Конъюгаты полиуроновых кислот с ароматическими аминами и 4-аминоантипирином тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.03, кандидат наук Арасланова, Диляра Ильдусовна

• Арасланова, Диляра Ильдусовна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Арасланова, Диляра Ильдусовна

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр.

Список принятых сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР. МОДИФИКАЦИЯ ПОЛИУРОНОВЫХ КИСЛОТ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

1.1. Альгиновая кислота. Нахождение в природе, строение, свойства и

применение

1.2. Модифицированная альгиновая кислота

1.3. Пектин и полигалактуроновая кислота. Строение, нахождение в природе и применение

Модифицированные пектин и полигалактуроновая кислота

1.5 Поли-а-( 1 ->4)-Ь-гулуроновая и поли-/?-(1—>4)-0-маннуроновая кислоты. Получение, применение, свойства,

модификация

1.6 Поли-а-( 1 -4)-глюкуроновая кислота из картофельного

крахмала

ГЛАВА 2. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

2.1. Конъюгаты альгиновой, полигулуроновой и полиманнуроновой кислот

2.2. Конъюгаты полигалактуроновой кислоты

2.3. ТЕМРО-окисление картофельного крахмала

2.4. Конъюгаты полиглюкуроновой кислоты

2.5. Анальгезирующие свойства конъюгата альгиновой кислоты с 4-аминоантипирином

2.6. Антирадикальная активность конъюгатов полигулуроновой и полигалактуроновой кислот

ГЛАВА 3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

3.1. Получение полиуроновых кислот

3.1.1. Выделение альгината натрия из бурых водорослей Laminaria digitata

3.1.2. Получение полигулуроновой и полиманнуроновой кислот из альгиновой кислоты

3.1.3. Получение Na соли полигалактуроновой кислоты

3.2. Синтез конъюгатов альгиновой, полигулуроновой и полиманнуроновой кислот

3.2.1. Конъюгаты с ароматическими аминами

3.2.2. Конъюгат с 4-аминоантипирином

3.3. Синтез конъюгатов полигалактуроновой кислоты

3.3.1. Конъюгаты с ароматическими аминами

3.3.2. Конъюгат с 4-аминоантипирином

3.4. Окисление водорастворимого картофельного крахмала

3.4.1. Определение содержания звеньев глюкуроновой кислоты в частично окисленном крахмале методом кислотно-основного титрования

3.5. Поли-а-(1->4)-0-глюкуроновая кислота и ее конъюгаты

3.5.1 Синтез поли-а-(1—>4)-0-глюкуроновой кислоты окислением

крахмала

3.5.2. Синтез конъюгатов с ароматическими аминами

3.5.3. Синтез конъюгата с 4-аминоантипирином

3.6. Определение антирадикальной активности конъюгатов полигулуроновой, полиманнуроновой и полигалактуроновой

кислот

ВЫВОДЫ

ЛИТЕРАТУРА

ПРИЛОЖЕНИЕ

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АК альгиновая кислота

поли-в поли- а-{ 1 —>4)-Ь-гулуроновая кислота

поли-М поли-/?-(1—>4)-0-маннуроновая кислота

поли-Са поли-а-( 1 —>4)-0-галактуроновая кислота

поли-с*-С1 поли-а-( 1 —>4)-В-глюкуроновая кислота

поли-/?-С1 поли-/?-(1 —>4)-В-глюкуроновая кислота

КДИ 1 -этил-3 - [3 -(диметиламино)пропил] карбодиимид

4-ААП 1 -фенил-2,3-диметил-4-аминопиразол-5-он (4-аминоантипирин)

НОВ! 7У-гидроксибензотриазол

ТЕМРО 2,2,6,6-тетраметилпиперидин-1-оксил

ДФПГ 2,2-дифенил-1 -пикрилгидразильный радикал

рве фосфатный буфер

МЕв 2-морфолинэтансульфоновая кислота

NHS Ы-гидроксисукцинимид

М-гидроксисульфосукцинимид

ИВМ искусственный внеклеточный матрикс

NAD+ никотинамидадениндинуклеотид

СБ Р-циклодекстрин

1)МР перйодинан Десс-Мартина

Б1С Н 1Ч-диизопропилкарбдиимид

ГК гиалуроновая кислота

Б1РЕА диизопропилэтиламин

ТВА трет-бутиловый спирт

СНР8 2-хлор-2-гидрокси-1 -пропансульфонат

вТМАС 2,3-глицидилтриметиламмоний хлорид

4-АТР 4-аминотиофенол

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Конъюгаты полиуроновых кислот с ароматическими аминами и 4-аминоантипирином»

ВВЕДЕНИЕ

Полиуроновые кислоты, относящиеся к полисахаридам растительного происхождения, имеют большое значение в питании, медицине и других жизненно важных областях человеческой деятельности. Альгиновая (из бурых водорослей) и пектовая (из фруктов и овощей) кислоты обладают противовоспалительными, противоязвенными, антиканцерогенными,

антиметастатическими свойствами, применяются для выведения тяжелых металлов из организма. Кислотным гидролизом альгиновой кислоты получают поли-сс-(1—>4)-Ь-гулуроновую и поли-/?-( 1 —И)-0-маннуроновую кислоты, щелочной деэтерификацией пектина - поли-а-(1—>4)-В-галактуроновую, селективным С(6)-окислением крахмала и целлюлозы - поли-ог-(1—>4)-0- и поли-1 -^4)-0-глюкуроновые кислоты. Природные и полу синтетические полиуроновые кислоты применяются в качестве полисахаридных носителей для биоактивных молекул. Несомненный интерес для медицины представляют конъюгаты полиуроновых кислот с фармакологически значимыми аминами. Их рассматривают как лекарственные препараты нового поколения с пролонгированным терапевтическим эффектом направленного действия. В этой связи синтез новых конъюгатов полиуроновых кислот с биологически активными аминами, изучение их структуры и свойств представляется актуальной задачей.

Целью исследования являлся синтез новых конъюгатов альгиновой, поли-аг-(1-»4)-Ь-гулуроновой, поли-/?-(1—>4)-0-маннуроновой, поли-аг-(1->4)-0-галактуроновой и поли-«-(1—>4)-0-глюкуроновой кислот с фармакозначимыми аминами, установление их структуры и биологической активности.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- получить полигулуроновую и полиманнуроновую кислоты кислотным гидролизом альгиновой кислоты, полиглюкуроновую кислоту - С(6)-

окислением водорастворимого картофельного крахмала реагентом NaOCl-

МаВг-2,2,6,6-тетраметилпиперидин-1-оксил (ТЕМРО-окислением);

- синтезировать конъюгаты полиуроновых кислот с аминами;

- исследовать структуру конъюгатов методами одно- ('Н, 13С) и двумерной

('Н-'Н COSY, ^-"С HSQC) ЯМР спектроскопии;

- выявить биомедицинские свойства конъюгатов.

В результате выполненной работы синтезированы новые конъюгаты альгиновой, поли-0:-(1—>4)-Ь-гулуроновой, поли-/?-(1—>4)-0-маннуроновой, поли-а-(1->4)-0-галактуроновой и поли-а-(1->4)-0-глюкуроновой кислот с фармакозначимыми аминами [оаминофенол, я-аминофенол, 4-аминосалициловая, 5-аминосалициловая кислоты, гс-аминобензойная, о-аминобензойная (антраниловая) кислоты и 1-фенил-2,3-диметил-4-аминопиразол-5-он (4-аминоантипирин)] и охарактеризованы содержанием амидных звеньев. Показано, что при карбодиимидной конъюгации под действием 1-этил-3-[3-(диметиламино)пропил]карбодиимида полиглюкуроновой кислоты с аминами наряду с амидными образуются изоуреидные звенья — продукты присоединения карбодиимида по карбоксигруппам. Найдено, что избежать образование изоуреидных звеньев удается проведением конъюгации в присутствии N-гидроксибензотриазола.

Нерегулярное распределение немодифицированных (А) и модифицированных (В) звеньев в конъюгатах полиуроновых кислот,

1 13

проявляющееся в расщеплении сигналов пиранозного цикла в Н, С ЯМР спектрах, впервые охарактеризованы триадами звеньев с центром A (AAA, ААВ, BAA, ВАВ) и с центром В (ВВВ, ABA, ABB, ВВА).

При исследовании ТЕМРО-окисления гипохлоритом натрия водорастворимого картофельного крахмала установлено, что в отсутствие бромида натрия как со-катализатора образуются только продукты частичного окисления крахмала, тогда как полиглюкуроновую кислоту в этих условиях получить не удается. В продуктах окисления крахмала впервые идентифицированы альдегид-гидратные группы. С помощью спектров ЯМР

структура одного из образцов частично окисленного крахмала, не содержащего звеньев С, впервые охарактеризована содержанием триад звеньев ВВВ (54% мольн.), ABA (20%), ААВ+ВАА (12%) и ВАВ (14%).

Получены обладающие анальгезирующей активностью конъюгаты альгиновой кислоты с 4-аминоантипирином.

Важные для антиоксидантной защиты организма антирадикальные свойства по отношению к дифенилпикрилгидразильному радикалу проявляли конъюгаты полигулуроновой, полиманнуроновой и полигалактуроновой кислот с аминофенолами.

Автор выражает глубокую благодарность заведующему лабораторией органического синтеза ИНК РАН доктору химических наук, профессору Виктору Николаевичу Одинокову за научные консультации, внимание и помощь, оказанные на всех этапах выполнения работы.

Автор выражает благодарность заведующему лабораторией структурной химии ИНК РАН доктору химических наук, профессору Халилову Леонарду Мухибовичу за неоценимую помощь при идентификации полученных соединений.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР. МОДИФИКАЦИЯ ПОЛИУРОНОВЫХ КИСЛОТ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

Строению, свойствам, применению и химической модификации полиуроновых кислот растительного происхождения - альгиновой, пектовой, поли-а-( 1 ->4)-Ь-гулуроновой, поли-J3~( 1 ->4)-0-маннуроновой, поли-а-{ 1 —>4)-D-галактуроновой и поли-о:-(1—>4)-0-глюкуроновой кислот посвящен ряд обзоров [1-10]. В данном обзоре обобщаются сведения по химической модификации полиуроновых кислот за последние 20 лет.

1.1. Альгиновая кислота. Нахояадение в природе, строение, свойства и

применение

Альгиновые кислоты (АК) представляют собой линейные сополимеры двух типичных для низших растений (водорослей) уроновых кислот: D-маннуроновой (М) и L-гулуроновой (G), связанных между собой а- и Р~ (1—>4)-гликозидными связями.

В природе АК находится в виде натриевой соли - альгината натрия. АК извлекается из бурой альги (водоросли РкаеоркуШ) путем вымачивания в щелочном растворе с последующим осаждением из экстракта минеральной кислотой или превращением в водонерастворимый альгинат кальция. Обработкой последнего минеральной кислотой получают альгиновую кислоту высокой чистоты.

Химический состав и молекулярная масса альгината зависят от времени сбора, возраста и вида водорослей, используемых в качестве сырья, а также от способов выделения [7]. В процессе биосинтеза АК сначала образуется поли-D-маннуроновая кислота, звенья которой под действием полиманнуронан-С-5-эпимеразы частично трансформируются в звенья поли-Ь-гулуроновой кислоты [11]. Соотношение М- и G-кислот в молекуле АК варьирует, причем имеются участки полисахарида, состоящие только из D-маннуроновой кислоты (блоки поли-М), или участки из остатков L-гулуроновой кислоты (блоки поли-G), или участки с чередующимися остатками M и G. Это обстоятельство влияет на физико-химические свойства альгинатов, вязкость их водных растворов и способность к гелеобразованию, а также на биологическую активность [8]. Обнаружено, что молодые водоросли содержат больше полиманнуровой кислоты, а зрелые - полигулуроновой. Пластичность водорослей зависит от поли-М, а жесткость - от поли-G. Развитию методов исследования и изучению структурных особенностей альгиновой кислоты уделяется большое внимание.

Для изучения структуры АК приобрели большое значение недеструктивные физико-химические методы, например, спектроскопия ЯМР [8]. С помощью методов ЯМР удается определить соотношение мономеров M/G в молекулах АК и охарактеризовать их распределение. Из отношения интенсивностей сигналов аномерных протонов кислот M и G в 'Н ЯМР спектрах АК находят соотношение M/G, которое зависит от источника выделения и изменяется в широких пределах (0.25 - 2.2). Из протонных спектров можно также найти относительное содержание четырех возможных пар мономеров ММ, MG, GM, GG [12]. Еще

1 1 ____1 л ______

большими возможностями обладает метод С ЯМР спектроскопии. Из 1JC ЯМР спектров не только находят соотношение M/G и содержание ММ, MG, GM, GG, но и определяют триадные последовательности звеньев с центром M - МММ, MMG, GMG, GMM и с центром G - GGG, GGM, MGM, MGG [13]. В спектрах ЯМР наблюдается расщепление сигналов аномерных атомов углерода до восьми линий, которые можно отнести к восьми теоретически возможным триадам, а из

относительной интенсивности этих линий рассчитать содержание триад каждого типа[8].

В полисахаридах, состоящих из двух типов звеньев, распределение триад можно описать с помощью статистики Бернулли или Маркова первого и второго порядка [14]. На основании экспериментальных данных установлено, что альгинатная цепь лучше описывается с помощью статистики второго приближения Маркова, а вероятность нахождения определенного типа мономерных остатков (М или С) зависит от вида двух предшествующих мономерных остатков.

Свойства альгината как высокозаряженного полиэлектролита и комплексона, образующего очень вязкие водные растворы даже при умеренных концентрациях, позволяют применять его в качестве загустителя в пищевом производстве, для изготовления фотографических пленок, извлечения различных металлов (в ионизированной форме) из загрязненной воды [15]. Из альгинатов изготавливают натрий-, кальций- и устойчивые к воспламенению кальций-хромовые альгинатные волокна. Альгинаты проявляют аффинность по отношению к различным энзимам, таким как пектиназа, липаза, фосфолипаза амилаза и глюкоамилаза, что используется для очистки этих ферментов методом аффинного осаждения [16]. Альгинат применяется в фармакологии в качестве носителя лекарственных средств, например, для капсулирования инсулина [17], дипиридамола [18] и других субстанций [19]. Структурно сходные с внеклеточным матриксом тканей альгинатные гидрогели, в том числе гибридные (то есть в смеси с другими биополимерами типа хитозана [20]), или наночастицы АК в поли-[2-(диэтиламино)этилметакрилате[21]), используются для заживления ран, доставки вакцин, лекарств и в тканевой инженерии [22, 23].

АК и альгинаты широко применяются в медицине в качестве антацидных средств. Препарат «Топалкан» обладает вспенивающим эффектом, формирует гель на поверхности жидкого содержимого желудка. Покрывая слизистую, препарат начинает действовать быстро (через 6-14 минут) и его действие продолжается 2-4 часа; применяется при эзофагитах и рефлюкс-эзофагитах [24].

На основе АК или ее натрий-кальциевых солей известны фармакопейные препараты «Альгимаф» (в сочетании с сульфаниламидным препаратом «Мафенид») и «Альгипор» (в сочетании с антисептиком фурацилином) -ранозаживляющие средства с резорбтивным и регенерирующим действием [25]. Из альгинатного волокна производятся стерильные повязки для обработки раневых поверхностей с обильным отделением экссудата - «Супрасорб-А» [26] и «Калтостат» [27]. В последнее время появились два новых препарата для лечения болезней желудочно-кишечного тракта: «Гевискон» и «Канальгат». «Гевискон» — антацидное средство, которое влияет на нормальный процесс пищеварения в желудке [28, 29], попадая в желудок, успокаивает раздраженный пищевод после первого глотка, образует эластичный гелевый «барьер», защищая стенки пищевода от агрессивного желудочного содержимого. «Канальгат» применяется для лечения желудочно-кишечных патологий у ликвидаторов аварии на ЧАЭС [9, 30]. На основе альгината производится клей для зубных протезов «Рго1ейх»(Германия) с адгезивными свойствами.

1.2. Модифицированная альгиновая кислота

Реакцией с янтарным ангидридом получают эфир (1) по гидроксильным группам АК (схема 1). Одновременно дополнительно к карбоксигруппам АК (3.9 ммоль/г) вводятся сукцинатные группы (4 ммоль/г). Более гидрофобный по сравнению с эфиром 1 конъюгат (3) АК с пальмитиновой кислотой синтезируют следующим образом: взаимодействием АК с 2-хлорэтиламином в щелочной среде получают содержащее 1.75 ммоль/г свободных аминогрупп соединение (2), которое реакцией с пальмитоилхлоридом нацело превращается в N-пальмитоиламиноэтилальгинат 3 (схема 1). Эфиры 1 и 3 используют как носители для кисломолочных бактерий Lactobacillus rhamnosus, которые, наряду с некоторыми другими видами лактобактерий, являются нормальной микрофлорой кишечника человека и полезны при лечении диареи, вызванной ротавирусной инфекцией. Жизнеспособность бактериальных клеток,

иммобилизованных на сукцинате АК, составляла 60%, в пальмитоиламиноэтилальгинате - 87%, тогда как в природном альгинате - не более 22-26% [31].

АК

№ОН

Н20, рН 8.5,40°С, 1 ч

СООЫа —О

Схема 1

.О.

СООЫа 1

COONa

АК

С[хчч/Ш2 , КТаОН Н20, 70°С, 1 ч

С15Н31СОС1, №ОН Н20, рН 7.2-7.5,60°С, 2 ч

но

сос15н31

Лактон (4) (конверсия карбоксигрупп а=12%) получают дегидратацией АК (в НГ-форме) нагреванием в вакууме (61-117°С, 1-6 ч) или кипячением в диоксане или толуоле (6-8 ч) (схема 2). Лактон 4 может применяться для ацилирования физиологически активных аминов [32].

Схема 2

АК

г>с

-н2о

он

1,2-Пропиленгликоль-альгинат 5 - единственный из О-алкиловых эфиров АК, являющийся коммерческим продуктом (код Е405), получают взаимодействием волокон АК с оксидом пропилена под давлением; достигнутая степень этерификации а - не менее 80% (схема 3). Продукт 5 кислотоустойчив и применяется в пищевой промышленности в качестве загустителя, эмульгатора и стабилизатора [33].

АК

н,с-сн—сн 3 \ / _о >

Р = 3.5 кг/см2, 80°С, 1 ч

п = 7, 11, 13

СН,

Н3С-(СН2)П-КН2

О^^ЩСН^Н,

-о

ОМБ, 20-25°С, 15 мин

ОН

Из эфира 5 (а=30%) взаимодействием с октиламином, додециламином и тетрадециламином получены соответствующие амиды 6-8 (конверсия не более 9%) (схема 3) [34-36]. Для водных растворов этих амидов характерны необычные реологические свойства, обратимые при сильных сдвиговых деформациях.

О-Алкиловые эфиры АК - этиловый [(9), а=10-90%], изопропиловый [(10), а=10-90%], итрет-бутиловый [(11), а=10-90%], бензиловый [(12), а=10-90%], додециловый эфир [(13), а=12%] [37], с кортикостероидами - гидрокортизоновый [(14), а=20%] и фторкортизоновый [(15), а=20%] [38, 39] синтезируют взаимодействием тетрабутиламмониевой соли АК с соответствующими алкилгалогенидами (схема 4).

Схема 4

АК^а+)

Е>о\уех 50 х 8 (в форме тетрабутиламмониевой соли)

СОО " М+(п-Ви)4 -О

,0^

сооы

ЯНа1

ИМБО, 30°С, 12 ч

НО

Я = Е1 (9), 1-Рг (10), 1-Ви (11), Вп (12), С12Н25 (13)

На1 = Вг, I

Эфир 9 используют для приготовления солей с антибиотиками амикацином, эритромицином и стрептомицином. Эфиры 9-12 менее токсичны, чем пропиленгликоль альгинат 5, в растворах более стабильны по сравнению с природным альгинатом, и могут использоваться как стабилизаторы эмульсий и эмульсификаторы в пищевой, медицинской и косметической промышленности.

Додециловый эфир 13 проявлял лучшие, по сравнению с АК, поверхностно-адсорбционные свойства [37]. Эфиры 14 и 15 (с кортикостероидами) применяются как противовоспалительные средства в различных областях медицины — офтальмологии, дерматологии, отоларингологии и др.; они перспективны для изготовления временных, не вызывающих симптомов воспаления или отторжения протезов, и как альтернатива металлическим протезам или сделанным из синтетического пластика [38, 39].

Амиды синтезируют взаимодействием АК с первичными аминами под действием водорастворимого 1 -этил-3-[3-(диметиламино)пропил]карбодиимида (КДИ) в качестве конденсирующего реагента [40]. Применяют две различные методики карбодиимидной конъюгации. По одной из них сначала из АК получают О-ацилизомочевины (16), которые считаются нестабильными интермедиатами, и затем в реакционную смесь добавляют амин (схема 5). Следует отметить, что степень трансформации карбоксигрупп в амидные невысокая.

Таким образом получают конъюгат (17), кросс-сшитый этилендиамином, конъюгаты с аминокислотами аргинином (18), лизином (19), фенилаланином (20), аспарагиновой кислотой (21) и Ь-цистеином (22). Конверсия карбоксигрупп в конъюгатах 18-21 составила 2-4% масс., в конъюгате 22 - 228 мкмоль/г (-5% масс.) [41].

Схема 5

АК^а+)

Н20, рН 4-5,20-25°С, 2 ч

НО

ОН

НО ОН

16

(СН3)2Ы(СН2)3-Ы=С-ЫНЕ1 или/и (СН^ЧСН^-ТЧН-С^^ Я2 №12= Ш2(СН2)2ЫН2 (17)

17-22

Аргинин

Лизин

Фенил ал анин

Аспарагиновая кислота Ь-цистеин

Конъюгат 17 в виде гидрогеля усиливает репаративное восстановление эпидермиса и нервной ткани [42], имеет более высокую температуру разложения, пониженное содержание кальция, губчатую макропористую структуру, не задерживает влагу и устойчив к высоким механическим нагрузкам [43]. Конъюгаты 18-21 способны активировать хондрогенез и применяются для иммобилизации на поверхности материала из поли-ОЬ-лактата [41]. Конъюгат 22 (а также конъюгаты других полисахаридов с L-цистеином, составляющие новый класс так называемых тиомеров) обладает способностью образовывать дисульфидную связь с белками слизистой оболочки, т.е. мукоадгезивностью, и предложены в качестве носителей лекарственных средств [44].

Конъюгат альгината с дауномицином (24) (О-гликозидным антибиотиком из группы антрациклинов Streptomyces species, обладающим противомикробным и противоопухолевым действием [45-48], эффективный при лечении острой формы миелоидной лейкемии [49]) синтезируют согласно схеме 6. Дауномицин модифицируют г/г/с-аконитиновым ангидридом. Полученный N-^wc-аконитил-дауномицин (23) сочетают с этилендиамин-модифицированным конъюгатом 17 с помощью КДИ (схема 6) [50].

о он

Схема 6

О он

Дауномицин N(i:

цис- аконитовыи ангидрид

N - С-СН=С-СН,С Н П I 2

о соон

:-сн=с-сн,соон

о он

23

N - C-CH=C-CH,CONHCH2CH.

\

Степень конверсии 17 (соответственно, содержание дауномицина в модифицированном альгинате) авторами [50] не указывалась. Изучение in vitro показало, что дауномицин в кислых условиях (рН 5-6) высвобождается из конъюгата 24 на 22-60% за 48 часов, при нейтральном рН скорость высвобождения лекарства была низкой (2-4% за 48 часов). Скорость отщепления дауномицина зависит также от молекулярной массы конъюгата 24: при рН 5 низкомолекулярный конъюгат (61 тыс. Да) был эффективнее высокомолекулярного (250 тыс. Да) в ~3 раза [50]. Конъюгат 24 является перспективным макромолекулярным пролекарством пролонгированного действия.

Взаимодействие АК и аминов в присутствии КДИ без предварительного получения О-ацилизомочевин приводит к гораздо более высоким конверсиям карбоксигрупп АК в амидные. Часто для уменьшения образования побочных продуктов или увеличения конверсии в реакцию добавляют N-гидроксисукцинимид (NHS), vV-гидроксисульфосукцинимид (NHSS) и N-гидроксибензотриазол (HOBt) - реагенты пептидного синтеза. В литературе предлагаются две вероятные схемы образования амидов с участием HOBt. По первой из них кислота и HOBt под действием КДИ образуют промежуточный активный эфир, который взаимодействует с амином RNH2 с образованием амида и высвобождением HOBt (схема 7, а) [51]. Согласно второй схеме предполагается, что образующиеся «нестабильные» (9-ацилизомочевины под действием HOBt гидролизуются и в присутствии RNH2 дают целевой амид (схема 7, б) [52].

КДИ

n hjo, рн 4.7-4.8, 20 -25°с \

HOBt ОН

о

ÇOOH КДИ

^HOV^V НА рН 4.7-4.8, rt

он

он

активный эфир

RNH,

NHR 0=С

НоХ^^"'

ОН

+ HOBt

/СН3

n

нх.

NH-<p=N—'

0

1

. с

сн,

0

1

о=с

о но

он

О-ацилизомочевина

NHR 0=С

rnh,, hobt-

но

неон 5

/ сн3

-nh-c-nh II о

Конъюгат (25) с RGD-пентапептидом GRGDY получают в буферном растворе морфолинэтансульфоновой кислоты (MES) с конверсией карбоксигрупп АК более 80% (схема 8) [23]. RGD-пептиды, GRGDY, GRGDYP и G4RGDSP (Р -пролин, S - серин), являются структурным фрагментом белка фибронектина [53]. При ковалентном их связывании с АК повышается клеточная адгезия, улучшается выживаемость клеточных культур в альгинатном искусственном внеклеточном матриксе (ИВМ).

RNH о

О

RNH2, КДИ, NHSS

AK(Na+)

MES, рН 6.0-7.5,20-25°С, 12-24 ч

НО

О

NH2 ^N11

rnh2 =

nh2

Чсн2 "NH ^N11

он nh

I I ^ХТТТ

(СН2)2

grgdy

ОН

G - глицин, R - аргинин, D - аспарагиновая кислота, Y - тирозин

NaV 9

MES = r^Y^4^ NHSS = 0=S—(^N-OH

O W

О

Схема 8

Конъюгаты АК с КХЮ-пептидами в смеси с гиалуроновой кислотой и хондроцитами в виде гидрогелей используются для регенерации хрящевой ткани [54]. Синтезирован конъюгат (27) метакрилированной по ОН-группе АК (26) с 04КСВ8Р-пептидом (схема 9); фотосшитый по двойной связи метакрилоильного остатка продукт (28) применяют в качестве ИВМ, регулирующего поведение жировых клеток-предшественников [53].

Схема 9

НО о N30,^0 $ $ ИаОН -МН2-С4Я005Р

Ак^а+>+ у^о-^ Рн7.о,72; V-/ I Ш88/кди

НО он НО О-*'''^

26 О

0„К005Р-Ш, „о N30, .о 04!«Ю$Р-Ш о

с- С" с__О_

-О. . )-О. „ УФ >-о у о

о^ / \

но он но н0 он но 2,

27

о

0=

но^ он о^ .он

о \ /о

о-{ о-

0*Сч 0'С"она

]чН-04К008Р

28

Конъюгат (29) АК с биотином (водорастворимым витамином группы В, кофермент К), содержащий 10-13% модифицированных звеньев, синтезируют с использованием гидразида биотином (схема 10). Конъюгат 29 используется в биосенсорах для определения антибиотика митомицина С [55].

ЯЫН о

о

АК(№+)

30

ЮЧН2/КДИ, МЕБ, N1188 Н20, рН 6.0, 20-25°С, 3-20 ч

-О

.О.

НО он

29-32

о

А

Н—N Н

О

Л

N11,

к= -ш (29) _Д)з(30)

биотин гидразид Ы-(З-аминопропил)

пиррол

о и' М уи

■• ^^Мг-Лр' (31)

(32)

он он

ЫАО+

Тирамин

/сн2)з е- /-о.

<4 + 2Н+

но он 33

Са2* + НВРЛНф

32 СН

Электрохимической полимеризацией пиррольного остатка конъюгата (30) с тУ-(3-аминопропил)пирролом получен конъюгат (33) с полипирролом, а=25-35% (схема 10). Конъюгат 33 применяют в биосенсорных конструкциях, содержащих фермент полифенолоксидазу для амперометрического определения катехола [56].

Конъюгат (31) с коферментом никотинамидадениндинуклеотидом (ХАХ>+) (схема 10), содержащий 3.4-17.6% проявляет коэнзимную активность не

ниже 80-90% от исходного ЫАБ+ и может использоваться в амперометрических энзимных электродах и электрохимических биореакторах [57].

Ионной (Са ) или катализируемой пероксидазой хрена (ИКР) окислительной сшивкой с помощью Н202 конъюгата АК-тирамин (32) получен конъюгат (34), -4.5% масс, (схема 10). Конъюгат 34 используется как материал для инкапсулирования клеточных культур - мышиных фибробластных клеток линии Ь929 и клеток кошачьих почек СгапёаП-Яеезе, обладающих высокой митохондриальной активностью и предназначенных для клеточной терапии [58].

Конъюгат (35) АК с 1-амино-1-дезокси-/Ш-галактозой (7-36% амидных звеньев, определено по интенсивности сигнала протонов Н-1 в остатке галактозамина) (схема 11) применяется для инкапсулирования гепатоцитов и их направленной имплантации в печень. Целевая доставка в печень достигается путем распознавания остатков галактозы асиалогликопротеиновыми рецепторами, расположенными в клеточной мембране клеток печени [59, 60].

Схема 11

он он

он пн J-о

КДИ, NHS, MES ^ / ^о.

AK(Na+) +

-------- 2 н20, рН 8.5,20-25°С

О

но он 35

NHS = Ц/N-OH О

Кросс-сшитые гидрогели, способные образовывать апатит, по свойствам схожий с костной тканью, получают по схеме 12. Сначала синтезируют конъюгат (36) АК с 3-аминопропилтриэтоксисиланом, затем селективно гидролизуют О-этилсиланольные группы и полученный продукт (37) «сшивают» дегидратацией по силанольным группам в продукт (38) [42].

Схема 12

(Et0)3Si(CH2)3NH^o^0 (OH)3Si(CH2)3NH^ ^О

I

(EtO)3Si(CH2)3MH2, КДИ, NHS \/0\ Н20 —-

AK(Na+) ---—---- \ X \ / -Н20

Н20, 20-25°С

но он но он

I 36 37

но ,0 4s( он

0^c^NH(CH2)f O-Si—(CH2)3NH^c^O

~ О )-о

Xk I ^ / \ xl

НО он но он

38

Для конъюгации АК с циклодекстринами (водорастворимые циклические олигосахариды, которые могут включать в свою гидрофобную полость различные

молекулы, повышая их растворимость и стабильность) предварительно получают аддукт АК с дигидразидом адипиновой кислоты (39), (а=6%) (схема 13), а (3-циклодекстрин (СБ) превращают в ацеталь (44). Для превращения в 44 СО окисляют перйодинаном Десс-Мартина (ОМР) до альдегида (40), который реакцией с 0-(карбоксиметил)-гидроксиламином превращают в основание Шиффа (41). Затем соединение 41 переводят в амид 42, обработкой которого 0.2М НС1 получают альдегид 43 [61]. Реакцией гидразида 39 и альдегида 43 получают аддукт 44 восстанавлением которого цианборгидридом получают целевой продукт (45) (а=5%) (схема 13). Последний проявляет комплексообразующие свойства свойственные СО [62].

А -А. О Схема 13

(СН,). ЫН V

)-О

II,N11ЫОС(СН,),СОМ 1Ы1I,, КДИ - / \

AK(Na+) --—-:-——

II,О, рН 4.75,2-25°С, 4 ч

НО' ОН

°„гГ о» ши4)_ _ оЧ „Л

/(СНО)п Н2,-0-С00н со^СН=Ы-°-СнГСООН|п Н2^СН(0Ме)2,Р1С,НОВ{

но\ О

РМР

\\он ОМБО С° Н,0, рН 4.8 "" ОМР

",-"7 л ¿'г

"0>° 40 (п=0-4) 2 " 41 (п=0-4)

но-

циклодексгрин (СБ)

со -- СО

Н20, рН 4.8

42 43

^о /\ о о ш

а ,n=01 соын чсг) о. ^сн сом! со

мн (СН2)4Ш и С »н (СН2)4 мн 2

- ЫаСМВН, ^ / О

39+43 --

Н20, рН 5.1,20-25°С, 3 ч

но он но он

44 45

Гидроксамовая функциональная группа, -С(=0)№ЮН, придает природным и синтетическим соединениям свойства антиоксидантов [63-65], хелаторов железа [66], ингибиторов матриксных металлопротеиназ [67, 68] и других ферментов [65], с ее помощью в молекулу включают различные органические фармакофоры

[69]. Гидроксамовые кислоты обладают противовоспалительными и антимикробными свойствами.

Гидроксамовые кислоты полисахаридов чаще всего получают из соответствующих метиловых эфиров. С этой целью АК метилируют в соляно-кислотном метаноле и эфир (46) затем превращают в гидроксамат (47) обработкой щелочным гидроксиламином (схема 14). Гидроксамат 47, содержащий 20-25% гидроксамовых звеньев, проявляет антирадикальные (1С50 24.5-29.8 мкг/мл) и антиоксидантные свойства (1С5о 90-92 мкг/мл) по отношению к 2,2-дифенил-1-пикрилгидразильным радикалам (ДФПГ). Гидроксамат 47 ингибирует (1С5о 0.090.16 мкг/мл ) аминооксидазу - фермент-металлопротеин, широко распространенный в растениях, микроорганизмах, органах животных (сосудах, пульпе зубов, глазах и плазме) [64].

Схема 14

МеОч HOHN4 .о

с с

MeOH/HCl '\ о NH20H/KQH «Э

AK(Na+) -- X У ^ -" X У ^

\_/ МеОН, 18-48ч \_</

но он но он

46 47

Для получения кросс-сшитых производных АК используют ионную сшивку солями Са2+ и противоположными по заряду полимерами с образованием полиэлектролитных комплексов, например, с хитозаном или гиалуроновой кислотой [70, 71]). Химическую сшивку осуществляют с помощью диглицидиловых эфиров, диаминов, дигидразидов, а также посредством генипина - агликона генипозида (гликозида иридоида), выделяемого из экстракта Gardenia jasminoides. Для сочетания с генипином сначала получают аминопроизводные (48-51) АК с гидразином (8% свободных аминогрупп), этилендиамином (7.5%), 1,6-гексаметилендиамином (3.5%) или транс-1,4-циклогександиамином (3%), свободная аминогруппа которых затем вовлекается в реакцию с генипином (схема 15), который под действием аминогруппы соединений 48-51 подвергается перегруппировке [72], показанной на схеме 16, превращаясь в кросс-сшитые

продукты (52-55), содержащих 0.8% масс, остатков генипина, сообщающих флюоресцентные свойства, которые могут быть использованы в биомедицинских сенсорах [73].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Арасланова, Диляра Ильдусовна, 2014 год

ЛИТЕРАТУРА

1. Kumar R., Patil M. В., Patil S. R., Paschapur M. S. Polysaccharides Based Colon Specific Drug delivery: A Review. // Int. J. PharmTech. Res. - 2009. - Vol. 1. - № 2. -P. 334-346.

2. Сливкин А. И. Полиурониды. Структура, свойства, применение (обзор). // Вестник ВГУ. Серия химия, биология. - 2000.- С. 30-46.

3. Новосельская И. JL, Воропаева Н. JL, Семенова JI. Н., Рашидова С. Ш. Пектин. Тенденции научных и прикладных исследований. // Химия природ, соединений. -2000.-Т. 1.-С. 3-11.

4. Хотимченко Ю.С. Противоопухолевые свойства некрахмальных полисахаридов: каррагинаны, альгинаты, пектины. // Биология моря. — 2010. - Т. 36. -№ 6. -С. 399-409.

5. Elboutachfaiti R., Delattre С., Petit Е., Michaud P. Polyglucuronic acids: structures, functions and degrading enzymes. // Carbohydr. Pol. - 2011. - Vol. 84. - № 1. - P. 113.

6. Siddhesh N. P., Kevin J. E. Alginate derivatization: a rewiev of chemistry, properties and applications. // Biomatherial. - 2012. - Vol. 33. - № 11. - P. 3279-3305.

7. Valla S., Ertesvag H., Skjak-Broek G. Genetics and biosynthesis of alginates. // Carbohydr.Eur. - 1996. - Vol. 14. - № - P. 14-18.

8. Smidsrod O., Draget K.I. Chemistry and physical properties of alginates. // Carbohydr.Eur. - 1996. - Vol. 14. - № - P. 6-12.

9. Espevik Т., Skjak-Broek G. Application of alginate gels in biotechnology and biomedicine. // Carbohydr. Eur. - 1996. - Vol. 14. - P. 19-25.

10. McHugh D. J. 1987. Production and utilization of products from seaweeds. Production, properties and uses of alginates. Food &Agriculture Organisation of UN, Rome. - pp. 58-115.

11. Haug A., Larsen B. Biosynthesis of alginate. Epimerisation of D-mannuronic to L-guluronic acid residues in the polymer chain. // Biochim. Biophys. Acta. - 1969. - Vol. 192.-№3.-P. 557-559.

12. Heyraud A., Gey C., Leonard C., Rochas С., et al. NMR spectroscopy analysis of oligoguluronates and oligomannuronates prepared by acid or enzymatic hydrolysis of homopolymeric blocks of alginic acid. Application to the determination of the substrate specificity of Haliotis tuberculata alginate lyase. // Carbohydr. Res. - 1996. — Vol. 289. - № - P. 11-23.

13. Усов А. И. Альгиновые кислоты и альгинаты: методы анализа, определения состава и установления строения. // Успехи химии. - 1999. - Т. 68. -№ 11. - С. 1051-1061.

14. Stokke В. Т., Smidsrod О., Brucheim P., Skjak-Braek G. Distribution of uronate residues in alginate chains in relation to alginate gelling properties. // Macromol. -1991.-Vol. 24. -№ l.-P. 4637-4645.

15. Takeshi G., Matsushima K., Kikuchi K. Preparation of aiginate-chitosan hybrid gel beads and adsorption of divalent metal ions. // Chemosphere. - 2004. - Vol. 55. - № 1. -P. 135-140.

16. Jain S., Mondal K., Gupta M. N. Applications of alginate in bioseparation of proteins. // Artif. Cells Blood Substit. Immobil. Biotechnol. - 2006. - Vol. 34. - № 2. -P. 127-144.

17. Leung Y.F., O'Shea G.M., Goosen M.F., Sun A.M. Microencapsulation of crystalline insulin or islets of Langerhans: an insulin diffusion study. // Artif. Organ. -1983. - Vol. 7. -№ 2. - P. 208-212.

18. Gursoy A., Kalkan F., Okar I. Preparation and tabletting of dipyridamole alginate-Eudragit microspheres. // J. Microencapsul. - 1998. - Vol. 15. - № 5. - P. 621-628.

19. Hughes M., Vassilakos A., Andrews D.W., Hortelano G., et al. Delivery of a secretable adenosine deaminase through microcapsules a novel approach gene therapy. // Hum. Gene Ther. - 1994. - Vol. 5. - № 12. - P. 1445-1455.

20. El-Kamel A., Sokar M., Naggar V., Al Gamal S. Chitosan and sodium alginate-based bioadhesive vaginal tablets. // AAPS PharmSci. - 2002. - Vol. 4. - № 4. - P. 224-230.

21. Guo R., Zhang L., Jiang Z., Cao Y., et al. Synthesis of alginic acid-poly[2-(diethylamino)ethyl methacrylate] monodispersed nanoparticles by a polymer-monomer pair reaction system. // Biomacromolecules. - 2007. - Vol. 8. - № 3. - P. 843-850.

22. Kuen Y. L., David J. M. Alginate: Properties and biomedical applications. // Progress in Polymer Science. - 2012. - Vol. 37. -№ 1. - P. 106-126.

23. Rowley J. A., Madlambayan G., Mooney DJ. Alginate hydrogels as synthetic extracellular matrix materials. // Biomaterials. - 1999. - Vol. 71. - № 1. - P. 45-53.

24. Herve D., Jacques D. Suspension containing alginic acid. // EP0506563 Al. 30 sep. 1992.

25. Машковский M. Д. Лекарственные средства. — Москва: Новая волна, 2008. — 1206 р.

26. Rohrer С., Leuprecht Н., Alupei I.-C. Antiseptic alginate preparation. // EP1973581 A2. 1 okt 2008.

27. Chen W. Y. J., Clay C. S., Walker M. Wound dressing. // WO 2002076518 Al. 3 okt 2002.

28. Banning D., Dettmar P. W., Jolliffe I. G., Hampson F. C. et al. . Pourable alginate compositions. // US6395307 Bl. 28 may 2002.

29. Бордин Д. С., Машарова А. А. Возможности альгинатов в терапии гастроэзофагенальной рефлюксной болезни. // Consilium modicum. - 2008. - Т. 10. -№ 8. - С. 5-9.

30. Onsoyen Е. Commercial applications of alginates. // Carbohydr. Eur. - 1996. - Vol. 14.-P. 26-31.

31. Le-Tien C., Millette M., Mateescu M. A., Lacroix M. Modified alginate and chitosan for lactic acid bacteria immobilization. // Biotechnol. Appl. Biochem. - 2004. -Vol. 39.-№ 3. —P. 347-354.

32. Ансон С. И., Новикова E. В., Иозеп А. А. Внутримолекулярные сложные эфиры альгиновой кислоты. // Журнал прикладной химии. - 2009. - Т. 82. -№ 3. -С. 1037-1039.

33. Noto V. Н, Pettit D. J. Production of propylene glycol alginic acid esters. // GB 1563019 A. 1980.

34. Sinquin A., Houzelle M. C., Hubert P., Choplin L., et al. Amphiphilic derivatives of propylene glycol alginate: □ a revisit of their physicochemical behavior in dilute aqueous solution. // Langmuir. - 1996. - Vol. 12. - № 16. - P. 3779-3782.

35. Sinquin A., Hubert P., Dellacherie E. Amphiphilic derivatives of alginate: evidence for intra- and intermolecular hydrophobic associations in aqueous solution. // Langmuir. - 1993. - Vol. 9. - № 12. - P. 3334-3337.

36. Sinquin A., Hubert P., Dellacherie E. Intermolecular associations in hydrophobically modified derivatives of propyleneglycol alginate. // Polymer. - 1994. — Vol. 35. - № - P. 3557-3560.

37. Babak V.G., Skotnikova E.A., Lukina I.G., Pelletier S. et al. Hydrophobically associating alginate derivatives: surface tension properties of their mixed aqueous solutions with oppositely charged surfactants. // J. Colloid. Interface Sci. - 2000. - Vol. 225.-№2.-P. 505-510.

38. Valle F. D., Romeo A. Compositions comprising partial esters of alginic acid. // EP0609968A2. lOaug. 1994.

39. Valle F. D., Romeo A. New esters of alginic acid. // US5416205 A. 16 may 1995.

40. Danishefsky I., Siskovic E. Conversion of carboxyl groups of mucopolysaccharides into amides of amino acid esters. // Carbohydr. Res. - 1971. - Vol. 16. - № 1. - P. 199201.

41. Zhu H., Ji J., Lin R., Gao C., at al. Surface engineering of poly (DL-lactic acid) by entrapment of alginate-amino asid derivatives for promotion of chondrogenesis. // Biomaterials. - 2002. - Vol. 23. - № - P. 3141-3148.

42. Hosoya K., Ohtsuki C., Kawai T., Kamitakahara M., et al. A novel covalently crosslinked gel of alginate and silane with the ability to form born-like apatite. // J. Biomed. Mater. Res. - 2004. - Vol. 71. - № 4. - P. 596-601.

43. Chiu C.T., Lee J.S., Chu C.S., Chang Y.P., Wang YJ. Development of two alginate-based wound dressings. // J. Mater. Sci. Mater. Med. - 2008. - Vol. 19. - № 6. - P. 2503-2513.

44. Davidovich-Pinhas M., Harari О., Bianco-Peled H. Evaluating the mucoadhesive properties of drug delivery systems based on hydrated thiolated alginate. // J. Control. Release.-2009.-Vol. 136.-№ 1.-P. 38-44.

45. Arcamone F., Penco S. Anthracyclines and anthracenedione-based anticancer agents (Ed. J.W. Lown). - New York: Elsevier, 1988. - 125 p.

46. Gale E.F., Cundliffe E., Reynolds P.E. et al. The Molecular Basis of Antibiotic Action. - New York: Wiley, 1981.-500 p.

47. Boulad F., Kernan N.A. Treatment of childhood acute limphoblastic leukemia: a review. // Cancer Invest. - 1993. - Vol. 11. - № _ p. 534-553.

48. Мосин O.B. Антибиотики в микробиологической промышленности [Электронный ресурс]. http://samlib.rU/o/oleg w m/cdocumentsandsettingsolegmoidokumentyantibiotikiwmik robiologicheskojpromyshlennostirtf.shtml

49. Веселков А. Н., Итон Р. Дж., Пахомов В. И., Дымант JI. Н., Дэвис Д.Б. Структурный и термодинамический анализ связывания антибиотика дауномицина с дезоксигексануклеотидами различной последовательности оснований в цепи методом ЯМР спектроскопии. // Журнал структурной химии. - 2001. - Т. 42. - С. 236-251.

50. Shamkhani A. A., Duncan R. Synthesis, controlled release properties and antitumour activity of alginate-cw-aconityl-daunomycin conjugates. // Int. J. Pharm. -1995.-Vol. 122.-№ 1-2.-P. 107-119.

51. Bich C., Maedler S., Chiesa K., DeGiacomo F. et al. Reactivity and applications of new amine reactive cross-linkers for mass spectrometric detection of protein-protein complexes. // Anal. Chem. - 2010. - Vol. 82. - № 1. - p. 172-179.

52. Chan L. С , Cox B. G. Kinetics of amide formation through carbodiimide/N-hydroxybenzotriazole (HOBt) couplings. // J. Org. Chem. - 2007. - Vol. 72. - № 23. -P. 8863-8869.

53. Chandler E.M., Berglund C.M., Lee J.S., Polacheck W.J. et al. Stiffness of photocrosslinked RGD-alginate gels regulates adipose progenitor cell behavior. // Biotechnol. Bioeng.- 2011. -Vol. 108.-№7.-P. 1683-1692.

54. Park H., Lee K.Y. Facile control of RGD-alginate/hyaluronate hydrogel formation for cartilage regeneration. // Carbohydr. Pol. - 2011. - Vol. 86. - № 3. - P. 1107-1112.

55. Polyak B., Geresh S., Marks R. S. Synthesis and characterization of a biotin-alginate conjugate and its application in a biosensor construction. // Biomacromolecules. - 2004. -Vol. 5.-№ 2.-P. 389-396.

56. Abu-Rabeah K., Polyak B., Ionescu R. E., Cosnier S., Marks R. S. Synthesis and characterization of a pyrrole-alginate conjugate and its application in a biosensor construction. // Biomacromolecules. - 2005. - Vol. 6. - № 6. - P. 3313-3318.

57. Nakamura Y., Suye S., Kira J., Tera H., et al. Electron-transfer function of NAD+ immobilized alginic acid. // Biochim. Biophys. Acta. - 1996. - Vol. 1289. - № 2. - P. 221-225.

58. Sakai S., Kawakami K. Both ionically and enzymatically crosslinkable alginate-tyramine conjugate as materials for cell encapsulation. // J. Biomed. Mater. Res. - 2008. - Vol. 85. - № 2. - P. 345-351.

59. Donati I., Vetere A., Gamini A., Skjak-Braek G., et al. Galactose-substituted alginate: preliminary characterization and study of gelling properties. // Biomacromolecules. - 2003. - Vol. 4. - № 3. - P. 624-631.

60. Donati I., Coslovi A., Gamini A., Skjak-Braek G., et al. Galactose-substituted alginate 2: conformational aspects. // Biomacromolecules. - 2004. - Vol. 5. - № 1. - P. 186-196.

61. Chariot A., Hyraud A., Guenot P., Rinaudo M., Auzely-Velty R. Controlled synthesys and inclusion ability of a hyaluronic acid derivative bearing /?-cyclodextrin molecules. // Biomacromolecules. - 2006. - Vol. 7. - № 3. - P. 907-913.

62. Gomez C.G., Chambat G., Heyraud H., Villar M., Auzely-Velty R. Synthesis and characterization of a p-CD-alginate conjugate. // Polymer. - 2006. - Vol. 47. - № 26. -P. 8509-8516.

63. Rha H. J., Bae I. Y, Lee S., Yoo S.-H., at al. Enhancement of anti-radical activity of pectin from apple pomace by hydroxamation. // Food Hydrocolloids. - 2011. - Vol. 25. -№ 3. - P. 545-548.

64. Liu D.-Z., Wu W.-C., Liang H.-J., Hou W.-C. Antioxidant and semicarbazide-sensitive amine oxidase inhibitory activities of alginic acid hydroxamates. // J. Sci. Food Agric.-2007.-Vol. 87.-№ l.-P. 138-146.

65. Yang S. S., Cheng K. D., Lin Y. S., Liu Y. W., Hou W. C. Pectin hydroxamic acids exhibit antioxidant activities in vitro. // J. Agric. Food Chem. - 2004. - Vol. 52. - № 13. -P. 4270-4273.

66. Varaprasad D. V. P. R., Desaraju P., Winston A. Synthesis of polyfunctional hydroxamic acids for potential use in iron chelation therapy. // Bioorg. Chem. - 1986. -Vol. 14.-№ l.-P. 8-16.

67. Skarja G. A., Brown A.L., Ho R.K., May M.H., Sefton M. V. The effect of a hydroxamic acid-containing polymer on active matrix metalloproteinases. // Biomaterials. - 2009. - Vol. 30. - № 10. - P. 1890-1897.

68. Hitoshi I., Tadashi M., Koichi T., Akira O., Tatsuya T. Conjugate of hydroxamic acid derivative and hyaluronic acid. // JP2004292465. 21 okt 2004.

69. Kenawy el-R., el-Newehy M., Abdel-Hay F., Ottenbrite R. M. A new degradable hydroxamate linkage for pH-controlled drug delivery. // Biomacromolecules. - 2007. -Vol. 8.-№ l.-P. 196-201.

70. Polk A., Amsden B., De Yao K., Peng T., Goosen M. F. Controlled release of albumin from chitosan-alginate microcapsules. // J. Pharm. Sci. - 1994. - Vol. 83. - № 2.-P. 178-185.

71. Gaserod O., Smidsrod O., Skjak-Braek G. Microcapsules of alginate-chitosan -1: A quantitative study of the interaction between alginate and chitosan. // Biomaterials. -1998.-Vol. 19.-№20.-P. 1815-1825.

72. Yoo J. S., Kim Y.J., Kim S.H., Choi S.H. Study on genipin: a new alternative natural crosslinking agent for fixing heterograft tissue. // Korean J. Thorac. Cardiovasc. Surg. - 2011. - Vol. 44. - № 3. - P. 197-207.

73. Chhatbar M. U., Meena R., Prasad K., Chejara D. R., Siddhanta A. K. Microwave-induced facile synthesis of water-soluble fluorogenic alginic acid derivatives. // Carbohydr. Res. - 2011. - Vol. 346. - № 5. - P. 527-533.

74. Dahlmann J., Krause A., Möller L., Kensah G. et al. Fully defined in situ cross-linkable alginate and hyaluronic acid hydrogels for myocardial tissue engineering. // Biomaterials. - 2013. - Vol. 34. - № 4. - P. 940-951.

75. Бадылькес И. С. Холодильная техника - Ленинград: «Печатный Двор» им. А. М. Горького. - 1961. - Т. 2. - С. 576.

76. Anaya М. С., Lopes М. С. A., Arjona I. L. Continuous clarification of pectin solutions in basket reactor with immobilized commercial pectinases. // Utilization enzymes techhnol. aliment. Symp. Intern. Paris, Fr. Edited by Dupuy Pierre Tech. Doc. Lavoisier. - 1982. - P. 503-512.

77. Grasdalen H., Andersen A. K., Larsen B. NMR spectroscopy studies of the action pattern of tomato pectinesterase: generation of block structure in pectin by a multiple-attack mechanism. // Carbohydr. Res. - 1996. - Vol. 289. - P. 105-114.

78. Schols H. A., Voragen A. G. J. 2002. Synthesis and application of pectic oligosaccharides. С. M.H. (ed.), Pectins and their manipulations. Blackwell Publ., Oxford, pp. 1-29.

79. Grasdalen H., Larsen В., Bakoy О. E. Determination of the degree of esterification and the distribution of methylated and free carboxyl groups in pectin by 1H-N.M.R. spectroscopy. // Carbohydr. Res. - 1988. - Vol. 184. - P. 183-191.

80. A., Baker R. Potential dietary benefits of citrus pectin and fiber. // Food Technology. - 1994.-Vol. 48.-P. 133-138.

81. Shen H., He L., Price R. L. Fernandez M. L. Dietary soluble fiber lowers plasma LDL cholesterol concentrations by altering lipoprotein metabolism in female guinea pigs. // J. Nutr. - 1998. - Vol. 128.-№9.-P. 1434-1441.

82. Vergara-Jimenez M., Conde K., Erickson S. K., Fernandez M. L. Hypolipidemic mechanisms of pectin and psyllium in guinea pigs fed high fat-sucrose diets: alterations on hepatic cholesterol metabolism. // J. Lipid. Res. - 1998. - Vol. 39. - № 7. - P. 14551465.

83. Adjarov D., Pentieva K., Ivanova L., Kerimova M. et al. Influence of dietary pectin on the hepatic levels of reduced glutathione and on lipid peroxide formation in mice. // J. Clin. Biochem. Nutr. - 1995. - Vol. 18. -№ 2. - P. 127-132.

84. Tazawa К., Ohkami H., Yamashita I., Yasuharu S. et al. Anticarcinogenic and/or antimetastatic action of apple pectin in experience rat colon carcinogenesis and on hepatic metastases rat model. // ACS Symp. Ser. - 1998. - Vol. 701. - P. 96-103.

85. Murai K., Kobayashi K., Tazawa K., Ogami H. et al. // Chem. Abstr. - 1995. - Vol. 123.-P. 47902.

86. Некрасова В.Б., Курныгина B.T. Фрагина А.И., Никитина Т.В. и др. Способ переработки подорожника // RU 2034557. 10 мая 1995.

87. Chourasia М. К., Jain S. К. Pharmaceutical approaches to colon targeted drug delivery systems. // J. Pharm. Pharmaceut. Sci. - 2003. - Vol. 6. - № 1. - P. 33-66.

88. Яблоков А. В., Нестеренко В. Б., Нестеренко А. В. Чернобыль: последствия катастрофы для человека и природы. - Санкт-Петербург: Наука. - 2007. - С. 376.

89. Хотимченко Ю.С., Кропотов А. В. Энтеросорбенты для больных и здоровых. // Мед.фарм. вестник Приморья. - 1998. - Т. 4. - С. 99-107.

90. Хотимченко Ю.С., Кропотов А.В. Применение энтеросорбентов в медицине. // Тихоокеанский мед. журнал. - 1999. - Т. 2. - С. 84-89.

91. Al-Lamee К. G., Taktak Y. S. Wound dressing gel. // WO 1998040110 Al. 17 sep 1998.

92. Lee. J., Fells E., Berger L. Esters of polygalacturonic acid methylglycoside and salts trereof. //US 2599564. lOjun 1952.

93. Simkovic I., Mendichi R., Uhliarikova I. Modification of polygalacturonic acid hydroxyls with trimethylammonium and/or sulfonate-2-hydroxypropyl group. // Carbohydr. Pol. - 2008. - Vol. 74. - № 3. - P. 611-616.

94. Lee M. W, Hung C. L, Cheng J. C, Wang Y. J. A new anti-adhesion film synthesized from polygalacturonic acid with l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide crosslinker. // Biomaterials. - 2005. - Vol. 26. - № 18. - P. 3793-3799.

95. Кёгу V., Novotny L., Tihlarik K., Haplova J., et al. Preparation, properties and antileukemic activity of arabinosylcytosine polysaccharide conjugates. // Int. J. Biochem. - 1990. - Vol. 22. -№ 10. - P. 1203-1207.

96. Perera G., Hombach J., Bernkop-Schnurch A. Hydrophobic thiolation of pectin with 4-aminothiophenol: synthesis and In vitro characterization. // Pharm. Sci. Tech. — 2010. -Vol. 11. -№ i._p. 174-180.

97. Majzoob S., Atyabi F., Dorkoosh F., Kafedjiiski K., Loretz В., Bernkop-Schnurch A. Pectin-cysteine conjugate: synthesis and in-vitro evaluation of its potential for drug delivery. //J. Pharm. Pharmacol. - 2006. - Vol. 58. -№ 12. - P. 1601-1610.

98. Peng H.-H., Liu P.-J., Chen I-M., Lee M.-W. Covalently crosslinked hyaluronan-polygalacturonic acid polymer as the drug carrier and its application in surgery. // Iran Polym. J. - 2013. - Vol. 22. - № 6. - P. 429-436.

99. Bae I. Y., Rha H. J., Lee S., Lee H. G. Preparation and characterization of pectin hydroxamates from Citrus Unshiu peels. 11 J. Excipients and Food Chem. - 2011. - Vol. 2. -№ 3. - P. 89-94.

100. Peng H.-H., Chen J.-W., Yang T.-P., Kuo C.-F., Wang Y.-J., Lee M.-W. Polygalacturonic acid hydrogel with short-chain hyaluronate cross-linker to prevent postoperative adhesion. // J. Bioact. Compat. Polym. - 2011. - Vol. 26. - № 6. - P. 552564.

v f

101. Simkovic I , Hricovini M., Sasinkova V. Preparation of ion-exchangers by cross-linking of starch or polygalacturonic acid with l,3-bis(3-chloro-2-hydroxypropyl)imidazolium hydrogen sulphate. // Carbohydr. Pol. - 2002. - Vol. 47. -№2.-P. 131-136.

V

102. I., Simkovic One-step introduction of amine and ammonium groups and croslinking of polygalacturonic acid. // Carbohydr. Pol. - 1997. - Vol. 32. - № 1. - P. 1-6.

103. Matricardi P., Dentini M., Crescenzi V., Ross-Murphy S.B. Gelation of chemically cross-linked polygalacturonic acid derivatives. // Carbohydr. Pol. - 1995. - Vol. 27. -№3.-P. 215-220.

104. Фомина Т.И., Хотимченко Ю.С., Зуева Е.П., Крылова С.Г. и др. Противоязвенное действие пектата кальция на модели хронического язвенного процесса слизистой желудка у крыс. // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2009. - Т. 2. - С. 35-38.

105. Писарев В. В., Ващенко Т. Н., Кайшева Н. LLL, Уткина Е. С., Компанцев В. А. Способ получения пектинатов, обладающих антимикробным действием. // SU 1776656 А1. 9 нояб. 1989.

106. Варью М., Майзель Ю., Лакатош Б. Способ получения комплекса иона металла с олиго- или полигалактуроновыми кислотами. // SU 886750. 30 нояб. 1981.

107. Выштакалюк А. Б., Миндубаев А. 3., Коновалов А. И., Карасева А. Н. и др. Водорастворимый натрий-, кальций-, железополигалактуронат, стимулирующий процесс кроветворения. // RU 2281957 С1. 20 авг. 2006.

108. Мустафин И.Г., Зобов В.В., Коновалов А.И., Миронов В.Ф. и др. Токсикологическая оценка натрий-, железо-, кобальт-, медь-полигалактуроната. // Токсикологический вестник - 2006. - Т. 6. -№ - С. 10-15.

109. Миронов В.Ф., Коновалов А.И., Карасева А.Н., Соснина Н.А. и др. Способ получения водорастворимых би- и полиметаллических комплексов полигалактуроновой кислоты. // RU 2220981 С2. 10 янв. 2004.

110. Миронов В.Ф., Коновалов А.И., Карасева А.Н., Соснина Н.А. и др. Водорастворимые би- и полиметаллические комплексы полигалактуроновой кислоты, стимулирующие процессы кроветворения. // RU 2219187 С2. 20 дек. 2003.

111. Минзанова С.Т., Миронов В. Ф., Выштакалюк А. Б., Цепаева О. В. и др. Получение комплексов пектиновых полисахаридов с дикарбоновыми кислотами. // Доклады Академии наук (ДАН). - 2010. - Vol. 434. - № 3. - Р. 356-360.

112. Миронов В. Ф., Карасева А. Н., Минзанова С. Т., Карлин В. Ф. и др. Комплексы пектинового биополимера с дикарбоновыми кислотами и способ их получения. // RU 2268267 С1. 20 янв. 2006.

113. Haug A., Larsen В., Smidsrod О. Studies on the sequence of uronic acid residues in alginic acid. // Acta Chem. Scand. - 1967. - Vol. 21. - P. 691-704.

114. Smidsrod O., Haug A., Larsen B. The influence of pH on the rate of hydrolysis of acidic polysaccharides. // Acta Chem. Scand. - 1966. - Vol. 20. - № 4. - P. 1026-1034.

115. Haug A., Larsen В., Smidsrod O. A study of the constitution of alginic acid by Partial acid hydrolysis. // Acta Chem. Scand. - 1966. - Vol. 20. - P. 183-190.

116. Haug A., Larsen B. The solubility of alginate at low pH. // Acta Chem. Scand. -1963.-Vol. 17.-P. 1653-1662.

117. Ueno M., Hiroki Т., Takeshita S., Jiang Z., et al. Comparative study on antioxidative and macrophage-stimulating activities of polyguluronic acid (PG) and polymannuronic acid (PM) prepared from alginate. // Carbohydr. Res. - 2012. - Vol. 352.-P. 88-93.

118. Хотимченко Ю. С., Ковалев В. В., Савченко О. В., Зиганшина О. А. Физико-химические свойства, физиологическая активность и применение альгинатов -полисахаридов бурых водорослей. // Биология моря. - 2001. - Т. 27. -№ 3. - С. 151-162.

119. Liu Н., Geng М., Xin X., Li F., et al. Multiple and multivalent interactions of novel anti-AIDS drug candidates, sulfated polymannuronate (SPMG)-derived oligosaccharides, with gpl20 and their anti-HIV activities. // Glycobiology. - 2005. -Vol. 15. -№ 5. — P. 501-510.

120. Zhu H.-B., Geng M.-Y., Guan H.-S., Zhang J.-T. Antihypertensive effects of D-polymannuronic sulfate and its related mechanisms in renovascular hypertensive rats. // Acta Pharmacol. Sin. - 2000. - Vol. 21. - № 8. - P. 727-732.

121. Xia Z., Guiling L., Huashi G. Sulfated polyguluronic acid ester and its preparation method and uses. // 200310105718. 10 Nov. 2004.

122. Li Q., Li C., Yang C., Liu C., at al. Preparation, characterization and antioxidant activities ofpolymannuronic acid phosphate, H-phosphonate and sulfate. // Int. J. Biolog. Macromol. - 2013. - Vol. 62. - P. 281-286.

123. Nooy A. E. J., Besemer A. C., Bekkum H. Highly selective nitroxyl radical-mediated oxidation of primary alcohol groups in watersoluble glucans. // Carbohydrate Res. -1995. - Vol. 269. - № 1. - P. 89-98.

124. Chang P. S., Robyt J. F. Oxidation of primary alcohol groups of naturally occurring polysaccharides with 2,2,6,6,-tetramethyl-l-piperidine oxoammonium ion. // J. Carbohydr. Chem. - 1996. - Vol. 15. - № 7. - P. 819-830.

125. Kato Y., Matsuo R., Isogai A. Oxidation process of water-soluble starch in TEMPO-mediated system. // Carbohydr. Pol. - 2003. - Vol. 51. - № 1. - P. 69-75.

126. Sun В., Gu C.J., Ma J.H.,Liang B.R.. Kinetic study on TEMPO-mediated selective oxidation of regenerated cellulose. // Cellulose. - 2005. - Vol. 12. - № 1. - P. 59.

127. Follain N., Montanari S., Jeacomine I., Gambarelli S., Vignon M.R. Coupling of amines with polyglucuronic acid: Evidence for amide bond formation. // Carbohydr. Pol. - 2008. - Vol. 74. - № 3. - P. 333-343.

128. Sanandiya N.D., Siddhanta A.K. Facile synthesis of a new fluorogenic metal scavenging interpolymeric diamide based on cellulose and alginic acids. // Carbohydr. Res. - 2013. - Vol. 381. - P. 93-100.

129. Платэ H. А., Литманович А.Д., Hoa О. В. Макромолекулярные реакции -Москва: Химия. - 1977. - С. 256.

130. Понеделькина И. Ю., Лукина Е. С., Суфиярова Р. Ш., Одиноков В. Н. Конъюгаты гиалуроновой кислоты и хондроитинсульфатов с 4-аминоантипирином и их анальгезирующие свойства. // Химия природн. соед. -2012.-Т. 4.-С. 583.

131. Тринус Ф. П., Клебанов Б. М., Мохорт Н. А. Методы скрининга и фармакологического изучения противовоспалительных, анальгезирующих и жаропонижающих веществ (методические указания). - Киев: - 1974. - 27 С.

132. Hou W.-C., Chen Y.-C., Chen H.-J., Lin Y.-H., et al. Antioxidant activities of trypsin inhibitor, a 33 KDa root storage protein of sweet potato (.Ipomoea batatas (L.) Lam cv. Tainong 57). // J. Agric. Food Chem. - 2011. - Vol. 49. - № 6. - P. 29782981.

133. Методы химии углеводов. - Под редакцией чл.-корр. АН СССР Кочеткова Н.- Москва: - 1967. - С. 317.