Конструирование комбинированных вакцин и иммуноферментных тест-систем для профилактики и диагностики управляемых инфекций: Дифтерия, столбняк, коклюш, гепатит В тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, доктор биологических наук Николаева, Алевтина Максимовна

• Николаева, Алевтина Максимовна
• доктор биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации доктор биологических наук Николаева, Алевтина Максимовна

Список основных сокращений.

Введение.

Глава 1. Комбинированные вакцины: история, принципы конструирования и проблемы оценки эффективности их применения (обзор данных литературы)

Глава 2. Материалы и методы.

Глава 3. Конструирование комбинированных вакцин.

3.1. Экспериментальное обоснование включения вакцины гепатита В в состав комбинированных вакцин.

3.2. Изучение влияния комбинированных вакцин на клеточный и гуморальный ответ у животных.

3.3. Разработка технологии получения комбинированных вакцин.

Глава 4. Конструирование иммуноферментных тест-систем для диагностики управляемых инфекций (дифтерия, столбняк, гепатит В)

4.1. Разработка технологии получения антивидового коныогата F(ab')2-фрагментов антител сыворотки лошади против IgG человека аффипноочищен-ных, меченых пероксидазой хрена.

4.2. Конструирование ИФТС для определения специфических антител с использованием антивидового коныогата.

4.3. Конструирование ИФТС для определения специфических антител на основе авидин-биотинового взаимодействия.

4.4. Разработка методики количественного иммуноферментного определения специфических антител (на модели тест-системы для определения дифтерийных антител).

4.5. Оценка валидности рабочих характеристик разработанных тест-систем с точки зрения количественного анализа.

Глава 5. Применение разработанных тест-систем для контроля эффективности вакцинации против дифтерии, столбняка и гепатита В, а также отбора плазмы доноров для производства специфических иммуноглобулинов.

5.1. Использование ИФТС (непрямой вариант) для определения уровня дифтерийного и столбнячного антитоксинов в человеческих сыворотках.Л

5.2. Использование ИФТС (авидин-биотиновый вариант) для определения анти-HBs.

5.3. Использование ИФТС (авидин-биотиновый вариант) для определения антитоксинов в сыворотках крови людей и животиых.

5.4. Изучение иммуногенности вакцин «Бубо-М» и «Бубо-Кок» в наблюдениях на взрослых и детях.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Конструирование комбинированных вакцин и иммуноферментных тест-систем для профилактики и диагностики управляемых инфекций: Дифтерия, столбняк, коклюш, гепатит В»

антигенов АКДС-вакцина вакцина коклюшно-дифтерийно-столбнячная адсорбированная Анти-HBs Бубо-Кок Бубо-М антитела к поверхностному антигену вируса гепатита В вакцина против дифтерии, столбняка, коклюша и гепатита В вакцина против дифтерии, столбняка и гепатита В адсорбированный с уменьшенным Hib-вакцина вакцина против гемофильной инфекции типа b Вакцина 1/Вакцина2-комбинированная вакцина Вакцина 1+ Вакцина 2 одномоментное введение вакцин ВОЗ ЕС ИПВ ИФА ИФТС ME МЗЕ МИЕ Всемирная организация здравоохранения единицы связывания вакцина полиомиелитная инактивированная 1,2,3 типов иммуноферментный анализ иммунофсрментная тест-система международные единицы международные защитные единицы международные иммунизирующие единицы НА-вакцина вакцина против гепатита А НВ вакцина вакцина против гепатита В НТД ОФД РН РПГА РПИ СГТ МИБП норматив1ю-техническая документация орто-фенилендиамин реакция нейтрализации реакция пассивной гемагглютинации расширенная программа иммунизации средняя геометрическая титра медицинские иммунобиологические препараты ВВЕДЕНИЕ Вакцинопрофилактика является высокоэффективной мерой борьбы с инфекциоьшыми болезнями, воздействующей на важнейший регулятор эпидемического процесса иммунитет населения. Успешная реализация программы ВОЗ по ликвидации оспы в мире резко повысила престиж вакцинации. В 1974 году была принята «Расширенная программа иммунизации» (РПИ), выполняя которую все страны добились впечатляющих успехов в предупреждении основных инфекционных заболеваний [66, 67, 94]. Вместе с тем возможности вакцинопрофилактики далеко не исчерпаны не только в отношении заболеваний, пока еще не входящих в круг управляемых, но и в отношении таких «добрых старых» инфекций, как коклюш, корь, дифтерия, краснуха, паротит. Во всем мире от инфекций, потенциально управляемых методами иммунопрофилактики, ежегодно погибает 12 миллионов детей, число детей, ставших инвалидами, а также расходы на лечение вообще подсчитать невозможно [87,89,90]. Таким образом, в ближайшей перспективе мы не в праве ожидать снижение числа инфекций, подлежащих активной иммунопрофилактике. Более того, предполагается, что календарь прививок 2025 года будет включать вакцинацию против 35-40 заболеваний. Так, уже сейчас в первые 2 года жизни ребенок получает более 15 инъекций [95, 268]. Для решения этой проблемы приказом Минздрава России от 18 декабря 1997 года 375 «О календаре профилактических прививок» предусмотрено одновременное (в один день) проведение вакцинации препаратами, указанными в календаре профилактических прививок. Данное положение приказа привело отечественные международными, правила проведения прививок 10 в лет. соответствие с существующими последние Одномоментная вакцинация, не сопровождающаяся угнетением иммунного ответа к какомулибо из антигенов и потенцированием реактогенности, позволяет не только более успешно реализовать проведение прививок в декретированные сроки, но и снизить загруженность медицинских работников. Вместе с тем при одномоментной вакцинации остается нерешенным ряд вопросов, таких как нереальность парентеральной иммунизации более чем двумя препаратами, избыточная инокуляция сорбента и консерванта в случае их содержания в обоих вакцинных препаратах и, наконец, проблема транспортирования препаратов, применения вакцин. Поэтому приоритетным Особенно актуальными направлением являются современной вакцинологии по созданию является программа разработки поливалентных комбинированных препаратов. исследования комби1шрованных вакцин с включением в них компонента со специфической направленностью против гепатита В. HBV-инфекция, характеризующаяся тяжелыми, потенциально летальными осложнениями, такими как цирроз и первичный рак печени, продолжает оставаться серьезной проблемой современного здравоохранения. У новорожденных гепатит В в 90 случаев принимает хроническое течение, при заражении на первом году жизни в 50 у взрослых в 5-10 [109, 110, 111, 131, 193]. Это указывает на первостепенную важность защиты детей самого раннего возраста [90, 149, 150]. В связи с этим, в соответствии с рекомендациями ВОЗ, отечественным календарем прививок предусмотрена вакцинация против ГВ всех новорожденных и детей первого года жизни. Выполнение этой программы может быть в значительной мере упрощено при объединении НВ-вакцины с другими вакцинами (АКДС, АДС), включенными в РПИ, в комбинированных препаратах. Положительный опыт по применению вакцин такого класса получен за рубежом [268, 269, 192, 225, 226, 271]. и хранения наличия большого всех количества для термолабильных единовременного а также показанных

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Николаева, Алевтина Максимовна

ВЫВОДЫ

1. Экспериментально обоснованы и разработаны оригинальные конструкции комбинированных вакцин для одновременной продуктивной иммунизации против дифтерии, столбняка, коклюша и гепатита В - вакцины Бубо®-М и Бубо®-Кок, защищенные патентами РФ № 2130779, № 2130778.

2. Разработана технология изготовления комбинированных вакцин (Бубо®-М, Бубо®-Кок), обеспечивающая получение препаратов, соответствующих требованиям ВОЗ по иммуногенности, безвредности, стабильности при хранении, и оформлена нормативно-техническая документация (производственные регламенты, ФСП).

3. Безопасность и высокая иммунологическая активность первых отечественных комбинированных вакцин (Бубо®-М и Бубо®-Кок), содержащих гепатитный компонент, определяет их конкурентоспособность. Вакцина Бубо®-М зарегистрирована в установленном порядке (Р № 000071 /01-20000) и разрешена к промышленному выпуску и медицинскому применению. Вакцина Бубо-Кок успешно прошла государственные испытания и рекомендована к регистрации.

4. Разработаны методические подходы и универсально стандартизированные схемы конструирования высокочувствительных ИФТС для определения специфических антител с использованием непрямого и авидин-биотинового варианта ИФА.

5. Впервые предложены иммуноферментные тест-системы (непрямой вариант ИФА), в которых в качестве антивидового конъюгата использованы Р(аЬ)2-фрагменты аффиноочищенных антител сыворотки лошади против Ig G человека, меченные пероксидазой хрена. Показано, что этот вариант ИФТС обеспечивает чувствительность анализа при определении антитоксинов (столбнячного и дифтерийного) на уровне - 0,5 - 1 мМЕ/мл, анти-HBs - 50 -100 мМЕ/мл.

6. Впервые с применением оригинально сконструированных антигенных маркеров (антигены, меченные биотином) на основе авидин-биотинового взаимодействия разработана универсальная конструкция ИФТС для определения специфических антител в сыворотках как людей, так и животных. Показано, что этот вариант ИФТС обеспечивает чувствительность анализа для анти-HBs на уровне 5-10 мМЕ/мл, при сохранении чувствительности непрямого варианта ИФА при определении антитоксинов. Конструкция ИФТС для определения анти-HBs защищена патентом РФ № 2206095.

7. Впервые при обработке результатов ИФА использован метрологический подход, позволивший разработать эффективную методику количественного иммуноферментного определения специфических антител в международных единицах (МЕ/мл). На основании предлагаемого алгоритма обработки результатов ИФА разработана унифицированная компьютерная программа количественного определения антител различной специфичности. Установлена высокая степень воспроизводимости результатов иммуноферментного определения специфических антител с использованием разработанных тест-систем.

8. Разработаны технологии изготовления ИФТС, отвечающих требованиям ВОЗ, для выявления дифтерийных и столбнячных антител (непрямой вариант) и анти-HBs антител (авидин-биотиновый вариант) и оформлена нормативно-техническая документация (производственные регламенты, ФСП, инструкции по применению). Тест-система для выявления дифтерийных и столбнячных антител зарегистрирована в установленном порядке и разрешена к использованию в практике здравоохранения (Р № 94/90/10). ИФТС для выявления анти-HBs антител находится в фазе регистрации.

9. Практическая ценность метода ИФА продемонстрирована эффективным применением 6 сконструированных ИФТС при оценке поствакцинального иммунитета у людей, отбора плазмы доноров с высоким содержанием антител при производстве специфических иммуноглобулинов, оценке иммуногенности вакцин на животных и определении титра антител гипериммунных антитоксических лошадиных сывороток.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Разработка новых комбинированных вакцин имеет важное значение для решения медицинских, социальных и экономических аспектов проблемы вак-цинопрофилактики [50, 57, 58, 97]. Особую значимость при использовании любых вакцин, в том числе и комбинированных, имеет оценка уровня специфического иммунитета в регионе, в коллективе и у отдельных лиц, позволяющая судить об эффективности профилактических прививок. Эта задача может быть решена с помощью высокочувствительных лабораторных методов, позволяющих проводить широкий эпидемиологический мониторинг.

Все вышеизложенное предопределило цель настоящей работы - разработку конструкций комбинированных вакцин и ИФТС для профилактики и диагностики управляемых инфекций (дифтерия, столбняк, коклюш, гепатит В).

Первый раздел настоящей работы был связан с разработкой конструкций комбинированных вакцин для профилактики дифтерии, столбняка, коклюша и гепатита В.

Трудности создания комбинированных вакцин связаны прежде всего с решением проблемы совместимости компонентов, стабильности и сохранения достаточной иммуногенности препарата. При разработке комбинированных вакцин важно было гарантировать, чтобы иммунный ответ на любой из компонентов вакцины не оказался неприемлемым из-за присутствия других.

В связи с этим на первом этапе работы было проведено экспериментальное изучение совместимости и конкурентности трех компонентов (дифтерийного, столбнячного и гепатитного) в составе двух вариантов комбинированных вакцин (АДС-М/НВ-вакцина и АДС/НВ-вакцина).

В предварительных опытах на животных было установлено, что иммунизация экспериментальными вариантами комбинированных вакцин приводила к формированию напряженного иммунитета в отношении всех компонентов. При этом совместное применение трех вакцинных препаратов заметно усиливало иммуногенность гепатитного компонента: частота положительных сероконверсий была значительно выше, чем при использовании моновакцины гепатита В. В серии экспериментов, предусматривающих заражение иммунизированных животных дифтерийным и столбнячным токсинами, была установлена более высокая иммуногенность соответствующих компонентов в том случае, когда они входили в состав вакцин, содержащих рекомбинантпый HBsAg.

При изучении совместимости четырех компонентов (дифтерийного, столбнячного, коклюшного и гепатитного) было установлено, что комбинированные вакцины, содержащие HBsAg, по иммуногенности превосходят базовые препараты (АКДС, НВ-вакцина). В ходе эксперимента были изучены варианты комбинированных вакцин с уменьшенным содержанием антигенов. При этом при уменьшении содержания в одной прививочной дозе комбинированной вакцины дифтерийного (с 15 до 10 Lf) и столбнячного (с 5 до 2,5 ЕС) анатоксинов иммуногенность этих компонентов оставалась на уровне АКДС-вакцины. Снижение дозы HBsAg (с 10 до 5 мкг) в составе комбинированных вакцин также не повлияло на иммуногенность последних по гепатитному компоненту: она сохранялась или даже несколько превышала аналогичный показатель моновакцины гепатита В.

Помимо тестов, регламентированных для доклинической оценки комбинированных вакцин, нами был проведен ряд дополнительных исследований с целью получения максимально объективной оценки влияния новых препаратов на различные звенья иммунной системы.

Известно, что в становлении любой антигенспецифической резистентности наряду с гуморальным важное значение имеет и клеточный иммунитет [47]. Поэтому оценка специфического клеточного иммунитета представлялась нам весьма важной как в плане характеристики иммунобиологических свойств комбинированных вакцин, так и в отношении возможного использования полученных данных для контроля эффективности вакцинации.

Для оценки влияния вакцин на клеточное звено иммунной системы сравнивали такие их характеристики, как влияние на массу и клеточность регионарных лимфатических узлов и способность вызывать реакции гиперчувствительности замедленного типа. Опыты выполнялись на аутбредных белых мышах.

Анализ результатов данного этапа исследования позволил нам прийти к заключению о том, что выраженность ответа клеточного звена иммунной системы на гепатитный компонент комбинированных вакцин в значительной мере зависит от остальных составляющих препарата: отмечено достоверное нарастание показателей как при комбинации HBsAg с дифтерийным и столбнячным анатоксинами, так и при последующем введении в состав вакцины коклюшной суспензии.

В то же время, сам гепатитный компонент не оказывал значимого влияния на клеточный ответ против остальных составляющих комбинированных вакцин.

В отношении столбнячного анатоксина показан стимулирующий эффект как дифтерийного компонента, так и коклюшной суспензии. При этом иммунный ответ на дифтерийный анатоксин слабо зависел от присутствия в препарате столбнячного компонента и в достаточной мере стимулировался лишь коклюшной суспензией.

Наконец, коклюшный компонент оказывал выраженное, статистически достоверное потенцирующее влияние на клеточное звено иммунного ответа против каждого из компонентов исследуемых комбинированных вакцин, что в целом согласуется с литературными данными [47].

Влияние состава комбинированных вакцин на гуморальное звено иммунного ответа оценивалось нами на иной экспериментальной модели - на аутбредных морских свинках. Выбор объекта определялся тем, что в данном случае требовался неоднократный забор крови для оценки уровня специфических антител в динамике. Кроме того, представлялось весьма заманчивым на одном виде животных оценить иммуногенность всех компонентов комбинированных вакцин. В настоящее время регламентированные методы оценки им-муногенности достаточно сложны и предусматривают использование, например, для контроля одной серии комбинированной вакцины несколько видов различных животных: 82 морских свинок (дифтерийный компонент), 165 аут-бредных белых мышей (столбнячный компонент), 165 мышей линии Balb (гепатитный компонент), 160 мышей-гибридов F1 (CBAxC57BL/6J) (коклюшный компонент).

В ходе данного этапа работы было показано, что введение в состав комбинированных вакцин гепатитного компонента ни в одном из изученных вариантов не приводило к снижению гуморального иммунного ответа на дифтерийный, столбнячный анатоксины и коклюшный компонент. В случае использования комбинированных вакцин, содержащих HBsAg, по сравнению с АДС-М и АКДС, в целом наблюдался более высокий уровень дифтерийных и столбнячных антител. При этом, для столбнячных антител эти различия были статистически достоверны. Был также установлен выраженный потенцирующий эффект как анатоксинов, так и в особенности коклюшной суспензии на формирование иммунного ответа против HBsAg.

Итак, в условиях разносторонних экспериментов была продемонстрирована полная иммунологическая совместимость антигенов отечественного производства (дифтерийного, столбнячного, коклюшного, HBsAg) в составе предлагаемых комбинаций вакцин - АДС-М анатоксин/НВ-вакцина, АКДС/НВ-вакцина. Установленный выраженный потенцирующий эффект при комбинации антигенов вакцины АКДС с HBsAg позволил снизить дозу гепатитного компонента (с 10 до 5 мкг) в составе 4-х компонентной комбинированной вакцины без уменьшения его иммуногенной активности. Это весьма важно как в плане снижения антигенной нагрузки на организм ребенка, так и уменьшения стоимости достаточно дорогостоящего препарата.

Кроме того, было показано,-что по содержанию специфических антител на одном виде предварительно иммунизированных животных (морских свинках) можно определять активность нескольких компонентов комбинированной вакцины. При этом, результаты оценки иммуногенности идентичны полученным с помощью регламентированных тестов. Использованный метод перспективен для оценки иммуногенности комбинированных вакцин, так как упрощает процедуру контроля и в значительной степени сокращает количество используемых животных. При разработке соответствующих стандартов иммуногенности отдельных компонентов вакцин предлагаемый метод может быть использован в практике.

Таким образом, в результате проведенных исследований была экспериментально обоснована возможность получения комбинированных препаратов для профилактики дифтерии, столбняка, коклюша и гепатита В. Оптимальными были признаны следующие два варианта вакцин: Бубо-М, содержащая в 1 прививочной дозе (0,5 мл): 5 Lf дифтерийного анатоксина, 5 ЕС столбнячного анатоксина, 10 мкг рекомбинантного HBsAg, 0,3-0,5 мг геля гидро-ксида алюминия и 0,025 мг мертиолята натрия; и Бубо-Кок, включающая 15 Lf дифтерийного анатоксина, 5 ЕС столбнячного анатоксина, 10 млрд. коклюшной суспензии, 5 мкг рекомбинантного HBsAg, 0,3-0,5 мг геля гидрокси-да алюминия и 0,05 мг мертиолята натрия.

При этом следует отметить, что концентрация мертиолята в составе вакцины Бубо-М в 2 раза ниже, чем в базовом препарате (АДС-М анатоксине). Это весьма важно, т.к. в мире вновь возобновилась дискуссия о возможном негативном воздействии мертиолята на организм ребенка и подчеркивается потенциальная опасность увеличения его дозы при одновременном введении нескольких вакцин, содержащих этот консервант [88]. Последнее обстоятельство еще раз подтверждает необходимость создания комбинированных вакцин.

На основании проведенных исследований, разработана технология получения комбинированных вакцин для профилактики дифтерии, столбняка, коклюша и гепатита В и оформлена НТД (регламенты производства и фармакопейные статьи).

В производственных условиях по разработанной технологии приготовлено 5 серий вакцины «Бубо-М» и 5 серий вакцины «Бубо-Кок».

Изучение физико-химических свойств, стерильности, токсичности, специфической безвредности, иммуногенности показало, что комбинированные вакцины для профилактики дифтерии, столбняка, коклюша и гепатита В, полученные в производственных условиях, полностью соответствуют требованиям, предъявляемым к препаратам такого класса ВОЗ и ГИСК им. JI.A. Тарасевича. При этом следует отметить, что по показателю иммуногенности вакцины Бубо-М и Бубо-Кок значительно превосходили эти требования [336].

К числу важных критериев, определяющих качество препаратов, относится стабильность свойств вакцин при длительном хранении. Как показали результаты наблюдения, разработанная технология обеспечивает получение стабильных вакцин: регламентированные показатели качества при хранении существенно не изменялись.

Государственные клинические испытания подтвердили безопасность и высокую иммунологическую эффективность разработанных вакцин «Бубо-М» и «Бубо-Кок». Введение в состав комбинированных вакцин АДС-М и АКДС гепатитного компонента не увеличило реактогенность новых препаратов - вакцин Бубо®-М и Бубо®-Кок.

Изучение иммуногенности вакцины Бубо-М выявило ее высокую иммунологическую активность при вакцинации взрослых. Так, при практически одинаковом фоновом уровне дифтерийных и столбнячных антител (р>0,05) после завершения первичной вакцинации иммунный ответ как на столбнячный, так и на дифтерийный компонент вакцины Бубо-М превышал таковой при использовании АДС-М (р<0,05). Следует также отметить, что нарастание титров антител к дифтерийному и столбнячному компоненту при иммунизации вакциной Бубо-М наблюдалось у 100 % вакцинированных, а при сочетанием введении АДС-М анатоксина и НВ-вакцины - у 95 % вакцинированных. В отношении HBsAg защитный уровень (10 МЕ/л) как при использовании вакцины Бубо-М, так и при сочетанном введении АДС-М анатоксина и НВ-вакцины был достигнут в 100 % случаев, однако средняя геометрическая титров во втором случае была ниже - 273, 26 МЕ/л против 658,6 МЕ/л.

Оценка иммуногенности вакцины Бубо-М при иммунизации детей показала, что по прошествии 1 месяца после завершения первичного курса вакцинации у всех детей наблюдалось значительное нарастание уровня дифтерийных и столбнячных антител (р<0,05). При этом уровень титров столбнячных антител в опытной группе статистически значимо (р<0,05) превышал соответствующий показатель в контрольной группе (АДС-М + НВ-вакцина). В то же время содержание дифтерийных антител после вакцинации в контрольной группе было значимо выше, чем в опытной (р<0,05), хотя по кратности нарастания титров антител (в 33,7 и 39,9 раза соответственно) различия не были существенными.

Ответ на гепатитный компонент вакцины Бубо-М наблюдался через месяц после завершения цикла вакцинации у 100 % детей. При этом в опытной группе вакцинированных уровень антител был значительно выше защитного (средний геометрический титр 12356 мМЕ/мл). В контрольной группе (соче-танное введение) процент сероконверсии составил 95 (средний геометрический титр 2729 мМЕ/мл).

При анализе иммунного ответа на Бубо-Кок и препараты сравнения было установлено, что защитный титр антител против столбняка и дифтерии формировался в 100 % случаев, при этом различия между группами носили в целом недостоверный характер. Средние геометрические титров антител против коклюшного компонента отличались также недостоверно, но при этом среди получавших Бубо-Кок титры ниже 1:80 имели лишь 11 % детей, а в группах сравнения - не менее 20 %. Наконец, в отношении гепатитного компонента было показано, что у всех детей, привитых Бубо-Кок, уровень специфических антител превышал защитный. В то же время, при одновременном введении АКДС и НВ-вакцины в разные участки тела процент сероконверсии составил 84,38 %. При этом суммарная доза HBsAg, введенная в составе вакцины Бубо-Кок составила 15 мкг, а в группе сравнения — 30 мкг. Следует отметить, что в наблюдениях на взрослых и детях подтвердился взаимопотенцирующий эффект совместного введения антигенов, обнаруженный ранее в опытах на животных.

Таким образом, в результате проведенных исследований разработаны первые отечественные комбинированные вакцины, содержащие гепатитный компонент, отличающиеся безопасностью и высокой иммунологической активностью. Одномоментная вакцинация, не сопровождающаяся потенцированием реактогенности и угнетением иммунного ответа к какому-либо из антигенов, позволит не только уменьшить стрессовую нагрузку на прививаемых, но и более успешно реализовать проведение прививок в сроки, определенные календарем прививок, снизить загруженность медицинских работников и соответственно уменьшить стоимость программ иммунизации.

Вакцина Бубо-М зарегистрирована в установленном порядке (Р № 000071 /01-20000 от 23.10.2000) и разрешена к промышленному выпуску и медицинскому применению. Вакцина Бубо-Кок рекомендована комитетом МИБП к регистрации в Российской Федерации (протокол № 1 от 27.02.03).

Второй раздел работы был связан с поиском высокоэффективных решений проблемы рациональных конструктивных разработок ИФТС со стандартизованными свойствами для определения антител различной специфичности.

Одним из важнейших моментов в программе конкретных разработок им-муноферментного метода определения специфических антител является выбор оптимальных реагентов для основных составляющих тест-систем - коньюгатов. В своих исследованиях мы пошли по пути максимальной очистки антительной составляющей конъюгата, так как именно этот путь по нашему мнению и данным литературы [1, 76, 85], ведет к достижению наиболее высокой чувствительности анализа. В этом плане перспективными представлялись препараты, которые в качестве основного специфического действующего начала содержали бы только F(ab')2 -фрагменты аффинноочищенных антител к IgG человека, преимущество которых определяется большей удельной активностью по сравнению с сыворотками и нативными чистыми антителами. Кроме того, F(ab')2-фрагменты аффинноочищенных антител избавлены от такого серьезного недостатка моноклональных антител, как слишком узкая специфичность последних [91].

В Пермском НИИ вакцин и сывороток накоплен большой опыт получения аффинноочищенных антител (столбнячных, дифтерийных, ботулиниче-ских и др.) из сыворотки крови гипериммунизированных лошадей. На этой основе и с учетом доступности исходного материала были предприняты исследования по созданию промышленного метода получения конъюгата на основе F(ab')2 -фрагментов аффинноочищенных антител лошади к IgG человека и пероксидазы хрена и испытание его в качестве индикатора антител. В результате проведенных экспериментов была обоснована технология приготовления достаточно стандартных препаратов - аффинноочищенных антител против IgG человека, меченных пероксидазой, обладающих высокой чувствительностью и практически не дающие песпецифической фоновой окраски при использовании в качестве контроля 1 % раствора БСА. Последнее весьма важно для получения максимальной дискриминанты между положительными и отрицательными результатами, необходимой при разнообразном возможном использовании таких конъюгатов.

На разработанную технологию составлен экспериментально-производственный регламент, утвержденный за № 293 [113]. В производственных условиях приготовлено более 40 серий антивидового конъюгата.

Далее нами исследовалась возможность использования разработанного антивидового конъюгата при конструировании ИФТС для определения антител различной специфичности. Конъюгаты испытывали в непрямой иммуно-ферментной реакции с соответствующими антигенами, сорбированными на твердую фазу (полистироловый планшет).

В силу того, что все антигены индивидуально различны, и вследствие этого могут различаться по способности фиксироваться на твердой фазе, была проведена серия экспериментов по исследованию условий сорбции каждого антигена на полистироловую основу. Для столбнячного и дифтерийного анатоксинов оптимальной оказалась концентрация 10 мкг/мл по белку в 0,01 моль/л карбонат-бикарбонатном буферном растворе рН 9,6; для рекомбинантного HBsAg - 1 мкг/мл (по белку) в 0,01 моль/л фосфатном буферном растворе рН 7,2. Наиболее благоприятным температурно-временным режимом сорбции всех изученных антигенов оказалась экспозиция в течение 20-24 часов при температуре 4 °С. Изменение свойств иммобилизованных антигенов не наблюдалось при хранении в течение 12 месяцев при температуре 4-10 °С.

При конструировании ИФТС мы столкнулись с проблемой неспецифического связывания, которое приводило как к появлению ложноположительных реакций, так и к существенному искажению кривых титрования. Согласно результатам проведенных исследований наиболее эффективное блокирование неспецифического связывания реагентов, используемых в ИФТС, с полистироловой основой достигалось при помощи введения в отмывающий 0,01 моль/л фосфатный буферный раствор твина-20 и казеината натрия. При этом для дифтерийной и столбнячной тест-систем неспецифическое связывание удалось устранить в значительной мере даже в образцах отрицательной сыворотки без разведения, в то время как для тест-системы для определения анти-HBs только в разведении 1:10. Оптимальная концентрация конъюгата для использования в рассматриваемых ИФТС составила 50-100 нг фермента в 1 мл. Равновесие в реакции устанавливалось в течение 40-60 минут при 37 °С. При этом наблюдалась максимальная чувствительность анализа, а кинетика превращения субстрата имела линейный характер.

Далее для каждой из разрабатываемых тест-систем была установлена величина порогового уровня, позволяющего надежно различать сигналы, соответствующие отрицательным и положительным образцам сывороток. Было установлено, что непрямой вариант ИФА с использованием антивидового конъюгата обеспечивает чувствительность анализа при определении дифтерийных и столбнячных антител - 0,5 мМЕ, анти-HBs - 50 мМЕ. При этом, следует отметить, что минимальный защитный уровень дифтерийных антител составляет 30 мМЕ/мл, столбнячных и анти-HBs - 10 мМЕ/мл. Следовательно, при определении антител к поверхностному антигену вируса гепатита В (HBsAg) этот вариант не обеспечивает необходимой чувствительности анализа.

В связи с этим мы обратились к методам, основанным на нековалентном введении ферментной метки. Один из наиболее эффективных методов такого рода основан на использовании авидина и биотина, образующих между собой комплекс, характеризующийся константой связывания 1015 М что в десятки тысяч раз превышает характеристики связи антиген-антитело [346].

В результате проведенных экспериментов была отработана оптимальная методика биотинилирования антигенов и оптимизированы параметры твердофазного авидин-биотинового варианта ИФА. Разработанная конструкция ИФТС представляет собой твердофазный «сэндвич» с сорбированным на планшете антигеном; при этом визуализация результатов реакции осуществляется с помощью реакции между меченым биотином антигеном и меченым пероксидазой хрена авидином.

При сравнительных испытаниях непрямого и авидин-биотинового вариантов ИФА было показано, что чувствительность последнего в отношении определения анти-HBs антител достоверно выше - в 7-10 раз. В то же время, для противодифтерийных и противостолбнячных антител существенных различий обнаружено не было. При этом важным преимуществом разработанного авидин-биотинового варианта стала возможность определения специфических антител в сыворотках крови не только людей, но и животных, что важно при лабораторной оценке качества комбинированных вакцин.

Существенным моментом создания коммерческих ИФТС стала также разработка метрологического обеспечения интерпретации результатов.

В докладе комитета экспертов ВОЗ по биологической стандартизации сформулирован перечень рекомендуемых критериев и руководящих указаний по оценке качества наборов для ИФА, но не описаны методы и технические приемы, с помощью которых можно количественно оценить результаты им-муноанализа [336].

В связи с этим одной из задач исследования являлась разработка методики количественного иммуноферментного определения специфических антител на модели дифтерийных антител (AT). При решении этой задачи был использован метрологический подход: количественное определение AT рассматривалось как многоэтапный процесс, где каждый этап вносит свою составляющую погрешности в конечный результат определения. Эксперименты по выявлению составляющих погрешности измерений проводились во всем диапазоне определяемых концентраций. При этом использовались образцы сывороток с высоким, средним и низким содержанием AT, установленные методом in vivo (РН), и образец сыворотки не содержащий AT. В итоге определены такие характеристики, как сходимость и воспроизводимость результатов, установлена зависимость значений оптической плотности растворов от концентрации AT и её графическое выражение (градуировочный график), а также необходимость применения стандартного образца состава исследуемого вещества для определения указанных характеристик.

На основании проведенных исследований предложен алгоритм обработки результатов ИФА, состоящий из четырех этапов: снятие показаний приборов, нахождение значений по градуировочному графику, определение кратности разведения - вычисление по формуле пересчета абстрактных значений в конкретные (ОП раствора - содержание антител, МЕ/мл).

Данный алгоритм обработки результатов ИФА позволил: аттестовать положительную контрольную сыворотку; определить суммарную погрешность измерений; выделить линейный участок в ограниченном диапазоне значений на градуировочном графике, что привело к получению обоснованных результатов, сравнимых с результатами прецизионного теста определения антитоксинов - реакции нейтрализации (г = 0,9). Учет результатов иммунофермент-ной реакции стандартизирован таким образом, что позволяет оценить содержание специфических антител в крови в международных единицах (МЕ/мл), аналогично биологическому тесту. Разработанная методика была успешно применена для обсчета данных иммуноферментного определения антител к токсинам основных возбудителей клостридиозов (С. perfringens типа А; С. oedematiens типа А; С. tetani, С. botulinum типов А,В,Е) [23], анти-HBs. На основании предлагаемого алгоритма обработки результатов ИФА была создана компьютерная программа количественного определения специфических антител.

Согласно положениям 31 доклада Комитета экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов [336], изготовитель набора для иммунологических испытаний должен привести подробные данные, касающиеся воспроизводимости рабочих характеристик набора, и информировать контрольный орган о методах, используемых для их оценки.

В соответствии со схемой логических шагов, рекомендуемых Европейской Фармакопеей [175], для подтверждения валидности экспериментальных данных, исследования были начаты с проверки предположения о том, является ли распределение результатов иммуноферментного определения антител нормальным (гауссовским).

На большом экспериментальном материале было продемонстрировано наличие нормального распределения результатов иммуноферментного определения специфических антител (дифтерийных, столбнячных, анти-HBs). Это обстоятельство явилось основанием для использования дисперсионного анализа при оценке качества разработанных тест-систем по таким основным критериям, как: оценка линейности и параллелизма результатов измерения анализируемого вещества и калибрователя, точность и воспроизводимость рабочих характеристик и методов их оценки.

Дисперсионный анализ показал:

- наличие параллелизма результатов измерения анализируемого вещества и положительного контрольного образца (калибрователя);

- точность измерений в пределах одной серии оказалась достаточно высокой, коэффициент вариации для исследуемых тест-систем находился в диапазоне 3,3 % - 8,7 %;

- воспроизводимость результатов тоже была весьма высокой - коэффициент вариации не превышал 10 %.

Таким образом, из представленных данных видно, что предлагаемые тест-системы обеспечивают достаточно высокую степень достоверности результатов иммуноферментного определения специфических антител.

Проведенные исследования послужили основанием для разработки технологии получения иммуноферментных тест-систем для определения дифтерийных, столбнячных и анти-HBs антител и оформления НТД. ИФТС для выявления дифтерийных и столбнячных антител (непрямой вариант) зарегистрирована в установленном порядке (Р № 94/90/10). С 1994 года начат производственный выпуск продукции. Следует отметить, что в настоящее время это единственная ИФТС такого класса прошедшая все фазы регистрации и разрешенная к применению в практике здравоохранения. Завершены государственные испытания ИФТС для определения анти-HBs (авидин-биотиновый вариант). Конструкция ИФТС для определения анти-HBs с использованием рекомбинантного HBsAg признана патентоспособной (Патент № 2206095 от 10.06.03 г.).

Следует отметить ещё один важный аспект применения ИФТС - отбор плазмы доноров по титрам специфических антител с целью формирования пулов для приготовления направленных иммуноглобулинов. В Пермском НПО «Биомед» ИФТС для выявления дифтерийных и столбнячных антител уже более 10 лет успешно применяется при изготовлении противостолбнячного иммуноглобулина. К настоящему времени с использованием тест-системы оттитровано более 300 тысяч донорских сывороток и приготовлено 47 серий противостолбнячного иммуноглобулина (50 тыс. доз).

ИФТС для определения анти-HBs (непрямой вариант ИФА) используется и для приготовления препарата Антигеп - иммуноглобулина человека против гепатита В (Патент № 2144379 от 20.01.2000 г.).

Перспективно использование универсальной конструкции ИФТС (ави-дин-биотиновый вариант) для контроля иммуногенности вакцин на животных, при приготовлении гипериммунных лошадиных сывороток (противостолбнячных и противодифтерийных).

Подводя итог исследованиям, результаты которых обобщены во втором разделе работы, следует указать, что нами впервые были разработаны методические основы количественного определения специфических антител с помощью ИФА, а для практического осуществления метода предложен ряд высокочувствительных и специфичных вариантов ИФТС со стандартизованными свойствами, в полной мере отвечающих по своим характеристикам требованиям ВОЗ, предъявляемым к наборам для иммунологических испытаний.

Обобщая итоги проделанной работы следует отметить, что основные поставленные задачи были решены в процессе ее выполнения (табл. 65).

Основные задачи исследования и полученные результаты

Основные задачи исследования Полученные результаты

1. Экспериментально обосновать конструкции комбинированных вакцин, предназначенных для профилактики дифтерии, столбняка, коклюша и гепатита В. Разработаны оригинальные конструкции комбинированных вакцин для иммунопрофилактики вирусного гепатита В, столбняка, дифтерии (патент № 2130779) и для иммунопрофилактики вирусного гепатита В, столбняка, дифтерии коклюша (патентно 2130778)

2. Разработать технологии изготовления комбинированных вакцин для профилактики дифтерии, столбняка, коклюша и гепатита В с оформлением нормативно-технической документации для их производства. Разработаны технологии изготовления комбинированных вакцин, предназначенных для профилактики дифтерии, столбняка, коклюша и гепатита В, оформлена НТД для их производства. Вакцина Бубо-М зарегистрирована в установленном порядке(Р № 000071 /01-20000 от 23.10.2000). Вакцина Бубо-Кок рекомендована к регистрации Комитетом медицинских иммунобиологических препаратов РФ (протокол № 1 от 27.02.03).

3. Разработать иммуноферментные тест-системы для количественного определения специфических антител (дифтерийных, столбнячных, апти-HBs) с оформлением нормативно-технической документации для их производства. Разработаны иммуноферментные тест-системы для количественного определения специфических антител (дифтерийных, столбнячных, анти-HBs), оформлена НТД для их производства. ИФТС для выявления дифтерийных и столбнячных антител (непрямой вариант) зарегистрирована в установленном порядке (Р № 94/90/10). ИФТС для определения анти-HBs (Патент № 2206095) находится в фазе регистрации.

4. Продемонстрировать эффективность применения разработанных тест-систем для оценки поствакцинального иммунитета у людей, оценки иммуногенности вакцин на животных, отбора плазмы доноров с высоким содержанием специфических антител для производства направленных иммуноглобулинов. Разработанные тест-системы используются для оценки иммуногенности комбинированных вакцин на животных, а также оценки эффективности вакцинации и ревакцинации против дифтерии, столбняка и гепатита В, характеристики иммунной структуры населения и выявления групп повышенного риска. Применяются для отбора плазмы доноров с высоким содержанием антител при производстве противостолбнячного иммуноглобулина и препарата Антигеп (Патент № 2144379).

В заключение следует сказать, что первые отечественные комбинированные вакцины Бубо-М и Бубо-Кок, содержащие рекомбинантный HBsAg, характеризуются весьма высоким эпидемиологическим и экономическим потенциалом. В связи с этим перспективы осуществления программы вакцинации взрослых и детей против гепатита В, дифтерии, столбняка и коклюша с использованием комбинированных вакцин выглядят достаточно реальными.

Разработанные ИФТС открывают широкие возможности для проведения массовых эпидемиологических обследований с целью объективной оценки эффективности вакцинации и ревакцинации против дифтерии, столбняка и гепатита В, характеристики иммунной структуры населения и выявления групп повышенного риска.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Николаева, Алевтина Максимовна, 2003 год

1. Авторское свидетельство 11337775. Способ иммуноферментного определения антигенов /Л.И. Райхер, И.И. Райхер, Е.Х. Хазина, Л.Ю. Смурова, С.В. Шаболина//Опубл. 1987.

2. Азаренок К.С. Семенов В.М. Способы обнаружения антигенов и антител с помощью белка А стафилококка // Лаб. дело.-1987.- № 4.- С. 304-307.

3. Александров Н.И., Гефен Н.Е. О путях дальнейшей разработки химических ассоциированных и депонированных вакцин. В кн.: Поливакцина. Труды Московского НИИВС. М., 1956.- С. 24-58.

4. Андреева З.М., Шобухова Т.С., Янкина Н.Ф. Иммуноферментный анализ для определения антител к сальмонеллам // Методы иммуноферментного анализа в биологии и медицине: Сб. тр. Московского НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова. М., 1983. -С. 62-64.

5. Аракелов С.А., Михайлов М.И., Ананьев В.А. и др. Определение поверхностного антигена вируса гепатита В (HBs Ag) методом иммуноферментного анализа // Вопр. Вирусологии.- 1984 . Т.29, №3. -С. 319-323.

6. Басова Н.Н. Интегральный принцип осуществления контроля за дифтерией // Материалы межд. конф.: Сб. науч. тр. / Институт им. Пастера. -С-Пб, 1998. С.75.

7. Бектемиров Т.А. Экономические приоритеты вакцинопрофилактики: опыт разных стран // Вакцинация. 2000. - № 7. - С. 3-5.

8. Березин И.В., Егоров A.M. Новые направления развития иммуноферментного анализа // Вестник АМН СССР. 1987, №12.- С. 72-78.

9. Брагинская В.П., Соколова А.Ф. Активная иммунизация детей. М., Медицина. 1990 - с. 202.

10. Брико Н.И. Критерии оценки эффективности вакцинации // Вакцинация. 2000. - № 11 (5). - С. 3-5.

11. Ванеева Л.И., Цветкова Н.В. Иммуноферментный метод, его настоящее и будущее // Иммунология.-1980.- № 22.- С. 13-19.

12. Ванеева Н.П., Ястребова Н.Е., Цветкова Н.В. и др. Выявление антител к тейхоевым кислотам клеточной стенки S. aureus в сыворотках больных остеомиелитом //Журн. микробиол.- 1985.- №1.-С. 48-51.

13. Ванеева Н.П., Ястребова Н.Е., Цветкова Н.В. и др. Сравнительный иммуноферментный анализ сывороток на наличие антител к препарату тейхоевых кислот S. aureus и ДНК //Журн. микробиол.- 1985.- №1.- С. 33-35.

14. Васерин Ю.И., Бабикова Н.В., Близнюк В.В. и др. Получение конъюгата белок А пероксидаза для иммуноферментного анализа // Лаб. дело.- 1983, № 12. - С. 19-20.

15. Воробьев А.А. Иммунобиотехнология на пути в XXI век // Вестник РАМН. 1999, № 2. - С. 65-69.

16. Воробьев А.А. Современные направления в разработке новых иммунобиологических препаратов // Журн. микробиол. 1999, №5. -С. 16-21.

17. Выгодчиков Г.В., Зелевинская С.А., Волкова З.М. и др. Комбинированные препараты для активной профилактики анаэробной инфекции // Анаэробные инфекции: Труды межинститутских конференций. Т.9.- М.: Бюро научной информации. - I960.- С. 3-13.

18. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Пер. с англ. М., Практика, 1999.-459 с.

19. Государственная Фармакопея СССР. М.: Медицина. 1990 г. -Издание XI, вып.2. - 397 с.

20. Грабарь П.Г. Иммуно-электрофоретический анализ белков человеческой сыворотки // Биохимия. 1957. - Т. 22. - Вып. 1-2. - С. 49-59.

21. Грязнова Д.В., Николаева A.M., Ефимова Н.П. Выявление экзотоксинов основных возбудителей анаэробной газовой инфекции с помощью иммуноферментного анализа // Журн. микробиол. 1998, №2. -С. 36-39.

22. Гусев А.И. Микрометод преципитации в агаре // Иммунохимический анализ, М. Медицина, 1968. 99 с.

23. Дзантиев Б.Б., Егоров A.M. Современное состояние и перспективы развития иммуноферментного анализа //Журн. Всесоюз. Хим. Общества.-1982.-27.- №4.-С. 442-449.

24. Домейко М.А., Абрамова JI.A., Мальцева Н.Н., Тверских И.И. Использование иммуноферментного метода для исследования антихламидийных сывороток // Вопр. вирусол. 1985. - Т. 30, № 4. - С. 474-477.

25. Егоренкова Е.М., Христова M.JL, Леонов С.В. и др. Применение иммуноферментного анализа с использованием конъюгата белка А стафилококка с пероксидазой в серодиагностике гриппа // Журн. микробиол.- 1987.-Т. 32, № 2. С. 168-172.

26. Егоров A.M. Современный иммунохимический анализ и перспективы его развития // Журн. Всесоюз. Хим. Общества им. Д.И. Менделеева. -1988.- Т.ЗЗ, №5.- С.494-501.

27. Ермолин Г.А. История создания, области и перспективы применения количественного ферментного иммуноанализа (КФИА) // Иммунодиагностика тропических и паразитарных болезней / ЦОЛИУВ, T.CCXXXI, М.1980, С. 14 24.

28. Ефимова Н.П. Разработка и экспериментальное обоснование производства препаратов против анаэробных инфекций. Дисс. . докт. мед. наук. Пермь, 1971.- 464 с.

29. Ефимова Н.П., Николаева A.M., Каменева М.А. Научные достижения в области производства анатоксинов // Журн. микробиол. -1998, №2.-С. 28-32.

30. Журавлева Г.В., Демина А.А., Ильина Т.В. и др. Иммунофермептный метод в диагностике менингококковой инфекции // Журн. микробиол. 1984, №9. - С. 28-32.

31. Зигель Э. Реакция гемагглютинации // Иммунологичесие методы / Ф.Фримель Пер с нем. М.: Мир 1979.- С. 108 112.

32. Иванская Н.В., Ганова JI.A., Мартынеико Д.Л. и др. Определение напряженности иммунитета к дифтерии методом ИФА // Материалы межд. конф.: Сб. науч. тр. / Институт им. Пастера.- С-Пб., 1998.- С. 184.

33. Иммуноферментный анализ: Пер. с англ./Под ред. Т. Нго и Г. Ленхоффа.- М.: Мир, 1988. -446 с.

34. Индикация антител к индивидуальным белкам вируса гриппа с помощью твердофазного иммуноферментного анализа / М.Л. Христова,

35. Е.М. Егоренкова, С.В. Леонов и др. // Актуальные проблемы вирусологии: Тезисы докл. конф.-М., 1985.-С. 194-195.

36. Камалов А.А. Выявление антител к токсину столбняка с помощью реакции непрямой гемагглютинации // Журн. микробиол. 1966, № 1. -С. 103-108.

37. Колесникова В.Ю., Анохина Г.И., Захарова Н.А., Лямперт И.М. Определение антител к полисахариду стрептококков группы А в сыворотках человека ИФМ // Бюлл. экспер. биол. мед. 1985. - Т. 99, №2. -С. 181-183.

38. Кондрашина Н.Н., Шмелева Е.А., Берестень С.В. Использование иммуноферментного анализа для определения антибактериальных антител при дифтерийной инфекции // Журн. микробиол. 1987. - № 9. -С. 115-119.

39. Леонов С.В., Посевая Т.А., Закомырдин Ю.А. и др. Использование конъюгата белка А стафилококка с пероксидазой в иммуноферментной тест-системе для определения антител к вирусу простого герпеса // Вопр. вирусол. 1986. - Т. 1 , № 3. - С. 321.

40. Магазов Р.Ш. О совместимости вакцин при комплексной и ассоциированной иммунизации // Журн. микробиол. 2000, №5. - С. 108-112.

41. Майер К.-П. Гепатит и последствия гепатита. М., ГЭОТАР -Медицина, 1999. - 423 с.

42. Максимова Н.М., Маркина С.С., Королева В.Н. и др. Сравнительное определение уровня дифтерийного антитоксина в сыворотке крови с использованием четырех разных методов // Современная вакцинология. -Пермь, 1998.-С. 40-41.

43. Малая Л.Т., Веремеенко К.Н., Шуляк Л.Н. и др. Перспективы применения иммуноферментного анализа в медицинской практике // Врачебное дело. 1988. - № 12. - С. 1-4.

44. Маркина С.С., Максимова Н.М., Котова Е.А., Жилина Н.Я. О заболеваемости дифтерией в России в 1993 1995 годах. // Материалы VII съезда Всерос. общества эпидем., микробиол. и паразитологов. -Москва, 1997.- Т. 1.- С. 25 -26.

45. Медуницын Н.В. Вакцинология. М., «Триада - X», 1999, 272 с.

46. Медуницын Н.В. Иммунный ответ на сложные антигены и комбинированные вакцины // Иммунология. 2001. -№1. - С. 4-6.

47. Медуницын Н.В. Индивидуальная вакцинация // Эпидемиология и инфекционные болезни. -2000. №3. - С. 8-12.

48. Медуницын Н.В. История, принципы конструирования комбинированных вакцин и проблемы вакцинопрофилактики при их применении // Журн. микробиол. 2001. - №1. - С. 90-94.

49. Медуницын Н.В. Проблемы безопасности новых вакцин // Современная вакцинология. Пермь, 1998. - С. 13.

50. Медуницын Н.В. Пути совершенствования вакцин // Материалы межд. конф.: Сб. науч. тр. Институт им. Пастера. С-Пб., 1998. - С.50.

51. Методические рекомендации по оценке аллергенных свойств фармакологических средств. (Издание официальное). МЗ СССР. Фарм. Комитет МЗ СССР. - М., 1988. - 19 с.

52. Методические рекомендации по экспрессному определению бактериальных токсинов и анатоксинов в реакции коагглютинации с помощью специфически направленных стафилококковых реагентов / Л.И. Райхер, Е.Х. Хазина, В.Н. Сперанская и др. Пермь, 1986. - 10 с.

53. Методы исследований в иммунологии: Пер. с англ. / Под ред. И. Лефковитса, Б. Перниса. М.: Мир, 1981.- 485 с.

54. Методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов, вводимых людям: Методические указания (МУК 4.1/4.2.588-96). М.: Информационно - издательский центр Минздрава России, 1996. - 128с.

55. Онищенко Г.Г. О состоянии инфекционной заболеваемости в Российской Федерации в 2000 г. И принимаемых мерах по еестабилизации // Журн. микробиол. 2001. - № 5. - С. 3-7.

56. Онищенко Г.Г. Состояние вакцинопрофилактики в России и перспективы её развития // Российские медицинские вести. — 1998. — Т. 3, № 4. С. 4-9.

57. Онищенко Г.Г. Эпидемиологическая обстановка в Российской Федерации и основные направления деятельности по её стабилизации // Матер, к докладу на VIII Всероссийском съезде эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. Москва, 26-28 марта 2002 г. - С.

58. Осипов А.П., Егоров A.M. Молекулярные усилители в иммунохимическом анализе // Журн. Всес. хим. об-ва им. Д.И. Менделеева. 1989. - Т.34. - С. 18-23.

59. Патент на изобретение № 2130778 Комбинированная вакцина для иммунопрофилактики вирусного гепатита В, столбняка, дифтерии и коклюша / Борисова В.Н., Мельников В.А., Буданов М.В. и др. // Опубл. 1999 г.-12 с.

60. Патент на изобретение № 2130779 Комбинированная вакцина для иммунопрофилактики вирусного гепатита В, столбняка и дифтерии / Борисова В.Н., Мельников В.А., Буданов М.В. и др. // Опубл. 27.05.1999 г. 11 с.

61. Патент РФ на изобретение № 2144379. Противовирусный препарат и способ получения иммуноглобулина для профилактики и лечения вирусных заболеваний / Петров В.Ф., Николаева A.M., Казьянин А.В. и др. // Опубл. 20.01.2000 г. 14 с.

62. Перельман Е.В., Булк В.Ф., Щетинина Е.В. и др. Выбор методов получения конъюгатов стафилококкового белка А с пероксидазой для иммуноферментного анализа // Журн. микробиол 1986. - № 10. - С. 68-71.

63. Петровских В.П. Серологическая индикация и дифференциация ботулинических токсинов типов А, В и Е : Дисс.канд. биол. наук. -Пермь,1998.-144 с.

64. Покровский В.И., Семенов Б.Ф. Вакцинопрофилактика. Итоги XX века и перспективы следующего столетия // Жури, микробиол. 1999. -№ 5. - С. 6-8.

65. Покровский В.И., Семенов Б.Ф. Ожидаемые перспективы развития вакцинологии в XXI веке // Современная вакцинология. Пермь, 1998. -С. 10.

66. Покровский В.И., Шабалина С.В., Семина Н.А. и др. Использование иммуноферментного метода для диагностики различных форм менингококковой инфекции // Клинич. мед. 1981. - Т. 59, № 7. - С. 93-96.

67. Производственный регламент № 1113-01 «Анатоксин столбнячный очищенный адсорбированный жидкий»: Утв. 20.06.2001 г. 121 с.

68. Производственный регламент № 1121-95 «Вакцина гепатита В рекомбинантная дрожжевая жидкая»: Утв. 1995 г. МЗ РФ.

69. Производственный регламент № 136-69 «Регламент производства коклюшной вакцины»: Утв. 15.07.1969 г. Пермь, 1969.- 102 с.

70. Производственный регламент № 1257-02 «Гель алюминия гидроксида»: Утв. 10.10.2002 г. Пермь, 2002. - 74 с.

71. Производственный регламент № 553-96 «Анатоксин дифтерийный очищенный адсорбированный»: Утв. 20.02.1996 г. Пермь, 1996.-118 с.

72. Производственный регламент № 860-99 «Комбинированная вакцина для иммунопрофилактики вирусного гепатита В, дифтерии, столбняка (АДС-М-В-гепатитная вакцина, АДС-В-гепатитная вакцина)»: Утв. 27.05.1999 г. Москва-Пермь. 1999.

73. Райхер И.И., Райхер Л.И., Пагнуева Л.Ю. и др. Проблема чистых антител и её реализация в работах по созданию иммуноферментных тест-систем //Журн. микробиол. 1998. — № 2. - С. 12-14.

74. Райхер Л.И. Экспериментальные материалы к проблеме специфической вакцинопрофилактики и серодиагностики коклюша // Автореф. дис. . докт. мед. наук.-Пермь, 1971.-38 с.

75. Руководство по вакцинному и сывороточному делу. / Под ред. П.Н. Бургасова// М.: "Медицина", 1978. 439 с.

76. Селезнева Т.С., Баева Е.А., Цветкова Н.В. Борисенко Ю.В. Изучение противококлюшного иммунитета с помощью иммуноферментного анализа // Журн. микробиол. 1986. - № 7. - С. 87-89.

77. Семенов Б.Ф., Онищенко Г.Г., Наркевич М.И., Ганзенко В.П. Расширенная программа иммунизации: итоги, перспективы, новые проблемы // Журн. микробиол. 1996, №5. - С. 110-113.

78. Семина Н.А., Шабалина С.В., Рубцов И.В. и др. Параметры конструирования тест-систем для выявления менингококковых антител иммуноферментным методом // Журн. микробиол. 1981. - №6. - С.67-71.

79. Серия технических докладов ВОЗ. 1979. - № 638.

80. Серия технических докладов ВОЗ. 1990. - № 760.

81. Смирнов В.Д. Получение экзотоксина коклюшного микроба и изучение его свойств. // Автореф. дисс. . докт. мед. наук. М, 1991. — 44 с.

82. Смурова Л.Ю. Конструирование иммуноферментных тест-систем на основе F (аЬ)2-фрагментов «чистых» антител для определения бактериальных токсинов (на модели дифтерийного токсина). Дисс.канд. биол. наук. М.,1988. - 147с.

83. Сперанская В.Н. Обоснование и разработка серологических микротестов для определения бактериальных растворимых антигеновна основе реакции коагглютинации. Дисс. .канд. биол. наук. М.,1988. - 204 с.

84. Сумароков А.А., Салмин JI.B. Прививочное дело. М.: Медицина, 1983.-200 с.

85. Таточенко В.К. Проблема консерванта // Медицина для всех. 2001, №1. - С. 16.

86. Таточенко В.К., Озрецковский Н.А. (ред.). Иммунопрофилактика2000 (справочник). М. Изд-во «Остоженка инвест», 2000, 176 с.

87. Таточенко В.К., Озрецковский Н.А. (ред). Иммунопрофилактика2001 (справочник). М. Изд-во «Остоженка инвест», 2001, 168 с.

88. Теория и практика иммуноферментного анализа / A.M. Егоров, А.П. Осипов, Б.Б. Дзантиев, Е.М. Гаврилова. М.: Высш. шк., 1991. - 288 с.

89. Турьянов М.Х., Беляева Н.М., Царегородцев А.Д. Шапошников А.А., Турьянов А.Х. Дифтерия.- М., 1996. 252 с.

90. Учайкин В.Ф., Шамшева О.В. Вакцинопрофилактика в России: состояние и перспективы // Педиатрия. 2000. - №2. - С. 4-8.

91. Учайкин В.Ф., Шамшева О.В. Вакцинопрофилактика: настоящее и будущее. Москва: Гэотар-Мед, 2001. - 400 с.

92. Учайкин В.Ф. Комбинированные вакцины в календаре профилактических прививок: сегодня и завтра// Российский вестник перинатологии и педиатрии. 2001, № 3. - С. 57-58.

93. Фельдблюм И.В. Управление вакцинопрофилактикой в системе эпидемиологического контроля за инфекциями (проблемы и решения) // VIII Всерессийский съезд эпидемиологов, микробиологов и паразитологов: Материалы съезда 26 28 марта 2002 г. М. Т.1С.238 -239.

94. Фельдблюм И.В. Итоги и перспективы развития вакцинопрофилактики // Вакцинопрофилактика в XXI веке: Материалы научно-практич. конф. Западно-Уральского региона. Пермь: Перм. гос. мед. академия, 2000. - С. 3-6.

95. ФС 42-3358-97 «Анатоксин дифтерийно-столбнячный адсорбированный с уменьшенным содержанием антигенов жидкий. АДС-М-анатоксин»: Утв. 17.04.89 г. Фармакопейным комитетом. 7 с.

96. ФС 42-3361-97 «Анатоксин дифтерийно-столбнячный адсорбированный жидкий. АДС-анатоксин»: Утв. 17.04.89 г. Фармакопейным комитетом. 15 с.

97. ФС 42-3362-97 «Вакцина коклюшно-дифтерийно-столбнячная адсорбированная жидкая. АКДС-вакцина»: Утв. 11.03.97 Фармакопейным государственным комитетом. 26 с.

98. ФС 42-3438-97 «Вакцина гепатита В рекомбинантная дрожжевая жидкая»: Утв. 01.11.97 г. Фармакопейным государственным комитетом. -5 с.

99. ФС 42-3874-99 «Физико-химические, химические, физические и иммунохимические методы контроля медицинских и иммунобиологических препаратов»: Утв. 03.02.2000 г. Фармакопейным государственным комитетом. — 77 с.

100. ФСП 42-0028031000 "Бубо-М" вакцина комбинированная гепатита В и анатоксина дифтерийно-столбнячного с уменьшенным содержанием антигенов.: Утв. 06.09.2000 г.

101. Цветкова. Ю.В. Борисенко Е.М. Кузнецова и др. О возможности серодиагностики коклюшной инфекции иммуноферментным методом // Журн. микробиол. 1987. - № 8. - С. 91-93.

102. Ценева Г.Я., Акимкин Г.Я., Щедеркина Е.Е. и др. Эффективность лабораторного контроля противодифтерийного иммунитета // Материалы межд. конф.: Сб. науч. тр. / Институт им. Пастера.- С-Пб, 1998.- С. 192.

103. Шаханина К.Л. Определение антител к столбнячному токсину иммуноферментным методом на твердофазном носителе (ELISA) // Иммунология. 1982. - № 3. - С. 31-33.

104. Шахгильдян И.В. Вакцинопрофилактика гепатита В в мировой практике.//Детский доктор. 1999. -№5. - С.6-10.

105. Шахгильдян И.В. Хухлович П.А. Кузин С.Н. Итоги применения вакцины Engerix В в группах высокого риска заражения вирусом гепатита В в России и странах СНГ // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колонопроктол. 1995. - Т. 5, №2. - С. 27-31.

106. Шахгильдян И.В. Хухлович П.А. Стратегия вакцинопрофилактики гепатита В в России // Медицина для всех. 1998, №1. - С. 12-18.

107. Шахгильдян И.В., Михайлов М.И., Хухлович П.А. и др. Актуальные вопросы вакцинопрофилактики гепатита В в России // Эпидемиол. и инф. бол. 2000. - №6. - С. 55-58.

108. Шахгильдян И.В., Михайлов М.И., Хухлович П.А. и др. Вакцинопрофилактика гепатита В в России достижения, проблемы, перспективы Журн. микробиол. - 2000. - №2. - С. 44-49.

109. Швагер М.М., Левова Т.М., Мартыненко О.Д. и др. Подходы к определению напряженности иммунитета к столбняку с помощью иммуноферментного метода // Журн. микробиол. 1986. - № 9. - С. 8082.

110. Экспериментально-производственный регламент № 293 «Иммуноглобулины диагностические против иммуноглобулина G (H+L) человека, меченные пероксидазой, сухие (конъюгат)»: Утв.28.12.1990 г. Пермь, 1989.

111. Яковлев А.Т., Зыкин Л.Ф., Рыбкин B.C. Иммуноферментный анализ в микробиологии / Под ред. докт. мед.наук Н.Г. Тихонова.-Саратов: Изд-во Саратовского ун-та, 1990. 109 с.

112. Acellular pertussis vaccines: what matters serology or clinical protection? // Aventis Paster MSD. - 2000. - 8 p.

113. Adler Stothz Karen, Dreesman Gordon R., Graham David Y. et al. Biotin avidin amplified ELISA for quantitation of human Jg A . // J. Immunoassay. - 1985.- Vol.6, №1-2. - P. 67-77.

114. Adler-Storthz К., Kendall С., Kennedy R.C. et al. Biotin-avidin amplified enzyme immunoassay for detection of herpes simplex virus antigen in clinical specimens // J. Clin. Microbiol. 1983. - V. 18. - P. 1329-1334.

115. Alter M., Hadler S.C., Margolis H.S. et al. The changing epidemiology of hepatitis В in the United States: need for alternative vaccination strategies. JAMA 1990. - V. 263. - P. 1218-1222.

116. Ambrosch F., Frisch-Niggemeyer W., Kremsner P. et al. Persistence of Vaccine-induced Antibodies to Hepatitis В Surface Antigen and the Need for Booster Vaccination in Adult Subjects. // Postgrad. Med. J. -1987.- V. 63 (2 Suppl). P. 129-135.

117. Ambrosch F., Fritzel В., Andre F.E. et al. Clinical and immunological investigation on of a new combined hepatitis A and hepatitis В vaccine // J. Med. Virol. 1994. - V. 44. - P. 452-456.

118. Ambrosch F., Wiedermann G., Miller H. Eine neue Mikro-ELISA-Methode zur Bestimmung der Tetanus-Antikorper // Zbl. Bakteriol., Mikrobiol. und Hyg. 1984. - A. 258, № 2-3. - P. 173-182.

119. Amir J., Melamed R., Balder J., et al. Immunogenicity and safety of a liquid combination of DT-PRP-T lyophilized PRP-T reconstituted with DTP //Vaccine. 1997.-№ 15.-P. 149-154.

120. Andre F.E. Development of combined vaccines: manufacturers viewpoint // Biological. 1994. - Vol.22. - P. 317-321.

121. Andre F.E. Overview of 5-year clinical experience with a yeast Hepatitis В vaccine // Vaccine. 1990. - Vol.8. - P. 74-78.L

122. Andre F.E., The way forward combined vaccines. // Abstr. From the 9 Triennial International Symposium on Viral Hepatitis and Liver Disease. -Rome. - 1996. P. 140-141.

123. Aprile M.A., Wardlaw A.C. Aluminium compounds as adjuvants for vaccines and toxoids in man: A review // Can. J. Public. Health. 1966. -57.-P. 343-354.

124. Arbeter A.M., Baker L., Starr S.E., Plotkin S.A. The combination measles, mumps, rubella and varicella vaccine in healthy children // Dev. Biol. Stand. 1986. - 65. - P. 89-93.

125. Arnon R., Van Regenmortel M.H.V. Structural basis of antigenic specificity and design of new vaccines // FASEB J. — 1992. №6. - P. 32653274.

126. Baker J.D., Halperin S.A., Edwards K. et al. Antibody response to Bordetella pertussis antigens after immunization with American and Canadian whole-cell vaccines // J. Pediatr. 1992. - № 121.- 523-527.

127. Ballardini G., Groff P., Zoli M. et al. Increased risk of hepatocellular carcinoma development in patients with cirrhosis and with high hepatocellular proliferation // J. Hepatol. 1994. - Vol. 20. - P. 218.

128. Barrie H. Whooping cough vaccination // Lancet. 1977. - № 8012. - P. 648.

129. Basham L.E, Pavliak V. Estimation of type-specific anti-streptococcal M-protein antibodies with biotinylated peptides in human sera // APMIS .-1998.-V.106 (lss. 2). P. 288-292.

130. Basham L.E, Pavliak V., Li X.R. et al. A simple, quantitative,Уreproducible avidin-biotin ELISA for the evaluation of group В Streptococcus type-specific antibodies in humans // Vaccine 1996. - V. 14, №5.-P. 439-445.

131. Bayer A. and Wilchek M. The use of the Avidin-Biotin complex as a tool in molecular biology // Methods Bioch. Anal. 1980. - № 26.- P. 1-45.

132. Bell F., Martin A., Blondeau C., et al. Combined diphtheria, tetanus, pertussis and Haemophilus influenzae type b vaccines for primary immunization// Arch. Dis. Chil. 1996. - № 75. - P. 298-303.

133. Bordt D.E., Whalen J.W., Boyer P.A. et al. Poliomyelitis component in quadruple antigen. //JAMA. 1960. - № 174. - P. 1166-1169.

134. Boucher Ph., Sato H., Sato Y., Locht C. Neutralizing antibodies and immunoprotection against pertussis and tetanus obtained by use of a recombinant pertussis toxin-tetanus toxin fusion protein// Infect, and Immun.- 1994. V. 62, №2 - P. 449-456

135. Boughton C.R. Pertussis vaccines: Acellular versus whole-cell // Med. J. of Australia 1996-V. 164 - P.564-566

136. Brunell P.A., Novelli V.M., Lipton S.V., Pollock B. Combined vaccine against measles, mumps, rubella, and varicella. Pediatrics. 1988. - №81. -P. 779-784.

137. Cadoz M., Montagnon В., Yvonnet В. et al. Lack of adjuvant effect of the pertussis component on IPV DTP-polio vaccine in children // Dev. Biol. Stand.- 1986.-№65.-P. 153-158.

138. Camargo M.E., Silveira L., Furuta J.A. et al. Immunoenzymatic assay of anti-diphtheric toxin antibodies in human serum // J. Clin. Microbiol. 1984. -V. 20,№4. -P. 772-774.

139. Carruthers M.M., Jenkins K.E., Kabat W.J., Buranosky T. Detection of antibody to staphylococcal lipoteichic acid with a microenzyme-linked immunosorbent assay // J. Clin. Microbiol. 1984. - V. 19, № 4. - P. 552554.

140. Centers for disease control. Morbidity and mortality weekly reports // Post exposure prophylaxis of hepatitis/-June/-1984.-33.- №21. P.285-290.

141. Chang M.H., Chen C.J., Lai M.S. et al. Universal hepatitis В vaccination in Taiwan and the incidence of hepatocellular carcinoma in children // N. Engl. J. Med. 1997.-V. 336.-P. 1855-1859.

142. Chen C.J., Chang M.H., Ni Y.H. et al. Seroepidemiology of hepatitis В virus infection in children: ten years of mass vaccination in Taiwan // JAMA. 1996.-V. 276, № 11.-P. 906-908.

143. Chengde Y. Immune response and reaction to simultaneous administration of DPT, TOPV and hepatitis В vaccine // Chinese J. Epidemiol. 1989. - V. 10. - P. 206-209.

144. Children's vaccine initiative (news). World Health Forum. 13:93. -1992.

145. Christenson B. Serological diagnosis of staphylococcal bacteriaemia // The Lancet. 1986. - V. 2, № 8516. - P. 1165-1166.

146. Clemens J.D., Ferrecio C., Levine M. et al. Impact of Haemophilus influenzae type b polysaccharide-tetanus conjugate vaccine on responses to concurrently administered diphtheria-tetanus-pertussis vaccine// JAMA. -1992.-№267.-P. 673-678.

147. Corti A., Gasparri A., Sacchi A. Et al. Tumor targeting with biotinylated tumor necrosis factor alpha: Structure-activity relationships and mechanism of action on avidin retargeted tumor cells // Cancer Research.-1998.-V. 58. -Iss. 17.-P. 3866-3872.

148. Das REG. Assessment of assay precision: a case study of an ELISA for antipertussis antibody // Biologicals. 1999. - V. 27, № 2. - P. 125-131.

149. Decker M.D., Edwards K.M. Combination vaccines. Vaccines (edited by.) Stanley A. Plotkin., Walter A. Orenstein. Copyright by W.B. Saunders Company, 1999. P. 508-530.

150. Ditchburn R.K. Whooping cough after stopping pertussis immunization // Brit. Med. J. 1979. - № 6178B. - P. 1601-1603.

151. Dittman Sieghart. Vaccine Safety Risk Communication A Global Perspective // Millennium second world congress on vaccines and immunization. Amphitheaters of Europe, Liege, Belgium. - August 29 -September 3, 2000. - W10-6.

152. Dokmetjian J., DellaValle C., Lavigne V. et al. A possible explanation for the discrepancy between ELISA and neutralizing antibodies to tetanus toxin // Vaccine. 2000. - V. 18, № 24. - P. 2698-2703.

153. Drucker J., Soula G., Diallo O., Fabre P. Evaluation of a new combined inactivated DPT-polio vaccine // Dev. Biol. Stand. 1986. - № 65. - P. 145151.

154. Edwards K.M., Decker M.D., Combination vaccines consisting of acellular pertussis vaccines // Pediatr. Infect. Dis. J. 1997. - 16 (suppl.4) -P. 97-102.

155. Edwards K.M., Decker M.D., Combination vaccines: Hopes and challenges // Pediatr. Infect. Dis. J. 1994. - V. 13. - P. 345-347.

156. Edwards K.M., Meade B.D., Decker M.D. et al. Comparison of 13 acellular pertussis vaccines: Overview and serologic response // Pediatrics. -1995.-96.-P. 548-557.

157. Edwards K.M., Karzon D.T. Pertussis vaccines. Pediatr. Clin. Nort. Am. 1990.-№37.-P. 549-567.

158. Engvall E. Preparation of enzyme-labeled staphylococcal protein A and its use for detection of antibodies // Scand. J. Immunol. 1978. - V. 8. - P. 25-31.

159. Engvall E., Perlmann P. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of IgG. // Immunochemistry. 1971.- V.8, №9. - P. 871874.

160. Engvall E., Perlmann P. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Ill Quantitative of specific antibodies by enzyme-linked antiimmunoglobulin in antigen coated tubes//J. Immunol., 1972.-V. 109, № l.-P. 129-135.

161. European Pharmacopoeia. Biological assays. 1997. - P. 113-117.

162. European Pharmacopoeia. Second edition. Part I. VIII.13. Statistical Analysis of results of biological assays and tests. European Treaty Series No. 50. MAISONNEUVE S.A. 57160 Saint-Ruffine-France, 1993.

163. Farzad Z., James K., McClelland D/B/L/ Measurement of human and mouse anti-tetanus antibodies and isotype analysis by ELISA // J. Immunol. Meth., 1986. V. 87, № 1. - P. 119-125.

164. FDA approval of a fourth Acellular pertussis vaccine for use among infants and young children // JAMA 1999 - V.281 - P. 226

165. Feery B.J. Pertussis vaccine controversy: to vaccinate or not? // Austral. Paediatr. J. 1984. - 20. - № 2. - P. 91 -93.

166. Final Report 217744/007 (DTaP-HBV-IPV-007). Risenxart, Belgium, SmithKline Beecham Biologicals, April 14, 1997.

167. Finn A., Bell F. Time to switch from whole cell to acellular pertussis vaccines? // Brit. Med. J. 2000 - V. 320. - P. 875

168. Fulginitl V.A. A new pertussis vaccine: hope for the future // J. Infect. Diseases. 1983.-V. 148, №1.-P. 146-147.

169. Galazka A.M. Diphtheria: the immunological basis for immunization. // Geneva: World Health Organization.-1993. WHO/EPI/GEN/93.12.

170. Galazka A.M., Robertson S.E. Diphtheria: changing patterns in the developing world and the industrialized world. // Eur J. Epidemiol.- 1995.-V. 11.- P. 107-117.

171. Galazka A.M., Robertson S.E. Immunization against diphtheria with special emphasis on immunization of adults. // Vaccine.-1996.- V. 14. P. 845-857.

172. Galazka A.M., Robertson S.E., Oblapenco G.P. Resurgence of diphtheria.//Eur J. Epidemiol.- 1995.- V. 11.-P. 95-105.

173. General recommendations on immunization. Recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP). MMWR Morb. Mortal Wkly Rep. 43 (RR-1). 1994. - P. 1-38.

174. Gentili G., Pini C., Collotti C. The determination of the human tetanus immunoglobulins by an enzyme-linked immunosorbent assay // J. Biol. Stand. 1984. - V. 12, № 2. - P. 167-175.

175. Gentili G., Pini C., Collotti C. The use of an immunoenzymatic assay for the estimation of tetanus antitoxin in human sera: a comparison with seroneutralization and indirect haemagglutination // J. Biol. Stand. 1985. -V. 13.-P. 53-59.

176. German-Fattal M., Bizzini В., German A. Immunity to tetanus: tetanus antitoxin and anti-BIIb in human sera // J. Biol. Stand. 1987. - V. 12. - P. 223-230.

177. Giammanco G., Moiraghi A., Zotti C., et al. Safety and immunogenicity of a combination DTa-pertussis-hepatitis В vaccine (DTPa-HepB) administered according to two different primary vaccination schedules // Vaccine. 1998. - V. 16. - P. 722-726.

178. Giammanco G., Volti S.L., Mauro L. et al. Immune response to simultaneous administration of a recombinant DNA hepatitis В vaccine and multiple compulsory vaccines in infancy // Vaccine. — 1991. — V. 9. P. 747750.

179. Global Perspectives on Hepatitis. Newsletter of the International Task Force on Hepatitis В Immunization and the Program for Appropriate Technology in Health (PATH). 1992. - V. 3. - P. 1 -2.

180. Grabenstain J.D. Immunofacts: Vaccines and Immunologic Drugs. St. Louis: Facts and Comparisons. 1995.

181. Granoff D.M. Challenges for licensure of new diphtheria, tetanus, accellular pertussis (DTaP) combination vaccines // Point. Pediatr. Infect. Dis. J.- 1996.-№ 15. 1069-1070.

182. Granstorm M., Blennow M., Hedenskog S., et al. Antitoxin response to acellular pertussis vaccines // Abstr. Annu. Meet. Amer. Soc. Microbiol., 1987 87th Ann. Meet., Atlanta, 1-6 March, 1987. Washington, D.C. 1987 -P. 113

183. Granstrom M., Lindeberg A., Askeloef P.et al. Detection of antibodies in human serum against the fimbrial haemagglutinin of Bordetella pertussis by enzyme-linked immunosorbent assay//J. Med. Mikrobiol.- 1982.-V.15, №1 P. 85-96.

184. Greco D., Salmaso S., Mastrantonio P. et al. A controlled trial of two acellular vaccines and one whole-cell vaccine against pertussis // N. Engl. J. Med. 1996. - № 334. - P. 341-348.

185. Greenberg D.P., Wong V.K., Partridge S., et al. Evaluation of a new combination vaccine that incorporates diphtheria-tetanus-acellu|ar pertussis

186. DTaP), hepatitis В (HB) and Haemophilus influenzae type b conjugated (PRP-T) vaccine abstr. 602. Abstracts of the 35lh Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy, American Society for Microbiology; Washington, DC; 1995.

187. Greenberg L., Fleming D.S. The immunizing efficacy of diphtheria toxoid when combined with various antigens // Can. J. Public. Health. 1948. - № 39. - P. 131-135.

188. Guesdon J.L., Ternynck Т., Avrameas S. The use of avidin-biotin interaction in immunoenzymatic techniques // J. Histochem. Cytochem. -1979. V. 27, № 2. - P. 1131-1139.

189. Guiso Nicole. Bordetella pertussis Variants, Vaccines and Animal Models // Millennium second world congress on vaccines and immunization. Amphitheaters of Europe, Liege, Belgium. August 29 - September 3, 2000.-S1-4.

190. Gupta R.H., Maheshwari S.C., Singh H. The titration of tetanus antitoxin IV. Studies on the sensitivity and reproducibility of the toxin neutralization test // J. Biol. Stand. 1985. - V. 13. - P. 143-149.

191. Gupta R.K., Highman S., Gupta C.K., Rost В., Siber G.R. Suitability of the Vero cell method for titration of diphtheria antitoxin in the United States potency test for diphtheria toxoid // Biologicals. 1994. -*• V. 22. - P. 65-72.

192. Gupta R.K., Maheshwari S.C., Singh H. The titration of tetanus antitoxin II. A comparative evaluation of the indirect haemagglutination and toxin neutralization test // J. Biol. Stand. 1984. - V. 12.-P. 137-143.

193. Gupta R.K., Maheshwari S.C., Singh H. The titration of tetanus antitoxin III. A comparative evaluation of the indirect haemagglutination and toxin neutralization titres of human sera // J. Biol. Stand. 1984. - V. 12. - P. 145149.

194. Gupta R.K., Siber G.R. Comparative analysis of tetanus antitoxin titers of sera from immunized mice and guinea pigs determined by toxin neutralization test and enzyme-linked immunosorbent assay // Biologicals. -1994.-V. 22.-P. 215-219.

195. Guris D., Strebel P.M., Bardenheier В., et al. Changing epidemiology of pertussis in the United States: Increasing reported incidence among adolescents and adults, 1990-1996 // Clin. Inf. Dis. 1999 - V. 28 - P. 12301237

196. Gustafsson L., Hallander H.O., Olin P. et al. A controlled trial of a two-component acellular, a five-component acellular, and a whole-cell pertussis vaccine // N. Engl. J. Med. 1996. - V. 334. - P. 349-355.

197. Hagenaars A.M., van Delft R.W., Nagel J. Comparison of ELISA and toxin neutralization for the determination of tetanus antibodies // J. Immunoassay. 1984. - № 5. - P. 1-11.

198. Haider S.C.,Francis D.P., Maynard J.E.,et al. Long-term Immunogenicity and Efficacy of Hepatitis В Vaccine in Homosexual Men. // New Eng J. Med .- 1986.-№315.-P. 209-214.

199. Halperin S.A., Langley J.M., Eastwood B.J. Effect of inactivated poliovirus vaccine on the antibody response to Bordetella pertussis antigens when combined with diphtheria-pertussis-tetanus vaccine // Clin. Infect. Dis. 1996.-№22.-P. 59-62.

200. Hanlon M.G., Nambiar R., Kakakios A.M. et al. Pertussis antibody levels in infants immunized with an acellular pertussis component vaccine, measured using whole-cell pertussis ELISA // Immunology and Cell Biology. 2000. - V. 78, № 3. - P. 254-258.

201. Hardy IRB, Dittmann S, Sutter RW. Current situation and control strategies for resurgence of diphtheria in newly independent states of the former Soviet Union. // Lancet. 1996. - V. 347. - P. 1739-1744.

202. Harmer J.G., Samuel D. The FJTS-anti- FJTS system is a sensitive alternative to biotin-streptavidin in ELISA // J. Immunol. Meth. 1989. -V.122, № 1. - P. 115-121.

203. Haum M., Wasi safia. Biotinylated antibodies bound to streptavidin beads: a versatile solid matrix for immunoassays // Analyt. Biochem.- 1990.-V.191.-P. 337-342.

204. Henderson D.A., Witte J.J., Morris L., Langmuir A.D. Paralytic disease associated with oral polio vaccines // JAMA. 1964. - № 190 - P. 41-48.

205. Hendriksen C.F.M., Gun J.W. Animal models an alternatives in the quality control of vaccines//ALTA.- 1995.-V. 23, № l.-P. 61-73.

206. Hessel Luc. A new Hexavalent DtacP-IPV-HB Vaccine: Overview of its Clinical Profile // Millennium second world congress on vaccines and immunization. Amphitheaters of Europe, Liege, Belgium. August 29 -September 3, 2000. -Sl-3.

207. Hessel Luc. Vaccine Safety Risk Communication The Industry's Perspective // Millennium second world congress on vaccines and immunization. Amphitheaters of Europe, Liege, Belgium. - August 29 -September 3, 2000. - W10-7.

208. Hilderbrand R.L. Elisa (Enzyme-linked immunosorbent Asay) // In Rapid Diagnosis in Infectious Disease. CRC Press.- New York. 1979. - P. 71-88.

209. Hollinger F.B. Factors influencing the immune Response to Hepatitis В Vaccine, Booster Dose Guidelines, and Vaccine Protocol Recommendations. // Am J. med .-1989. 87. - (ЗА Suppl.) - P. 36-40.

210. Howard C.R. Viral hepatitis: diagnosis treatment and prevention. International Symposium on viral hepatitis. San Francisco March 8-10. -1984. Immunology today. - 5/№7.- P. 185-188.

211. Insel R.A. Potential alterations in immunogenicity by combining or simultaneously administering vaccine components // Ann. N.Y. Acad. Sci. -1995.-V. 754.-P. 35-47.

212. Jacob E., Arendt D.M., Brook I. et al. Enzyme-linked immunosorbent assay for detection of antibodies to Staphylococcus aureus cell walls in experimental osteomyelitis // J. Clin. Microbiol. 1985. - V. 22, № 4. - P. 547-552.

213. Jadhav S.S., Gairola S. Composition of acellular pertussis and combination vaccines: a general review // Biologicals 1999 - V. 27 - P. 105-110.

214. Jilg W., Sshmidt M., Zachoval R.et al. Persistenz von Antikorpern gegen Hepatitis B-Oberflachen antigen nach impfung gegen Hepatitis B. // Dtsch. Med. Wsch. - 1985. - Bd. 110. - S. 205-209.

215. John T.J., Selvakumar R., Balrai V., Simoes E.A.F. Antibody response to measles vaccine with DTPP // Am. J. Dis. Child. 1987. - V. 141. - P. 14.

216. Just M., Berger R., Just V. Evaluation of a combined measles-mumps-rubella-chickenpox vaccine // Dev. Biol. Stand. 1986. - V. 65. - P. 85-88.

217. Kanra G., Geyhan M., Ecevit Z., et al. Primary vaccination of infants with a combined diphtheria-tetanus-acellular pertussis-hepatitis В vaccine // Pediatr. Infect. Dis. J. 1995. - V. 14. - P. 998-1000.

218. Kaplan S.L., Lauer B.A., Ward M.A., et al. Immunogenicity and safety of Haemophilus influenzae type b tetanus protein conjugate vaccine alone or mixed with diphtheria-tetanus-pertussis vaccine in infants // J. Pediatr. -1994.-V. 124.-P. 323-327.

219. Keitel W.A. Cellular and acellular pertussis vaccines in adults // Clin. Inf. Dis.- 1999.-V. 28.- P.l 18-123.

220. Kendall C., Ionescu-Matin I., Dreesman G.R. Utilization of the biotin/avidin system to amplify the sensitivity of the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) // J. Immunol. Methods. 1983. - V. 56, № 3.-P. 329-339.

221. Kimura M., Kuno-Sakai H., Kunita N., Isomura S. et al. Эпидемиология коклюша и изучение серопозитивных случаев в Японии. // J. Jap. Assoc. Infec. Diseases. 1996. - V. 70, № 1. - P. 19-28.

222. Knight P.A. The use of ELISA for the assay of antitoxins from human and laboratory animals. In: Manclark CR (Ed.) Proceedings of an Informal Consultation on the World Health Organization Requirements for

223. Diphtheria, Tetanus, Pertussis and Combined Vaccines held at Geneva on May 30-June 1, 1988. Department of Health and Human Services, United States Public Health Service, Bethesda (DHHS Publication No. (FDA) 911174, 1991; pp. 123-126.

224. Kristiansen M., Aggerbeck H., Heron I. Improved ELISA for determination of anti-diphtheria and/or antitetanus antitoxin antibodies in sera // APMIS, 1997. V. 105, № 11. - P. 843-853.

225. Laemmli V.K. Cleavage of structural proteins dying the assembly of the head of Bacteriophage T // Nature. 1970. - V. 227. - P. 678-680.

226. Lema F. ELISA for detection of human antibodies to Chlamydiae // J. Immunol. Meth.- 1986.-V. 94, № 1-2.-P. 153-159.

227. Leroux-Roels G., Moreau W., Desombere A., Safary A. Safety and immunogenicity of a combined hepatitis A and hepatitis В vaccine in young healthy adults//Scand. J. Gastroenterol. 1996. - №31. -P. 1027-1031.

228. Maggio E.T. Enzyme immunoassay //Ed. Maggio E.T. Florida: CRS Press, Boca Raton. 1981. - P. 5-70.

229. Mandre R. Vaccination contre la coqueluche // Vie med. 1979. - V.60, №2.-P. 1793-1798.

230. Marmick C. Pertussis vaccines: trials (and tribulations) // JAMA., 1988 - V. 259, № 14 - P. 2054-2059.

231. McLaren M.L. Lillywhithe J. .E Au A. C. S. Indirkt enzyme linked immunosorbent assay (ELISA): practical aspects of standartization and quality control. Med. Lab. Sci., 1981, V. 38 P. 245 -251.

232. Megret F., Guesdon J.-L., Alouf J.E. Solid phase enzyme immunoassays of pertussis toxin using peroxidase or biotin labeled antibodies // J. of Immunoassay 1987. - V. 8, № 1. - P. 43-71.

233. Melville-Smith M.E., Balfour.A. Estimation of Corynebacterium diphtheriae antitoxin in human sera: a comparison of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) with the toxin neutralization test // J. Med. Microbiol. 1988. - V. 25. - P. 279-283.

234. Meschievitz C., Blatter M., Starr S., Fritzell B. Safety and immunogenicity of IPV only or a sequential schedule of IPV (given separately or in combination with DTP) followed by OPV abstract Н089.iL

235. Abstracts of the 36 Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy, American Society for Microbiology; Washington, DC; 1996.

236. Millman I. and McMichael J.C. Glycoprotein of natural origin with an affinity for hepatitis В surface antigen. Infection and Immunity. 21:879885.1978.

237. Morris R.E., Saelinger C.B. The Avidin-biotin system // Imm. Today -1984. V. 5. - P. 127.

238. Mullholland E.K., Hoestermann A., Ward J.I., et al. The use of Haemophilus influenzae type b tetanus toxoid conjugate vaccine mixed with diphtheria-tetanus-pertussis vaccine in Gambian infants // Vaccine. -1996.-V. 14.-P. 905-909.

239. Mushahwar I.K., Dienstag J.L.,Polesky H.F. et al. Interpretation of various serological profiles of hepatitis В virus infection // Amer. J. Clin. Pathol. 1981.-V. 76.-P. 773-777

240. Nakano P.K., Kawaoi A. Peroxidase-labeled antibody. A new method of conjugation//J. Histochem., Citochem. 1974. - V.22, №12.-P. 1084-1091.

241. National Committee for Clinical Laboratori Standards. Protection of laboratory workers form infectious disease transmitted by blood, body fluids, and tissue: Tentative guideline. NCCLS Document M29-T. Villanova P.A.-NCCLS, 1989.

242. Nilsson Bertil. A general reagent for amplifying ELISA // Immunological Methods. 1988. - №114. - P. 89-93.

243. O'Connor E., Roberts E.M., Davies J.D. Amplification of cytokine-specific ELISAs increases the sensitivity of detection to 5-20 picograms per milliliter//Journal of Immunological Methods. 1999. - V. 229, № 1-2. -P. 155-160.

244. Pain D., Surolia A. Preparation of protein A-peroxidase monoconjugate using a heterobifunctional reagent, and its use in enzyme immunoassay // J. Immunol. Meth. 1981. - V. 40. - P. 219-230.

245. Papaevangelou G. Current combined vaccines with hepatitis В // Vaccine. 1998.-V. 16.-P. 69-72.

246. Peel M.M. Measurement of tetanus antitoxin I. Indirect haemagglutination //J. Biol. Stand.- 1980.-V. 8.-P. 177-189.

247. Peter R. Paradiso. Recent research trends in pediatric vaccination -towards combination vaccines // Millennium second world congress on vaccines and immunization. Amphitheaters of Europe, Liege, Belgium. -August 29 September 3, 2000. - PS 1 -3.

248. Peters R.L., Collins M.J., O'Beirne A.J. et al. Enzyme-linked immunosorbent assay for detection of antibodies to murine hepatitis virus // J. Clin. Microbiol. 1979. № 10. - P. 595-597.

249. Pitzurra M, Bistoni F, Pitzurra L, Marconi P. Use of turkey red blood cells in the passive haemagglutination test for studying tetanus immunity // Bull World Org. 1983. - V. 61, № 2. - P. 331-338.

250. Pizza M., Covacci A., Bartoloni A. et al. Mutants of pertussis toxin suitable for vaccine development // Science. 1989. - V. 246. - P. 497-500.

251. Placebo-controlled trial of two acellular vaccines in Sweden protective efficacy and adverse events // Lancet - 1988 - № 8592 - P. 955-960.

252. Pollok T.M., Miller E., Mortimer J.Y., Smith G. Symptoms after primary immunisation with DTP and with DT vaccine // Lancet. 1989.- P. 146-149.

253. Potgieter L.N., Rouse B.T., Webb-Martin T.A. Enzyme-linked immunosorbent assay, using staphylococcal protein A for detecting virus antibodies // Amer. J. Vet. Res. 1980. - V. 41, № 6. - P. 978-980.

254. Prince A.M., Brotman B. Proceedings of a symposium on viral hepatitis.-San Francisco March 8-10 .-1984. New-York Gruel and Stratton .-1984.

255. Quantitation of Salmonella O-antibodies in human sera by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) / H.E. Carlsson, A.A. Lindberg, S. Hammarstrom, A. Ljunggren // Int. Arch. Allergy. 1975. - V. 48. - P. 485494.

256. Rao T.V.S., Malik P., Asgola D. Evaluation of avidin-biotin ELISA for the detection of antibodies to goat poxvirus using noninfectious diagnostic reagent//Acta Virologica. 1999.- V. 43, № 5. - P. 297-301.

257. Read G.F., Williams P.E. Evaluation of assays of serum IgG subclasses and IgG antigen-specific antibodies in the investigation of recurrent infection // Annals of Clinical Biochemistry. 2000. - V. 37, № 3. - P. 326-329.

258. Recommendations of the immunization Practices Advisory Committee. Update on Hepatitis B.

259. Rosenthal S., Chen R., Hadler S. The safety of acellular pertussis vaccine vs whole-cell pertussis vaccine: A postmarketing assessment // Arch, of Pediatr. & Adol. Med. 1996 - V. 150 - P. 457-460

260. Rothstein E.P., Anderson E.L., Decker M.D., et al. An acellular pertussis vaccine in healthy adults: safety and immunogenicity // Vaccine. 1999. -V.l7. - P. 2999-3006.

261. Rumke H.C., Schlumberger M., Floury B. et al. Serological evaluation of a simplified immunization schedule using quadruple DPT-polio vaccine in Burkina Faso. Vaccine. - 1993.- V. 11.-P. 1113-1118.

262. Ruuskanen O., Viljanen M.K., Salmi ТТ., et al. DTP and DTP-inactivated polio vaccines: Comparison of adverse reactions and IgG, IgM and IgE antibody responses to DTP // Acta Pediatr. Scand. 1980. - V. 69. - P. 177182.

263. Salmaso S., Piscitelli A., Rapicetta M., et al. Immunogenicity of hepatitis В vaccines among infant recipients of acellular and whole cell pertussis DTP vaccines // Vaccine. 1998. - V. 16. - P. 643-646.

264. Sato H., Sato Y. Experience with diphtheria toxoid-tetanus toxoid-acellular pertussis vaccine in Japan // Clin. Inf. Dis. 1999 - V. 28 - P. 124-S130.

265. Sato Y., Kimura M., Fukumi H. Development of a pertussis component vaccine in Japan // Lancet. 1984. - № 86396 - P. 122-126.

266. Schleifele D., Barreto L., Meekison W. et. al. Can Haemophilus influenzae type b-tetanus toxoid conjugate vaccine be combined with diphtheria toxoid-pertussis vaccine-tetanus toxoid? // Can. Med. Assoc. J. -1993.-V. 149. P. 1105-1112.

267. Schmitt H.J., vonKonig C.H.W., Zepp F. et al. Immunogenicity and reactogenicity of HbOC vaccine administered simultaneously with acellular pertussis vaccine (DtaP) into either arms or thighs of infants // Infection. -1997. V. 25, № 5. - P. 298-302.

268. Sehulster L.M., Hollinger F.B., Dreesman G.R. et al. Immunological and biophysical alteration of Hepatitis В virus antigens by sodium hypochloride disinfection// Appl. and Envir. Microbiol. 1981. - V. 42. - P. 762-767

269. Shahin R.D., Brennan M.J., Li Z.M., et al. Characterization of the protection capacity and immunogenicity of the 69-kD outer membrane protein of Bordetella pertussis sll J. Exp. Med. 1990. - V. 171. - P. 63-73.

270. Simoes E.A.F., Balraj V., Selvakumar R., John T.J. Antibody response of children to measles vaccine mixed with diphtheria-pertussis-tetanus or diphtheria-pertussis-tetanus-poliomyelitis vaccine // Am. J. Dis. Chil. — 1988.-V. 142.-P. 309-311.

271. Simonsen O., Bentzon M.W., Heron I. ELISA for routine determination of antitoxic immunity to tetanus // J. Biol. Stand. 1986. - V. 14. - P. 231 -240.

272. Simonsen O., Sebou C., Heron I. Modification of the ELISA for the estimation of tetanus antitoxin in human sera // J. Biol. Stand. 1987. - V. 15,№ l.-P. 143-157.

273. Spiller V., Barnes J.M., Holt L.B., Cullington D.E. Immunization against diphtheria and whooping-cough: Combined v. separate inoculations // BMJ. 1955.-V. 2.-P. 639-642.

274. State of the world's vaccines and immunization. WHO, UNICEF, Geneva 1996.

275. Stoeckel P., Schlumberger M., Parent G. et al. Use of killed poliovirus vaccine in a routine immunization program in West Africa // Rev. Infect. Dis. 1984. - V. 6. - P. 463-466.

276. Summary of notifiable diseases, United States, 1996 // MMWR. 1996. -V. 45.-P. 73.

277. Svenson S.B., Larsen K. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) for determination of diphtheria toxin antibodies // J. Immunol. Meth. -1977.-V. 17.-P. 249-256.

278. Taranger J., Trollfors В., Lagergard Т., Robbins J.B. Protection against pertussis with a monocomponent pertussis toxoid vaccine // Biologicals -1999-V. 27- P. 89

279. Thoelen S., Van Damme P., Mathei C. and al. Safety and immunogenicity of hepatitis В vaccine formulated with a novel adjuvant system // Vaccine. -1998. V. 16, № 7. - P. 708-714.

280. Tiollais P.,Charnay P.,Vyas G.N. Biology of hepatitis В virus Science. -1981. V. 213, № 64. - P. 406-411.

281. Tormans G., vanDoorslaer E., vanDamme P., et al. Economic evaluation of pertussis prevention by whole-cell and acellular vaccine in Germany // Eur. J. of Pediatr. 1998 - V. 157 - P. 395-401

282. Triebel F., Autran В., Roquefeuil S. et al. Immune response to diphtheria toxin and to different fragments: evidence for different В and T cell reactivity//Eur. J. Immunol.- 1986. V. 16, № l.-P. 47-53.

283. Tsega E., Tafesse В., Nordenfelt E. et al. Immunogenicity of hepatitis В simultaneously administered with the Expanded Programme on Immunization (EPI) // J. Med. Virol. 1990. - V. 32. - P. 232-235.

284. U.S. Department of Health and Human Services. Biosafety in microbiological laboratories. HHS Publication (NIH) 88-8395. Washington: U.S. Government Printing Office, May 1988.

285. U.S. Environmental Protection Agency. EPA quide for infectious waste management. Washington, DC: U.S. Environmental Protection Agency, Publication No. EPA/530-5W-56-014, 1986.

286. Usonis V., Bakasenas V., Taylor D., Vandapapaliere P. Immunogenicity and reactogenicity of a combined DTPw-hepatitis В vaccine in Lithuanian infants//Eur. J. Pediatr.- 1996. V. 155.-P. 189-193.

287. Vaccination now: the right of children / CVI Form November 1998, 17, p. 2-12.

288. VanDamme H., VanVelthoven Т., Kaelen E., Pelssers E. Fluid elements -A concept for automation of diagnostic tests // Clinical Chemistry. 1997. -V.43, № 2. - P. 369-378.

289. VanderWielen M., VanDamme P., Joossens E. et al. A randomized controlled trial with a diphtheria-tetanus-acellular pertussis (DTpa) vaccine in adults // Vaccine 2000 - V. 18 - P. 2075-2082

290. Verbrugh H.A., Peters R., Goessens W.H.F., Mishel M.F. Distinguishing complicated from uncomplicated bacteriaemia caused by St. aureus: The value of "new" and "old" serological tests // J. Infect. Dis. 1986. - V. 153. -P. 109-115.

291. Vesikari Т., Ohrling A., Baer M. et al. Evaluation of live attenuated varicella vaccine (Oka-RIT strain) and combined varicella and MMR vaccination in 13-17-month-old children // Acta Paediatr. Scand. 1991 - V. 80.-P. 1051-1057.

292. VonHunolstein C., Aggerbeck H., Andrews N. et al. European Sero-epidemiology Network: standardization of the results of diphtheria antitoxin assay // Vaccine. 2000. - V. 18, № 28. - P. 3287-3296.

293. Walory J., Gizesiowski P., Hryniewicz W. Comparison of four serological methods for the detection of diphtheria antitoxin antibodies // Journal of Immunological Methods. 2000. - V. 245, № 1-2. - P. 55-65.

294. Watson B.M., Laufer D.C., Kuter B.J. et al. Safety and immunogenicity of a combined live attenuated measles, mumps, rubella, and varicella vaccine (MMRhV) in healthy children // J. Infect. Dis. 1996. - V. 173. - P. 731734.

295. West D.J., Hesley T.M., Jonas L.C. Safety and immunogenicity of a bivalent Haemophilus influenzae type b/hepatitis В vaccine in healthy infants // Pediatr. Infect. Dis. J. 1997. - V. 16. - P. 593-599.

296. West Т.Е., Cantey J.R., Burdash N.M., Apicella M.A. Enzyme-linked immunosorbent assay for detection immunoglobulin G and M antibodies toteichoic acid in intravascular staphylococcal disease // Eur. J. Clin. Microbiol. 1985. - V. 4, № 3. - P. 286-290.

297. Westdijk J., vandenljssel J., Thalen M. et al. Quantification of cell-associated and free antigens in Bordetella pertussis suspensions by antigen binding ELISA // Journal of Immunoassay. 1997. - V. 18, № 3. - P. 267284.

298. White C.J., Stinson D., Staehle B. et al. Measles, mumps, rubella and varicella combination vaccine: Safety and immunogenicity alone and in combination with other vaccines given in children // Clin. Infect. Dis. — 1997.-№24.-P. 925-931.

299. WHO Expert Committee on Biological Standardization. World. Health Organization Technical Report. Series 658/31. Geneva, 1981.

300. Williams J.C., Goldenthal K.L., Burns D.L., Lewis B.P. Jr. (eds.) Combined vaccines and simultaneous administration: Current issues and perspectives. Ann. New York Acad. Sci. 754:xi-404, 1995.

301. Win K.M., Aye M., Htay-Htay H. et al. Comparison and separate and mixed administration of DTPw-HBV and Hib vaccines: Immunogenicity and reactogenicity profiles // Int. J. Infect. Dis. 1997. - V.2. - P. 79-84.

302. Wong WCW, Tsang KK. A mass hepatitis В vaccination programme in Taiwan: its preparation, results and reasons for uncompleted vaccinations // Vaccine. 1994. - V. 12. - P. 229-234.

303. World Bank // World development Report: investing in health. Oxford University, N.Y., 1993.

304. World Health Organization. Epidemiology of diphtheria in the newly independent states of the former USSR // January 1995 March 1996.-Wkly Epidemiol. Rec. 1996. - V. 71. - P. 245-250.

305. World Health Organization. Informal consultation on quadrivalent diphtheria tetanus - pertussis - hepatitis В vaccine. Geneva 7-8 May 1992.

306. World Health Organization. Laboratory biosafety manual. World Health Organization. Geneva, 1983.

307. Yolken R.H. Enzyme immunoassay for the detection of infections antigens in body fluids: current limitations and future prospects // Rev. Infect. Dis. 1982. - V. 4, № 1. - P. 35-68.

308. Yolken R.H. Enzyme immunoassay for the detection of microbial antigens in body fluids // Pure and Appl. Chem. 1985. - V. 57, № 4. - P. 583-586.

309. Yolken R.H., Leister F.J., Whitcomb L.S., Santosham M. Enzyme immunoassay for the detection of bacterial antigens utilizing biotin-labeled antibody and peroxidase biotin-avidin complex // J. Immunol. Methods -1983. V. 56.-P. 319-327.

310. Zackrisson G., Lagergard Т., Lonnroth H. An enzyme-linked immunosorbent assay method for detection of immunoglobulins to pertussis toxin // Acta Pathol. Microbiol. Scand.: Sect. C. Immunol. 1986. - V. 94, № 6. - P. 227-233.