Конверсия 3-кетостероидов Nocardioides simplex ВКМ Ас-2033Д тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Фокина, Виктория Валерьевна

• Фокина, Виктория Валерьевна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Фокина, Виктория Валерьевна

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Биоконверсия 9( 11 )-дегидро-3-кетостероидов

2.2. Микробиологическое 1(2)-дегидрирование 3-кетостероидов

2.2.1. Распространенность 3-кетостероид-1(2)-дегидрогеназной (3-КСД) 13 активности среди микроорганизмов

2.2.2. Свойства 3-КСД

2.2.3. Сходство строения и механизма действия 3-КСД и других дегидрогеназ

2.2.4. Механизм 1 (2)-дегидрирования 3-кетостероидов на примере 3-КСД 19 Nocardia corallina

2.2.5. Субстратная специфичность 3-КСД

2.2.6. Локализация 3-КСД

2.2.7. Связь 3-КСД с другими ферментными системами клетки

2.3. Реклассификация штаммов рода Arthrobacter

2.3.1. Современная систематика микроорганизмов

2.3.2. Признаки, используемые для классификации и идентификации 26 актиномицетов

2.3.3 Переописание штаммов, ранее отнесенных к роду Arthrobacter

2.4 Биоконверсия труднорастворимых субстратов

2.4.1. Конверсия стероидных субстратов в микрокристаллической форме

2.4.2. Использование специальных реакторов для биоконверсии

2.4.3. Использование органических растворителей

2.4.4. Использование полимеров

2.4.5. Использование циклодекстринов и их производных 33 2.5. Культивирование микроорганизмов 39 2.5.1 Режим с периодической подпиткой 39 2.5.2. Варианты стратегии управлением режима с подпиткой

3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 42 3.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

3.1.1. Реактивы

3.1.2. Микроорганизмы и методы их культивирования 42 3.1.2.1. Штаммы, использованные в работе 42 3.1.2.2 Среды для выращивания микроорганизмов

3.1.2.3. Условия культивирования "Arthrobacter globiformis 193"

3.1.2.4. Фракционирование (получение ЦПМ)

3.1.2.5. Трансформация стероидных субстратов

3.1.3. Микроскопия

3.1.3.1. Электронная микроскопия

3.1.3.2. Световая микроскопия

3.1.4. Аналитические методы

3.1.4.1. Анализ продуктов трансформации

3.1.4.2. Масс-спектрометрический анализ

3.1.4.3. ЯМР-спектрометрия

3.1.4.4. Определение концентрации белка

3.1.4.5. Определение растворимости стероидов

3.1.5. Таксономические методы

3.1.5.1. Определение чувствительности к антибактериальным препаратам

3.1.5.2. Определение способности утилизировать сахаро-спирты в качестве 49 единственного источника углерода

3.1.5.3. Определение гидролазной активности

3.1.6. Определение основных хемотаксономических признаков

3.1.6.1. Очищенные препараты клеточных стенок

3.1.6.2. Определение изомера диаминопимелиновой кислоты

3.1.6.3. Определение аминокислотного состава полученных препаратов 50 пептидогликанов

3.1.6.4. Полуколичественное определение менахинонов

3.1.6.5. Состав жирных кислот

3.1.7. Определение последовательности гена 16S рРНК

3.1.8. Филогенетический анализ 51 3.2 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.2.1. Ре-идентификация штамма "Arthrobacter globiformis 193"

3.2.2. Биоконверсия ацетилированных 9(11 )-дегидро-3-кетостероидов

3.2.2.1. Конверсия прегна-4,9(11)-диен-17а,21-диол-3,20-диона

3.2.2.2. Конверсия 21 -ацетата прегна-4,9( 11 )-диен-17а,21 -диол-3,20-диона

3.2.2.3. Конверсия 17а,21-диацетата прегна-4,9(11)-диен-17а,21-диол-3,20-диона

3.2.2.4. Конверсия 21-ацетокси-прегна-4,9(11),16(17)-триен-3,20-диона

3.2.3. Выращивание уплотнённой культуры N. simplex ВКМ Ас-2033Д

4. ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Конверсия 3-кетостероидов Nocardioides simplex ВКМ Ас-2033Д»

Актуальность проблемы.

Физиологическая активность 1(2)-дегидрированных стероидов определяет их широкое использование в терапии многих заболеваний в онкологии, дерматологии, для эффективного лечения больных ревматизмом, инфекционным неспецифическим полиартритом, бронхиальной астмой, различными аллергическими заболеваниями. Иммунодепрессивные свойства этих препаратов используют при трансплантации органов и тканей для подавления реакции отторжения. В сравнении с 1(2)-насыщенными предшественниками 1(2)-дегидростероиды являются более эффективными и вызывают меньше побочных реакций.

Известное с 50-х годов микробиологическое 1(2)-дегидрирование стероидов является основой промышленных технологий получения преднизолона и других преднистероидов. Однако современное развитие Фарминдустрии ставит задачи повышения эффективности процессов 1(2)-дегидрирования 3-кето-стероидов, вводя при этом жесткие ограничения по применению токсических реагентов и растворителей, а также разработки эффективных способов получения широкого ряда современных лекарственных средств, в том числе, галогенированных кортикоидов, в синтезе которых большая роль отводится микробиологическому 1(2)-дегидрированию 3-кето-9(11)-ненасыщенных стероидов.

В связи с этим, актуальным является изучение влияния структурной модификации 3-кетостероидов на процесс их микробиологического 1(2)-дегидрирования, изучение взаимосвязи процесса 1(2)-дегидрирования с другими реакциями метаболизма 3-кетостероидов, разработка способов интенсификации и повышения селективности процесса 1(2)-дегидрирования.

Выбор объекта исследований - культуры Nocardioides simplex ВКМ Ас-2033Д (Arthrobacter globiformis 193) обусловлен его высокой 3-КСД активностью в отношении широкого ряда стероидных субстратов: андростендиона, прогестерона, гидрокортизона, ба-метилгидрокортизона, кортексолона и его 21-ацетата (Суходольская с соавт., 2000; Аринбасарова с соавт., 1995). Высокий биотехнологический потенциал штамма как продуцента стероидных 1(2)-дегидроаналогов предусматривал уточнение его таксономического положения.

Состояние вопроса.

Традиционно двойная связь между С1 и С2 в кольце А стероидов вводится либо на начальных, либо на конечных этапах синтеза (Bork et al., 1968). Изучены особенности процесса дегидрирования гидрокортизона, его ба-метилированного производного, разработаны эффективные методы получения преднизолона и других дегидроаналогов (Аринбасарова с соавт., 1984; Аринбасарова с соавт., 1995). Исследованы свойства 3-кетостероид-1(2)-дегидрогеназы (3-КСД) у многих организмов (Nocardia corallina, Rhodococcus erythropolis, Arthrobacter simplex). Показано существование нескольких изоформ фермента различной локализации (Geize et al., 2002). На процессе биоконверсии гидрокортизона исследована взаимосвязь 1(2)-дегидрирования и 20р-восстановления у Arthrobacter globiformis (Medentsev et al, 1985).

Однако, литературные данные о 1(2)-дегидрировании 9(11)- и 9(11), 16(17)-ненасыщенных 3-кетостероидов ограничены. Сообщалось о том, что процесс конверсии может сопровождаться нежелательной ароматизацией кольца А, либо деструкцией стероидного ядра (Wolf and Kominek, 1984). Данные о возможности биоконверсии ацетатных форм Д4,9(||)-3-кетостероидов в доступной литературе отсутствуют.

Показана высокая 3-КСД активность штамма "Arthrobacter globiformis 193" из рабочей коллекции лаборатории микробиологической трансформации органических соединений ИБФМ РАН в отношении гидрокортизона, ба-метилгидрокортизона, и других стероидных субстратов (Аринбасарова с соавт., 1995).

Анализ диаминокислоты клеточной стенки показал, что штамм имеет LL-диаминопимелиновую кислоту, что отличает его от представителей рода Arthrobacter, для которых характерен пептидогликан А4 с лизином в качестве диаминокислоты. Представлялось актуальным определить соответствующее таксономическое положение штамма с использованием современных методов классификации микроорганизмов.

Биоконверсия многих стероидов осложнена их низкой растворимостью в водных средах. Так, растворимость гидрокортизона составляет менее 0.4 г/л, растворимость 9(11 )-дегидрокортексолона и его ацетилированных форм - в несколько раз ниже. Предложены различные способы решения проблемы доступности стероидных субстратов клеточному биокатализатору, в том числе основанные на использовании органических растворителей и детергентов (Аринбасарова и Кощеенко, 1983; Кощеенко с соавт., 1995). Одним из наиболее эффективных подходов является использование циклодекстринов. Эти биосовместимые циклические олигосахариды образуют с гидрофобными стероидными соединениями комплексы включения, таким образом, оказывая на стероиды солюбилизирующий эффект (Duchenc, 1991). 6

Эффективность использования циклодекстринов была показана для многих процессов конверсии стероидов, в том числе для 1(2)-дегидрирования гидрокортизона и 6а-метилгидрокортизона (Кощеенко с соавт., 1995). Однако эффективность использования природных циклодекстринов (например, Р-циклодекстрина) для повышения эффективности биоконверсии имеет ограничения, связанные как с их растворимостью, так и с растворимостью их комплексов включения со стероидами (Fromming and Szejtli, 1994), поэтому наиболее целесообразным представляется использование в процессах биоконверсии водорастворимых модифицированных производных Р-циклодекстрина.

Осуществление 1 (2)-дегидрирования 3-кетостероидов отмытыми клетками на буферной среде обеспечивает высокую скорость и селективность процесса, облегчает процедуру выделения и очистки целевого продукта, снижает риск контаминации. Однако эффективность такого подхода требует применения высокопроизводительных способов получения биомассы с высокой целевой активностью. Одним из таких приемов является получение уплотнённой культуры, обеспечивающее достижение высокой биомассы при сокращении числа стадий выращивания. В литературе описаны способы получения уплотнённых нокардиеподобных культур (Fass et al., 1995; Honda et al., 1998; Ikeda and Katsumata, 1999), однако, сведения о получении уплотнённых культур со стероидтрансформирующей активностью в литературе отсутствуют.

Цель и задачи работы.

Целью данной работы являлось изучение конверсии Д4,9(П'-3-кетостероидов и их ацетилированных производных культурой Nocardioides simplex ВКМ Лс-2033Д {Arthrobacter globiformis 193) и разработка способов получения их 1(2)-дегидроаналогов.

В связи с этим ставились следующие задачи:

1. Определение таксономического положения штамма "A. globiformis 193" с использованием современных методов классификации микроорганизмов.

2. Изучение возможности 1 (2)-дегидрирования ацетилированных Д4,9(П)-3-кетостероидов.

3. Исследование особенностей биоконверсии ацетилированных Д4-9<||)-3-кетостероидов в присутствии метилированного производного Р-циклодекстрина (МЦД).

4. Получение уплотнённой культуры N. simplex ВКМ Ас-2033Д с высокой стероид-1 (2)-дегидрогеназной активностью.

5. Разработка методов получения 1 (2)-дегидроаналогов Д49("'-3-кетостероидов и их ацетилированных производных.

Научная новизна работы.

Впервые показана возможность микробиологического 1(2)-дегидрирования ацетилированных 3-кетостероидов, ненасыщенных по кольцу С и D. Исследованы особенности метаболизма 21-моно- и 17а,21-диацетата прегна-4,9(11)-диен-17а,21диол-3,20-диона культурой Nocardioides simplex ВКМ Ас-2033Д. Показано, что 1(2)дегидрирование сопровождается дезацетилированием в положении 21 и 20(3восстановлением. Впервые показана неферментативная миграция ацетильной группы из положения 17 в положение 21 при микробиологической конверсии 17а,21-диацетата д4,9< 11 >3-кехостероидов.

Изучены особенности микробиологического дезацетилирования 21-моно- и 17а,21-диацетатов А4'9( 11-3-кетостероидов, выявлен конститутивный характер стероидных эстераз Nocardioides simplex, а также их цитозольная и мембраносвязанная локализация.

Изучен биотехнологический потенциал бактерий рода Nocardioides в отношении 1(2)-дегидрирования стероидов и установлены преимущества использования штамма Nocardioides simplex ВКМ Ас-2033Д, ранее классифицированного как Arthrobacter globiformis 193.

Исследованы особенности трансформации Д4,9(П-3-кетостероидов в присутствии химически модифицированных циклодекстринов. Показано, что ведение процесса в присутствии метилового эфира p-циклодекстрина обеспечивает полную конверсию 3-кетостероидов при высоких (5 г/л) концентрациях.

Разработан способ получения уплотнённой культуры N. simplex ВКМ Ас-2033Д с высокой 3-КСД активностью. Предложены эффективные методы получения 1(2)-дегидроаналогов Д4,9(| '-3-кетостероидов.

Практическая значимость работы.

Определены условия эффективной конверсии клетками N. simplex ВКМ Ас-2033Д ацетатных форм 3-кетостероидов, ненасыщенных по кольцу С и D, и предложены эффективные микробиологические методы получения 21-ацетата прегна-1(2),4,9(11)-триен-17а,21-диол-3,20-диона, 17а-ацетата прегна-1(2),4,9(11)-триен-3,20-дион-17а,21 -диола, 21 -ацетокси-прегна-1 (2),4,9( 11), 16( 17)-тетраен-3,20-диона.

Применение разработанных методов при получении фторированных кортикостероидов позволит заменить многостадийный и низкоэффективный химический синтез этих соединений и повысить эффективность технологий получения лекарственных субстанций в целом.

Разработан способ получения уплотнённой культуры N. simplex ВКМ Ас-2033Д с высокой 3-кетостероид-1(2)-дегидрогеназной активностью. Применение способа позволит избежать затратного многоэтапного культивирования биомассы при масштабировании биотехнологий.

Апробация работы.

Материалы диссертации были представлены на российских и международных конференциях: на 5-ой Пущинской конференции молодых ученых (2001), International Symposium "Biocatalysis and Biotransformations" Biotrans-2001, (2001, Darmstadt), Biotrans-2003 (2003, Olomouc), на ежегодном конкурсе научных работ ИБФМ РАН (2001).

Основные положения диссертации были представлены на совместных семинарах Лаборатории микробиологической трансформации органических соединений и Лаборатории энзиматической деградации органических соединений.

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 7 работ, из них 4 статьи и 3 тезисов.

Структура и объём диссертации.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, включающей описание материалов и методов исследований, изложения результатов и их обсуждения, выводов, списка цитируемой литературы. Работа содержит 144 страницы машинописного текста, 17 таблиц и 48 рисунков. Библиография включает 179 наименований, из них 137 иностранных работ.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Фокина, Виктория Валерьевна

4. ВЫВОДЫ

1. На основании комплексного изучения морфоструктурных, биохимических и филогенетических признаков штамм "Arthrobacter globiformis 193" реклассифицирован как Nocardioides simplex ВКМ Ас-2033Д. Установлены его преимущества как эффективного биокатализатора процессов 1(2)-дегидрирования 3-кетостероидов перед другими представителями рода Nocardioides.

2. Показана возможность микробиологического получения 1 (2)-дегидроаналогов 3-кетостероидов, ненасыщенных по кольцу С и D, и их ацетилированных производных. Найдены условия, обеспечивающие селективное получение 1 (2)-дегидроаналогов с выходом выше 90% при концентрациях субстратов, значительно превышающих пределы их растворимости (свыше 5 г/л).

3. Изучены особенности конверсии 21-ацетата и 17а,21-диацетата прегна-4,9(11)-диен-3,20-дион-17а,21-диола N. simplex ВКМ Ас-2033Д. Показано, что 1(2)-дегидрирование сопровождается дезацетилированием и 20Р-восстановлением стероидов. Впервые установлена неферментативная миграция ацетильной группы из положения 17 в положение 21 при микробиологической трансформации 17а,21-диацетата стероида.

4. Изучены особенности конверсии 21-ацетокси-прегна-4,9(11),16(17)-триен-3,20-диона N. simplex ВКМ Ас-2033Д. Показано, что в отличие от 3-кетостероид-1(2)-дегидрогеназ, стероид-эстеразы являются конститутивными ферментами. Установлена их цитозольная и мембраносвязанная локализация.

5. Изучены особенности 1(2)-дегидрирования 3-кетостероидов в присутствии химически модифицированных циклодекстринов. Показано преимущество процесса одностадийного микробиологического способа получения ацетилированных 1(2)-дегидропроизводных ненасыщенных по кольцу С и D 3-кетостероидов по сравнению с известным химическим методом.

6. Впервые разработан метод выращивания уплотнённой культуры N. simplex ВКМ Ас-2033Д. Метод обеспечивает получение биомассы до 21 г/л с сохранением высокой стероид-1 (2)-дегидрогеназной активности.

7. Разработаны микробиологические методы получения 21-ацетата прегна-1(2),4,9(11)-триен-17а,21-диол-3,20-диона, 17а-ацетата прегна-1(2),4,9(11)-триен-3,20-дион-17а,21-диола, 21-ацетокси-прегна-1(2),4,9(11),16(17)-тетраен-3,20-диона -интермедиатов синтеза фторированных кортикостероидов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Фокина, Виктория Валерьевна, 2003 год

1. Редикульцев Ю.В., Кощеенко К.А., Скрябин Г.К., Литвиненко JI.A., Борман Е.А., Суходольская Г.В., Меньшова Н.И., Гриненко Г .С., Корзинкина Н.А. 1985. Способ получения преднизолона. А.С. СССР 1471561.

2. Агре Н.С. 1986. Систематика термофильных актиномицетов. Пущино, ОНТИ НЦБИ АН СССР, 132 с.

3. Алехина Т.М, Рыжкова В.М., Гусарова Т.И, Куракова В.В, Клубничкина Г.А, 1993. Микробиологическая трансформация соединений включения стероидов с Р-циклодекстрином. Химико-фармацев. журнал. Вып. 4. С. 59-62.

4. Ананьин В.М., Боев А.В., Вельков В.В. 1997. Два подхода к получению уплотнённых культур рекомбинантных штаммов Saccharomyces cerevisiae. Прикл. Биохим. и микробиол. Т. 33. N. 1. С. 84-87.

5. Ананьин В.М., Боев А.В., Горлатова Н.В., Крюкова Е.Г., Ловля Д.И., Вельков В.В. 1992. Два подхода к получению уплотнённых культур рекомбинантных штаммов Saccharomyces cerevisiae. Биотехнология. Вып. 6. С. 80-82.

6. Аринбасарова А.Ю. Окислительно-восстановительные превращения гидрокортизона свободными и иммобилизованными клетками Arthrobacter globiformis. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Пущино. 1985.

7. Аринбасарова А.Ю., Кощеенко К.А. 1980. Ковалентное связывание клеток с активированным силикагелем. Прикл. биохимия и микробиология. Т. 16. Вып. 6. С. 854861.

8. Аринбасарова А.Ю., Фокина В.В., Карпов А.В., Меденцев А.Г., Кощеенко К. А. 1995. 1-ен-дегидрирование ба-метилгидрокортизона клетками Arthrobacter globiformis 193. Биохимия. Т. 60. Вып. 10. С. 1679-1687.

9. Аринбасарова А.Ю., Кощеенко К. А. 1983. Использование водно-органических систем в энзиматической трансформации стероидов. Прикл. биохим. микробиол. Т. 19. Вып. 1. С. 20-31.

10. Аринбасарова А.Ю., Кощеенко К.А., Андрюшина В.А., Гриненко Г.С., Скрябин Г.К. 1993. Способ получения 1,2-дегидропроизводных кортикостероидов. Патент РФ 1830949.

11. Ахрем А.А., Титов Ю.А. 1965. Микробиологические трансформации стероидов. Москва, "Наука".

12. Ахрем А.А., Титов Ю.А. 1970. Стероиды и микроорганизмы. Москва, "Наука".

13. Борман Е.А., Кощеенко К.А., Соколова JI.B., Ковылкина Н.Ф. 1975. Микробиологическое дегидрирование микрокристаллических Д4-3-кетостероидов. Изв. ак. наук. Серия биологическая. Вып. 1.

14. Донова М.В., Довбня Д.В., Калиниченко А.Н., Аринбасарова А.Ю., Вагабова Л.М., Морозова З.В., Кощеенко К.А. 1995. Способ получения андроста-1,4-диен-3,17-диона. Патент РФ 2039824.

15. Донова М.В., Довбня Д.В., Калиниченко А.Н., Аринбасарова А.Ю., Вагабова Л.М., Морозова З.В., Кощеенко К.А. 1997. Способ получения андрост-4-ен-3,17-диона. Патент РФ 2079258. БИ N. 13.

16. Готовцева В.А., Скворцова Л.Ф., Коровкина А.С. 1979. Влияние некоторых соединений на процесс восстановления 20-кетогруппы кортикостероидов культурой Mycobacterium globiforme. Микробиология. Т. 158. Вып. 5. С. 833-837.

17. Евтушенко Л.И. и Зеленкова Н.Ф. 1989. Таксономическое положение Proactinomyces farineus. Микробиология. Т. 58. С. 498-500.

18. Кощеенко К.А. 1981. Живые иммобилизованные клетки как биокатализаторы процессов трансформации и биосинтеза органических соединений. Прикл. биохимия и микробиология. Т. 17. Вып. 4. С.477-493.

19. Красильников Н.А., Скрябин Г.К., Асеева И.В., Корсунская Л.О. 1959. Дегидрирование в положении 1,2-гидрокортизона при помощи Mycobacterium sp. 193. Докл. АН СССР. Т. 128. Вып. 5. С. 1063-1065.

20. Ксандопуло Г.Б. 1971. Влияние некоторых факторов на процесс трансформации стероидов микроорганизмами. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Москва.

21. Лестровая Н.Н., Назарук М.М., Скрябин Г.К. 1965. Дегидрирование и восстановление кольца А Д4-3-кетостероидов бесклеточными препаратами из Mycobacterium globiforme 193. Докл. АН СССР. Т. 163. Вып. 3. С. 768-770.

22. Лестровая Н.Н., Бухар М.И., Скрябин Г.К. 1966. Ферментативный механизм микробиологического дегидрирования и восстановления кольца А стероидов. Биохимия. Т. 32. С. 741.

23. Лестровая Н.Н., Бухар М.И. 1970. Доказательство участия двух ферментов в процессе микробиологического 1,2-дегидрирования и восстановления Д'-связи в кольце А стероидов. Биохимия. Т. 35. С. 1182-1186.

24. Лестровая Н.Н., Кузнецова В.И. 1971. Закономерности индуцированного синтеза -Д'-стероидной дегидрогеназы Mycobacterium sp. 193. Изв. АН СССР. Серия микробиологическая. Вып. 1. С. 74.

25. Лестровая Н.Н., Ксандопуло Г.Б., Карасевич Ж.Г. 1971. Влияние стероидов на эстеразную активность Mycobacterium album Jensen. Микробиология. Т. 50. Вып. 3. С. 461-465.

26. Лестровая Н.Н., Бухар М.И. 1973. Дегидрирование и восстановление кольца А стероидов ферментными препаратами микробного происхождения. В сб. Ферменты микроорганизмов. "Наука", Москва.

27. Лестровая Н.Н. 1973. Получение очищенных препаратов Д1-стероидной дегидрогеназы микобактерий. Изв. АН СССР. Сер. биол. Вып. 5. С. 755-759.

28. Лестровая Н.Н. 1981. Локализация З-оксостероид-д'-дегидрогеназы в клетках Mycobacterium rubrum и Arthrobacter globiformis. Микробиология. Т. 50. Вып. 4. С. 619-625.

29. Матыс В.Ю., Ананьин В.М., Соколов Д.М., Вельков В.В. 1994. Сравнение физиологических и биохимических характеристик метилотрофных дрожжей Hansenula polymorpha DL-1 при хемостатном и уплотнённом культивировании. Биотехнология. N 8. С. 14-17.

30. Машковский М.Д. 1997. Лекарственные средства (пособие для врачей) Том 2 (издание тринадцатое, новое). Харьков "Торсинг" стр. 28-45.

31. Меденцев А.Г., Аринбасарова А.Ю., Кощеенко К.А., Акименко В.К. 1983. Связь З-кетостероид-Д'-дегидрирогеназы с дыхательной цепью бактерий Arthrobacter globiformis. Биохимия. Т. 48. Вып. 10. С. 1726-1732.

32. Методы общей бактериологии под ред. Гердхардта Ф. 1984. М.: Мир. Том 3. Систематика. С. 5-163.

33. Назарук М.И. 1972. Влияние рС>2 на процесс Д'-дегидрирования стероидов культурой Мус. globiforme 193. Микробиологическая промышленность. Т. 6. Вып. 90. С. 31-35.

34. Наумова И.Б. и Шашков А.С. 1997. Анионные полимеры в клеточной стенке грамположительных бактерий. Биохимия. Т. 62. С. 809-840.

35. Нестеренко О.А., Квасников Е.И. и Ногина Т.М. 1985. Нокардиоподобные и коринеподобные бактерии. Киев: Наукова думка. 334с.

36. Кощеенко К.А., Аринбасарова А.Ю., Донова М.В., Андрюшина В.А., Стыценко Т.С., Пашкин И.И., Кузькина И.Ф., Кирш Э.Ю., Карапутадзе Т.М., Зубов В.П. 1995. Способ получения дегидроаналогов стероидов. Патент РФ 2042687.

37. Суходольская Г.В., Донова М.В., Николаева В.М., Кощеенко К.А., Довбня Д.В., Хомутов С.М., Гулевская С.А. 2000. Способ получения 1,2-дегидропроизводных 4-дельта-3-кетостероидов. Патент РФ 2156302.

38. Abul-Hajj Y.J. 1978. Isolation of vitamin K2 (35) from Nocardia restrictus and Corynebacterium simplex. J. Biol. Chem. V. 253. pp. 2356-2360.

39. Abul-Hajj Y.J. 1972. Stereochemistry of C-l,2-dehydrogenation of 5P-pregnane-3,11,20-trione by Septomyxa affinis. J. Biol. Chem. V. 147. pp. 686-691.

40. Ananjin V.M., Komkov A.S., Solovyeva I.V., Boyev A.V., Okunev O.N. 1991. Some approaches to adaptive control of fed-batch culture of the celtobiase producer Aspergillus japonicus. Acta Biotechnol. V. 11. N 2. pp. 121-128.

41. Andriantsoa M., Laget M., Cremieux A., Dumenil G. 1984. Constant fed-batch-culture of methanol-utilizing corynebacterium producing vitamin В12. Biotechnol. Lett. V. 6. N 12. pp. 783-788.

42. Arinbasarova A Yu., Medentsev A.G., Akimenko V.K., Koshcheyenko K.A., and Skryabin G.K. 1985. Redox reactions in hydrocortisone transformation by Arthrobacter globiformis cells. J. steroid Biochem. V. 23. N. 3. pp. 307-312.

43. Atrat P., Deppmeyer V., and Horhold C. 1980. Efficient purification of a microbial steroid 1-dehydrogenase by electrophoretic desorption from the affinity matrix on a preparative scale. J. Cromatog. V.189. pp. 279-283.

44. Baddiley J. 1988. The function of teichoic asids in walls and membranes of bacteria. In: The roots of modern biochemistry, pp. 223-229. Edited by Kleinkauf von Dohren, Jaenicke. Berlin-New-York: Walter de Gruyter and Co.

45. Becker В., Lechevalier M.P., Gordon R.E., Lechevalier H.A. 1964. Rapid differentiation between Nocardia and Streptomyces by paper chromatography of whole cell hydrolysates. Appl. Microbiol. 1964. V. 12. pp. 421-423.

46. Bergey's Mannual of Systematic Bacteriology 9ed. 1989. Baltimore: Williams and Wilkins Co.

47. Bernstein S„ Lenhard R.H., Allen W.S., Heller M., Littell R., Stolar S. M., Feldman L.J., Blank R.H. 1956. 16a-hydro derivatives of 9a-halo-steroids. J. Amer. Chem. Soc. V. 78. N. 21. pp. 5693-5699.

48. Bork K.H., Bruekner K., Mannhardt H., Metz H. von Werder F.V. 1968. 16-Methylene-9a-fluoro steroids. German Patent 1,263,765.

49. Bunch A.W. 1994. High cell density growth of micro-organisms. Biotechnol. Genet. Eng. Rev. V. 12. pp. 535-561.

50. Charney W., and Herzog H. 1967. Microbial transformation of steroids. Academic Press, Inc., New York, pp. 4-9,236-261.

51. Carruthers N.I., Garshasb S., McPhail A.T. 1992. Synthesis of corticoids from 9a-hydroxyandrost-4-ene-3,17-dione. J. Org. Chem. V. 57. pp. 961-965.

52. Castro N.M., Ruiz J.A. 1994-1995. Synthesis of 17a,21-dihydroxy-pregna-1,4,9(1 l)-triene3,20-dione 21-acetat. Rev. CENIC Cienc. Quim. V. 25-26. N 1-2-3. pp. 9-12.

53. Catroux Y., Fournier J., Blachere H. 1968. Importance de la forme cristalline de e'acetate de cortisone pour la dehydrogenation en C-l par Arthrobacter simplex. Can. J. Biochem. V. 46. pp. 537-542.

54. Chen K.-C., Chang C.-C., Chiu C.-F. and Ling A.C. 1985. Mathematical simulation of pseudo-crystallofermentation of hydrocortisone by Arthrobacter simplex. Biotech. Bioeng. V. 27. N. 3. pp. 253-259.

55. Choi K.P., Molnar I., Murooka Y. 1995. Secretory overproduction of Arthrobacter simplex 3-ketosteroid-Д1 -dehydrogenase by Streptomyces lividans with a multicopy shuttle vector. Appl. Microbiol. Biotechnol. V. 43. N. 6. pp. 1044-1049.

56. Cirilo G.M., Jorge R.L., and Pedro J.N. 1993. Synthesis and lH and 13C nuclear magnetic resonance of 16-methylene-17a-hydroxypregna-l,4,9(l l)-triene-3,20-dione. Steroids. V. 58. pp. 396-399.

57. Collins M.D. 1985. Isoprenoid quinone analisis in bacterial classification and identification. Chemical methods in bacterial systematics V. 23. pp. 267-287.

58. Collins M.D., Dorschet M. and Stackebrandt E. 1989. Transfer of Pimelobacter tumescens to Terrabacter gen. nov. as Terrabacter tumescens comb. nov. and Pimelobacter jensertii to Nocardioides jensenii comb. nov. Int J Syst Bacteriol V. 39. pp. 1-6.

59. Collins M.D., Jones D., Keddie R.M., Kroppenstedt R.M. and Schleifer K.H. 1983. Classification of some coryneform bacteria in a new genus Aureobacterium. Syst Appl Microbiol V. 4. pp. 236-252.

60. Collins M.D., Cockcroft S. and Wallbanks S. 1994. Phylogenetic analysis of a new LL-diaminopimelic acid-containing corineform bacterium from herbage, Nocardioides plantarum sp. nov. Int J Syst Bacteriol V. 44. pp. 523-526.

61. Collins M.D. and Jones D. 1981. The distribution of isoprenoid quinone structural types in bacteria and their taxonomic implication. Microbiol. Rev. V. 45. N. 1. pp. 316-354.

62. Collins M.D., Jones D., Keddie R.M., Kroppenstedt R.M., Schliefer K.H. 1983. Classification of some corineform bacteria in a new genus Aureobacterium. Syst. Appl. Microbiol. N4. pp. 236-252.

63. Cross T. and Alderson G. 1988. What weight morphology in current actinomycete taxonomy. Biology of Actinomycetes'&8 Y. Eds.: Okami Т., Beppu H„ Ogawara. Proceeddings of 7th Int. Symp. on biology of Actinomycetes. p. 216-220.

64. Culos D., Watanabe M. 1982. Testosterone-dependent oxygen consumption in membrane vesicles of Pseudomonas testosteroni. J Steroid Biochem. V. 17. N. 1. pp.67-69.

65. Dannenberg H., Neuman H.-G. Dehydrierung von steroiden. 1964. 9-Abhangigkeit der dehydrierung mit chinonen von chinon, reaktion-smilen und steroid. Annalen der Chemie. V. 675. pp. 109-111.

66. Deppmeyer V. 1982. Dissertation zur promotion A. Friedrich-Schiller-Universitat,1. Jena.

67. Donova M.V., Dovbnya D.V., Koshcheyenko K.A. 1996. Modified CDs-mediated enhancement of microbial sterol sidechain degradation. In: Proc. of Eighth Int. Symp. on Cyclodextrins. Kluwer Ac. Pub. Dordrecht, pp.527-530.

68. Drobnii К., Krizaj I., Gubensek F., and Komel R. 1993. Improved purification of steroid 1:2-dehydrogenase from Nocardia opaca and partial characterization of its cloned gene sequence. Biochem. and Biophys. Res. Com. V. 190. N. 2. pp. 509-515.

69. Duchene D. 1991. New trends in cyclodextrins and derivatives. Editor Dominique Duchene. Editions de Sante. 19, rue Louis-le-Grand-75002, Paris, p. 604.

70. Dutta R.K., Roy M.K., Singh H.D. 1992. Metabolic blocks in the degradation of beta-sitosterol by a plasmid-cured strain of Arthrobacter oxydans. J. Basic Microbiol. V. 32. N. 3. pp. 167-76.

71. El-Refai A.-M., Sallam L., Nairn N. 1976. Enzymic oxidation and reduction of Cortisol with Bacillus cereus. J. Gen. Appl. Microbiol. V. 22. pp. 25-33.

72. Evans C.G.T., Herbert D., Tempest D.B. 1970. The continuous cultivation of microorganisms. 2. Construction of a chemostat. Methods in Microbiology. V. 2 pp. 277-327.

73. Evtushenko L.I., Taptykova S.D., Akimov V.N. and Dobritsa S.V. 1989. A new species of actinomycete, Amycolata alni. Int. J. Syst. Bacteriol. V. 39. pp. 72-77.

74. Fass R., Bahar S., Kaufman J., Shiloach J. 1995. High-yield production of diphtheria toxin mutants by high-density culture of C7 (beta)tox+ strains grown in a non-deferrated medium. Appl. Microbiol. Biotechnol. V. 43. N 1. pp. 83-88.

75. Fernandes P., Cabral J.M.S., Pinheiro H.M. 1995. Bioconversion of a hydrocortisone derivative in a organic-aqueous two-liquid-phase sistem. Enzyme Microbiol. Technol. V. 17. N.2. pp.163-167.

76. Fieschko J.C. 1989. Fermentation technology using recombinant microorganisms in biotechnology. Biotechnology (New York). Eds.: Rehm H.J. and Reed G. VCH, Weinheim. V. 7b. N 1. pp. 117-140.

77. Florin C., Kohler Т., Grandguillot M., Plesiat P. 1996. Comamonas testosteroni 3-ketosteriod-A4-(5a)-dehydrogenase: gene and protein characterization. J. Bacteriol. V. 178. No 11. pp. 3322-3330.

78. Freeman A. and Lilly M.D. 1987. The effect of water-miscible solvents on the 1-dehydrogenase activity of free and PAAG-entrapped Arthrobacter simplex. Appl. Microbiol. Biotechnol. V. 25, pp .495-501.

79. Fried J. and Thoma R.W. 1956. Production of Д1-bonds in the A ring of the cyclopentano-polyhydrophenanthrene nucleus by Streptomyces lavendulae. US pat., 2756179.

80. Fromming K.-H. and Szejtli J., 1994. Topics in inclusion science. V. 5. Cyclodextrins in pharmacy. Series Editor: Davies J.E.D. Editorial board: Iwamoto Т., Lipkowski J., Saenger W. Kluwer Academic Publishers. Dordrecht / Boston / London, pp. 1 -224.

81. Galdecki Z., Grochulski P., Wawrzak Z., Duax W.L., Strong P., Segaloff A. 1985. Structure determination of 3 beta,17-dihydroxy-17alpha-pregn-5-ene-20-one. Steroids. V. 45. N. 3-4. pp. 289-296.

82. Galdecki Z., Grochulski P., Wawrzak Z., Duax W.L., Strong Ph.D. 1990. Structure of 21-fluoro-4,9(ll)-pregnadiene-3,20-dione-17a-yl acetate, C23H29O4F. J. Cryst Spectr Res. V. 20. N. 2. pp. 441-444.

83. Gale P.H., Page A.C., Stoudt Т.Н., Folkers K. 1962. Identification of vitamin K2 (35) an apparent cofactor of a steroid-1-dehydrogenase of Bacillus sphaericus. Biochemistry. V. l.pp. 788-792.

84. Goodfellow M. 1989. The Actinomyceles I. Suprageneric classification of actinomycetes. In: Bergey's manual of systematic bacteriology. Eds.: Williams S.T., Sharpe M.E. and Holt J.G. Baltimore: Williams and Wilkins.V. 4. pp. 2333-2339.

85. Goodfellow M. and Minnikin D.E. 1985. Introduction to chemosystematics. In: Chemical Methods in Bacterial Systematics. Ed.: Goodfellow M. and Minnikin D.E. London: Academic Press, pp. 1-15.

86. Goodfellow M. and Cross T. 1984. The biology of the actinomycetes. In: The Biology of the Actinomyces. Eds.:ited by M. Goodfellow, M. Mordarski, S.T. Williams. London: Academic Press, pp. 7-164.

87. Goren Т., Harnik M., Rimon S., Aharonowitz Y. 1983. 1-Ene-steroid reductase of Mycobacterium sp. NRRL B-3805. J. Steroid Biochem. V. 19. N. 6. pp.1789-1797.

88. Groh H., Komel R., Deppmeyer V., Schade W. and Horhold C. 1980. Steroid transforming enzymes from microorganisms: the reverse reaction of the steroid 1-dehydrogenase from Nocardia. J. Steroid Biochem. V.13. pp. 1413-1415.

89. Grove M.J., Strandberg G.W., Smiley K.L. 1971. Steroid esterase bound to porous glass beads. Biotechnol. Bioeng. V. 13. N. 5. pp. 709-711.

90. Higushi T. and Connors K. 1965. Phase-solubility techniques. In: C.N. Reilly (Ed.). Advances in analitical chemistry and instrumentation. Intercsience. New York. NY. pp. 117-212.

91. Hocknull M.D. and Lilly M.D. The stability of the 1-dehydrogenation system of Arthrobacter simplex in organicsolvent/aqueous two-liquid phase environments. 1988. Enzym. Microb. Technol. V. 10. pp.669-674.

92. Honda H., Sugiyama H., Saito I., Kobayashi T. 1998. High cell density culture of Rhodococcus rhodochrous by pH-stat feeding and dibenzothiophene degradation. J. Ferment. Bioeng. V. 85. N. 3. pp. 334-338.

93. Hubener H. J. and Sahrholz F. G. 1960. 20-(5-Hydroxy-steroid-dehydrogenase. II. Darstelling und Kristallization. Biochem. Z. V. 333. p. 95.

94. Ikeda M„ Katsumata R. 1999. Hyperproduction of tryptophan by Corynebacterium glutamicum with the modified pentose phosphate pathway. Appl. Environ. Microbiol. V. 65. N 6. pp. 2497-2502.

95. Itagaki E., Matushita Т., Hatta T. 1990. Steroid transhydrogenase activity of 3-ketosteroid-Д1-dehydrogenase from Nocardia corallina. J. Biochem. V. 108. N. 1. pp. 122-127.

96. Itagaki E., Hatta Т., Wakabayashi Т., Suzuki K. 1990. Spectral properties of 3-ketosteroid-A'-dehydrogenase from Nocardia corallina. Biochim. Biophys. Acta. V. 1040. N. 2. pp. 281-286.

97. Jukes Т.Н. and Cantor C.R. 1969. Evolution of protein molecules. In Mammalian Protein Metabolism. Ed. Munro H.N. N. Y. A. P. pp. 21-132.

98. Kaul R. and Mattiasson B. 1986. Steroid bioconversion in aqueous two-phase system. Laane C., Tramper J. and Lilly M.D. (Eds.) Biocatalysis in organic media. Proc. Int. Symp. at Wageningen, The Netherlands, 7-10 December 1986. pp. 107-113.

99. Kampfer P, and Kroppenstedt M. 1996. Numerical analysis of fatty acid patterns of coryneform bacteria and related taxa. Can. J. Microbiol. V. 42. pp. 989-1005.

100. Kleman G.L., Strohl W.R. 1994. Developments in high cell density and high productivity microbial fermentation. Review. Curr. Opin. Biotechnol. V. 5. N 2. pp. 180-186.

101. Kleman G.L., Strohl W.R. 1992. High cell density and high-productivity microbial fermentation. Curr. Opin. Biotechnol. Review. V. 3. N 2. pp. 93-98.

102. Kominek L.A., Wolf H.J. 1985. Process for preparing 1,2-dehydro steroids. US Patent 4.524.134.

103. Kominek L.A. 1973. Process for the micbiological 1-dehydrogenation of certain 4,17(20)-pregnadienes. US Patent 3.770.586.

104. Kondo E., Masuo. E. 1961. Pseudocrystallofermentation of steroids: a new process for preparing prednisolone by a microorganism. J. Gen. Appl. Microbiol. V. 7. pp. 113117.

105. Kroppenstedt R.M., Stackebrandt E. and Goodfellow M. 1990. Taxonomic revision of the actinomycete genera Actinomadura and Microtetraspora. Syst. Appl. Microbiol. V. 13. pp. 148-160.

106. Laane С., Boeren В., Vos К., Veeger С. 1987. Rules for optimization of biocatalysis in organic solvents. Biotechnol. Bioeng. V. 30. pp. 81-87.

107. Labeda D.P. 1987. Actinomycete taxonomy: generic characterization. Developments in Industrial Microbiology. V. 28. pp. 115-121.

108. Lee J., Lee S.Y., Park S., Middelberg A.P.J. 1999. Control of fed-batch fermentations. Biotechnol. Adv. V. 17. pp. 29-48.

109. Levy R.H., Talalay P. 1959. Bacterial oxidation of steroids. I. Ring A dehydrogenations by intact cells. J. Biol. Chem. V. 234. pp. 2009-2013.

110. Levy R.H., Talalay P. 1959. Bacterial oxidation of steroids. II. Studies on the enzymatic mechanism of ring A dehydrogenation. J. Biol. Chem. V. 234. pp. 2014-2026.

111. Lilly M.D. 1990. The use of free and immobilized Arthrobacter simplex in organic solvent/aqueous two-liquid phase reactors. Appl. Microbiol. Biotechnol. V. 22. N. 2. pp. 148-153.

112. Medentsev A.G., Arinbasarova A.Y., Koshcheyenko K.A., Akimenko V.K. and Skryabin G.K. 1985. Regulation of 3-ketosteroid-l-en-dehydrogenase activity of Arthrobacter globiformis cells by a respiratory chain. J. Steroid Biochem. V. 23. N. 3. pp. 365-368.

113. Minehane B.J., Brown D.E. 1986. Fed-batch culture technology. Biotechnol. Adv.1. V. 4. N. 2. pp. 207-218.

114. Nagy U.E., Bartho I., Hantos G„ Trinn M., Vida Z., Szejtli J., Stadler A., Habon I., Balazs M. 1981. Intensification of microbiological conversion of steroids by using cyclodextrin additives. UK Patent GB 2 108 965 A.

115. Nobile A., Charney W., Perlman D., Herzog H., Payne C., Tully M., Jevnik M., Hershberg E. 1955. Microbiological transformation of steroids. 1. Al,4-diene-3-ketosteroids. J. Amer. Chem. S. V. 77. N. 15. pp. 1484-1488.

116. Park T.G., and Hoffman A.S. 1989. Immobilization of Arthrobacter simplex cells in thermally reversible hydrogels: comparative effects of organic solvent and polymeric surfactant on steroid conversion. Biotechnol. Lett. V. 11. N. 1. pp. 17-22.

117. Penasse I., Peyre H. 1968. Studies of З-oxo-steroid-A'-oxidoreductase of Arthrobacter simplex. Steroids. V. 12. pp. 525-544.

118. Pinheiro H.M. Bioconversion of 6a-methylhydrocortisone by immobilized cells of Arthrobacter simplex. M. Sc. Thesis. Instituto Superio Tecnico, Lisboa. 1988.

119. Pinheiro H.M., and Cabral J.M.S. 1991. Effects of solvent molecular toxicity and microenvironment composition on the Д1 dehydrogenation activity of Arthrobacter simplex cells. Biotech. Bioeng. V. 37. pp. 97-102.

120. Plesiat P., Grandgulliot M., Harayama S., Vragar S. and Michel-Briand Y. 1991. Cloning, sequencing, and expression of the Pseudomonas testosteroni gene encoding 3-oxosteroid A'-dehydrogenase. J. Bacteriol. V. 173. N. 22. pp. 7219-7227.

121. Prauser H. 1976. Nocardioides, a new genus of the order Actinomycetales. Int. J. Syst. Bacteriol. V. 26. pp. 58-65.

122. Prauser H. 1984. Nocardioides luteus spec. now. Z. Allg. Microbiol. V. 24. pp. 647-648.

123. Pridham T.G., Gottlieb D. 1948. The utilization of carbon compounds by some Actinomycetales as an aid for species determination. J. Bacteriol. V. 56. pp. 107-114.

124. Ringold H.J., Hayano M. and Stefanovic V. 1963. Conelring the stereochemistry and mechanism of bacterial C-l,2-dehydrogenation of steroids. J. Biol. Chem. V. 238. pp. 19601965.

125. Rossello-Mora R and Amann R. 2001. The species concept for prokaryotes. FEMS Microbiol. Rev. V. 25. pp. 39-67.

126. Ryu D. Y„ Lee B.K., Thoma R.W., Humphrey A.E. 1971. Semicontinuos production of 3 ketosteroid Д1-dehydrogenase for steroid transformation at high substrate concentrartion. Chem. Eng. Progr. Symp. Ser. V. 67. N. 108. pp. 80-83.

127. Saitou N. and Nei M. 1987. The neighbour-joining method: a new method for reconstructing phylogenetic trees. Mol. Biol. Evol. V. 4. pp. 406-425.

128. Sambrook J., Fritsch E.F. and Maniatis T. 1989. Molecular cloning: a laboratory manual, 2nd ed. Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor. New York.

129. Sebek O.K., and Perlman D. 1979. Microbial technology. Eds: Peppier H. J. and Perlman D. Academic Press. V. 1. pp. 483-496.

130. Scharfenberg-Pfeiffer D., Megges R., Bohl M., Simon K., Stopsack H. 1990. Crystal and molecular structure of 17a-acetoxy-21-hydroxy-l,4-pregnadiene-3,20-dione. Cryst. Res. Technol. V. 25. N. 2. pp. 151-156.

131. Scharfenberg-Pfeiffer D., Megges R., Hohne E., Stopsack H. 1990. Crystal and molecular structure of 17a,21-dihydroxy-l,4-pregnadiene-3,20-dione. Cryst. Res. Technol. V. 25. N. 5. pp. 505-509.

132. Schleifer K.H. and Kandler O. 1972. Peptidoglycan types of bacterial cell walls and their taxonomic implications. Bacteriol. Rev. V. 36. pp. 407-477.

133. Shephard, Kenneth Paul, Van Rheen, Verlan H. 1977. Process for the preparation of 17a-hydroxyprogesterones and corticoids from androstenes. US Pat.No 4,041,055.

134. Sih J.C., Bennett E.R. 1962. Steroid-1-dehydrogenase of Nocardia restrictus. Biochem. Biophys. Acta. V. 56. pp. 584-592.

135. Singer Y., Shity H., Bar R. 1991. Microbial transformation in a cyclodextrin medium. Part 2. Reduction of androstenedione to testosterone by Saccharomyces cerevisiae. Appl. Microbiol. Biotechnol. V. 35. pp. 731-737.

136. Smolders A.S.S., Pinheiro H.M., Noronha P., Cabral J.M.S. 1991. Steroid bioconversion in microemultion system. Biotech. Bioeng. V. 39. N. 10. pp. 1210-1217.

137. Solovyeva I.V., Ananjin V.M., Boyev A.V., Okunev O.N. 1997. Controlled biosynthesis of eellobiase by Aspergillus fungi. Process Biochem. V. 32. N. 1. pp. 21-28.

138. Spassov G., Krutzfeldt R., Sheldrick W.S., Wania W., Vlahov R. and Snatzke G. 1983. Crystallographic monitoring of microbiological steroid transformations. Eur. J. Appl. Microbiol. Biotechnol. V. 17. pp. 80-84.

139. Stackebrandt E. and Liesack W. 1994. Nucleic acids and classification. In: Handbook of new bacterial systematics. pp. 152-194. Edited by Goodfellow M. and O'Donnel A.G. London: Academic Press.

140. Stackebrandt E., Rainey F.A. and Ward-Rainey N.L. 1997. Proposal for a new hierarchic classification system, Actinobacteria classis nov. Int. J. Syst. Bacteriol. V. 47. pp. 479-491.

141. Stefanovic V., Hyano M., Dorfman R.J. 1963. Some observation the Д1-dehydrogenation by Bacillus sphaericus. Biochem. Biophys. Acta. V.71. pp. 429-437.

142. Suzuki K., Goodfellow M. and O'Donnel A.G. 1994. Cell envelopes and classification. In: Handbook of new bacterial systematics. pp. 195-250. Edited by Goodfellow M. and O'Donnel A.G. London: Academic Press.

143. Sutcliffe I.C. 1994. The lipoteichoic acids and lypoglycans of Gram-positive bacteria: a chemotaxonomic perspective. System Appl Microbiol V. 17. pp. 467-480.

144. Szejtli J. 1991. The use of cyclodextrins in biotechnological operations. Ed.: Duchene D. Published in France by Editions de Sante. 625 p.

145. The United States Pharmacopeia. USP 26. The National Formulary. NF 21. Solubilities. Reference tables. United States Pharmacopeial Convention, INC. 12601 Twinbrook Parway, Rockville, MD 20852. pp. 2588-2594.

146. Todhunter J.A. 1979. In: Meth. Enzymol. Ed.: Purich D.L. Ac. Press, London. V. 63A. pp. 383-411.

147. Tramper J., Wolters I., Verlaan P. In Biocatalysis in organic media. Eds.: Laane C., Tramper J., Lilly M.D. pp.311-316.

148. Vandamme P., Pot В., Gillins M., De Vos P., Kersters K. and Swings J. 1996. Poliphasic taxonomy, a consensus approach to bacterial systematics. Microbiol. Rev. V. 60. pp. 407-438.

149. Vischer E., Wettstein A. Enzymatic transformations of steroids by microorganisms. 1958. Adv. Enzymology. V. 20. N.-Y.-London, pp. 1-237.

150. Wagner В., Atrat P.G., Clark-Curtiss J.E., and Wagner M. 1992. Localization of the steroid 1-dehydrogenease in Rhodococcus erythropolis IMET 7030 by immunoelectorn microscopy. J. Basic Microbiol. V. 32. N. 1. pp. 65-71.

151. Watanabe M., Lefebvre D., Lefebvre Y., Sy L.P. 1980. Membrane-bound dehydrogenases of Pseudomonas testosteroni. J. Steroid Biochem. V. 13. N. 7. pp. 821-827.

152. Wittmann C., Zeng A.P., Deckwer W.D. 1995. Growth inhibition by ammonia and use of a pH-controlled feeding strategy for the effective cultivation of Mycobacterium chlorophenolicum. Appl. Microbiol. Biotechnol. V. 44. N. 3-4. pp. 519-525.

153. Wolf H.J., and Kominek L.A. 1984. Improved steroid-1-dehydrogenation using heat-dried cells. Ann. of the N.-Y. Ac. of Sci. Eds.: Laskin A.I., Tsao G.T., Wingard L.B., Jr. In: Enz. Engineering 7. V. 434. pp. 106-109.

154. Wovcha M.G., and Merle G. 1977. Process for preparing 9a-hydroxyandrostenedione. US Pat 4,035,236.

155. Wovcha M.G., Brooks K.E. and Kominek L.A. 1979. Evidence for two steroid 1,2-dehydrogenase activities in Mycobacterium fortuitum. Biochim. Biophys. Acta. V. 574. pp. 471-479.

156. Yan H., Kishimoto M., Omasa Т., Katakura Y., Suga K.-I., Okumura K., Yoshikawa 0. 1995. Increase in desulfurization activity of Rhodococcus erythropolis KA 2-5-1 using ethanol feeding. J. Biosci. Bioeng. 2000. V. 89. N 4. pp. 361-366.

157. Yoon J.-H., Rhee S.-K., Lee J.-S., Park Y.-H. and Lee S.T. 1997. Nocardioides pyridinolyticus sp. nov., a pyridine-degrading bacterium isolated from the oxic zone of an oil shale column. Int. J. Syst. Bacteriol. V. 47. pp. 933-938.

158. Yoon J.-H., Cho Y.-G., Lee S. Т., Suzuki K., Nakase T. and Park Y.-H. 1999. Nocardioides nitrophenolicus sp. nov., a p-nitrophenol-degrading bacterium. Int. J. Syst. Bacteriol. V. 49. pp. 675-680.

159. Российская академия наук Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина

160. УТВЕРЖДАЮ директора ИБФМ РАН ;.биолл£аук1. М.Б.Вайнштейн 2003 г.1. Актиспытаний способа микробиологического 1(2)-дегидрирования 21-ацетата прегна-4,9(11)-диен-17а,21-диол-3,20-диона клетками

161. N. simplex VKM Ас-2033Д, представленного сотрудниками лаборатории микробиологической трансформации органических соединений ст.н.с. к.б.н. Суходольской Г.В., м.н.с. Фокиной В.В., Н.С. KiX«H« Николаевой В.М. и зав.лаб. к.б.н. Доновой М.В.

162. Для определения соответствия данного способа лабораторно-техническому уровню было проведено сравнение балансовых операций по пяти ферментациям в аппаратах АНКУМ 2М с общим объемом 3 литра.