Комплексная оценка комплементсвязывающей способности внутривенных иммуноглобулинов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Евченко, Татьяна Анатольевна

• Евченко, Татьяна Анатольевна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Евченко, Татьяна Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. Иммуноглобулины для внутривенного введения и методы контроля их комплементсвязывающей способности.

1.1. Способы получения препаратов иммуноглобулинов для внутривенного введения.

1.2. Система комплемента: строение и функции. Взаимодействие с иммуноглобулинами.

1.3. Методы контроля комплементсвязывающей способности препаратов иммуноглобулинов.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. М атериа лы.

2.2. Методы.

Глава 3. Качественная характеристика препаратов иммуноглобулинов.

3.1. Иммунохимическая характеристика.

3.2. Антикомплементарная активность.

3.2. Разработка модифицированного метода оценки антикомплементарной активности.

Глава 4. Оценка препаратов внутривенного иммуноглобулина различными способами.

4.1. Определение способности препаратов иммуноглобулинов активировать С1-С5 компоненты комплемента.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АКА - антикомплементарная активность

ВВИГ - иммуноглобулин для внутривенного введения

ВИЧ - вирус иммунодефицита человека

ВМБ - веронал-мединаловый буфер

ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения

ВФС - временная фармакопейная статья

ГИСК - Российский государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов

ГУП - Государственное унитарное предприятие

ЖББ - желатин-барбиталовый буфер

ИГ - иммуноглобулин

КАА - комплекс антиген-антитело

КМИБП - Комитет медицинских иммунобиологических препаратов НПО - научно-производственное объединение

НИИЭМ - Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии

ОблСПК - Областная станция переливания крови

ПА - полиамид

ПЭГ - полиэтиленгликоль

РСК - реакция связывания комплемента

РЦ - регенерированная целлюлоза

ТУ - технические условия

УПМП - полисульфонамид

ФЭК - фотоэлектроколориметр

2 СН50 - 2 гемолитические единицы комплемента

С1 - С9 - компоненты комплемента

СЯ - рецепторы комплемента

ЕА - эритроциты барана

МНЕ - минимальная гемолитическая единица

Ю -115 - реагенты для оценки активности компонентов комплемента

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Комплексная оценка комплементсвязывающей способности внутривенных иммуноглобулинов»

Актуальность проблемы исследования. Среди обширного набора иммуномодулирующих препаратов важное место принадлежит иммуноглобулинам. Благодаря наличию большого спектра антител ко многим микроорганизмам, вирусам и их токсинам, препараты нормальных и специфических иммуноглобулинов человека широко используются для профилактики и терапии различных инфекционных и иммунодефицитных заболеваний (Berkman et al., 1990).

За рубежом получило развитие отдельное направление, посвященное вопросам применения, дозировки и эффективности иммуноглобулинов для внутривенного введения. Для лечебного применения предлагается целый набор препаратов, различающихся по своему качеству, частоте возникновения побочных реакций, форме выпуска, физическим параметрам и длительности циркуляции в организме. Препараты условно подразделяют на несколько групп (Delire, 1995). Иммуноглобулины первого поколения подвергнуты обработке ферментами для разрушения или повреждения комплементсвязывающего участка, препараты второго поколения приготовлены химической модификацией, а более совершенные иммуноглобулины получены комбинацией нескольких способов, предусматривающих как «мягкое» фракционирование, так и удаление агрегатов из уже готового продукта (Ahrens et al., 1982; Freisen et al., 1985).

По требованиям ВОЗ препараты иммуноглобулинов для внутривенного введения должны, по возможности, сохранять интактную структуру молекулы, иметь длительный период полувыведения из организма и близкое к естественному распределение субклассов иммуноглобулинов G (McCue et al., 1989). Одним из наиболее важных параметров является низкая комплементактивирующая активность иммуноглобулина. Внутривенное введение иммуноглобулинов низкого качества связано с риском возникновения у пациентов реакций анафилактоидного типа, что обусловлено запуском системы комплемента на агрегированных при фракционировании молекулах иммуноглобулинов (Barandun et al., 1986; Duhem et al, 1994).

В нашей стране производится единственный препарат первого поколения, пригодный для внутривенного введения, который представляет собой иммуноглобулин, обработанный пепсином для устранения комплементсвязывающей способности. В результате молекулы иммуноглобулина с нарушенным Fc-фрагментом быстро выводятся из организма, и лечебный эффект препарата значительно уменьшается. Поэтому предлагаются различные варианты препаратов, 6 приготовленные по различным технологиям и имеющие разную антикомплементарную активность.

Совершенствование процессов фракционирования позволило предложить препараты иммуноглобулинов четвертого поколения в нетрадиционной форме, с величиной рН 5,5 и даже 4,2, что способствует сохранению биологических функций молекулы иммуноглобулина (Анастасиев В.В., 1997; Алешкин В.А., Лютов А.Г., 1998; Исрафилов А.Г. и др., 1998; Tenold, 1982).

Для оценки одного из самых важных параметров внутривенного иммуноглобулина, антикомплементарной активности, применяют различные методы, основанные на определении способности препарата связывать первый компонент системы комплемента и объединенные под названием «реакция связывания комплемента» (Козлов Л.В. и др., 1998).

В процессе производства препаратов иммуноглобулинов требованиями нормативно-технической документации предусмотрено проведение оценки связывания комплемента при инкубации иммуноглобулина с 2 гемолитическими единицами (2 СН50) комплемента в солевом растворе. Эта доза комплемента дает около 90 % гемолиза, и по снижению гемолиза можно обнаружить связывание комплемента любой степени (Киселева И.А. и др., 1988).

В связи с тем, что низкая величина рН, приводя к неспецифическому гемолизу эритроцитов, затрудняет определение антикомплементарной активности препаратов внутривенных иммуноглобулинов, оценка качества их традиционными методами невозможна. Поэтому предлагаются трудоемкие, сложные способы анализа качества по связыванию с иммобилизованными компонентами комплемента (Козлов Л.В. и др., 1998) или по количеству свободного комплемента, добавленного в избытке к иммуноглобулину (European Pharmacopoeia, 1994).

Из большого количества существующих методов оценки белков системы комплемента часть адаптирована для определения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов, причем каждый метод предусматривает оценку комплементсвязывающей активности в собственных единицах и имеет свои критерии качества внутривенных иммуноглобулинов. Это усложняет оценку качества препаратов.

Учитывая потребность в сравнительной характеристике качественных показателей внутривенных иммуноглобулинов, приготовленных по различным технологическим вариантам, и невозможность оценки антикомплементарной активности препаратов с низким значением рН традиционным методом, была сформулирована цель, и определены задачи настоящего исследования. 7

Цель исследования. Комплексная оценка комплементсвязывающей способности иммуноглобулинов для внутривенного введения, различающихся качественным составом и процессом получения.

Задачи исследования:

1. Приготовить различными способами экспериментальные и производственные образцы иммуноглобулинов, охарактеризовать их доступными физико-химическими методами.

2. Определить антикомплементарную активность образцов иммуноглобулинов в реакции с постоянным количеством комплемента (2 СН50) и адаптировать данный способ оценки антикомплементарной активности для контроля качества внутривенных иммуноглобулинов с различным значением рН.

3. Оценить воспроизводимость и информативность микрометода радиальной диффузии в геле для определения антикомплементарной активности иммуноглобулинов и использования в качестве перспективного способа контроля.

4. Провести определение качества образцов иммуноглобулинов по активации С1-С5 компонентов комплемента и путем определения комплементсвязывающей активности в избытке комплемента.

5. Исследовать возможности различных методов определения антикомплементарной активности иммуноглобулинов для скрининга полуфабрикатов и оценки качества готовых препаратов иммуноглобулинов, имеющих различное значение рН.

6. Установить зависимость между комплементсвязывающей способностью иммуноглобулинов различного качественного состава и используемым методом определения.

Научная новизна и практическая значимость работы. Проведена комплексная оценка антикомплементарной активности иммуноглобулинов для внутривенного введения, полученных по разным технологиям и различающихся своим качественным составом, что позволило создать стабильную сухую форму иммуноглобулина для внутривенного применения, получившую коммерческое название «Иммуновенин» (патент РФ № 2155069 от 02.02.99 г. ГУП «Иммунопрепарат», Уфа)

Для анализа качества препаратов иммуноглобулинов использован оригинальный метод радиальной диффузии в геле. Метод отличается простотой, воспроизводимостью и является перспективным способом оценки качества внутривенных иммуноглобулинов и скрининга полуфабрикатов. 8

Предложен модифицированный метод титрования исследуемых препаратов иммуноглобулинов в присутствии 2 СН50, который целесообразно использовать для определения антикомплементарной активности иммуноглобулинов различного качественного состава, в том числе препаратов с низким значением рН. Метод способствовал разработке технологии получения мономерного иммуноглобулина, имеющего рН 4,2 (патент РФ № 2140289 от 30.00.98 г. ГУП «Иммунопрепарат», Уфа).

Внедрение результатов исследований в практику. Сухая стабильная форма иммуноглобулина для внутривенного введения получила коммерческое название «Иммуновенин», препарат рекомендован для внедрения в практику здравоохранения (решение Комитета МИБП № 10 от 29.12.99 г.). Экспериментально-производственный выпуск препарата начат цехом препаратов крови ГУП «Иммунопрепарат».

Метод оценки комплементсвязывающей способности иммуноглобулинов в избытке комплемента применяется на биологическом факультете Башкирского государственного университета для иммунологических исследований.

Микрометод определения активности компонентов комплемента использован в процессе выполнения исследовательского гранта № 806 по изучению образцов плазмы крови после криорадиационной обработки.

Предложенная модификация метода титрования иммуноглобулина в присутствии 2 СН50 включена в проект временной фармакопейной статьи на препарат «Габриглобин». Препарат рекомендован для внедрения в практику здравоохранения решением Комитета МИБП (протокол № 1 от 15.03.2000 г.).

Метод радиальной диффузии в геле рекомендован в качестве перспективного способа оценки антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов для внутривенного введения.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 работ, получено 2 патента.

Положения, выносимые на защиту:

1. Модифицированный способ оценки антикомплементарной активности при постоянном количестве комплемента позволяет легко определять комплементсвязывающую способность препаратов внутривенного иммуноглобулина с различным значением рН.

2. Микрометод радиальной диффузии в геле целесообразно использовать для определения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов различного качественного состава.

3. Экспериментальные и производственные образцы иммуноглобулинов, приготовленные по различным технологиям, различаются по содержанию димерных, 9 мономерных и фрагментированных молекул, иммуноэлектрофоретическому составу и антикомплементарной активности.

4. Наиболее низкой антикомплементарной активностью обладают препараты «1пй^1оЫп» и «РаЬ-2 иммуноглобулин». Препараты с низким значением рН имеют допустимую, для критерия внутривенного применения, антикомплементарную активность. Антикомплементарная активность иммуноглобулинов, приготовленных методом ферментативного расщепления, хотя и различалась в зависимости от используемого метода определения, была выше 10 мг белка, не активирующих 2 СН50.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на Всероссийской конференции биохимиков Урала и Западной Сибири (Уфа, 1998); Всероссийской научной конференции, посвященной 95-летию УфНИИВС им. И.И. Мечникова, ГУП «Иммунопрепарат» (Уфа, 2000); Всероссийской научной конференции в МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского (Москва, 2000), посвященной 140-летию Г.Н. Габричевского.

Апробация проведена на заседании секции Ученого Совета «Медицинская биотехнология» МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского 18.07.2000 г. и на заседании Ученого Совета УфНИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова ГУП «Иммунопрепарат» 05.09.2000 г. (протокол №7).

Раздел исследований по получению экспериментальных и производственных серий препарата «Иммуновенин» выполнен в цехе препаратов крови ГУП «Иммунопрепарат» (г. Уфа) совместно с начальником цеха препаратов крови к.м.н. Кудашевой Г.Б. и микробиологом Корниловой И.А.

Раздел работы, посвященный изготовлению экспериментальных образцов «термообработанного» иммуноглобулина, выполнен совместно с в.н.с. лаборатории препаратов крови ГУП «Иммунопрепарат» Исрафиловым А.Г.

10

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Иммуноглобулины для внутривенного введения и методы контроля их комплементсвязывающей способности

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Евченко, Татьяна Анатольевна

ВЫВОДЫ

1. По четырем технологиям получены экспериментальные и производственные образцы иммуноглобулинов, имеющие различное соотношение димерных, мономерных, фрагментированных молекул, иммуноэлектрофоретический состав и антикомплементарную активность (патент РФ № 2140289).

2. Разработан модифицированный способ оценки антикомплементарной активности при постоянном количестве комплемента, позволяющий легко определять комплементсвязывающую способность препаратов внутривенного иммуноглобулина с различными значениями рН.

3. Предложено неизвестное ранее использование микрометода радиальной диффузии в геле для определения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов. Метод отличается простотой, воспроизводимостью и является перспективным способом оценки качества внутривенных иммуноглобулинов.

4. Способы оценки иммуноглобулинов по активации С1-С5 компонентов комплемента и путем определения комплементсвязывающей активности в избытке комплемента позволяют определять или очень низкую, или очень высокую антикомплементарную активность препаратов с разными значениями рН.

5. Изученные способы оценки качества внутривенных иммуноглобулинов применимы для определения антикомплементарной активности препаратов и дают совпадающие результаты. Для оценки качества иммуноглобулинов с низким значением рН наиболее пригодны: модифицированный способ титрования с 2 СН50, радиальная диффузия в геле и способ определения в избыточном количестве комплемента (100 СН50).

99

6. Наиболее низкой антикомплементарной активностью, по данным всех вариантов реакции, обладают 1тга§1оЫп и РаЬ-2 иммуноглобулин. Препараты с низким значением рН имеют достаточную, для критерия внутривенного применения, антикомплементарную активность. Комплементсвязывающая активность иммуноглобулинов производства Нижегородского предприятия «ИмБио» и ГУП «Иммунопрепарат» (патент РФ № 2155069), хотя и различается в зависимости от используемого метода определения, составляет выше 10 мг белка иммуноглобулина, не активирующих 2 СН50.

100

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Препараты иммуноглобулинов являются высокоэффективным, безопасным и широко используемым средством лечения и профилактики многих инфекционных болезней (Зимин Ю.И., 1994; Алешкин В.А. и др., 1997; Вегкшап е! а1.,1988).

Созданием препаратов иммуноглобулинов для внутривенного введения за рубежом занимаются многие известные корпорации. Для лечебного применения предлагается целый набор препаратов, различающихся по своему качеству, частоте возникновения побочных реакций, форме выпуска, пути введения, физическим параметрам и длительностью циркуляции в организме (Клегпан е1 а1., 1986; Вегкшап е! а1., 1990).

Большой опыт применения препаратов различного качества зарубежными исследователями позволил сформулировать требования, которым должна отвечать внутривенная форма: полная толерантность при внутривенном введении, содержание всего спектра антител класса О, которые имеются в данном регионе, наличие всех четырех подклассов IgG в физиологическом распределении, сохранение всех структурных и функциональных свойств антител, особенно СН2 и СНЗ доменов Гс-фрагмента. Должны полностью осуществляться следующие функции: связывание и активация комплемента после взаимодействия с антигеном, сохранение естественного катаболизма (периода выведения ИГ из организма), взаимодействие с рецепторами макрофагов и моноцитов, взаимодействие с белком А, перенос ИГ через плаценту, фиксация на Гс-рецепторах нейтрофилов и цитотоксических клетках (Вегкшап, 1988; КагагсЬкше, 1996). Особо подчеркивается, что высококачественный ИГ для внутривенного введения не должен содержать неоантигенов, агрегатов и фрагментов (ОагсН, 1984).

В нашей стране внутривенный иммуноглобулин выпускается по единой технологии, впервые внедренной в Нижегородском НИИЭМ и теперь уже значительно устаревшей. Препарат быстро, в течение нескольких дней, выводится из организма и перестает оказывать лечебный эффект (Анастасиев В.В. с соавт., 1985; Анастасиев В.В., 1993).

86

Поэтому разработка новых, более совершенных препаратов иммуноглобулинов для внутривенного введения, обладающих высокими лечебными свойствами, весьма актуальна. Совершенствование процессов фракционирования позволило предложить препараты иммуноглобулинов в нетрадиционной форме, с величиной pH 5,5 и даже 4,2 (Анастасиев В.В., 1997; Алешкин В.А., Лютов А.Г., 1998; Исрафилов А.Г. и др., 1998; Tenold, 1982).

В связи с тем, что внутривенное введение препаратов ИГ низкого качества вызывает побочные реакции за счет активации системы комплемента на поврежденных в процессе изготовления препарата молекулах иммуноглобулинов и образования анафилатоксинов С4а, СЗа и С5а, что может приводить, в свою очередь, к активации калликреин-кининовой, плазминовой систем и системы свертывания крови, клинически проявляющейся одышкой, дрожью, тошнотой, а в некоторых случаях и коллапсом (Watkins, 1982), наиболее важным параметром, строго контролируемым фирмами-производителями препаратов, является так называемая «антикомплементарная активность».

Однако, в отношении этого главного критерия качества внутривенных иммуноглобулинов нет единого мнения. В разных странах пользуются своими модификациями метода оценки антикомплементарной активности и предлагают собственные критерии внутривенной переносимости препаратов (Seiler et al., 1979).

Оценка антикомплементарной активности основана на определении способности препарата связывать первый компонент системы комплемента, а методы объединены под названием «реакция связывания комплемента» (Козлов Л.В. и др., 1998).

Общепринятым методом оценки качества препаратов ИГ, выпускаемых в нашей стране, является способ определения степени связывания комплемента при инкубации иммуноглобулина с 2 гемолитическими единицами комплемента в солевом растворе (2 СН50). Эта доза комплемента дает около 90% гемолиза, и по снижению гемолиза можно обнаружить связывание комплемента любой степени (Киселева И. А. и др., 1988). К сожалению, применение данной методики не позволяет определить истинную степень связывания комплемента мономерными препаратами ИГ, имеющими низкое значение pH.

87

Поэтому, учитывая потребность в сравнительной характеристике качественных показателей внутривенных иммуноглобулинов, приготовленных по различным технологическим вариантам, и невозможность оценки антикомплементарной активности препаратов с низким значением рН общепринятым методом, была сформулирована цель настоящего исследования: проведение комплексной оценки комплементсвязывающей способности иммуноглобулинов, предназначенных для внутривенного введения, различающихся своим качественным составом и процессом получения. Одной из задач являлись подбор и модификация методов, пригодных для контроля качества препаратов, имеющих низкое значение рН.

В первую очередь по различным технологическим вариантам были приготовлены экспериментальные и производственные образцы внутривенных иммуноглобулинов, соответствующих нескольким поколениям препаратов.

В качестве препаратов первого поколения использовали иммуноглобулин нормальный человеческий для внутривенного введения Нижегородского предприятия, сухую форму подобного препарата, приготовленную по оригинальной технологии - Иммуновенин; второму поколению химически модифицированных препаратов соответствовал Ьтй^оЫп Р; препаратами третьего-четвертого поколения с низкой величиной рН были мономерный Габриглобин и термообработанный иммуноглобулин. Кроме того, использовали экспериментальный препарат, содержащий, в основном, фрагменты ^С. и обычный иммуноглобулин для внутримышечного применения. Все препараты были охарактеризованы иммунохимическими методами, и определена их антикомплементарная активность общепринятым регламентным методом с двумя единицами СН50 и использованием солевого раствора.

Самой низкой антикомплементарной активностью обладал обработанный (3-пропиолактоном Шга§1оЫп, хотя по данным колоночной хроматографии препарат имел наиболее высокое содержание полимеров - 2,2 %. По-видимому, прямой зависимости между количеством агрегированных форм ^С в препарате и высокой комплементсвязывающей способностью не имеется. Так, в расщепленных пепсином и химически модифицированных препаратах агрегаты присутствуют, однако эти формы, как правило, обладают низкой спонтанной комплементактивирующей

88 способностью. Это подтверждается данными Ramasamy et al. (1997), изучавшими АКА иммуноглобулина, агрегированного прогреванием IgG. Агрегаты, сформировавшиеся в растворе IgG с низким pH, обладали невысокой способностью активировать систему комплемента, тогда как агрегаты, образовавшиеся при нейтральном значении среды, сильно связывали С1 q (по данным ELISA) и имели высокую антикомплементарную активность.

Препараты, приготовленные с использованием ферментативного расщепления, имели, в среднем, от 11,7 до 15,0 мг белка, не активирующих 2СН50.

Степень связывания комплемента препаратами с низкой величиной pH (термообработанный иммуноглобулин и Габриглобин) данным способом определить не удалось, вследствие неспецифического гемолиза. На трудности оценки качества внутривенного иммуноглобулина с величиной pH 4,2 указывали Seiler et al. (1979). В их опытах применение обычного солевого раствора с низкой буферной емкостью приводило к снижению величины pH в системе [иммуноглобулин - солевой раствор -комплемент - сенсибилизированные эритроциты], что вызывало неспецифический гемолиз эритроцитов. Поэтому нами была предпринята попытка модификации классического метода Киселевой И.А и соавт. (1988).

Для устранения гемолиза была изучена возможность использования различных буферных систем, как рекомендуется в ряде методик определения компонентов комплемента.

Наилучшие результаты были достигнуты при использовании веронал-мединалового буфера, а для предупреждения повышения величины pH в смеси [иммуноглобулин - солевой раствор - комплемент] и, как следствие, агрегации молекул и увеличения потребления комплемента (McCue et al., 1986) во время инкубации испытуемых иммуноглобулинов с 2 CH50 в течение 18 ч, было предложено использование на первом этапе для разведения испытуемых иммуноглобулинов солевого раствора с pH 6,5.

Отличий в результатах реакции, проводимой в соответствии с указаниями Киселевой И.А. и соавт. (1988), и по методу с использованием солевого раствора с pH 6,5 и веронал-мединалового буфера, при изучении препаратов ИГ выявлено не было.

89

Важным преимуществом модифицированного варианта реакции является возможность определения комплементсвязывающей способности препаратов, имеющих низкое значение рН. При этом не требуется подведения величины рН в препаратах. Это происходит автоматически при добавлении индикаторной системы к смеси испытуемых препаратов с комплементом. В то же время, применение солевого раствора с рН 6,5 не влияет на величину рН в исследуемых образцах иммуноглобулинов и не приводит к самопроизвольному возрастанию их способности к связыванию комплемента в процессе инкубации. Габриглобин и термообработанный иммуноглобулин содержали 10,8 - 11,3 мг белка, не активирующих 2 СН50.

Далее сравнительный анализ качества препаратов иммуноглобулинов, по рекомендациям Козлова Л.В. и соавт. (1985) и Козлова Л.В. и Гузовой В.А. (1998), был проведен экспресс-методом в микропланшетах, основанным на определении потребления С4 компонента комплемента морской свинки в результате связывания и активации комплемента препаратом (или содержащимися в нем примесями). Использовали визуальный и спектрофотометрический способы подсчета результатов. В части опытов данные выражали в мг агрегированного

Внутримышечный иммуноглобулин, как и следовало ожидать, обладал высокой способностью к связыванию и активации комплемента - антикомплементарная активность составила 2,0 - 4,0 СН50/мг. 1пй^1оЫп не активировал только 12,0 мг белка иммуноглобулина. Иммуноглобулины производства Нижегородского НИИЭМ в одном случае не активировали 12 мг белка иммуноглобулина, а в другом случае -только 8 мг. ГаЬ-2 препарат не связывал комплемент при концентрации белка в лунке 15 мг.

В связи с тем, что методикой проведения такой реакции для приготовления реагентов (II1 - Я5) предусмотрено использование буферного раствора, мы применили данный способ оценки АКА для анализа качества иммуноглобулинов с низким значением рН. Термообработанный иммуноглобулин и Габриглобин не связывали и не активировали комплемент при концентрации 13,5 - 15,0 мг белка иммуноглобулина.

90

В варианте проведения реакции с использованием в качестве стандарта агрегированного иммуноглобулина получены следующие результаты. Внутримышечный иммуноглобулин обладал высокой способностью к потреблению компонента С4, соответствующей содержанию 1Д4 мг/мл агрегированного IgG. Intraglobm, хотя и имел 2,2 % полимерных форм IgG по данным колоночной хроматографии, потреблял комплемент в количестве, эквивалентном 0,14 мг/мл агрегированного IgG. Термообработанный иммуноглобулин и Иммуновенин потребляли комплемент в количестве, эквивалентном 0,25 и 0,28 мг/мл, Fab-2 ИГ и Габриглобин - 0,30 и 0,33 мг/мл агрегированного IgG.

При анализе комплементарной системы белков плазмы Титовым Л.П. (1991) использован оригинальный способ радиальной диффузии в геле, сочетающий простоту и удобство в постановке реакции.

Нами была сделана попытка использования данного метода для определения комплементактивирующей способности препаратов иммуноглобулинов. Для этого были подобраны оптимальные условия проведения реакции. Для автоматической коррекции величины рН в испытуемых образцах агаровый гель готовили на веронал-мединаловом буфере. Наиболее приемлемыми условиями были: толщина слоя геля 2-3 мм, концентрация эритроцитов барана - 3 %, диаметр лунок - 3 мм. В этом случае объем вносимой пробы составлял 0,02 мл.

Наиболее низкой антикомплементарной активностью в данном варианте реакции обладали Intraglobin и препараты ИГ с величиной рН 4,2. Зоны гемолиза лунок с внесенными образцами данных препаратов практически не отличались от зон гемолиза контрольных лунок. Метод оценки качества препаратов радиальной диффузией в геле, на наш взгляд, легко воспроизводим, экономичен, дает стабильные результаты и может с успехом использоваться для скрининга иммуноглобулинов на различных этапах технологического процесса их получения.

Заключительным этапом исследований была оценка комплементсвязывающей способности внутривенных иммуноглобулинов путем титрования остаточного количества свободного комплемента, добавленного в избытке к исследуемому препарату (European Pharmacopoeia, 1994).

91

Этот метод обладает достаточно высокой чувствительностью, хотя требует сложного подсчета получаемых результатов. Важным преимуществом его является выражение результатов определения в единицах комплемента, связавшегося с 1 мг белка препарата, что позволяет Количественно оценивать как низкую, так и очень высокую ЛКЛ. По результатам метода АКА препарата «Intiaglobin» и Fab-2 иммуноглобулина равна 0 СН50/мг белка. Антикомплементарная активность Нижегородского препарата и Иммуновенина в среднем составила 0,16 и 0,39 СН50/мг, соответственно, тогда как у Габриглобина и термообработанного ИГ изучаемый показатель равнялся 0,52 и 0,57 СН50/мг белка.

Каждый используемый нами метод оценки препаратов по-своему характеризует качество одних и тех же образцов иммуноглобулинов. Результаты реакции выражаются в различных «антикомплементарных единицах». Например, по методу Киселевой И.А. и соавт. (1988) антикомплементарная активность выражается в количестве мг белка, не активирующих 2 СН50, оценка препаратов в избытке комплемента регистрируется в единицах СН50 на 1 мг белка, а в методе радиальной диффузии в геле были использованы единицы СН50 в 1 мл раствора иммуноглобулина с концентрацией белка 50 мг/мл. Козлов Л.В. и Гузова В.А. (1998) ввели стандарт агрегированного иммуноглобулина и предлагают учитывать комплементсвязывающую активность препаратов ИГ соответственно определенному количеству мг агрегированного IgG человека. Все это создает определенные трудности при проведении сравнительной оценки качества препаратов иммуноглобулинов различными способами.

Тем не менее, нами была сделана попытка дать сравнительную характеристику антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов по результатам всех использованных методов. Средние значения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов приведены в сводной табл. 22. Результаты реакции выражены в значениях, предусмотренных каждым методом.

92

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Евченко, Татьяна Анатольевна, 2000 год

1. Анастасиев В.В. Иммуноглобулин для внутривенного введения в терапии инфекционных и аутоиммунных заболеваний. Ниж. Новгород, 1998.

2. Анастасиев В.В. Клиническое применение иммуноглобулина для внутривенного введения. Ниж. Новгород, 1998.

3. Анастасиев В.В. Разработка технологии получения нового поколения иммуноглобулинов для терапии инфекционных и аутоиммунных заболеваний человека: Автореф. дис. . д-ра биол. наук. М., 1997. - 49 с.

4. Анастасиев В.В., Киселева H.A., Новикова Л.П., Тараева Г.А. Получение из плазмы крови доноров иммуноглобулина для внутривенного введения // Гематология и трансфузиология.-М.: Медицина, 1985. № 10. - С. 46-48.

5. Вавилова Л.М., Голосова Т.В. Система комплемента. Механизмы активации и регуляции, значение в биологии и медицине // Иммунология. М., 1990. -Т.24.

6. Воробьева E.H., Корнилова И.А., Исрафилов А.Г. и др. Отказ от использования асбеста при производстве иммуноглобулина // Актуальные вопросы прикладной биохимии и биотехнологии: Сб. науч. тр. Уфа, 1998. - С. 151-153.

7. Вязов O.E., Ходжаев Ш.Х. Руководство по иммунологии. М.: Медицина, 1973. -391 с.101

8. Ю.Галебская JI.В. Новые подходы к исследованию саморегуляции альтернативного пути активации комплемента // Вопросы медицинской химии. 1999. - № 44. -С. 5.

9. Герасимова Л.М. Изменение молекулярного состава иммуноглобулинов в процессе хранения // Иммуноглобулины: Сб. науч. тр. НГМИ. Н. Новгород, 1993. -С. 41-45.

10. Громов А.Е., Климова H.H. Исследование зависимости между специфической активностью иммуноглобулина антирезус и степенью агрегации белковых молекул // Гематология и трансфузиология. 1985. - № 2. - С. 60-61.

11. Доронина H.A., Сарафанова Л.Н., Мигунов В.Н. и др. Влияние стабилизирующих добавок на антикомплементарную активность иммуноглобулина // Иммуноглобулины: Сб. науч. тр. НГМИ. Н. Новгород, 1993. - С. 68-74.

12. Заволжскова Н.В., Короткова Т.В., Герасимова Л.М. Молекулярный состав иммуноглобулина для внутривенного введения при использовании различных вариантов технологии // Там же. С. 59-64.

13. Зимин Ю.И. Внутривенные иммуноглобулины при иммунной недостаточности // Клин, фармакол. и терапия. 1994. - № 4. — С. 32-34.

14. Исрафилов А.Г., Лютов А.Г., Корнилова И.А., Конева O.K., Евченко Т.А. Изучение условий предупреждения агрегации и снижения димеризации иммуноглобулина при температурной обработке // Там же. С. 171-173.

15. Исрафилов А.Г., Лютов А.Г., Корнилова И.А., Кудашева Г.Б., Хакимова Ф.З. Способ получения лиофилизированной формы иммуноглобулина для внутривенного введения // Там же. С. 174-182.

16. Исрафилов А.Г., Лютов А.Г., Корнилова И.А. Мостовская Е.В. Предварительная подготовка полуфабрикатов для получения внутривенного иммуноглобулина // Там же. С. 182-184.102

17. Исрафилов А.Г., Лютов А.Г., Корнилова И.А., Кудашева Г.Б., Хакимова Ф.З. Способ получения термостабильного внутривенного иммуноглобулина с высоким содержанием мономеров // Там же. С. 194-196.

18. Каргина Т.М., Рунова В.Ф. Изучение молекулярного состава фракций иммуноглобулиновых препаратов методом гель-фильтрации // Журн. микробиол. -1987.-№ 12.-С. 74-77.

19. Киселева И.А., Анастасиев В.В. Получение и характеристика иммуноглобулина для внутривенного введения // Лечебные препараты белков плазмы крови: Сб. науч. трудов. М., 1981.-С. 115-121.

20. Киселева И.А., Анастасиев В.В., Немов В.В. и др. Определение антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов // Методические рекомендации. Горький, 1988. - С. 10-15.

21. Киселева И.А., Тимофеева Г.В. Метод определения антикомплементарной активности в препаратах иммуноглобулина // Гематология и трансфузиология -1986. -№ 4.- С. 54-60.

22. Козлов Л.В., Бургова Н.С., Лоскутов И. А. Система комплемента при ангиосклеротической ретинопатии и лечении никотиновой кислотой // Иммунология. -1997,- С. 55-60.

23. Козлов Л.В., Вавилова Л.М., Голосова Т.В. Микрометод определения факторов комплемента // Иммунология. 1985. - № 3. - С. 66-68.

24. Козлов Л.В., Гузова В.А. Определение комплементактивирующей активности препаратов для внутривенного введения // Методические рекомендации. Москва, 1998.- 7 с.

25. Козлов Л.В. и др. Модифицированные методы определения функциональной активности факторов комплемента С2, СЗ, С4 и С5 // Биоорганическая химия. -1982.- № 5,- С. 652-659.

26. Козлюк A.C., Анисимова Л.А., Шройт И.Г. Иммунологические методы в гигиенических исследованиях. Кишинев: Штиинца, 1987.-С. 18-23.

27. Кульберг А.Я. Молекулярная иммунология. М.: Высш. школа, 1985.

28. Лаптева Л.К., Минакова Л.В. Очистка препаратов иммуноглобулина от балластных сывороточных белков // Стандарты, штаммы и методы контроля бактериальных и вирусных препаратов. М., 1989. - С. 115-118.103

29. Лебедева T.B. Углеводные компоненты иммуноглобулина G: роль в связывании Clq компонента комплемента: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1995.

30. Лютов А.Г., Алешкин В.А. Разработка внутривенного иммуноглобулина нового поколения // Проблемы медицинской биотехнологии и иммунологии инфекционных болезней: Сб. науч. тр. Москва, 1996. - С. 21-25.

31. Лютов А.Г. и др. Сравнительный анализ антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулина для внутривенного введения // Роль иммунобиологических препаратов в современной медицине: Матер, международ, симиоз. Уфа. - 1995. - Ч. 2. С. 73-75.

32. Лютов А.Г., Алешкин В.А. Разработка внутривенного иммуноглобулина нового поколения // Проблемы медицинской биотехнологии и иммунологии: Сб. тр. МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского. М., 1996. - Ч. 2,- С. 21-25.

33. Лютов А.Г., Евченко Т. А., Алешкин В.А. Сравнительная характеристика антикомплементарной активности препаратов внутривенного иммуноглобулина // Проблемы инфекционных болезней: Сб. тр. МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского. -М., 2000.-Ч. 2.-С. 71-75.

34. Мигунов В.Н., Позина И.М. Совершенствование качества препаратов иммуноглобулина // Препараты крови для лечения и профилактики заболеваний человека: Сб. науч. тр. М., 1989. - С. 10-15.

35. Минакова Л.В., Лаптева Л.К. Состояние проблемы производства и качества нормального и специфических иммуноглобулинов из крови человека // Иммуноглобулины: Сб. науч. трудов НГМИ. Н. Новгород, 1993. -С. 4-14.

36. Михайлов И.Ф. Флюоресцирующие антитела и методы их применения. М.: Медицина, 1968. - С. 64-69.

37. Молодовская Э.В., Квасова Н.К., Веселкова Л.А. Опыт внедрения новых технологий в производство препаратов крови // Иммуноглобулины и другие препараты крови: Сб. науч. трудов ГМИ. Горький, 1986. - С. 83-88.

38. Резников Ю.П., Лутоенко Л.В. Содержание субклассов IgG в препаратах гамма-глобулина // Препараты крови для лечения и профилактики заболеваний человека: Сб. науч. тр. М., 1989. - С. 75-79.

39. Русанов В.М., Сапожникова B.C., Порохненко С.Г. Организация производственного процесса изготовления антистафилококкового иммуноглобулина // Гематология и трансфузиология. 1991. - № 2. - С. 34-36.

40. Савкина М.А., Киселева И.А., Анастасиев В.В. Использование методов хроматографии для очистки иммуноглобулина от биологически активных примесей // Хроматография в биологии и медицине: Сб. науч. тр. М., 1983. -С. 34-35.

41. Скриган Е.Р. Влияние трансфузионных сред на антикомплементарную активность препаратов иммуноглобулинов: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Москва. -1985.-21 с.

42. Стригин В.А., Терновой А.П. Неспецифические свойства препаратов иммуноглобулинов. М.: Медицина, 1979. - С. 5-37.

43. Титов Л.П., Батян А.Н. Сравнительная характеристика исследования общей гемолитической активности альтернативного пути системы комплемента различными методами // Лабор. дело. 1987. - № 9. - С. 696-699.

44. Титов Л.П. Физиологические и патологические закономерности функционирования системы комплемента: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. Киев, 1991. -С. 8-12.

45. Тукачинский С.Е. К вопросу о стабилизации иммуноглобулиновых препаратов // Прикладная биохимия и микробиология. 1981. - Т. 13. - С. 45-49.105

46. Холчев Н.В. Препараты нормальных и специфических иммуноглобулинов человека // Очистка и стандартизация препаратов крови человека. М., 1982. -С. 3-14.

47. Шляхов Э.Н., Андриеш Л.П. Иммунология. Кишинев: Штиинца, 1985. -232 с.

48. Abbal М., Tkaczuk J., Praud С. et al. Computer-assisted kinetic assay for quantification of total complement activity // Complement Inflamm. -1991. V. 8, № 2. -P. 92-103.

49. Andrews B.S., Theofilopoulos A.N. A microassay for the determination of hemolytic complement activity in mouse serum // J. Immunol. Methods. 1978. - V. 22, suppl. 3-4. -P. 273-281.

50. Anrens U.E. Method for the preparation of a gamma globulin solution suitable for intravenous use // US 4,312,949, Blutspendedienst det Landesver. Jan 26, 1982.

51. Araujo M.N., Leser P.G., Gabriel J.A. et al. A simple radial immunohemolysis assay for the measurement of functional complement C2 activity // Bras. J. Med. Biol. Res. 1991. -V. 24, № 1,-P. 49-57.

52. Art G.P., Finlayson J.S. Stability of immune serum globulin during storage: effects of prior heating // Vox. Sang. 1969. - V. 17, № .5. - P. 419-433.

53. Bach S. et al. Electrophoretic polymorphism of the fourth component of complement (C4) in paired maternal and foetal plasmas // Immunology. 1971. - V. 5. -P. 869-878.

54. Barandun S., Isliker H. Development of immunoglobulin preparations for intravenous use//Vox. Sang. 1986.-V. 51. - P. 157-160.

55. Barandun S., Kistler P., Jenet F., Isliker H. Intravenous administration of human y-globulin // Vox. Sang. 1962. - V. 7, № 2. - P. 157-174.

56. Basta M., Dalakas M.C. High-dose intravenous immunoglobulin exerts its patients with dermatomyositis by blocking endomysial deposition of activated complement fragments // J. Clin. Invest. 1994.- V. 94, № 5. - P. 1729-1735.

57. Berden J.H., Hagemann J.F., Koene R.A. A sensitive haemolytic assay of mouse complement // J. Immunol. Methods. 1978. - V. 23, № 1-2. - P. 149-159.

58. Berkman S.A., Lee M.L., Gale R.P. Clinical uses of intravenous immunoglobulins // Ann. Intern. Med. 1990. - V. 112, № 4. - P. 278-292.

59. Berkman S.A., Lee M.L., Gale R.P. Clinical uses of intravenous immunoglobulins // Hematology. 1988. - V. 25, № 2. - P. 140-158.

60. Berrens L., Lopez B.C. Complement activating agents in allergenic extracts // Inflamm. Res. 1997. - V. 46, № 11. - P. 455-460.

61. Bordet, Gengou. Ann. Inst. Pasteur. 1901. - V. 15. - P. 289.

62. Bourret E., Bardet L. A study of the single radial haemolysis optimization for complement haemolytic activity assay // Clin. Chim. Acta. -1980. Mar. 14. - V. 102, № l.-P. 1-9.

63. Bourret E., Bardet L., Fortune R. A simple hemolytic plate method for complement activity estimation // Pathol. Biol. (Paris). 1981. - V. 29, № 8. - P. 461-467.

64. Bowden D.W., Rising M., Akots G. et al. Homogeneous, liposome-based assay for total complement activity in serum // Clin. Chem. 1986. - V. 32, № 2. -P. 275-278.

65. Браун Э.Дж., Джойнер К.А., Фрэнк М.М. Комплемент // Иммунология /под ред. У. Пола/ М.: Мир, 1989. - Т. 3. - С. 89-118.

66. Cheung А.К. Adsorption of unactivated complement proteins by hemodialysis membranes // Amer. J. Kidney Dis. 1989. - V. 14, № 6. - P. 472-477.

67. Clark R.J., Tschida A.R., Markowitz H. Improved assay for total hemolytic complement //J. Clin. Lab. Immunol. 1985,-V. 18, №4. -P. 194-197.

68. De Waal R.M., Schrijver G., Bogman M.J. et al. An improved sensitive and simple microassay of mouse complement // Immunol. Methods. 1988. - Y. 108, № 2. -P. 213-221.

69. Doekes G., van Seggelen-van Zijp A.C., van Es L.A. et al. Binding and activation of human precursor CI by soluble aggregates of human and rabbit IgG // Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 1985. - V. 78, № 3. - P. 256-259.

70. Duhem C. et al. Side-effects of intravenous immune globulins // Clin. Exp. Immunol. -1994. V. 97, № l.-P. 79-83.107

71. Eckblad W.P., Hendrix K.M., Olson D.P. Total complement hemolytic activity of colostral whey and sera from dairy cows // Cornell. Vet. 1981. - V. 71, № 1. -P. 54-58.

72. Ellis S.T., Clancy R.L. A simple microtitration technique for quantitating total haemolytic complement levels // J. Immunol. Methods. -1978. V. 20. -P. 311-316.

73. Erhan S., Greller L.D. Do immunoglobulins have proteolytic activity? // Nature. 1974. - V. 251, № 5473. - P. 353-355.

74. European pharmacopoeia. European Treaty Series № 50. - 1994. - P. II.

75. Fong J.S., Renaud L. A hemolytic plate method for alternative-pathway complement activity assay // Clin. Pathol. 1978. - V. 69, № 2. - P. 156-160.

76. Frank M.M., Basta M., Fries L.F. The effects of intravenous immune globulin on complement-dependent immune damage of cells and tissues // Clin. Immunol. Immunopathol. 1992. - V. 62, № 1. - P. 82-86.

77. Freysdottir J., Ormarsdottir S., Sigfusson A. Evaluation of in vivo immune complex formation and complement activation in patients receiving intravenous streptokinase // Clin. Exp. Immunol. 1993. - V. 94, № 2. - P. 286-290.

78. Fujii H. Ham test, sugar-water test // Nippol. Rinsho. 1997. - V. 55, № 1. -P. 156-158.

79. Fukuoka Y., Seino J., Okuda T., Tachibana T. Development of a hemolytic assay for mouse complement components in sera and the variation of their levers with age // Tohoku. J. Exp. Med .- 1982. V. 137, № 1. - P. 79-90.

80. Gadd K.J., Reid K.B. The binding of complement component C3 to antibody-antigen aggregates after activation of the alternative pathway in human serum // Biochem. -1981.-V. 195, №2.-P. 471-480.

81. Gardi A. Quality control in the production of an immunoglobulin for intravenous use. Blut. 1984. - V. 48. - P. 337-344.108

82. Giclas P.С. Evaluation of complement activation tests and their application in studies of biomaterials in vivo and in vitro // BioMaterials Forum. 1996. - V. 18, № 2. -P. 14-15,26.

83. Goslings W.R., Prodeus A.P., Streilein J.W. et al. A small molecular weight factor in aqueous humor acts on Clq to prevent antibody-dependent complement activation // Invest. Ophthalmol. Vis Sci. 1998. - V. 39, № 6. - P. 989-995.

84. Gruinach A.S., Kirschfmk M. Complement and IgG subclasses in agammaglobulinemic patients // Exp. Clin. Immunogenet. 1995. - V. 12, № 1. - P. 10-15.

85. Habeeb A.F., Francis R.D. Preparation of human immunoglobulin free of plasmin and anticomplement activities // Vox. Sang. 1977. - V. 32, № 3. - P. 143-158.

86. Hofstaetter Т., Gronski P., Kanzy E.J. et al. S-sulfonation: a reversible chemical modification of human immunoglobulins permitting intravenous application. II. Effect on Fc-mediated effector functions // Vox. Sang. 1983. - V. 4, № 2. - P. 155-165.

87. Holmberg C.A., Ellingsworth L., Osburn B.I., Grant C.K. Measurement of hemolytic complement and the third component of complement in nonhuman primates // Lab Anim Sci. 1977. - V. 27, № 6. - P. 993-998.

88. Horgan C., Taylor R.P. Complement-component-C3-opsonised immunoglobulin G anti-DNA antibodies do not bing effectively to red blood cell unless aggregated on a high-Mr DNA matrix 11 Biochem. 1984. - V. 224, № 3. - P. 755-759.

89. Jaskowski T.D., Martins T.B., Litwin C.M., Hill H.R. Comparison of three different methods for measuring classical pathway complement activity //Clin. Diagn. Lab. Immunol. 1999. - V. 6, № 1. - P. 137-139.

90. Йегер JI. Клиническая иммунология и аллергология. М.: Медицина, 1986. - Т. 1. - С. 206-229.

91. Jones D.B., Goulding N.J., Casey C.R., Gallagher P.J. Clq binding and Raji immune complex assays: acomparison using detined immunoglobulin aggregates // J. Immunol. Methods. 1982. - V. 53, № 2. - P. 201-208.

92. Johnson K.W., Anderson A.C., Munson A.E., White K.L. In vivo and in vitro effects of sodium azide mouse complement // Toxicol. Appl. Pharmacol. -1984. V. 73, № 3. -P. 559-563.

93. Кэбот E., Мейер M. Экспериментальная иммунохимия. М.: Медицина, 1968. -684 с.109

94. Kazatchkine M.D. Mechanisms of action of intravenous immunoglobulin in immunemediated diseases. Intravenous immunoglobulin: research and therapy // Bath. UK. -1996,-P. 29-40.

95. Kaufmann Т., Kytzia H.J., Rittner C. Rapid and standardized quantitation of hemolytic activity of the fourth component of human complement // Complement Inflamm. 1990. - V. 7, № 4-6. - P. 282-289.

96. Kiernan M., O'Dwyer R., McCann S.R. The use of intravenous immunoglobulin (endobulin) in patients with immune trombocytopenia // J. Clin. Lab. Haematol. 1986. -V. 8, № l.-P. 21-26.

97. Kojima Т., Del Carpio C.A., Tajiri H. et al. Inhibition of complement-mediated immune hemolysis by peptides derived from the constant domaiin of immunoglobulin // Transplantation. 1999. - V. 67, № 4. - P. 637-638.

98. Kolb W.P., Kolb L.M., Podack E.R. Clq: isolation from human serum in high yield by affinity chromatography and development of a highly sensitive hemolytic assay // Immunology. 1979. - V. 122. - P. 2103-2111.

99. Kolde H.J., Deubel R. Development of a rapid kinetic assay for the function of the classical pathway of the complement system and for C2 and C4 // J. Clin. Lab. Immunol. 1986. -V. 21, №4. -P. 201-207.

100. Lachmann P.J. Complement // Intheantigens. 1979. V. 5. - 283-353.

101. Lee M.D., Wooley R.E., Brown J. et al. Composition of aquantitative microtiter method, a quantitative automated method, and the plate-count method for determining microbial complement resistance // Avian. Dis. 1991. - V. 35, № 4. -P. 892-896.

102. Lint T.F. Laboratory detection of complement activation and complement deficiencies // Med. Technol. 1982. - V. 48, № 9. - P. 743-748.

103. Liu C.C., Young J.D. A semi-automated microassay for complement activity // J Immunol. Methods. 1988. - V. 144, № 1-2. - P. 33-39.

104. Лобуи Дж.Л., Келтон Дж. Современная гематология и онкология. М.: Медицина, 1983. - С. 105-121.

105. ИЗ. Lundblad J.L., Mitra G., Sternberg M.M., Schroeder D.D. Comparative studies of impurities in intravenous immunoglobulin preparations // Rew. Infect. Dis. 1986. - V. 8, № 4. - P. 382-390.110

106. Mancini G., Vaerman J.P., Carbonara A.O., Heremans J.E. A singleradical diffusion method for the immunological quantitation of proteins // Protides of the biological fluide /Ed. H. Peeters/ Amsterdam, 1963/1964. - P. 370-373.

107. Masaki T., Okada N., Yasuda R., Okada H. Assay of complement activity in human serum using large unilamellar liposomes // J. Immunol. Methods. 1989. - V. 123, № 1. -P. 19-24.

108. Mateytschuk P., More J. Factors affecting the production of intravenous immunoglobulin // Biochem. Soc. Transactions. 1990. - V. 18, suppl. 2. - P. 310.

109. McCue J.P. Changes in therapeutic proteins caused by preparation techniques // Ann. Intern. Med. 1989. - V. Ill, №4. -P. 271-272.

110. McCue J.P., Hein R.H., Tenold R. Three generations of immunoglobulin G preparations for clinical use // Rev. Infect. Dis. 1986. - V. 8, № 4. - P. 374-381.

111. Miekka S.I., Gozze I. Anticomplementary activity of human immunoglobulin G. I. Mechanism of the artifactual increase in anticomplementary activity of IgG during the assay//Vox. Sang. 1975.-V. 29, №2.-P. 101-123.

112. Mondino B.J., Zaidman G.W. Hemolytic complement in tears // Ophthalmic. Res. -1983. V. 15, №4.-P. 208-211.

113. Mondino B.J., Brady K.J. Distribution of hemolytic complement in the normal cornea //Arch. Ophthalmol. 1981.-V. 99, №8.-P. 1430-1433.

114. Montanari V. et al. Early decrease in total hemolytic complement activity (CHI00) after lasting or intestinal bypass in the rat // Eur. Surg. Res. 1986. - V. 18, № 1. -P. 36-40.

115. Mori H., Sakamoto O., Xu Q.A., Daikoku M., Koda A. Solid phase enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for anti-sheep erythrocyte antibody in mouse serum // J. Immunopharmacol. 1989. - V. 11, № 6. - P. 597-606.

116. Morrison L.J., Behan P.O., Behan W.M. Assay of complement activation in mouse serum by ELISA//J. Immunol. Methods.- 1990.-V. 126,№2.-P. 191-197.1.l

117. Narchi G., Milani S., Tedesco F. A computerized microassay for complement hemolytic activity using an automated spectrophotometer // Ric. Clin. Lab. 1987. -V. 17, № l.-P. 27-33.

118. Newell S., Gorman J.C., Bell E., Atkinson J.P. Hemolytic and antigenic measurements of complement // Lab. Clin. Med. 1982. - V. 100, № 3. - P. 437-444.

119. Newland A.C. The use and mechanisms of action of intravenous immunoglobulin: an update // Brit. J. Hematol. 1989. - V. 72, № 3. - P. 301-305.

120. Nielsen K., Rosenbaum B., Ballinger R., Stiller J. Effects of various treatments of bovine complement on its lytic efficacy measured by two different tests // Vet. Immunol. Immunopathol. 1984. - V. 6, № 3-4. - P. 273-283.

121. Nielsen K., Rosenbaum B., Harper S., Adams L.G., Williams J.D. Failure of bovine complement levels measured by radial hemolysis to correlate with tube titration // J. Vet. Res. 1983.-V. 44, № 10.-P. 1935-1937.

122. Nilsson U.R., Nilsson B. Simplified assays of hemolytic activity of classical and alternative complement pathways // J. Immunol. Methods. 1984. - V. 72, № 1. -P. 49-59.

123. Nydegger U.E., Lambert P.H ., Miescher P.A. Estimation du complement hemolytique aves l'autonanalyseur // Path.-Biol. V. 21, № 9. P. 1037-1042.

124. Ong G.L., Shah P.B., Mattes M.J. Rabbit complement lysis tumor cells without massive C3 deposition // Immunol. Invest. 1996. - V. 25, № 3. - P. 215-229.

125. Parver Z., Moncada R. Complement abnormalities during contrast media procedures // Int. J. Immunopharmacol. 1985. -V. 7, № 1. - P. 123-127.

126. Peakman M., Lobo-Yeo A., Senaldi G., Nilsson M., Tee D.E., Vergani D. Quantification of C3d in biological fluids by an enzymelinked immunosorbent assay // Immunol. Methods. 1987.-V. 104, № 1-2. - P. 51-56.

127. Perelson A.S., Segel L.A. A singular pertirbation approach to diffusion reaction equations containing a point source, with application to the hemolytic plaque assay // Math. Biol. 1978. - V. 6, № 1. - P. 75-85.

128. Peterman G.M., Wust C.J. Comparison of three hemolytic plaque assays using sheep and mouse erythrocytes as antigens in rats // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1975. - V. 150, № 2. - P. 289-294.

129. Platts-Mills Т., Ishizaca K. Activation of the alternative pathway of human complement by rabbit cells // Immunology. 1974. V. 113, № 1. - P. 348-358.

130. Plebani A., Notarangelo L.D., Duse M., Avanzini A., Massa M., Ugazio A.G. Serum IgG levels and complement activity in hypogammaglobulinaemic patients under substitution therapy // Clin. Exp. Immunol. 1984. - V. 58, № 1. - P. 193-198.

131. Ploug M., Jessen Т.Е., Welinder K.G., Barkholt V. Hemolytic plate assay for quantification of active human complement component C3 using methylamine-treated plasma as complement source // Anal. Biochem. 1985. - V. 146, № 2. -P. 411-417.

132. Pocecco M., De Campo C., Cantoni L., Tedesco F., Panizon F. Effect of high doses intravenous IgG in newly diagnosed diabetic children // Helv. Paediat. Acta. 1987. -V. 42, №4. - P. 289-295.

133. Poutrel В., Caffln J.P. A sensitive microassay for the determination of hemolytic complement activity in bovine milk // Vet. Immunol. Immunopathol. 1983. - V. 5, № 2. -P. 177-184.

134. Радди Ш. Функции регуляторных белков при классическом и альтернативном путях активации комплемента // Последние достижения в клинической иммунологии / под ред. Томпсона Р.А. / М.: Медицина, 1983. - С. 129-158.

135. Raghava G.P., Goel A., Singh A.M., Varshney G.C. A simple microassay for computing the hemolytic potency of drugs // Biotechniques. 1994. - V. 17, № 6. -P.1148-1153.

136. Ramasamy I., Tran E., Farrugia A. Measurement of anticomplementary activity in therapeutic intravenous immunoglobulin preparations // Biological. 1997. - V. 25, № 1. - P. 87-92.113

137. Ranken R., Linscott W.D. A sensitive hemolitie assay for mouse C3 // J. Immunol. Methods. 1979. - V. 26, № 3. - P. 283-290.

138. Reis K.J. A hemolytic assay for the measurement of equine complement // Vet. Immunol. Immunopathol. 1989. - V. 23, № 2. - P. 129-137.

139. Richard S., Schwartz M.D. Overview of the biochemistry and safety of a new native intravenous gamma globulin, IGIV, pH 4,25 // Amer. J. Med. 1987. - V. 83, № 4A -P. 47.

140. Rommel F.A., Bendure D.W.,Kalter S.S. Hemolytic complement in nonhuman primates // Lab. Anim. Sci. 1980. - V. 30, № 6. - P. 1026-1029.

141. Ross M., England D., Webb H., Hoover E.L. Effects of plasmapheresis and autotransfusion on complement recovery in dogs // J. Surg. Res. 1990. - V. 49, № 1. -P. 30-33.

142. Rossi Devivo M.L. Romano E.L., Suarez G., Rodriguez M., Blasini A.M., Soyano A. Evaluation of complement activity by an enzyme immunoassay // Arch. Allergy Immunol. 1993. - V. 101, № 3. - P. 234-239.

143. Rousell R.H., Budinger M.D., Keppler D.C., Victor R., Minaga T. Anticomplementary activity and the safety of intravenous immunoglobulin // Clin. Ther. 1989. -V. 11,№ 1. - P. 143-150.

144. Russell M.W., Reinholdt J., Kilian M. Anti-inflammatory activity of human IgA antibodies and their Fab alpha fragments: inhibition of IgG-mediated complement activation // Eur. J. Immunol. 1989. -V. 19, № 12. - P. 2243-2249.

145. Saddler J.N., Wardlaw A.C. Superiority of human complement for assaying bacterial lipopolysaccharides by their anticomplementary activity // Experientia. .1978. - V. 34, №9.-P. 1227-1228.

146. Scheiermann N., Kuwert E.K. Studies on human immunoglobulin preparations: II. Purity and composition // Med Klin. 1979. - .V. 74, № 21. - P. 825-829.

147. Schneider W., Wolter D. Process of improving the compatibility of gamma globulins // US 4,126,605, Plasmesco AG. Nov 21, 1978.114

148. Sedlacek H.H., Gronski.P, Hofstaetter T., Kanzy E.J., Schorlemmer H.U., Seiler F.R. The biological properties of immunoglobulin G and its split products F(ab)2 and Fab. // Klin. Wochenschr. 1983. - V. 61, № 13. - P. 723-736.

149. Seiler F.R., Peukert A., Kanzy E.J. Comparison of several in vitro assay methods for the quantitative determination of complement consumption ('binding') by gammaglobulin preparations // Dev. Biol. Stand. 1979. - V. 44. - P. 153-163.

150. Sgouris J. T. The preparation of plasmin treated immune serum globulin for intravenous use // Vox. Sang. 1967. - V. 13, № 1. - P. 71-84.

151. Shoham-Kessary H., Naot Y., Gershon H. Immune complex-like moieties in immunoglobulin for intravenous use bind complement and enhance phagocytosis of human erythrocytes // Clin. Exp. Immunol. 1998. - V. 113, № 1. - P. 77-84.

152. Skeeles J.K., Lukert P.D., DeBuysscher E.V. A rapid and simplified technique for the assay of chicken hemolytic complement // J. Vet. Res. 1979. - V. 40, № 3. -P. 443-445.

153. Skvaril F. The question of specificity in binding human IgG subclasses to protein A-sepharose // Immunochemistry. 1976. - V. 13, № 10. - P. 871-872.

154. Soler-Rodriguez A.M., Romano E., Aranguren Y., Soyano A. A new hemolytic assay for bovine serum complement and its application during experimental bovine anaplasmosis // Vet. Immunol. Immunopathol. 1990. - V. 24, № 4. - P. 347-360.

155. Souda N., Fujioka T., Kondou Y., Bara S., Hiwatashi S., Sibayama A., Katori S., Warabi H. Studies on the conditions of blood sampling and storage for the liposome-basedCH50 assay//Rinsho Byory. 1998.-V. 46, № 10.-P. 1049-1055.

156. Stephan W., Dichtelmuller H. 3ß-Propiolacton als sterilisierendes Agenc bei der Herstellung eines intravenösen Immunoglobulin-Praparates // Arzneim.-Forsch. 1983. -V. 33(11), №9,-P. 230-231.

157. Stefanovic J., Starsia Z., Murgasova I., Absolonova O. In vitro effects of organic solvents on immunity indicators in serum // J. Hyg. Epidemiol. Microbiol. Immunol. -1987.-V. 31, № l.-P. 1-7.115

158. Stefanski V, Ruppel H.G. A nev quantitative assay for the determination of complement activity // Immunol. Lett. 1991. - V. 30, № 1. - P. 1-5.

159. Tanaka S., Suzuki Т., Nishoka K. Assay of classical and alternative pathway activities of murine complement using antibody-sensitized rabbit erythrocytes // J. Immunol. Methods. 1986. - V. 86, № 2. - P. 161-170.

160. Tao M.H., Smith R.I., Morrison S.L. Structural features of human immunoglobulin G that determine isotype-specific differences in complement activation // J .Exp. Med. -1996.-V. 183. P. 2343-2348.

161. Tatsu Y., Yoshikawa S. Homogeneous chemiluminescent immunoassay based on complement-mediated hemolysis of red blood cells // Hematology. 1988. - V. 25, № 2. -P. 140-158.

162. Tomlinson S., Nussenzweig V. Human alternative complement pathway-mediated lysis of rabbit erythrocytes is enhanced by natural anti-Galalphal-3Gal antibodies // J. Immunol 1997.-V. 159, № 11.-P. 5606-5609.

163. Tenold R.A. Intravenously injectable immune serum globulin // US 4,499,073, Cutter Laboratories. Feb. 12, 1985.

164. Тиц Н.У. и др. Энциклопедия клинических лабораторных тестов. М.: Лабинформ, 1997. - С. 252-271.

165. Torma Е., Suomela Н., Hamalainen Е. Microtiter plate assay for measuring the anticomplementary activity of immunoglobulins // Immunol. Methods. 1993. - V. 164, № l.-P. 101-107.

166. Uemura Y. Dissociation of aggregation IgG and denaturation of monomeric IgG by acid treatment Tohoki J. Exp. Med. - 1986, № 141. - P. 337.

167. Uemura Y., Goto Т., Капо Y., Funakoshi S. Process for preparing immunoglobulin suitable for intravenous injection // US 4,371,520, The Green Cross Corporation. Feb.l, 1983.

168. Yamamoto S., Kubotsu K., Kida M., Kondo K., Matsuura S., Uchiyama S., Yonekawa О., Kanno T. Automated homogeneous liposome-based assay system for total complement activity // Clin. Chem. 1995. - V. 41, № 4. - P. 586-590.

169. Young J.D., Leong L.G., Di Nome M.A., Cohn Z.A. A semiautomated hemolysis microassay for membrane lytic proteins // Anal. Biochem. 1986. - V. 154, № 2. -P. 649-654.116

170. Van Dam A.P., Hack C.E. Formation of C3-IgG complexes in serum by aggregated IgG and by non-immunoglobulin activators of complement // Immunology. 1987. -V.61,№2.-P. 105-110.

171. Van Dijk H., Rademaker P.M., Willers J.M. Estimation of classical pathway of mouse complement activity by use of sensitized rabbit erythrocytes // J. Immunol. Methods. 1980. -V. 39, № 3. - P. 257-268.

172. Wadsworth C., Hanson L.A., Kjellman H., Soderstrom T., Blomback M. Some characteristics of aggregates of IgG and plasma proteins in heat-treated factor VIII concentrates//Blut. 1989.-V. 58, № 3.-P. 133-141.

173. Wagner E., Piatt J.L., Frank M.M. High dose intravenous immunoglobulin does not affect complement-bacteria interations // J. Immunol. 1998. - V. 160. -P. 1936-1943.

174. Wahn V. Intravenous gamma globulin therapy. Measurement of circulating immune complexes and complement factors // Fortsch. Med. 1984. - V. 103, № 31-32. -P. 795-798.

175. Watkins J. The practical assessment of complement involvement in anaphylactoid reactions // Ann. Fr. Anesth. Reanim. 1982. - V. 1, № 3. - P. 279-284.

176. Weiser M.R., Williams J.P., Moore F.D., Kobzik J.L., Ma M.,Hechtman H.B., Carroll M.C. Reperfusion injury of ischemic skeletal muscle is mediated by natural antibody and complement // J. Exp. Med. 1994. -V. 180, № 3. - P. 1087-1096.

177. Weisman L.E., Fisher G.W., Marinelli H., Hemming V.G., Pierce J.R., Golden S.M., Peck C.C. Pharmacokinetics of intravenous immunoglobulin in neonates // Vox. Sang. -1989.-V. 57, №4.-P. 243-248.

178. White K.L., Anderson A.C. Measurement of modulation of mouse complement levels in vivo, utilising a microtiter hemolytic assay // Agents. Actions. 1984. - V. 15, № 5-6. -P. 562-568.

179. Wieme R.J. et al. Genetically determined electrophoretic variant of the human component C'3 // Nature. 1967. - V. 214, № 92. - P. 1042-1043.

180. Zlatnik V.I., Rumbesht L.M., Petrik L.M. Determination of complement in an automatic mode // Lab. Delo. 1990. - V. 11. - P. 67-68.

181. Zolton R.P., Nasser J.A. Histidine stabilized immunoglobulin and method of preparation // US 4,597,966, Ortho Diagnostic Systems. Jul.l, 1986.117

182. Zwirner J., Wittig A., Kremmer E., Gutze O. A novel ELISA for the evalution of the classical rathway of complement // J. Immunol. Methods. 1998. - V. 211, № 1-2. -P. 183-190.