Клонирование провирусов ретровирусов С-типа мышей и создание на их основе векторов экспрессии генов в клетках про- и эукариот тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Незнамов, Н.С.

• Незнамов, Н.С.
• кандидат биологических наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Незнамов, Н.С.

I.BB№ME 1^!'3

II. ОБЗОР ЛИТЕРАРУРЫ №

ГЛАВА

I. Характеристика генома и биологические особенности ретро вирусов 1^ -30 а) Структура генома ретровирусов. б) Обратная транскрипция и образование кДНК. 3 в) Интеграция кДНК. г) Структура и функции XIDR 10 -16 д) Усиливающие транскрипцию последовательности в XTR ретровирусов. 6 -20 е) Структурные участки генома, необходимые для самосборки и репликации. -22 ж) Биологические свойства ретровирусов. 2 8 з) Регуляция экспрессии ретровирусов общеклеточными механизмами -30 и) Общие черты ретровирусов и мобильных генетических элементов

ГЛАВА

II. Векторные молекулы, полученные на основе геномов ретровирусов

ГЛАВА

III. Использование других моделей для получения векторов эукариот. 9 0

III.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. ,

1) Используемые вирусы и ферменты

2) Выделение высокомолекулярной ДНК из клеток C-I

3) Получение s РНК из препаратов

4) Получение и очистка кДНК RLV . .44 . . и

5) Аиплификация фагов

6) Конструирование библиотеки генов

7) Скрининг библиотеки генов

8) Реклонирование в плазиидные векторы

9) Анализ ДНК методом электрофореза в геле блоттинг-гибридизации по Саузерну

10) Ввделение ЕсоЖ рестриктазы

11) Ник-трансляция

12) Ввделение плазмидной ДНК

13) Элюция ДНК из агарозного геля

14) Ввделение ДНК из фагов по Блатнеру

15) •'Дот"-гибридизация фаговых клонов

16) Радиоиммунопреципитационный анализ белков

17) Определение нуклеотидной последовательности ДНК

1у РЕЗУЛЬТАТЫ. I ) Получение на фаге Харон 4А библиотеки генов эритролейкозных клеток мышей линии AKSi, з а ражённых RL

2) Скрининг библиотеки

3) Рестрикционный анализ полученных клонов

4) Анализ плазмидных клонов, содержащих провирусные последовательности

5) Получение вектора-экспресси эукариот на основе провируса из плазмиды 147.2 -

6) Характеристика нровируса экзогенного происхоадения на основ из генома клеток C-I

7) Создание вектора экспрессии на основе провируса из клона

8 ) Определение нуклеотвдной последовательности ДНК из клона 4 3 7 V ОБСУЖДЕНИЕ

1) Характеристика клонов, содержащий провирусн MuLV

2) Вектор экспрессии эукариот на основе эндогенного провируса из клона

3) Характеристика провируса экзогенного происхозздения. ,

4) Прошторные функции LTR провируса из клона

3) Вектор экспрессии на основе провируса из клона

6) Нуклеотидная последовательность фрагмента ДНК из з'части генома провируса клона 107.4 III-112

VI. ВЫВОДЫ. 113

VII. СПИСОК ЛИТЕРАТИРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клонирование провирусов ретровирусов С-типа мышей и создание на их основе векторов экспрессии генов в клетках про- и эукариот»

Развитие молекулярной биологии, генетической инженерии,..а также такР1х отраслей народного хозяйства, как биотехнология, фармацевтическая и медицинская промышленности требуьзт получения различных векторных молекул, которые позволяли бы исследовать и использовать экспрессию генетического материала, как про- так и эукариот. В настоящее время создан целый ряд векторных молекул для E.coli ( на основе геномов плазмид и фагов), а также для целого ряда других микроорганизмов. Однако, такая же задача стоит , и для решения целого ряда проблем молекулярной биологии эукариот.Удобными моделями для получения векторов эукариот являются различные вирусы животных как ДНК, так и РНК содержащие. Для этой цели пытаются использовать геномы аденовирусов, вирусов группы Панова, вирус герпеса, а также ретровирусы [49] . Использование геномов этих вирусов для создания эукариотических векторов ( далее везде в диссертации под эукариотпческими векторами бз^ дут подразумеваться векторы для клеток млекопитающих и птиц, так как описываемые векторы, видимо, непригодны для клеток низжих эукариот, а также для растений, хотя, возможно, они могут быть функциональны и в беспозвоночных ) , удобно в том плане, что геномы этих вирусов хорошо изучены, известны их генетические и физические карты. Экспрессия этих вирусов в пермиссивных условиях очень интенсивна и превышает экспрессию основной массы клеточных генов, транскрибируемых РНК полимеразой II.Первые опыты по получению таких векторов были проведены с использованием, геномов вирусов группы папова, в частности SV-40 и полиомы 1^57,lOSj . Геном этих вирусов содержит различные регуляторные,последовательности как для транскрипции, так и для репликации. В целом ряде работ была достигнута экспрессия чужеродного генетинского материала с промоторных последовательностей этих ,- 2 - , вирусов [l06,II0j . Однако, векторы на основе геномов этих вирусов эбладают следующими двумя основными недостатками: а) они имеют, очень яаленькую"ёмкость" - при введении чужеродной ДНК больше 2,5 т.п.н. нельзя получить инфекционный вирус, хотя величина вводимого фрагмента не влияет на способность экспрессировать её с промоторов вируса, и б) папова вирусы имеют ограниченный круг хозяев.Ретровирусы сарком и острых лейкозов птиц и млекопитающих при ., длительном исследовании оказались естественными векторами эукариот, поскольку они способны переносить генетический материал клеточного происхо"£дения [201 . Известно более 10 различных клеточных трансформирующих последовательностей, которые стали стабильной частью вирусного генома и способствовали образованию высокопатогенных ретровирусов, индуцирурщих неопластическую трансформацию с коротким латентным периодом Г2бТ . В результате рекомбинации происходит утрата части внутренних рровирусных.-последовательностей и встраивание в эт5? область клеточного генетическоро материала.Удобным является и то, что при инфекции ретровирусами кДНК всегда встраивается вгеном клетки-реципиента, причём,.интеграция происходит сайт-специфично относительно генома вируса. Ёмкость генома позволяет вводить до 7 ш.н.н. фрагменты чужеродной дак и при этом сохраняется способность упаковывать её в вирусные частицы. Ретровирусы имеют широкий круг хозяев, что также важно для использования их в качестве вектора. Наконец, свойства эукариотического вектора, сконструированного на основе ретровируса, определяются особенностями структуры длинных концевых повторов ( ЬТЕ ). Исследование нуклеотидных последовательностей провирусов различных ретровирусов показало, что в LTR расположены регуляторные области, ответственные за инициацию транскрипции, терминацию и полиаденилирование синтезируемых D О — молекул РНК. При условии наличия открытой рамки считывания экспрессия клеточных последовательностей монет начинаться с вирусного промотора, локализрванного в области ы н , и приводить к образованию полноценного белкового продукта. Видимо, удобнее использовать ЬТЕ из экзогенных ретровирусов, так как они эффективнее в качестве промоторов ьТЕ из эндогенных ретровирусов [29] .Б настоящей работе в качестве основы для получения вектора для эукариотических организмов использован провирус одного из компонентов вируса лейкоза Раушера ( ELV ). Как показали резз^льтаты опытов, Ш Е из клонированного провируса несут промоторные последовательности как для эу-, так и для прокариот. Это их свойство позволило получить векторы, позволяющие экспрессировать клонированные гены непосредственно в E.coli , что значительно проще, чем в клетках эукариот.ОБЗОР ЛИТЕРЛТ^.ФЫ

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Незнамов, Н.С.

выводы

1) На Хароне 4А получена библиотека генов эритролейкозных клеток мыши линии AKR . в библиотеке с 90$ вероятностью присутствует любая уникальная последователвность генома, имеющая при EcoRl рестрикции размеры не больше 20 т.п.н.

2) Из вышеупомянутой библиотеки генов изолированы провирусы эндогенных ксенотропных MuLV III класса. Все выделенные провирусы дефектны. Некоторые из них содержат последовательности LTR (одну или две).

3) На основе одного из провирусов эндогенных ксенотропных MuLV III класса ( клон 147) создана рекомбинантная плазми-да, содержащая две последовательности LTE , которая может быть использована для экспрессии генов в эукариотических организмах.

4) Проклонирован провирус экзогенного MuLV ( клон 107), который является одним из компонентов blv . Построена рест-рикционная карта этого провируса. Выявлены последовательности, содержащие LTE этого провируса.

5) Определена нуклеотидная последовательность фрагмента ДНК из 31 части генома провируса из клона 107, практически полностью совпадающая с нуклеотидной последовательностью из гена gp 55 SFFV Френд, что позволяет однозначно охарактеризовать провирус из клона 107 как sffv компонент elv .

6) Показано, что ьтн провируса из клоаа 107 может быть использован в качестве промотора как в клетках эукариот, так и в клетках, прокариот.

7) На основе провируса из клона 107 получен ряд плазмид, которые могут быть использованы для экспресси генов в эукариоти

- 114 -ческих организмах.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Незнамов, Н.С., 1984 год

1. Георгиев Г.П., Ильин Ю.В., Рысков А.П., Крамеров Д.А., "Мобильные диспергированные генетические элементы эукариот и их возможное отношение к канцерогенезу.", Генетика, 1981, 17, 222-232.

2. Колобков С.Л., Комиссарова Е.В., Крюкова И.Н., "Выделение и свойства нового дефектного вируса из клеток эритролейкоза, индуцированного у мышей линии АКа вирусом Раушера.",

3. Экспер. онкология, 1981, б, 6-12.

4. Незнанов Н.С., Колобков С.Л., Домнинский Д.А., Гринёва Н.И., Газарян К.Г., Доклады Акад. Наук СССР, "Клонирование и характеристика провирусов С-типа из мышиных эритролейкозных клеток.", Докл. Акад. Наук СССР, 1983, 268» 1478-1480.

5. Amanuma Н., Katori A., Obata М., Sagata П., Ikawa Y., "Complete nucleotide sequenoes of the gene for the specific glycoprotein (gp55) of Friend spleen focus-forming virus." Proc. nat, aoad. science, 1983, Щ, 3913-3917.

6. Banergi J., Rusconi S., Schaffner W., "Expression of a globin gene is enhanced by remote SV-40 3MTA.89qu£nces,", Cell, 1981, 2?. 729-740.

7. Banerji J., Olson Ь,, Schaffner W.," A lymfocyte-specific cellular enhanoer is located downstream of the joining region in immunoglobulin heavy chain genes.", Cell, 1983, 2Д, 729-740.

8. Bentley Ю.1., Babbitts Т.Н., "Human immunoglobulin variable region genesi ША sequences of the two V genes and a pseudogene.", Nature, 1980, 288, 730-733.- 116

9. Benton W.D., Davis B.W., "Screening gt recombinant clones by hybridization to single plaques in situ.", Science, 1977, 180-182.

10. Benz B.W., Wydro E.M., Nadal-Ginard B., Dina D.,"Moloney murine sarcoma proviral DNA is a transcriptional unit.", Nature, 1980, 288. 665-669.

11. Birnboim H.C., Doly J.,"A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA." Nucl. Acid. Bes., 1979, 1, 1513-1523.

12. Blair D.G., Oscarsson M., Wood T.D., Mc Clements W.L., Fi-shinger D.J., Van de Woude G.G.,"Activation of the transforming potential of a normal oell sequence: molecular model for oncogenesis." Science, 1981, £1£, 941-943.

13. Blattner P.E., Blehl A.B., Denniston-Thompson K., Faber H.E., Bichards J.E., Slightom J.L., Tucker P.W., Smithies 0.,"Cloning human fetal globin and mouse -type globin DNA preparationand screening of shotgun collection,", Soience, 1978, 202. 1279-1284.

14. Boone I.E., Hyer P.E., Yang D.H., Kiggans J.O., Koh C., Tennant B.W., Yang W.K. »"Analysis of recombinant DNA olones of the endogenous BALB/c murine leukemia virus WN 1802N: variation in long terminal repeat lenght." J. virol., 1983, 484-488.

15. Buckler C.E., Hoggan M.D., Chan H.W., Sears J.P., Khan A.S., Moore J.L., Hartley J.W., Eowe W.P., Martin M.A., "Cloning and characterization of the envelop-speoific probe from xenotropic murine leukemia pro viral DNA.", J. Virol., 1982, 41., 228-236.

16. Callahan E., Benveniste B;E., lieber M.M., Todaro G.L., "Nucleic acid homology of murine type-C viral genomes^, J. virol.,1974, l£, 1394-1403. •

17. Collahan B., Eowe W,P., Lieber M.M., Todaro G.J.»"Nucleic acid homology of murine xenotropic type-C viruses.", J. virol.,1975, 1378-1384.

18. Capecchi M.R., "High efficincy transformation hy direct microinjection of MA into cultured mammalian cells,", Cell, 1980, 479-488.

19. Chang E.H., Purth M.E., Scolnick E.M., Lowy D.R., "Tumorogenic transformation of mammalian cells induced "by a normal human gene homologous to the oncogene of Harvey murine sarcoma virus1.', Nature, 1982, £22, 479-483.

20. Chang E.H., Gonda M.A., Ellis R.W., Scolnick B.M., Lowy D.R., "Human genome contains four genes homologous to transforming genes of Harvey and Kirsten murine sarcoma viruses.", Proc. nat. acad. science, 1982, 4848-4852.

21. Chattopadhyay S.K., lander M.R., Gupta S., Rands E., Lowy D.,

22. Origin of mink cytopathic focus-forming (MCF) viruses: comparison with ecotropic and xenotropiur murine leukemia virus genomes.", Virol., 1981, 113. 465-483.

23. Qhattopadhyay S.K., lander M.R., Rands E., Lowy 33.R., "Structure of endogenous murine leukemia virus MA in mouse genome."i Proc. nat. acad. science, 1980, 5774-5778.

24. Cattopadhyay S.K., Lowy D.R., Teich A.S., Levine A.S., Rowe W.P., "Qualitative and quantitative studies of the AKR-type murine leukemia virus sequences in mouse MA.",

25. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1974, 22., 1085-1101.

26. CiBffin J.M. » "Struoture, replication and recombination of retroviruses genomes: some unifying hypotheses.",

27. J.gen. virol., 1979, 42, 1-26.

28. Coffin J.!., Varmus H.E., Bishop J.M., Essex M., Harding W.D.,

29. Martin G.S., Rosenberg N.E., Scolnick E.M., Weinberg R.A., Yost P.K., "Proposal for namibg host cell-derived inserts in retrovirus! genomes.", J. virol., 1981, iQ,, 953-957.

30. Collins J., Hohn B., "Cosmids: a type of plasmid gene-oloning vector that is packageable in vitro in bacteriophage heads.", Proc. natl. acad, sc., 1978, 15» 4242-4246.

31. Cullen B.R., Kopchick J.J., Stacey D.W., "Effct of intron size on the splicing efficiency in retroviral transcripts.", Nuol. acids res., 1982, 6177-6190.

32. Cullen B.R., Scaloa A.M., Ju G., Endogenous avian retroviruses contain deficient promoter and leader sequences.'", Proc. natl. acad. sc., 1983, §£, 2946-2950.

33. Czernilofsky A.P., Deliorfe P.W., Swanstrom R., Yarraus H.E., Bishop J.M., Tischer E., G-oodman H.M., "The nucleotide sequence of an untranslated but conserved domain at the 3 end of the avian sarooma virus genome.", Nucl. acids res., 1980, 2967-2984.

34. Dalla Pavera, Gelman E.P., Gallo R.C., Wong-Staal P., "A human one gene homologous to the transforming gene ( v-sis) of simian sarcoma virus.", Nature, 1981, 292. 31-35.

35. Denison R.A., Weiner A.M., "Human U1 ENA pseudogenes may be generated by both MA- and ENA-mediated mecanisms.", Mol. and Cell. Biol., 1982,2, 815-828.

36. Thar R., Mc Clements W.L., Enquist L.W., Vande-Woode G.F., "Nucleotide sequences of integrated Moloney sarcoma virus long terminal repeats add their host and viral ¿junction.", Proo. Natl. Acad. Sc., 1980, XX» 3937-3941.

37. Diokson C., Peters G., "Protein coding potential of mouse mammary tumor virus genome RNA as examined by in vitro translation.", J. Virol., 1981, 21, 36-47.

38. Dickson C., Smith R., Peters G., "In vitro syntesis of poli-peptide, encoded by the long terminal"region of mouse mammary tumour virus DNA.", Nature, 1981, 2£1,, 511-513.

39. Doehmer J., Barinaga M., Vale W,, Rosenfeld M.G., Verma J.M., Ivans R.M., "Introduction of rat growth gormone gene into mouse fibroblasts via a retroviral DNA vector: expression and regulation.", Prod. Natl. Acad. So., 1982,2268-2272.

40. Donehower I.A., Huang H.I., Hager G.L., "Regulatory and coding potential of the mouse mammary tumour virus.l9ng terminal redundancy.", J. Virol., 1981, 21» 226-238.

41. DretzenG., Bellard M., Chambon P.,"A reliable method for the reoovery of DNA fragments from agarose and aorylamide gels.",

42. Analit. Biochem., 1981, 112. 295-298.

43. Dvyfe G., Leis J., Longiaru M., Scalca A.M., "Selective cleavag in the avian retroviral long terminal repeat sequence by theforme of avian reverse transcriptase.", Proc. Natl. Acad. Sc., 1983, 80, 6745-6749.

44. Eiden J.J., Bolognesi D.P., Langlous A.J., Nicols J.I., "The initial nucleotide sequence of jjsa transcribed from avian myeloblastosis virus 70S RNA by EN A-dependent MA polymerase.",1. Virol., 1975, 6£,163. 172 .

45. Elder J.H., Gautsch J.M., Jensen P.O., Lemer R.A., Chused T, Morse H.O., Hartley J.¥., Rowe W.P., "Differential expressionof the two distinct xenotropic virus in HZB mice.",

46. Clin. Imm. Immunopath., 1980,1^,493-501.

47. Emerman M., Bandyopadhya p., Pangiban A., Tarpley G., Watanabe S., Temin H,M.»"Infectious retrovirus vectors that express foreign UNA.", Cold Spring Harb. Symp., N Y , 1983.

48. Puhrman S.A., Beveren C.V., Verma I.M.»"Identification of the ENApolimerase 11 initiation site in the long terminal repeat of Moloney murine leukemia viral DHA#", Proc. Natl. Acad. Sc., 1981, 18, 5411-5415.

49. Gilboa E., Zolbe M., Noonan K., Kucherlapati E., "Construction of the mammalian transducing vector from the genome of Moloney marine leukemia virus.", J. Virol., 1982, 44, 845-851.

50. Gilboa E., Mitra S.W., Goff S., Baltimore D., "A detailed model of reverse transcription and tests of crucial aspects.", Cell, 1979, 93-100.

51. Gilboa E., Park J., Kolbe M., Hwang S., Kucherlapati E., Hoonan K., Preeman H., "Transduction and expression of nonselectable genes using retrovirus-derived vectors.", in Eukariotic viral vectors, CSH,HY, 1981, 145-151.

52. Gillies S.D., Morrison S.I.V A tissue-specific transcription enchancer element is located in the ma^or intron of the rearranged immunoglobulin heavy chain gene.", Cell, 1983, 21* 717-728.

53. Glusman G.M., Eukariotic viral vectors, CSH, NY, 1981.

54. Goff S.P., Gilboa E., Wite O.N., Baltimore D., "Structure of the Abelson murine leukemia virus genome and the homologous cellular gene: studies with cloned viral UNA.", Cell, 1980, 22, 777-787. .

55. Goldberg D.A., Posacony J.W., Maniatis T., "Corrected developmental expression of.a cloned alcohol dehydrogenase gene trans-ducked into the Drosophila germ line.", Cell, 1983, 34, 59-73.

56. Green N., Hiai H., Elder J.H., Schwartz R.S., Khiroya R.H., Thomas C.Y., Tsichiis P.N., Coffin J.M., "Egression of leukemo-genic recombinant viruses associated with a reoessive gene in

57. HRS/J mice.», j. Exp. Med., 1980,152. 249-264.

58. Grimaldi G., Singer M.F., "A monkey Alu sequence is flanked by 13 base pair direct repeats of an interrupted satellite 35NA sequence.", Proc. Natl. Acad. Sc.,1982, £2.» 1497-1500.

59. Grosveld G.C., Koster A., Flavell R.A.,"A transcription map for the rabbit globin gene.", Cell, 1981, 22, 573-584.

60. Grunstein M. Hogness B.S., "Colony hibridization: a method for the isolation of cloned DNAs that contain a specific gene.", Proc. Natl. Aoad. Sc., 1975, £2, 3691-3695.

61. Gruss P., Khoury G., "Expression of simian virus 40 rat pre-proinsulin recombinants in monkey kidney cells: use of preproin-sulin UNA processing signals.", Proc. Natl. Aoad.§©., 1981, 78. 133-137.

62. Guntaka R.V., Mitsialis S.A., "Cloning of avian tumour virus DNA fragments in plasmid pBE322i evidence for efficient transcription in E.coli from a virus coding promoter.", Gene, 1980, 12 « 113-121.

63. Guntaka E.V., Eao P.I., Katz A., Mitsialis S.A., "Binding of E.coli SNA polimBrase'to a specific site located near the3 end of the avian sarcoma virus genome.", Bioch. Bioph. Acta, 1980, 602, 457-469.

64. Habara A., Eeddy E.P., Aaronson S.A., " Rauscher murine leukemia virus: molecular oloning of ifectious integrated proviral MA.", J. Virol., 1982, 44, 731-735.

65. Hackett P.B., Varmus H.E., Bishop J.M.,"Ihe genesis of Rous sarcoma virus messenger ENA.", Virol., 1981, 112, 714-728.

66. Hager G.L., Huang A.L., Bassin E.H., Ostrowski M.C., "Analysis of glucocorticoid regulation by linkage of the mouse mammary tumour virus promoter to a viral oncogene.", in "Eukaryotic viral vectors", CSH, NY, 1981, 165-169.

67. Hampe A., Gobet M., Even J.,Sherr C.J., Galibert P., "Nucleotide sequences of feline sarcoma virus LIE*s and 5 leaders show exfce tensive homology to those of other mammalian retrovirus.",J. Virol., 1983,45,, 466-472.

68. Hayvard W.S., Neel B.G., Astrin S.M., "Activation of a cellular ono gene.", Nature, 1981, 2^0, 475-480.

69. Hoffmann J.W., Steffen D., Gusella J., Tabin C., Bird S., Cowing D., Weinberg E.A., "MA methylation affecting the expression of murine leukemia prövirus.", J. Virol., 1982, 44, 144-157.

70. Hishinuma P., Be Bona P.J., Aätrin S., Scalka A.M., "Nucleotide sequenöe of acceptor'site and termini of integrated avian endogenous provirus ev1: integration creates a 6 b.p. repeat of host MA.", Cell, 1981, £2, 155-164.

71. Hoggan"M.3)., Buckler C.E., Sears J .P., Chan H.W., Howe W.P., Martin M.A., "Cloning and characterization- of ah envelope specific probe from-xenotropic murine leukemia proviral MA.", J.Virol., 1982, 41., 228-236.68. Hoffman-Palk H.,

72. Hoffman P.M.»"Drosophila melanogaster MA clones homologous to vertebrate oncogenes: evidence for a common ancestor to the src and abl cellular genes.", Cell, 1983, ¿2, 588-598.

73. Hsu T.W., Sabran J.L., Mark G.E., Guntaka R.V., Taylor J.M., "Analysis of unintegrated avian MA tumor virus double-stranded MA intermidiates.", J.Virol., 1978, g8, 810-818.

74. Huang A.L., Ostrovsky M.C., Bersrd D., Hager G.I., "Glucocorticoid regulation of the Ha-MuSV p21 gene conferred by sequences from mouse mammary tumour virus.", Cell, 1981, 22,245.255. h,

75. Hug£s S.H., Toyoshima S.K., Bishop J.M., Varmus H.B## "Organisation of the endogenous proviruses of chickens? implications for origin and expression.", Virology.108f 1981, 189-207.v j.^, 100>

76. Jaenishe R., Jahner B., Nobil P., Simfcn I., l£5hler J., Harbers K., Grotkopp D., "Chromosomal position and activation of retroviral genomes inserted into the germ line of mice.", Cell, 198^^19-529,

77. Jolly D.J., Esty A.C., Submamani S., Friedmann T., Verma I.M., "Elements in the long terminal repeat of murine retroviruses en hance stable transformation by thymidin kinase gene.", Hucl. Acids Res., 1983, 11, 1855-1872.

78. Joyner A., Yamamoto Y., Bernstein G., "Retrovirus long terminal repeats activate expression of coding sequences for the herpes simplex virus timidin kinase gene.", Proc, Hatl. Acad, Sc., 1982, 22., 1573-1577.

79. Karin M., Richards R.I., "Human metallothionein genes primary-structure of the metallothionein II gene and a related processed gene.", Nature, 1982, 797-802.

80. Kessler Ví.§,, "Rapid isolation of antigens from cells with a staphyloooocal protein A antibody adsorbent.",

81. J. Immun., 1975, ДД5, 1617-1624.

82. Kozak C,, Rowe W.P., "Genetic mapping of the ecotropic murine leukemia virus inducing locus of BALB/c mouse to ohromosome5.", Science,1979, 2Q£, 69-71.

83. Kozak C, Rowe W.P., "Genetic mapping of xenotropic murine leukemia virus- inducing loci in five mouse strain,",

84. J. Exp. Med., 1980, 1£2, 219-228.

85. Kriegler M., Botchan M.,"A retroviral long terminal repeat contains a new type of eukaryotic regulatory element.2, in "Euka-ryotic viral vectors.", CSH, NY, 1981, 171-180.

86. Kriegler M., Botchan M., "Enhaneed transformation by a simian virus 40 recombinant virus containing a Harvey murine sarcoma virus long terminal repeat.", Mol. Cell. Biol., 1983, 2, 325339.

87. Kuginuaa W,, Ikenaga H., Saigo K., "Close relationship between the 1TR of avian leukosis sarcoma virus and oopia-like movable genetic elements of Drosophila.", Proo. Nail. Acad. Sc.,1983, 8СЦ, 3193-3197.

88. Laemly U.K., "Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.", Nature, 1970, g£2, 680-685.

89. Laimins L.A., Khoury G., Gorman C., Howard B, Gruss P., "Host-specific activation of transcription by tandem repeats from simian virus 40 and Moloney murine sarcoma virus.", Proc. Natl. Acad. Sc., 1982, £2, 6453-6457.

90. Lee P., Mulligan R., Berg P., Ringold G., "Glucocorticoids regulate expression of dihydrofolate reductase cDNA in mouse mammary tumour virus chimeric plasmids.", Nature, 1981, 294. 220-232.

91. Leis J.P., Mc Ginnis J., Green R.W., "Rous sarcoma virus p19 binds to specific double-stranded regions of viral RNA: effect of p19 on cleavage of viral RNA by RNAse III.',' Virol., 1978, §£,87-98.

92. Levinson В., Khoury G., Wonde G.V., Gruss P., "Activation of SV-40 genome by 72 base pair tandem repeats of Moloney sarcoma virus.", 1982, Nature, 1982, 295. 568-572.

93. Maizel J.V., link E.L., "Enhanced graphic matrix analysis of nucleic acid and protein sequences.", Proc. Natl. Acad. Sc., 1981, 28, 7665-7669.

94. Majors J.E., Various H.E., "Nucleotide sequences at host-pro-virar junctions for mouse' mammary tumor virus.", Nature, 1981, 289. 253-258.

95. Majors J.E., Various H.E.,"A small region of the mouse mammary tumor virus long terminal' repeat confers glucocorticoid hormon regulation on a linked heterologous gene.", Proo. Natl. Acad. Sc., 1983, 8C), 5866-5870. .

96. Majors J.E., Varmus H.E., Eonehover J.,"Eegulatory and cloning potential of "the mouse mammary tumor virus long terminal redundancy',' J. Virol., 1981, 21» 226-238.

97. Maniatis T., Hardison E.C., Lacy £., Laur J.f O'Connell C., Quon D., Sim G.K., Efstratiadis A., "The isolation of structural genes from libraries of eukariotic MA.", Cell, 1978, 678-701.

98. Maxam A.M., Gilbert W., "A new method for sequencing MAS, Proc. Natl. Acad. Sc., 1977, 24, 560-564.

99. Mc Keown M., Firtell R.A., "Actin raultigene family of Dictyostelium.", Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1982, 46, p.2, 495-505.

100. Mc Knight S.L., Gavis E.R., Kingsbury R., Axel R., "Analysis of transcriptional regulator^ signals of the HSV thymiiih kinase genes identification of the upstream control region,", Cell, 1981, 22.1 385-398.

101. Merttegaert ?jA»r§n)3Q*^.A., "Characterization of inducible type-C BETA viruses of mouse strains from different geographio areas.», Virol. ,1982 165-174. ; r, ^ ^ . ¿?o

102. Mellon P., Parker V., Gluzman Y., Maniatis T., "Identification of MA sequences required for transcription of the human globin gene in a new SV-40 host vector system.", Cell, 1981, 2£,p.1, 279-288.

103. Mitra S.W., Chow M., Champoux J., Baltimore D., "Syntesis of murine leukemia virus plus strong stop MA initiates at a unique site.", J. Biol. Chem., 1982, 2£2, 5983-5986.

104. Mitsialis S.A., Young J.F., Palese P., Guntaka R.V.,

105. An avian tumour virus promoter directs expression of plasmid genes in Escherichia coli.", Gene, 1981, l£, 217-225.

106. Moreau P., Hen R., Chambon P.,"The SV-40 72 base repair repeat has a striking effect on gene expression bouth in SV-40 and other chimeric recombinants.", Nucl. Aoids Res., 1981,2., 6047-6068.

107. Mulligan R.C., "Development of new mammalian transducing vectors.", in"Eukaryotic viral vectors", CSH, NY, 1981, 133-137.

108. Neel B.G., Hayward W.S., Robinson H.I., Pang P., Astrin S.M., "Avian leukosis virus-induced tumours have common provirus integration sites and synthesize discrete new RNA: oncogenesis by promoter insertion.",Cell, 1981, 2^, 323-334.

109. Nishioka Y., Leder A., leder P., "Unusual globin-like gene that has cleantly lost both globin intervening sequences.", Proc. Natl. Acad. Sc., 1980, 2£, 2806-2809.

110. Oskarsson M., Mc Clements W.L., Blair D.G., Maiael J.V., Vande Woode G.P., "Properties of normal mouse cell DNA sequense (sarc) homologous to the sro sequence of Moloney sarooma virus,", Science, 1980, 201» 1222-1224,

111. OstrowskyM.C., Berard D., Hager G.L,»"Specific transcriptional initiation in vitro on murine type C retrovirus promoter'.1 Proc. Natl. Acad, Sc., 1981, 28, 4485-4489.

112. Panganiban A.T., Temin H.M., "The terminal nucleotides

113. Of retrovirus HHA are retired for integration W not Tirusproduction.", Nature, 1983, 206, 155-160.

114. Parker~R.C., Varmus H.E., Bishop J.M., "Cellular homologue (c-sro) of the transforming gene of Rous sarcoma virus! isolation, mapping and transcriptional analysis of c-src and flanking regions'.', Proc. Natl. Acad. Sc., 1981, 28, 5842-5846.

115. Parslove E.G., Granner D.K., "Structure of a nuclease-sensitiv region inside the immunoglobulin kappa-gene J evidence for a rolein gene regulation.", Nucl. Acids Res., 1983, li, 4775-2792.

116. Payne G.S., Bishop J.M., Varmus H.E., "Multiple arrangements of the viral UNA and an activated host oncogene in bursal lymphomas.", Nature, 1982, 295. 209-214.

117. Payne G.S., Courtneidge S.A., Crittenden L.B., Padly A.M., Bishop J.M., Various H.E., "Analysis of avian leukosis virus UNA and BNA'in bursal tumour s viral gene expression is not required for maintenance of tumour state.", Cell, 1981, 22, 311-322.

118. Perucho M., Hanahan D., Lupsich L., Wigler M., "Isolationof the chicken thymidine kinase gene by plasmide rescue.", Nature, 1980, 28^., 207-210.

119. Prakask 0., Guntaka R.V., Sarkar N.U., "Evidence for a procario tic promoter in the murine mammary tumour virus long terminal repeat.", Gene, 1983, 22» 117-130.

120. Queen C., Baltimore D., "Immanoglobulin gene transcription is activated by downstream sequence elements.", Cell, 1983, 22, 741-748.126. Queen C.L., Korn J.,

121. A new approach to the DNA sequenoes analysis.",

122. Methods Enzymol,,1980,6^, 595-608.

123. Quint W., Quan W., van der Putten, Berns A., "Characterization of AKR murine leukemia virus sequences in AKR mouse genome substrains and structure of integrated recombinant genomes in tumour tissues.", J. Virol., 1981, ¿g.» 110.

124. Rauoher E.J. "A virus-induced disease of mioe characterised by exytrocytopoiesis and lymfoid leukemia.

125. J. Hat. Cancer Inst., 1962, 22., 516-543.

126. Eeddy E.P., Dunn C.J., Aaronsoa S.A., "Different lymphoid cell targets for transformation by replication-competent MOloney and Eaucher mouse leukemia viruses.? Cell, 1980, l^., 663-669.

127. Bigby P.W., Bieckmann C.R., Bhodes M., Berg P.J., "labeling deoxyribonucleic acid to high specific activity in vitro by nick translation with DNA polymerase.", J. Mol. Biol., 1977, 113. 237-251.

128. Bingold g.M., Sohank P.E., Varmus H.E., Eing J., Yamamoto K.R., "Integration and transcription of mouse mammary tumor virus DNA in rat hepatoma cells.", Proc. Natl. Acad, Sc., 1979, 26, 665-669.

129. Bingold G.M., Yamamoto K.R., Bishop J.M., Varmus H.E., "Inhibition of cytokenesis in Friend leukemia cells by membrane mobility agents.", Proc. Natl. Acad. Sc., 1977, 2i» 2879-2883.

130. Bobbin B., Young J.M., Mural.E.J., Bell I.E., Ihle J.N., "Molecular cloning and c^racterization of murine leukemia virus -related DNA sequences from C3H/HeN mouse BNA.", J.Virol., 1982, £2, 113-1266 • . ■ .

131. Robinson H.L., Blais B.M., Tschlis P.H., Coffin J.M., "At least two regions of the viral genome determine the oncogenic potential of avian leukosis virus.",Proc, Natl, Acad, Sc., 1982, 22.» 1225-1229.

132. Ross D.G., Swan J., Kleckner N., "Physical structures of Tn-10 promoted deletion and invertionsjrole of 1400 b.p. inverted repetitions.", Cell, 1979, 16,; 721-731.

133. Rowe W.P., Kozak C.A., "Germ -line reinsertion of AKR murineluekemia virus genomes in Akv-1 oongenic mice.", Proo. Natl. Acad. Sc., 1980, 4871-4874.

134. Rubin G.M., Spradling A.C., "Veotora for P element -mediated gene transfer in Drosophila.", Nuol. Acids Res., 1983, H, 63416351.

135. Rushlow R.E., lantenberger J.A., Reddy E.P., Sonza L.M., Baluda H.A., Chirikjian J.G., Papas T.S.»"Nucleotide sequence analysis of the long terminal repeat of avian myeloblastosis virus and adjacent sequenses.", J.Virol., 1982, 4g, 840-846.

136. Scarpulla R.C., Wu R., " Nanallelic members of the oythochrome c multigene family of the rat may arise through different messenger ENAs.", Cell, 1983, ^2, 473-482.

137. Schimke R.T., Kaufman E.J., Alt F.V., Kellems R.3?., "Gene amplification and drug resistance in cultured murine cells.", Science,1978, 202, 1051-1055.

138. Schnieke A., Harbers K., Jaenisch R., "Embrionic lethal mutation in mice induoed by retrovirus insertion into the 1(1) collagen gene.", Nature, 1983, 304. 315-320.

139. Scholnick'S.B., Morgan B.A., Hirsh J., " The oloned dopa decarboxylase gene is developmentally regulated when reintegrated into the Drosophila genome.", Cell, 1983, ^4, 37-45.

140. Seiki M., Hattoris S., Yoshida M., "Human adult T-cell leukemia virus: molecular cloning of the provirus DNA and the unique terminal structure.", Proc.Hatl. Acad, Sc., 1982, 22-, 6899-6902.

141. Sen A., Todaro G.J., "Speoififcgrfcy of in vitro binding of primate type C viral BNA and the homologous viral p12 core protein." »Science, 1976. 193 . 326-328.

142. Shalloway D., Zelentz A.D., Cooper G.M.»"Molecular cloning and characterization of the chioken gene homologous to the transforming gene of the Rouse sarcoma virus.", Cell, 1981, 24, 531-543.

143. Shanck P.R., Hughes S.H., Kung H.J., Majors J.E., Quintrell

144. N., Guntaka R.V., Bishop J.M., Varmus H.E., "Mapping integrated avitermini of linear DNA avian sarcoma virus DNASbear 300 nucleotides present once ortwice in tire species of circular DNA.", Cell, 1978, 1383-1395.

145. Shapiro J.A., "Molecular model for the transposition and replication of bacteriophage Mu and other transposable elements.", Proc. Natl. Acad. Sc., 1979, l£, 1933-1937.

146. Shiba T., Saigo K., "Retrovirus-like particles containing RNA gomologous to the transposable elemait copia in Drosophila melanogaster.", Nature, 1983, 302, 119-124.

147. ShimAsa K., Goldfarb M., Suard Y., Perucho M., Li Y., Kamata T Feramisco J., Stavnezer E., Poch J., Wigler M.N., "Three human transforming genes are related to the viral ras oncogenes.", Proc. Natl. Acad. Sc., 1983, 8Q., 2112-2116.

148. Shimotohno K., Mizutani S., Temin H.M., "Sequences of retrovirus provirus resembles that of bacterial transposable elements.", Nature, 1980, 28^., 550-554.

149. Shimotohno K., Temin H.M., "Formation of infectious progeny virus after insertion of Herpes simplex thymidine kinase gene into DNA of avian retrovirus.", Cell, 1981, 26, 67-77.

150. Shimotohno K., Temin H.M., "Spontaneous variation and synthesis in the U3 region of the long terminal repeat of an avian retrovirus.", J.Virol., 1982, 41, 163-171.

151. Shimotohnb K., Temin H.M., "Loss of intervening sequences in genomic mouse globin DNA inserted in an infectious retrovirus vectnrr.", Nature, 1982, 265-268.

152. Shinnick T.M., Lemer R.A., Sutcliffe G., "nucleotide sequence of Moloney murine leukemia virus.", Nature, 1981,-22.1, 543-548.

153. Sorge J., Hughes S.H., "Retrovirus vectors independent of selectable markers."}in "Eukaryotic viral vectors»., CSH, NY, 1981, 127-132.

154. Southern E.M., "Detction of specific sequences among UNA fragments separated "by gel electrophoresis,",J. Mol. Biol.,1975, 28, 503-517.

155. Steeves H.A., "Spleen focus-forming virus in Priend and Rauscher leukemia virus preparations.",

156. J. Hat. Cancer Inst., 1975, 289-297.

157. Steffen!)., Bird S., Röwe W.P., Weinberg H.A., "Identification of DNA fragmants barring ecotropic proviruses of AKRmice.", Proc. NAtl. Acad. Sc., 1979, Z£, 4554-4558.

158. Steffen D.L., Mural R., Cowing D., Mielcarz J., Young J., Bobbin R., "Most of the murine leukemia virus seqüenees in the DNA of NIH/Swisse mice consist of the two closely related pro-viruses, each repeated several times.", J.Virol., 1982, 42» 127-135

159. Sumegi J., Breedveld D, Hassenlopp P., Chambon P.,

160. A rapid procedure for purification of EcoRI endonuclease.", Bioch. Bioph. Res. Com., 1977, 78-86.

161. SyEora K.W., Moelling K., "Properties of the avian viral protein p12.%1. J. Gen. Virol., 1981,379.391.

162. Tabin C.J., Hoffmann J.W., Shih C.-H., Goff S.P., Y/einberg R.A., "The utilization of the retrovirus as a eukaryotic vector for transmitting cloned DNA sequences.", in "Eukaryotic viral vectors1;, CSH, NY, 1981, 123-126.

163. Taylor J.M., "An analysis oil the role of tENA species as a primers for the transcription into DNA of RNA tumor virus genomes*;, Bioph.^ioch. Acta, 1977, 422, 57-71.

164. Temin H.M., "Origin of retroviruses from cellular moveable genetic elements."21., 599-600.

165. Tronick S.R., Robbins K.C., Canaani E., Devare S.G., Andersen P.R., Aaronson S.A., "Molecular cloning of Moloney murine sarcoma virus: arrangement of virus-related sequences within the normal mouse genome.", Proc. Natl. Acad. Sc., 1979, 2£, 6314-6318.

166. Troxier D.H., lowy R., Horok R., Young H., Scolnick E.M., "Friend strain of spleen focus-forming virus is a recombinant between ecotropic murine type C-virus." Proc. Natl. Acad. Sc., 1977, Ii, 4671-4675.

167. Ulrich A., Gray A., Goeddel D.V., Dull T.F., "Nucleotide sequence of a portion of Human chromosome 9 containing a leukocite interferon gene cluster.", J. Möl. Biol., 1982, 1£6, 467-486.

168. Verma I.M., " 1316 reverse transcriptase".,

169. Biochim. Bioph, Acta, 1977, 4?3.1169. de Vilier J., Sghàffner W., "A small segment of polyèma virus DNA enchances the expression'of a oloned globin gene over a distance of 1400 base pairs." Nucleic. Acids Res., 1981, 6251-6264.

170. Vincent B.R de S., Delbrück S., Eckhart W., Meinkoth J., Wahl G., "The cloning and reintroduction into animal cell ofa functional CAD gene, a dominant amplifiable genetic marker.", Cell, 1981, gl, p.1, 267-277.

171. Watanabe S., Temin H.M., "Enoapsidation sequence required for retrovirus vectors.", in"Eukaryotic viral vectors.", CSH, NY, 4981, 115-121.

172. Watanabe S., Temin H.M., "Enoapsidation sequences for spleen necrosis virus, an avian retrovirus, are between the 5 long terminal repeat and the start of the gag gene.", Proc. Natl. Acad. Sc., 1982, 22» 5986-5990.

173. Wheeler D.A., Butel J.S., Medina B., Cardiff R.D., Hager G.L.,

174. Transcription of mouse mammary tumor virus: identifacation of acandidate for a long terminal repeat gene product.", J.Virol., 461983, 42-49.

175. Wilde C.B., Crowther C.E., Cripe T.P., lee M. G.-S., Cowan N.J., "Evidence that a human tubulin pseudogene is derived from its corresponding RNA.", Nature, 1982, 221, 83-84.

176. Yamamoto T., de Crombrugghe B., Pastan I., "Identification of a functional promoter in the long terminal'repeat of Rouse sarcoma virus.", Cell, 1980, 22, 787-798.

177. YoshirauraP.K., Breda M., "lack of AKR ecotropic provirus amplification in AKR leukemic thymuses.", 1981, 22.» 808-815.

178. Yoshimura F.K., Weinberg R.A., "Restriction endonuclease cleavage of linear and closed circular murine leukemia viral DNAs: diecovery of a smaller circular form.", Cell, 1979,16., 323-^332.

179. Zabarovsky E.R., Shumakov I. M.,"Kisselev L.L., "Tight linkage of the retrovirale like sequences to a variant human c-mos gene in the human genome." Gene, 19^5^379-384.