареза больным проводилась КТ или МРТ позвоночника.

На первом этапе работы проведено скришшговое исследование чувствительности опухолевых плазмоцитов костного мозга in vitro в клинически эквивалентных концентрациях к 12 противоопухолевым препаратам: вепезид, рубомицин, цитозар, сарколизин, алкеран, доксорубицин, белустин, преднизолон, винкристин, цисплатин, метотрексат, дексаметазон.

Проведенные скрининговые исследования у 50 больных, включающих вновь диагностированною, осложненную и резистентную ММ, позволили оценить терапевтический ресурс указанных противоопухолевых препаратов.

Высокой вероятностью противоопухолевой активности по данным теста in vitro обладают: вепезид (91%), рубомицин (81%), сарколизин (80%), цитозар (75,8%) и алкеран (73%). Для дальнейшего клинического изучения были взяты два препарата: цитозар и сарколизин.

Предпосылками для клинического изучения цитозара при ММ послужили: возможность его использования для интратекальных введений при нейролейкозах, отсутствие данных о его противоопухолевом эффекте на плазмоклеточные опухоли, а также синдром внутристшального опухолевого роста (19 из 70 больных ММ в наших наблюдениях), при котором интратекальное введение цитозара с учетом данных чувствительности in vitro патогенетически оправдано. Следует отметить, что к моменту начала исследований нам не удалось найти в литературе аналогичных данных.

Предпосылкой для клинического изучения сарколизина также послужили результаты скрининговой противоопухолевой фармакодинамики in vitro. Было обращено внимание на то, что противоопухолевая эффективность in vitro сарколизина несколько больше, чем алкерана. Скрининговая концентрация сарколизина, на которой фиксируется эффект по 1С7о в два раза меньше (0,7 мкг/мл) по сравнению с концентрацией алкерана (1,4 мкг/мл). Также частота противоопухолевого ответа in vitro на сарколизин выше, чем на алкеран (80% и 73% соответственно).

Кроме того, при анализе результатов скрининга становится очевидным, что вероятность противоопухолевого эффекта каждого цитостатического препарата, включенного в программы М-2 и ЦСВП (циклофосфан не исследовался in vitro), которые были использованы в индукционном лечении, ниже, чем алкерана и сарколизина. Из этого следует, что доминирующим препаратом в программах М-2 и ЦСВП является алкеран (сарколизин) и при J развитии резистентности к этим программам можно использовать принцип дозового преимущества сарколизина в режиме монотерапии.

Далее на основании результатов скрининговых исследований, показавших высокую эффективность цитозара в культуре миеломных клеток, были предприняты исследования, направленные на более глубокое изучение фармакодинамики препарата in vitro. Для этого использовали различные его концентрации: 0,04, 0,16, 0,63, 2,5 и 10 мкг/мл в 96-ти часовых культурах миеломных клеток костного мозга у 9 больных ММ, осложеннной внутриспинальньш опухолевым ростом. Изучить противоопухолевую эффективность различных концентраций представлялось важным, так как предполагалось использование цитозара при внутриспинальном опухолевом росте. Очевидно, что клинические концентрации цитозара в плазме и ликворе различны, учитывая их объемы и величины разовых доз.

Анализ результатов фармакодинамического моделирования цитозара in vitro в культуре миеломных клеток показал, что цитозар обладает высокой противоопухолевой активностью на малых концентрациях от 0,04 до 0,63 мкг/мл, когда при 96-ти часовой экспозиции гибнет от 40 до 70% опухолевых клеток. Остаточные опухолевые плазмоциты (в среднем 30%) обладают высокой устойчивостью к цитозару. Для снижения количества живых опухолевых клеток с 30 до 10% необходимо было увеличить концентрацию препарата в 16 раз с 0,63 до 10 мкг/мл.

Проведенные исследования in vitro показали, что в фармакодинамической модели цитозар обладал хорошей цитотоксической активностью против миеломных клеток у больных ММ, осложненной внутриспинальньш опухолевым ростом. Важным фактором исследований является активность цитозара, проявляющаяся на малых концентрациях, что может свидетельствовать об эквивалентности фармакодинамической модели in vitro и клинической фармакодинамике при его интратекальном введении. В связи с этим было проведено исследование клинической эффективности интратекально вводимого цитозара у 19 больных ММ, осложеннной внутриспинальным опухолевым ростом. При проведении КТ и МРТ позвоночника установлен узловой экстрадуральный опухолевый рост у 11 больных, диффузный рост (поражение нитей конского хвоста, нечеткая визуализация оболочек спинного мозга - интратекальный) - у 2, опосредованный рост (внедрение в спинномозговой канал фрагментов позвонков и дисков, разрушенных опухолью) — у 4, диффузный и опосредованный рост - у 2 пациентов.

Различия в клинической картине поражения нервной системы позволили разделить исследуемых больных на 2 группы. В первую вошли 7 больных с опухолевой радикулопатией, которая характеризовалась тяжелыми и резистентными корешковыми болями. Во вторую включено 12 больных с опухолевой миелопатией, проявляющейся нижними парезами и нарушениями функции тазовых органов у 3 больных.

Длительность интратекальной химиотерапии цитозаром в первой группе составила в среднем 4 месяца, в индукционную фазу препарат вводился 1 раз в неделю, а в фазу поддерживающего лечения - 1 раз в 2 месяца. Во второй группе длительность терапии составила 7 месяцев, в период индукции цитозар вводился 1-2 раза в неделю, а в период поддерживающего лечения 1 раз в 1,5 месяца. В результате проведенной интратекальной терапии цитозаром отмечено уменьшение внутриспинального опухолевого роста, оцениваемого по данным КТ и МРТ позвоночника, в первой группе на 70%, а во второй — на 46%.

Важным фактором эффективности предложенного метода лечения является положительная динамика клинического статуса, тяжесть которого оценивали по шкале Karnofsky. Установлено, что у больных ММ, осложненной корешковым синдромом, индекс Karnofsky, отражающий двигательную активность, повышался с 45 до 70 баллов. У больных с компрессионной миелопатией аналогичный показатель также имел положительную тендендшо (с 30 до 65 баллов). Это означает, что у практически обездвиженных больных появлялась возможность к самостоятельному передвижению.

Интенсивность корешковых болей, оцениваемая по визуально-аналоговой шкале, снижалась с максимального значения 10 ед. до 5,5 ед. у пациентов с ММ, осложненной корешковым синдромом и с 9,5 ед. до 4,5 ед. в группе больных с компрессионной миелопатией. Необходимо отметить, что в одном случае ММ, осложненной нижним вялым парапарезом, отмечалась самая высокая чувствительность миеломных клеток к цитозару среди наблюдавшихся больных. Это соответствовало клиническому эффекту, выражающемуся в полном восстановлении подвижности больного и исчезновении внутриспинальной опухоли по данным МРТ позвоночника, выполненной спустя 24 дня после 3 введений цитозара по 50 мг каждое.

Таким образом, проведенные исследования показали высокую клиническую значимость фармакодинамического моделирования цитозара in vitro в культуре миеломных клеток, позволивших предложить новый эффективный метод лечения опухолевых миелорадикулопатий, осложняющих течение ММ (патент № 2213563 от 10.10.2003 г.).

Основываясь на результатах фармакодинамического моделирования сарколизина in vitro в культуре миеломных клеток, был проведен клинический анализ его противоопухолевой активности. Препарат применяли в режиме монотерапии, используя принцип дозового преимущества, у 10 резистентных к программам М-2 и ЦСВП больных. Данный принцип основан на том, что при тестировании in vitro программ М-2 и ЦСВП, только сарколизин и алкеран обладали противоопухолевой активностью в 100% случаев. Остальные компоненты комбинаций (винкристин, белустин, преднизолон) были активны в 60 и 70% случаев соответственно. Это означает, что данные эмпирически созданные комбинации, без тестирования in vitro их противоопухолевых характеристик, обладают сомнительным усилением интегральной противоопухолевой активности.

Сарколизин был взят для клинического исследования в связи с тем, что его «удельная» противоопухолевая активность in vitro, отнесенная к концентрации, выше, чем алкерана. В среднем проведено 6 курсов монотерапии сарколизином, средняя курсовая доза которого составила 70 мг, что на 43% превышает суммарную дозу аналога сарколизина алкерана в индукционных ПХТ схемах.

В результате лечения у 60% рефрактерных больных ММ был получен ответ. Концентрация Pig в сыворотке снизилась с 5,3 ±0,6 до 3,4 ±0,4 г/% (Р<0,05), СОЭ уменьшилась с 65,1 ±2,9 до 37,7± 9,5 мм/ч (Р<0,05). Двигательная активность по шкале Карновского увеличилась с 70,0 до 90,0.

Токсичность детерминированной по чувствительности in vitro терапии сарколизином по принципу дозового преимущества не отличалась от таковой при лечении ПХТ программами.

Оценивая клинический результат в соответствии с критериями эффективности SWOG, разработанными в 1972 г., полный ответ был получен у 1-го больного (редукция Pig на 75%), частичный- у 2-х (редукция Pig на 53%), объективный ответ- у 3-х (редукция па 32%), отсутствие ответа — у 4 пациентов (редукция Pig на 6%). Длительность ответа сохранялась 11 месяцев (от 1 до 30 мес.) на фоне проведения поддерживающего лечения.

Сравнивая клинический результат с данными фармакодинамического моделирования in vitro, можно говорить о совпадении полученных значений. Сарколизин вызывает лизис опухолевых плазмоцитов in vitro по IC70 у всех больных (100%). Редукция маркера MM Pig от 32 до 75% после лечения сарколизином была достигнута у 6 больных (60%). При этом следует учитывать, что реальный лизис опухолевых клеток несколько больше, чем редукция Pig в сыворотке, которая запаздывает в соответствии со временем его полураспада.

Важным этапом нашей работы было изучение противоопухолевой активности бисфосфонатов (бонефос, зомета) при ММ на основании фармакодинамического моделирования in vitro, а также их влияния на выживаемость больных.

Интерес к проблеме бисфосфонатов обусловлен тем, что они включены в стандарты современного лечения ММ, что связано с их остеотропным действием, усиливающим репаративные процессы в костной системе. В то же время длительный прием этих препаратов может оказывать влияние на опухолевые клетки, о чем свидетельствуют данные литературы.

Анализируя результаты противоопухолевых фармакодинамических моделей бонефоса в культурах миеломных клеток in vitro больных ММ, следует отметить, что его противоопухолевая эффективность проявляется на высоких концентрациях (1С50 достигнута на концентрации 1000 рМ). Нарастание эффекта зависело от дозы препарата, но не от времени инкубации (24 или 72 часа). В тоже время анализ фармакокинетики бонефоса показал, что его концентрации в сыворотке больного при приеме терапевтических доз значительно меньше, чем in vitro при достижении противоопухолевого эффекта. Следовательно длительный прием бонефоса больными ММ не будет сопровождаться противоопухолевым эффектом.

При изучении противоопухолевой фармакодинамики зометы in vitro было получено достоверное повышение процента апоптотических клеток на максимальной концентрации препарата (60 рМ), однако значения 1С50 достигнуто не было. При сравнительном анализе данных фармакокинетики в клинике и фармакодинамики in vitro установлена их клиническая эквивалентность. Это означает, что остаточные концентрации зометы, сохраняющиеся в интервале между введениями, обладают противоопухолевым эффектом.

Таким образом, проведенные исследования чувствительности миеломных клеток к цитостатическим препаратам и бисфосфонатам in vitro, позволили получить важные для клинической практики результаты.

Скрининговое фармакодинамическое моделирование in vitro к 12 цитостатическим препаратам послужило основанием для дальнейшего клинического исследования двух препаратов: сарколизина (алкерана) и цитозара. Подробное фармакодинамическое исследование цитозара установило противоопухолевую активность малых концентраций, что послужило поводом для его использования при внутриспинальном опухолевом росте, осложняющим течение ММ. Интратекальные введения цитозара при этом сопровождались уменьшением объема внутриспинальной опухоли и позитивным клиническим результатом.

Высокая противоопухолевая эффективность in vitro сарколизина подтвердилась в клинике при лечении 10 больных ММ, резистентных к ранее проводимой ПХТ с использованием алкерана. Это позволило говорить о детерминированном по чувствительности in vitro лечении резистентной ММ по принципу дозового преимущества.

Установлена противоопухолевая активность in vitro бисфосфонатов с наличием клинической эквивалентности концентраций у зометы и отсутствием таковой у бонефоса.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Трифонова, Елена Викторовна, 2005 год

1. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Иммунологические проблемы апоптоза.//М: Эдиториал УРСС, 2002.

2. Веллингтон К., Гоа K.JI. Зомета (золендроновая кислота) в лечении костных метастазов и гиперкальциемии при злокачественных опухолях. Обзор литературы. //М., 2003.

3. Голенков А.К., Луцкая Т.Д., Юпошненкова Е.Н., Тишенина Р.С. Внеопухолевые механизмы остеолиза при множественной миеломе и пути их коррекции. //Тер.архив, 1996, №7, 68, стр. 58-61.

4. Голенков А.К., Киселев А.М., Кедров А.В. и соавт. Опыт применения комбинированного лечения больных множественной миеломой с опухолевым поражением спинного мозга. //Материалы 1 съезда онкологов стран СНГ, 3-6 декабря 1996г., М., стр.553.

5. Голенков А.К., Шабалин В.Н. Множественная миелома. // СПб: Гиппократ, 1995.-с.-144.

6. Фрешни Р. Культура животных клеток. Методы. //Москва: Мир, 1989, стр. 264-265.

7. Afonja О., Juste D., Inghirami G., Takeshita К. Apicidin, a histone deacetylase inhibitor, induces apoptosis and PDCD4 expression in human T-cell leukemia cells. //Blood, 2003, V.102 (П), p. 596a, abstr 2198.

8. Ala-Houhala I., Saha H., Liukko-Sipi S., Ylitalo P. Pharmacokinetics of clodronate in haemodialysis patients. //Nephrol Dial transplant (1999) 14: 699-705.

9. Anderson K.C., Terry J.H. et al. Management of multiple myeloma today. //Seminars on Hematology, V.36, N 1, Suppl 3 (January), 1999, p. 3-8.

10. Aparicio A., Gardner A., Tu Y. In vitro cytoreductive effects on multiple myeloma cells induced by bisphosphonates. //Leukemia, 1998 Feb; 12 (2): 220-229.

11. Appereley J.F., Croucher P.I. Bisphosphonates in multiple myeloma. //Pathol. Boil. (Paris), 1999, V.47, p. 178-181.

12. Bairey O., Zimra Y., Belaiev I., Shaklai M., Rabizadeh E. In vitro sensitivity of B-CLL cells to retuximab in different conditions. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 355b, abstr 5146.

13. Balducci D.M. Arsenic trioxide (Ar203) down regulates procoagulant activities of human acute promyelocyte and breast cancer cells. //The Hematology Journal, 2003, V4, S2, p. 268.

14. Bellosillo В., Colomer D., Pons G., Gil J. Mitoxantrone, a topoisomerase II inliibitor, induces apoptosis of B-chronic lymphocytic leykemia cells. //Br. J. Haematology, 1998, 100, p. 142-146.

15. Berenson J.R. //A phase I/II multicenter, safeti and efficacy study of combination treatment with melfalan, arsenic trioxid and vitamin С (MAC) in patient with relapsed or refractory multiple myeloma, //Blood 2004, 11,104, p. 659-a.

16. Berenson J.R., Hillner B.E., Kyle R.A., Anderson K., Lipton A., Yee G.C., Biermann J.S. The role of bisphosphonates in multiple myeloma. //Journal of Clinical Oncology, 2002, V.20, No 17, p. 3719-3736.

17. Berenson J.R., Lipton A. Bisphosphonates in the treatment of malignant bone disease. //Annu. Rev. Med., 1999, V. 50, p. 237-248.

18. Berenson J.R., Rosen L.S., Howell A. Zolendronic acid reduces skeletal-related events in patients with osteolytic metastases. //Cancer, 2001, V.91, p. 1191-1200.

19. Berenson J.R., Yang H., Vescio R., Swift R. Preliminary findings in a phase V2 study of trisenox (arsenic trioxide) doses twice weekly in patients with advanced multiple myeloma. //The Hematology Journal, 2003, V4, S2, p. 163.

20. Bisping G., Wenning D., Dreyer В., Hilberd F., Roth GJ. In vitro effects of the novel indolinone derivative BIBF1000 in multiple myeloma. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 190a, abstr 661.

21. Bloomfield D.J. Should bisphosphonates be part of the standart therapy of patients with multiple myeloma or bone metastases from other cancer? An evidence-based review. //J. Clin. Oncol., 1998, V.16,p. 1218-1225.

22. Body J.J. Bisphosphonates. //Eur J. Cancer, 1998, V.34, p. 263-269.

23. Body J J., Bartl R., Burckhardt P. Current use of bisphosphonates in oncology. International Bone and Cancer Study Group. //J. Clin. Oncol., 1998, V. 16, p. 3890-3899.

24. Body J.J., Mancini I. Bisphosphonates for cancer patients: why, how, and when? //Support Care Cancer, 2002, V.10 950, p. 399-407.

25. Bonati A., Tabilio A., Loloco F., Pelicei P.G., Lunghi P. Therapeutic targeting of the mekerk pathway enhances arsenic trioxide-mediated apoptosis in acute promyelocytic leukemia. //The Hematology journal, 2003, V4, S2, p.67.

26. Borad M., Swift R.A., Sadler K., Yang H., Berenson J.R. Melphalan, arsenic trioxide and ascorbic acid (MAC) is effective in the treatment of refractory and relapsed multiple myeloma (MM). //Blood, 2003, V.102 (II), p.235a, abstr 827.

27. Bosanquet A.G. Correlations between therapeutic response of leukaemias and in vitro drug sensitivity assay. //Lancet, 1991, 337, p. 711-714.

28. Bosanquet A.G., Johnson S.A., & Richards S.M. Prognosis for fludarabine therapy of chronic lymphocytic leukaemia based on ex vivo drug response by DiSC assay. //Br. J. Haematol., 1999, 106, p. 71-77.

29. Bosanquet A.G., & Bell P.B. Enhanced ex vivo drug sensitivity testing of chronic lymphocytic leukaemia using refined DiSC assay methodology. //Leukemia Research, 1996, 20, p. 143-153.

30. Cahill S., Szegezdi E., SamaliA., (TDwyer M. Arsenic trioxide sensitized leukemic cells to TRAIL-induced apoptosis. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 861a, abstr 3202.

31. Canpinar H., Guc D., Kansu E. Cell adhesion-mediated drug resistance phenotype in HL60 cell line. //Blood, 2003, V.102 (П), p. 205b, abstr 4538.

32. Case D.C., Jain J.V., Stiff P., Jansen J., Stewart A.K., Sliurafa M. Phase II study of PSC 833 and VAD chemotherapy in patients with VAD-refractory multiple myeloma. //Blood, 1998; 92(suppl 1): 105a. abstr 427.

33. Catley L., Tai Y.-T., Shringarpure R. et al. Clinical implications for optimizing the approach to topoisomerase 1 as a therapeutic target in multiple myeloma. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 389b, abstr 5282.

34. Chan G., Lam D., Chan S., Koo M., Law H. Ganoderma Lucidum (Lingzhi, Reishi) mycelium extract enhanced leukemic cells proliferation but its spore extract suppressed leukemic cells growth in vitro. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 251a, abstr 4729.

35. Cheer S.M., Noble S. Zolendronic acid. //Drugs, 2001, V. 61(6), p. 799-805; discussion 806.

36. Chuah C., Tipping A.J., Goldman J.M., Melo J.V. Zolendronate is active against imatinib mesylate-resistant chronic myeloid leukemia cell lines and synergistic/additive when combinated with imatinib mesylate. //Blood, 2003, V.102 (П), p. 19a, abstr 57.

37. Clezardin P., Gligorov J., Delmas P. Mechanisms of action of bisphosphonates on tumor cells and prospects for use in the treatment of malignant osteolysis. //Joint Bone Spine.-2000, V. 67, p. 22-29.

38. Cohen S., Schilder R. et al. Dexamethasone and 13-cis-retinoic acid for untreated multiple myeloma. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 389-390b, abstr 5285.

39. Corso A., Ferretti E., Lunghi M., Maiocchi M.-A. Zolendronate interferes with the bone marrow stromal cells in multiple myeloma: a possible mechanism for its antitumor effect. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 443a, abstr 1619.

40. Crawford L.J., Morris T.C., Chauhan D., Anderson Kenneth C. Proteasome activity is cell-type dependent. //Blood, 2003, V.102 (П), p. 933a, abstr 3475.

41. Croucher P.I., Apperley J.F. Bone disease in multiple myeloma. //Br. J. Haematol., 1998, V.103,p. 902-910.

42. Dalton W.S. Mechanisms of drug resistance in hematologic malignancies. //Seminars in Hematology, 1997; 34 (suppl 5): 3-8.

43. Derenne S., Amiot M., Barille' S. Zolendronate is a potent inhibitor of myeloma cell growth and secretion of IL-6 and MMP-1 by the tumoral environment. //J. Bone Miner Res., 1999 Dec; 14 (12): 2048-56.

44. Desmond J., Kawabata H., Heber B. et al. The syntetic furanonaphthoquinone FNQ3 induces growth arrest, apoptosis and differentiation in a variety of leukemic cell lines. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 206b, abstr 4765.

45. Drucker L., Osadchi A., Afensiev F., Radnay J., Shapiro H. Combined application of simvastatin with either chemotherapy or cytocine stimulation to myeloma cell lines. //Blood, 2003, V.102 (П), p. 361b, abstr 5170.

46. Dvorakova K., Payne C.M., Zandowski Т.Н., Tome M.E. Imexon activates an intrinsic apoptosis pantway in RPM 18226 myeloma cells. //Anti-Cancer Drugs, 2002, 13, p. 1031-1042.

47. Fromique" O., Body J.J. Bisphosphonates influence the proliferation and the maturation of normal human osteoblasts. //J. Endocrinol. Invest, 2002 Jun; 25 (6), p. 539-546.

48. Ganeshaguru K., Jones D., Folarin N. et al. Ansamysins synergise with conventional drug in apoptotic killing of B-chronic lymphatic leukemia (CLL) cells. //Blood, 2003, V. 102 (II), p. 349b, abstr 5121.

49. Glass В., Dingeldein S., Rave-Frank M., Hasenkamp J. Radiation and rituximab have additive cytotoxic and proapoptotic effects on B-cell lymphoma cell lines in vitro. //The Hematology Journal, 2003, V4, S2, p. 108.

50. Gordon S., Helfrich M., Sati H. et al. Pamidronate causes apoptosis of plasma cells in vivo in patients with multiple myeloma. //Br. J. Haematol., 2002, 119, p. 475.

51. Grossi A., Biscardi M., Caporale R., Gavazzi S. Effect of aplidine in leykemia cell lines and cells from acute myeloid leukemia. //Blood, 2003, V. 102 (П), p. 205b, abstr 4539.

52. Guenther A., Baum W., Burger R., Bakker F., Faller G. Zolendronic acid inhibits myeloma growts in vitro and in vivo. //The Hematology Journal, 2003, V4, S2, p.257-258.

53. Heinrich M., Yee K., Giese N., Chittenhelm M. MLN518, a potent FLT3 inhibitor, displays synergistic effects with cytarabine and daunorubicin on FLT3 ГГО leukemia cell lines. //Blood, 2003, V.102 (П), p. 97a, abstr 330.

54. Horton Т., Plon S. Et al. Synergistic cytotoxicity of bortezomib (formerly PS-341) and dexamethasone in acute lymphoblastic leukemia. //Blood, 2003, V.I02 (II). p. 862a, abstr 3207.

55. Janosi J., Sebestyen A, Bocsi J. et al. Mevastatine induced apoptosis and growth suppression in U266 myeloma cells. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 380b, abstr 5247.

56. Jourdan M., Ferlin M., Legouffe E.et al. The myeloma cell antigen syndecan-1 is lost by apoptotic myeloma cell. //Br. J. Haematology, 21998, 100, 637646.

57. К an is J.A., McCloskey E.V. Bisphosphonates in multiple myeloma. //Cancer, 2000, V.15, p. 3022-3032.

58. Kanis J.A., McCloskey E.V. The use of clodronate in disorders of calcium and skeletal metabolism. //Prog. Basic. Clin. Pharmacol.-Basel, Karger, 1990, V.14, p. 89-136.

59. Kanis J.A., CTRourke N., McCloskey E. Consequences of neoplasia induced resorption and the use of clodronate. //Int. J. Oncol., 1994, V.5, p. 713-731.

60. Kaspers G.J.L., Pieters R., Veerman A.J.P. Glucocorticoid sensitivity and resistance in childhood leukemia // Drug resistance in leukemia and lymphoma II. Edited by Pieters R., Kaspers G.J.L., Veerman A.J.P.; Netherlands 1997: 95-103.

61. Kaufman J., Waller E., Torre C., Boswell M. Bortezomib inhibits T cell proliferation. //Blood, 2003, V.102 (II), abstract 3946, p. 61b, abstr 3946.

62. Kimura S., Segawa H., Kuroda J., Maekawa T. Inhibition of leukemic cell growth by a novel anti-cancer drug (GUT-70) from Calophyllum brasilience that acts by induction of apoptosis via extrinsic pathway. //Blood, 2003, V.102 (П), p.208b, abstr 4550.

63. Knapper S., Burnett A., Gilkes A., Mills K., Walsh V. The in vitro sensitivity of primary AML blasts to two flt3 inhibitors and cytarabine appears independent of flt3 mutation status. //Blood, 2003, V.102 (II), p.24a, abstr 74.

64. Kuroda J., Kimura S., Segawa H., Ottmann O.J. The anti-leukemic effects of third-generation bisphosphonate, zolendronic acid. //Blood, 2003, V. 102 (II), p. 596a, abstr 2199.

65. Laitinen K., Patronen P., Haiju P. et al. Timing of food intake has a marked effect on the bioavailability of clodronate. //Bone Vol. 27, №2, Aug. 2000: 292-296.

66. Leleu X., Troncy J. et al. Evaluation of gemcitabine in relapsed or refractory multiple myeloma. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 384b, abstr 5263.

67. List A., Schiller G.J., Mason J., Douer D. Trisenox (arsenic trioxid) in patients with myelodysplastic syndromes (MDS): preliminary findings in a phase 2 clinical study. //The Hematology Journal, 2003, V4, S2, p. 218.

68. Magda D., Lecane P., Naumovski P, Chen J., Ramos J. Motexafin gadolinium ((Xcytrin®) potentiates TRAIL activity in human lymphoma and myeloma cell lines by inducing apoptosis through independent pathways. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 213b, abstr4574.

69. Maisel C.M., Miao Y., Kharfan-Dabaja M.A., Bahlis N.J. The proteasome inhibitor MG-132 combined with the heat shock protein inhibitor 17-AAG synergistically induces cell death in myeloma cell line U266. //Blood, 2003, V. 102 (П), p. 75a, abstr 254.

70. Major P., Lipton A., Berenson J., Hortobagyi G. Oral bisphosphonates: A review of clinical use in patients with bone metastases. //Cancer, 2000, V. 1, p. 6-14.

71. Major P., Lortholary A., Hon J. Zolendronic acid is superior to pamindronate in the treatment of hypercalcemia of malignancy: A pooled analysis of two randomized, controlled clinical trials. //J. Clin. Oncol., 2001, V.19, p. 558567.

72. Marce S., Ferrer A., Villamor N., Bellosillo В., Bosch F. Drug-induced apoptosis in primary tumor cells from mantle-cell lymphoma. //Blood, 2003, V.102 (II), abstract 4401, p. 172b, abstr 4401.

73. Matsui W., Huff C., Wang Q., Barber J., Smith B. Multiple myeloma (MM) stem cells arise from post-germinal center В cells and inhibited by rituximab in vitro. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 931a, abstr 3467.

74. Meinhardt G., Grun G., Dayyani F., Emmerich B. Gemcitabine is a potent inducer of apoptosis in multiple myeloma cells in vitro and has synergistic effects with modulators of protein kinase C. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 933a, abstr 3473.

75. Mitsiades С., McMullan С., Mitsiades N., Faircloth G. Рте-clinical studies in support of the clinical development of Aplidin® (APL) for the treatment of multiple myeloma (MM). //Blood, 2003, V. 102 (П), p.74a, abstr 250.

76. Mitsiades C., Mitsiades N., Rooney M. et al. IPI-504: a novel hsp 90 inhibitor with in vitro and in vivo anti-tumor activity. //Blood 2004, 11, 104, p. 660-a.

77. Montagna M., Montillo A.M., Lazzarino M. Analytical methodology and pharmacokinetics of campath-lH. Blood, 2003, V.102 (II), p. 213b, abstr 4572.

78. Morabito F., Stelitano C., Callea I., et al. In vitro drug-induced cytotoxicity predicts clinical response to fludarabine in B-cell chronic lymphocytic leukaemia. //Br. Journal of Haematology, 1998, 102, p. 528-531.

79. Musto P. Hie role of bisphosphonates for the treatment of bone disease in multiple myeloma. //Leuk. Lymphoma, 1998, V.31, p. 453-462.

80. Naumovski L., Ramos J., Chen J., Lecane P., Magda D. PCI-2000, a novel sapphyriiL, induces apoptosis in hematopoietic tumor-derived cell lines. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 860a, abstr 3197.

81. Park C.J., Kim M.J., Seo E.J., Chi H.S. In vitro chemosensitivity in acute leukemia //The Hematology Journal, 2003, V4, S2, p. 37.

82. Pei X., Dai Y., Grant S. //The proteasome inhibitor bortezomib interacts synergistically with histone deacetylase inhibitors to induce apoptosis in human multiple myeloma cells. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 685a, abstr 2536.

83. Pepper C.J., Thomas A., Hoy Т., Fegan C., Bentley P. The vitamin D3 analogue, EB 1089, defines a novel class of terapeutic agents for the treatment of B-cell chronic lymphocytic leukemia. ///The Hematol. journal, 2003, V4, S2, p. 133.

84. Salmon S.E., Hersh E.M. Sensitivity of multiple myeloma to imexon in the human tumor cloning assay. //Journal of national cancer institute, 1994, 86, 3, p. 228-230.

85. Sarsotti E., Terol M., Benet I., Martinez-Climent et al. Rituximab induced apoptosis «in vitro» on Binet A B-CLL; correlation with CD59/CD20 expression. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 861a, abstr 3203.

86. Schmidmajer R., Baumann P., Emmerich D. Cell adgesion-mediated drug resistance (CAM-DR) of multiple myeloma cells is mediated by cell-cell interaction independent of soluble factors. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 441a, abstr 1608.

87. Segawa H., Kimura S., Kuroda J., Hodohara K. YM529, a novel bisphosphonate, inhibits the growth of human leykemic cells in vitro via induction of apoptosis. //The Hematol. journal, 31, 2003, p. 233.

88. Segawa H., Kimura S., Kuroda J., Hodohara K., Maekawa T. ON05920/YM529, a third generation bisphosphonate, inhibits the growth of human leukemic cells both in vitro and in vivo. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 594a, abstr 2191.

89. Shimizu Т., Miyakawa Y., Kizaki M., Ikeda Y. Acquired higher sensitivity to IFN-alfa in STI 571 resistant CML cells and its molecular mechanisms. //The Hematol. journal, 2003, V4, S2, p. 253.

90. Shipman C.M., Rogers M.J., Apperley J.F. Anti-tumor activity of bisphosphonates in human myeloma cells. //Leuk Lymphoma, 1998, V.32, p. 129-138.

91. Smolewski P., Szmigielska A., Cebula В., Rogalinska M. In vitro proapoptotic effect of alemtuzumal on B-CLL cells. //The Hematol. journal, 2003, V4, S2, p.

92. Soleman M., Moarreni S, Araste R. The combined effect of gamma-interferon and chemotherapevtic drugs on KE-37 cell line. //The Hematol. journal, 2001, VI, SI, p. 80.

93. Sonneveld P. Drug resistance in multiple myeloma. //Pathol Biol (Paris), 1999, 47:182-187.

94. Sonneveld P., Durie B.G.M., Loxhorst H.M., Marie J.P. Modulation of multidrug resistant multiple myeloma by cyclosporin. //Lancet, 1992, 340, p. 255-259.

95. Sonneveld P., Marie J., Huisman C. et al. Reversal of multidrug resistance by SDZ PSC 833, combined with VAD in refractory multiple myeloma. A phase I study. //Leukemia, 1996; 10:1741-1750.

96. Sonneveld P., Noortje H.M. van Oostrum, Schoester M., Oosterhoud S. PS341 (Bortezomib) and the histone deacetylase inhibitor LAQ824 sensitize melphalan resistant multiple myeloma cells to melphalan. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 189a, abstr 660.

97. Steinbach D., Friedrich J., Witting S., Gruhn B. In vitro drug resistance and the expression of ABC-transpirters in childhood ALL. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 861a, abstr 3204.

98. Tassone P., Forciniti S., Galea E. et al. Growth inhibition and synergistic induction of apoptosis by zolendronate and dexamethasone in human myeloma cell lines. //Leukemia, 2000, V.14, p. 841-844.

99. Tassone P., Gozzini A., Goldmacher V.S. In vitro and in vivo antitumor activity of the maytansinoid immunoconjugate BB-10901 (huN901-DMl) on

100. CD56+ multiple myeloma cells. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 690a, abstr 7 2554.

101. Tatetsu H., Hata H., Nakamura M., Okuno Y., Matsuno F. A novel NF-kB inhibitor induces apoptosis to multiple myeloma cells; a comparison with proteasome inhibitor and analisis in vitro and in vivo. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 927a, abstr 3452.

102. Trafalis D.T., Camontsis Ch., Pangalis G.A., Poulakidaes E. Lastestronyl. A lastam steroidal ester of chlorambucil on the treatment of lymphocytic leukemia //The Hematol. journal, 2003, V4, S2, p. 40

103. Twentyman P.R. Modulation of drug resistance. //Drug resistance in leukemia and lymphoma II. Edited by Pieters R., Kaspers G.J.L., Veerman A.J.P.; Netherlands 1997: 403-411.

104. Villikka K., Perttunen K., Rosnell J. et al. The absolute bioavailability of clodronate from two different oral doses. Bone Vol. 31, №3, Sep. 2002: 418421.

105. Vos S., Pervan M., Song S., McBride W. Mechanisms of resistance to PS-341 (VELCADE™), a lymphoma cell line model. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 861a, abstr 3205.

106. Vries J.F., Barge R.M.G., Willemre R., Falkeuburd J.H.F. Cytarabine-mediated killing of B-CLL cells does not require cell proliferation and DNA incorporation. //The Hematology Journal, 2003, V4, S2, p. 189.

107. Walter R., Cronk M., Raden В., Bernstein I. Reversal of resistance to gemtuzumab ozogamicin by a peripheral benzodiazepine receptor ligand (PK11195) in acute myeloid leukemia cells in vitro. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 597a, abstr 2204

108. Weisenthal L.M., Dill P.L., Kurnick N.B., Lippman M.E. Comparison of dye exclusion assays with a clonogenic assay in the determination of drug-induced cytotoxicity. // Cancer Res., 1983.

109. Weisenthal L.M., Marsden J.A., Dill P.L., Macaluso C.K. A novel exclusion method for testing in vitro chemosensitivity of human tumors. //Cancer Res., 1983, V43, p. 749-757.

110. Won J.H., Cheong H.J., Kim S.J., Kim C.K. Erythroid differentiation and apoptosis of k562 cell resistant to ATRA is induced by arsenic trioxide. //The Hematol. journal, 2003, V4, S2, p. 44.

111. Wong R., Wiffen P.J. Bisphosphonates for the relief of pain secondary to bone metastases (Cochrane Reviw). In: The Cochrane Library. Oxford: Update Software 2002; (Issue 3).

112. Wu L., Zhang L-H., Pedemonte M. et al. CC-5079 causes NF-k0-independent apoptosis in hematopoietic cancer cell lines and in taxol and doxorubicin drug-resistant cells. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 209-210b, abstr 4556.

113. Xu J. //The effect of AA in ATO-induced cytotoxicity on human MM cell line KM3. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 381b abstr 5253.

114. Yang H., Yan X., Chen H, Berenson J.R. Differential synergistic anti-myeloma effects of the COX-2 inhibitor NS398 and bortezomib on doxorubicin-sensitive and -resistant myeloma cells. //Blood, 2003, V.102 (II), p. 936a, abstr 3488.

115. Yasui H. et al. Anti-tumor activity of a novel immunosuppressant FTY-720 in multiple myeloma. //Blood 2004,11,104, p. 941-a.

116. Zaker F., Bakhshayesh M., Osati F. Anti-tumoral and differentiation of Harmine and Harmaline on HL60 treated with ATRA and G-CSF. //The Hematol. journal, 2003, V4, S2, p.35.

117. Zavrski L, Eucker J., Heider U et al. Differential effects of the combination of carcumin with conventional chemotherapeutic agents on human multiple myeloma cells. // Blood, 2003, V.102 (П), p. 375b, abstr 5232.