Лакказа и Mn-пероксидаза базидиомицета Cerrena maxima: Характеристика и роль в биосинтезе гуминоподобных веществ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Явметдинов, Ильдар Самиуллович

• Явметдинов, Ильдар Самиуллович
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Явметдинов, Ильдар Самиуллович

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Грибы белой гнили. Характеристика субстрата.

1.1.1. Особенности строения лигнина - природного субстрата грибов белой гнили.

1.1.2. Общая характеристика лигнинразрушающих грибов.

1.1.3. Факторы, влияющие на селективность деградации лигнина.

1.2. Общая характеристика ферментов лигнолитической системы.

1.2.1. Лигниназа.

1.2.2. Мп-пероксидаза.

1.2.3. Лакказа.

1.3. Физиологические функции ферментов лигнолитической системы.

1.4. Биосинтез ароматических соединений грибами, возбудителями белой гнили.

1.5. Образование гуминовых веществ в природе. Гуминоподобные вещества грибов - предшественники гуминовых кислот.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Материалы и объекты исследования.

2.2. Жидкофазное культивирование Cerrena maxima и

Coriolus hirsutus.

2.2.1. Поверхностное культивирование Cerrena maxima и

Coriolus hirsutus.

2.2.2. Глубинное культивирование Cerrena maxima и

Coriolus hirsutus.

2.3. Твердофазное культивирование индивидуальных штаммов

Cerrena maxima и Coriolus hirsutus и их совместное культивирование на природном лигнинсодержащем субстрате - овсяной соломе.

2.3.1. Изучение совместимости Cerrena maxima и Coriolus hirsutus при культивировании.

2.3.2. Совместное и раздельное твердофазное культивирование данных штаммов.

2.4. Очистка лакказы и Mn-пероксидазы Cerrena maxima.

2.5. Методы определения активности лигнолитических ферментов.

2.6. Определение биохимических и кинетических характеристик лакказы и Mn-пероксидазы Cerrena maxima.

2.7. Выделение и очистка ГПВ грибов белой гнили.

2.8. Синтез ГПВ in vitro с помощью лакказы С. maxima.

2.9. Определение основных количественных и качественных хапактеоистик ГПВ.

2.9.1. Элементный анализ.

2.9.2. Определение молекулярных масс ГПВ методом эксклюзионной хроматографии.

2.9.3. Спектрофотометрический и ИК- спектроскопический анализ ГПВ.

2.9.4. 13С ЯМР спектроскопия препаратов ГПВ.

2.10. Методы определения содержания основных компонентов растительного сырья.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Скрининг культуры Cerrena maxima.

3.2. Культивирование и биосинтез лигнолитических ферментов базидиомицета Cer. maxima.

3.3. Выделение, очистка и изучение лакказы и Мп-зависимой пероксидазы Cer. maxima.

3.3.1. Выделение и очистка лакказы и

Мп-зависимой пероксидазы.

3.3.2. Характеристика физико-химических свойств лакказы Cer. maxima.

3.3.3. Характеристика физико-химических свойств

Мп- пероксидазы Cer. maxima.

3.3.4. Субстратная специфичность лакказы и

Mn-пероксидазы Cer. maxima.

3.4. Изучение роли лакказы и Mn-пероксидазы Cer. Maxima в процессе деградации лигнина на природных лигноцеллюлозных субстратах.

3.5. Структурная характеристика и исследование роли лигнолитического комплекса в биосинтезе ГПВ.

3.5.1. Получение ГПВ.

3.5.2. Структурная характеристика ГПВ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Лакказа и Mn-пероксидаза базидиомицета Cerrena maxima: Характеристика и роль в биосинтезе гуминоподобных веществ»

В настоящее время во всем мире ведется интенсивная разработка биотехнологий на основе лигнолитических грибов и ферментов как для обработки лигноцеллюлозных материалов, так и для утилизации лигнинсодержащих отходов. Лигнин - полимер ароматической природы, составляющий 25% сухого веса фотосинтезирующей биомассы. Для него насчитывается не менее десяти типов связей между фенилпропановыми структурными единицами, которые обуславливают высокую степень разветвленности молекулы и недоступность для действия большинства микроорганизмов.

Базидиальные грибы, возбудители белой гнили древесины, принадлежат к немногочисленной группе микроорганизмов, способных разрушать лигнин и обладающих уникальной системой лигнолитических ферментов: лигнинпероксидазы, лакказы и Mn-пероксидазы. Несмотря на то, что проблемой биоконверсии лигнина последние 20-25 лет активно занимаются многие научные коллективы, окончательного решения данного вопроса еще не найдено. Это связано со значительной сложностью строения лигноцеллюлозного субстрата, а также с недостаточной изученностью метаболизма грибов-лигнолитиков, в том числе механизма действия разлагающих лигнин ферментов. Для эффективного использования биотехнологических подходов весьма актуальным представляется изучение лигнолитического потенциала грибов белой гнили и физиологических функций основных лигнолитических ферментов. Известно, что некоторые виды высших базидиальных грибов, деструкторов древесины, обладают уникальными механизмами детоксификации как продуктов деградации лигнина, так и ксенобиотиков. Для грибов белой гнили некоторыми исследователями показано образование из продуктов деструкции лигноуглеводного комплекса гуминоподобных веществ (ГПВ), обладающих физиологической активностью. Однако до настоящего времени практически отсутствуют данные о механизме образования, структуре и биологических свойствах ГПВ; поэтому представляется актуальным исследование 7 особенностей синтеза подобных полимеров и их характеристика, а также выяснение функций лигнолитического комплекса в этом процессе.

Понимание роли лигнолитических ферментов в процессе деградации лигнина открывает возможные пути оптимизации переработки этого полимера и сопутствующий синтез на основе продуктов его деструкции таких соединений, как гуминоподобные вещества. Исследование ГПВ представляет несомненный интерес как с точки зрения изучения метаболизма грибов белой гнили, так и с позиции применения данных микроорганизмов для получения препаратов, которые могут использоваться в медицине.

Основными целями настоящей работы являлись:

- изучение лигнолитического потенциала смешанной культуры грибов белой гнили Cerrena maxima и Coriolus hirsutus при росте на различных лигноцеллюлозных субстратах по сравнению с индивидуальными штаммами грибов, синтезирующих различные доминирующие лигнолитические ферменты.

- характеристика ферментов лигнолитической системы Cer. maxima: лакказы и Мп-пероксидазы

- изучение физиологической роли данных ферментов в процессе деградации лигнина и образовании ГПВ

- исследование структуры полученных ГПВ и подтверждение их гуминовой природы.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Явметдинов, Ильдар Самиуллович

115 Выводы.

1. Показана возможность совместного культивирования штаммов Cerrena maxima (активный продуцент Mn-пероксидазы) и Coriolus hirsutus (активный продуцент лакказы). Впервые выделены и охарактеризованы по физико-химическим свойствам лигнолитические ферменты базидиомицета Cer. maxima - Mn-пероксидаза и лакказа. Установлено, что при различных условиях культивирования Cer. maxima может синтезировать в качестве основного лигнолитического фермента или Mn-пероксидазу или лакказу.

2. Показано, что грибы белой гнили Cer. maxima и С. hirsutus являются активными делигнификаторами при культивировании на растительном сырье - овсяной соломе и березовом лигнине. Эффект синергизма деградации лигнина смешанной культурой Cer. maxima и С. hirsutus наблюдался только при твердофазном культивировании на березовых опилках.

3. Твердофазное культивирование индивидуальных и смешанной культур на березовых опилках сопровождалось высокой активностью ферментов лигнолитического комплекса: лакказы и Мп-пероксидазы. Установлено, что ключевым ферментом при разложении лигноцеллюлозного комплекса овсяной соломы являлась лакказа при обоих температурных режимах культивирования (28° С и 37° С). Повышение температуры культивирования до 37° С приводило к полному исчезновению Мп-пероксидазной активности.

4. Впервые проведена комплексная характеристика гуминоподобных веществ, образованных грибами белой гнили, при культивировании на растительном субстрате (овсяной соломе). Установлено, что по элементному, структурно-групповому и молекулярно-массовому составу изученные ГПВ близки к почвенным ГК. Показано, что предшественниками ГПВ являются продукты деструкции лигнина.

5. Путем ферментативного синтеза, инициированного лакказой Cer. maxima из низкомолекулярных соединений - продуктов деструкции лигнина, а также аминокислот, синтезированы гуминоподобные вещества. По своим характеристикам данные ГПВ были близки природным ГК и ГПВ грибов

116 белой гнили. Таким образом, установлена новая физиологическая функция лакказы грибов белой гнили - участие в образовании гуминоподобных веществ.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Явметдинов, Ильдар Самиуллович, 2003 год

1. Tuomela ML, Vikman М., Hatakka A., Itavaara М. Biodegradation of lignin in a compost environment: a review. Bioresource Technol. 72: 169-183, 2000.

2. Рабинович M.JI., Болобова A.B., , Кондращенко В.И. Теоретические основы древесных композитов. Кн. I. Древесина и разрушающие ее грибы. М.: Наука, 2001.264 с.

3. Никитин Н.И. Химия древесины и целлюлоза. М.: Лесная промышленность, 1973, с. 115-150.

4. Брауне Ф., Брауне Д. Химия лигнина. М.: Лесная промышленность, 1964, с. 98-162.

5. Vares Т. Ligninolytic enzymes and lignin-degrading activity of taxonomically different write-rot fungi. Academic dissertation in microbiology. Helsinki, 1996.

6. Медведева С. А. Превращения ароматической компоненты древесины в биохимических процессах делигнификации. Диссертация на соиск. уч. степ, д.х.н. Иркутск, 1995.

7. Tuor U., Winterhalter К., Fiechter A. Enzymes of white-rot fungi in lignin degradation and ecological determinants for wood decay. J. of Biotechnol. 41: 117, 1995.

8. Головлева Л. А., Леонтьевский А.А. Биодеградация лигнина. В кн.: Успехи микробиологии. М.: Наука. 1990. Т.24, с. 128-156.

9. Leatham G., Kirk Т. FEMS Microbiol. Lett. 16: 65-67, 1983.

10. Sjostrom E. Wood chemistry: fundamentals and application. N.Y., London, Toronto, Sydney: Acad. Press, 1981, 223 p.

11. Dorado J., Claassen F.W. Van Beek T. A., Lenon G., Wijnberg J. B.P.A., Sierra-Alvarez R. Elimination and detoxification of softwood extractives by white-rot fungi. J. of Biotechnol. 80: 231-240, 2000.

12. Рипачек В. Биология дереворазрушающих грибов. М.: Лесная пром-сть, 1967, 258 с.118

13. Tien M., Kirk Т. Lignin-degrading enzyme from the hymenocete Phanerochaete chrysosporium. Science. 221: 661-663, 1983.

14. Glenn J. Morgan M., Mayfield M. An extracellular H202-requiring enzyme preparation involved in lignin biodegradation by the white rot basidiomycete Phanerochaete chrysosporium. Biochem. Biophys. Res. Commun. 114: 1077-1083, 1983.

15. Tien M. Properties of ligninase from Phanerochaete chrysosporium and their possible applications. Crit. Rev. Microbiol. 161: 141-168, 1987.

16. Tien M., Kirk T. Lignin peroxidase from Phanerochaete chrysosporium. Methods Enzymol. 161: 238-249, 1988.

17. Tonon F., Odier E. Influence of veratryl alcohol and hydrogen peroxide on ligninase activity and ligninase production by Phanerochaete chrysosporium. Eur. J. Biochem. 233: 650-658, 1995.

18. Kuwahara M., Glenn J.K., Morgan M.A., Gold M'.H. Separation and characterization of two extracellular H^CVdependent oxidases from ligninolytic culture of Phanerochaete chrysosporium. FEBS Letters. 169(2): 247-250, 1984.

19. Hofrichter M. Review: lignin conversion by manganese peroxidase (MnP). Enzyme Microb. Technol. 30: 454-466, 2002.

20. Hatakka A. Lignin-modifying enzymes from selected white-rot fungi: production and role in lignin degradation. FEMS Microbiol. Rev. 13: 125-135,1994.

21. Lobos S, Larram J., Salas L., Cullen D., Vicuna R. Isoenzymes of manganese dependent peroxidase and laccase produced by the lignin degrading basidiomycete Ceriporiopsis subvermispora. Microbiology. 14: 2691-2698, 1994.

22. Kawai S., Jensen K.A., Hammel K.E. New polymeric model substrates for the study of microbial ligninolysis. Appl. Environ. Microbiol. 61: 3407-3414,1995.

23. Hilden L., Johansson G., Pettersson L.J., Ljungquist P., Henriksson G. Do the extracellular enzymes cellobiose dehydrogenase and manganese peroxidase form a pathway in lignin biodegradation? FEBS Lett. 477: 79-83, 2000.

24. Reinhammer В. Purification and properties of laccase and stellacyanin from Rhus vernicifera. Biochem. Biophys. Acta. 205(1): 35-47, 1970.

25. Branden R., Deinum J. Effect of pH on oxygen intermediate and dioxygen reduction site in blue oxidases. Biochem. Biophys. Acta. 524(2): 297304, 1978.

26. Bligny R., Douce R. Excretion of laccase by sycamore (Acer pseudoplatanus) celles. Purification and properties of the enzyme. Biochem. J. 209(2): 489-496, 1983.

27. LaFayette P.R., Eriksson K.-E.L., Dean J.F.D. Nucleotide sequence of a cDNA clone encoding an acidic laccase from sycamore maple (Acer pseudoplatanus). Plant Physiol. 107(2): 667-668, 1995.

28. Driouich A., Laine A.-C., Yian В., Faye L. Characterization and localization of laccase forms in stem and cell-cultures of Sycamore. Plant J. 2(1): 13-24, 1992.

29. Bao W., O'Malley D.M., Whetten R., Sederoff R.R. A laccase associated with lignification in Loblolly pine xylem. Science. 260: 672-674, 1993.

30. Youn H.-D., Kim K.-J., Maeng J.-S., Han Y.H, Jeong I.-B., Jeong G., Kang S.-O., Hah Y. C. Single electron transfer by an extracellur laccase from the white-rot fungus Pleurotus ostreatus. Microbiology. 141(2): 393-398, 1995.

31. Гиндилис А., Жажина E., Баранов Ю., Карякин А., Гаврилова В., Ярополов А. Выделение и свойства лакказы из базидиального гриба Coriolus hirsutus (Fr.) Quel. Биохимия. 53(5): 735-739, 1988.120

32. Lerch К., Deinum J., Reinhammer B. The state of copper in Neurospora laccase. Biochem. Biophys. Acta. 534(1): 7-14, 1978.

33. German U.A., Muller G., Hunziker P.E., Lurch K. Characterization of two allelic form of Neurospora crassa laccase. Ammino and carboxil-terminal processing of a precursor. J. Biol. Chem. 263(2): 885-896. 1988.

34. Fahraeus G., Reinhammer B. Large scale production and purification of laccase from cultures of fungus Polyporus versicolor and some properties of laccase A. Acta Chem. Scand. 21(9): 2367-2378, 1967.

35. Agostinelli E.A., Cervoni L., Morpurgo L. Stability of japanese-lacquer-tree (Rhus vernicifera) laccase to thermal and chemical denaturation: comparison with ascorbat oxidase. Biochem. J. 306(3): 697-702, 1995.

36. Solomon E.I., Sundaram U.M., Machonkin Т.Е. Multicopper oxidases and oxygenases. Chem. rev. 96(7): 2563-2605, 1996.

37. Yaropolov A.I., Skorobogat'ko O.V., Vartanov S.S., Varfolomeyev S.D. Laccase: propeties, catalytic mechanism, and applicability. Appl. Biochim. Biotech. 49(3): 257-280, 1994.

38. Sannia G., Bionocore V., Guardina P, Lina M., Rossi M. Laccase from Pleurotus ostreatus. Biotechnol. Letters. 8(11): 797-800, 1986.

39. Zonazi N., Romette J.-L., Thomas D. Purification and properties of two laccase isoenzymes produced by Botrytis cinerea. Appl. Biochem. Biotech. 15(3): 213-225, 1987.

40. Geiger J.P., Nandris D., Nicole M., Rio B. Laccases of Rigidoporus lignosus and Phellinus noxius. Purification and some physicochemical properties. Appl. Biochem. Biotech. 12(2): 121-133, 1986.

41. Reinhammer B. Oxidation-reduction potentials of electron acceptors in laccase and stellacyanin. Biochem. Biophys. Acta. 534(1): 7-14, 1978.

42. Messerschmidt, A. In Multicopper oxidases. Ed. by Messerschmidt A. World Scientific, Singapore, New Jersey, London, Hong Kong. 1997, pp. 23-80.

43. Farver, O., Pecht, I. In Multicopper oxidases. Ed. by Messerschmidt A. World Scientific, Singapore, New Jersey, London, Hong Kong. 1997, pp. 355-390.

44. Варфоломеев С.Д., Наки А., Ярополов А.И., Березин И.В. Кинетика и механизм каталитического восстановления молекулярного кислорода в присутствии лакказы. Биохимия. 50(9): 1411-1420, 1985.

45. Варфоломеев С.Д., Наки А., Побочин А.С., Ярополов А.И. Функциональная активность ферментов и пути ее регулирования. М: Изд-во МГУ, под ред. Северина С.Е., 1997, с. 97-124.

46. Naki A., Varfolomeev C.D. Inhibition mechanism of Poliporus laccase by fluoride ion. FEBS Letter. 113: 157-160, 1980.

47. Piontek K., Antorini M., Choinowski Th. Crystal structure of a laccase from the fungus Trametes versicolor at 1.90-A resolution containing a full complement of coppers. J. Biol. Chem. 277(40(4)): 37663-37669, 2002.

48. Ярополов A.M., Гиндилис А.Л., Гаврилова В.П. Лакказа из базидиального гриба Cerrena maxima. Некоторые свойства и кинетический механизм действия. Биохимия. 55(2): 315-319, 1990.

49. Ярополов А.И., Маловик В. Ферментный электрод на основе иммобилизованной лакказы для определения полифенолов и полиаминов. Журнал аналитической биохимиии. 38(3): 503-508, 1983.

50. De Vries О.М.Н., Kooistra W.H.C.F, Wessels J.G.H. Formation of an extracellular laccase by a Schizophyllum commune Dicaryon. J. General Microbiol. 132:2817-2826, 1986.

51. Shutteworth K.L., Bollag J.-M. Soluble and immobilized laccase as catalysts for the transformation of substituted phenols. Enzyme Microbiol. Technol. 8(3): 171-177, 1986.122

52. Youn H.-D., Yung Yung C.H., Sa-Ouk K. Role of laccase in lignin degradation by white-rot fungi. FEMS Microbiol. Letters. 132: 183-188, 1995.

53. Eggert C., Temp U., Jeffrey F.D.D., Eriksson K.-E.L. A fungal metabolite mediates degradation of non-phenolic lignin structures and synthetic lignin by laccase. FEBS Letters. 391: 144-148, 1996.

54. Wariishi H., Valli K., Gold M.H. In vitro depolymerization of lignin by manganese peroxidase of Phanerochaete chrysosporium. Biochem. Biophys. Res. Commun. 176: 269-275, 1991.

55. Wariishi H., Valli K., Gold M.H. Manganese(II) oxidation by manganese peroxidase from basidiomycete Phanerochaete chrysosporium. J. Biol. Chem. 267: 23688-23695, 1992.

56. Болобова A.B., Аскадский A.A., Кондращенко В.И., Рабинович M.Jl. Теоретические основы древесных композитов. Кн. И. Ферменты, модели, процессы. М.: Наука, 2002. 344 с.

57. Jensen К.А., Bao W., Kawai S. Manganese-dependent cleavage of nonphenolic lignin structures by Ceriporiopsis subvermispora in the absence of lignin peroxidase. Appl. Environ. Microbiol. 62: 3679-3686, 1996.

58. Thurnston C.F. The structure and function of fungal laccases. Microbiol. 140(1): 19-26, 1994.

59. Ander P., Eriksson K.-E. The importance of phenol oxidase activity in lignin degradation by the white-rot fungus Sporotrichum pulverulentum. Arch. Microbiol. 109(1): 1-21, 1976.

60. Eggert C., Temp U., Eriksson K.-E.L. Laccase is essential for lignin degradation by white-rot fungus Pycnoporus cinnabarinus. FEBS Letters. 407: 8992, 1997.

61. Leonowicz A., Szklarz G., Wojtas-Wasilewska M. The effect of fungal laccase on fractionated lignosulphonates. Phytochem. 24(3): 393-396, 1985.

62. Kirk Т.К., Harkin J.M., Cowling E.B. Degradation of the lignin model compound syringyl-glycol-(3-guaiacyl ether by Polyporus versicolor and Stereum frustulatum. Biochem. Biophys. Acta. 165(1): 145-153, 1968.123

63. Clutterbuck A.J. Absence of laccase from yellow spored mutants of Aspergillus nidulans. J. Gen. Microbiology. 70(3): 423-435, 1972.

64. Scherer M., Fischer R. Molecular characterization of a blue-copper laccase, TILA, of Aspergillus nidulans. FEMS Microbiology Letters. 199: 207213,2001.

65. Temp U., Eggert C. Novel interaction between laccase and cellobiose degidrogenase during pigment synthesis in the white rot fungus Pycnoporus cinnabarinus. Appl. Environ. Microbiol. 65(2): 389-395, 1999.

66. Edens W.A., Goins T.Q., Dooley D., Henson J.M. Purification and characterization of a secreted laccase of Gaeumannomyces graminis var. tritici. Appl. Environ. Microbiol. 65 (7): 3071-3074, 1999.

67. Bar Nun N., Mayer D.M. Cucubitacins repressors of induction of laccase formation. Phitochem. 28: 1369-1371, 1992.

68. Viterbo A., Yagen В., Mayer A.M. Cucubitacins, "attack" enzymes and laccase in Botrytis cinerea. Phytochem. 32: 61-62, 1993.

69. Williamson P.R. Biochemical and molecular characterization of the diphenol oxidase of Cryptococcus neoformans: identification as a laccase. J. of Bacteriol. 176: 656-664, 1994.

70. Sarkanen S. Enzymatic lignin degradation. An extracurricular view. ACS Semp. Ser. 460: 247-269, 1991.

71. Guissani A., Henry Y., Gilles L. Radical scavenging and electron-transfer reaction in Poliporus versicolor laccase a pulse radiolyses study. Biophys. Chem. 15(2): 177-190, 1982.

72. Ruttimann-Johnson C., Lamar R.T. Polymerization of pentachlorophenol and ferulic acid by fungal extracellular lignin-degrading enzymes. Appl. Environ. Microbiol. 62(10): 3890-3893, 1996.

73. Ruttimann-Johnson C., Lamar R.T. Binding of pentachlorophenol to humic substances in soil by the action of white rot fungi. Soil Biol. Biochem. 29 (7): 1143-1148, 1997.

74. Шиврина A.H., Низковская О.П., Фалина H.H., Маттисон Н.Л.,124

75. Ефименко О.М. Биосинтетическая деятельность высших грибов. JL: Наука, 1969. 244 с.

76. Феофилова Е.П. Современные направления в изучении биологически активных веществ из базидиальных грибов. Прикл. биохим. микробиол. 34 (6): 597-608, 1998.

77. Fogarty R. V., Tobin J. М. Fungal melanins and their interactions with metals. Enzyme Microbiol. Technol. 19: 311-317, 1996.

78. Bell A.A., Wheeler M.H. Biosynthesis and functions of fungal melanins. Ann. Rev. Phytopathol. 24: 411-451, 1986.

79. Лях C.H. Микробный меланиногенез и его функции. М.: Наука, 1981.274 с.

80. Knicker Н., Almendros G., Gonzalez-Vila F.J., Ludemann H.-D., Martin F. 13C and 15N NMR analysis of some fungal melanins in comparison with soil organic matter. Org. Geochem. 23: 1023-1028, 1995.

81. Шиврина A.H., Низковская О. П., Платонова Е.Г. Кормовые белки и физиол. активн. вещества для животнов. М.-Л.: Наука, 1965. С. 80-87.

82. Шиврина А.Н., Ловягина Е.В., Платонова Е.Г. К вопросу о природе и происхождении водорастворимого пигментного комплекса, образуемого трутовым грибом чага. Биохимия. 24(1): 67-72, 1959.

83. Шиврина А.Н. Химическая и спектрофотометрическая характеристика воднорастворимых гуминоподобных соединений,образуемых грибом Inonotus obliguus (pers.) pil. Почвоведение. 1962. Т. 11. С. 51-60.

84. Shimada М., Higuchi L. Degradation of lignin. In Wood and cellulosic chemistry Ed. by D.N.-S. Hon and N. Shiraishi. N.Y. and Basel: Marcel Dekker. 1991, pp. 525-591.

85. Jacobson E.S. Pathogenic roles for fungal melanins. Clinic. Microbiol. Reviews. 13(4): 708-717.

86. Бабицкая В.Г., Щерба В.В., Иконникова Н.В. Меланиновый комплекс гриба Inonotus obliguus. Прикл. биохим. микробиол., 36(4): 439-444, 2000.

87. Bollag J.-M., Shuttleworth K. L., Anderson D. H. Laccase-mediated detoxification of phenolic compounds. Appl. Environ. Microbiol. 54 (12): 30863091, 1988.

88. Sjoblad R. D., Bollag J.-M. Oxidative coupling of aromatic compounds by enzymes from soil microorganisms. In Soil Biochemistry. Vol. 5. Ed by E. A. Paul and J. N. Ladd . Marcel Dekker, Inc., N. Y., 1991.

89. Bollag J.-M., Sjoblad R. D., Liu Sh.-Y. Characterization of an enzyme from Rhizoctonia praticola which polymerizes phenolic compounds. Can. J. Microbiol. 25: 229-233, 1979.

90. Chefetz В., Chen, Y., Hadar Y. Purification and characterization of laccase from Chaetomium thermophilium and its role in humification. Appl. Environ. Microbiol. 64(9): 3175-3179, 1998.

91. Kataze Т., Bollag J.-M. Transformation of trans-4-hydroxycinnamic acid by a laccase of the fungus Trametes versicolor, its significance in humification. Soil Sci. 151:291-296, 1991.

92. Орлов Д.С. Гумусовые кислоты почв и общая теория гумификации. М.: Изд-во МГУ, 1990. 326 с.

93. Христева JI. А. Гуминовые удобрения. Теор. и практ. их примен. Тр. Херсонск. с.-х. инст. 1957, с. 75-108.

94. Севостьянова Н. В. Антимутагенный эффект гумизоля в культурах Т-лимфоцитов крови, находящихся в циклофосфане. Вопр. курортол. физеотер. леч. физ. культ. 4: 46-47, 1998.

95. Ferrara G., Loffredo Е., Simeone R., Senesi N. Evaluation of antimutagenic and desmutagenic effects of humic and fulvic acids on root tips of Viciafaba. Environ. Toxicol. 15(5): 513-517, 2000.

96. Sato Т., Ose Y., Nagase H. Desmutagenic effect of humic acid. Mutation Res. 162: 173-178, 1986.

97. Dekker J., Medlen C.E. Humic acid and its use in the treatment of various conditions. WO 00/016,785 (March 30, 2000).

98. Dekker J., Medlen C.E. Oxihumic acid and its use in the treatment of various conditions. WO 00/016,786 (March 30, 2000).

99. Мистерски В., Логинов В. Исследование некоторых физико-химических свойств гуминовых кислот. Почвоведение. 2: 39-51, 1959.

100. Комиссаров И.Д., Логинов Л.Ф. Молекулярная структура и реакционная способность гуминовых кислот. Гуминовые вещества в биосфере. 4: 36-45, 1993.

101. Кононова М.М. Проблема органического вещества на современном этапе. Органическое вещество целинных и освоенных почв. М.: Наука, 1972, с. 17-19.

102. Александрова Л.Н. Органическое вещество почвы и процессы его трансформации. Д.: Химия, 1980.

103. Stevenson F. J. Humus Chemistry. Genesis, Composition, Reactions. N Y: Wiley, 1988, pp. 264-270.

104. Linhares L.F., Martin J.P. Decomposition in soil of the humic acid-type polymers (melanins) of Eurotium echinulatum, Aspergillus glaucus sp. and other fungi. Soil Sci. Soc. Amer. J. 42(5): 738-743, 1978.

105. Шиврина A.H., Маслова P. А. Аминокислотный состав гуминоподобных комплексов образуемых некоторыми древоразрушающими грибами. Почвоведение. 11: 63-67, 1963.

106. Запрометова К., М. Мирчинк Т.Г., Орлов Д.С., Юхнин А.А. Характеристика черных пигментов темноокрашенных почвенных грибов. Почвоведение. 7: 22-30, 1971.

107. Ковалевский Д.В., Пермин А.Б., Перминова И.В., Петросян B.C. Вестник МГУ, сер. 2. Химия. 41: 39-42, 2000.

108. Malkin R., Malmstrom B.G., Vanngard Т. The reversible removal of one specific copper(II) from fungal laccase. Eur. J. Biochem. 7(2): 253-259, 1969.

109. Шлеев C.B., Кузнецов С.В., Топунов А.Ф. Прикладная биохимия и микробиология. 36: 354-358, 2000.127

110. Карякин Ю.В., Ангелов И.И. Чистые химические вещества. М.: Химия, 1974.

111. Paszczynski A., Crawford R.L., Huynh V.-B. In: Methods Enzymol. Ed. by Wood, W.A., Kellogg, S.T. AP: New York, 1988, 161: 264-271.

112. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr I.L. and Randall R.J. Protein mesurement with the Folin phenol reagent. J. Biol.Chem. 193(2): 265-275, 1951.

113. Орлов Д.С., Гришина JI.A., Ерошичева Н.Л. Практикум по биохимии гумуса. М.: Изд-во МГУ, 1969, 106 с.

114. Беллами Л. Инфракрасные спектры сложных молекул. М.: Изд-во иностр. литер., 1963, 590 с.

115. Перминова И.В. Анализ, классификация и прогноз свойств гумусовых кислот: Автореф. дис. докт. хим. наук. М.: МГУ им. Ломоносова, 2000, 50 с.

116. Оболенская А.В., Щеголев В.П., Аким Г.Л., Аким Э.Л., Коссович Н.Л., Емельянова И.З. Практические работы по химии древесины и целлюлозы. М.: Изд-во: Лесная промышленность, 1965, с. 50-95.

117. Методы экспериментальной микологии. Справочник под ред. Билай В.И. Киев.: Наукова Думка, 1982, с. 106-165.

118. Соловьев В.А., Малышева О.Н., Малева И.Л., Саплина В.И. Изменение химического состава древесины под действием лигнинразрушающих грибов. Химия древесины. 6: 94-100, 1985.

119. Xu F. Laccase. In Encyclopedia of bioprocess technology: fermentation, biocatalysis, bioseparation. Ed. by Flickinger M. C., Drew S. W.; John Wiley & Sons, Inc., 1999.

120. Степанова E. В. Сравнительная характеристика лакказ высших грибов и возможность их практического применения. Автореф. дисс. на соиск. уч. ст. канд. биол. наук. М.: ИНБИРАН, 1999.

121. Dedeyan В., Klonowska A., Tagger S., Tron Th., Iacazio G., Gil G., le Petit J. Biochemical and molecular characterization of a laccase from marasmius quercophilus. Appl. Environ. Microbial. 66(3): 925-929, 2000.

122. Galhaup С., Haltrich D. Enhanced formation of laccase activity by the white-rot fungus Trametes pubescens in the presence of copper. Appl. Microbiol. Biotechnol. 56(1/2): 225-232, 2001.

123. Coll P.M., Ternandez-Abalos J.M., Villanueva J.R., Santamaria R., Perez P. Appl. Environ. Microbiol. 59(8): 2607-2613, 1993.

124. Fortina M.G., Acquati A., Rossi P., Manachini P.L., Gennaro C.Di. Production of laccase by Botrytis cinerea and fermentation studies with strain F226. J. Industr. Microbiol. 17(2): 69-72, 1996.

125. Yoshiyama M., Iton Y. Poliphenol oxidase production in a jar fermentor by Coriolus versicolor. J. Ferment. Bioengeneering. 78(1): 188-190, 1994.

126. Staszczak M., Nowak G., Grzywnowicz K., Leonowicz A.: Proteolytic activities in cultures of selected white-rot fungi. J. Basic Microbiol. 36: 193-203, 1996.

127. Staszczak M., Zdunek E., Leonowicz A. Studies on the role of proteases in the white-rot fungus Trametes versicolor: Effect of PMSF and chloroquine on ligninolytic enzymes activity. J. Basic Microbiol. 40: 51-63, 1996.

128. Iwahara K., Honda Y., Watanabe Т., Kuwahara M. Polymerization of guaiacol by lignin-degrading manganese peroxidase from Bjerkandera adusta in aqueous organic solvent. Appl. Microbiol. Biotechnol. 54(1): 104-111, 2000.

129. Salas C., Lobos S., Larrain J., Salas L., Cullen D., Vicuna R. Properties of laccase isoenzymes produced by the basidiomycete Ceriporiopsis subvermispora. Biotechnol. Appl. Biochem. 21(3): 323-333, 1995.

130. Kojima Y., Tsukuda Y., Kawai Y., Tsukamoto A., Sugiura J., Sakaino M., Kita Y. Cloning, sequence analysis, and expression of ligninolytic phenoloxidase genes of the white-rot basidiomycete Coriolus hirsutus. J. Biol. Chem. 265(25): 15224-15230, 1990.

131. Nishizawa Y., Nakabayashi K., Shinagawa E. Purification and characterization of laccase from white rot fungus Trametes sanguinea. J. Ferment. Bioengeneering. 80(1): 91-93, 1995.

132. Geiger J.P., Nandris D., Nicole M., Rio B. Laccases of Rigidoporus lignosus and Phellinus noxius. Purification and some physicochemical properties. Appl. Biochem. Biotech. 12(2): 121-133, 1986.

133. Malkin R., Malmstrom B.G., Vanngard T. The reversible removal of one specific copper (II) from fungal laccase. Eur. J. Biochem. 7(2): 253-259, 1969.

134. McMillin R., Eggleston M.K. Bioinorganic chemistry of laccase. In Multicopper oxidases. Ed. by Messerschmidt A. World Scientific, Singapore, New Jersey, London, Hong Kong., 1998, pp. 129-166.

135. Беккер Е.Г., Пирцхалаишвили Д.О., Элисашвили В.И., Синицин А.П. Mn-пероксидаза из Pleurotus ostreatus: выделение, очистка и некоторые свойства. Биохимия. 57(8): 1248-1254, 1992.

136. Sarkar S., Martynez А.Т., Martynez M.J. Biochemical and molecular characterization of a manganese peroxidase isoenzyme from Pleurotus ostreatus. Biochim. Biophys. Acta. 1339: 23-30, 1997.

137. Варфоломеев С.Д., Наки А., Ярополов А.И., Березин И.В. Кинетика и механизм каталитического восстановления молекулярного кислорода в присутствии лакказы. Биохимия. 50(9): 1411-1420, 1985.130

138. Shutteworth K.L., Bollag J.-M. Soluble and immobilized laccase as catalysts for the transformation of substituted phenols. Enzyme and Microbiol. Technol. 8(3): 171- 177, 1986.

139. Смирнов C.A., Королева O.B., Гаврилова В.П., Белова А.Б., Клячко H.JT. Лакказы базидиомицетов: физико-химические характеристики и субстратная специфичность по отношению к метоксифенольным соединениям. Биохимия. 66(7): 774-779, 2001.

140. Galliano H., Gas G., Seris J.L., Boudet A.M. Lignin degradation by Rigidoporus lignosus involves synergistic action of two oxidizing enzymes: Mn peroxidase and laccase. Enzyme Microbiol. Technol. 13: 478-482, 1991.

141. Калабин Г.А., Каницкая Л.В., Кушнарев Д.Ф. Количественная спектроскопия ЯМР природного органического сырья и продуктов его переработки. М.: Изд-во: Химия, 2000, 407 с.

142. Dorado J., Almendros G., Camarero S., Martinez A.T., Vares Т., Hatakka A. Transformation of wheat straw in the course of solid-state fermentation by four ligninolytic basidiomycetes. Enzyme Microbiol. Technol. 25: 605-612, 1999.

143. Sanchez-Ferrer A., Rodriguez-Lopez J.N., Garcia-Canovas F., Garcia-Carmona F. Tyrozinase: a comprehensive review of its mechanism. Biochim. Biophys. Acta. 1247: 1-11, 1995.

144. Mester Т., Field J.A. Optimization of manganese peroxidase production by the white rot fungus Bjerkandera sp. strain BOS55FEMS. Microbiol. Letters. 155: 161-168, 1997.

145. Hofrichter M., Lundell Т., Hatakka A. Conversion of milled pine wood by manganese peroxidase from Phlebia radiata. Appl. Environ. Microbiol. 67(10): 4588-4593,2001.

146. Екабсоне М.Я., Крейцберг 3.H., Сергеева B.H., Киршбаум И.З. Исследование энзиматически разрушенной древесины. Химия древесины. 2: 61-64, 1978.

147. Rice J.A., MacCarthy P. Org. Geochem. 17: 635-648, 1991.

148. Visser S.A. Environ. Sci. Technol. 17: 412-417, 1983.

149. Perminova I.Y., Frimmel F.H., Kovalevskii D.V, Abbt-Braun G., Kudryavtsev A.V, Hesse S. Wat. Res. 32: 872-881, 1998.

150. Perminova I.V. Size exclusion chromatography of humic substances: complexities of data interpretation attributable to non-size exclusion effects. Soil Sci. 164(11): 834-840, 1999.

151. Kudryavtsev A.V., Perminova I.V., Petrosyan V.S. Size-exclusion chromatographic descriptors of humic substances. Analyt. Chim. Acta. 407: 193202, 2000.

152. Куликова H. А. Связывающая способность и детоксицирующие свойства гумусовых кислот по отношению к атразину. Диссертация на соиск. уч. степ. к. б. н. М.: МГУ им. Ломоносова, 1999.

153. Martin J. P., Haider К. Microbial activity in relation to soil humus formation. Soil Sci. 111(1): 54-63, 1971.