Композитные иммобилизованные биокатализаторы с частицами ферментных препаратов, включенных в матрицу криогеля поливинилового спирта тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат химических наук Шаскольский, Борис Леонидович

• Шаскольский, Борис Леонидович
• кандидат химических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат химических наук Шаскольский, Борис Леонидович

Список принятых сокращений и обозначений.4

ВВЕДЕНИЕ.6

ГЛАВА 1. ИММОБИЛИЗАЦИЯ БИОКАТАЛИТИЧЕСКИ АКТИВНОГО

НАЧАЛА ВКЛЮЧЕНИЕМ В ГЕЛЬ (литературный обзор).10

Введение.'.10

1.1. Ковалентные гели с включённым биокаталитически активным началом.12

1.1.1. Иммобилизованные биокатализаторы с матрицами из ковалентных гелей, полученных полимеризацией мономеров в присутствии действующего начала.12

1.1.2. Иммобилизованные биокатализаторы с матрицами из ковалентных гелей, полученных сшиванием полимеров.25

1.2. Нековалентные гели с включённым биокаталитически активным началом.30

1.2.1. Включение биокатализаторов в термообратимые гели.30

1.2.2. Включение биокаталитически активного начала в криогели.36

1.2.3. Включение биокатализаторов в ионотропные гели.39

1.3. Наполнители, подходящие для включения в гель в виде дисперсных частиц.44

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.48

2.1. Материалы.48

2.2. Методы.48

2.3. Математическая обработка результатов измерений.59

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.61

3.1. Некоторые физико-химические свойства криогелей поливинилового спирта, используемых в качестве носителей для иммобилизации ферментов.61

3.2. Ферментативно-активные наполнители.69

3.2.1. Сшитые гели трипсина с хитозаном.70

3.2.2. Поперечно-сшитые ферментные агрегаты.74

3.2.2.1. Изменение выхода и ферментативной активности поперечно-сшитых ферментных агрегатов при разных режимах их формирования.75

3.2.2.2. Калориметрические исследования поперечно-сшитых ферментных агрегатов и нативного трипсина.80

3.2.2.3. Поперечно-сшитые ферментные агрегаты трипсина с хитозаном.86

3.2.3. Трипсин, иммобилизованный на сшитом геле ПВС.86

3.3. Композитные биокатализаторы.90

3.3.1. Физикомеханические характеристики композитных систем.95

3.3.2. Ферментативная активность композитных биокатализаторов.97

ВЫВОДЫ.109

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Композитные иммобилизованные биокатализаторы с частицами ферментных препаратов, включенных в матрицу криогеля поливинилового спирта»

В связи с серьёзными экологическими и энергетическими проблемами современности особенно остро стоит вопрос о получении необходимых для экономики продуктов с минимальными отрицательными воздействиями на окружающую среду и относительно небольшими энергетическими и материальными затратами. Одним из решений вышеназванных задач является использование биотехнологических подходов. Они применяются в различных областях деятельности: в медицине и фармакологии (при производстве вакцин, антибиотиков, витаминов, инсулина, пептидных, стероидных и других гормонов); в пищевой промышленности (при получении пищевого белка, уксуса, лимонной кислоты, пищевых красителей, пищевых консервантов); сельском хозяйстве (получение ростовых гормонов, кормовых аминокислот, феромонов, антибиотиков для растений); в экологической биотехнологии для биологической очистки стоков, биокомпостирования твёрдых отходов; в энергетике для получения биогаза из органических отходов и получения моторного топлива, и др.

Важной областью биотехнологии является применение ферментов, например, использование гликозидаз при гидролизе крахмала, энзиматическом осветлении сока и вин, обработке текстильных изделий и гидролизе лактозы в молочных продуктах; применение протеаз при выделке кож и в процессах, осуществляемых при получении сыра; использование изомераз при получении глюкозо-фруктозных сиропов и т.д. Успешно применяются ферменты для модификации р-лактамных антибиотиков (задачи, трудно выполнимой для крупномасштабного химического синтеза).

Особое место в ряду методов, использующих ферменты, принадлежит процессам, происходящим при участии иммобилизованных ферментов. Биокатализаторы данного типа применяют в том случае, если субстрат растворим. Препараты, получаемые в результате иммобилизации, имеют ряд преимуществ по сравнению с растворимыми ферментами. Во-первых, гетерогенный катализатор легко отделить от реакционной смеси, что позволяет многократно использовать катализатор, и получать продукт, незагрязнённый ферментами. Кроме того, использование гетерогенных биокатализаторов позволяет осуществлять ферментативный процесс непрерывно в проточных реакторах. Поскольку при иммобилизации довольно часто наблюдается повышение стабильности иммобилизованного белка, то открывается возможность для проведения реакций в неводных средах и благодаря этому сдвигать химическое равновесие в сторону процесса, обратного тому, который происходит в клетке с участием такого фермента.

В качестве носителей для иммобилизации ферментов широко применяют как органические (природные и синтетические), так и неорганические материалы. К носителям предъявляются определённые требования: они должны быть нерастворимы в реакционной среде, иметь химическую и биологическую стойкость, механическую прочность, обладать низкой неспецифической сорбцией и не вызывать сильных конформационных изменений молекулы белка, легко гранулироваться, и в случае необходимости, активироваться.

Перспективными носителями для иммобилизованных ферментов являются криогели поливинилового спирта (ЛВС) - макропористые упруговязкие полимерные гелевые материалы, получаемые в результате криогенной обработки, то есть замораживания - выдерживания в замороженном состоянии — оттаивания водных растворов данного полимера.

Полимерными криогелями называются гелевые материалы, сформированные в неглубоко замороженных реакционных растворах полимерных или мономерных предшественников. Неглубоко (умеренно) замороженными считаются системы при температурах не ниже, чем несколько десятков градусов от точки замерзания чистого растворителя. Подобные системы, как правило, являются двухфазными, они содержат поликристаллы твердой фазы, которые выполняют роль порогенов, и небольшой объем остающегося еще жидким раствора - так называемую незамерзшую жидкую микрофазу, где концентрируются растворенные вещества и происходит формирование криогелевой матрицы. Образующиеся криогели обычно имеют макропористую (от ОД до 10 мкм) или сверхмакропористую структуры (от 10 до 1000 мкм) с взаимосвязанными порами, что придает таким материалам уникальный набор физико-химических свойств, а также позволяет использовать их для решения ряда биомедицинских и биотехнологических задач.

Наиболее изученным представителем криогелей с макропористой структурой является криогель поливинилового спирта (КГПВС). Поливиниловый спирт доступен, является продуктом крупнотоннажного синтеза (мировое производство несколько сотен тысяч тонн в год), каждая его марка стандартизована. Благодаря высокой прочности, хорошей пористости, биосовместимости и стабильности в биологических средах КГПВС нашли широкое применение в различных областях биотехнологии. В частности, криогели ПВС были использованы в качестве носителей для ковалентного присоединения белков и ферментов при получении макропористых иммуносорбентов и ряда иммобилизованных биокатализаторов, предназначенных для ферментолиза очень высокомолекулярных субстратов или для работы в маловодных средах. В этом случае емкость криогеля ПВС как носителя, то есть содержание фермента в расчете на единицу массы или объема, составляет порядка 1-10 мг/г(мл), что характерно для крупнопористых матриц, существенная часть объёма которых приходится на поры, а количество реакционноспособных группировок полимера, расположенных в стенках этих макропор, относительно невелико. В этой связи представляют интерес иммобилизованные системы, в которых биокаталитическое действующее начало (в рассматриваемом нами случае — препарат фермента) включено в матрицу макропористого криогеля ПВС в виде частиц дисперсного наполнителя, распределенного по всему объёму носителя, что, вероятно, позволило бы значительно повысить содержание фермента в соответствующем иммобилизованном биокатализаторе. При этом важным условием является сохранение хороших физико-механических свойств композитного геля, несмотря на включение в него механически непрочного ферментного наполнителя и отсутствие препятствий в технически несложной методике получения гранулированных гелевых препаратов на основе водных растворов ПВС.

В этой связи представляется весьма актуальным изучение возможности получения композитных биокатализаторов с матрицей из криогеля поливинилового спирта и включённым в неё биокатализатором в виде частиц дисперсного наполнителя. Исходя из указанной цели, в данной диссертационной работе решались следующие задачи:

1. Исследование физико-химических свойств криогеля поливинилового спирта (морфологических, теплофизических и физико-механических) при разных условиях получения.

2. Изучение разных вариантов формирования дисперсных ферменто-содержащих наполнителей, подходящих для включения в матрицу криогеля ПВС. Оценка каталитических свойств наполнителей.

3. Изучение физико-механических свойств и ферментативной активности композитных биокатализаторов.

Данная диссертационная работа выполнялась в лаборатории криохимии биополимеров ИНЭОС РАН и явилась продолжением исследований, направленных на создание эффективных носителей биотехнологического назначения в рамках проектов по грантам РФФИ 05-04-08018офиа, РФФИ 07-04-12132офиа и РФФИ 07-03-96682-РАа.

Работа состоит из введения, 3-х глав, выводов, и списка цитируемой литературы. В главе 1 рассмотрены литературные данные, касающиеся иммобилизация биокаталитически активного начала включением в гель; глава 2 содержит описание эксперимента, глава 3 посвящена описанию и обсуждению полученных в работе результатов экспериментальных исследований.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Шаскольский, Борис Леонидович

Выводы

1. Исследовано влияние концентрации поливинилового спирта на физико-механические и теплофизические свойства, а также структуру гелей (криогелей), получаемых при криогенной обработке водных растворов данного полимера. Показано, что повышение концентрации полимера в растворе, подвергаемом замораживанию — выдерживанию в замороженном состоянии — оттаиванию, приводит к возрастанию жёсткости сформированных образцов, повышению температуры их плавления, к утолщению элементов гелевой фазы и к более упорядоченной макропористой морфологии образующихся криогелей.

2. Проведено изучение процессов формирования сшитых гелей трипсина с хитозаном, поперечно-сшитых ферментных агрегатов трипсина, по-пречно-сшитых ферментных агрегатов трипсина с хитозаном и препаратов трипсина, иммобилизованного на сшитых гелях поливинилового спирта. Найдено, что выход поперечно-сшитых ферментных агрегатов значительно уменьшается при низких скоростях разбавления раствора фермента раствором осадителя-сшивателя или при больших временных интервалах между прибавлением к системе сшивателя и осаждением белка; такой результат объясняется довольно быстрой модификацией аминогрупп белка, способных участвовать в реакциях межмолекулярной сшивки. Отмечено значительное стабилизирующее влияние хитозана на сохранение активности трипсина при его иммобилизации с помощью глутарового альдегида как в составе комплексных поперечно-сшитых ферментных агрегатов, так и в составе триспин-хитозановых гелей.

3. Продемонстрирована возможность получения композитных биокатализаторов на основе дисперсных ферментосодержащих препаратов, включённых в матрицу криогеля поливинилового спирта. Показано, что матрица композитного биокатализатора не создаёт серьёзных препятствий для протекания катализируемых ферментом реакций.

4. При изучении влияния ферментных наполнителей на физико-механические свойства композитных биокатализаторов найдено, что включение в матрицу криогеля поливинилового спирта дисперсных частиц ферментосодержащих наполнителей приводит к заметному повышению жёсткости сформированных композитных криогелей.

5. Показано, что композитные иммобилизованные биокатализаторы обладают повышенной температурной и рН стабильностью, а также сохраняют свою активность при длительном хранении.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Шаскольский, Борис Леонидович, 2009 год

1. Cao L. Carrier-Bound 1.mobilized Enzymes Principles, Applications and Design. - Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KgaA, 2005 - P. 563.

2. Berger J.L. Immobilization of p-galactosidases from Thermus aquaticus YT-1 for oligosaccharides synthesis / J.L. Berger, B.H. Lee, C. Lacroix // Biotechnology Techniques. (1995) - Vol. 9. - № 8. - P. 601-606.

3. Ray R.R. Immobilization of P-amylase from Bacillus megaterium B6, into gelatin film by cross-linking / R.R. Ray, S.C. Jana, G. Nanda // Journal of Applied Bacteriology. (1995) - Vol. 79. - № 2. - P. 157-162.

4. Синицын А.П., Райнина Е.И., Лозинский В. И., Спасов С. Д. Иммобилизованные клетки микроорганизмов. Москва: Издательство Московского Университета. Университетское издательство им. Св. Климента Орхидско-го.-1994-288 с.

5. Lozinsky V. I. Poly(vinyl alcohol) cryogels employed as matrices for cell immobilization. 3. Overview of recent research and developments / V. I. Lozinsky, F. M. Plieva // Enzyme and Microbial Technology. (1998) - Vol. 23. - № 3-4. -P. 227-242.

6. Chang Ch. Ch. Immobilization of Alcaligenes eutrophus using PVA crosslinked with sodium nitrate / Ch. Ch. Chang, S. K. Tseng // Biotechnology Techniques. -(1998) Vol. 12. - № 12. - P. 865-868.

7. Li-sheng Z. Immobilization of activated sludge using improved polyvinyl alcohol (PVA) gel / Z. Li-sheng, W. Wei-zhong, W. Jian-long // Journal of Envi-romental Sciences. (2007) - Vol. 19.-№ 11.-P. 1293-1297.

8. Fraser J.E. Entrapment in calcium alginate / J.E. Fraser, G.F. Bickerstaff // Methods in Biotechnology. 1997 — Vol. 1 — Immobilization of Enzymes and Cells. Edited by G. F. Bickerstaff. Humana Press Inc. - Totowa, NJ P. 61-66.

9. Smidsnad O. Alginate as immobilization matrix for cells / O. Smidsmd, G. S. Skjak-Braek // Trends in Biotechnology. (1990) - Vol. 8. - № 1. - P. 71-78.

10. Thu B. Alginate gels some structure-function correlations relevant to their use as immobilization matrix for cells / B. Thu, O. Smidsrad, G. Skjak-Braek //Immobilized Cells: Basics and Applications. Progress in Biotechnology. -(1996)-Vol. 11.-P. 19-30.

11. Kraewska B. Application of chitin- and chitosan-based materials for enzyme immobilizations: a review / B. Kraewska // Enzyme and Microbial Technology. (2004) - Vol. 35. - № 2-3. - P. 126-139.

12. Cabarcos E.L. Immobilization of glucose oxidase in cross-linked poly(aciylamide/acrylic acid) microgels / E.L. Cabarcos, J. R. Retama, B. Lopez-Ruiz // Progress in Colloid and Polymer Siense. (2004) - Vol. 126. - P. 194—196.

13. Basari M. Immobilization of lipase on poly(N-vinyl-2-pyrrolidone-co-styrene) hydrogel / M. Basari, A. Harun, M. B. Ahmad, C.N.A. Razak, A.B. Salleh // Journal of Applied Polymer Science. (2001) - Vol. 82. - № 6. - P.l 404-1409.

14. Baran T. Comparison of (3-galctosidase immobilization by entrapment in and adsorption on poly(2-hydroxyethylmathacrylate) membranes / T. Baran, M. Y. Arica, A. Denizli, V. Hasirci // Polymer International. (1997) - Vol. 44. - №. 4.-P. 530-536.

15. Endo H. Enzyme sensor system for determination of total cholesterol in fish plasma / H. Endo, M. Maita, M. Takikawa, H. Ren, T. Hayashi, N.Urano, K. Mitsubayashi // Fisheries Science. (2003) - Vol. 69. - № 6. - P. 1194-1199.

16. Ichimura K. A convenient photochemical method to immobilize enzymes / K. Ichimura // Journal of Polymer Science; Polymer Chemistry Edition. (1984) -Vol. 22-№ 11.-P. 2817-2828.

17. Tanaka A. Entrapment of biocatalysts by prepolymer methods / A. Tanaka, T. Lida // Methods in Biotehnoogy. 2001 Vol. 15. Enzymes in Nonaqueous Solvents: Methods and Protocols. P. 19-30.

18. Miura Y. Epoxidation of alkanes and cycloalkanes by microbial lipases immobilized with photo-crosslinkable resin prepolymer / Y. Miura, T. Yamane // Biotechnology Letters. (1997) - Vol. 19. - № 7. - P. 611-613.

19. Muscat A. Poly(carbomoylsulfonate), a material for immobilization: synthesis, diffusion- and mechanical properties / A. Muscat, J. Beyersdorf, K-D. Vorlop // Biotechnology Techniques. (1993) - Vol. 7. -№ 8. -P.591-596.

20. Fukushima S. Hydrophilic urethane prepolymers: convenient materials for enzyme entrapment / S. Fukushima, T. Nagai, K. Fujita, A. Tanaka, S. Fukui // Biotechnology and Bioengineering. (1978) - Vol. 20. - № 9. - P. 1465-1469.

21. DeGroot A. R. Encapsulation of urease in alginate beads and protection from a-chymotrypsin with chitosan membranes / A. R. DeGroot, R. J. Neufeld // Enzyme and Microbial Technology. (2001) - Vol. 29. - № 6-7. - P.321-327.

22. Soni S. Immobilization of yeast alcohol dehydrogenase by entrapment and co-valent binding to polymeric supports / S. Soni, J.D. Desai, S. Devi // Journal of Applied Polymer Science. (2001) - Vol. 82. - № 5. - P. 1299-1305.

23. Noureddini H. Immobilization of Candida rugosa lipase by sol-gel entrapment and its application in the hydrolysis of soybean oil / H. Noureddini, X. Gao, S. Joshi // Journal of American Oil Chemists Society. (2003) - Vol.80. - № 11. -P.1077-1083.

24. Avnir D. Recent bio-applications of sol-gel materials / D. Avnir, T. Coradin, O. Lev, J. Livage // Journal of Material Chemistry. (2006) - Vol. 16. - № 11 -P. 1013-1030.

25. Chen J-P. Synthesis of geranyl acetate by esterification with lipase entrapped in hybrid sol-gel formed within nonwoven fabric / J-P. Chen, W-S. Lin, M-F. Chang // Journal of American Oil Chemical Society. (2002) - Vol. 79. - № 3. -P. 309-314.

26. Munjal N. Stability and properties of mushroom entrapped in alginate, poly-acrylamide and gelatine gels / N. Munjal, S. K. Sawhney // Enzyme and Microbial Technology. (2002) - Vol. 30 - № 4 - P. 613-619.

27. Industrial Enzymes Structure, Function and Applications. Edited by Julio Po-laina and Andrew P. MacCabe Instituto de Agroquimica у Tecnologia de Ali-mentos, CSIC, Valencia, Spain. Springer. 2007.

28. End N. Immobilized biocatalysts in industrial research and production / N. End, K.-U. Schoning // Topics in Current Chemistiy. (2004) - Vol. 242. - P. 273317.

29. Tanaka A. Application of immobilized growing cells / A. Tanaka, H. Nakajima // Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology. (1990) - Vol. 42. - P. 97-131.

30. Jha S. K. Preparation of polyvinyl alcohol-polyacrylamide composite polymer membrane by y-irradiation for entrapment of urease / S. K. Jha, S. F. D Souza // Journal of Biochemical and Biophysical Methods. (2005) - Vol. 62. - №3.-P. 215-218.

31. Кабанов В.Я. Получение полимерных биоматериалов с использованием радиационно-химических методов / В.Я. Кабанов // Успехи химии. — (1998) -Т. 67.-№9.-С. 861-895.

32. Atia К. Preparation of glucose oxidase immobilized in different carriers using radiation polymerization / K. Atia, A. El-Batal // Journal of Chemical Technology and Biotechnology. (2005) - Vol. 80. - № 7. - P. 805-811.

33. Schulz B. Influence of polymerization parameters and entrapment inpoly (hydroxy ethyl methacrylate) on activity and stability of GOD / B. Schulz, A. Riedel, P.U. Abel // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. (1999) -Vol. 7. -№ 1-4.-P. 85-91.

34. Кирстен M. П. Иммобилизация клеток и ферментов включением их в гель / М. П. Дж. Кирстен, М. П. Кафлэн // Глава из книги «Иммобилизованные клетки и ферменты». Методы. Под редакцией Дж. Вудворда. М.: Мир, 1988-С. 53-64.

35. Novick S.J. Protein-containing hydrophobic coatings and films / S.J. Novick, J.S. Dordick // Biomaterials. (2002) - Vol. 23. - № 2. - P. 441-448.

36. Veronese F. M. Peptide and protein PEGylation: a review of problems and solutions / F. M. Veronese // Biomaterials. (2001) - Vol. 22. - № 5. - P.405-417.

37. Mohapatra S. C. Immobilization of a-chymotrypsin for use in batch and continuous reactions / S. C. Mohapatra, J. T. Hsu // Journal of Chemical Technology and Biotechnology. (2000) - Vol. 75. - № 7. - P. 519-525.

38. Roy I. Smart biocatalysts: design and applications /1. Roy, S. Sharma, M.N. Gupta // Advances in Biochemical Engineering/ Biotechnology. (2003) — Vol. 86.-P. 251-310.

39. Taniguchi M. Properties of a reversible soluble-insoluble cellulase and its application to repeated hydrolysis of crystalline cellulose / M. Taniguchi, M. Ko-bayashi, M. Fujii // Biotechnology and Bioengineering. (1989) - Vol. 34. - № 8.- P.1092-1097.

40. Еремеев H.JI. Взаимосвязь степени гидратации поли-N-изопропилакриламидного геля и активности иммобилизованного в нём а-химотрипсина / H.JL Еремеев, Н.Ф. Казанская // Известия Академии наук. Серия химическая. (2001) - № 10. - С.1806-1810.

41. Гросберг А.Ю. Фазовые переходы в полимерных и биополимерных системах / А.Ю. Гросберг, А.Р. Хохлов // Успехи физических наук. (1986) -Т. 149. - Вып. 4. - С.723—726.

42. Лифшиц И.М. Объёмные взаимодействия в статистической физике полимерной макромолекулы / И.М. Лифшиц, А.Ю. Гросберг, А.Р. Хохлов // Успехи физических наук. (1979) - Т. 127. - Вып. 3. - С. 353 - 389.

43. Chen J-P. Immobilization of a-chymotiypsin to a temperature-responsive re-versibly soluble insoluble oligomer based on N-isopropylacrylamide / J-P. Chen // Journal of Chemical Technology and Biotechnology. - (1998) — Vol. 73. - № 2. - P.137-143.

44. Валуев Л.И. Структура и функциональные свойства термочувствительных производных иммобилизованных белков / Л.И. Валуев, И.Л. Валуев, И.М. Шаназарова // Прикладная биохимия и микробиология. — (2006) Т. 42. — № 1. - с. 33-36.

45. Schmaljohann D. Thermo- and pH-responsive polymers in drug delivery / D. Schmaljohann// Advanced Drug Delivery. (2006) - Vol.58. - № 15. -РД655-1670.

46. Park T.G. Immobilization and characterization of p-galactosidase in thermally reversible hydrogel beads / T.G. Park, A.S. Hoffman // Journal of Biomedical Materials Research. (1990) - Vol. 24. - № 1. - P. 21-38.

47. Dong L. C. Thermally reversible hydrogels: III. Immobilization of enzymes for feedback reaction control / L. C. Dong, A. S. Hoffman // Journal of Controlled Release. (1986) - Vol. 4. - № 3. - P. 223-227.

48. Ding Z. Unusual properties of thermally sensitive oligomer—enzyme conjugates of poly(N-isopropylacrylamide)-trypsin / Z. Ding, G. Chen, A. S. Hoffman // Journal of Biomedical Materials Research. (1998) - Vol. 39. - № 3. - P.498-505.

49. Еремеев Н. Л. Температурное поведение равновесных констант ферментативных реакций при фазовом переходе в термочувствительной матрице / Н. Л. Еремеев, Л. В. Сиголаева, П. А. Симаков, Н. Ф. Казанская // Биохимия. (1995) - Том 60 - Вып. 8 - С. 1307-1317.

50. Jin W. Properties and applications of proteins encapsulated within sol-gel derived materials / W. Jin, J. D. Brennan // Analytica Chimica Acta. — (2002) — Vol. 461.-№1.-P. 1-36.

51. Soares С. M. F. Studies on immobilizd lipase in hydrophobic sol-gel / С. M. F. Soares, O. A. dos Santos, H. F. de Castro, F. F. de Moraes, G. M. Zanin // Applied Biochemistry and Biotechnology. (2004) - Vol. 113. - № 1-3. - P. 307319.

52. Ciriminna R. Recent uses of sol-gel doped catalysts in the fine chemicals and pharmaceutical industry / R. Ciriminna, M. Pagliaro // Organic Process Research & Development. (2006) - Vol. 10. - № 2. - P. 320-326.

53. Pierre A.C. The sol-gel encapsulation of enzymes / A.C. Pierre // Biocatalyst and Biotransformation. (2004) - Vol. 22. - № 3. - P. 145-170.

54. Avnir D. Enzymes and other proteins entrapped in sol-gel materials / D. Avnir, S. Braun, O. Lev, M. Ottolenghi // Chemisrty of Materials. (1994) - Vol. 6. -№ 10.-P. 1605-1614.

55. Gupta R. Entrapment of biomolecules in sol-gel matrix for applications in biosensors: problems and future prospects / R. Gupta, N.K. Chaundhury // Biosensors and Bioelectronics. (2007) - Vol. 22. - № 11. - p. 2387-2399.

56. Branyik T. Encapsulation of microbial cells into silica gel / T. Branyik, G. Kunkova // Journal of Sol-Gel Science and Technology. (1998) - Vol. 13. - № 1-3.-P. 283-287.

57. Fennouh S. Sol-gel entrapment of Escherichia coli. / S. Fennouh, S. Guyon, J. Livage, C. Roux // Journal of Sol-Gel Science and Technology. (2000) - Vol. 19. -№ 1-3.-P. 647-649.

58. Li B. New immobilization method for enzyme stabilization involving a mesoporous material and an organic/inorganic hybrid gel / B. Li, H. Takahashi // Biotechology Letters. (2000) - Vol. 22. - № 24. - P. 1953-1958.

59. Ferrer M. L. Denaturation and leaching study of horseradish peroxidase encapsulated in sol-gel matrices / M. L. Ferrer, F. del Monte, C.R. Mateo, J. Gomez, D. Levy // Journal of Sol-Gel Science and Technology. (2003) - Vol. 26. - № 1-3.-P. 1169-1172.

60. Besanger T.R. Screening of inhibitors using enzymes entrapped in sol—gel-derived materials / T.R. Besanger, Y. Chen, A.K. Deisingh, R. Hodgson, W. Jin, S. Mayer, M. A. Brook, J.D. Brennan // Analytical Chemistry. (2003) - Vol. 75.-№ 10.-P. 2382-2391.

61. Noureddini H. Characterization of sol-gel immobilized lipases / H. Noureddini, X.J. Gao // Journal of Sol-Gel Science and Technology. (2007) - Vol. 41. - № 1. —P. 31—41.

62. Reetz M.T. Efficient immobilization of lipases by entrapment in hydrophobic sol-gel materials / M.T. Reetz, A. Zonta, J. Simpelkamp // Biotechnology and Bioengineering. (1996) - Vol. 49. - № 5. - P. 527-534.

63. Ghanem A. Entrapment of Pseudomonas cepacia lipase with peracetylated p— cyclodextrin in sol-gel: application to the kinetic resolution of secondary alcohols / A. Ghanem, V. Schurig // Tetrahedron Asymmetry. (2003) - Vol. 14. -№ 17.-P. 2547-2555.

64. Tripathi V.S. Preparation of ormosil and its applications in the immobilizing biomolecules /V.S. Tripathi, V.B. Kandinalla, H. Ju // Sensors and Actuators B. -(2006)-Vol. 114.-№2.-P. 1071-1082.

65. Collinson M. M. Analytical applications of organically modified silicates / M. M. Collinson // Microchimica Acta. (1998) - Vol. 129. - № 3-4. - P. 149-165.

66. Jiirgen-Lohmann D.L. Immobilization of bovine catalase in sol-gels / D.L. Jur-gen-Lohmann, R.L. Legge // Enzyme and Microbial Technology. (2006) -Vol. 39. - № 4. - P. 626-633.

67. Yi Y. Optimization of tetramethoxysilane-derived sol gel entrapment protocol stabilizes highly active chlorophyllase / Y. Yi, R. Neufeld, S. Kermasha // Journal of Sol-Gel Science and Technology. (2006) - Vol. 38. - № 3. - P. 251259.

68. Kawakami K. Entrapment of lipase in silica glass by the sol-gel method and its esterification activity in organic media / K. Kawakami, S. Yoshida // Biotechnology Techniques. (1994) - Vol. 8. - № 6. - P. 441-446.

69. Carter C.B., Norton M.G. Ceramic Materials/Science and Engineering. Springer 2007-716 P.

70. Gill I. Bioencapsulation within synthetic polymers (part 1): sol-gel encapsulated biologicals /1. Gill, A. Ballesteros // Trends in Biotechnology. (2000) -Vol. 18. - № 7. - P. 282-296.

71. Siouffi A.M. Silica gel-based monoliths prepared by the sol-gel method: facts and figures / A.M. Siouffi // Journal of Chromatography A. (2003) - Vol. 1000. -№ 1-2. - P. 801-818.

72. Brook M. A. Sugar-modified silanes: precursors for silica monoliths / M. A. Brook, Y. Chen, K. Guo, Z. Zhang, J. Brennan // Journal of Material Chemistry. (2004) - Vol. 14. - № 9. - P. 1469-1479.

73. Wu X. J. An optical glucose biosensor based on entrapped-glucose oxidase in silicate xerogel hybridised with hydroxyethyl carboxymethyl cellulose / X. J. Wu, M. M.F. Choi // Analytica Chimica Acta. (2004) - Vol. 514. - № 2. -P.219-226.

74. Meyer M. Novel ringing silica gels that do not shrink / M. Meyer, A. Fischer, H. Hoffinann // The Journal of Physical Chemistry B. (2002) - Vol. 106. - № 7-P. 1528-1533.

75. Shchipunov Yu. A. Sol-gel-derived biomaterials of silica and carrageenans / Yu. A. Shchipunov // Journal of Colloid and Interface Science. (2003) - Vol. 268.-№ l.-P. 68-76.

76. Chen J-P. Sol-gel powders and supported sol-gel polymers for immobilization of lipase in ester synthesis / J-P. Chen, W-S. Lin // Enzyme and Microbial Technology. (2003) - Vol. 32. - № 7. - P. 801-811.

77. Paljevac M. Hydrolysis of carboxymethyl cellulose catalyzed by cellulase immobilized on silica gels at low and high pressures / M. Paljevac, M. Primozic,

78. M. Habulin, Z. Novak, Z. Knez // The Journal of Supercritical Fluids. (2007) -Vol. 43.-№ 1. - P.74-80.

79. Veum L. The first encapsulation of hydroxynitrile lyase from Hevea brasil-iensis in a sol-gel matrix / L. Veum, U. Hanefeld, A. Pierre // Tetrahedron. -(2004) Vol. 60. - № 46. - P. 10419-10425.

80. Bhatia R.B. Aqueous sol—gel process for protein encapsulation / R.B. Bhatia, C.J. Brinker, A.K. Gupta, A.K. Singh // Chemisrty of Materials. (2000) - Vol. 12.-№8.-P. 2434-2441.

81. Lin Т.—Y. Entrapment of horseradish peroxidase in sugar—modified silica monoliths: toward the development of a biocatalytic sensor / T.-Y. Lin, C.-H. Wu, J.D. Brennan // Biosensors and Bioelectronics. (2007) - Vol. 22. - № 9-10.-P. 1861-1867.

82. Gill I. Encapsulation of biologicals within silicate, siloxane, and hybrid sol-gel polymers: an efficient and generic approach /1. Gill, A. Ballesteros // Journal of American Chemical Society. (1998) -Vol. 120.-№34.-P. 8587-8598.

83. Shchipunov Yu. A. Gelling of otherwise nongelable polysaccharides / Yu. A. Shchipunov, Yu. V. Burtseva, A. V. Krekoten, I. V. Postnova // Journal of Colloid and Interface Science. (2005) - Vol. 287. - № 2. - P. 373-378.

84. Ferrer M. L. A novel and simple alcohol free sol-gel route for encapsulation of labile protein / M. L. Ferrer, F. del Monte, D. Levy // Chemisrty of Materials. - (2002) - Vol. 14. - № 9. - P. 3619-3621.

85. Karout A. Immobilization of a lipoxygenase in silica gels for application in aqueous media / A. Karout, C. Chopard, A. C. Pierre // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. (2007) - Vol. 44. - № 3-4. - P. 117-127.

86. Reetz M. T. Characterization of hydrophobic sol-gel materials containing entrapped lipases / M. T. Reetz, A. Zonta, J. Simelkamp, A. Rufinska, B. Tesche // Journal of Sol-Gel Science and Technology. (1996) - Vol. 7. - №. 1-2. - P. 35-43.

87. Reetz M. T. Second generation sol-gel encapsulated lipases: robust heterogeneous biocatalysts / M. T. Reetz, P. Tielmann, W. Wiesenhofer, W. Konen, A. Zonta // Advanced Synthesis & Catalysis. (2003) - Vol. 345. - P.717-728.

88. Keeling-Tucker T. Fluorescent probes as reporters on the local structure and dynamics in sol—gel-derived nanocomposite materials / T. Keeling-Tucker, J. D. Brennan // Chemistry of Materials. (2001) - Vol. 13. - № 10. - P. 3331-3350.

89. Besanger T. R. Entrapment of membrane proteins in sol-gel derived silica / T. R. Besanger, J. D. Brennan // Journal of Sol-Gel Science and Technology. -(2006) Vol. 40. - № 2-3. - P. 209-225.

90. Ichimura K. Method for enzyme immobilization. // US. Pat. N 4,269,941. 1981.

91. Shido Y. Network formation and swelling behavior of photosensitive poly(vinyl alcohol) gels prepared by photogenerated crosslinking / Y. Shido, N.

92. Katagiri, Т. Ebisuno, M. Hasegawa, M. Mitsuda // Die Angewandte Makro-moleculare Chemie. (1996) - Vol. 240. - № 1. - P. 231-239.

93. Vorlop K-D. Entrapment of microbial cells whitin polyurethane hydrogel beads with the advantage of low toxicity / K-D. Vorlop, A. Muscat, J. Beyers-dorf// Biotechnology Technique. (1992) - Vol. 6. - № 6. - P. 483^188.

94. Dave R. Estirification in organic solvent by lipase immobilized in polymer of PVA-alginate-boric acid / R. Dave, D. Madamwar // Process Biochemistry. -(2006) Vol. 41. - № 4. - P.951-955.

95. Cheng S. Immobilization of permeabilized whole cell penicillin G acylase from Alcaligenes faecalis using pore matrix crosslinked with glutaraldehyde / S. Cheng, D. Wei, Q. Song // Biotechnology Letters. (2006) - Vol. 28. - № 14. -P.l 129-1133.

96. Martinez-Madrid C. Degradation of limonin by entrapped Rhodococcus fas-cians cells / C. Martinez-Madrid, A. Manjon, J.L. Iborra // Biotechnology Letters. (1989) - Vol. 2. - № 9. - P. 653-658.

97. Химическая Энциклопедия в 5-ти томах. М.: «Большая Российская Энциклопедия» 1998.

98. Colby J. Immobilization of Rhodococcus AJ270 and use entrapped biocatalyst for production of acrylic acid / J. Colby, D. Snell, G. W. Black // Chemical Monthly. (2000) - Vol. 131. - № 6. - P. 655-666.

99. Ichiro C., Tetsuya Т., Isao T. Immobilized catalytically active substance and method of preparing the same. // US Patent No. 4138292 -1979.

100. Wijffels // Biotechnology and Bioengineering. (1997) - Vol. 56. - № 5. - P. 517-529.

101. Belyaeva E. Immobilization of a-chymotrypsin in к-carrageenan beads prepared with the static mixer / E. Belyaeva, D. D. Valle, D. Poncelet // Enzyme and Microbial Technology. (2004) - Vol. 34. - № 2. - P. 108-113.

102. Prud-Homme R. K. Enzyme immobilization by imbibing an enzyme solution into dehydrated hydrocolloid gel beads / R. K. Prud-Homme, C. Cukras, H. Pfeffer // US patent No. 6268191 2001.

103. Hossain K. S. Sol-gel transition behavior of pure i-carrageenan in both salt-free and added salt states / K. S. Hossain, K. Miyanaga, H. Maeda, N. Nemoto // Biomacromolecules. (2001) - Vol. 2. - № 2. - P. 442-449.

104. Mammarella E. J. Study of the deactivation of (3-galactosidase entrapped in alginate-carrageenan gels / E. J. Mammarella, A. C. Rubiolo // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. (2005) - Vol. 34. - № 1-6. - P.7-13.

105. Sahin F. A novel matrix for immobilization of acetylcholinesterase / F. Sahin, G. Demirel, H. Tumturk // International Journal of Biological Macromolecules. -(2005) Vol. 37 - № 3 - P. 148-153.

106. Chi M.-C. Characterization of Bacilus kaustophilus leucine aminopeptidase immobilized in Ca-alginate/K-carrageenan beads /M.-C. Chi, R-C. Lyu, L—L.1.n, H.-B. Huang // Biochemical Engineering Journal. (2008) - Vol. 39. - №2.-P. 376-382.

107. Fadnavis N. W. Gelatin blends with alginate: gels for lipase immobilization and purification / N. W. Fadnavis, W. Sheelu, В. M. Kumar, M.U. Bhalero, A. A. Deshpande // Biotechnology Progress. (2003) - Vol. 19. - № 2. - P. 557564.

108. Kara F. Immobilization of urease by using chitosan-alginate and poly(acrylamyde-co-acrylic acid)/K-carrageenan support / F. Kara, G. Demirel, H. Tumtiirk // Bioprocess and Biosystems Engineering. (2006) - Vol. 29. - №3. — P.207—211.

109. Богдановская B.A. Влияние способа иммобилизации на активность лак-казы / В.А. Богдановская, М.Р. Тарасевич, Ф. Шеллер, Д. Пфейфер, У. Вол-ленберг // Электрохимия. (1987) — Т. 23. - Вып. 5. - С. 666-668.

110. Li N. Reagentless biosensor for phenolic compounds based on tyrosinase entrapped within gelatine film /N. Li, M—H. Xue, H. Yao, J—J. Zhu // Analytical and Bioanalytical Chemistry (2005) - Vol. 383. - № 7-8. - P.l 127-1132.

111. Kennedy J. F. Surface immobilization and entrapping of enzymes on glu-taraldehyde crosslinked gelatin particles / J. F. Kennedy, B. Kalogerakis, J. M.S. Cabral // Enzyme and Microbial Technology. (1984) - Vol. 6. - № 3. - P. 127-131.

112. Bodalo A. A comparison of different methods of (3-galactosidase immobilization. A. Bodalo, E. Gomez, J.L. Gomez, J. Bastida, M.F. Maximo, F. Diaz // Process Biochemistry. (1991) - Vol. 26. - № 6. - P. 349-353.

113. Лозинский В.И. Криогели на основе природных и синтетических полимеров: получение, свойства и области применения / В.И. Лозинский // Успехи химии. (2002) - Том 71 - № 6 - С. 559-585.

114. Лозинский В.И. Криотропное гелеобразование растворов поливинилового спирта / В.И. Лозинский // Успехи химии. (1998) - Т. 67. - № 7. - С. 641-655.

115. Wong F-L. Comparative stady of poly(vinyl alcohol)-based support materials for the immobilization of glucose oxidase / F-L. Wong, A. Abdul-Aziz // Journal of Chemical Technology and Biotechnology. (2008) - Vol. 83. - № 1. - P. 41-46.

116. Kuo С. К. Ionically crosslinked alginate hydrogels as scaffolds for tissue engineering: Part 1. Structure, gelation rate and mechanical properties / С. K. Kuo, P. X. Ma // Biomaterials. (2001) - Vol. 22. - № 6. - P.511-521.

117. Betigeri S. S. Immobilization of lipase using hydrophilic polymers in the form of hydrogel beads / S. S. Betigeri, S. H. Neau // Biomaterials. — (2002) -Vol. 23. № 17. - P. 3627-3636.

118. Simsek-Ege F. A. Matrix molecular weight cut-off for encapsulation of carbonic anhydrase in polyelectrolyte beads / F. A. Simsek-Ege, G. M. Bond, J. Stringer //Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. (2002) - Vol. 13. -№ 11.-P. 1175-1187.

119. Won K. Optimization of lipase entrapment in Ca-alginate gel beads / K. Won, S. Kim, K-J. Kim, H.W. Park, S.-J. Moon // Process Biochemistry. -(2005) Vol. 40. - № 6. - P. 2149-2154.

120. Matto M. Entrapment of porous stable concovalin A-peroxidase complex into hybrid calcium alginate-pectin gel / M. Matto, Q. Husain // Journal of Chemical Technology and Biotechnology. (2006) - Vol. 81. - № 7. - P. 1316-1323.

121. Magalhaes D. В. Immobilization of p-glucosidase aggregates in calcium alginate / D. B. Magalhaes, M. H. M. da Rocha-Leao // Biomass and Bioenergy. -(1991)-Vol. l.-№4.-P. 213-216.

122. Rinaudo M. Chitin and chitosan: properties and application / M. Rinaudo // Progress in Polymer Science. (2006) - Vol. 31 - № 7 - P. 603-632.

123. Краюхина M.A. Полиэлектролитные комплексы хитозана: формирование, свойства и применение / М.А. Краюхина, Н.А. Самойлова, И. А. Ям-сков // Успехи химии. (2008) - Т. 77. - №. 9. - С. 884-869.

124. Mansfeld J. Immobilization of cells in polyelectrolyte complex / J. Mansfeld, H. Dautzenberg // Methods in Biotechnology, Vol. 1. Immobilization of Enzymes and Cells, Edited by Bicker staff G. F., Humana Press Inc Totowa, NJ 1997 P. 309-317.

125. Dimitriu S. Enzyme immobilization using chitosan-xanthan complex / S. Dimitriu, P. Vidal, E. Chornet // Methods in Biotechnology, Vol. 1. Immobilization of Enzymes and Cells, Edited by Bickerstaff G. F., Humana Press Inc Totowa, NJ 1997- P. 229-236.

126. Wong S. S. Chemical crosslinking and the stabilization of proteins and enzymes / S. S. Wong, L-J. C. Wong // Enzyme and Microbial Technology. -(1992) Vol. 14. - № 11. - P. 866 - 874.

127. Martinek K. Stabilization of enzymes by intramolecular cross-linking using bifunctional reagents / K. Martinek, V. P. Torchilin // Methods in Enzymology. -(1988)-Vol. 173.-P. 615-626.

128. Wong S. S. Chemistry of protein conjugation and cross-linking. 1991 CRC Press, Boca Raton, Florida USA 340 P.

129. Mateo C. A new mild cross-linking enzyme aggregates / C. Mateo, J. M. Palomo, L. M. van Langen, F. van Rantwijk, R. A. Sheldon // Biotechnology and Bioengineering. (2004) - Vol. 86. - № 3. - P. 273-276.

130. Kazan D. Stabilization of Escherichia coli penicillin G acylase against thermal inactivation by cross-linking with dextran dialdehyde polymers / D. Kazan, H. Ertan, A. Eraslan // Applied Microbiology and Biotechnology. (1997) -Vol. 48,-№2. P.191-197.

131. Cao L. Cross-linked enzyme aggregates: a simple and effective method for the immobilization of penicillin acylase / L. Cao, L.M. van Langen, F. van Rantwijk, R.A. Sheldon // Organic Letters. (2000) - Vol. 2. - № 10. - P. 13611364.

132. Lopez-Serrano P. Cross-linked enzyme aggregates with enhanced activity: application to lipases / P. Lopez-Serrano, L. Cao, F. van Rantwijk, R.A. Sheldon // Biotechnology Letters. (2002) - Vol. 24. - №. 16. - P. 1379 - 1383.

133. Dalai S. Preparation and characterization of combi-CLEAs catalyzing multiple non-cascade reactions / S. Dalai, M. Kapoor, M. N. Gupta // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. (2007) - Vol. 44. - № 3-4. - P. 128 - 132.

134. Gaur R. Galacto-oligosaccharide synthesis by immobilized Aspergillus oryzae |3-galactosidase / R. Gaur, H. Pant, R. Jain, S. K. Khare // Food Chemistry. (2006) - Vol. 97. - № 3. - P. 426 - 430.

135. Tyagi R. Amorphous enzyme aggregates: stability toward heat and aqueous cosolvent mixtures / Tyagi R., Batra R., M. N. Gupta // Enzyme and Microbial Technology. (1999) - Vol. 24. - № 5-6. - P. 348- 354.

136. Broun G. Chemically aggregated enzymes / G. Broun // Methods in Enzy-mology. (1976) - Vol. 44. - P. 263-280.

137. Roy I. Smart biocatalysts: design and applications /1. Roy, Sh. Sharma, M. N. Gupta // Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology. (2004) - Vol. 86. -P.159-189.

138. Quicoho F.A. Intermolecular cross-linking of a protein in the crystalline state: carboxypeptidase-a / F.A. Quicoho, F. M. Richards // Proceedings of the National Academy of Sciences of USA. (1964) - Vol. 52 - № 3 - P. 833-839.

139. Mateo C. Stabilisation of oxygen-labile nitrilases via co-aggregation with poly(ethyleneimine) / C. Mateo, B. Fernandes, F. van Rantwijk, A. Stolz, R. A.

140. Sheldon // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. (2006) - Vol. 38. -№3-6.-P. 154-157.

141. Bio-inorganic hybryd nanomaterials. Strategies, synthesis, characterizaion and application. Edited by Ruiz-Hitzky E., Ariga K., Lvov Yu. Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KgaA, 2008 - P. 521.

142. Bandyopadhyay A. Poly(vinyl alcohol)/silica hybryd nanocomposites by sol-gel technique: synthesis and properties / A. Bandyopadhyay, M. de Sarkar, A. K. Bhomwick // Journal of Material Sciense. (2005) - Vol. 40. - № 19. - P. 5233-5241.

143. Nadarajah K. Production of chitosan by fungi / K. Nadarajah, J. Kader, M. Mazmira, D.C. Paul // Pakistan Journal of Biological Sciences. (2001) — Vol. 4. -№ 3. - P. 263-265.

144. Goksungr Y. Optimization of the production of chitosan from beet molasses by response surface / Y. Goksungr // Journal of Chemical Technology and Biotechnology. (2004) - Vol. 79. - № 9. - P.974-981.

145. Trasiv J. The specificity of porcine trypsin / J. Trasiv // Biochemical and Biophysical Research Communication (1967) - Vol. 29. - № 3. - P. 294-297.

146. Wortington Enzyme Manual. New Jersey: Freehold. - 1972 - P. 125-127.

147. Лозинский В.И., Зубов А.Л. Устройство для формирования сферических гранул из материала на основе водных систем. // Пат. РФ № 2036095 (1992); Б.И. № 15(1995).

148. Дёрфель К. Статистика в аналитической химии. М — Мир 1994 — С. 268.

149. Лозинский В.И. Приенение криогелей поливинилового спирта в биотехнологии. IV. Обзор литературы / В.И. Лозинский, А.В. Вакула, А.Л. Зубов // Биотехнология. (1992) - № 4. - С. 5-14.

150. Lozinsky V.I. Polymeric cryogels as promising materials of biotechnological interest / V.I. Lozinsky, I.Y. Galaev, F.M. Plieva, I.N. Savina, H. Jungvid, B. Mattiasson // Trends in Biotechnol. (2003) - Vol. 21. - № Ю. - P. 445-451.

151. Роговина Л.З. Природа студнеобразования, структура и свойства студней полимеров / Л.З. Роговина, Г.Л. Слонимский // Успехи химии. (1974) - Т. 43. - № 6. - С. 1102-1135.

152. Ross-Murphy S.B. Fundamentals of hydrogels and gelation / S.B. Ross-Murphy, H. McEvoy // British Polymer Journal. (1986) - Vol. 18. - № 1. - P. 2-7.

153. Eldridge J.E. Studies of the cross-linking process in gelatin gels. Ш. Dependence of melting point on concentration and molecular weight / J.E. Eldridge, J.D. Ferry // The Journal of Physical Chemistry. (1954) - Vol. 58. - № 11. - P. 992-995.

154. Малкин А.Я. // Энциклопедия полимеров. M.: Советская энциклопедия, 1972. Т. 1. С. 572.

155. Лозинский В.И. Применение криогелей поливинилового спрта в биотехнологии. V. Сверхмакропористые носители для иммобилизации молекул / В.И. Лозинский, Ф.М. Плиева, А.Л. Зубов // Биотехнология. — (1995) — № 12. С. 32-37.

156. Cao L. Immobilised enzymes: carrier-bound or carrier-free? / L. Cao, L. van Langen, R.A. Sheldon // Current Opinion in Biotechnology. (2003) - Vol.11. -№ 14.-P. 387-394.

157. Gaur R. Galacto-oligosaccharide synthesis by immobilized Aspergillus oryzae P-galactosidase / R. Gaur, H. Pant, R. Jain, S.K. Khare // Food Chemistry. (2006) - Vol. 97 - P. 426-430.

158. Sheldon R.A. Cross-linked enzyme aggregates (CLEA): stable and recyclable biocatalysts / R.A. Sheldon // Biochemical Society Transactions. (2007) - Vol. 35 -№ 6 — P. 1583-1587.