Применение полимеров в микробиологических трансформациях стероидов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат биологических наук Дружинина, Анна Викторовна

• Дружинина, Анна Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Дружинина, Анна Викторовна

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Значение трансформации стероидов для микроорганизмов.

2.2. Виды трансформаций стероидных соединений микроорганизмами.

2.2.1. 1,2-Дегидрирование стероидов.

2.2.1.1. Структура и свойства МЕТА.

2.2.1.2. Известные микробиологические методы получения МЕТА.

2.2.2. Микробиологическое гидроксилирование стероидов.

2.2.2.1. 7а-Гидроксилирование.

2.2.2.2. 11а-Гидроксилирование.

2.2.2.3. 14а-Гидроксилирование.

2.3. Повышение доступности стероидов для микроорганизмов-трансформаторов.

2.3.1. Механизм потребления микроорганизмами субстратов, практически не растворимых в воде.

2.3.2. Способы повышения доступности стероидных субстратов для микроорганизмов.

2.3.2.1. Конверсия субстратов в мелкокристаллической форме.

2.3.2.2. Использование органических растворителей.

2.3.2.3. Применение сурфактантов.

2.3.2.4. Использование синтетических полимеров класса N-виниламидов.

2.3.2.4.1. Использование поливинилпирролидона.

2.3.2.4.2. Использование поливинилкапролактамов.

2.3.2.5. Использование циклодекстринов и их производных.

2.3.2.5.1. Структура циклодекстринов и их производных, образование комплексов включения.

2.3.2.5.2. Применение циклодекстринов в промышленности.

2.3.2.5.3. Использование циклодекстринов в биотрансформациях стероидов.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1. Реактивы.

3.2. Микроорганизмы и методы их культивирования.

3.2.1. Штаммы, использованные в работе.

3.2.2. Среды для хранения и выращивания микроорганизмов.

3.2.3. Получение биомассы Pimelobacter simplex для проведения трансформации.

3.2.4. Трансформация стероидов бактериями.

3.2.4.1. Трансформация стероидов растущей бактериальной культурой.

3.2.4.2. Трансформация стероидов отмытыми клетками Pimelobacter simplex.

3.2.5. Трансформация стероидов растущими грибными культурами.

3.2.6. Трансформация стероидов отмытым мицелием.

3.3. Выделение продуктов трансформации.

3.4. Получение МИД для повторного использования.

3.5. Аналитические методы.

3.5.1. Тонкослойная хроматография (ТСХ).

3.5.2. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ).

3.5.3. Протонный магнитный резонанс (ПМР).

4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. 1,2-Дегидрирование.

4.1.1. Анализ 1,2-дегидрирующей активности штаммов Corynebacterium simplex, Rhodococcus erythropolis, Pimelobacter simplex.

4.1.2. 1,2-Дегидрирование МТС в присутствии ПВК.

4.1.3. Трансформация МТС с помощью поливиниловых спиртов.

4.1.4. 1,2-Дегидрирование МТС в присутствии ГТВП.

4.1.5. Трансформация МТС с помощью полиэтиленоксидов.

4.1.6. Трансформация МТС в присутствии модифицированного ЦД.

4.1.6.1. Влияние индуктора на 1,2-дегидрогеназную активность отмытых клеток P. simplex.

4.1.6.2. Трансформация МТС растущими и отмытыми клетками Р. simplex.

4.1.6.3. Влияние количества биомассы P. simplex на скорость 1,2-дегидрирования МТС.

4.1.6.4. Оценка влияния на процесс 1,2-дегидрирования состава трансформационной среды.

4.1.6.5. Изучение способности P. simplex к синтезу солюбилизаторов стероидов.

4.1.6.6. Влияние рН на скорость 1,2-дегидрирования МТС.

4.1.6.7. Влияние количества вносимого растворителя на конверсию МТС.

4.1.6.8. Влияние концентрации стероидного субстрата на скорость процесса 1, 2-дегидрирования МТС.

4.1.6.9. Оценка эффективности 1,2-дегидрирования различных стероидных субстратов в оптимизированных условиях.

4.1.6.10. Повторное использование МЦД в качестве солюбилизатора МТС.

4.1.6.11. Трансформация МТС в МЕТА в оптимальных условиях.

4.2. Гидроксилирование стероидов.

4.2.1.11 а-Гидроксилирование.

4.2.1.1. Трансформация андростендиона растущей культурой Beanveria sp.

4.2.1.2. Трансформация АД мицелием Beauveria sp.

4.2.2. 14а-Гидроксилирование стероидов мицелием Curvularia Innata

ВКПМ F

4.2.2.1. Трансформация АД в присутствии ПВП.

4.2.2.2. Трансформация АД в виде комплекса с химически модифицированными циклодекстринами.

4.2.2.3. Трансформация 9а-гидрокси-АД и АДД.

4.2.3. 11 ß-Гидроксилирование.

4.2.3.1. Трансформация ТС.

4.2.3.2. Трансформация в-ва «S».

4.2.4. 7а-Гидроксилирование.

4.2.4.1. 7а-Гидроксилирование мицелием С. lunata.

4.2.4.2. 7а-Гидроксилирование А5-Зр-гидроксистероидов в присутствии химически модифицированных ЦД.

4.2.4.3. Трансформация А5-ПГ, MAR и TAR.

5. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Применение полимеров в микробиологических трансформациях стероидов»

Актуальность проблемы.

Стероиды - кортикостероиды, гестагены, андрогены и эстрогены благодаря своей уникальной биологической активности и широкому спектру действия нашли большое применение в медицинской практике в качестве противовоспалительных, противошоковых, антиаллергических, противоастматических, диуретических, анаболических, противораковых, гормональных, контрацептивных и других лекарственных средств.

Известно использование стероидных препаратов при лечении свыше 100 распространенных заболеваний. Роль этой группы лекарственных препаратов, спасших не одну человеческую жизнь, трудно переоценить, поэтому многие из них входят в список жизненно необходимых. Потребность в стероидных гормональных препаратах в мире с каждым годом возрастает в связи с ухудшением экологии и соответственно значительным ростом аллергических, онкологических и других заболеваний.

В России в конце 80-х - начале 90-х годов выпускалось порядка 20 субстанций стероидных гормонов в объеме ~ 4-5 тонн. Объем производства кортикостероидов, включавший 7 наименований, составлял -1,5 тонны.

За последние 15 лет состояние дел в этой области в России резко ухудшилось. Производство- стероидных субстанций практически прекращено, а заводы переориентированы на выпуск готовой лекарственной формы из импортных субстанций, что привело к зависимости России от поставок из-за рубежа и недоступности для потребителей жизненно необходимых препаратов из-за их дороговизны. Поэтому разработка синтеза стероидных препаратов из доступного отечественного сырья и отработка отдельных технологических стадий синтеза с учетом новейших достижений биотехнологии является чрезвычайно актуальной задачей. Следует отметить, что химический синтез стероидов вследствие сложности строения стероидной молекулы и ее полифункциональности многостадиен и очень сложен. Поэтому важная роль в синтезе стероидов, особенно в промышленном масштабе, отводится микробиологической трансформации, имеющей значительные преимущества в виде высокой селективности (при наличии соответствующих штаммов), сокращению количества стадий синтеза, простоты аппаратурного оформления, отсутствия необходимости в дорогих реактивах и экологической чистоты микробиологических методов. Более того, такая трансформация стероидов как гидроксилирование практически выполнима только с помощью микробных катализаторов.

Однако, несмотря на все достоинства ферментативных процессов, их использование затрудняет чрезвычайно низкая растворимость стероидных субстратов в водных средах, что особенно существенно при масштабировании процессов. Проблема решения высокой нагрузки стероидного субстрата является чрезвычайно актуальной и наиболее сложной при решении вопросов синтеза стероидов в промышленном масштабе.

Состояние вопроса.

Для повышения растворимости и доступности для микробной клетки практически нерастворимых в воде стероидных субстратов используют ряд приемов: механическое измельчение кристаллов до микрочастиц, либо переосаждение стероида в водной реакционной среде из раствора в смешивающемся с водой органическом растворителе, что также позволяет получать субстрат в виде микрочастиц. Мелкодисперсную эмульсию стероидов в воде получают путем внесения их в виде раствора в органических растворителях, после чего растворители упаривают [1]. Иногда проводят реакцию в присутствии растворителя, смешивающегося с водой, например, диметилсульфоксида, который вносят не только одновременно с субстратом [2], но и последовательно [3], что также улучшает диспергирование субстрата. Применяют органические растворители наряду с солюбилизирующими агентами [3, 2]. Однако органические растворители, как смешивающиеся, так и не смешивающиеся с водой, оказывают токсическое действие на микроорганизмы, а солюбилизирующие агенты приводят к образованию пены, что затрудняет массообмен и аэрирование системы. Как правило, при использовании органических растворителей реакцию проводят в присутствии искусственных акцепторов электронов, чаще всего менадиона [2]. Однако даже при этом не достигается высокая степень превращения, поскольку менадион сам токсичен для микроорганизмов. Кроме того, присутствие гидрофобного менадиона в реакционной смеси затрудняет очистку гидрофобного продукта. Оригинальное решение доступности субстратов для микробной клетки было предложено венгерскими исследователями [4]. Предложенный ими способ включает микробиологическое превращение стероидных субстратов в присутствии интенсифицирующих процесс а-, (3- или у-циклодекстринов или их смесей. Было показано, что в присутствии этих соединений растворимость стероидов значительно увеличивается за счет образования комплексов включения, наблюдалось также увеличение скоростей реакций, сокращалось время превращения и уменьшалось характерное для многих стероидов ингибирование скорости реакции продуктом. Циклодекстрины после проведения процесса могут быть регенерированы. Среди недостатков этого метода следует отметить недостаточно высокую концентрацию субстратов (не более 4 г/л); при этом удовлетворительное превращение (98%) достигается лишь в присутствии менадиона. Позже этот способ был улучшен в реакции дегидрирования с Р-циклодекстрином российскими учеными, применившими в трансформации вещества, снижающие трансмембранный потенциал (аминокислоту, никотинамид или ретинол, или их сочетание), что позволило избежать использования менадиона [5]. Однако, несмотря на то, что способ позволил поднять концентрацию субстрата в 2 раза, он далеко не универсален, описан только для процесса дегидрирования и подходит не для всех субстратов. Кроме того, само использование (3-циклодекстрина ограничено его невысокой растворимостью в воде. Поэтому для интенсификации процессов биотрансформации стероидов перспективным является использование хорошо растворимых его химических модификантов. Одна из попыток решения этой задачи была предпринята путем получения эпихлоргидринового полимера ß-циклодекстрина [6]. Особенностью таких полимеров является не только хорошая растворимость в воде, но и способность образовывать комплексы с большими гостевыми молекулами по сравнению с ^модифицированным ß-циклодекстрином [6]. Однако существенного увеличения растворимости молекулы гидрокортизона достигнуто не было.

Известно также использование водорастворимых химически модифицированных производных ß-циклодекстрина, в процессах деградации стеринов до 17-кетоандростанов АД и АДД и в процессах получения 1,2-дегидропроизводных Д4 -3-кетостероидов [7-9], однако этот способ также не является универсальным и ограничен подбором для каждого процесса и каждого субстрата определенного производного ß-циклодекстрипа. Кроме того, в последнее время появилось несколько публикаций о влиянии некоторых производных циклодекстрина на рост и активность стерин трансформирующих микобактерий и их способности вызывать лизис культуры Bacillus halondurans [10, 11].

Для солюбилизации стероидов и других гидрофобных соединений описано также использование природных полимеров, таких как хитин и хитозан, или синтетических полимеров класса N-виниламида, например поливинилпирролидона (ПВП) и поливинилкапролактама (ПВК) [5, 12-16]. Использование хитиновых полимеров, к сожалению, не дало желаемых результатов. Значительным продвижением вперед было использование полимеров ПВК. Их использование в некоторых процессах позволило значительно поднять концентрацию некоторых стероидных субстратов в процессе микробиологического дегидрирования [14]. Однако исследование ограничилось одним процессом и узким набором субстратов.

Таким образом, в настоящее время известны несколько способов решения проблемы низкой растворимости стероидных субстратов. Тем не менее, ни один способ не является универсальным. Однако среди рассмотренных выше методов применение полимеров представляется наиболее перспективным.

Поэтому представлялось актуальным проведение исследований по поиску среди синтетических и природных полимеров универсального солюбилизатора, эффективного для различных процессов и стероидных соединений различной структуры, а также исследование его влияния на стероид трансформирующую активность бактерий и грибов и изучение условий проведения в его присутствии наиболее часто используемых в синтезе стероидов трансформаций, таких как 1,2-дегидрирование и гидроксилирование в различные положения стероидной молекулы. Цель и задачи работы.

Целью данной работы являлось исследование в области повышения эффективности практически значимых микробиологических трансформаций стероидов, таких как 1,2-дегидрирование и направленное гидроксилирование путем применения в реакциях синтетических и природных полимеров. В связи с данной целью были поставлены следующие задачи:

• Определить зависимость солюбилизирующей активности полимеров от их химического строения и молекулярной массы, а также структуры трансформируемых стероидов.

• Определить оптимальную концентрацию полимеров, наиболее эффективных в процессах 1,2-дегидрирования бактериями и гидроксилирования грибами.

• Исследовать факторы регуляции процесса 1,2-дегидрирования в присутствии наиболее эффективного солюбилизатора. и определить оптимальные условия, обеспечивающие максимальный выход целевого продукта.

Провести в присутствии лучшего полимера направленное гидроксилирование Д4-3-кето- и Д5-ЗР-гидроксистероидов ряда андростана и прегнана грибами с различной гидроксилазной активностью с целью выхода на новые биологически активные соединения.

Научная новизна работы.

Изучена зависимость способности к солюбилизации стероидов у 16 полимеров класса N-виниламидов и циклодекстринов от величины молекулярной массы, концентрации полимера, его химической структуры. В числе исследуемых полимеров 11 соединений ранее не применялись в трансформациях стероидов, осуществляемых с помощью бактерий, и 16 соединений - для трансформаций, осуществляемых грибами.

Впервые для стероидных трансформаций, осуществляемых грибными культурами, применены полимеры класса N-виниламидов и химически модифицированные циклодекстрины.

Показано, что метилированный (randomly) Р-циклодекстрин (МЦД) эффективен как солюбилизатор в процессах трансформации стероидных соединений различной структуры, осуществляемых как бактериями, так и грибами.

Впервые показана возможность увеличения нагрузки исследуемых стероидных субстратов в реакциях гидроксилирования грибами от 0.5-2 до 10-20 г/л в присутствии МЦД.

Впервые показана возможность повторного использования МЦД (не менее 3 раз) без его регенерации в процессах трансформации стероидов, осуществляемых как бактериями, так и грибами.

Впервые показано наличие 7а-гидроксилазной активности у гриба Curvularia Innata в отношении Д5-3(3-гидроксистероидов.

Методом лабораторной селекции при непосредственном участии автора получен новый штамм С. lunata, отличающийся высокой 7а-гидроксилазной активностью в отношении стероидных Д5-олефинов. Штамм депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) под номером F-981.

Разработан способ направленного 7а-гидроксилирования Д5-ЗР-гидрокси- стероидов с помощью нового штамма С. Innata ВКПМ F-981. На способ 7а-гидроксилирования получен патент РФ № 2 377 309 (Бюлл. Изобр. №36 от 27.12.2009). Изобретение включено отделом экономики и статистики промышленной собственности ФИПС в базу «Перспективные изобретения».

С помощью нового штамма С. lunata получено 17 гидроксипроизводных Д4-3-кето- и Д5-3(3-гидроксистероидов ряда андростана и прегпана, среди которых 4 новых соединения.

Практическая значимость работы.

Проведена оптимизация процесса трансформации 17а-метилтестостерона (МТС) с использованием штамма Pimelobacter simplex ВКПМ Ас-1632 [17] с высокой 1,2-дегидрогеназной активностью. На основании разработанной технологии предложен эффективный одностадийный метод 1,2-дегидрирования Д4-3-кетостероидов при повышенной нагрузке субстрата (до 20 г/л) в водном растворе МЦД. 1,2-Дегидроаналоги, находящие широкое применение в медицине и ветеринарии получены практически с количественным выходом. Метод соответствует лабораторно-техническому уровню согласно испытаниям, проведённым в аппаратном зале Центра «Биоинженерия» РАН, на основании которых составлен акт о наработке 125 г. метандростенолона (МЕТА).

Разработан способ направленного 7а-гидроксилирования стероидов с помощью нового штамма С. lunata ВКПМ F-981, открывающего возможности получения новых биологически активных соединений с иммуностимулирующей, противораковой, радиопротекторной и антихолестеринемической активностью.

Использование (З-циклодекстрина (ЦД) и его химически-модифицированных производных - МЦД и гидроксипропил-ЦД (ГПЦД) в процессе направленного 7а-гидроксилирования позволили не только увеличить нагрузку субстратов с 2 до 10 г/л, но и скорость реакции почти в 2 раза и поднять выход 7а-гидроксистероидов с 15до 95%.

Апробация работы.

Материалы диссертации были представлены на российских и международных конференциях: на VI Международном Форуме «Биотехнология и современность» (2005, Санкт-Петербург), VII Международном форуме «Биотехнология и современность» (2006, Санкт-Петербург), I Всероссийской научно-практической конференции «Питательные среды и методы культивирования клеток для биологии, медицины и биоиндустрии: фундаментальные и прикладные аспекты» (2007, Пущино), XX зимней международной молодёжной научной школе «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии» (2008, Москва), XXVIII Российской Школе «Наука и технология» (2008, Миасс).

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 12 работ, из них 4 статьи в журналах, рекомендованных ВАК, 2 патента РФ, 1 сообщение и 5 тезисов.

Структура и объём диссертации.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, включающей описание материалов и методов исследования, изложения результатов и их обсуждения, выводов, списка цитируемой литературы, приложения. Работа содержит 115 страниц машинописного текста, 13 таблиц, 34 рисунка. Библиография включает 153 наименования, из них 123 иностранные работы.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Дружинина, Анна Викторовна

5. ВЫВОДЫ

1) Изучена стероид со любил изирующая активность 17 водорастворимых синтетических и природных полимеров, проявляемая в процессах трансформации стероидов бактериями и грибами. Установлено, что солюбилизирующая активность полимеров класса N-виниламидов возрастает с увеличением их молекулярной массы и достигает максимума у полимеров с молекулярной массой 500-2000 кДа. У природных полимеров -циклодекстринов - солюбилизирующая активность определяется наличием и характером заместителя в молекуле олигосахарида, при этом лучшие результаты получены в присутствии метил-р-циклодекстрина (МИД).

2) Установлено, что оптимальной концентрацией полимеров класса N-виниламидов в процессе 1,2-дегидрирования метилтестостерона бактерией Pimelobacter simplex является 1% для ПВК и 3.5% для ПВП. Оптимальным мольным соотношением МЦД/стероид в процессах 1,2-дегидрирования является 1.2:1, а в процессах гидроксилирования грибами -0.8:1.

3) Определены оптимальные условия, обеспечивающие количественный выход целевого продукта в процессе 1,2-дегидрирования: рН 7.2, количество биомассы — 4 г/л, концентрация метанола - 7%, присутствие индуктора 3-кетостероиддегидрогеназы, среда для трансформации - деминерализованная вода, солюбилизатор - МЦД. Разработан эффективный одностадийный метод 1,2-дегидрирования МТС при нагрузке субстрата до 20 г/л в растворе МИД.

4) Впервые для гидроксилирования (7а-, 1ф- и 14а-) стероидов плесневыми грибами использованы химически модифицированные циклодекстрины. В результате трансформации Д4-3-кето- и Д5-Зр-гидроксистероидов ряда андростана и прегнана мицелием Curviilaria Innata в присутствии МЦД получено 17 гидроксипроизводных, из которых 4 стероида не- описаны в литературе. Установлено, что в присутствии МЦД в случае гидроксилирования стероидов продукты трансформации содержатся только в водной фазе, что существенно облегчает их выделение в кристаллическом виде.

5) Разработан способ получения 7а-гидроксипроизводных стероидных 5-олефинов с помощью нового штамма Ситъйапа 1ипМа ВКПМ Р-981. Способ позволяет достигнуть 95% выхода 7а-гидроксистероидов в присутствии МЦД при нагрузке стероидного субстрата 10 г/л.

6). Показано, что МЦД можно рассматривать как универсальный солюбилизатор, эффективный в процессах трансформаций стероидных соединений различной структуры, осуществляемых как бактериями, так и грибами. При этом была показана возможность его повторного использования после выделения продуктов реакции.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Дружинина, Анна Викторовна, 2010 год

1. Beaton J. Preparation of sterol substrates for bioconversion. US patent №4124607, IPC С 07 J 9/00, 1978.

2. Zaffaroni A., Campillo C. Process for the production of 11-hydroxylatedsteroids. GB patent № 1083204, IPC C12P33/00, 1967.

3. Nagy U.E., Bartho I., Hantos G., Trinn M., Vida Z., Szejtli J., Stadler A., Habon I., Balazs M. Process for the intensification of microbiological conversions of steroids by using cyclodextrin additives. GB patent № 2108965 В, С 07/J 1/00, 5/00, 1985.

4. Аринбасарова А.Ю., Кощеенко K.A., Андрюшина В.А., Гриненко Г.С., Скрябин Г.К. Патент РФ № 1830949 Способ получения 1,2-дегидрированных кортикостероидов. Кл. С 12 Р 33/00. EHN 19, 1995.

5. Волкова Д.А., Банникова Г.Е., Лопатин С.А., Ильин М.М., Андрюшина В.А., Грачева И.М., Варламов В.П. // Хим.-Фарм.Ж. 1999. - Т. 33. -№3. - С. 30-32.

6. Harada A., Furue M. and Nozakura S. Inclusion of aromatic compounds by a (3-cyclodextrin epichlorohydrin polymer. Polymer.J., 1981, V.13, №8, p. 777-778.

7. Суходольская Г.В., Донова M.B., Николаева В.M. и др. Способ получения 1,2-дегидропроизводных 4-дельта-З-кетостероидов. Патент РФ 2156302, 2000.

8. Донова М.В., Довбня Д.В., Калиниченко А.Н. и др. Способ получения андроста-1,4-диен-3,17-диона. Патент РФ 2039824, 1995.

9. Донова М.В., Довбня Д.В., Калиниченко А.Н. и др. Способ получения андрост-4-диен-3,17-диона. Патент РФ 2079258. Бюлл. Изобр. № 13. 1997.

10. Donova M.V., Nikolayeva V.M., Dovbnya D.V., Gulevskaya S.A., Suzina N.E. Methyl-p-cyclodextrin alters growth, activity and cell envelope features of sterol-transforming mycobacteria. Microbiology, 153, 2007, p. 19821992.

11. Zhang H., Li Z., Uematsu K., Kobayashi Т., Horikoshi K. Antibacterial activity of cyclodextrins against Bacillus strains. Arch Microbiol, 2008, №190, p. 605-609.

12. Sedlaszek L. Biotransformation of steroids. Crit.Rev.Biotechnol., 1988, V.7,№3,p.l 87-236.

13. Кощеенко K.A., Аринбасарова А.Ю., Донова M.B., Андрюшина В.А., Стыценко Т.С., Пашкин И.И., Кирш Ю.Э., Зубов В.П. Способ получения дегидроаналогов стероидов. Патент РФ 2042687. Бюл. Изобр. №24. 1995.

14. Андрюшина В.А., Аринбасарова А.Ю., Войшвилло Н.Е., Савинова Т.С., Сазонова А.С., Стыценко Т.С. Способ получения метандростенолона. Патент РФ 2236464. Бюл. Изобр. № 2, 2004.

15. Банникова Т.Е., Волкова Д.А., Лопатин С.А., Габинская К.Н., Андрюшина В.А., Ильин М.М., Варламов В.П. Материалы пятой конф. «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». Москва-Щелково, 25-27 мая. М., Изд-во ВНИРО, 1999, С. 12-15.

16. Андрюшина В.А., Войшвилло Н.Е., Скрябин К.Г., Стыценко Т.С., Савинова Т.С., Сазонова А.С. Штамм Pimelobacter simplex, проявляющий стероид-1,2-дегидрогеназную активность. Патент РФ № 2215038. Бюл. изобрет. №30, 2003.

17. Ахрем А.А., Титов Ю.А. Стероиды и микроорганизмы. М., Наука, 1970, с. 525.

18. Войшвилло Н.Е., Андрюшина В.А., Савинова Т.С. и др. Идентификация нового штамма трансформирующих стероидымикобактерий как Mycobacterium neoaurum. Прикладная биохимия и микробиология, т. 39, №2, 2003, с. 173-179.

19. Войшвилло Н.Е., Ахрем А.А., Титов Ю.А. Стерины водорослей. Биологические Науки, № 1, 1972, С. 92-101.

20. Porter R., Gallimore W., Reese P. Steroid transformation with Exophiala jeanselmei var. lecaniicorni and Ceratocystis 'paradoxa, Steroids., 1999, Vol. 64, p. 770-790.

21. Mahato S., and Garai S. Advances in microbial steroid biotransformation, Steroids, V. 64, №4, 1997, p. 332-345.

22. Schomer U., Martin C., Microbial transformation of sterols. Biotechnol. Bioeng., 1980, Vol. 22, №11, p. 11-24.

23. Charney W., Herzog H. Microbial transformation of steroids. Academic Press, Inc., New York. P., 1967, p. 728.

24. Машковский M. Д. Лекарственные средства. M.: Новая волна, 2002. Т. 2, с. 58.

25. Arinbasarova A., Karpov A., Fokina V., Medentsev A., Koshcheyenko К. Kinetic characteristics of 1-en-dehydrogenation of methyHydrocortisone by cells of Arthrobacter globiformis 193. Enzyme and Microbial technology, 1996, №19, p. 501-506.

26. Potin-Gotier H., Casiot C., Abstr.Sot.Trace Elem. Res. Hum. (ISTERH) 5th Int. Conf., Lyon, Sept., 26-30, 1998, P. 351.

27. Fernandes P. et al. Microbial conversion of steroid compounds: recent developments. Enzyme and Microbial Technology, 2003, V.32, p. 688-705.

28. Yusuf J. Abul-Hajj, Stereochemistry of C-1,2 Dehydrogenation of 5(3-Pregnane-3,11,20-trione by Septomyxa affinis. The Journal of Biological Chemistry, V. 247, №3, 1972, p. 686-691.

29. Perez C., Falero A., Llanes N., Hung B.R., Herver M.E., Palmero A., Marti E. Resistance to androstanes as an approach for androstandienedione yield enhancement in industrial mycobacteria. J Ind Microbiol Biotechnol, 2003, V.30, №10, p. 623-626.

30. Donova M.V. Transformation of steroids by actinobacteria: A Review. Applied Biochemistry and Microbiology, 2007, Vol. 43, №1, p. 1-14.

31. Войшвилло H.E., Турута A.M., Камерницкий A.B., Микроорганизмы как реагенты для трансформации 5а-стероидов. Известия РАН, серия химическая, 1994, №4, с. 567-588.

32. Choi K.P., Molnar L., Murooka Y. Secretory overproduction of 3-ketosteroid-1,2-dehydrogenase. Appl. Microbiol. Biotechnol. 1995, V.43, №6, p. 1044-1049.

33. Ахрем A.A., Войшвилло H.E. Трансформация метиландростендиола в дианабол культурой Mycobacterium sp. . Прикл. биохим. микробиол., 1970, Т. 6, №6, с. 654-659.

34. Ахрем A.A., Войшвилло Н.Е. Действие 17а-метиландростендиола и продуктов его микробиологического превращения на Mycobacterium sp. 77. Известия АН, Серия биологическая, 1971, № 2. с. 302-304.

35. Donova M.V., Egorova O.V., Nikolaeva V.M. Steroid 17-reduction by microorganisms. Process Biochem., 2004, № 5, p. 1-10.

36. Boynton J, Hanson JR, Hunter AC. The hydroxylation of some 13-methylsteroids by Cephalosporium aphidicola. Phytochemistry, 1997, V. 45, p. 951-956.

37. Holland H.L. Recent advances in applied and mechanistic aspects of the enzymatic hydroxylation of steroids by whole-cell biocatalysts. Steroids, 1999, V. 64, p. 178-186.

38. Wang P.F., Baez J.A., Liu C. et al. 1 lalpha-hydroxy-steroid-4,6-diene-3-one compounds and a process of their preparation. European Patent № 1167380, C07J21/00, 2002.

39. Dray F. J., Cotillon A. C. 7a-Hydroxylation of dehydroepiandrosterone and pregnenolone by bioconversion using Fusarium moniliforme. Fr Patent 2771105, 1999.

40. Cotillon A. C., Morfin R. Fusarium moniliforme 7a-hydroxylase: a new tool for the production of immunostimulating steroids. Biotrans 97, La grande motte, France: Abstract book, 1997, p. 126.

41. Cotillon A. C. and Morfin R. Transformation of 3-hydroxysteroids by Fusarium moniliforme 7a-hydroxylase. J. Steroid Biochem. Mol. Biol., 1999, V. 68, p. 229-237.

42. Lathe R., Rose K.A., Seckl J. R., Best R., Yau J. L., Leckie C.M. Use of 7a-hydroxy or 7-oxo substituted steroids. World Patent WO 9737664,1997.

43. Morfin R. and Courchay G. Pregnenolone and dehidroepiandrosterone as precursors of activ 7-hydroxylated metabolites which increase the immune response in mice. J. Steroid Biochem. Mol. Biol., 1994, V. 50, p. 91-100.

44. Loria R.M. Immune up-regulation and tumor apoptosis by androstene steroids. Steroids, 2002, V. 67, p. 953-966.

45. Hampl R., Lapcic O., Hill M., Klak J., Kasal A., Novacek A., Sterzl I., Starka L. 7-Hydroxiepiandrosterone a natural antiglucocorticoid and a candidate for steroid replacement therapy? Physiol. Res., 2000, V. 49, (Suppl.l) p.107-112.

46. Kolek T., Biotransformation XLVII: transformations of 5-ene steroids in Fusarium culmorum culture. Journal of Steroid Biochemistry & Molecular Biology, 1999, № 71, p. 83-90.

47. Wilson M.R., Gallimore W.A., Reese P.B. Steroid transformations with . Fusarium oxysporum var. cubense and. Colletotrichum musae. Steroids,1999, V. 64, № 12, p.834-843.

48. Choudhary M.I., Ali Shah S.A., Musharrah S.G., Shaheen F., Ur-Rahman A. Microbial transformation of dehydroepiandrosterone. Nat. Prod. Res., 2003, V. 17, № 3, p. 215-220.

49. Bensasson C.M., Hanson J.R., Hunter A.C. The hydroxylation of delta 5-androstenes by Cephalosporium aphidicola. Phytochemistry, 1998, V. 49, № 8, p. 2355-2358.

50. Namboori K., Pereira L., Merchant J.R. Fungal transformation • of pregnenolone & progesterone with the marine fungus Cladosporium herbarum. Indian J. Biochem. Biophys., 1980, V.17, № 2, p. 149-152.

51. Romano A., Romano D., Ragg E., Costantino F., Lenna R., Gandolfi R., Molinary F. Steroid hydroxylations with Botryodiplodia malorum and Colletotrichum lini. Steroids, 2006, V. 71, № 6, p. 429-434.

52. Madyastha K.M., Joseph T. Transformation of dehydroepiandrosterone and pregnenolone by Mucor piriformis. Appl. Microbiol. Biotechnol., 1995, V. 44, № 3-4, p. 339- 343.

53. Lamm A.S., Chen A.R.M., Reynolds W.F., Reese P.B. Steroid hydroxylation by Whetzelinia sclerotiorum, Phanerochaete chrysosporium and Mucorplumbeus. Steroids, 2007, V. 72, № 9-10, p.713-722.

54. Войшвилло H.E., Истомина З.И., Камерницкий A.B. Введение 9a-гидроксигруппы в Д5-3 3-гидроксистероиды с помощью плесневых грибов Circinella sp. Известия АН, Сер. Хим., 1994, №4, с. 737-742.

55. Murray Н.С., Peterson D.H. Oxygenation of steroids by Mucorales fungi. U.S. Patent 2602769, 1952.

56. Samantha T.B., Ghosh D.K. Characterisation of progesterone 11a-hydroxylase of Aspergillus achraceus TS: a cytochrome linked monoxygenase. J Steroid Biochem, 1987, V. 28, p.327-32.

57. Smith K.E., Ahmed F., Williams R.A.D., Kelley S. Microbial transformations of steroids—VIII. Transformation of progesterone by whole cells and microsomes of Aspergillus fumigatus. J Steroid Biochem Mol Biol, 1994, V. 49, p. 93-100.

58. Reskvar К., Cresnar В., Hadnik-Plevnik T. Resolution and reconstitution of cytochrome P-450 containing steroid hydroxylating system of Rhizopus nigricans. J Steroid Biochem, 1987, V. 14, p. 395-399.

59. Yoshihama M. Microbial hydroxylation of steroid hormones and their pharmaceutical applications. Yukijirushi Nyugyo Kenkyusho Hokoku, 1993, 99, p. 1-70.

60. Dtugonski J, Bartnicku K, Choyeeka V, Sedlaezek L. Stabilization of steroid 11-hydroxylation activity of Cunninghamella elegans protoplasts in organic osmotic stabilizers. World J Microbiol Biotechnol, 1992, V. 9, p. 56-58.

61. Zeng В., Zhang B. The relationship between the growing characterization and steroid 1 la-hydroxylation of Beauveria bassiana AS69 during fermentation. Weishengwuzue, 1992, V. 12, p.43-45.

62. Farooq A.H., James R., Iqbal Z. Hydroxylation of progesterone by Cephalosporium aphidicola. Phytochemistry, 1994, V. 37, p. 723-726.

63. De Jager E. A new progestagen for oral contraception. Contracept Delivery" Syst, 1982, V. 3, p. 11-15.

64. Hu S., Tian X., Sun Y., and Han G. Microbial hydroxylation of 13-ethyl-17|3-hydroxy- 18,19-dinor-17a- pregn- 4- en- 20- yn- 3- one. Steroids, 1996, V. 61, p. 407-410.

65. Баюнова В.И., Габинская K.H., Колыванова T.C., Коробова Ю.Н., Гриненко Г.С. Трансформация андрост-4-не-3,17-диона и андроста-1.4-диен-3,17-диона с помощью Beauveria sp. С. 471-473.

66. Griffiths D.A., Brown D.E., Jezequel S.G. Metabolism of xenobiotics by Beauveria bassiana. Xenobiotica, 1993, V. 23, p. 1993-1085.

67. Hu S., Genain G., and Azerad R. Microbial transformation of steroids: Contribution to 14a-hydroxylations. Steroids, 1995, V. 60, April, p. 337352.

68. Yoshioka H., Asada S. 14a-Hydroxy-4-androstene-3,17-dione manufacture with Myrothecium. Japanese Patent 06. 153. 987 (Nippon Kayaku, KK), 1994.

69. Asada S. Microbial manufacture of 14ct-hydroxy-4-androstene-3,l7-dione. Japanese Patent 06. 225. 791 (Nippon Kayaku,KK), 1994.

70. Madyastha K.M., Joseph T. Studies on the 14a-hydroxylation of progesterone in Mucorpiriformis. J Steroid Biochem Mol Biol, 1993, V. 45, p. 563-569.

71. Holland H.L., Poddar S., Tripet B. Effect of cell immobilization and organic solvents on sulfoxidation and steroid hydroxylation by Mortierella isabellina. J lnd Microbial, 1992, V. 10, p. 195-197.

72. Краснова JI.A., Мессинова O.B., Баюнова В.И. Колыванова Т.С., Гриненко Г.С. Способ получения 14а-оксиандрост-4-ен-3,17-диона. Авторское свидетельство № 801517, 1979.

73. Shuvalova S. D., Gabinskaya K. N., Popova E. V., Savinova T. S., and Andryushina V. A., Hydroxylation of androst-4-ene-3,17-dione with the aid of Curvularia lunata fungus. Pharmaceutical Chemistry Journal, 2001, V. 35, №. 5, p. 279-281.

74. Pinheiro H.M. and Cabral J.M.S. Effects of solvent molecular toxicity and microenvironment composition on the A1 dehydrogenation activity of Arthrobacter simplex cells. Biotech. Bioeng., 1991, V. 37. p. 97-102.

75. Tramper J., Wolters I., Verlaan P., The liquid-impelled-loop reactor: a new type of density-difference-mixed bioreactor in Biocatalysis in organic media. Eds.: Laane C., Tramper J., Lilly M.D., Elsevier, Amsterdam, 1987, p. 311-316.

76. Mahato S., Majumdar I. Current trends in microbial steroid transformation. Phytochemistry, 1995, V. 218, p. 883-898.

77. Goswami P.C., Singh H.D., Bhagat S.D., Baruah J.N. Microbial transformation of steroids. Biotechnol. Bioeng., 1983, V. 35, p.2929-2943.

78. Wodzinski R.S., Larocca D. Microbial transformation of steroids. Appl. Environ. Microbiol., 1977, V. 33, p. 660.

79. Chakravarty M., Singh H.D., Baruah J.N. et al. Microbial transformation of steroids. Biotechnol. Bioeng., 1975, V.17, p.399.

80. Reddy P.G., Singh P.K., Roy P.K., Baruah J.N. Microbial transformation of steroids. Biotechnol. Bioeng., 1982,V.24, p. 1241.

81. Heberland N.E., Reynolds J.A. Biotransformation of steroids. Proc. Natl. Acad. Sci., 1973, V. 70, p. 2313.

82. Thompson E.D., Knights B.A., Parks L.W. Biotransformation of steroids. Biochem. Biophys. Acta, 1973, V. 304, p. 131.

83. Звягинцева И.С., Звягинцев Д.Г. Микробиология. М: Наука, 1969, Т. 38. С. 816- 820;

84. Goetschel R., Bar R. Formation of mixed crystals in microbial conversion of sterols and steroids. Enzyme Microb Technol, 1992, V.14, p. 462-469.

85. Аринбасарова А.Ю., Фокина В.В., Карпов А.В. и др. 1-Ен-дегидрирование ба-метилгидрокортизона клетками Arthrobacter globiformis 193. Биохимия, 1995, Т. 60, Вып. 10, с. 1679-1687.

86. Fernandes P., Cabral J.M., Pinheiro Н.М. Bioconversion of а hydrocortisone derivativein organic aqueous two liquid phase system. Enzyme Microbiol. Biotechnol., 1995, V. 17, №.2, p. 163-167.

87. Angelova В., Schmauder H.-P. Lipophilic compounds in biotechnology— interactions with cells and technological problems. J Biotechnol, 1999, V.67, p. 13-32.

88. Takazawa Y., Sato S. and Takahashi J., Microbial oxidation of tetradecanols and related substances in organic solvents. Agric. BioL Chem., 1984,V. 48, №10, p.2489-2495.

89. Phase N., Patil S. Natural oils are better than organic solvents for the conversion of soybean sterols to 17-ketosteroids by Mycobacterium fortuitum. World J Microbiol Biotechnol, 1994, V. 10, p. 228-229.

90. Oda S., Ohta H. Microbial transformation on interface between lyophilic carriers and hydrophobic organic solvents. Biosci Biotechnol Biochem, 1992, V. 56, p. 2041-2045.

91. Strickley R. G., Solubilizing Excipients in oral and injectable formulations. Pharmaceutical Research, 2004, V. 21, №2, p. 201-230.

92. Chen Ching-Lin, Chang Shwu-Fen, Lee Daniel, Yang Lang-Yo, Lee Yi-Hsuan, Hsu Chung Y., Lin Shwu-Jiuan, and Liaw Jiahorng. Bioavailability effect of methylprednisolone by polymeric micelles. Pharmaceutical Research, 2008, V. 25, № 1, p. 39-47.

93. Park T. G. and Hoffman A. S . Immobilization of Arthrobacter simplex cells in thermally reversible hydrogels: comparative effects of organicsolvent and polymeric surfactant on steroid conversion. Biotechnology Letters, 1989, V.l, № 1, p. 17-22.

94. Veronese F.M. and Pasut G. PEGylation, successful approach to drug delivery. Drug Discov Today, 2005, V. 10, p. 1451-1458.

95. Buhler V. Polyvinylpyrrolidone excipients for pharmaceuticals. Springer Berlin Heidelberg, 2005, p. 5-125.

96. Plaizer-Vercammen J. A., Interaction of povidone with aromatic compounds IV: effects of macromolecule molecular weight, solvent dielectric constant, and ligand solubility on complex formation. J. Pharm. Sci., 1983, №9, p. 1042-1044.

97. Sekikawa H. et al. Dissolution behaviors and gastrointestinal absorption of sulflsoxazole in sulfisoxazole-polyvinylpyrrolidone coprecipitate. Yalcugaku Zasshi, 1978, V. 98, №1, p. 62-66.

98. Chien M.M. and Rosazza J. P. Microbial transformations of natural antitumor agents: use of solubilizing agents to improve yields of hydroxylated ellipticines. Applied and environmental microbiology, Oct. 1980, Vol. 40, №.4, p. 741-745.

99. Lugao A.B., Rogero S.O., Malmonge S.M. Rheological behaviour of irradiated wound dressing poly(vinyl pyrrolidone) hydrogels. Radiation Physics and Chemistry, 2002, V. 63, №3-6, p. 543-546.

100. Abeer Abd El-Hady and Hassan A. Abd El-Rehim. Production of prednisolone by Pseudomonas oleovorans cells incorporated into PVP/PEO radiation crosslinked hydrogels. Journal of Biomedicine and Biotechnology, 2004, V. 4, p. 219-226.

101. Kirsh, Y.E. Water Soluble Poly-N-Vinylamides. John Wiley & Sons, Chichester, Great Britain, 1998.

102. Фокина B.B., Аринбасарова А.Ю., Зубов A. Jl. и др. Дегидрирование стероидных субстратов бактериальными клетками, включенными в криогель поливинилового спирта. Прикл. биохим. микробиол., 1995, Т. 31, с. 213-219.

103. Dass C.R., Jessup W. Apolipoprotiens A-I, Cyclodextrins and liposomes as potential drugs for the reversal of atherosclerosis. J Pharm Pharmacol, 2000, V. 52, p.731-61.

104. Szejtli J., Past, present, and future of cyclodextrin research. Pure Appl. Chem., 2004, V. 76, №. 10, p. 1825-1845.

105. Szejtli J. Introduction and general overview of cyclodextrin chemistry. Chem.Rev., 1998, V. 98, p. 1743-1753.

106. Szejtli, J. Cyclodextrin Technology. Kluwer academic publishers, Dordrecht, 1988, p. 450.

107. Eastburn S.D., Tao B.Y. Applications of modified cyclodextrins. Biotechnol Adv, 1994, №12, p.325- 339.

108. Moutard S., Perly В., Gode P., Demailly G. and Djedaini-Pilard F. Novel Glycolipids Based on Cyclodextrins. Journal of Inclusion Phenomena and Macrocyclic Chemistry, 2002, V.44, p. 317-322.

109. Loftsson Т., Brewster M.E. Pharmaceutical applications of cyclodextrins: 1. Drug solubilisation and stabilization. J Pharm Sci, 1996 V. 85, p. 1017-1025.

110. Schneiderman E., Stalcup A.M. Cyclodextrins: a versatile tool in separation science. J Chromatogr B, 2000, V.745, p.83-102.

111. Arias-Bianco M.J.A., Moyano J.R., Martinez J.I.P., Gines J.M. Study of inlusion complex of gliclazide in a-cyclodextrin. J Pharm Biomed Anal, 1998, V. 18, p. 275-279.

112. Nagase Y., Hirata M., Wada K., et al. Improvement of some pharmaceutical properties of DY-9760e by sulfobutyl ether beta-cyclodextrin. Int J Pharm, 2001, V. 229, p. 163-172.

113. Schmid G. Cyclodextrin glucanotransferse production: yield enhancement by overexpression of cloned genes. Trends Biotechnol, 1989, V. 7, p. 244-248.

114. Singh M., Sharma R. and Banerjee V.C. Biotechnological applications of cyclodextrins. Biotechnology Advances, 2002, V. 20, p. 341-359.

115. Fujishima N., Kusaka K., Umino T., Urushinata T., Terumi K. Flour based foods containing highly branched cyclodextrins. Japanese Patent JP 136,898,2001.

116. Bhardwaj R., Dorr R.T., Blanchard J. Approaches to reducing toxicity of parenteral anticancer drug formulations using cyclodextrins. J Pharm Sci Technol, 2000, V.54, p.233-239.

117. Lezcano M., Ai-Soufi W., Novo M., Rodriguez-Nunez E., Tato J.V. Complexation of several benzimidazole-type fungicides with alpha and beta-cyclodextrins. J Agric Food Chem, 2002, V.50, p. 108- 112.

118. Dufosse L., Souchon I., Feron G., Latrasse A., Spinnler H.E. In situ detoxification of the fermentation medium during gammadecalactone production with the yeast Sporidiobolus salmonicolor. Biotechnol Prog 1999, V. 15, p. 135-139.

119. Hedges R.A. Industrial applications of cyclodextrins. Chem Rev, 1998, V. 98, p. 2035-2044.

120. Gao S., Wang L. Application of cyclodextrin in environmental science. Huanjing Kexue Jinzhan, 1998, V.6, p. 80- 86.

121. Prasad N., Strauss D., Reichart G. Cyclodextrins inclusion for food, cosmetics and pharmaceuticals. European Patent 1,084,625, 1999.

122. Uekama K., Hirayama F., Irie T. Cyclodextrin drug carrier systems. Chem Rev, 1998, V. 98, p. 2045 -2076.

123. Saenger W. and Steiner T. Cyclodextrin inclusion complexes: host-guest interactions and hydrogen-bonding networks. Acta Cryst, 1998, V. A54, p. 798-805.

124. Bar R. Cyclodextrin aided bioconversions and fermentations. Trends Biotechnol, 1989, V. 7, p. 2- 4.

125. Szejtli J. Utilization of cyclodextrins in industrial products and processes. J. Mater. Chem., 1997, V. 7, № 4, p. 575-587.

126. Li X.-x., Wew Z., Kiao Kesheng, Wang M. Effect of p-cyclodextrin on growing characteristic of steroid biotransformation microorganisms. Tianjin Keji Daxhle Xuebao, 2006, V.21, №3, p. 1-4.

127. Schlosser D., Irrgang S., Shmauder H.P. Steroid hydroxylation with free and immobilized cells of Penicillium raistrickii in the presence of beta-cyclodextrin, Appl Microbiol Biotechnol., 1993, V. 39, №1, p. 16-20.

128. Jadoun J., Bar R. Microbial transformation in a cyclodextrin medium. Part 4. Enzyme in a microbial oxidation of cholesterol. Appl Microbiol Biotechnol, 1993, V. 40, p. 477-482.

129. Greenberg-Ofrath N., Terespolosky Y., Kahane I., Bar R. Cyclodextrins as carries of cholesterol and fatty acids in cultivation of Mycoplasmas. Appl Environ Microbiol, 1993, V. 59, 547-551.

130. Алехина T.M., Рыжкова B.M., Куракова B.B. и др. Микробиологическая трансформация соединений включения стероидов с p-циклодекстрином. Химико-фармацевтический журн., 1993, Вып. 4, с. 59-62.

131. Kumar R, Dahiya J. S., Singh D. and Nigam P. Biotransformation of cholesterol using Lactobacillus bulgaricus in a glucose-controlled bioreactor. Bioresour Technol, 2001, V. 78, №2, p. 209-211.

132. Alexander D.L., Fisher J.E., A convenient synthesis of 7 alpha-hydroxycholest-4-en-3-one by the hydroxypropyl-beta-cyclodextrin-facilitated cholesterol oxidase oxidation of 3beta, 7alpha-cholest-5-ene-3,7-diol. Steroids, 1995,V.60, №3, p. 290-294.

133. Чинчокар С.Б., Суходольская Г.В., Баклашова Т.Г., Кощеенко К. А. Особенности процесса 11 (3-гидроксилирования стероидных соединений мицелием Curvularia lunata ВКМ F-644 в присутствии циклодекстрина. Прикл. Биохим. Микробиол, 1992, т. 28, с. 685-693.

134. Van der Geize R., Hessels G., Dijkhizen L. Molecular and functional characterization of the kstD2 gene of Rhodococcus erythropolis SQ1 encoding a second 3-ketosteroiddehydrogenase isoensime. Microbiology, 2002, V. 148, № 10, p. 3285-3292.

135. Itagaki E., Hatta Т., Wakabayashi Т., Suzuki K. Spectral properties of 3-ketosteroid-delta 1-dehydrogenase from Nocardia corallina. Biochim. Biophys. Acta, 1990, V. 1040, №2, p. 281-286.

136. Ringold H.J., Hayano M., Stefanovic V. Concerning the stereochemistry and mechanism of the bacterial C-1,2 dehydrogenation of steroids. The Journal of biological chemistry, 1963, V. 238, p. 1960-1965.

137. Plesiat P., Grandguillot M., Harayama S., Vragar S., Michel-Briand Y. Cloning, sequencing and expression of the Pseudomonas testosteroni gene encoding 3-oxosteroid delta 1-dehydrogenase. Journal of bacteriology, 1991, V. 173, №22, p. 7219-7227.

138. Nikaido H., Jarlier V., Permeability of mycobacterial cell wall. Res. Microbial., 1991,V. 142, p. 437-441.

139. Szejtli J. Cyclodextrins and their inclusion complexes. Budapest, Hungary, 1982.

140. Miro A., Quaglia F., Giannini L., Cappello В., Immacolata La Rotonda M. Drug/Cyclodextrin Solid Systems in the Design of Hydrophilic Matrices: A Strategy to Modulate Drug Delivery Rate. Current Drug Delivery, 2006, V.3, Issue 4, p.373-378.

141. Huszcza E., Dmochowska-Gladisz J., Transformations of testosterone and related steroids in Absidia glauka culture. J. Basic Microbiol., 2003, V. 43, №2, p. 113-120.

142. Сайтон Д., Фотергилл А., Риналди M. Определитель патогенных и условно патогенных грибов. «Мир» 2001, С. 468.

143. Al-Aboudi A., Mohammad М., Musharraf S.G., Choudhary М. I., Atta-ur-Rahman. Microbial transformation of testosterone by Rhizopus stolonifer and Fusarium lini. Natural Product Research, November 2008, V. 22, Is. 17, p. 1498- 1509.

144. Capek A., Hanc O., Tadra M. Microbial transformations of steroids. Publishing House of the Czechoslovak Academy of Sciences, Prague, 1966.

145. УТВЕРЖДАЮ Директор Центра «Биоинженерия» РАН Академи26 февраля 2010 года1. АКТ

146. О наработке анаболического препарата метандростенолона дляветеринарии.