Технологические приемы получения концентратов аллоантител к эндотоксину Pseudomonas aeruginosa тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Лазыкина, Анна Викторовна

• Лазыкина, Анна Викторовна
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Лазыкина, Анна Викторовна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. СИНЕГНОЙНАЯ ИНФЕКЦИЯ И ВОЗМОЖНОСТИ

ПРИМЕНЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ.

1.1 Синегнойная инфекция

1.1.1. Особенности формирования госпитальных штаммов

P. aeruginosa

1.1.2. Факторы патогенности P.aeruginosa

1.1.3. Строение эндотоксина P.aeruginosa.

1.1.4. Протективная активность и лечебная эффективность концентратов антител к ЛПС P.aeruginosa

1.2. Методы получения препаратов иммуноглобулинов.

1.2.1. Получение препаратов иммуноглобулина G для внутривенного введения.

1.2.2. Получение IgM-содержащих препаратов иммуноглобулина

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Методы заготовки плазмы доноров

2.2. Методы определения специфической активности образцов сыворотки и плазмы донорской крови и концентратов антител

3.3. Изучение стабильности антител в плазме при хранении

2.4. Методы получения концентратов антител.

2.5. Методы изучения физико-химических и иммунобиологических свойств концентратов антител.

2.6. Экспериментальная оценка лечебной эффективности иммуноглобулина для внутривенного введения

2.7. Статистический анализ.

Глава 3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТРЕБОВАНИЙ К ИСХОДНОМУ СЫРЬЮ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ КОНЦЕНТРАТОВ АНТИТЕЛ К ЭНДОТОКСИНУ P.aeruginosa

3.1. Оценка содержания антител к эндотоксину синегнойной палочки в коммерческих препаратах иммуноглобулина

3.2. Изучение содержания антител к эндотоксину P.aeruginosa в плазме неиммунизированных доноров

3.3. Определение содержания антител к эндотоксину P. aeruginosa в плазме доноров, иммунизированных синегнойной вакциной.

3.4. Стабильность антител к эндотоксину P.aeruginosa в плазме при хранении.

Глава 4. ПОЛУЧЕННОЕ КОНЦЕНТРАТОВ АНТИТЕЛ ИЗ ПЛАЗМЫ, СОДЕРЖАЩЕЙ АНТИТЕЛА К ЭНДОТОКСИНУ P. aeruginosa, И ИЗУЧЕНИЕ ИХ СВОЙСТВ

4.1. Оценка возможности получения концентрата иммуноглобулина G для внутривенного введения, высокоактивного в отношении эндотоксина P. aeruginosa

4.1.1. Иммуноглобулин для внутривенного введения, полученный из антисинегнойной плазмы

4.1.2. Изучение лечебной эффективности иммуноглобулина для внутривенного введения в эксперименте

4.2. Получение IgM-содержащего концентрата антител путем обработки цельной плазмы мягкими осадителями и изучение его свойств.

4.3. IgM-содержащий концентрат антител, полученный из осадка фракции II+III.

4.3.1. Разработка технологической схемы получения

IgM-содержащего концентрата антител из осадка фракции П+Ш.Ю

4.3.2. Изучение физико-химических и иммунобиологических свойств ^М-содержащего концентрата, выделенного из осадка П+Ш.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Технологические приемы получения концентратов аллоантител к эндотоксину Pseudomonas aeruginosa»

Актуальность проблемы.

За последние 20 лет в структуре гнойно-септических осложнений существенно возросла роль инфекций, вызываемых условно-патогенными грамот-рицательными микроорганизмами [7,18,29,31,64,73,103,133,136,140,167, 209]. Среди них видное место занимает синегнойная инфекция, поражающая, как правило, иммунокомпрометированных пациентов [17]. Синегнойная палочка (СП) является самым частым возбудителем нозокомиальных пневмоний (до 68 % всех случаев), причиной более 60 % осложнений ожоговой болезни, более 70 % осложнений у пациентов палат интенсивной терапии и отделений реанимации [69,94]. К группе риска относятся пациенты хирургических стационаров всех профилей [89], пациенты с онкологическими заболеваниями [87,163,228], патологией дыхательного тракта [137,213], заболеваниями почек и мочевыводящих путей [194]. Среди инфекционных больных P. aeruginosa наиболее часто осложняет состояние пациентов со стафилококковой инфекцией (пневмония, сепсис), корью и туберкулезом, может развиваться у детей с ОРВИ и пневмониями любой этиологии [89]. Весьма уязвимым для P. aeruginosa контингентом являются новорожденные и, особенно, недоношенные дети [116,122,144,145,168,176]. Лечение синегнойной инфекции затруднено выраженной природной и приобретенной устойчивостью P.aeruginosa к воздействию антибактериальных химиопрепаратов, а также ослабленным состоянием иммунной системы пациентов [15,29,97,104,164,167,189]. Летальность при некоторых формах синегнойной инфекции может достигать 60.80 % [7,60], а при очаговом сепсисе - 90 % [10].

Тяжесть клинической картины синегнойной инфекции связывают с наличием у возбудителя многочисленных факторов патогенности, и прежде всего, эндотоксина - высокотоксичного макромолекулярного компонента клеточной стенки P.aeruginosa [28,34], высвобождение которого происходит 7 вследствие разрушения клеток СП, в том числе и с помощью антибактериальных терапевтических средств [114,170]. Попадая в системный кровоток, эндотоксин способен вызывать различные патологические процессы, ведущие к развитию синдрома эндогенной интоксикации, эндотоксинового шока и гибели больных [28,50,188,217].

В работах многих авторов было показано, что защита от эндотоксиче-ского шока возможна с помощью введения препаратов специфических антител (АТ) [131,146,208,231]. В нашей стране с этой целью применяется антиси-негнойная плазма, заготовленная от иммунизированных доноров, или же отобранная методом серологического скрининга на наличие АТ к липополисаха-риду (ЛПС) СП [16,20,24,43,74,84,100]. Однако, как известно, введение пациентам донорской плазмы сопряжено с риском сенсибилизации реципиента многочисленными белковыми антигенами, а также опасностью развития по-сттранфузионных осложнений, связанных с возможной вирусной контаминацией плазмы [112,124].

В литературе обсуждается ряд направлений развития иммунотерапии синегнойной инфекции. Одно из них связано с применением иммуноглобулина для внутривенного введения как наиболее рациональной и безопасной формы использования иммунного потенциала донорской плазмы [112, 118,119,120,126,132,184]. Другим перспективным направлением является использование в терапевтических целях специфических концентратов АТ класса 1§М, которые обладают наиболее выраженной протективной активностью и лечебной эффективностью в отношении инфекций, вызываемых грамотрица-тельными микроорганизмами [65,131,198].

На сегодняшний день в России отечественный антисинегнойный иммуноглобулин для внутривенного введения отсутствует, а препараты, содержащие в терапевтически значимых количествах иммуноглобулин класса ^М, I представлены только лекарственными формами для перорального и ректаль- / / ного применения и предназначены для терапии кишечных расстройств 8

21,45,47]. Таким образом, разработка технологических схем получения препаратов иммуноглобулина человека, содержащих AT к эндотоксину P.aeruginosa является актуальной задачей, решение которой позволит в конечном счете повысить эффективность терапии синегнойной инфекции.

Целью настоящего исследования явилась разработка технологических схем получения концентратов аллоантител к эндотоксину P.aeruginosa.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

1. Изучить содержание AT к ЛПС P.aeruginosa в плазме неиммунизированных доноров, а также доноров, иммунизированных вакциной синегной ^) ной, поливалентной, корпускулярной, инактивированной, жидкой. ^ t

2. Определить условия и сроки хранения плазмы крови доноров, содержащей AT к ЛПС P.aeruginosa.

3. Оценить возможность применения метода кислотно-ферментативного гидролиза раствора иммуноглобулина с целью получения внутривенного концентрата AT к эндотоксину СП.

4. Получить образцы концентратов AT, содержащих иммуноглобулин класса IgM, и оценить их серологическую активность в отношении ЛПС P.aeruginosa.

5. Изучить физико-химические и иммунобиологические свойства полученных IgM-содержащих концентратов AT.

Работа выполнена в рамках темы научно-исследовательской работы Кировского НИИ гематологии и переливания крови (КНИИГПК) «Разработка технологии получения антисинегнойного иммуноглобулина для внутривенного введения».

Научная новизна.

Проведена оценка возможности использования общепринятой технологической схемы производства иммуноглобулина для внутривенного 9 введения с применением спиртового фракционирования и последующего кислотно-ферментативного гидролиза раствора иммуноглобулина для получения из плазмы неиммунизированных и вакцинированных доноров внутривенного иммуноглобулина G, содержащего AT к ЛПС P.aeruginosa. Получены новые данные о распределении AT, обладающих активностью к эндотоксину СП, по фракциям при спиртовом осаждении белков плазмы крови доноров.

Путем обработки цельной плазмы мягкими осадителями получены образцы IgM-содержащего концентрата AT, охарактеризованы их физико-химические и иммунобиологические свойства, а также специфическая активность в отношении ЛПС P.aeruginosa.

Разработана оригинальная схема получения IgM-содержащего концентрата AT, включающая этанольное фракционирование плазмы до стадии осадка II+III, суспендирование осадка и его последовательную обработку мягкими осадителями. Изучены физико-химические и иммунобиологические свойства образцов концентрата AT, полученных по указанной схеме, выявлено высокое содержание в них AT к ЛПС P.aeruginosa. По материалам исследования подана заявка на патент «Способ получения IgM-содержащего концентрата иммуноглобулина» (№ 99112728).

Практическая значимость.

Обоснована и внедрена в практику работы Стации переливания крови Кировского НИИ гематологии и переливания крови заготовка антисинегной-ной плазмы методом серологического скрининга образцов сыворотки крови доноров на наличие AT к ЛПС P.aeruginosa с помощью РПГА, а также путем иммунизации доноров вакциной синегнойной, поливалентной, корпускулярной, инактивированной, жидкой.

Разработаны требования к хранению антисинегнойной донорской плазмы.

Определены условия выделения IgM-содержащего концентрата AT, которые применяются в работе по созданию технологической схемы произвол

10 ства IgM-содержащего препарата иммуноглобулина человека для внутривенного введения.

Материалы исследования используются в преподавании на кафедре гематологии и трансфузиологии Факультета усовершенствования врачей Пермской государственной медицинской академии на базе Кировского НИИ гематологии и переливания крови.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Серологический скрининг плазмы донорской крови методом РПГА позволяет заготавливать плазму с высокой серологической активностью в отношении ЛПС P.aeruginosa. Для увеличения объемов заготавливаемой анти-синегнойной плазмы целесообразно использовать активную иммунизацию доноров поливалентной корпускулярной синегнойной вакциной.

2. AT к ЛПС P. aeruginosa стабильны при хранении плазмы при температуре (6 ± 4) °С в течение 1 мес и при температуре не выше минус 20 °С в течение 6 мес.

3. Получение концентрата AT к эндотоксину СП методом кислотно-ферментативного гидролиза раствора иммуноглобулина, очищенного и концентрированного спиртовым фракционированием, в общем случае нерационально: титры специфических AT в готовых образцах не отличаются от таковых в исходной плазме и коммерческом иммуноглобулине нормальном человека для внутривенного введения, лечебная эффективность образцов по результатам экспериментальной апробации также не отличается от таковой иммуноглобулина нормального человека для внутривенного введения.

4. Значительная часть AT к эндотоксину СП, как естественных, так и образовавшихся после иммунизации доноров поливалентной корпускулярной вакциной, относится к классу IgM и попадает в осадок III, неиспользуемый при получении иммуноглобулина G для внутривенного введения. Концентраты AT, содержащие IgM, обладают более высокой серологической активно

11 стью в отношении ЛПС P.aeruginosa по сравнению с коммерческими препаратами иммуноглобулина.

5. Оригинальная технологическая схема позволяет получать IgM-содержащий концентрат AT с низкой АКА и высокой серологической активностью в отношении эндотоксина СП.

Апробация работы.

Основные результаты и положения работы доложены на научно-практической конференции «Препараты крови и кровезаменители - производство, контроль и клиническое применение», посвященной 35-летию Кировского НИИ гематологии и переливания (Киров, 1995 г.); 3-й международной конференции по службе крови стран Восточной Европы (С.-Петербург, 1996 г.); III Всероссийском съезде гематологов и трансфузиологов (С.Петербург, 1996 г.); совещании технологов службы крови (Москва, 1997 г.); конференции «Трансфузиология и служба крови» (Москва, 1998 г.) неоднократно докладывались на итоговых научных конференциях Кировского НИИ гематологии и переливания крови.

Объем и структура работы.

Диссертация изложена на 161 странице машинописи и состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием материалов и методов, двух глав с изложением результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы. Библиография включает 240 источников, из них 115 отечественных и 125 зарубежных. Диссертация иллюстрирована 18 рисунками и 32 таблицами.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Лазыкина, Анна Викторовна

ВЫВОДЫ

1. Для заготовки плазмы с высоким содержанием антител к эндотоксину /1

Ite^f 4

Pseudomonas aeruginosa целесообразно использовать метод серологического " . " " ""*"" '* > скрщинга. Применение вакцины синегнойной, поливалентной, корпускуляр- ^ ^ ной, инактивированной, жидкой для иммунизации доноров с низкой сероло- ^ гической активностью в отношении липополисахарида Pseudomonas aerugi- ^ щых антител да ч nosa приводит к достоверному увеличению титров т^-И? РъСм в сыворотке доноров в среднем в 3,3 раза, что указывает на необходимость^ ^ вакцинации для увеличения объемов заготавливаемой иммунной плазмы.

2. Содержание антител к липополисахариду Pseudomonas aeruginosa стабильно при хранении плазмы в течение 1 мес при температуре (6 ± 4) °С и 6 мес при температуре не выше минус 20 °С.

3. Значительная часть антител к эндотоксину Pseudomonas aeruginosa переходит в балластный осадок этанольного фракционирования плазмы. Кон

135 центраты антител для внутривенного введения, полученные из антисинегной-ной плазмы традиционным методом кислотно-ферментативного гидролиза раствора иммуноглобулина, очищенного и концентрированного спиртовым осаждением, по содержанию указанных антител in vitro и лечебной эффективности при экспериментальной синегнойной инфекции in vivo достоверно не отличаются от коммерческого иммуноглобулина нормального человека для внутривенного введения.

4. Получены образцы концентрата антител, содержащего иммуноглобулин класса М, стабильные при хранении и обладающие высоким содержанием антител к липополисахариду Pseudomonas aeruginosa классов G и М.

5. Разработана оригинальная технологическая схема получения концентрата антител, позволяющая повысить содержание иммуноглобулина класса М в готовом концентрате, снизить его антикомплементарную активность, увеличить содержание антител к эндотоксину Pseudomonas aeruginosa. Данная схема может применяться в основном технологическом процессе производства препаратов крови, принятым в России, и быть использована при создании технологии производства отечественного антисинегнойного препарата иммуноглобулина для внутривенного введения, содержащего иммуноглобулин класса М.

136

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Инфекционные осложнения, обусловленные грамотрицательными возбудителями, усугубляют течение целого ряда заболеваний, и даже в условиях современного развития медицинских технологий характеризуются высокой летальностью [134,136,140,159,170,187]. К числу таких осложнений относится синегнойная инфекция, этиологическая значимость которой особенно возросла за последние 20 лет [7,56,58,90,96]. Повышение устойчивости СП к применяемым антибактериальным средствам на фоне неблагоприятных изменений иммунного статуса населения диктует необходимость разработки новых высокоэффективных иммунных препаратов для терапии синегнойной инфекции [20,60,75].

В мировой клинической практике все более широкое применение находят концентраты AT - препараты иммуноглобулина [124,184,186]. Показано, что их использование позволяет снизить риск возникновения инфекционных осложнений, а также увеличить эффективность назначаемых антибактериальных средств [116,133]. При этом перспективы увеличения эффективности заместительной иммунотерапии связывают с созданием специфических имму-ноглобулиновых препаратов [2,66-68,92,107,110]. Следовательно, актуальность проблемы получения препаратов антисинегнойного иммуноглобулина несомненна.

Целью настоящего исследования явилась разработка технологических схем получения концентратов аллоантйтел к эндотоксину P.aeruginosa как одному из ведущих факторов патогенности синегнойной инфекции.

В ходе выполнения работы проведена оценка возможности получения концентратов AT к эндотоксину СП с применением трех методов: кислотно-ферментативного гидролиза раствора иммуноглобулина, щадящего фракционирования плазмы с использованием «мягких» осадителей, оригинальной схемы выделения IgM-содержащего концентрата AT. По материалам иссле

124 дования подана заявка на патент «Способ получения IgM-содержащего концентрата иммуноглобулина» № 99112728. Полученные результаты используются при заготовке и хранении антисинегнойной донорской плазмы и разработке технологии производства препарата иммуноглобулина для внутривенного введения, содержащего IgM.

Для оценки принципиальной возможности получения высокоактивного в отношении эндотоксина СП концентрата гомологичных АТ было изучено содержание АТ к ЛПС P. aeruginosa в коммерческих препаратах иммуноглобулина человека. Выявлено, что титры специфических АТ в отдельных сериях препаратов значительно варьируют, обнаружены 7. 10-кратные различия между минимальными и максимальными значениями. В 16,7 % серий препарата иммуноглобулина нормального человека для внутривенного введения методом РПГА выявлено содержание АТ к эндотоксину СП не менее 1:180. Установленные факты свидетельствуют о возможности получения из донорской плазмы концентрата АТ к ЛПС P.aeruginosa.

Специфическая активность готового концентрата АТ прямо пропорционально зависит от таковой исходного сырья - донорской плазмы [93]. В связи с этим мы сочли целесообразным на следующем этапе работы определить методику заготовки плазмы, содержащей АТ к эндотоксину СП, и требования к условиям ее хранения.

С помощью РПГА было изучено содержание АТ к эндотоксину СП в 673 индивидуальных образцах плазмы неиммунизированных доноров. Установлено, что все исследованные образцы содержали указанные АТ, причем плазма 13,4 % доноров обладала высокой серологической активностью в отношении ЛПС P.aeruginosa (> 1:320 в РПГА) и, согласно действующей нормативной документации, являлась антисинегнойной. Определенный практический интерес представляла оценка возможности иммунизации доноров для увеличения объемов заготавливаемого сырья. Вакцинацию 60 человек с ис

125 ходно низкой серологической активностью в отношении эндотоксина СП (в среднем 1:35) осуществляли вакциной синегнойной, поливалентной, корпускулярной, инактивированной, жидкой производства НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи. Применение синегнойной вакцины привело к достоверному увеличению титров AT к ЛПС P. aeruginosa в плазме доноров в среднем в 3,33 раза. Содержание AT к эндотоксину СП достигло максимальных значений через 1 месяц после вакцинации. К концу срока наблюдения (4 месяца) отмечено достоверное снижение титров по сравнению с максимальным уровнем, но они, тем не менее, оставались выше исходных.

Известно, что хранение плазмы ведет к потере ее специфической активности [92,107]. В связи с этим, обязательным этапом разработки технологии получения препарата иммуноглобулина любой специфичности является определение стабильности AT при хранении исходного сырья. Оценивали устойчивость AT к ЛПС P.aeruginosa в образцах плазмы 75 неиммунизированных и 28 вакцинированных доноров. Установлено, что AT к ЛПС P. aeruginosa стабильны при хранении в плазме. Их уровень остается без статистически значимых изменений в течение 1 месяца хранения при температуре (6±4)°С и 6 месяцев при температуре не выше минус 20 °С.

На основании полученных результатов мы можем рекомендовать для заготовки плазмы с высокой серологической активностью в отношении ЛПС P.aeruginosa метод серологического скрининга. С целью увеличения объемов заготавливаемого сырья можно дополнительно использовать иммунизацию доноров полив!алентной корпускулярной синегнойной вакциной. Срок хранения плазмы, содержащей антитела к эндотоксину СП, составляет 1 месяц при температуре (6±4)°С и 6 месяцев при температуре не выше минус 20 °С.

Анализ отечественной и зарубежной литературы убедительно показывает, что абсолютное большинство применяемых во всем мире препаратов иммуноглобулина получают с использованием метода этанольного фракционирования белков плазмы крови [123,124]. Концентраты иммуноглобулина G,

126 выделенные непосредственно спиртовым фракционированием, можно применять только внутримышечно вследствие их способности спонтанно активировать систему комплемента при попадании в кровяное русло. В то же время концентрат АТ, предназначенный для терапии генерализованной синегной-ной инфекции, должен обеспечивать немедленное лечебное действие и, следовательно, представлять собой инфузионную лечебную форму.

В нашей стране иммуноглобулин для внутривенного введения получают единственным производственным методом, основанным на кислотно-ферментативном гидролизе осадка II, выделенного спиртовым фракционированием [5,44,46]. При этом снижение показателя АКА достигается путем обработки раствора иммуноглобулина пепсином при рН реакционной среды 3,9.4,0 с последующим удалением фермента гелем гидроокиси алюминия. Конечный продукт представляет собой 5 % раствор иммуноглобулина класса G, содержащегося в основном в мономерной форме. Поскольку известно, что определенная часть содержащихся в плазме доноров АТ к ЛПС P. aeruginosa относится к классу IgG [11,114,137,150,151], и указанные АТ выявляются в коммерческом иммуноглобулине нормальном человека для внутривенного введения, заготовленная антисинегнойная плазма была подвергнута спиртовому фракционированию до стадии осадка II, а из полученного полуфабриката методом кислотно-ферментативного гидролиза был приготовлен концентрат АТ для внутривенного введения.

По всем параметрам полученные образцы концентрата АТ соответствовали требованиям, предъявляемым к иммуноглобулину для внутривенного введения ФС 42-3159-95 и содержали АТ к ЛПС P.aeruginosa в титрах от 1:150 до 1:2550. Среднее значение степени концентрации АТ к эндотоксину СП в процессе получения иммуноглобулина для внутривенного введения составило 1,3, расчетное максимальное значение указанного параметра - 2,5. Полученная степень концентрации АТ к эндотоксину СП оказалась значительно ниже аналогичного показателя для АТ к другим антигенам

127 антиальфастафилолизин, столбнячный антитоксин, AT к вирусу клещевого энцефалита): при получении соответствующих специфических внутривенных иммуноглобулинов G степень концентрации составляет 4.6 [107].

Таким образом, результаты нашего исследования показали, что получение концентрата AT к эндотоксину СП методом кислотно-ферментативного гидролиза в общем случае нерационально. Между содержанием AT к эндотоксину P.aeruginosa в образцах иммуноглобулина для внутривенного введения и в плазме, использованной для их приготовления, достоверных различий не выявлено (t = 0,47, р > 0,05).

Известно, что в сыворотке доноров обычно наблюдается активность AT одновременно к нескольким антигенам P.aeruginosa [32,179]. Имеются также сведения о том, что гамма-глобулин, полученный из плазмы вакцинированных против P.aeruginosa доноров, более эффективно защищает белых мышей от синегнойной инфекции, чем нормальный человеческий гамма-глобулин [230]. Указанные факты позволили предположить, что полученные экспериментальные образцы внутривенного иммуноглобулина могут содержать AT к другим антигенам СП, причем в более высоких титрах, чем коммерческий иммуноглобулин для внутривенного введения. В связи с этим в условиях in vivo была проведена оценка лечебной эффективности образцов концентрата AT для внутривенного введения в сравнении с коммерческим иммуноглобулином нормальным человека для внутривенного введения. Для чистоты эксперимента использовали серии иммуноглобулина с близким содержанием специфических AT. В препарате сравнения титр AT к ЛПС P.aeruginosa составил 1:100, что приблизительно соответствует среднему содержанию AT к эндотоксину СП в коммерческом нормальном внутривенном иммуноглобулине; в концентрате, полученном из плазмы вакцинированных доноров, - 1:170; в концентрате, полученном из отобранной скринингом плазмы, - 1:160. Заражение белых беспородных мышей осуществляли последовательными двукратными разведениями микробной культуры P.aeruginosa. Заражающая доза

128 составила от 7,0 • 105 до 1,4 • 107 колониеобразующих единиц. Испытуемые образцы иммуноглобулина для внутривенного введения и препарат сравнения разводили стерильным 0,15 М раствором NaCl в соотношении 1:11,5 и вводили животным в хвостовую вену через 3, 24 и 48 ч после заражения в разовой дозе 4 мг белка на мышь (1 мл разведенного белкового раствора), что в пересчете на кг массы тела составило 200 мг иммуноглобулина. Животным контрольной группы вводили стерильный 0,15 М раствор NaCl. Учет результатов проводили на четвертые сутки эксперимента, после чего рассчитывали LD5o для каждого опыта. Все изученные образцы внутривенного иммуноглобулина, включая препарат сравнения, достоверно снижали смертность белых мышей от внутрибрюшинного заражения P.aeruginosa: LD50 увеличивалась в 1,83.2,15 раза. Испытанные нами образцы концентрата АТ для внутривенного введения по своей лечебной эффективности при экспериментальной синег-нойной инфекции достоверно не отличались от препарата сравнения. Достоверных отличий в лечебной эффективности образцов, полученных из плазмы вакцинированных и неиммунизированных доноров, также не выявлено. Выявлена прямая корреляция между титром АТ к ЛПС Р. aeruginosa в иммуноглобулине и индексом его эффективности: коэффициент корреляции составил 0,92, однако, полученный в наших условиях результат оказался статистически незначим (Т = 2,42, Р > 0,05), вероятно, вследствие близких значений титров испытуемых образцов.

Анализ изменения содержания АТ к ЛПС Р.aeruginosa в белковых растворах на этапах получения образов концентрата АТ для внутривенного введения показал, что потеря большей части специфических АТ происходит на стадии преципитации осадка II. Основная масса АТ, обладающих активностью к эндотоксину СП, относится к классу IgM и попадает в осадок III, не используемый в процессе приготовления внутривенного иммуноглобулина. На наш взгляд, возможность получения высокоактивного концентрата АТ к эндотоксину Р. aeruginosa для внутривенного введения общепринятым в Рос

129 сии методом кислотно-ферментативного гидролиза, связана с отбором необходимого количества плазмы, содержащей специфические АТ класса 1§0. Такой скрининг, в частности, можно осуществить, используя метод ИФА. Другой путь получения концентрата АТ, активного в отношении эндотоксина СП, связан с выделением и очисткой АТ класса ^М, попадающих в осадок III.

Для выделения ^М-содержащего концентрата АТ была использована схема щадящего фракционирования плазмы [98]. На первом этапе в цельную плазму добавляли аэросил А-380 до конечной концентрации 35 г-л"1. После центрифугирования устанавливали рН смеси 4,1.4,3 и добавляли в нее КН до конечной концентрации 0,35 %. После удаления осадка центрифугированием полученный раствор подвергали диафильтрации для удаления ацетата и каприлата и концентрировали до достижения содержания белка 5.6 %.

По оптическим свойствам и концентрации вносимых веществ опытные образцы ^М-содержащего концентрата АТ, выделенного из цельной плазмы, соответствовали требованиям, предъявляемым к внутривенному иммуноглобулину. Концентрация белка составила в среднем 5,5 г-дл"1. На иммуноэлек-трофореграмме конечного продукта идентифицированы зоны преципитации, соответствующие ^А, 1§М и альбумину. Соотношение : ^А : ^М в образцах, определенное методом радиальной иммунодиффузии, составило в среднем 79,0 : 17,6 : 3,4 %. Согласно результатам хроматографического определения молекулярных параметров образцов 1£М-содержащего концентрата, полученного из цельной плазмы, содержание ^М, равнялось в среднем 3,2 %, димеров 1§А и(или) - 4,1 %, мономеров ^А - 9,5 %, мономеров 75,1 %, альбумина - 5,0 %.

Показатель рН в образцах составил в среднем 4,5, что отличается от требований к отечественному коммерческому иммуноглобулину для внутривенного введения на 2 единицы рН. Буферная емкость полученных нами образцов 1§М-содержащего концентрата АТ не превышала 20 миллиэквивален-тов щелочи на 1 л, что позволило не проводить коррекцию рН.

130

При изучении АКА полученных образцов IgM-содержащего концентрата AT выявлена атипичная зависимость потребления комплемента от содержания белка в реакционной смеси, отличная от таковой для иммуноглобулина, полученного кислотно-ферментативным гидролизом. С изменением содержания белка в реакционной смеси в среднем от 1,5 до 13,0 мг наблюдалось резкое увеличение потребления комплемента в среднем до 92 %. С дальнейшим увеличением содержания белка потребление комплемента снижалось, и в присутствии 20.33 мг белка активировалось в среднем 83 % содержащегося в реакционной смеси комплемента. АКА полученных образцов варьировала от 3,40 до 6,62 мг белка, не активирующих 2 гемолитические единицы комплемента.

Титр AT к ЛПС P.aeruginosa в полученных образцах по данным РПГА составил от 1:140 до 1:200, содержание специфических AT класса IgG по данным ИФА - от 1,0 до 4,8 ЕДифа'Мг"1, класса IgM - от 0,13 до 0,42 ЕДифа'Мг"1. Расчетный средний показатель степени концентрации составил в 1,3, 0,74, и 0,62 соответственно. Снижение специфической активности наблюдалось в течение всего процесса выделения концентрата AT из цельной плазмы.

Для выяснения причин указанного снижения в экспериментальных пробах дополнительно определили содержание AT к ЛПС E.coli и Kl.pneumoniae. Степень концентрации AT класса IgG к ЛПС E.coli составила в среднем 3,37, к Kl.pneumoniae - 3,15; степень концентрации AT класса IgM к ЛПС E.coli - 1,62, к ЛПС Kl.pneumoniae - 2,38. Если бы уменьшение специфической активности AT к ЛПС P. aeruginosa в процессе получения IgM-содержащего концентрата AT было обусловлено только выпадением IgG и IgM в осадок, это вызывало бы снижение содержания AT и к другим антигенам (ЛПС E.coli и Kl.pneumoniae). Отсутствие указанного эффекта свидетельствовало о более высокой чувствительности AT к ЛПС P.aeruginosa к воздействию фракционирующих агентов в условиях выделения IgM-содержащего концентрата AT из цельной плазмы по сравнению с AT к ЛПС Е. coli и

131

Kl.pneumoniae. Тем не менее, в полученных нами образцах IgM-содержащего концентрата AT активность AT к ЛПС P.aeruginosa класса IgG была в среднем в 1,3 выше таковой в коммерческом препарате иммуноглобулина (t = 0,67, Р > 0,001), а класса IgM - в 20 раз выше (t = 5,88, Р < 0,001).

Свойства образцов IgM-содержащего концентрата AT, выделенного из цельной плазмы, не претерпевали статистически значимых изменений при хранении в течение 1 года при температуре (6 ± 4) °С.

Для повышения вирусной безопасности продукта, более рационального использования плазмы, увеличения выхода IgM первоначальная технологическая схема получения IgM-содержащего концентрата AT была изменена. На первом этапе фракционирования мы применили общепринятый методический подход - спиртовое осаждение по Кону до стадии осадка II+III, что делает возможным использование новой схемы, не нарушая общепринятого в России технологического процесса производства препаратов крови. Изменение условий проведения первого этапа выделения IgM-содержащего концентрата AT потребовало соответствующего пересмотра условий проведения всех последующих этапов.

Для определения оптимального весового соотношения сырого осадка фракции II+III и изотонического раствора оценивали оптические свойства полученных после обработки аэросилом центрифугатов. Оптимальным мы сочли соотношение 1:10, поскольку оно позволяет избежать чрезмерного увеличения исходного объема реакционной смеси и получать достаточно прозрачные растворы.

С целью определения количества аэросила, необходимого для удаления балластных примесей из исходной суспензии, оценивали влияние концентрации указанного сорбента на оптические свойства и белковый спектр растворов после центрифугирования. Полученные результаты позволили заключить, что оптимальной является концентрация аэросила 30 г-л"1, обеспечивающая

132 получение белкового раствора необходимой степени осветления и не приводящая к значительному снижению концентрации IgM.

При определении параметров обработки белковых растворов КН оптимальными считали условия, обеспечивающие максимальное относительное содержание IgM в получаемых белковых растворах при минимальных потерях белка: конечная концентрация КН 0,4 % в реакционной смеси с рН 4,0.

Таким образом, нами была разработана оригинальная технологическая схема получения IgM-содержащего концентрата АТ, включающая этанольное фракционирование плазмы до стадии осадка II+III, суспендирование осадка в изотоническом растворе NaCl, последовательную обработку суспензии аэросилом в конечной концентрации 30 г-л"1 и КН в конечной концентрации 0,4 % при рН 4,0 с промежуточными центрифугированиями, диафильтрацию полученного раствора с целью удаления низкомолекулярных примесей, ультрафильтрацию для повышения концентрации белка до 5.6 % и стерилизующую фильтрацию готового концентрата АТ.

По оптическим свойствам и концентрации вносимых веществ опытные образцы соответствовали требованиям ФС 42-3159-95 на внутривенный иммуноглобулин. Концентрация белка составила в среднем 5;3 %. На иммуно-электрофореграммах образцов выявлены наличие 3 зон преципитации, соответствующих IgG, IgA и IgM. Соотношение концентраций IgG : IgA : IgM, определенное методом радиальной иммунодиффузии, составило в среднем 68,1 : 17,2 : 14,7 %. Согласно результатам хроматографической оценки молекулярных параметров, полученные образцы содержали в среднем 6,8 % IgM, 7,9 % димеров IgA и(или) IgG и IgA, 8,3 % мономеров IgA и 73,1 % мономеров IgG. Среднее значение показателя рН образцов IgM-содержащего концентрата АТ, полученных из осадка II+III, составило 5,71. Поскольку буферная емкость образцов не превышала 19 миллиэквивалентов щелочи на 1 л, коррекцию рН не проводили.

133

Показатель AK А экспериментальных образцов варьировал от 5,16 до 6,54 мг белка, не активирующих 2 гемолитические единицы комплемента, и составил в среднем 5,7 мг. В отличие от образцов IgM-содержащего концентрата AT, выделенных из цельной плазмы, снижение потребления комплемента при повышении содержания белка в смеси не выявлено. В присутствии 20.33 мг белка потреблялось в среднем 77 % содержащегося в среде комплемента. Таким образом, образцы IgM-содержащего концентрата AT, выделенного из осадка II+III, по комплементактивирующим свойствам занимали промежуточное положение между концентратом AT из цельной плазмы и коммерческим иммуноглобулином для внутривенного введения.

Приготовленные по разработанной нами технологической схеме образцы IgM-содержащего концентрата AT обладали выраженной активностью в отношении ЛПС Р.aeruginosa. Это утверждение справедливо даже по отношению к образцам, полученным из исходной плазмы с низкой серологической активностью. Титры специфических AT в готовых образцах по данным РПГА составили в среднем 1:286, содержание AT класса IgG к эндотоксину СП по данным ИФА - (5,10 ± 0,96) ЕДифа-мг"1, класса IgM - (0,92 ±0,25) ЕДи фа'Мг"1; степень концентрации AT составила 3,16, 2,86 и 1,94 соответственно. Специфическая активность была достоверно выше таковой коммерческих препаратов иммуноглобулина, а содержание AT класса IgM к ЛПС СП - достоверно выше таковой образцов IgM-содержащего концентрата AT из цельной плазмы.

Согласно результатам дополнительно проведенного исследования, содержание AT к ЛПС E.coli в образцах IgM-содержащего концентрата, выделенного из осадка II+III, было достоверно выше такового в коммерческом иммуноглобулине человека нормальном для внутривенного введения, а также в IgM-содержащем концентрате AT, выделенном из цельной плазмы.

134

Свойства образцов IgM-содержащего концентрата AT, выделенного из осадка II+III, не претерпевали статистически значимых изменений при хранении в течение 1 года при температуре (6 ± 4) °С.

Таким образом, разработана технологическая схема выделения IgM-содержащего концентрата AT из осадка II+III, позволяющая получать конечный продукт высоким выходом иммуноглобулина класса М, низкой АКА, высокой серологической активностью в отношении эндотоксина P.aeruginosa, а также E.coli. Схема может применяться параллельно с основным технологическим процессом производства препаратов крови, принятым в Росси. Полученные результаты могут быть использованы при разработке технологии производства антисинегнойного IgM-содержащего препарата иммуноглобулина для внутривенного введения.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Лазыкина, Анна Викторовна, 1999 год

1. Адарченко А.А., Крылов И.А., Ливтинова Е.И. Антагонистическая активность госпитальных и внегоспитальных штаммов Ps. aeruginosa 1. Антибиотики и медицинская биотехнология.- 1985.- № 3.- С. 189-190.

2. Анастасиев В.В. Разработка технологии получения нового поколения иммуноглобулинов для терапии инфекционных и аутоиммунных заболеваний человека: Автореф. Дис. доктора биол. наук. М., 1997. - 49с

3. Анастасиев В.В Разработка молекулярных моделей процесса фракционирования иммуноглобулинов // Иммуноглобулины: Сб. науч. трудов.-Нижний Новгород, 1993.- С. 45-50.

4. Анастасиев В.В., Киселева И.А., Новикова Л.П., Тараева Г.А. Получение из плазмы крови доноров иммуноглобулина для внутривенного введения // Гематол. и трансфузиол. -' 1985. № 10. - С. 46-48.

5. Анастасиев В.В. Применение иммуноглобулинов // Иммуноглобулины: Сб. науч. трудов.- Нижний Новгород, 1993.- С. 14-31.

6. Антипенко В.П., Куницкая С.А., Рудницкая Л.С. Энтеробактерии и Pseudomonas aeruginosa в этиологии хронических заболеваний легких и плевры // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1990.-№ 9.-С.24-27.

7. Антонов Ю.В., Илюхин В.И., Поповцева Л.Д., Батманов В.П. Чувствительность псевдомонад к современным антибактериальным препаратам // Антибиотики и химиотерапия.- 1991. -Т. 36, № 1. -С. 14-16.

8. Анциферова Н.Г. Биологические свойства синегнойной палочки // Синегнойная инфекция.- М.: Медицина, 1988.- С. 5-29.137

9. Анциферова Н.Г. Клиника синегнойной инфекции // Синегнойная инфекция.- М.: Медицина, 1988.- С. 144-165.

10. Анциферова Н.Г. Синегнойная инфекция и иммунитет // Синегнойная инфекция.- М.: Медицина, 1988.- С. 129-143.

11. Ашмарин И.П., Воробьев A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях.- Л.: Издательство медицинской литературы, 1962.-179С.

12. Баскакова Н.В. Факторы патогенности синегнойной палочки // Синегнойная инфекция.- М.: Медицина, 1983.-С. 30-54.

13. Белкин З.П., Егорова Т.П., Нартикова В.Ф. и др. Иммуногенные свойства белка эндотоксина: сывороточные антитела у животных и человека // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1991,- № 7.- С. 73-75.

14. Белоцкий С.М. Механизмы иммунитета при инфекциях, вызванных условно-патогенными микроорганизмами // Иммунология инфекционного процесса.-М., 1994.-С. 199-209.

15. Беляев A.A., Буранов Н.Ф., Андрей В.А. и др. Применение высушенной антисинегнойной плазмы у пострадавших с тяжелой механической травмой // Актуальные вопросы трансфузиологии: Мат-лы науч. конф. Л., 1987. -С. 97.

16. Беляков В.Д., Ряпис Л.А., Илюхин В.И. Псевдомонады и псевдомо-нозы.- М.: Медицина, 1990.- 224 с.

17. Блатун Л.А., Павлова М.В., Терехова Р.П. и др. Лечение и профилактика раневой инфекции // Новый медицинский журн.- 1998.- № 3.- С. 7-11.

18. Богдашина Е.В., Альбицкая Н.Б., Щипкова Л.Г. Опыт получения специфического иммуноглобулина человека для терапии осложненных форм эпидемического паротита // Иммуноглобулины: Сб. науч. тр. Н. Новгород, 1992.-С. 84-88.138

19. Бодрова Г.Н. Получение и оценка иммунологической активности антитоксической антисинегнойной плазмы: Автореф. Дис. . канд. мед. наук.-М., 1997. -24 с.

20. Борисова И.В., Холчев Н.В., Поспелова В.В., Джикидзе Э.К. Получение комплексных иммуноглобулиновых препаратов (КИП) для парентерального и энтерального применения // Иммуноглобулины и другие препараты крови.- Горький, 1986.- С. 69-73.

21. Борщова И.В., Алешкин В.А., Холчев Н.В. и др. Комплексные им-муноглобулиновые препараты для перорального и ректального применения // Иммунобиологические препараты: Сб. науч. тр. М., 1989. - С. 5-7.

22. Булава Г.В. Здановская JI.K., Титова Т.И. Влияние иммунной антибактериальной плазмы и донорской лейкоцитной массы на иммунную систему больных с гнойно-септическими процессами // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1989.- № 10.- С. 91-95.

23. Ванеева Н.П., Янишевская М.Н., Александрова Т.Н., Яншина H.JI. Определение специфических антитоксинов Pseudomonas aeruginosa в коммерческих препаратах иммуноглобулина человека //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1995.- № 1.- С.59-61.

24. Володавец В.В. К механизму распространения внутрибольничных инфекций // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1981.-№ 7.-С. 3-8.

25. Гришина И.А., Колкер И.И., Самыкина Т.Д. и др. Иммунотипирова-ние свежевыделенных штаммов P.aeruginosa!I Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1984.- № 4.- С. 26-30.

26. Громов Б.В. Строение бактерий.- Л., 1985.- 192 с.139

27. Дектева Г.К., Пылаева С.И., Мусонова И.В. и др. Наблюдение за циркуляцией госпитальной микрофлоры в ожоговом стационаре с помощью электрофоретического анализа белков // Журн. микробиол., эпидемиол. и им-мунобиол.- 1994.- № 6.- С. 11-12.

28. Демидова Н.В. Отдаленные результаты иммунизации доноров // Вопросы донорства плазмы крови и клиническое применение иммунных препаратов. Л., 1982. - С. 15-16.

29. Домидзе Н.Г., Гоцадзе Э.Г., Чиладзе А.З. и др. Лечение сепсиса в гнойной хирургии // Вестник хирургии.- 1990. № 1.- С. 48-49.

30. Егизова С.А., Дерябин П.Н., Каральник Б.В. и др. Диагностическая эффективность эритроцитарных иммунореагентов из различных антигенов Pseudomonas aeruginosa II Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.-1990.-№ П.- С.30-33.

31. Егоров А.М., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа.- М., 1991.- 288 с.

32. Езепчук Ю.В. Патогенность как функция биомолекул.- М., 1985.234 с.

33. Зайцева Г.А., Козьминых Л.Ф., Мороз А.Ф. Исследование спектра иммунных антител у доноров крови и плазмы // Гематол. и трансфузиол., 1987.-№3.-С. 58-60.

34. Зайцева Г.А., Минаков В.М., Новосадов В.М. и др. Влияние искусственной иммунизации на различные иммунобиологические параметры доноров // Акт. вопр. трансфузиологии и развития службы крови Лит.ССР. Вильнюс, 1989.- С. 18-19.

35. Захарова И.Я., Танатар Н.В. Липополисахариды бактерий рода Pseudomonas П Микробиологический журнал.- 1984.- № 6.- С.78-92.

36. Зуева Л.П., Яфаев Р.Х., Танеева Н.Ф и др. Характеристика источников и путей распространения синегнойной инфекции в урологическом отделении // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1989.- № 2.- С. 61-64.140

37. Иванова Н.И., Бекина К.Е. Распространенность О-серогрупп Pseudomonas aeruginosa И Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.-1987.-№7.-С. 10-13.

38. Инструкция по медицинскому освидетельствованию доноров крови, плазмы и клеток крови, утвержденная МЗ РФ 29.05 1995 г.- М., 1995.- 22 с.

39. Инструкция по применению вакцины синегнойной, поливалентной, корпускулярной, инактивированной жидкой, утв. 21 января 1991 г. '.tP^' Ь

40. Казьянин А.В., Карпеева А.В., Климова Н.Я. и др. Использование сокращенной схемы иммунизации доноров стафилококковым анатоксином для получения иммунной плазмы // Экспериментальная и прикладная иммунология: Тез. докл.- Пермь, 1991.- С. 11.

41. Касаткин В.Н. Антитела к эндотоксину грамотрицательных бактерий в диагностике и лечении тяжелых гнойно-воспалительных заболеваний у детей: Автореф. Дис. . канд. мед. наук.- М., 1991.

42. Киселева И.А., Анастасиев В.В. Получение и характеристика иммуноглобулина для внутривенного введения // Лечебные препараты белков плазмы крови. М., 1981. - С.115-121.

43. Киселева И.А., Анастасиев В.В., Савкина М.А., Наумова Ю.К. Выделение и свойства иммуноглобулина, обогащенного IgM, для энтерального применения // Иммуноглобулины и другие препараты крови.- Горький, 1986.-С. 65-69.

44. Киселева И.А., Тимофеева Г.В. Метод определения антикомплементарной активности в препаратах иммуноглобулина // Гематол. и трансфузи-ол.- 1986.- № 4.- С.40-46.

45. Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов. Сер. техн. докл.- Женева.- 1992.- 786.- докл.39.

46. Кондратьева Т.К. Бактериальные липополисахариды // Иммунология инфекционного процесса.- М., 1994.- С. 58-71.

47. Корначев A.C. Роль антибиотиков в профилактике внутрибольнич-ных инфекций у новорожденных и родильниц // Антибиотики и химиотерапия.- 1991. Т.36, № 7.- С. 45-47.

48. Крохина М.А., Гришина И.А., Архипова H.A. и др. Результаты изучения безвредности, реактогенности и иммунологической эффективности пиоиммуногена при иммунизации доноров-добровольцев // Журн. микро-биол., эпидемиол. и иммунобиол. 1981.- № 10.- С. 95-98.

49. Кузнецов А.И., Муравьева В.И. Опыт использования внутривенного иммуноглобулина при лечении тяжелых форм острой пневмонии // Клиническое применение иммуноглобулина для внутривенного введения.- Нижний Новгород, 1998.- С. 55-58.

50. Кунягина О.В., Михайлова H.A., Мороз А.Ф. Экспериментальное изучение протективной активности анатоксина синегнойной палочки // Иммунитет и иммунобиологические препараты.- Уфа, 1991.- С. 4-6.

51. Леви М.И., Степанова С.Л., Туник А.И. и др. К механизму взаимодействия хлорамина с Pseudomonas aeruginosa II Журн. микробиол., эпиде-миол. и иммунобиол.- 1988.- № 4.- С. 17-21.

52. Легостаева Е.И., Шинкаренко А.А. Уровень антисинегнойных антител у разных групп доноров // 2-й Украинский съезд гематологов и трансфу-зиологов: Труды (ч1) Киев, 1986.- С.20.

53. Литяева Л.А. Химиотерапия новорожденных детей с кишечными инфекциями, вызванными условно-патогенными грамотрицательными аэробными бактериями // Антибиотики и химиотерапия.- 1991.- Т. 36, № 9.- С. 3738.

54. Макаренко Т.А. Белковые протективные антигены P.aeruginosa: Автореф. Дис. . канд. мед. наук,- М., 1994.- 23 с.

55. Макаренко Т.А., Балаян С.С., Сергиенко А.И. и др. Иммунологический ответ у доноров-добровольцев, иммунизированных вакциной псевдомо-нас // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1991.- № 11.- С.39-41.

56. Макаров Н.А., Ротков И.Л., Кукош М.В. и др. Гнойно-септические осложнения при хирургическом лечении деструктивного панкреатита // Вестник хирургии. 1990.- № 9.- С. 55-58.

57. Манченко Л.В. Аэросил, его свойства, применение и технические условия.- Львов, 1965.- 35 с.

58. Мельникова В.Н., Кайтанджан Е.И., Файзулин Р.Г. Резервы получения иммунной плазмы с антибактериальной направленностью // Актуальные вопросы трансфузиологии и развития службы крови Литовской ССР.- Вильнюс, 1989.- С. 10-11.

59. Меньшиков Д.Д., Лазарева Е.Д., Васина Т.А. и др. Микрофлора ран больных в условиях их массового поступления в стационар с огнестрельными повреждениями конечностей // Журн. микробиол., эпидемиол. и имму-нобиол.- 1996.-№ 2.-С. 17-20.143

60. Мигунов В.Н., Ажигирова М.А., Вязова Е.П. и др. Разработка специфических препаратов иммуноглобулинов для профилактики и лечения сепсиса // Новое в трансфузиологии: Информ. бюл. 1997. - Вып. 17. - С. 37-42.

61. Мигунов В.Н., Позина И.М., Доронина Н.В. Эффективность препаратов внутривенного иммуноглобулина при лечении инфекционных заболеваний у детей // Вопросы терапии инфекционных болезней у детей. Республиканский сборник науч. тр.- М., 1990.- С. 143-148.

62. Мигунов В.Н., Позина И.М., Левина Л.А. и др. Зависимость анти-генсвязывающей активности препаратов иммуноглобулина от их молекулярного состава // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1994.- № 3.-С. 88-92.

63. Минакова Л.В., Лаптева Л.К. Состояние проблемы производства и качества нормального и специфических иммуноглобулинов из крови человека // Иммуноглобулины: Сб. науч. тр. Н.Новгород, 1993. С.4-14.

64. Минухин В.В, Кравцова В.И., Цыганенко А.Я. Этиология гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных условно-патогенными микроорганизмами в неинфекционной клинике // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1989.-№ 3.-С. 48-52.

65. Михайлова H.A., Кунягина О.В., Шаймухаметов Ф.А. и др. Изучение безвредности, реактогенности и антигенной активности анатоксина си-негнойной палочки на добровольцах //Иммунитет и иммунобиологические препараты. Уфа, 1991,- С. 6-8.

66. Мороз А.Ф., Анциферова Н.Г., Бродинова Н.С. Эпидемиологические аспекты синегнойной инфекции // Синегнойная инфекция.- М.: Медицина, 1988.- С. 99-128.

67. Мусина Л.Т., Семина H.A., Гладкова К.К. Микробиологический мониторинг за внутрибольничными гнойно-септическими инфекциями у новорожденных и родильниц // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.-1996.- №2.- С.91-94.

68. Назарчук Л.В. Донорская плазма с антисинегнойной активностью как препарат направленного действия // Врачебное дело.- 1987.- № 7.-С. 96-98.

69. Назарчук Л.В. Иммунные антисинегнойные препараты крови. (Обзор литературы). // Врачебной дело, 1992.- № 2.- С. 15-20.

70. Патент РФ № 1693751.- Кузьмичев В.А., Сарафанова Л.Н., Крохина М.А. и др. «Способ получения иммуноглобулина для внутривенного введения со сниженной антикомплементарной активностью».

71. Патент РФ № 2068695.- Сапожникова B.C., Шарыгин С.Л. «Способ получения иммуноглобулина для внутривенного введения»

72. Петров В.Ф., Сафонова Г.М., Стерлягова A.B. и др. Использование ß-пропиолактона для снижения антикомплементарной активности иммуноглобулина // Актуальные проблемы вакцинопрофилактики: Тез. докл. науч.-практич. конф.- Екатеринбург, 1996.- С. 47-48.

73. Пичугин С.В., Иванова И.П., Макаревич Н.И., Беседнова H.H. Опыт получения экспериментального противовсепдотуберкулезного иммуноглобулина // Иммуноглобулины и другие препараты крови.- Горький, 1986.-С. 73-78.145

74. Платэ Н.А., Николайчик В.В., Чупов В.В. Новый подход к фракционированию белков плазмы и получению высокоочищенных препаратов крови // Гематол. и трансфузиол.- 1993.- № 6.- С. 10-13.

75. Покровский В.И., Рубцов И.В. Инфекционный процесс // Иммунология инфекционного процесса.- М., 1994,- С. 10-28.

76. Пол У. Иммунные системы // Иммунология.- М., 1987.- С. 14-45.

77. Попова Н.Н. Получение антисинегнойной плазмы и ее применение при лечении тяжелообожженных: Автореф. Дис. . канд. мед. наук.-С.-Петербург, 1992. 17 с.

78. Потемкина Е.Е., Галкина Л.В., Хромецкая Т.М. и др. Возможность снижения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулина человека с помощью химической модификации // Журн. микробиол., эпиде-миол. и иммунобиол.- 1987.- № 6.- С. 54-57.

79. Промышленный регламент на производство препарата раствор альбумина 10 %, утвержденный 20.06.97. Протокол заседаний комиссии по стандартизации № 29.

80. Регламент производства иммуноглобулина человека нормального №131-79.

81. Рейзис А.Р. Госпитальные инфекции в современной медицине.-С.-Петербург, 1993.- 284 с.

82. Ряпис Л.А., Джузенов А.А., Маликова Н.Р. и др. Типирование Pseudomonas aeruginosa и его использование для эпидемиологического анализа // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1993.- № 6.-С. 110-111.146

83. Совет Европы. Руководство по приготовлению, использованию и обеспечению качества компонентов крови,-Москва., 1996.- 171 с.

84. Сапожникова B.C. Разработка и изучение свойств антистафилококкового и противостолбнячного иммуноглобулинов для внутривенного введения: Автореф. Дис. канд. биол. наук. Киров, 1990; - 195с.

85. Сапожникова B.C., Медведева H.A. Оптимизация процесса получения антистафилококкового иммуноглобулина // Изобретательство и рационализация в медицине.- М., 1990.- С. 19-21.

86. Свирская A.M., Строков В.А., Анциферова Н.Г., Мороз А.Ф. Госпитальная инфекция, обусловленная синегнойной палочкой, в отделениях реанимации // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1985.- № 5.-С 7-11.

87. Смирнова А.И. Социальные, эпидемиологические и организационно-методические основы получения иммунных антибактериальных препаратов из донорской крови: Автореф. Дис. докт. мед. наук. Д., 1990. - 47с.

88. Ставертий J1.B., Мефодьев В.В., Гилева C.B. Псевдомонады как маркер санитарно-эпидемиологического состояния учреждений родовспоможения // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1995.- № 2.-С.42-45.

89. Сэнфорд Дж., Гилберт Д., Гербердинг Дж., Сэнде М. Антимикробная терапия. М., 1996.- 219 с.

90. Темпер P.M., Мигунов В.Н., Левина JI.A. и др. Внутривенный панг-лобулин для иммунотерапии эндотоксемии и септицемии // Современные достижения биотехнологии: Материалы Всерос. конф.- Ставрополь, 1996.-С. 86-87.

91. Тернер М., Ричарде Ф., Варга Дж. и др. Структура и функции антител.- М. : Мир, 1983200 с.

92. Титова Т.И., Григорьев Н.И., Анциферова Н.Г. и др. Получение и изучение свойств поливалентной корпускулярной синегнойной вакцины.147

93. Оценка биологических свойств поливалентной корпускулярной синегнойной вакцины //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1985.- № 7.-С. 14-18.

94. Тюрин Ю.Н., Макаров A.A. Анализ данных на компьютере.- М., 1995.- 384 с.

95. Федоровская Е.А., Назарчук JI.B. Иммунный ответ организма доноров на анатоксин синегнойной палочки, ранее ревакцинированых столбнячным анатоксином // Гематология и переливание крови.- Киев, 1990. С. 100-104.

96. Холодкова Е.В., Макаренко Т.А., Кузьмичев В.А. и др. Экспериментальное изучение активности антисинегнойного иммуноглобулина для внутривенного введения // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.-1993.-№6.-С. 74-75.

97. Цинзерлинг A.B. Современные инфекции: патологическая анатомия и вопросы патогенеза.- С.-Петербург, 1993.- 363 с.

98. Шарыгин C.JI. Иммуноглобулины направленного действия для внутривенного введения // Медицинские технологии. 1995. - № 5. - С.36-38.

99. Шарыгин C.JI. Препараты внутривенных иммуноглобулинов из донорской плазмы для терапии бактериальных и вирусных инфекций (получение и клиническое применение): Автореф. Дис. . докт. мед. наук. -С.-Петербург, 1997. 42с

100. Шарыгин С.Л. Проблемы развития службы крови в новых экономических условиях // Новое в трансфузиологии: Информац. бюл. 1995. -№ 11. - С.29-33148

101. Шарыгин С.Л. Разработка препаратов из донорской крови и плазмы важнейшее направление научной деятельности Кировского НИИ гематологии и переливания крови // Новое в трансфузиологии: Информац. бюл.- 1996.-№ 13. - С.16-19.

102. Шарыгин С.Л., Сапожникова B.C. Комплексная программа разработки специфических иммуноглобулинов для внутривенного введения // Актуальные вопросы трансфузиологии и клинической медицины: Материалы научн. конф. Киров, 1993.- С. 3-4.

103. Яненко Ф.С., Крылов В.Н., Станиславский Е.С., Холодкова Е.В. Влияние плазмид на вирулентность штаммов Pseudomonas aeruginosa в экспериментах на мышах. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1985.-№7.- С. 19-22.

104. Яровая Л.М., Алешкин В.А. Новые данные о химической структуре липополисахаридов и практические перспективы // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1991.- № 3.- С. 73-78.

105. Яфаев Р.Х., Зуева Л.П., Башмакова М.А. и др. Факторы риска гнойно-септических инфекций у новорожденных // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1990.- № 6.- С. 36-39.149

106. Adhikari M., Wesley A.G., Fourie P.B. Intravenous immunoglobulin prophylaxis in neonates on artificial ventilation. // S. Afr. Med. J.- 1996.-Vol. 86, № 5.- P. 542-545.

107. Banach W., Bucholc B. Opsonizing activity of human immunoglobulin preparations for intravenous use (IVIG) //Med.Dosw.Mikrobiol.- 1994.-Vol. 46, № 4.- P. 349-355.

108. Barandun S., Imbach P., Kindt H. et al. Clinical Applications of immunoglobulin (gamma globulin) Edited by P.Lattman. Sandor Products (Switzerland Ltd.) Missionssttsteasse.- 1982.- 60/62.- 4012 Basle.-Schwitzerland.

109. Barandun S., Isliker H. Development of immunoglobulin preparations for intravenous use // Vox. Sang.- 1986.-Vol. 51.-P. 157-160.

110. Barclay G.R., Scott B.B., Wright I.H. et al. Changes in anti-endotoxin-IgG antibody and endotoxaemiain in three cases of gram-negative septic shock // Circ. Shock.-1989.- Vol. 29, № 2.- P. 93-106.

111. Borte M., Miler I., Braun W. Neonatale sepsis: Grundlagen und Möglichkeiten einer Immuntherapie und Immunprophylaxe. II. Immun-therapie.// Padiatund Grenzgeb.- 1990.- Vol. 29, № 5.- P. 363-371.

112. Burnouf T. Integration of chromatography with traditional plasma protein fractionation methods// Bioseparation.- 1991.- № 1.- P. 383-396.

113. Burnouf T. Le fractionnement plasmatique. Progresbi, problemes et perspectives. //Ann.Pharm.Fr.- 1994.- Vol. 52, № 3.- P. 124-136.

114. Burnouf T., Martinache L., Goudemand M. Large-scale fractionation of immunoglobulin G by combined ethanol and chromatographic purification methods // Abstr. 19th Congr. ISBT. Sidney, 1986.- P. 426-429.150

115. Burnouf T. New trends in plasma fractionation and plasma products trends in plasma fractionation // Vox Sang.- 1994.- Vol. 67, Suppl. 3.- P. 251-253.

116. Burton D.R. Structure and function of antibodies // Mol. Genet. Immunoglobulin.- Amsterdam, 1987. P. 1-50.

117. Chester I.R., Grey G.W., Wilkinson S.G. Further studies of the chemical composition of the lipopolicaccharide of Pseudomonas aeruginosa II Biochem. J.- 1972.- Vol. 126, № 2.- P. 395-407.

118. Cohn E. Blood proteins and their theraupevtic value // Science.- 1945.-№ 101.-P. 51-56.

119. Cohn E., Strong L., Hughes W. Preparations and properties of serum and plasma proteins // J. Amer. Chem. Soc.-1946.- Vol. 68.- P. 459.

120. Collins M.S., Ladehoff D.K., Mehton N.S., Noonan J.S. Opsonic and protective activity of five human IgM monoclonal antibodies reactive with lipopolysaccharide antigen of Pseudomonas aeruginosa. II FEMS. Microbiol. Immunol.- 1990.-№ 2(5-6).-P. 263-268.

121. Collins M.S., Roby R.E. Protective Activity of an Intravenous Immune Globulin (Human) Enriched in Antibody Against Lipopolisacharide Antigens of Psudomomas aeruginosa II The American J. of Medicine.- 1984.- Vol.76., №.3(A).-P. 168-178.

122. Cometta A., Baumgartner J.D., Glauser M.P. Polyclonal intravenous immune globulin for prevention and treatment of infections in critically ill patients. // Clin. Exp. Immunol.-1994.- Vol. 97., Suppl. 1.- P.69-72.

123. Cometta A. et all //N. Engl. J. Med.- 1992.- Vol.327.- P.234-240

124. Condie R.M., O'Reily R. Prevention of cytomegalovirus infection by prophylaxis with an intravenous, hiperimmune, nativ, unmodified cytomegalovirus Globulin // Am. J. Med.- 1984.- Vol. 76, № 3a.- P. 410-412.

125. Craven D.E., Steger K.A. Nosocomial pneumonia in mechanically ventilated adult patients: epidemiology and prevention in 1996 // Semin. Respir.Infect.- 1996.-Vol. 11,№. l.-P. 32-53.151

126. Cryz SJJr., Maag M. Pseudomonas aeruginosa toxin-A-neutralising antibodes in normal human serum// Lancet.- 1988.- V. 8.- P. 855.

127. Darville T., Tabor D., Simpson K., Jacobs, R.F. Intravenous immunoglobulin modulates human mononuclear phagocyte tumor necrosis factor-alpha production in vitro II Pediatries.- 1994.- Vol. 35, № 4, Pt 1.- P. 397-403.

128. Diggelmann H., Koblet H., Barandun S., Gerber H. Bestimmung der totalen clearance von Standart-gammaglobulin, PH 4-gammaglobulin und gam-mavenin // Path. Microbiol.- 1964,- Vol. 27, № 6.- P. 572-581.

129. Dunn D.L. Development and potential use of antibody directed against lipopolysaccharide for the treatment of gram-negativebacterial sepsis // J. Trauma.- 1990.- Vol. 30, № 12.- P. 100-106.

130. Eibl M. Intravenous immunoglobulins: clinical and experimental studies // Immunoglobulins: characteristics and used of intravenous preparations.- US Dept. of Health Service, 1979.- P. 213-223.

131. Evans T.J., Cohen J. Immunotherapy of sepsis // J.Med. Microbiol.-1993.- Vol. 38, № 4.- P. 237-239.

132. Fernandes P. M., Landblad G. L. Preparations of stable intravenous gamma-globulin: process desing and scale-up// Vox Sang.- 1980.- Vol. 39, № 2.- P. 101-112.

133. Ferriani V.R.L. Avaliacas da atividada litica dependente do complemento (vias classica e altarnativa) po soro de recemnascidos e lacten- tes eutroficos. // Medicina (Bras).- 1990. -Vol. 23, Suppl, №2. P. 161-162.

134. Fischer G.W. Use of intravenous immune globulin in newborn infants // Clin.Exp.Immunol.- 1994.-Vol. 97, Suppl. 1.- P. 73-77.

135. Fomsgaard A., Baek L., Fomsgaard J.S., Engquist A. Preliminary study on treatment of septic shock patients with antilipopolysaccharide IgG from blood donors // Scand. J. Infect. Dis.- 1989.- Vol. 21, № 6.- P.697-708.152

136. Friesen A.D. Column ion exchange chromatographic production of albumin, IV IgG and factor IX from 75 000 to 100 000 liters of plasma per year // Plasma fractionation and transfuson.- London, 1985.- P. 97-103.

137. Friesen A.D., Bowman J.M., Bees W.C.H. Column ion exchange chromatographic production of human immune globulins and albumin // Methods of plasma protein fractionation.- Ed. by J.M.Curling.- London: Academic Press, 1981.- P. 117-126.

138. Frommhagen S., Fundenberg H. The role of aggregated y-globuline activity of human and animal sera // Immunology.- 1962.- Vol. 89,1 3.- P. 336-343.

139. Gottlieb D.J., Cryz S.J., Furer E. et al. Immunity against Pseudomonas aeruginosa: Adoptively Transferred to bone marrow transplant recipients // Blood.-1990.- Vol. 76, № 12. P.2470-2475.

140. Grzybowski J., Trafny E.A., Wrembler-Wargocka J. et al. Amount, Avidity and Specificity of Antibodies to Pseudomonas aeruginosa in Normal Human Sera //J.Clinical Microbiology, 1989.- Vol. 27, № 6.- P.1367-1371.

141. Hamamoto J., Harada S., Yamamoto N. et al. Elimination of viruses (Human immunodeficiency, Hepatitis B, Vesicular stomatitis and Sindbis Viruses) from an intravenous immunoglobulin preparation. // Vox Sang.- 1987.- Vol.53, № 2. P. 65-69.

142. Haque K.N., Remo C., Bahakim H. Comparison of two types of intravenous immunoglobulins in the treatment of neonatal sepsis // Clin.Exp.Immunol.- 1995.-Vol. 101, № 2 P. 328-333.

143. Hiemstra P.S., Brands-Tajouiti J., van Furth R. Comparison of antibody activity against various microorganisms inintravenous immunoglobulin preparations determined by ELISA and opsonicassay // Lab. Clin. Med.- 1994.-Vol. 123, №2.-P. 241-246.

144. Hilgartner M., Bussel J. Use of intravenous gammaglobulin for the treatment of autoimmune neutropenia of childhood and autoimmune hemolitic anemia // Amer. J. Med. 1987.- Vol. 83, № 4.- P. 25-29.153

145. Horowitz B. Inactivation of viruses found with plasma proteins // Yale J. Biol. Med.- 1990.- Vol. 63, № 3.- P. 361-369.

146. Iglewski B.H., Sadoff G.C., Björn J. et al. Pseudomonas aeruginosa exoenzyme S: an adenosin diphosphate ribosyltransferase distinct from toxin A // Proc. Nat. Acad. Sei. USA.- 1978.- Vol. 75, № 11.- P. 3211-3215

147. Immunopharmacolgy of Endotoxicosis/ Eds. Agarwal M.K., Yoshida M.- Berlin, 1984.

148. Ivanovic D., Gjurasin M., Gasparovic V. et al. Immunotherapy of sepsis and septic shock // Lijec. Vjesn.- 1995.- Vol. 117.- P. 8-11.

149. Jacoby C.A. Resistance plasmids of Pseudomonas aeruginosa.//Antimicrobial drug resistance.- New York, 1984. P.497-514.

150. Janewey C. The development of clinical uses of immunoglobulins: a revue // Immunoglobulins: biological aspects and clinical uses.- Washington, 1970.-P. 3-14.

151. Jungi T.W., Santer M., Lerch P.G., Barandun S. Effect of various treatment of gamma-globulin (IgG) for achieving intravenous tolerance on the capacity to interact with human monocite Fc receptors // Vox Sang.- 1986.- Vol. 51, № 1.-P. 18-26.

152. Juriander J., Geisler C.H., Hansen M.M. Treatment of hypogammaglobulinemia in chronic lymphocytic leukaemia by low-dose intravenous gammaglobulin // EurJ.Haematol.-1994.- Vol. 53, № 2.- P. 114-118.

153. Khan M.M.H., Shibuya Y., Nakagaki T. et al. Alpha2-macroglobulin as* the major defence in acute pseudomonal septic shock in the guinea pig model // Int. J. Exp.Path.- 1994.- V. 75, № 4.- P.285-293.

154. Kistler P., Friedli H. Ethanol precipitation // Methods of plasma protein fractionation.- Ed. by J.M.Curling.- London: Academic Press, 1980.- P. 3-15.

155. Knirel J.A., Vinogradov E.V., Shashkov A.S. et al. 2,3-Diacetamido-2,3-dideoxy-L-guluronic acid: a new amino sugar from Pseudomonas aeruginosa 03 a, d, e lipopolisaccharide // Carbohyd. Res.- 1983.- Vol. 112, № 1.- P. C4-C6.154

156. Kooi C., Hodges R.S., Sokoll P.A. Identification of Neutralizing Epitopes on Pseudomonas aeruginosa Elastase and Effects of Cross-Reactions on Other Thermolysin-Like Proteases // Infect. Immun.- 1997.- Vol. 65, № 2.-P. 472-477.

157. Lassiter H.A., Tanner J.E., Cost K.M. et al. Diminished IgG, but not complement C3 or C4 or Factor B, presedes nosocomial bacterial sepsis in very low birth weight neonates.// Pediat. Infec. Dis. J.-1991.- Vol. 10, №9.- P.663- 668.

158. Luderitz O., Freudenberg M.A., Galanos G. et al. Lipopolisaccharides of gramnegative bacteria // Microbiol. Membrane Lipids.- 1982.- Vol. 17.- P. 79151.

159. Lugowski C Immunotherapy in gram-negative bacterial infections// Acta Biochim. Pol.- 1995.- Vol. 42, № 1,- P. 19-24.

160. Lutz F., Seeger W., Schischke B. et al. Effect of cytotoxin from Pseudomonas aeruginosa on a phagocytic and pinocytic cells: in vitro and in vivo studies // Toxicon.- 1983.- Suppl. 3.- P. 257-260.

161. Macik B., Gabriel Don A., White G. et al. The use^ of high-dose intravenous gamma-globulin in acguired von Willebrand syndrome // Arch. Pthol. and Lab. Med.- 1988.- Vol. 112,№ 2.-P. 143-146.

162. Mancini G., Vaerman I., Carbonara A., Heremans I. A single-radialdiffusion method for the immunological guantitation of proteins // Proteides of Biological Fluids.- 1964.-Colloguium.- Bruges.- 1963.- P. 370-373.

163. Masuho G., Tomibe K., Matsuzava K., Ohtzu A. Development of an intravenous gamma-globulin with Fc activities. I. Preparation and characterization of s-sulfonated human gamma-globulin // Vox Sang.- 1977.- Vol. 32, № 3.-P. 175-181.

164. Mc Kinney M.M., Parkinson A. // J. of Immunol. Meth.- 1987.- Vol. 96, №2.-P. 271-278.

165. Mitall O.P., Sabharwal U., Keswani K.K. Serodiagnosis of the role of Opportupistic Bacteria in Cases of Burn Wound Sepsis // Burns.- 1982.- Vol.8, №3.- P.161-163.

166. Morell A. Various immunoglobulin preparations for intravenous use // Vox Sang.- 1986.- Vol. 51, Suppl. 2.- P. 44-49.

167. Nakae T., Nakajima T., Nagai H. et al. Protective effect and antibody titer of intravenous immunoglobulin (IVIG) against clinical isolates of opportunistic bacteria // Yakugaku-Zasshi.- 1994.- Vol.114, № 12.- P. 972-979.

168. Natanson Ch. Selected treatment strategies for septic shock based on proposed mechanism of pathogenesis // Annals of Int.Med.- 1994.- Vol. 120, № 9.-P.771-783.

169. Netea M. G., Demacker P.N.M., Kullberg B. J. et al. Low-Density Lipoprotein Receptor-deficient Mice Are Protected Against Lethal Endotoxemia and Severe Gram-negative Infections // J. Clin. Invest.- 1996.- Vol. 97, № 6.- P. 1366-1372.

170. NiahinuraT. Report of the subcommitee in anti-pseudomonas globulin // Proc. 12th Meet. Japan Pseudomonas aeruginosa society.- Tokyo: Ishijama, 1978.-P. 29-30.

171. Nielsen H. Immunoglobulin preparations for intravenous administration. A review of their biologic activities and comparison of various preparation methods // Allergy 1994.- Vol. 49, № 2.- P. 69-77.

172. Nydegger U.E. Alte und neue aspekte der intravenösen immunglobulintherapie // Schweiz. Med. Wochenschr.-1994.- Vol. 124, № 1-2.-P.5-25.

173. Nydegger U.E. Evaluating the Quality of Immunoglobulin G Preparations for Intravenous Therapy.// Vox Sang.- 1985.-Vol.49, Suppl. 1.- P. 1-7.156

174. Nydegger U.E. Intravenous immunoglobulin in combination with other prophylactic and therapeutic measures // Transfusion.- 1992.- Vol. 32, № 1.- P. 7282.

175. Nys M., Damas P, Joassin L, Lamy M. Sequential anti-core glycolipid immunoglobulin antibody activities in patients with and without septic shock and theirrelation to outcome //Ann. Surg.- 1993.-Vol. 217, № 3.- P. 300-306.

176. Opal S.M., Cross A.S., Jhung J.W. et al. Potential hazards of combination immunotherapy in thetreatment of experimental septic shock // J. Infect. Dis.- 1996.- Vol. 173, № 6.- P. 1415-1421.

177. Olson J.C., McGuffie E.M., Frank D.W. Effects of Differential Expression of the 49-Kilodalton Exoenzyme S by Pseudomonas aeruginosa on Cultured Eukaryotic Cells //Infect. Immun.- 1997.- Vol. 65, № 1.- P. 248-256.

178. Paranchych W., Sastry P.A., Drake D. et al. Pseudomonas pili // Anti-biot. Chemoter.- 1985.- Vol. 36, № 1.- P. 49-57.

179. Pegg S.P., Amerena R., Mc Tahir H. Changing Patterns of Pseudomonas aeruginosa Antibiotic Sensitivity.//Burns.- 1982. Vol.8, № 3.-P.151-155.

180. Pennington J.E., Small G.J. Passive immune therapy for experimental Pseudomonas aeruginosa pneumonia in 8the neutropenic host // J.Infect.Dis.-1987.- V.155.- P.973-978.

181. Pier G.B., Thomas D.M. Characterisation of the humanimmune responce to a polisacharide vaccine from Pseudomonas aeruginosa II J. Infect. Dis.- 1983.- Vol. 148, № 2.- P.206-213.

182. Pilz G., Kaab S., Neeser G. et al. Supplemental Immunoglobulin (iv IgG) treatment in 163 patients with sepsis and septic shock // Europ. J. Clin. Stud. Trtatm. Inf. 1991.- Vol. 19, № 4. P. 216-227.

183. Pollack M. Antibody activity against Pseudomonas aeruginosa in immune globulins prepared for intravenous use in humans //J. Infect. Dis.- 1983.-Vol. 147, № 6.- P. 1090-1098.157

184. Poison A., Ruis-Bravo C. Fractionation of plasma with polyethilengli-col // Vox Sang.- 1972.- Vol. 23, № 2.- P. 107-118.

185. Poxton I.R. Antibodies to lipopolysaccharide // J. Immunol. Methods.-1995.- Vol. 186, № l.-P. 1-15.

186. Raff H., Bradley C., Brady W. et al. Comparison of Functional Activities between IgGl and IgM class Switched Human Monoclonal Antibodies Reactive with Group B Streptococcus or Ecsherichia coli Kl //J.Infect.Dis., 1991.-Vol. 163, №2.- P. 346-354.

187. Ramphai R., Pier G.B. Role of Pseudomonas aeruginosa mucoid exopolisaccharide in adherence to tracheal cells // Infect. Immun.- 1985.- Vol. 47, № l.-P. 1-4.

188. Rasmussen J., Brandslund I., Svehag S. In vitro investigation of human immunoglobulin preparations: Fc-receptor reactivity and complement consumption // Acta Patol. Microbiol, et Immunol. Scand.- 1984.- Vol. 92, №6.- P.335-340.

189. Roberton D., Upton H., Hosking C. et al. Decreased incidence of advers infusion reactions in hypogammaglobulinemic children receving low pH intravenous immunoglobulin // Austral, and N.Z.J.Med.- 1987.- Vol.17, № 5.- P. 495-500.

190. Romer J., Gardi A., Kistler P. Assay of anticomplementary activity in solutions of immunoglobulins // Develop. Biol. Stand. 1979.- Vol. 44.- P. 147151.

191. Romer J., Späth P.J., Skvaril F. et al. Characterization of various immunoglobulin preparations for intravenous aplication. II. Complement activation and binding to staphylococcus protein A // Vox Sang.- 1982.- Vol. 42, № 2.- P. 7480.

192. Rousell R.H., Budinger M.D., Pirofski B. et al. Prospective study on the hepatitis safety of. intravenous immunoglobulin, pH 4,25.// Vox Sang., 1991.-V.60.- P.65-68.158

193. Rutter G.H. Requirements for safety and quality of intravenous immunoglobulin G preparations. // J.Neurol.Neurosurg.Psychiatry.- 1994.-N 57, Suppl.- P. 2-5.

194. Sakiel S., Schiller B., Buchowies I. et al. Antipseudomonas immunoglobulin. III. Preliminary clinical evaluation //Arch. Immunol. Ther. Exp.-1983- Vol.31, № 4.- P. 517-521.

195. Saravolatz L.D., Markowitz N., Collins M.S. et al. Safety, pharmacokinetics, and functional activity of human anti-Pseudomonas aeruginosa monoclonal antibodies in septic and nonseptic patients // J.Infect.Dis.- 1991.- Vol. 164, №4.-P. 803-810.

196. Sato T., Wada Y., Okazaki M., et al. Study on septicaemia in infants and children in the past 20 years. Part 1. An analysis of causal organisms // Kansenshogaku Zasshi.- 1996.- Vol. 70, № 8.- P. 775-783.

197. Schroeder D.D., Tankersley D.L., Lundbad. A new preparation of modified immun serum globulin (human) suitable for intravenous and alkylation reaction // Vox Sang.- 1981.- Vol. 40, № 6.- P. 373-382.

198. Schultse N.E., Schwick G. New possiblities in the intravenous use of gamma globulin // Dtsch. Med. Wschr.- 1962.- Vol. 87, № 34.- P. 1643-1650.

199. Seiler F.R., Peukert A., Kanzy E.J. Comparison of several in vitro assay methods for the quantitative determination of complement consumption («binding») by gammaglobuline preparation // Develop. Biol. Stand. 1979.-Vol. 44, №2.- P. 153-163.

200. Shorr R.M., Ershler W.B., Jamelli R.Z Immuoglobulin Production in Burned Patients // J.Trauma.- 1984.- Vol.24, № 4.- P.319-323.159

201. Shriniwas M.H., Bhujwala R.A. Production of permiability factor and enterotoxin by Ps.aeruginosa II Indian J. Med. Res.- 1979.- Vol. 70, №3.-P. 380-383.

202. Skvaril F., Gardi A. Differences among available immunoglobulin preparations for intravenous use // Padiat. Infect. Dis. J.- 1988.- Vol. 7, № 5, Suppl.- P. 43-48.

203. Skvaril F., Theilkas L., Probst M. et al. IgG Subclass Composition and Immunochemical Characteristics of Plasmin-Treated Human Gamma-Globulin // Vox Sang.- 1976.- Vol. 30, № 6.- P.334-348.

204. Spapen H.D., Diltoer M., Huyghens L.P. Passive immunotherapy of gram-negative bacteremia, sepsis and septic shock // Acta. Clin. Belg. 1993.- Vol. 48, № 1.-P. 20-29.

205. Spielberg H.L. Biological activities of immunoglobulins of different classes and subclasses // Adv.Immunol.- 1974,- № 19.- P. 289.

206. Sqouris I. The preparation of plasmin treated immune serum globulin for intravenous use // Vox Sang.- 1967.- Vol. 13, № 2.- P. 71-73.

207. Sriskandan S., Cohen J. The Pathogenesis of Septic Shock // J. of Infect.- 1995.- Vol. 30, № 2. P. 201-206.

208. Stanislavsky E.S., Makarenko T.A., Kozhenova T.E. Specific and nonspecific mouse protection induced by different chemotypes of Pseudomonas aeruginosa lipopolisaccharides // FEMS Microbiol. Immun.- 1992.- Vol. 105.-P.181-190.

209. Steinbuch M. Protein fractionation by ammonium sulphate, rivanol and caprylic acid precipitation // Methods of plasma protein fractionation.- Ed. by J.M.Curling.- London: Academic Press, 1980.- P.33-56.

210. Stephan W. Intravenous IgM by means of treatment of Cohn fraction III with |3-propiolacton // Separation of plasma proteins.- 1983.- P. 153-156.

211. Stephan W. Undegraded human immunoglobulin for intravenous use // Vox Sang.- 1975.- Vol. 26, № 6.- P. 422-437.160

212. Sullivan K. Immunoglobuline therapy in bone marrow transplantation // Amer. J. Med.- 1987.- Vol. 83, Suppl. 4A.- P. 34-45.

213. Suomela H. An ion exchange method for immunoglobulin G production // Methods of plasma protein fractionation.- Ed. by J.M.Curling.- London: Academic Press, 1980.- P. 107-116.

214. Thomas E.T., Jones L., Simae E. Epidemiology of Pseudomonas aeruginosa in a general hospital //J. Clin. Microbiol.- 1975.- Vol.2, №.5.-P.397-402.

215. Tilz G.P, Nydegger U. Effekte und nebeneffekte von intravenosen gammaglobultnen. 1. Das problem der immunokomplexbildung //Wein. Med.Wochenschr.- 1991.- Vol. 141, № 13.- P. 301-303.

216. Tousch D., Allary M., Saint-Blancard J., Bjschetti E. Preparative purification of IgG from a human plasma alcohol precipitate // Biotechnology of plasma Proteins.- 1989.- Vol. 175.- P. 229-236.

217. Traub W.H. Failure of the Commercial Human IgG Immunoglobulin Preparation Polyglobin to Enhance Combined Phagocytic and Serum Bactericidal Activity of Normal Blood against Serratia marcescens II Chemotherapy.-1983.- Vol. 29. -P.43-47.

218. Van-Wye J.E., Collins M.S., Baylor M. et al. Pseudomonas hyperimmune globulin passive immunotherapy for pulmonary exacerbations in cystic fibrosis// Pediatr.Pulmonol.- 1990.- Vol. 9, №> 1.- P. 7-18.

219. Wasserman D., Paul G., Schlotter M., Bruxelle J. Problemes poses les infections a pyocyanique chez les grands brules // J. Med.et malad. infect.- 1983.-Vol. 13, №6 bis.-P. 378-384.

220. Weisman L.E., Cruess D.F., Fischer G.W. Opsonic activity of commercially available standard intravenous immunoglobulin preparations // Pediatr.Infect.DisJ.- 1994.- Vol. 13, № 12.-P. 1122-1125.

221. Wenzel R., Bone R., Fein A. et al. Results of second double-blind randomized controlled trial of anti-endotoxin antibody E5 in gram-negative sepsis //161

222. Program and abstracts of the 31st Interscince Conference of Antimicrobial Agents and Chemotherapy.- 1991,- Abstract № 1170.

223. Wilkinson S.G., Galbraith L. Studies of lipopolisaccharides from Pseudomonas aeruginosa II Eur. J. Biochem.- 1975.- Vol. 52, № 2.- P.269-278.

224. Williams A., Barclay A. The immunoglobulin superfamily-domains for cell surface recognition // Ann. Rev. Immunol.- 1988.- Vol. 6,- P.381-405.

225. Wretlind B., Pavlovskis O.R. The role of proteases and exotoxin A in the pathogenecity of Pseudomonas aeruginosa infections // Scand. J. Inf. Dis-1981.- Suppl. 29.- P. 13-19.

226. Young V.M., Moody R.M. Serotyping of Pseudomonas aeruginosa // J. Infect. Dis.- 1974.- V. 130.- P. 47-52.

227. Zanetti G., Glauser M.P., Baumgartner J.D. Anti-endotoxin antibodies and other inhibitors of endotoxin //New Horiz.- 1993.- Vol. 1, № 1.- P. 110-119.

228. Ziegler, McCutchan J.A., Fierer J. et al. Treatment of gramnegative bacteremia and shock with human antiserum to a mutant Escherichia coli II N. Engl. J. Med.- 1982.- Vol. 307, № io.- P. 1225-1230.