Разработка технологии получения и изучение свойств иммуноглобулина против клещевого энцефалита для внутривенного введения тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Мальцева, Ольга Валерьевна

• Мальцева, Ольга Валерьевна
• кандидат биологических наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Мальцева, Ольга Валерьевна

ВВЕДЕНИЕ.

ЕЛАВА 1. КЛЕЩЕВОЙ ЭНЦЕФАЛИТ И СРЕДСТВА СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ИММУНОТЕРАПИИ

1.1 Клещевой энцефалит

1.1.1. Эпидемиология клещевого энцефалита

1.1.2. Строение вируса клещевого энцефалита.

1.1.3. Механизмы развития клещевого энцефалита.

1.1.4. Основные средства специфической профилактики и терапии клещевого энцефалита

1.2. Методы получения иммуноглобулинов для внутривенного

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка технологии получения и изучение свойств иммуноглобулина против клещевого энцефалита для внутривенного введения»

ГЛАВ А 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ .35

2.1. Методы получения иммунной донорской плазмы.35

2.2. Изучение стабильности специфических антител в плазме при хранении .36

2.3. Метод получения иммуноглобулина против клещевого энцефалита для внутривенного введения .37

2.4. Методы изучения физико-химических и иммунобиологических свойств препарата . 38

2.5 Методы клинического изучения терапевтической эффективности иммуноглобулина против клещевого энцефалита для внутривенного введения .40

2.6. Статистический анализ .44

ГЛАВА 3. ПОЛУЧЕНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНА ПРОТИВ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ . . .45

3.1. Определение минимальной специфической активности готового препарата и исходной плазмы .45

3.2. Получение иммунной донорской плазмы.48 3

3.3. Определение требований к хранению исходного сырья . 53

3.4. Получение иммуноглобулина против клещевого энцефалита для внутривенного введения.58

ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ ИММУНОГЛОБУЛИНА ПРОТИВ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ . 66

4.1. Физико-химические и иммунобиологические свойства препарата и их стабильность.66

4.2. Клиническое изучение терапевтической эффективности иммуноглобулина против клещевого энцефалита для внутривенного введения .81

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.88

ВЫВОДЫ .100

ЛИТЕРАТУРА .101

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АКА - антикомплементарная активность

ВИЧ - вирус иммунодефицита человека

ВКЭ - вирус клещевого энцефалита

ВОЗ - Всемирная Организация Здравоохранения

ЕОП - единицы оптической плотности

ИПВЭ - Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов

ИФА - иммуноферментный анализ

ИЭФ - иммуноэлетрофорез

КЭ - клещевой энцефалит

МКА - моноклональные антитела

МЗ - Министерство Здравоохранения

НИИВС - Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток ОСПК - Областная станция переливания крови ПЭГ - полиэтиленгликоль

РАМН - Российская академия медицинских наук

РГА - реакция гемагглютинации

РНК - рибонуклеиновая кислота

РСК - реакция связывания комплемента

РТГА - реакция торможения гемагглютинации

РФ - Российская Федерация

ФС - фармакопейная статья

ЦНС - центральная нервная система a-HCV - антитела к вирусу гепатита С a-HIV - антитела к вирусу иммунодефицита человека

СН50 - гемолитическая единица комплемента

Д - дальтон

HBsAg - поверхностный антиген вируса гепатита В 5

IgG - иммуноглобулин класса G

IgM - иммуноглобулин класса М

М - средняя арифметическая m - ошибка средней арифметической t - статистический коэффициент Стьюдента

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы.

Клещевой энцефалит (КЭ) является одной из наиболее опасных нейро-вирусных инфекций в России и ряде европейских стран [1,76,93,146,197,206,217,240]. Это обусловлено особенностями клинического течения инфекции, тяжестью и длительностью заболевания, необратимыми остаточными явлениями, высоким уровнем смертности [58,79,117,147]. Несмотря на то, что вирусная этиология заболевания, переносчики, эпидемиологические закономерности распространения инфекции были установлены еще в 1930-е годы, в нашей стране проблема КЭ далека от своего разрешения [13,14,117].

В настоящее время в России в течение года регистрируется в среднем 2,5 тыс. заболеваний КЭ, при этом летальность от указанной инфекции в различных регионах составляет 1 - 15 % от общего числа наблюдаемых случаев инфицирования [75]. В ряде регионов России смертность при КЭ достигает 25-30 % [79,130].

Главная особенность эпидемиологического процесса КЭ - цикличность с возможностью значительного подъема заболеваемости в отдельные годы [55,58,66,87,128]. В последнее время отмечается возрастание количества случаев КЭ на территории всех природных очагов инфекции. Так, в 1996 году в России зарегистрировано максимальное число заболевших КЭ - более 10 тыс. человек [1,64,93,94]. Тенденцию к росту заболеваемости КЭ исследователи связывают, прежде всего, с восстановлением численности клещей на ранее обрабатываемых акарицидами территориях, увеличением числа контактов городского населения с переносчиками КЭ, а также снижением напряженности коллективного иммунитета на всех эндемичных территориях из-за наблюдавшегося ранее спада активности природных очагов КЭ [1,21,75,87,93,140,155,156].

Составной частью комплекса профилактических мероприятий, направленных на предупреждение КЭ, является вакцинация [25,126,205,226]. В европейских странах вакцинопрофилактика - основной метод борьбы с КЭ [159,167,181,205,207,230]. В нашей стране также разработаны и применяются вакцины против КЭ [16,25,39,41,84,91,98,100,116,152,153]. Вместе с тем ежегодно проводимая иммунизация охватывает лишь незначительную часть населения эндемичных районов. По указанной причине снижения общей заболеваемости КЭ не происходит [11,79,94].

На сегодняшний день основным средством экстренной профилактики и терапии КЭ является донорский иммуноглобулин, содержащий антитела к вирусу клещевого энцефалита (ВКЭ) в титре не менее 1:80 по данным реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и предназначенный для внутримышечного введения [19,75,96,106,129]. Своевременное применение специфического иммуноглобулина уменьшает явления интоксикации в острый период заболевания, снижает летальность и число осложнений очаговых форм КЭ [35,110]. Однако недостатки внутримышечного введения иммуноглобулина (ограничение объема введения препарата, медленная резорбция антител из мышечной ткани, значительный местный протеолиз белковых молекул) не позволяют достичь быстрого лечебного эффекта при лечении тяжелых форм инфекции.

В литературе имеются данные об эффективном применении донорской плазмы с титром антител к ВКЭ 1:80 в РТГА. Убедительно показано, что ее введение способствует нормализации самочувствия больных, быстрому купированию инфекционно-токсического синдрома, благотворно влияет на систему гемостаза и способствует усилению защитных сил организма [23,26,119,120]. Вместе с тем введение плазмы связано с риском сенсибилизации организма реципиента многочисленными белковыми антигенами и опасностью развития посттрансфузионных осложнений, связанных с возможной вирусной контаминацией плазмы [145,169].

Перспективным направлением повышения эффективности иммунотерапии КЭ является внутривенное введение специфического иммуноглобулина, полученного из иммунной донорской плазмы [115,149,151]. Этот путь применения препарата позволяет сравнительно безболезненно вводить иммуноглобулин в больших, необходимых для лечения дозах и быстро увеличивать уровень специфических антител в крови больного. При этом исключаются ре-зорбционные потери иммунного белка в месте инъекции, что приводит к оптимальному усвоению введенной дозы антител [176,190,222]. Применение внутримышечного иммуноглобулина против КЭ внутривенно недопустимо из-за возможности развития опасных побочных реакций [176,221]. В литературе не имеется сведений о наличии иммуноглобулина против КЭ, предназначенного для внутривенного введения.

Таким образом, для повышения эффективности лечения больных тяжелыми формами КЭ актуальной задачей является получение специфического иммуноглобулина для внутривенного введения.

Целью настоящего исследования явилась разработка технологии получения и изучение свойств иммуноглобулина человека против клещевого энцефалита для внутривенного введения.

Для достижения поставленной цели требовалось решить следующие задачи:

1. Установить минимально допустимую специфическую активность готового внутривенного иммуноглобулина и исходной плазмы.

2. Выявить возможные источники получения иммунной донорской плазмы.

3. Определить условия и сроки хранения иммунного сырья.

4. Разработать технологическую схему изготовления иммуноглобулина против клещевого энцефалита для внутривенного введения.

5. Исследовать физико-химические и иммунобиологические свойства иммуноглобулина в процессе хранения.

6. Оценить терапевтическую эффективность препарата при лечении больных тяжелыми формами клещевого энцефалита.

Работа выполнена в рамках темы научно-исследовательской работы (НИР) Кировского НИИ гематологии и переливания крови "Разработка технологии получения иммуноглобулина против клещевого энцефалита для внутривенного введения".

Научная новизна.

Впервые показана возможность использования общепринятой технологической схемы производства иммуноглобулина для внутривенного введения с применением спиртового фракционирования и последующего кислотно-ферментативного гидролиза раствора иммуноглобулина для получения нового специфического препарата - иммуноглобулина человека против КЭ для внутривенного введения. Разработаны требования к условиям и срокам хранения исходной иммунной плазмы. Изучены физико-химические и иммунобиологические свойства препарата в процессе изготовления и хранения. Получен Патент РФ № 2141342 от 20 ноября 1999 г. "Способ получения иммуноглобулина человека против клещевого энцефалита для внутривенного введения" Показана высокая терапевтическая эффективность препарата в комплексном лечении больных тяжелыми формами КЭ. Совместно с Хабаровским НИИ эпидемиологии и микробиологии получен Патент РФ № 2158606 от 10 ноября 2000 г. "Способ комплексного лечения больных клещевым энцефалитом".

Практическая значимость.

Получен иммуноглобулин против клещевого энцефалита для внутривенного введения, эффективный в комплексной терапии тяжелых форм заболевания. На основании результатов исследования составлена и утверждена нормативная документация на препарат:

- "Опытно-промышленный регламент на производство иммуноглобулина человека против клещевого энцефалита для внутривенного введения", утв. директором Кировского НИИ гематологии и переливания крови 7 июля 1997 г;

- "Временная фармакопейная статья на иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита для внутривенного введения", утв. Приказом МЗ РФ № 87 от 3 марта 2000 г. (ВФС 42-3526-99);

- "Инструкция по применению иммуноглобулина человека против клещевого энцефалита для внутривенного введения", утв. Главным гос. санитарным врачом РФ 2 декабря 1999 г.

Полученные результаты применяются в работе Станции переливания крови Кировского НИИ гематологии и переливания крови. Материалы исследования используются в лекциях на кафедре гематологии и трансфузиологии Факультета усовершенствования врачей Пермской государственной медицинской академии на базе Кировского НИИ гематологии и переливания крови.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Сырьем для получения иммуноглобулина против КЭ для внутривенного введения служит донорская плазма с титром антител к ВКЭ не менее 1:10 в РТГА. Минимально допустимой специфической активностью готового препарата является титр антител к ВКЭ 1:40.

2. Метод кислотно-ферментативного гидролиза позволяет получать иммуноглобулин против КЭ, пригодный для внутривенного введения и содержащий специфические антитела в титре не менее 1:40.

3. Для заготовки исходного сырья целесообразно использовать серологический скрининг донорской плазмы на наличие естественных специфических антител и намеренную иммунизацию доноров вакциной клещевого энцефалита культуральной очищенной инактивированной сухой концентрированной.

4. Иммунная плазма, предназначенная для приготовления внутривенного иммуноглобулина против КЭ, сохраняет активность антител к ВКЭ при температуре (6 ± 4) °С в течение одного месяца и при температуре не выше минус 20 °С в течение шести месяцев.

5. Физико-химические и иммунобиологические свойства иммуноглобулина человека против КЭ для внутривенного введения стабильны в течение одного года при температуре (6 ± 4) °С.

6. Клиническое изучение нового препарата свидетельствует о его эффективности в комплексном лечении больных менингеальной и очаговыми формами КЭ.

Апробация работы.

Основные результаты и положения работы доложены на 3-й международной конференции по службе крови стран Восточной Европы (С. - Петербург, 1996 г.); III Всероссийском съезде гематологов и трансфузио-логов (С. - Петербург, 1996 г.); совещании технологов службы крови (Москва, 1997 г.); конференции "Трансфузиология и служба крови" (Москва, 1998 г.); научно-практической конференции "Клиника, диагностика, профилактика, лечение клещевого энцефалита" (Киров, 1999 г.); на научных конференциях Кировского НИИ гематологии и переливания крови.

Объем и структура работы.

Диссертация изложена на 128 страницах машинописи и состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием материалов и методов, двух глав с изложением результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы. Библиография включает 240 источников, из них 158 отечественных и 82 зарубежных. Диссертация иллюстрирована 12 рисунками и 17 таблицами.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Мальцева, Ольга Валерьевна

выводы

1. Разработана технология получения иммуноглобулина человека против клещевого энцефалита для внутривенного введения на основе метода кислотно-ферментативного гидролиза.

2. Предложены формулы расчета минимально допустимой специфической активности внутривенного иммуноглобулина против клещевого энцефалита и исходной иммунной плазмы. Показана возможность изготовления препарата со специфической активностью не менее 1:40 в реакции торможения гемагглютинации из донорской плазмы с титром антител к вирусу клещевого энцефалита не менее 1:10.

3. Для заготовки иммунного сырья целесообразно использование серологического скрининга донорской плазмы на наличие естественных специфических антител и намеренной иммунизации доноров вакциной клещевого энцефалита культуральной очищенной инактивированной сухой концентрированной.

4. Иммунную плазму рекомендуется хранить в течение 1 месяца при температуре (6 ± 4) °С и 6 месяцев при температуре не выше минус 20 °С.

5. Иммуноглобулин против клещевого энцефалита для внутривенного введения стабилен в течение одного года при температуре (6 ± 4) °С.

6. Специфический внутривенный иммуноглобулин эффективен в комплексной терапии больных менингеальной и очаговыми формами клещевого энцефалита.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Среди инфекционных поражений центральной нервной системы до 30 % занимают вирусные энцефалиты [31]. Одной из самых опасных нейровирус-ных инфекций, широко распространенных на территории нашей страны, является клещевой энцефалит, отличающийся тяжестью и длительностью течения, грубыми остаточными явлениями после перенесенного заболевания, высоким процентом летальных исходов [29,78,93,104,139,146].

Неблагоприятная эпидемиологическая обстановка по КЭ в нашей стране указывает на необходимость создания новых и совершенствования существующих средств лечения больных КЭ [79,93,105,117]. Применение донорской плазмы, содержащей антитела к ВКЭ, связано с риском аллергических осложнений [145], а также передачи множества потенциальных патогенных агентов [169].

Введение специфического внутримышечного иммуноглобулина не создает оптимальной концентрации антител к ВКЭ в сыворотке крови больных тяжелыми формами КЭ для нейтрализации возбудителя в максимально короткие сроки. Следовательно, на сегодняшний день для повышения эффективности лечения больных КЭ актуальной задачей является создание специфического внутривенного иммуноглобулина.

Целью настоящего исследования явилась разработка технологии получения и изучение свойств иммуноглобулина против клещевого энцефалита для внутривенного введения. Для достижения поставленной цели требовалось решить следующие задачи:

1. Установить минимально допустимую специфическую активность готового внутривенного иммуноглобулина и исходной плазмы.

2. Выявить возможные источники получения иммунной донорской плазмы.

3. Определить условия и сроки хранения иммунного сырья.

4. Разработать технологическую схему изготовления иммуноглобулина против клещевого энцефалита для внутривенного введения.

5. Исследовать физико-химические и иммунобиологические свойства иммуноглобулина в процессе хранения.

6. Оценить терапевтическую эффективность препарата при лечении больных тяжелыми формами клещевого энцефалита.

Известно, что коммерческий иммуноглобулин человека против КЭ, предназначенный для внутримышечного введения, содержит антитела к ВКЭ в титре не ниже 1:80 и производится из донорской плазмы с титром специфических антител не ниже 1:10 по результатам РТГА (ФС 42-3155-95); концентрация белка во внутривенном препарате в 2-3 раза ниже, чем во внутримышечном (5 % и 10-16 % соответственно). Кроме того, инфузионная форма иммуноглобулина обладает более высокой эффективностью по сравнению с инъекционной, лишена антикомплементарных свойств и позволяет увеличивать объем вводимого препарата [123,199,221,222].

Для определения минимально допустимой специфической активности внутривенного иммуноглобулина против КЭ и исходной донорской плазмы были выведены следующие формулы : т2 С! Т22 С!

1) Ъ = - ; 2) Тз =-- , где

С2 Т, С2 К

Т] - минимальная специфическая активность внутривенного иммуноглобулина (обратный титр антител к ВКЭ);

Т2 - минимальная специфическая активность внутримышечного иммуноглобулина (обратный титр антител к ВКЭ);

Т3 - минимальная специфическая активность котловой загрузки плазмы для получения внутривенного иммуноглобулина (обратный титр антител к ВКЭ); С] - концентрация белка во внутривенном препарате;

- концентрация белка во внутримышечном препарате; К - минимальная степень концентрации специфических антител в коммерческом препарате иммуноглобулина против КЭ.

В соответствии с предложенными формулами произведен расчет величин, характеризующих технологию получения иммуноглобулина против КЭ для внутривенного введения: минимально допустимой специфической активностью готового препарата является титр антител к ВКЭ 1:40, исходной плазмы - 1:10.

Согласно требованиям ВОЗ (1984,1988) специфическим является препарат иммуноглобулина, в котором содержание антител к определенному возбудителю не менее чем в 5 раз превышает этот показатель в препарате иммуноглобулина нормальном. В предварительно проведенном исследовании 10-ти образцов иммуноглобулина нормального человека для внутривенного введения антитела к ВКЭ в РТГА не выявлялись. Следовательно, внутривенный иммуноглобулин с титром антител к ВКЭ 1:40 в РТГА отвечает требованиям ВОЗ к специфическим иммунным препаратам.

С целью апробирования предварительных расчетов изучена активность белковых растворов на различных этапах приготовления 5-ти опытных образцов внутривенного иммуноглобулина из донорской плазмы с титром антител к ВКЭ 1:10. Снижение специфической активности иммуноглобулина приблизительно соответствовало уменьшению концентрации общего белка за счет разведения исходного раствора на этапах изготовления препарата. Следовательно, кислотно-ферментативная обработка не оказывала отрицательного влияния на активность антител к ВКЭ. В готовом препарате иммуноглобулина для внутривенного введения титр антител к ВКЭ в четырех образцах был равен 1:40, в одном -1:80 при содержании белка в растворе 4,6 - 5,5 %. Степень концентрации антител к ВКЭ (отношение специфической активности в готовом препарате к таковому в исходной плазме) в четырех образцах препарата оказалась равной 4, в одном образце - 8.

Таким образом, экспериментально была подтверждена правильность предварительных математических расчетов. Для получения внутривенного иммуноглобулина против КЭ с титром антител к ВКЭ не менее 1:40 необходимо использовать донорскую плазму с активностью не менее 1:10.

Традиционным методом заготовки иммунного сырья для получения специфических препаратов иммуноглобулина является серологический скрининг донорской плазмы на наличие естественных антител к определенному возбудителю [34,53,73,97,106,125,150]. Для оценки возможных источников получения иммунной плазмы на первом этапе исследования было изучено содержание антител к ВКЭ в плазме крови 1160 доноров, проживающих в различных районах Кировской области. Результаты исследования образцов плазмы доноров из Белохолуницкого, Кирово-Чепецкого, Омутнинского, Советского и Юрьянского районов показали, что относительное количество доноров с содержанием антител к ВКЭ в плазме не менее 1:10 составляет в среднем 7,6 %. Следовательно, целенаправленный скрининг плазмы крови доноров позволяет заготовить определенные объемы иммунного сырья для приготовления внутривенного иммуноглобулина против КЭ, однако получение достаточного количества плазмы для серийного производства препарата в данных условиях проблематично.

В связи с вышесказанным изучена возможность иммунизации доноров с целью увеличения количества заготавливаемого сырья. Проиммунизировали 101 донора вакциной клещевого энцефалита культуральной очищенной инак-тивированной сухой концентрированной производства ИПВЭ им. М.П.Чумакова РАМН (г. Москва). При анализе результатов вакцинации доноров по двум разным схемам выявлено следующее: у 74 человек

73,3 % от общего количества иммунизированных) наблюдался положительный иммунный ответ (титр антител к ВКЭ 1:10 и выше), у 27 (26,7 %) - отрицательный (титр антител к ВКЭ менее 1:10), причем количество доноров с титром специфических антител 1:20 и более оказалось равным 44, что составило 59,5 % от общего числа доноров с положительным иммунным ответом.

Хранение иммунной плазмы ведет к потере ее специфической активности [73,123,150]. В связи с этим необходимо было определить условия и сроки хранения исходного сырья. Изучена стабильность антител к ВКЭ в 50 образцах донорской плазмы с исходным титром 1:10 и 1:20 в различных температурных режимах. Установлено, что иммунная плазма сохраняет специфическую активность в течение 1 месяца хранения при температуре (6 ± 4) °С и 6 месяцев - при температуре не выше минус 20 °С.

На основании полученных результатов рекомендовано для заготовки иммунного сырья использовать серологический скрининг донорской плазмы на наличие антител к ВКЭ, а также иммунизацию доноров вакциной КЭ сухой концентрированной, обеспечивающую выход в иммуноактивные доноры 73,3 % иммунизированных. Срок хранения плазмы, содержащей антитела к ВКЭ, - 1 месяц при температуре (6 ± 4) °С и 6 месяцев - при температуре не выше минус 20 °С.

С целью получения инфузионной формы иммуноглобулина против КЭ за основу был взят утвержденный в нашей стране метод кислотно-ферментативного гидролиза осадка фракции II, выделенного спиртовым фракционированием донорской плазмы [6,60,111,118]. Лиофилизированный осадок иммуноглобулина против КЭ, полученный на базе Свердловской ОСПК (г. Первоуральск) из иммунной плазмы, содержащей антитела к ВКЭ в титре не менее 1:10 и проверенной на отсутствие HBsAg, a-HIV и a-HCV, обрабатывали небольшим количеством пепсина (25-50 мг на 100 г белка) в слабокислой среде (рН 3,9-4,0). Фермент удаляли гелем гидроокиси алюминия. Перед стадией выстаивания устанавливали рН раствора 6,0 - 6,4. На этапе выстаивания иммуноглобулина для ускорения выпадения осадка проводили дополнительное термостатирование раствора в течение 24 часов. На стадии получения готового препарата перед центрифугированием иммуноглобулин обрабатывали гелем гидроокиси алюминия, что способствовало более полному удалению коллоидно-нестабильных компонентов. По разработанной технологической схеме приготовили 9 экспериментально-производственных серий иммуноглобулина против КЭ для внутривенного введения общим объемом 28,575 л.

Изучена сохранность антител к ВКЭ на этапах приготовления препарата. После спиртового фракционирования иммунной плазмы с титром специфических антител 1:10 - 1:40, проведения кислотно-ферментативного гидролиза осадка фракции II и выстаивания иммуноглобулина в течение 1-3 месяцев был получен внутривенный препарат с титром специфических антител 1:40 - 1:320.

В процессе изготовления специфического внутривенного препарата выявлено, что кислотно-ферментативная обработка и неоднократное проведение осветляющей и стерилизующей фильтрации не оказывали значительного влияния на активность антител к ВКЭ. Степень концентрации специфических антител в готовом препарате составила в среднем 4,4 и совпала с рассчитанной ранее.

Значительный интерес с точки зрения технологии производства иммуноглобулинов представлял конечный выход препарата из 1 л иммунной плазмы. При фракционировании 813,5 л плазмы (в среднем 90,39 л на одну серию препарата) было получено 4875 г сухого полуфабриката иммуноглобулина (в среднем 541,67 г) и далее - 28,575 л (3,175 ± 0,330) готового внутривенного препарата. В результате из одного литра иммунной плазмы мы получили (35,72 ± 4,16) мл внутривенного иммуноглобулина против КЭ, что в среднем составило 1,79 г белка.

Таким образом, разработана комплексная технологическая схема изготовления иммуноглобулина против КЭ для внутривенного введения, включающая заготовку донорской плазмы с титром антител к ВКЭ не менее 1:10 в РТГА; хранение исходного сырья при температуре (6 ± 4) °С не более 1 месяца и при температуре не выше минус 20 °С не более 6 месяцев; спиртовое фракционирование плазмы до стадии сухого осадка иммуноглобулина; приготовление препарата иммуноглобулина для внутривенного введения модифицированным методом кислотно-ферментативного гидролиза. Препарат имеет специфическую активность не менее 1:40 в РТГА. На способ получения иммуноглобулина человека против клещевого энцефалита для внутривенного введения получен Патент РФ № 2141342 от 20 ноября 1999 г.

Изучение физико-химических и иммунобиологических свойств 9 экспериментально-производственных серий иммуноглобулина показало, что препарат полностью соответствовал требованиям, предъявляемым к отечественным иммуноглобулинам для внутривенного введения (ФС 42-3159-95).

Препарат представлял собой прозрачную или слегка опалесцирующую бесцветную жидкость. Показатели прозрачности и цветности растворов внутривенного иммуноглобулина составили в среднем 0,008 и 0,024 ЕОП соответственно; значение рН - (6,82 ± 0,04); содержание белка, определяемое по биу-ретовой реакции, - (5,01 ± 0,12) %; концентрации хлорида натрия, глюкозы и гликокола - 0,87, 0,91 и 0,56 % соответственно.

Молекулярный состав полученного препарата был представлен в основном мономерами IgG - (80,90 ± 2,15) %; димеры IgG составили в среднем (6,63 ± 0,66) %; фрагменты - (12,47 ± 2,10) %. Уровень АКА во всех сериях препарата соответствовал требованиям к инфузионной форме иммуноглобулина и в среднем был равен 19,44 мг белка, не связывающим две гемолитические единицы комплемента. Электрофоретическое исследование показало, что во всех сериях иммуноглобулина содержится только одна фракция с подвижностью у-глобулина. На иммуноэлектрофореграммах образцов всех серий препарата выявлена одна интенсивная зона преципитации, соответствующая расположению иммуноглобулина G. В семи сериях из девяти присутствовала дополнительная, менее интенсивная, зона преципитации, соответствующая расположению иммуноглобулина А. Титр антител к ВКЭ в препарате варьировал от 1:40 до 1:320.

Все серии препарата были стерильны, апирогенны, нетоксичны, проверены на отсутствие HBsAg и a-HIV.

Изучение стабильности иммуноглобулина против КЭ для внутривенного введения в процессе длительного хранения показало, что в среднем раствор сохраняет свои физико-химические свойства в течение трех лет. В свою очередь иммунобиологические свойства препарата за данный промежуток времени заметно изменяются. Известно, что растворы иммуноглобулина содержат незначительную примесь протеолитических ферментов, которые с течением времени расщепляют молекулы IgG на низкомолекулярные фрагменты [37,59,134]. Иммуноэлектрофоретическое исследование образцов внутривенного иммуноглобулина против КЭ, хранившихся 24 месяца, выявило в пяти сериях из семи раздвоение линии преципитации IgG, указывающее на расщепление молекул иммуноглобулина. Кроме того, в пределах допустимых норм изменялся молекулярный состав препарата. Через 24 и 36 месяцев наблюдалось достоверное увеличение количества фрагментов и снижение содержания мономеров IgG. Исследование АКА хранившихся образцов внутривенного иммуноглобулина показало, что через 18 месяцев происходит достоверное возрастание уровня АКА в пределах нормы. После 24 месяцев хранения в трех сериях препарата из семи АКА составила 5 мг белка, не связывающих две гемолитические единицы комплемента, что не соответствовало требованиям к инфузионной форме иммуноглобулина.

Известно, что специфическая активность препаратов иммуноглобулина при длительном хранении снижается [59,123,134]. Через 18 месяцев наблюдалось двукратное падение титра антител к ВКЭ в двух сериях из семи, через

24 месяца - в трех сериях. После 36 месяцев хранения в двух сериях препарата специфическая активность была ниже уровня 1:40. Одной из причин снижения титра антител к ВКЭ при хранении препарата является, по-видимому, расщепление молекул иммуноглобулина под воздействием протеолитических ферментов, присутствующих в препарате в следовых количествах [37,59,134]. Наблюдалась взаимосвязь между увеличением относительного количества фрагментов IgG, уменьшением содержания мономеров IgG и снижением активности антител к ВКЭ при длительном хранении иммуноглобулина, что является косвенным доказательством присутствия в препарате следовых количеств протеаз.

Таким образом, разработанный внутривенный иммуноглобулин против КЭ полностью сохранял физико-химические и иммунобиологические свойства в течение одного года. На препарат утверждена Временная фармакопейная статья (Приказ МЗ РФ № 87 от 3 марта 2000 г).

Терапевтическая эффективность иммуноглобулина человека против клещевого энцефалита для внутривенного введения оценивалась по результатам комплексного лечения больных тяжелыми формами КЭ. С этой целью было использовано 5 серий иммуноглобулина против КЭ для внутривенного введения, проконтролированных в ГИСК им. Л.А.Тарасевича и допущенных к испытанию. Препаратом сравнения служил коммерческий иммуноглобулин против КЭ для внутримышечного введения. Под наблюдением находилось 120 пациентов в возрасте от 15 до 60 лет, в том числе 64 больных менингеальной формой КЭ и 56 - очаговыми формами инфекции. Диагноз КЭ был установлен на основании клинических данных и подтвержден методами специфической лабораторной диагностики. В рандомизированном исследовании были сформированы группы пациентов, получавших иммуноглобулин против КЭ для внутривенного введения (47 человек, из них 29 с менингеальной формой КЭ и 18 с очаговыми формами) или иммуноглобулин против КЭ для внутримышечного введения в количестве, адекватном по условной нейтрализующей дозе внутривенному препарату, но превышающем регламентированные дозы препарата (37 пациентов, из них 22 с менингеальной формой КЭ и 15 с очаговыми). В качестве группы исторического контроля использовались результаты лечения пациентов внутримышечным специфическим иммуноглобулином в регламентированных дозах (36 пациентов, из них 13 с менингеальной и 23 с очаговыми формами КЭ).

При лечении больных менингеальной формой КЭ внутривенным иммуноглобулином и внутримышечным в регламентированных дозах выявлено достоверное преимущество испытуемого препарата (р < 0,05). Введение внутривенного иммуноглобулина вызывало нормализацию общего состояния пациентов в среднем на 3,4 дня раньше, регресс менингеальных симптомов - на 3,3 дня раньше, санацию спинномозговой жидкости - на 6,7 дня раньше. При лечении больных очаговыми формами КЭ применение внутривенного препарата по сравнению с внутримышечным в регламентированных дозах приводило к нормализации состояния пациентов в среднем на 1 день раньше, санации спинномозговой жидкости - на 9,1 дня раньше (р < 0,05), регрессу двигательных расстройств - раньше на 1,9 дня. При сопоставлении эффективности опытного препарата с воздействием больших доз коммерческого иммуноглобулина выявлено, что сроки нормализации вышеперечисленных симптомов статистически не отличались. Однако известно, что внутримышечное введение больших доз белкового препарата может вызвать абсцесс в месте инъекции.

Показано, что применение иммуноглобулинов не вызывало у больных угнетения собственного специфического антителообразования, при этом титр IgG-антител к ВКЭ в сыворотке крови пациентов нарастал быстрее при введении внутривенного препарата. Если в начале заболевания антитела к ВКЭ у всех больных были на одном уровне (в среднем 3,5 ед. ИФА), то ко второй неделе титр специфических антител увеличивался в среднем в 2 раза у пациентов, получивших внутривенный иммуноглобулин (6,9 ед. ИФА) и в 1,5 раза у больных, пролеченных внутримышечным препаратом в больших дозах (5,2 ед. ИФА). К 6-9 неделе заболевания у всех, получивших специфическую иммунотерапию, наблюдалось повышение уровня антител к ВКЭ (в среднем 7,4 и 7,3 ед. ИФА соответственно), связанное, вероятно, с собственным иммунным ответом на внедрение инфицирующего агента. Вместе с тем исследование циркуляции комплементсвязывающего антигена ВКЭ в крови пациентов исследуемых групп в остром периоде инфекционного процесса (1-3 недели заболевания) показало, что при введении внутривенного иммуноглобулина снижение концентрации антигена ВКЭ в крови больных происходило достоверно быстрее, чем при использовании внутримышечного препарата в регламентированных дозах. Это свидетельствовало о раннем нейтрализующем действии на вирус специфических антител, введенных непосредственно в кровоток больного.

Результаты проведенного клинического исследования выявили преимущество иммуноглобулина против КЭ для внутривенного введения в комплексной терапии больных тяжелыми формами КЭ по сравнению с внутримышечным препаратом. Применение внутривенного иммуноглобулина положительно влияло на течение инфекционного процесса, способствовало быстрому регрессу симптомов заболевания и нормализации состояния больных, не оказывало депрессивного влияния на собственный активный антителогенез. Эффективность применения внутривенного иммуноглобулина против КЭ и больших доз специфического внутримышечного препарата по основным показателям оказалась сходной. Установлено, что специфическую иммунотерапию целесообразно начинать в максимально ранние сроки от начала заболевания (до 6 дня болезни).

Необходимо подчеркнуть, что внутривенное введение препарата дает возможность увеличения дозы иммунного белка, поступающего непосредственно в кровяное русло, что приводит к быстрому эффекту лечения КЭ. При этом отсутствуют местный протеолиз молекул антител и побочные реакции в

99 виде абсцессов. Кроме того, внутривенный иммуноглобулин, полученный кислотно-ферментативной обработкой, в отличие от внутримышечного практически лишен примесных белков, сенсибилизирующих организм реципиента.

В период проведения клинических испытаний внутривенного иммуноглобулина против КЭ установлена его безвредность и ареактогенность. Результаты исследования терапевтической эффективности иммуноглобулина послужили основой для составления Инструкции по применению препарата. Федеральная комиссия по медицинским иммунобиологическим препаратам МЗ РФ считает целесообразным внедрение иммуноглобулина против КЭ для внутривенного введения в практику здравоохранения (Протокол № 1 заседания Комитета МИБП от 19 февраля 1998 г.). Совместно с Хабаровским НИИ эпидемиологии и микробиологии получен Патент РФ № 2158606 от 10 ноября 2000 г. "Способ комплексного лечения больных клещевым энцефалитом".

Таким образом, разработана технология получения нового препарата -иммуноглобулина человека против клещевого энцефалита для внутривенного введения, изучены его свойства, показана эффективность в комплексной терапии тяжелых форм клещевого энцефалита, утверждена нормативная документация на препарат.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Мальцева, Ольга Валерьевна, 2002 год

1. Абросимова Л.П., Ярошецкая Э.Е. Эпидемиологические особенности клещевого энцефалита в Кировской области // Материалы регион, науч.-практич. конф. "85 лет первой антирабической прививке в Вятской губернии",- Киров, 1999,- С. 49-52.

2. Анализ генетической вариабельности штаммов вируса клещевого энцефалита по первичной структуре фрагмента гена белка оболочки Е / Злобин В.И., Демина Т.В., Мамаев и др. // Вопр. вирусологии,- 2001,- № 1,-С. 12-16.

3. Анастасиев В.В. Иммуноглобулин для внутривенного введения-Нижний Новгород: Изд. НГМА, 2000,- 168 с.

4. Анастасиев В.В., Киселева И.А., Новикова Л.П., Тараева Г.А. Получение из плазмы крови доноров иммуноглобулина для внутривенного введения // Гематол. и трансфузиол,- 1985,- № 10,- С. 46-48.

5. Анастасиев В.В. Применение иммуноглобулинов // Иммуноглобулины: Сб. науч. трудов,- Нижний Новгород, 1993,- С. 14-37.

6. Анастасиев В.В. Разработка молекулярных моделей процесса фракционирования иммуноглобулинов // Иммуноглобулины: Сб. науч. трудов.-Нижний Новгород, 1993 С. 45-50.

7. Анастасиев В.В. Разработка технологии получения нового поколения иммуноглобулинов для терапии инфекционных и аутоиммунных заболеваний человека: Автореф. Дис. . доктора биол. наук,- М., 1997,- 49 с.

8. Антигенемия и циркуляция специфических иммунных комплексов при бессимптомном течении клещевого энцефалита / Кузяев Р.З., Пархоменко Т.Г., Душкин Е.А. и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.- 1998,- № 2,- С. 86-88.

9. Антыкова Л.П. Эпидемиология клещевого энцефалита в Ленинграде // Клещевой энцефалит,- Л., 1989,- С. 21-25.

10. Апоптоз как механизм цитопатического действия вируса клещевого энцефалита / Исаева М.П., Леонова Г.Н., Кожемяко В.Б. и др. // Вопр. вирусологии,- 1998,- № 4,- С. 182-186.

11. Болотин Е.И. Критический анализ монографии Г.Н. Леоновой "Клещевой энцефалит в Приморском крае (вирусологические и эколого-эпидемиологические аспекты)" // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 1999,-№3.-С. 114-117.

12. Васильев К.Г. К 60-летию со дня открытия вируса клещевого энцефалита// Вопр. вирусологии,- 1997,- № 2,- С. 92-93.

13. Васильев Н.В., Федоров Ю.В., Васильева О.А. Механизм формирования иммунитета при клещевом энцефалите // Клещевой энцефалит.-Л., 1989,-С. 77-84.

14. Верета Л.А., Воробьева М.С. Природная гетерогенность и целенаправленный отбор штаммов вируса клещевого энцефалита,- М.: Медицина, 1990,- 128 с.

15. Верета Л.А. Принципы прогнозирования заболеваемости клещевым энцефалитом,- М.: Медицина, 1975,- 136 с.

16. Взаимодействие РНК вируса клещевого энцефалита с белками / Морозова О.В., Фоменко Н.А., Бугрышева Ю.В. и др. // Вопр. вирусологии.-2001,-№2,- С. 13-17.

17. Влияние иммуноглобулинопрофилактики на частоту заболеваний клещевым энцефалитом людей после присасывания зараженных переносчиков / Пеньевская Н.А., Наволокин О.В., Матюхина J1.B. и др. // Природноочаговые болезни человека,- Омск, 1988,- С. 58-68.

18. Возможности комплексной диагностики вирусных энцефалитов в Свердловской области / Глинских Н.П., Федотова Т.Т., Перескокова И Г. и др. //Вопр. вирусологии,- 1994,-№4,- С. 190-191.

19. Волегова Г.М., Леонтьев С.А., Эйхнер Э.Э. Иммунная плазма в терапии клещевого энцефалита // Иммунопрофилактика, иммунодиагностика, иммунокоррекция Омск, 1994,- С. 16-18.

20. Волкова Л.И. Клиническая характеристика больных клещевым энцефалитом в сезон 1991 г. // Эпидемиология, клиника и профилактика вирусных инфекций,- Екатеринбург, 1992,- С.146-151.

21. Гайдамович С.Я., Логинова Н.В. Семейство Togaviridae // Общая и частная вирусология,- М.: Медицина, 1982,- Т 2- С. 49-94.

22. Генетический анализ штаммов вируса клещевого энцефалита Западной Сибири / Бахвалова В.Н., Pap В.А., Ткачев С.Е. и др. // Вопр. вирусологии,- 2000,- № 5,- С. 11-13.

23. Генетическое типирование штаммов вируса клещевого энцефалита на основе анализа уровней гомологии фрагмента гена белка оболочки / Злобин В.И., Демина Т.В., Беликов С.И. и др. // Вопр. вирусологии,- 2001,-№ 1.-С. 17-22.

24. Географическое распространение генетических вариантов вируса клещевого энцефалита / Злобин В.И., Шаманин В.А., Дрокин Д.А. и др. // Вопр. вирусологии,- 1992,- № 5-6,- С. 252-256.

25. Двухволновое течение клещевого энцефалита / Мышкина O.K., Эйх-нер Э.Э., Воробьева В.В. и др. // Материалы науч.-практич. конф., посвящ. 70-летию санитарно-эпидемиол. службы,- Пермь, 1992,- С. 137-138.

26. Деконенко Е.П., Уманский К.Г. Острые вирусные энцефалиты // Клинич. медицина.- 1994.- № 5,- С. 67-71.

27. Евстафьев И.Л. Итоги 20-летнего изучения клещевого энцефалита в Крыму // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 2001,-№2,-С. 111-114.

28. Зависимость содержания общих сывороточных иммуноглобулинов от вида специфической терапии у больных клещевым энцефалитом / Портня-гина Л.К., Лепехин А.В., Ратнер Г.М. и др. // Вирусные и бактерийные препараты,- Томск, 1989,- С. 134-138.

29. Зайцева Г.А. Иммуногенетические маркеры крови и состояние про-тивоинфекционного иммунитета: Дис. . докт. мед. наук,- Киров, 1990,327 с.

30. Захарычева Т.А. Клиническая характеристика эффективности специфической терапии при клещевом энцефалите в Хабаровском крае: Авто-реф. дис. . канд. мед. наук,- Пермь, 1993,- 18 с.

31. Идентификация отдельных антигенных эпитопов белка оболочки вируса клещевого энцефалита с применением моноклональных антител / Караванов А.С., Матвеев Л.Э., Рубин Г.Г. и др. // Вопр. вирусологии 1990,-№2,- С. 140-143.

32. Изучение отдаленных последствий иммунизации людей живой вакциной против клещевого энцефалита / Шаповал А.Н., Камалов И.И., Денисова Е.Ю. и др. // Клещевой энцефалит,- Л., 1989,- С. 133-135.

33. Изучение электрофоретической подвижности вирусспецифических белков штаммов вируса клещевого энцефалита, выделенных в различных географических регионах СНГ / Васильев В.В., Злобин В.И., Дживанян Т.Н. и др. //Вопр. вирусологии,- 1993,-№ 1,- С. 11-16.

34. Иммуноглобулин сыворотки человеческой крови для профилактики и терапии клещевого энцефалита / Верета JI.A., Николаева С.П., Михеева Е.И. и др. // Иммуноглобулины и другие препараты крови,- JI.,1976.- С. 37-42.

35. Инструкция по медицинскому освидетельствованию доноров крови, плазмы и клеток крови, утв. МЗ РФ 16.11.1998 г.

36. Инструкция по переливанию крови и ее компонентов (утв. МЗ СССР 3.12.1988 г.).- М., 1990,- 53 с.

37. Инструкция по применению вакцины клещевого энцефалита культу-ральной, очищенной, концентрированной, инактивированной, сухой (вакцины клещевого энцефалита концентрированной), утв. 15.08.1988 г.

38. Инструкция по применению иммуноглобулина человека против клещевого энцефалита, утв. МЗ СССР 20.05.1987г.

39. Инструкция по применению иммуноглобулина человека против клещевого энцефалита, утв. Гл. гос. сан. врачом РФ 8.09.1999г.

40. Инструкция по проведению донорского плазмафереза утв. МЗ РФ 29.05.1995г.

41. Ионова А.И. Влияние аппаратного плазмацитафереза на состояние иммунной системы и некоторые другие показатели гомеостаза доноров: Автореф. дис. . канд. биол. наук,- Л., 1991,- 19 с.

42. Исаева Н.В. Статус активных доноров крови и ее компонентов по иммунологическим критериям: Автореф. дис. . канд. биол. наук,- М., 2000,24 с.

43. Исследование спектра иммунных антител у доноров крови и плазмы / Зайцева Г.А., Козьминых Л.Ф., Мороз А.Ф. и др. // Гематол. и трансфузиол,-1987,-№3,-С. 58-60.

44. К вопросу о роли антител в генезе длительной персистенции вируса при клещевом энцефалите / Пиценко Н.Д., Илюшенко Л.П., Кветкова Э.А. и др. // Природноочаговые болезни человека,- Омск, 1989 С.56-61.

45. Кайрукова О.И., Леонова Г.Н., Дименко В.М., Кругляк С П. Особенности клещевого энцефалита в период эпидемического подъема заболеваемости в 1990-1992 гг в Приморском крае // Инфекционная патология в Приморском крае,- Владивосток, 1994,- С. 41-42.

46. Камалов И.И., Соколова Е.Д., Ильенко В.И., Рожкова Л.В. Живая вакцина против клещевого энцефалита: принципы отбора вакцинных штаммов // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 1993.-№ 3,- С. 70-76.

47. Карпова М.Р., Федоров Ю.В., Киселева Н.Н., Воробьева М.С. Анализ стабильности биологических свойств вируса клещевого энцефалита // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 1996,- № 5,-С. 88-89.

48. Киселева Е.В., Лившиц М.Л. Многолетняя динамика клинико-эпидемиологических проявлений клещевого энцефалита в Кемеровской области // Природноочаговые болезни человека,- Омск, 1989.- С. 65-69.

49. Киселева И.А., Анастасиев В.В., Немов В.В. Структура и свойства препарата иммуноглобулина для внутривенного введения // Препараты крови.-Горький, 1981,-С. 17-23.

50. Киселева И.А., Анастасиев В.В. Получение и характеристика иммуноглобулина для внутривенного введения // Лечебные препараты белков плазмы крови,-М., 1981,-С. 115-121.

51. Киселева И.А., Тимофеева Г.В. Метод определения антикомплементарной активности в препаратах иммуноглобулина // Гематол. и трансфузиол,-1986,-№4,-С. 40-46.

52. Клиника, диагностика и лечение клещевого энцефалита / Методические указания,- М., 1990,- С. 20-21.

53. Количественная характеристика Т- и В-популяций лимфоцитов у больных клещевым энцефалитом / Кветкова Э.А., Семенов Б.Ф., Переходова С.К. и др. // Вопросы иммунитета и диагностики природно-очаговых болез-ней,-Л., 1978,-С. 36-43.

54. Коренберг Э.И., Иванова Л.М., Юркова Е В. Пределы изменений интенсивности эпидемического проявления природных очагов клещевого энцефалита // Мед. паразитол.,- 1986,- № 2,- С. 35-39.

55. Кострова О.М., Алешкин В.А. Иммуноглобулиновая терапия вирусных инфекций // Российский медицинский журнал,- 1995,- № 1.- С. 52-54.

56. Котыхов И.В., Мальчикова И.П., Киселева Н.Н., Федоров Ю.В. Однородность популяции производственного штамма 205 вируса клещевого энцефалита // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 1991 .-№ 6,- С. 48-50.

57. Кузнецова Р.И. Эпидемиологическая характеристика клещевого энцефалита в Ленинградской области // Клещевой энцефалит,- Л., 1989.-С. 12-20.

58. Кульберг А.Я. Иммуноглобулины как биологические регуляторы.-М.: Медицина, 1975,- 200 с.

59. Лаврова Н.А., Наволокин О.В., Заводчикова Е.Н. Выявление антител у больных клещевым энцефалитом // Современные проблемы эпидемиологии, диагностики и профилактики клещевого энцефалита,- Иркутск, 1990.-С.99-100.

60. Лазыкина А.В. Технологические приемы получения концентратов аллоантител к эндотоксину Pseudomonas aeruginosa: Автореф. дис. . канд. биол. наук,- М., 1999.- 26 с.

61. Ларина Г.И., Карпович Л.Г., Левкович Е.Н. Сравнительное изучение активности В-лимфоцитов в селезенке мышей, инфицированных вирусами комплекса клещевого энцефалита // Вопр. вирусологии,- 1978,- № 2,-С. 207-211.

62. Лашкевич В.А., Иванова Л.М. Современная эпидемиология клещевого энцефалита и перспективы борьбы с этой инфекцией // Современные проблемы эпидемиологии, диагностики и профилактики клещевого энцефалита,- Иркутск, 1990,- С. 73-74.

63. Леонова Г.Н. Антигенная, биологическая и молекулярно-генетическая характеристики популяции вируса клещевого энцефалита на Дальнем Востоке // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 1997,-№5,-С. 94-97.

64. Леонова Г.Н., Исачкова Л.М., Борисевич В.Г., Фисенко А.Ю. Экспериментальный клещевой энцефалит у золотистых хомячков на фоне специфической иммунотерапии // Вопр. вирусологии,- 2000,- № 4,- С. 28-33.

65. Леонова Г.Н. Исторические этапы изучения клещевого энцефалита на Дальнем Востоке // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 1997,-№ 5,- С. 91-93.

66. Леонова Г.Н., Сомов Г.П. Клещевой энцефалит в Приморском крае // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 1989,- № 7,-С.43-48,

67. Леонова Г.Н., Кожемяко В.Б., Исаева М.П., Майстровская О.С. Молекулярная характеристика популяции вируса клещевого энцефалита Южно-Сихотэ-Алиньского очагового региона // Вопр. вирусологии,- 1996,- № 4,-С. 154-158.

68. Леонова Г.Н., Майстровская О.С., Борисевич В.Б. Антигенемия у людей, инфицированных вирусом клещевого энцефалита // Вопр. вирусологии,- 1996,-№6,-С. 260-263.

69. Максимова Т.Г., Бахвалова В.Н., Морозова О.В. Выделение комплекса белков вируса клещевого энцефалита методом афинной хроматографии с использованием моноклональных антител к белкам NS5 и NS3 // Вопр. вирусологии,- 1998,- № 1,- С. 36-39.

70. Матвеева В.А., Бугрышева Ю.В., Бахвалова В.Н., Морозова О.В. Секреция гетерокомплекса гликопротеинов Е и NS1 вируса клещевого энцефалита на поздней стадии инфекции // Вопр. вирусологии,- 1997,- № 4,-С. 179-182.

71. Наркевич М.И., Онищенко Г.Г., Федоров Ю.М. О состоянии инфекционной заболеваемости в СССР в 1988 г. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 1990,- № 11,- С. 33-37.

72. Наумов Р.Л., Гутова В.П., Фонарева К.С. Степень совпадения долгосрочного экстраполяционного экспертного прогноза с реальной заболеваемостью клещевым энцефалитом в СССР // Мед. паразитол,- 1990,- № 5,-С. 40-43.

73. Нетесов С.В., Локтев В.Б., Протопопова Е.В. Поиск и изучение структуры гена клеточного рецептора для вируса клещевого энцефалита // Тез. докл. 2 Всесоюз. конф. по направлению "Генная и клеточная инженерия",-М., 1992,-С. 40.

74. Николаевская Т.Н., Васильева В.И. Тяжелые формы клещевого энцефалита и их лечение // Актуальные проблемы природноочаговых инфекций.-Горький, 1988,- С.22-28.

75. Новая перспективная вакцина против клещевого энцефалита / Чумаков М.П., Рубин С.Г., Семашко И.В. и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 1991,- № 1,- С. 36-40.

76. Оленев О.Г. Динамика некоторых показателей иммунитета у больных клещевым энцефалитом и возможности их коррекции // Природноочаго-вые болезни человека.- Омск, 1988,- С.26-32.

77. Онищенко Г Г., Монисов А.А., Гульченко Л.П., Федоров Ю.М. Заболеваемость зооантропонозными и природноочаговыми инфекциями и меры по их профилактике // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 1999,- №4,- С. 14-18.

78. Онищенко Г.Г. Об эпидемиологической ситуации и заболеваемости природноочаговыми инфекциями в Российской Федерации и мерах по их профилактике // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.-2001,-№3,- С. 22-28.

79. Опыт комплексного фракционирования плазмы донорской крови для получения лечебных препаратов / Ажигирова М.А., Мигунов В.Н., Вязова Е.П. и др. // Новое в трансфузиол.: Информац. бюл. 1997,- № 19,-С. 46-51.

80. Опыт применения иммуноглобулина против клещевого энцефалита / Верета Л.А., Захарычева Т.А., Александров В.И. и др. // Инфекционная патология в Приморском крае: Тез. докл. науч.-практ. конф,- Владивосток: Даль-наука, 1994,-С. 118-119.

81. Организация сбора сырья при изготовлении иммуноглобулина для профилактики и терапии клещевого энцефалита: Метод, реком. / Хабаровский НИИ эпидемиологии и микробиологии; Сост. Л.А.Верета, А.С.Песков, С.В.Пичугин и др.- Хабаровск, 1987,- 16 с.

82. Осипова Е.Г., Киселева Н.Н., Хасаншин P.P., Соколова Е.Д. Изучение содержания белковых примесей в вакцине клещевого энцефалита и очистка ее методом микрофильтрации // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 1992,- № 7-8,- С. 39-42.

83. Патоморфология лимфатических узлов у человека при остром клещевом энцефалите / Рычков А.А., Зиновьев А.А., Кветкова Э.А. и др. // Природноочаговые болезни человека,- Омск, 1989,- С. 79-83.

84. Первиков Ю.В., Эльберт Л.Б. Иммунные комплексы при вирусных инфекциях,- М.: Медицина, 1984,- 160 с.

85. Платэ Н.А., Николайчик В.В., Чупов В.В. Новый подход к фракционированию белков плазмы и получению высокоочищенных препаратов крови // Гематол. и трансфузиол,- 1993,- № 6,- С. 10-13.

86. Погодина В.В., Фролова М.П., Ерман Б.А. Хронический клещевой энцефалит,- Новосибирск: Наука, 1986,- 216 с.

87. Полторацкая Т.Н., Альбицкая Н.Б., Синельников Г.Е. Иммунизация доноров вакциной клещевого энцефалита с целью получения специфического иммуноглобулина // Природноочаговые болезни человека,- Омск, 1989,-С. 62-64.

88. Получение иммуноглобулина для профилактики клещевого энцефалита в условиях области / Большакова С.Л., Лаунер Л.Б., Федотова Р.Л. и др. // Клещевой энцефалит,- Л., 1989,- С. 175-180.

89. Получение одноцепочечных антител к поверхностному гликопро-теину Е вируса клещевого энцефалита / Тикунова Н.В., Николенко Г.Н., Протопопова Е.В. и др. //Вопр. вирусологии,- 1999,-№ 1.-С. 12-15.

90. Приказ МЗ СССР № 141 от 9 апреля 1990г. "О дальнейшем совершенствовании мероприятий по профилактике клещевого энцефалита".

91. Приказ МЗ РСФСР № 217 от 17.12.90г. "Об увеличении производства и упорядочении применения иммуноглобулина против клещевого энцефалита".

92. Природно-очаговые клещевые нейроинфекции Западной Сибири / Дроздов В.Н., Коваленко В.Н., Веселов Ю.В. и др.- Кемерово: изд-во ГМИ, 1988,- 128 с.

93. Промышленный регламент на производство иммуноглобулина человека против клещевого энцефалита, утв. 25.10.1996 г. Протокол заседания Комиссии по стандартизации № 22 от 23.12.1996 г.

94. Промышленный регламент на производство препарата раствор альбумина 10 %, утв. 20.06.1997 г. Протокол заседания Комиссии по стандартизации № 29.

95. Протопопова Е.В., Коновалова С.Н., Локтев В.Б. Выделение клеточного рецептора для вируса клещевого энцефалита при помощи антиидио-типических антител // Вопр. вирусологии,- 1997,- № 6,- С. 264-268.

96. Разработка специфических препаратов иммуноглобулинов для профилактики и лечения сепсиса / Мигунов В.Н., Ажигирова Н.А., Вязова Е.П. и др. // Новое в трансфузиологии: Информ. бюл.- 1995,- Вып. 17,- С. 37-42.

97. Расщепкина М.Н. Профилактика и диагностика клещевого энцефалита // Актуальные проблемы создания и применения иммунобиологическихпрепаратов для диагностики и профилактики инфекционных болезней. -Пермь, 1993,- С. 106-126.

98. Регламент производства иммуноглобулина нормального человека для внутривенного введения, утв. 23.12.1994 г.

99. Рысинская Т.К. Сравнительная оценка эффективности некоторых методов лечения клещевого энцефалита: Автореф. дис. . канд. мед. наук -Л., 1989.-21 с.

100. Рябов В.И., Мотырева А.И., Оленев О.Г. Состояние иммунной реактивности и естественной резистентности у больных клещевым энцефалитом // Природноочаговые болезни человека,- Омск, 1988,- С.43-47.

101. Сапожникова B.C., Медведева Н.А. Оптимизация процесса получения антистафилококкового иммуноглобулина // Изобретательство и рационализация в медицине,- М., 1990,- С. 19-21.

102. Сапожникова B.C. Разработка и изучение свойств антистафилококкового и противостолбнячного иммуноглобулинов для внутривенного введения: Дис. . канд. биол. наук,- Киров, 1990,- 195 с.

103. Смирнова А.И. Социальные, эпидемиологические и организационно-методические основы получения иммунных антибактериальных препаратов из донорской крови: Автореф. Дис. . докт. мед. наук,- Л., 1990,- 47с.

104. Смородинцев А.А., Дубов А.В. Клещевой энцефалит и его вакци-нопрофилактика,- Л.: Медицина, 1986,- 232 с.

105. Совет Европы. Руководство по приготовлению, использованию и обеспечению качества компонентов крови,- М., 1996,- 171 с.

106. Современные особенности эпидемиологии клещевого энцефалита в Иркутской области / Горин 0.3., Малых Т.К., Ковшаров А.Ф. и др. // Современные проблемы эпидемиологии, диагностики и профилактики клещевого энцефалита.- Иркутск, 1990,- С. 63-64.

107. Соловьев А.Ф. Опыт производства иммуноглобулина против клещевого энцефалита на Свердловской ОСПК // Новое в трансфузиологии,1996,- вып. 14.- С.77-81.

108. Сравнение иммунного ответа, индуцированного ДНК или инакти-вированной вакциной против клещевого энцефалита / Морозова О.В., Попова Р.В., Максимова Т.Г. и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.- 2000,- № 2,- С. 54-57.

109. Сравнительные региональные особенности сезонной динамики заболеваемости клещевым энцефалитом / Ястребов В.К., Хазова Т.Г., Пахотина В.А. и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 1997 -№ 3,- С. 107-109.

110. Стронин О.В., Черный Н.Б., Подоплекина JI.E. Индикация антигена вируса клещевого энцефалита в крови инфицированных людей методами РИГА и ИФА // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.1997.-№3,-С. 115-116.

111. Сысолятин В.А., Селютина И.А., Караванов А.С. Особенности иммунного ответа у больных клещевым энцефалитом // Современные проблемы эпидемиологии, диагностики и профилактики клещевого энцефалита.-Иркутск, 1990,- С.125-126.

112. Тараева Г.А. Стабильность антител к различным антигенам в коммерческом иммуноглобулине в процессе хранения // Препараты крови.-Горький, 1981,-С. 40-43.

113. Терапевтическая эффективность гомологического и гетерологиче-ского гамма-глобулина при клещевом энцефалите / Грибачева Е.В., Глухов Б.М., Иерусалимский А.П. и др. // Вопросы инфекционной патологии.-Омск, 1971,-С. 55-59.

114. Тихомолова Е.Г., Зыкова И.В., Аббасова С.В. Клещевые нейроин-фекции в Кировской области // Вопросы трансфузионной и клинической медицины: Материалы 6-й науч. конф. молодых ученых КНИИГПК 29-30 марта 1999 г.-Киров, 1999,-С. 91.

115. Уманский К.Г., Деконенко Е.П. О нозологических вариантах клещевого энцефалита // Журн. невропатологии и психиатрии,- 1980,- вып. 2-С, 184-188.

116. Уманский К.Г., Деконенко Е.П. Полиморфизм и патогенетическое единство клинических форм клещевого энцефалита // Современные проблемы эпидемиологии, диагностики и профилактики клещевого энцефалита.-Иркутск, 1990,- С. 126-127.

117. Устинова О.Ю., Волегова Г.М., Девятков М.И., Гусманова А.И. Клинико-эпидемиологические особенности клещевого энцефалита в Пермской области // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 1997.-№ 3,- С. 33-36.

118. Устинова О.Ю., Соловьева М.Н. Динамика интерферонового статуса и результаты терапии реафероном больных клещевым энцефалитом // Материалы науч.-практ. конф., посвящ. 70-летию сан.-эпид. службы,- Пермь, 1992,- С.138-140.

119. Устинова О.Ю., Соловьева М.Н. Изменения интерферонового статуса при разных формах клещевого энцефалита // Иммунопрофилактика, иммунодиагностика, иммунокоррекция,- Омск, 1994,- С. 86-88.

120. Черницина JI.O., Иерусалимский А.П., Кветкова Э.А. Актуальные аспекты проблемы специфической терапии клещевого энцефалита // Природ-ноочаговые болезни человека,- Омск, 1989,- С. 70-78.

121. Черницина JI.O., Коненков В.И. Клинико-иммуногенетическая разнородность различных форм и вариантов течения клещевого энцефалита // Тез. докл. I съезда иммунологов России,- Новосибирск, 1992,- С. 531-532.

122. Шабалин В.Н. Современные проблемы клинической трансфузиоло-гии // Профилактика и лечение посттрансфузионных осложнений,- JI., 1980.-С. 5-14.

123. Шаповал А.Н. Клещевой энцефалит болезнь нашего века // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 1993,- № 1,- С.92-97.

124. Шаповал А.Н. Клещевой энцефаломиелит. М.: Медицина, 1980.256 с.

125. Шаповал А.Н. Хронические формы клещевого энцефалита.-Л.: Медицина, 1976,- 176 с.

126. Шарыгин С.Л. Иммуноглобулины направленного действия для внутривенного введения // Медицинские технологии,- 1995,- № 5,- С. 36-38.

127. Шарыгин С.Л. Препараты внутривенных иммуноглобулинов из донорской плазмы для терапии бактериальных и вирусных инфекций (получение и клиническое применение): Автореф. Дис. . доктора мед. наук,-С,-Петербург, 1997,-42 с.

128. Эльберт Л.Б., Ворович М.Ф., Тимофеев А.В. Сравнительный анализ тестов in vitro и in vivo количественной оценки иммуногенности вакцины клещевого энцефалита // Вопр. вирусологии,- 1998,- № 5,- С. 236-238.

129. Эпидемиологическое районирование Красноярского края по клещевому энцефалиту / Хазова Т.Г., Евтушок Г.А., Дулькейт О.Ф. и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 1995,- № 6,- С. 27-28.

130. Эпидемиологическая характеристика клещевого энцефалита в г. Екатеринбурге / Филипповец Р.В., Ковалева В.И., Рыжая М.М. и др. // Эпидемиология, клиника и профилактика вирусных инфекций,- Екатеринбург, 1992,-С. 144-146.

131. Эффективность серопрофилактики клещевого энцефалита в зависимости от титра антигемагглютининов гомологичного гамма-глобулина / Хлебутина Л.А., Минаева В.М., Лузин П.М. и др. // Журн. микробиол,- 1987,-№ 7,- С. 32-34.

132. A randomized phase II study of a new tick-borne encephalitis vaccine using three different doses and two immunization regimens / Harabacz I., Bock H., Jungst C. et al. // Vaccine.- 1992,- Vol. 10., № 3,- P. 145-150.

133. Aberham С., Radda A., Holzmaim H., Krech T. Detection of tick-borne encephalitis (TBE) virus in Liechtenstein // Int. J. Med. Microbiol. Virol. Parasitol. Infect. Dis.- 1992,- Vol.277, № 4,- P. 554-560.

134. Antigenic Structure and Function of the Flavivirus Envelope Protein E / Heinz F.X., Mandl C, Holzmann H. et al. // New Aspects of Positive-Strand RNA Viruses.- Am. Soc. Microbiol., Washington.- 1990,- P. 294-300.

135. Antigenic structure of flavivirus envelope protein E at the molecular level usting tick-borne encephalitis as a model / Mandl C., Guirakhoo F., Holzmann H. et al. // J. gen. Virol.- 1989,- Vol. 63,- P. 564-571.

136. Aronson D., Finlayson E. Historical and future therapeutic plasma derivatives (epiloque) // Seminars in Trombosis and Hemostasis.- 1980,- Vol. 1,-P. 121-139.

137. Baumberger P., Krech Т., Frauchiger B. Development of early-summer meningoencephalitis (FSME) in the Thurgau region 1990-1995~a new endemic area ? // Schweiz. Med. Wochenschr.- 1996,- Vol. 126, № 48,- P. 2072-2077.

138. Barandun S., Isliker H. Development of immunoglobulin preparations for intravenous use // Vox. Sang.- 1986.- Vol. 51,- P. 157-160.

139. Berlit P. Immunoglobulin therapy in neurologic diseases. // Klin. Wochenschr.- 1989,- Vol. 67, № 19,- P. 967-970.

140. Bobrowska E., Grzeszczuk A., Prokopowicz D. Vaccination against tick-borne encephalitis-distant evaluation // Rocz. Akad. Med. Bialymst.- 1996,- Vol. 41., № l.-P. 44-50.

141. Burnouf T. Integration of chromatography with traditional plasma protein fractionation methods // Bioseparation.- 1991.- № 1.- P. 383-396.

142. Burnouf T. Le fractionnement plasmatique. Progres, problemes et perspectives // Ann. Pharm. Fr.- 1994,- Vol. 52., № 3. P. 124-136.

143. Burnouf Т., Martinache L., Goudemand M. Large-scale fractionation of immunoglobulin G by combined ethanol and chromatographic purification methods // Abstr. 19th Congr. ISBT. Sidney, 1986,- P. 426-429.

144. Burnouf Т. New trends in plasma fractionation and plasma products trends in plasma fractionation // Vox Sang.- 1994,- Vol. 67, Suppl. 3,- P. 251-253.

145. Characterization and complete genome sequences of high- and low-virulence variants of tick-borne encephalitis virus / Wallner G., Mandl C.W., Ecker M. et al. // J. Gen. Virol.- 1996,- Vol. 77., № 5,- P. 1035-1042.

146. Characterization of various immunoglobulin preparations for intravenous aplication. II. Complement activation and binding to staphylococcus protein A / Romer J., Spath P.J., Skvanl F. et al. // Vox Sang.- 1982,- Vol. 42, № 2,- P. 74-80.

147. Chromatographic method for the production of a human immunoglobulin G solution for intravenous use / Tanaka K., Sawatani E.M., Shigueoka E. et al. // Brasilian J. Med. Biol. Res.- 1998,-№ 31,-P. 1375-1381.

148. Clements J., Narayan O. Immune selection of virus variants // Cone. Viral Pathog.-New York, 1984 P. 152-157.

149. Clinical applications of immunoglobulin (gamma globulin). A review of current findings (ed. by P.Lattman) / Barandun S., Imbach P., Kindt H. et. al. // Sandor Products (Switzerland) Ltd, 1982.

150. Cohn E., Strong L., Hughes W. Preparations and properties of serum and plasma proteins // J. Amer. Chem. Soc.- 1946,- Vol. 68,- P. 459.

151. Correlation between ELISA, hemagglutination inhibition, and neutralization tests after vaccination against tick-borne encephalitis / Holzinann H., Kundi M., Stiasny K. et al. // J. Med. Virol.- 1996,- Vol. 48., № 1,- p. 102-107.

152. Deresiewicz R.L., Thaler S.J., Hsu L., Zamani A.A. Clinical and neuro-radiographic manifestations of eastern equine encephalitis // N. Engl. J. Med.- 1997,-№ 336,-P. 1867-1874.

153. Eibl M. Intravenous immunoglobulins: clinical and experimental studies // Immunoglobulins: characteristics and used of intravenous preparations.-US Dept. of Health Service, 1979,- P. 213-223.

154. Elimination of viruses (Human immunodeficiency, Hepatitis B, Vesicular stomatitis and Sindbis Viruses) from an intravenous immunoglobulin preparation / Hamamoto J., Harada S., Yamamoto N. et al. // Vox Sang.- 1987,- Vol. 53, № 2,-P. 65-69.

155. Epitope analysis of tick-borne encephalitis (TBE) complex viruses using monoclonal antibodies to envelope glycoprotein of TBE virus (persulkatus subtype) / Tsehanovskaya N., Matveev L., Rubin S. et al. // Virus Res.- 1993.-Vol. 30,- P. 290-295.

156. Erman B.A., Tulakina L.G., Konev V.P., Poleshchuk T.I. Ultrastructural pathology of the lymph nodes in tick-borne encephalitis // Arkh. Patol.- 1996,- Vol. 58., №2,-P. 37-41.

157. Evaluation of the presence of RF-like activites in immunoglobulin preparations for intravenous use / D Amelio R., Nisini R., Matricardi P.M. et al. // J. elm. lab. Immunol. 1987,- Vol. 24., № 3,- P. 139-142.

158. Familial epidemics of tick-borne encephalitis in central Povazie / Zaludko J., Vrbova O., Hachlmcova R. et al. // Bratisl. Lek Listy.- 1994,- Vol. 95, № 11,-P. 523-526.

159. Fernandes P. M., Landblad G. L. Preparations of stable intravenous gamma-globulin: process desing and scale-up // Vox Sang.- 1980,- Vol. 39, № 2-P. 101-112.

160. Friesen A.D., Bowman I.M., Bels W.C.H. Column ion exchange chromatographic production of human immune serum globulin for intravenous use //Vox Sang.- 1985,-Vol. 48., №4,-P. 201-212.

161. Friesen A.D. Column ion exchange chromatographic production of albumin, IV IgG and factor IX from 75 000 to 100 000 liters of plasma per year // Plasma fractionation and transfuson.- London, 1985,- P. 97-103.

162. Frommhagen S., Fundenberg H. The role of aggregated g-globuline activity of human and animal sera // Immunology.- 1962,- Vol. 89, № 3,-P. 336-343.

163. Furth R., Leijh P., Klin F. Correlation letween opsonic activity for various microorganisms and composition of gammaglobulin preparations for intravenous use // J. of Infections Diseases.- 1984,- Vol. 140,- P. 511-517.

164. Granstrom M., Grandien ML, Saikku P. Early diagnosis of tick-borne encephalitis (TBE) by demonstration of specific IgM antibodies // Scand. J. Infect. Dis.- 1978,- Vol. 10., № 2,- P. 97-100.

165. Guencheva G. Requirements and characteristics of various immunoglobulin preparations for intravenous application // Z. ges. Hyg.- 1984,-№30, Heft l.-S. 21-23.

166. Guirakhoo F., Radda A.C., Heinz F.X., Kunz C. Evidence for antigenic stability of tick-borne encephalitis virus by the analysis of natural isolates // J. Gen. Virol.- 1987,- Vol. 68., № 3.- P. 859-864.

167. Gustafson R. Epidemiological studies of Lyme borreliosis and tick-borne encephalitis // Scand. J. Infect. Dis.- 1994 Suppl. 92,- P. 1-63.

168. Haglund M., ForsgrenM., Lindh G., Lindquist L. A 10-year follow-up study of tick-borne encephalitis in the Stockholm area and a review of the literature:need for a vaccination strategy // Scand. J. Infect. Dis.- 1996,- Vol. 28, № 3 -P. 217-224.

169. Heinz F.X., Mandl C. The molecular biology of tick-borne encephalitis virus//APMIS.- 1993,- Vol. 101.- P. 735-745.

170. Hilfenhaus J., Geiger H. Immunglobuline: AIDS-Virus-frei // Die gelben Hefte.- 1988,-№2,-P. 49-58.

171. Hofmarm H., Frisch-Niggemeyer W., Kunz C. Protection of mice against tick-borne encephalitis by different classes of immunoglobulins // Infection.- 1978,- Vol. 6., № 4,- P. 154-157.

172. Horowitz B. Inactivation of viruses found with plasma proteins // Yale J. Biol. Med.- 1990,- Vol. 63, № 3,- P. 361-369.

173. Humoral immunity against tick-borne encephalitis virus following manifest disease and active immunization / Klockmann U., Bock H.L., Kwasny H. et al. // Vaccine.-1991,- Vol. 9., № 1,- P. 42-46.

174. Kaiser R. Tick-borne encephalitis in southwestern Germany // Infection.- 1996,- Vol. 24, № 5,- P. 398-399.

175. Klockmann U., Krivanec K., Stephenson J.R., Hilfenhaus J. Protection against European isolates of tick-borne encephalitis virus after vaccination with a new tick-borne encephalitis vaccine // Vaccine.- 1991.- Vol. 9., № 3,- P. 210-212.

176. Коек Т., Stunzner D., Freidl W., Pierer K. Clinical aspects of early summer meningoencephalitis in Styria // Nervenarzt.- 1992,- Vol 63, № 4,-P. 205-208.

177. Kozuch O., Gurycova D., Lysy J., Labuda M. Mixed natural focus of tick-borne encephalitis, tularemia and haemorrhagic fever with renal syndrome in west Slovakia // Acta Virol.- 1995,- Vol. 39, № 2,- P. 95-98.

178. Krech Т., Aberham C., Risch G., Kunz C. Endangering of the Liechtenstein population by the early-summer meningoencephalitis virus // Schweiz. Med. Wochenschr.- 1992,- Vol. 122, № 34. p. 1242-1244.

179. Kreil Т., Eibl M. Pre- and postexposure protection by passive immunoglobulin but no enhancement of infection with a flavivirus in a mouse model // J. Virol.- 1997,- Vol. 71., № 4.- P. 2921-2927.

180. Kvetkova E.A., Shmatko V.G. Cerebrospinal fluid immunoglobulins in patients with acute tick-borne encephalitis // Zh. Nevropatol. Psikhiatr.- 1982.-Vol. 82., № 2,- P. 220-224.

181. Lahmann N. Prophylaxe und Therapie mit humanen Immunoglobulinen // Folia Heamatol.- 1986,- Vol. 113., № 5,- P. 587-595.

182. Masuho G., Tomibe K., Matsuzava K., Ohtzu A. Development of an intravenous gamma-globulin with Fc activities. I. Preparation and characterization of s-sulfonated human gamma-globulin // Vox Sang.- 1977,- Vol. 32, № 3,-P. 175-181.

183. Mandel B. Mechanisms of vims neutralization // Cone. Viral Pathog.-New York, 1984,-P. 32-38.

184. McNair A.N., Brown J.L. Tick-borne encephalitis complicated by monoplegia and sensorineural deafness // J. Infect.-1991,- Vol. 22, № 1,- P. 81-86.

185. Minar J. Natural foci of tick-borne encephalitis in central Europe and the relationship of the incidence of Ixodes ncmus to original ecosystems // Cent. Eur J. Public Health.- 1995,- Vol. 3., № 1. p. 33-37.

186. Morell A. Various immunoglobulin preparations for intravenous use // Vox Sang.- 1986,- Vol. 51., Suppl. 2,- P. 44-49.

187. Niedrig M., Klockmann U., Lang W., Roeder J., Burk S., Modrow S.,.Pauli G. Monoclonal antibodies directed against tick-borne encephalitis virus with neutralizing activity in vivo. // Acta Virol.- 1994,- Vol.38, № 3,-P. 141-149.

188. Nucleotide sequence of the protein E gene of the tick-borne encephalitis virus strain 595 isolated in Slovakia / Kaluzova M., Kaluz S., Kozuch O. et al. //Acta Virol.- 1995,-Vol. 39., №3,-P. 165-169.

189. Nydegger U.E. Evaluating the Quality of Immunoglobulin G Preparations for Intravenous Therapy //Vox Sang.- 1985,- Vol. 49, Suppl. 1,- P. 1-7.

190. Nydegger U.E. Intravenous immunoglobulin in combination with other prophylactic and therapeutic measures // Transfusion.- 1992,- Vol. 32,- № 1,-P. 72-82.

191. Otoneurological aspects of tick-borne encephalitis / Snarska-Furla I., Rzewnicki I., Pancewicz S.A. et al. // Otolaryngol. Pol.- 1995,- Vol. 49, № 3,-P. 231-237.

192. Pancewicz S.A., Hermanowska-Szpakowicz Т., Biedzinska T. Epidemiological analysis of cases of TBE in 1993 in Bialystok district // Przegl. Epidemiol.- 1994,- Vol. 48, № 4,- P. 467-473.

193. Poison A., Ruis-Bravo C. Fractionation of plasma with polyethilenglicol //Vox Sang.- 1972,-Vol. 23, №2,-P. 107-118.

194. Reinhardt F. The prevention of tick-borne encephalitis // Wien Klin. Wochenschr.- 1976,- Vol. 88., № 8,- P. 253-257.

195. Rutter G.H. Requirements for safety and quality of intravenous immunoglobulin G preparations. // J.Neurol.Neurosurg.Psychiatry.- 1994,- № 51 -P. 2-5.

196. Schroeder D.D., Tankersley D.L., Lundbad. A new preparation of modified immun serum globulin (human) suitable for intravenous and alkylation reaction // Vox Sang.- 1981,- Vol. 40, № 6,- P. 373-382.

197. Schultse N.E., Schwick G. New possiblities in the intravenous use of gamma globulin // Dtsch. Med. Wschr.- 1962,- Vol. 87, № 34,- P. 1643-1650.

198. Schwarz B. Health economics of early summer meningoencephalitis in Austria. Effects of a vaccination campaign 1981 to 1990 // Wien Med. Wochenschr.-1993,- Vol. 143., № 21.- P. 551-555.

199. Serologic evidence for tick-borne encephalitis (TBE) in North-American military stationed in Germany / Clement J., Leirs H., Armour V. et al. // Acta Leiden.- 1992,- Vol.60, № 2,- P. 15-17.

200. Spielberg H.L. Biological activities of immunoglobulins of different classes and subclasses //Adv. Immunol.- 1974,- № 19,- P. 289.

201. Spread of early-summer meningoencephalitis in the Federal Republic of Germany / Ackermann R., Kruger K., Roggendorf M. et al. // Dtsch. Med. Wochenschr.- 1986,- Vol. Ill, № 24,- P. 927-933.

202. Stephan W. Undegraded human immunoglobulin for intravenous use // Vox Sang.- 1975,- Vol. 26, № 6,- P. 422-437.

203. The envelope glucoprotein from tick-borne encephalitis virus at 2 A resolution / Rey F.A., Hemz F.X., Mandl C. et al. // Nature.- 1995,- Vol. 375,-P. 291-298.

204. Tick-borne encephalitis in the Saarland and the Rhineland-Palatinate / Treib J., Haass A., Mueller-Lantzsch N. et al. // Infection.- 1996,- Vol. 24, № 3,-P. 242-244.

205. Tick-borne encephalitis virus activity in Styria, Austria / Labuda M., Stunzner D., Kozuch O. et al. // Acta Virol.- 1993,- Vol. 37, № 2-3,- P. 187-190.

206. Tomazic J., Ihan A. Flow cytometric analysis of lymphocytes in cerebrospinal fluid in patients with tick-borne encephalitis // Acta Neurol. Scand.-1997,-Vol. 95, № l.-P. 29-33.