Биотехнология нетоксичных композиционных материалов из отходов растительного сырья и микробиологической промышленности тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, доктор биологических наук Кадималиев, Давуд али-оглы

• Кадималиев, Давуд али-оглы
• доктор биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации доктор биологических наук Кадималиев, Давуд али-оглы

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Биотехнология пластиков из отходов растительного сырья.

1.1.1. Химический состав лигноцеллюлозных субстратов.

1.1.2. Общая характеристика дереворазрушающих грибов.

1.1.3. Биодеградация лигноцеллюлозных субстратов.

1.1.3.1. Механизмы биодеградации лигнина.

1.1.3.2 Лигнолитический ферментный комплекс.

1.1.3.3. Физиологические условия, влияющие на биодеградацию ^ и синтез лигнолитических ферментов.

1.1.3.4. Продукты биодеградации лигнина.

1.1.4. Использование лигноцеллюлозных субстратов.

1.1.4.1. Технология пластиков из отходов растительного сырья.

1.1.4.2. Влияние физико-химических свойств и связующих на качество пластиков.

1.1.4.3. Перспективные технологии пластиков и других композ-ционных материалов.

1.2. Использование отходов микробиологических производств.

1.2.1. Физико-химические основы склеивания и компоненты клеев.

1.2.2. Состав и свойства отходов микробиологических производств

1.2.3. Использование отходов микробиологических производств.

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Микроорганизм.

4' 2.2. Реактивы, субстраты и материалы.

2.3. Культивирование P. tigrinus.

2.4. Методы определения активности ферментов.

2.5. Методы выделения ферментов и исследования их свойств.

2.6. Методы выделения лигнина и исследование продуктов его биодеградации.

2.7. Аналитические методы.

2.8. Прессование и испытание биопластиков.

2.8.1. Определение физико-механических показателей.

2.8.2. Определение экологических показателей.

2.9. Изготовление и испытание клеевых композиций.

2.9.1. Методы исследования химического состава отходов.

2.9.2. Испытание клеевых композиций.

3.0. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. ВЛИЯНИЕ УСЛОВИЙ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ГРИБА PANUS TIGRINUS НА ЛИГНОЛИТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ И БИОСИНТЕЗ ФЕРМЕНТОВ ЛИГНОЛИЛИТИЧЕСКОГО КОМПЛЕКСА.

3.1. Погруженное культивирование.

3.1.1 Влияние буферных систем и рН.

3.1.2. Влияние температурного сдвига.

3.1.3. Влияние Твина-80.

3.1.4. Влияние индукторов-лигноцеллюлозных субстратов.

3.1.5. Влияние соотношения азотного и углеродного питания.

3.1.6. Влияние источников углеродного питания.

3.1.7. Влияние источников азотного питания.

3.1.8. Выделение, очистка и характеристика лигнолитических ферментов Partus tigrinus. fr- 3.2. Твердофазное культивирование.

3.2.1. Влияние природы и модификации лигноцеллюлозных субстратов.

ГЛАВА 4. БИОДЕГРАДАЦИЯ ЛИГНОЦЕЛЛЮЛОЗНЫХ СУБСТРАТОВ ГРИБОМ PANUS TIGRINUS.

4.1. Особенности биодеградации лигнина различных лигноцеллюлозных субстратов.

4.2. Изменение химического состава древесных опилок при различных условиях культивирования.

4.3. Изменение химического состава отходов хлопчатника при различных условиях культивирования.

ГЛАВА 5. ПОЛУЧЕНИЕ ПРЕССОВАННЫХ МАТЕРИАЛОВ ИЗ ОТХОДОВ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ ОБРАБОТАННЫХ PANUS TIGRINUS.

5.1. Влияние условий обработки грибом на физико-механические свойства биопластиков.

5.2. Влияние условий обработки грибом на физико-механические свойства прессованных материалов из отходов хлопчатника.

5.3. Влияние условий прессования на физкоко-механические свойства биопластиков.

5.4. Механизмы участия лигнина в формировании свойств бипластиков. v 5.5. Экологические характеристики биопластиков.

ГЛАВА 6. ПОЛУЧЕНИЕ КЛЕЕВЫХ КОМПОЗИЦИЙ ИЗ ОТХОДОВ ПРОИЗВОДСТВА АНТИБИОТИКОВ И КРОВЕЗАМЕНИТЕЛЕЙ.

6.1. Химический состав отходов производства антибиотиков * и кровезаменителей.

6.2. Влияние обработки мицелия щелочью и кислотой на выход белков.

6.3. Влияние условий модификации мицелия и соотношения компонентов композиций на физико-химические свойства клеев.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биотехнология нетоксичных композиционных материалов из отходов растительного сырья и микробиологической промышленности»

Актуальность проблемы. Комплексное использование сырья и создание безотходных технологий является одной из основных задач современного производства и биотехнологии здесь отводится особая роль. Значительная часть растительной биомассы - отходы лесного и сельского хозяйства, перерабатывающей промышленности — используются нерационально. Промышленные лигнины скапливаются в отвалах, что приводит к загрязнению природной среды. Изготовление из отходов древесины древесностружечных плит (ДСП) дает возможность сохранить большие запасы леса. Формальдегидные и карбамидные смолы, используемые в качестве связующих в производстве композиционных материалов токсичны и поэтому не безопасны для здоровья человека. Предложен ряд технологий древесных пластиков с использованием природных клеящих материалов, однако они не нашли широкого применения из-за низкой эффективности.

Компоненты лигноцеллюлозного сырья, в особенности лигнин, имеют сложную структуру. Лигнин — трехмерный, нестереорегулярный полимер ароматической природы. Он является обязательным структурным компонентом всех наземных растений и составляет 20 - 35% их сухой массы. Лигнин высокоустойчив к химическому и микробиологическому разложению, что создает ряд проблем при переработке лигноцеллюлозного сырья. Между тем, реакционно-способные группы лигнина, возникающие при соответствующей химической или биологической обработке и способные вступать во взаимодействия, придают лигноцеллюлозе пластифицирующие свойства, что позволяет изготавливать на ее основе древесные (лигноуглеводные) пластики (Болобова, 1999; Huttermann, 2001). Наиболее перспективной представляется предобработка лигниновой компоненты для увеличения ее адгезивных свойств.

Биомодификация лигнина - многоступенчатый ферментативный процесс, зависящий от многих факторов, в котором участвуют окислительные и гидролитические ферменты. Гриб «белой гнили» Panus tigrinus обладает высокой скоростью роста на лигноцеллюлозных субстратах, эффективно разрушает компоненты сырья. Его можно использовать для модификации древесных отходов целлюлозно-бумажной, деревообрабатывающей промышленности и отходов сельского хозяйства растительного происхождения в производстве композиционных материалов - лигноуглеводных пластиков. Однако механизмы деградации лигноцеллюлозы этим грибом в полной мере не выяснены, не определена роль отдельных ферментов в разложении сырья, не исследованы продукты, образующиеся при биодеградации и роль этих продуктов во взаимодействии компонентов лигноцеллюлозных субстратов. Без таких исследований невозможно контролировать биомодификацию и биоконверсию лигноцеллюлозных материалов.

Для покрытия древесных пластиков шпоном часто используют синтетические, дорогие клеящие материалы. Между тем, отходы микробиологической промышленности (производство антибиотиков, кровезаменителей, витаминов) содержат значительное количество белков и других полимеров, которые обладают вяжущими свойствами и могут быть использованы для получения биоклеев.

Полимеры в отходах микробиологических производств находятся в связанном состоянии и не доступны для взаимодействия с поверхностью склеиваемых твердых субстратов. Для вовлечения реакционно-способных групп этих макромолекул во взаимодействие с субстратом необходимо исследовать физико-химические свойства отходов, подобрать условия повышения их адгезивных свойств.

Цель исследования - разработка биотехнологии нетоксичных композиционных материалов из отходов растительного сырья и микробиологической промышленности.

Задачи исследования:

1. Подобрать условия культивирования P. tigrinus, обеспечивающие максимальный выход ферментов лигнолитического комплекса и высокую скорость разложения лигнина.

2. Изучить состав внеклеточного лигнолитического ферментного комплекса (ВЛФК) P. tigrinus, определить ключевой и вспомогательные ферменты.

3. Выделить и охарактеризовать физико-химические и лигнолитические свойства лакказы и пероксидазы гриба.

4. Исследовать динамику и характер изменения химического состава различных лигноцеллюлозных субстратов при твердофазном культивировании P. tigrinus, выращенного на различных питательных средах.

5. Исследовать влияние условий культивирования гриба на физико-механические свойства и экологические характеристики прессованных материалов из отходов растительного сырья, а также роль функциональных групп, продуктов и свободных радикалов, образующихся при биодеградации лигнина, в адгезии.

6. Разработать технологические приемы с использованием P. tigrinus для производства нетоксичных прессованных материалов из отходов растительного сырья.

7. Изучить физико-химические свойства отходов производства пенициллина и кровезаменителей, влияние условий модификации на их адгезивные свойства.

8. Разработать технические условия производства клеевых композиций из отходов производства пенициллина и кровезаменителей. Научная новизна. Впервые исследован состав лигнолитического комплекса гриба Panus (Lentinus) tigrinus штамм ВКМ F- 3616 D. Гриб синтезирует Mn-пероксидазу, пероксидазу , лакказу, а также Н2О2генерирующий фермент глюкозооксидазу в условиях погруженного культивирования, но не продуцирует лигнинпероксидазу . Для получения пероксидазы и лакказы разработан новый способ погруженного культивирования гриба, повышающий выход ферментов в несколько раз. При твердофазном культивировании на лигноцеллюлозных субстратах гриб синтезирует преимущественно пероксидазу и лакказу. Последовательность и максимумы проявления активностей зависят от вида лигноцеллюлозного сырья и способов их предварительной модификации.

Гриб продуцирует, по меньшей мере, две изоформы оксидаз различающихся по субстратной специфичности. Одна из них относится к желтым лакказам.

Впервые из P. tigrinus выделена и охарактеризована секреторная пероксидаза растительного типа. Изучение физико-химических свойств показало, что этот фермент имеет рН- и температурные оптимумы не характерные для грибных пероксидаз. Фермент проявляет оксидазные и пероксидазные свойства в зависимости от условий функционирования. Характер воздействия фермента на лигнин зависит от величины рН и наличия Н2О2.

Изучены условия культивирования P. tigrinus, изменения происходящие в химическом составе отходов растительного сырья и в распределении функциональных групп лигниновой компоненты при бидеградации, влияние этих изменений на адгезивные свойства лигнина. Подобраны условия биомодификации и режимов прессования отходов растительного сырья для получения нетоксичных пластиков. Физико-механические свойства пластиков зависят от условий обработки грибом, режимов прессования, глубины и характера изменений, происходящих в лигнине растительного сырья.

Пластики, изготовленные из отходов растительного сырья, обработанных грибом, по прочности не уступают пластикам, изготовленным с применением синтетических смол.

Исследованы физико-химические свойства отходов производства пенициллина и кровезаменителей. Подобраны условия химической модификации мицелиальных отходов продуцента пенициллина для увеличения адгезивных свойств. Разработаны условия получения экологически чистых клеевых композиций на основе отходов микробиологических производств, которые можно использовать для покрытия древесных пластиков шпоном для повышения их влагостойкости и улучшения внешнего вида. Это позволяет осуществлять безотходную технологию производства пенициллина и других продуктов микробиологического синтеза.

Научно-практическая значимость работы. Предложены приемы повышения биосинтеза ферментов лигнолитического комплекса грибом Р. tigrinus и его применения для биомодификации отходов растительного сырья с целью получения нетоксичных композиционных прессованных материалов, без использования токсичных синтетических связующих. Биотехнологическое производство пластиков, обладающих высокой прочностью на изгиб позволяет уменьшить эмиссию формальдегида в атмосферу более, чем в 30 раз, улучшить санитарно-гигиенические характеристики изготавливаемых изделий, решить проблему эффективной утилизации отходов различных отраслей промышленности (отходы древесины, хлопчатника, лигносульфонаты, целлолигнин). Получены два патента №213481 от 27.11.02, №2002103196/13 от 10.02.03 на производство прессованных материалов.

Подобраны условия получения клеевых композиций из отходов производства антибиотиков и кровезаменителей. Это дает возможность перевода производства антибиотиков в безотходный режим, позволяет снизить значительные объемы энергетических затрат на утилизацию мицелиальных отходов. Разработаны технические условия производства клеев («Клеевая композиция» ТУ 9218-001-02069964-01), которое можно осуществлять непосредственно на предприятиях, выпускающих антибиотики и кровезаменители, что позволит, наряду с решением проблем социального и экологического (дополнительные рабочие места, утилизация отходов) характера, получить дополнительную прибыль от производства и реализации клея.

Получены два патента РФ №2132348 от 09.04.97 и №2155790 от 02.11.98. Технология получения биоклея включена в каталог «Научно-техническая продукция малых фирм университетских технопарков» Минобразования РФ.

Связь работы с научными программами. Представленные результаты были получены в ходе исследований, проведенных в рамках хоздоговорных научно-исследовательских работ с ОАО «Биохимик» -«Разработка технологии производства клеев из отходов производства пенициллина», «Исследование адгезивных свойств отходов производства кровезаменителей». Грантов Правительства Республики Мордовия «Разработка новых технологий производства биоклеев из отходов предприятий Мордовии», «Получение экологически чистых строительных материалов при помощи базидиальных грибов», грантов Министерства образования РФ «Исследование свойств и роли ферментов лигнолитических грибов в биодеградации растительных субстратов и использование их для получения прессованных материалов РД 02-1.4-406», «Исследование физиолого-морфологических характеристик и свойств ферментов лигнолитического комплекса гриба P. tigrinus Е.02-6.0-112»

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Кадималиев, Давуд али-оглы

284 ВЫВОДЫ

1. Изучены физиологические и биохимические свойства гриба Partus (Lentinus) tigrinus штамм ВКМ F-3616D при погруженном и твердофазном культивировании.

2. Подобраны условия погруженного культивирования P. tigrinus, повышающие выход лигнолитических ферментов: минеральная среда лимитированная по азоту, разные источники и соотношения азота и углерода, специфические полимерные индукторы синтеза ферментов, применение детергента Твин-80, буферных растворов, рН и температурного сдвига. Выход ферментов увеличен более чем в 5 раз.

3. Изучен состав внеклеточного лигнолитического комплекса P. tigrinus, включающий Mn-пероксидазу, пероксидазу, лакказу и Н2О2-генерирующий фермент глюкозооксидазу. Впервые из P. tigrinus выделена и охарактеризована секреторная пероксидаза растительного типа. Фермент имеет рН- и температурные оптимумы, не характерные для грибных пероксидаз, проявляет оксидазные и/или пероксидазные свойства в зависимости от величины рН и присутствия Н2О2. Гриб продуцирует, по меньшей мере, две изоформы оксидаз, различающиеся по субстратной специфичности, но имеющие одинаковые рН- и температурные оптимумы и нетипичные для «голубых лакказ» спектры поглощения в видимой и УФ-области. Одна из оксидаз относится к желтым лакказам.

4. Биосинтез ферментов лигнолитического комплекса при твердофазном культивировании зависит от природы субстрата и способов его предварительной обработки. Совпадение по времени синтеза и проявления лигнолитической активности указывает на ведущую роль лакказы в биодеградации лигнина. Пероксидаза в основном играет вспомогательную роль, дополняя действие лакказы и участвуя в детоксикации.

5. Исследованы особенности биодеградации различных растительных субстратов из P. tigrinus при твердофазном культивировании. В процессе роста наблюдается преимущественное потребление лигнина. Убыль лигнина была выше при культивировании на березовых опилках, чем на сосновых опилках и отходах хлопчатника. Биодеградация отходов растительного сырья инокулятом P. tigrinus при рН 6,2 является оптимальной для целенаправленной модификации сырья. При этом в лигнине освобождаются фенольные гидроксильные, карбонильные и карбоксильные группы и образуются свободные радикалы.

6. Разработаны технологические приемы получения экологически безопасных прессованных материалов из отходов древесины и стеблей хлопчатника. Обработанное P. tigrinus сырье пригодно для производства прессованных материалов без применения токсичных синтетических связующих. При прессовании важную роль в образовании химических связей между частицами растительного сырья, обработанного P. tigrinus, играют лигнин и образующиеся при его биодеградации фенольные гидроксильные группы и свободные радикалы, гемицеллюлоза, а также белки и полисахариды гриба.

7. Прессование опилок сосны, обработанных P. tigrinus, в течение 3-6 суток при 170°С, давлении 5 МПа в течение 20 минут позволяет изготовить нетоксичные древесностружечные плиты с прочностью на изгиб до 26,4 МПа.

8. Прессование отходов стеблей хлопчатника, обработанных P. tigrinus в течение 1 -3 суток, при 170°С, давлении 5 МПа в течение 20 минут позволяет изготовить экологически чистые лигноуглеводные пластики с прочностью на изгиб до 15,4 МПа.

9. Разработаны технологические основы и технические условия получения клеевых композиций из отходов производства антибиотиков и кровезаменителей. Модификация NaOH и НС1 повышает адгезивные свойства мицелиальных отходов производства пенициллина. Использование модифицированного мицелия и отходов производства кровезаменителей (низкомолекулярная фракция декстрана) позволяет получить клеевые композиции, не уступающие по своим свойствам декстриновому и костному клеям и они могут быть использованы для покрытия шпоном прессованных материалов, полученных биотехнологическим способом.

287

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Результаты исследований показали, что гриб P. tigrinus ВКМ F-3616 D при погруженном культивировании синтезирует пероксидазу, лакказу, Мп-пероксидазу и НгОг-генерирующий фермент глюкозооксидазу, активность которых зависит от условий культивирования. Максимальный синтез лигнолитических ферментов грибом наблюдается в присутствии в среде лигноцеллюлозного субстрата - березовых опилок. Выделены и охарактеризованы два лигнолитических фермента - лакказа и секреторная пероксидаза растительног типа. P. tigrinus синтезирует две изоформы лакказы, одна из которых близка к желтой лакказе. Также впервые из Р. tigrinus выделена и охарактеризована секреторная пероксидаза растительного типа.

При выращивании гриба на естественных или модифицированных лигноцеллюлозных субстратах наблюдается преимущественный синтез пероксидазы и лакказы. Лакказа в составе ферментного комплекса P. tigrinus играет ведущую роль в деградации лигнина. Пероксидаза дополняет действие лакказы и участвует в детоксикации продуктов деградации лигнина.

Растительное сырье обработанное грибом P. tigrinus пригодно для производства древесностружечных плит без применения токсичных синтетических связующих. Качество прессованных материалов зависит от условий обработки растительного сырья P. tigrinus, и условий прессования.

Механизмы деградации лигнина зависят от природы лигноцеллюлозного сырья. Важную роль для твердофазного культивирования P. tigrinus и образования химических связей при прессовании сырья играет рН среды, оптимальным является рН 6,2. Базидиомицет вызывает глубокие изменения в лигниновой части лигноцеллюлозных субстратов. На начальном этапе культивирования в лигнине древесного сырья происходят полимеризационные процессы, и лишь затем идет деструкция полимера.

Показано, что важную роль в образовании химических связей между древесными частицами, обработанными P. tigrinus, играют лигнин, продукты его биодеградации и гемицеллюлозы, а также белки и полисахариды базидиомицета. Вероятно, влияние на этот процесс оказывают и свободные радикалы, образующиеся при разложении лигнина.

Модификация мицелиальных отходов производства пенициллина НС1 и NaOH позволяет получить клеевые композиции. Адгезивные свойства отходов обусловлены присутствием белков и полисахаридов. Свойства клеевых композиций зависят от условий модификации и соотношения компонентов. Разработаны технические условия для получения клеевых композиций из отходов производства антибиотиков и кровезаменителей. По своим физико-химическим параметрам полученные клеевые композиции не уступают костному и декстриновому клеям. Клей можно использовать для покрытия шпоном ДСП полученных биотехнологическим способом.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Кадималиев, Давуд али-оглы, 2003 год

1. Аксенова Э.Н., Андрианова О.П., Арзамасцев А.П., Коваленко Л.И., Митрягина С.Ф., Печенников В.М., Рыженкова А.П., Чернова С.В. Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической химии./Под ред. А.П.Арзамасцева.-М.:Медицина.,1987.-304с.

2. Алейникова Т.Л., Рубцова Г.В. Руководство к практическим занятиям по биологической химии./Под ред. А.Я.Николаева.-М.:Высш.шк., 1988.-239с.

3. Александрова Г.П., Петров А.Н., Медведева С.А., Бабкин В.А. Отбор лигнинразрушающих грибов для биотехнологических процессов .;. //Прикл.биохим.микробиол.-1998.-Т.34.-№3.-С.270-275.

4. Анисимова А.А., Леонтьева А.Н., Александрова И.М. Биохи-мия.М. :Высш.шк., 1986.-551 с.

5. Анненков В.Ф., Гук В.К., Янцо В.М. Изготовление прессованных деталей и изделий из отходов древесины. Киев: TexHika, 1986. - 112 с.

6. Ахмедова З.Р. Целлолитические, ксиланолитические и лигнолитические ферменты гриба Pleurotus ostreatus. II Прикл. биохим.микробиол. -1994.-Т.ЗО.- С.42-48.

7. Ахмедова З.Р., Белецкая О.П., Далимова Г.Н., Халикова М.М., Азим-ходжаева М.Н., Давранов К.Д., Шарипова А. Отбор и культивирование целлюлозо- и лигнинразрушающих грибов // Микробиология.- 1994.-Т.63, N 5.- С. 929-936.

8. Бабицкая В.Г. Ферментативная деструкция лигнина, содержащегося в растительных субстратах мицелиальными грибами // Прикл. био-хим.микробиол.- 1994.- Т. 30.- №6.- С. 827-835.

9. Бабицкая В.Г., Стахеев И.В. Изучение условий биотрансформации лигноцеллюлозных субстратов мицелиальными грибами в условиях твердофазной ферментации // Прикл.биохим.микробиол. -1986.- Т. 22.- №4.-С. 470-478.

10. Бабицкая В.Г., Щерба В.В. Деградация природных полимеров мицели-альными грибами продуцентами биологически активных веществ // Прикл. биохим. микробиол.- 1991.- №5.- С. 687-694.

11. Бабицкая В.Г., Щерба В.В. Особенности деградации лигнина природных полимеров ксилотрофами и почвенными сапротрофами // Микробиология. 1994. - № 1. - С.65-72.

12. Бабицкая В.Г., Щерба В.В., Осадчая О.В. Антиокислительная активность некоторых микро- и макромицетов деструкторов лигноцеллюлозных субстратов // Прикл. биохим. микробиол.- 1997.- Т. 33.- №5.- С. 559-563.

13. Бабичева А.Ф., Дрегваль Г.Ф. Газохроматографическое определение фенола и формальдегида в воде, в водных вытяжках и в воздухе.//Гигиена. санитар.-1990.-№2.-С.90-91.

14. Бадалян С.М. Систематика, биоэкология и физиологическая активность серно-желтого опенка. Ереван: Ереванский Университет, 1993.- 196 с.

15. Базарнова Н.Г., Галочкин А.И., Глебов Л.Ю. Прессованные материалы из гидротермически обработанной древесины осины и ангидридов ди-карбоновых кислот // Химия раст. сырья. 1997а. - Т.1.- №2. - С. 15-22.

16. Базарнова Н.Г., Галочкин А.И. Крестьянников B.C. Влияние гидротермической обработки древесины на свойства древесных прессованных материалов // Химия раст. сырья. 19976. -Т. 1.- № 1. - С. 11 -16.

17. Базарнова Н.Г., Галочкин А.И., Крестьянников B.C. Влияние мочевины на свойства прессованных материалов из древесины, подвергнутой гидротермической обработке // Химия раст. сырья. —1997в. -Т.1.- №1.- С.22-30.

18. Базарнова Н.Г., Ефанов М.В. Исследование содержания связанных ацильных групп в основных компонентах ацилированной древесины //Химия раст. сырья. 1999. - №1. - С. 99-106.

19. Баскакова А.А., Яковлев П.А. Изучение динамики образования белков в процессе роста и развития P.ChrysogeniumJМат-лы научн.конф.итоги 1959г.Л.:Изд-во ЛХФИ.-1960.-С.5-9.20