Клинико-экспериментальное обоснование применения аллогенных фибробластов для лечения ожоговых ран IIIА степени тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.17, кандидат медицинских наук Жиркова, Елена Александровна

• Жиркова, Елена Александровна
• кандидат медицинских наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Жиркова, Елена Александровна

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные методы лечения ожогов.

1.2 Применение аллофибробластов для лечения ожоговых ран.

1.3 Мыши мутантной линии НгИг/Нгкг (безволосые).

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Характеристика клинических групп больных.

2.2 Методы исследования и лечения пациентов

2.2.1 Методы исследования пациентов.

2.2.2 Методы лечения пациентов.

2.3 Характеристика экспериментальных групп.

2.4 Модель ожога IIIА степени и методика применения аллофибробластов для заживления ожоговых ран у беспородных мышей и мышей генетической линии Нг1гг/Нгкг.

2.5 Методы, использованные в экспериментальных исследованиях

2.5.1. Метод культивирования фибробластов мыши.

2.5.2. Морфологические методы исследования.

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Клиническое исследование.

3.1.1 Применение аллофибробластов у обожженных.

3.1.2 Морфологическое исследование процесса заживления ожоговых ран ША степени при применении аллофибробластов.

3.2.2 Обсуждение результатов клинического исследования.

3.2 Экспериментальное исследование.

3.2.1 Применение аллофибробластов при заживлении ожоговых ран у беспородных мышей и мышей генетической линии Нгкг/Нгкг.

3.2.2 Морфологическое исследование процесса заживления ожоговых ран ША степени при применении аллофибробластов у мышей двух генетических линий

3.2.2.1 Регенерация кожи после ожоговой травмы у беспородных белых мышей.

3.2.2.2 Регенерация кожи после ожоговой травмы у мышей мутантной линии Hrh7Hrhr.

3.2.2.3 Радиоавтографическое исследование.

3.2.3 Обсуждение результатов экспериментального исследования.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клинико-экспериментальное обоснование применения аллогенных фибробластов для лечения ожоговых ран IIIА степени»

Актуальность исследования

В настоящее время наметилась тенденция к сокращению численности больных, госпитализируемых с ожогами во все стационары России. В 1999 г. сообщалось о 600 тысячах случаев в год [3]. По последним данным, в России регистрируется около 500 тысяч случаев ожогов, что составляет 6-8% в общей структуре травматизма [21]. Несмотря на уменьшение общего уровня ожогового травматизма, летальность от ожогов в целом по стране не только не сократилась, а, напротив, заметно возросла [2].

Исход ожоговой травмы зависит не только от площади глубоких ожогов, но и от общего поражения. Это положение отражает прогностический индекс Франка, который определяет тяжесть и возможный исход ожоговой болезни [29]. Из числа обожженных, госпитализируемых в стационары, у 60-80% больных имеются поверхностные ожоги П-ША степени, которые во многом определяют тяжесть травмы и ее прогноз [12, 60]. По нашим данным, больные с ожогами II и IIIА степени, госпитализированные в ожоговый центр НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского за последние 5 лет, составляли 70% от общего числа больных.

Пограничные ожоги ША степени могут заживать самостоятельно за счет сохранившихся эпидермальных придатков кожи, которые, однако, находятся под угрозой гибели. Этот процесс самостоятельного заживления при обширных ожогах может длиться до 30-36 дней. При этом около 1/3 ожогов ША степени заживают, оставляя после себя гипертрофические и келоидные рубцы, которые в дальнейшем требуют длительного консервативного и оперативного лечения [32].

При ожогах ИГА степени мозаичность поражения? кожи часто затрудняет самостоятельное заживление, особенно при- обширных ожогах,, когда за снет нарушений микроциркуляции и инфицирования эпидермальные производные находятся' под угрозой-- гибели; [43]. В таких условиях раны, могут «углубляться». . [24]. Кроме того, при сочетании обширных пограничных ожогов: IIIA степени с глубокими ожогами IIIB-IV степени; заживление пограничных ожогов на фоне тяжелой ожоговой! болезни« часто; «задерживается». Повышается риск генерализации инфекции; значительно;-ухудшается прогноз и результаты лечения термической травмы [7]. Порой, в подобной ситуации, для спасения жизни больного приходится прибегать к аутодермоп ластике, основными недостатками которой являются дополнительная- кожная рана в месте забора лоскута и невозможность применения этой технологии при обширных поражениях [71, 81, 149, 150].

Современные разработки в области клеточной биологии и тканевой инженерии дали возможность вплотную подойти к решению проблемы восстановления кожи посредством тканеинженерных конструкций на основе кератиноцитов, фибробластов и коллагеновой матрицы в различных их сочетаниях [11, 14, 53^ 55, 62, 76, 152, 178]. Достижения науки позволяют производить новые поколения сложных повязок временно заменяющих кожу и стимулирующих регенерацию собственной-кожи в максимально короткие сроки и без образования выраженных рубцов. Однако механизмы,, в* результате действия которых формируются и восстанавливаются ткани, все еще недостаточно изучены, разработка методов лечения с использованием культивированных клеток кожи и ее эквивалентов требует совершенствования на всех этапах, начиная от формирования трансплантата и до его применения. Таким образом, научный поиск оптимальных методов восстановления дермы и эпидермиса продолжается, оставаясь актуальной проблемой в комбустиологии.

Цель исследования

Клинически и экспериментально обосновать целесообразность трансплантации аллофибробластов для лечения ожогов ША степени и исследовать механизмы их действия.

Задачи

1. Определить клиническую эффективность трансплантации аллофибробластов в сравнении с традиционными методами местного лечения.

2. Провести сравнительную клинико-морфологическую оценку восстановления кожи у пациентов с ожоговой раной ША степени при использовании аллофибробластов и при традиционном методе лечения.

3. На разработанной экспериментальной модели ожога ША степени провести морфологическое (гистологическое и радиоавтографическое) исследование влияния трансплантации аллофибробластов на заживление ожоговой раны.

4. Определить механизмы влияния аллофибробластов на процесс заживления ожоговой раны ША степени в эксперименте на мышах 2-х генетических линий (беспородных белых и мутантных линии Нг1Г/Нгь~).

Научная новизна

Определены клинические показания и оптимальные сроки применения аллофибробластов для лечения ожоговых ран ША степени.

Впервые для изучения механизмов стимулирующего влияния трансплантированных аллофибробластов на заживление ожоговых ран выполнено экспериментальное морфофункциональное исследование с использованием светомикроскопического радиоавтографического метода.

На основании результатов морфофункционального исследования показано стимулирующее влияние аллофибробластов на пролиферативную активность стволовых/прогениторных клеток, участвующих в заживлении' раны.

Впервые показано, что репаративная регенерация кожи при-ожоге ША степени у безволосых мышей с мутацией в гене Нг имеет те же закономерности, что и восстановление кожи у беспородных белых мышей.

Практическая значимость

В результате усовершенствования тактики применения трансплантации аллофибробластов на поверхность ожоговой раны ША степени значительно сократились сроки эпителизации раны. Заживление ожоговой раны ША степени после трансплантации аллофибробластов происходит с хорошим косметическим эффектом, без образования гипертрофического рубца.

Внедрение

Методика применения повязки на основе живых аллофибробластов, разработанная в рамках данного исследования, внедрена в клиническую практику ожогового центра НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского. Материал диссертации использован в информационном письме (Информ. письмо № 5 / НИИ СП им. Н.В.Склифосовского. -М., 2008.-7с.), в 2 патентах на изобретение (№ 2320349 «Способ лечения ожоговых ран» от 27.03.2008 г., № 2373944 «Способ лечения ожоговой раны» от 27.11.2009 г.).

Личный вклад соискателя

Заключение диссертации по теме «Хирургия», Жиркова, Елена Александровна

выводы

1. Применение повязок с аллофибробластами в первые трое суток после травмы обеспечивает заживление ожоговых ран ША степени в течение 6-9 суток без образования патологического рубца в отличие от традиционного метода лечения, при котором раны заживают на 20-22 сутки нередко с образованием гипертрофического рубца.

2. Морфологическое (цитологическое и гистологическое) исследование проведенное на различных стадиях раневого процесса, показало выраженный стимулирующий эффект трансплантации аллофибробластов на заживления ожоговых ран ША степени в 1-3 сутки после наложения повязки.

3. Морфо функциональное исследование на основе разработанной экспериментальной модели ожога ША степени на мышах позволило выявить основные механизмы стимулирующего влияния АФ на заживление ожоговых ран.

4. Трансплантированные АФ стимулируют пролиферацию стволовых и/или прогениторных эпителиальных клеток в придатках кожи, а также биосинтетическую активность клеток стенки микрососудов за счет биологически активных веществ, выделяющихся в результате разрушения АФ и содержащихся в раневом экссудате в 1-3 сутки после травмы.

5. У мутантных мышей не утрачивается значение волосяного фолликула как одного из источников эпителиальных стволовых клеток, несмотря на значительное изменение его морфологии и нарушение функции образования волоса.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендуем использовать повязки с АФ в максимально ранние сроки после травмы (1-3 сутки) с целью ускорения эпителизации ожогов ША степени и снижения риска образования гипертрофического рубца.

2. Для достижения максимального эффекта повязки с АФ рекомендуем применять пациентам, имеющим общую площадь ожогов не более 30% п.т., показатели прогностических индексов ПИФ в пределах 70 ед. и 11И11С до 100 ед.

3. Повязки с АФ следует применять на чистые раны. Не допускается присутствие на ранах струпа, плотно спаянного с подлежащими тканями фибрина, гнойного раневого отделяемого.

4. Перед трансплантацией АФ рекомендуем провести тщательный туалет ожоговой раны, обработать рану раствором антисептика, наложить повязку с АФ на ожоги ША степени, зафиксировать ее влажно-высыхающей марлевой повязкой.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Жиркова, Елена Александровна, 2011 год

1. Г. Адаме, Р. Методы культуры клеток для биохимиков Текст.* / Р. Адамс.-М.: Мир, 1983.-263 с.

2. Азолов, В.В. Проблемы специализированной помощи обожженным в России и пути их решения Текст. /В.В. Азолов, В.А. Жегалов, H.A. Пономорева//Междунар. мед. журнал.-2003.-№2.-С.102-107.

3. Азолов, В.В. Состояние и перспективы развития комбустиологии в России Электронный ресурс. / В.В. Азолов, В.А. Жегалов, С.П. Перетягин,- Режим доступа: [http://burn.ru/rubrics/show/show/?id=3474].-Загл. с экрана.

4. Алексеев, A.A. Лечение ожоговой болезни Текст. / A.A. Алексеев. // Медицинская газета.-1999.-№22.-24 марта.-С.8-9.

5. Алексеев, A.A. Лечение пограничных ожогов и донорских ран с применением культивированных аллофибробластов Текст. / A.A. Алексеев, М.Г. Крутиков, A.M. Рахаев // Анналы хирургии.-2001.-№1.-С.59-65.

6. Алексеев, A.A. Ожоговый сепсис: диагностика, профилактика, лечение Текст. : автореф. дис. д-ра мед. наук.- М., 1993.-36 с.

7. Аллогенная кожа в лечении раневых дефектов мягких тканей: проблемы и перспективы Текст. / В.И. Хрупкин, Л.В. Писаренко, А.Н. Ивашкин [и др.] // Военно-медицинский журнал.-2001.-№6.-С.29-3 7.

8. Байрейтер, К. Фибробласт при нормальной и патологической терминальной дифференцировке, старении, апоптозе Текст. / К. Байрейтер, П. Франц, Х.П. Родерман // Онтогенез.-1995.-Т.26.-№1.-С.22-37.

9. Ю.Бобро, Л.И. Фибробласты и их значение в тканевых реакциях Текст. / Л.И. Бобро // Архив патологии.-1990.-№12.-С.65-68.

10. П.Васильев, A.B. Клеточные механизмы репарации тканевых повреждений^ Текст. : автореф. дис. д-ра биол. наук.-М., 2003.-45с.

11. Вихриев, Б.С. Ожоги: руководство для врачей Текст. / Б.С. Вихриев, В.М. Бурмистров.- Л.: Медицина, 1986.-272с.

12. Воронкина, И.В. Изменение биологической активности ожогового экссудата человека в ходе заживления ожога Текст. / И.В. Воронкина, Н.В. Калмыкова, Г.П. Пинаев // Цитология.-2004.-№4.-С.361-375.

13. Восстановление кожного покрова путем трансплантации выращенных кератиноцитов Текст. / С. В. Смирнов, И. В. Киселев, О. С. Роговая [и др.] // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-2003 .-Т. 135.-№6.-С.711-713.

14. Гайер, Г. Электронная гистохимия Текст. / Г. Гайер.- М.: Мир, 1974.-488 с.

15. Глущенко, Е.В. Динамика синтеза фибронектина фибробластами человека в культуре Текст. / Е.В. Глущенко, Т.Л. Заец, Г.Г. Серов // Бюл. эксперимент, биол. и мед.-1996.-№5.-С.575-577.

16. Дермальные фибробласты для лечения дефектов кожи Текст. / В.Л. Зорин, А.И. Зорина, О.С. Петракова, В.Р. Черкасов // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия.-2009.-№4.-С.26-40.

17. Донецкий, Д.А. Биологические покрытия при лечении тяжелых ожоговых больных Текст. / Д.А. Донецкий, В.Г. Борисов // Актуальные вопросы хирургии: сб.трудов / под ред. В.Д.Федорова.- М., 1995.-С. 147152.

18. Зиновьев, Е.В Пути улучшения результатов оказания медицинской помощи при обширных глубоких ожогах населению, проживающему вне региональных административных центров Текст.: автореф.дис.д-ра мед. наук.- Великий Новгород, 2008.-43с.

19. История, проблемы и современные методы хирургического лечения обожженных Текст. / В.Д. Федоров, A.A. Алексеев, М.Г. Крутиков, O.A. Кудзоев // Комбустиология.-1999.-№1.

20. Кассиль, Г.Н. Наука о болиТекст. / Г.Н. Кассиль.-2-e изд.,доп.-М.: Наука, 1975.-400с.-(Серия "Проблемы науки и технического прогресса").

21. Колсанов, A.B. Комплексное лечение раневых дефектов кожи и мягких тканей различной этиологии с применением клеточных культурных биопокрытий (экспериментально-клиническое исследование) Текст.: дисс.д-ра мед. наук.-Самара, 2003.

22. Крутиков, М.Г. Современные методы лечения пограничных ожогов IIIA степени и донорских ран Электронный ресурс. / М.Г. Крутиков, A.M. Рахаев.- Режим доступа: [http://burn.ru/authors/show/show/?id=3563].- Загл. с экрана.

23. Кузин, М.И. Ожоговая болезнь Текст. / М.И. Кузин, В.К. Сологуб, В.В. Юденич.- М.: Медицина, 1982.-160с.

24. Местное лечение ожогов: метод, реком. Текст. / А.Ю. Варес, П.В. Мянинко, Г.Н. Фирсов, Х.А. Кристовальд.- Таллин, 1981.-Зс.

25. Метод хирургического лечения ожогов у детей с использованием культивированных аллофибробластов человека: метод, рек. МЗ РФ Текст.- М., 1997.-9с.

26. Назаренко, Г.И. Рана. Повязка. Больной: рук-во для врачей и медсестер Текст. / Г.И. Назаренко, И.Ю. Сугурова, С.П. Глянцев.- М.: Медицина, 2002.-С.89-89.

27. Пальцын, A.A. Микроскопическая техника Текст. / A.A. Пальцын.-М.: Медицина, 1996.-С.252-283.

28. Парамонов, Б.А. Ожоги: рук-во для врачей Текст. / Б.А. Парамонов, Я.О. Порембский, В.Г. Яблонский.- СПб.: СпецЛит, 2000.-480с.

29. Патоморфологические изменения ожоговых ран после пересадки аллогенных фибробластов Текст. / Е.Г. Колокольчикова, Л.И. Будкевич, А.Э. Бобровиков [и др.] // Бюл. экперим. биологии и медицины.- 2001.-№1.-С.107-111.

30. Перспективы использования фетальных фибробластов человека при лечении ран различной этиологии Текст. / Т.Д. Колокольцова, Н.Д. Юрченко, Н.Г. Колосов [и др.] // Вестник РАМН.-1998.-№3.-С.32-34.

31. Пластическое восстановление кожных покровов с использованием культивированных фибробластов. Текст. / В.Д. Федоров, Д.С. Саркисов,

32. B.Д. Федоров, Д.С. Саркисов, В.П. Туманов, Е.В. Глущенко //Врач.-1993.-№11.-С.26-28.45 .Пятнадцатилетний опыт использования культивированных фибробластов для лечения тяжелообожженных Текст. / Саркисов Д.С., Алексеев A.A.,

33. Туманов В.П. и др. // Новые методы лечения ожогов с использованием культивированных клеток кожи: материалы II междунар. симп.- Саратов, 1998.-С.31.

34. Расулов, М.Ф. Трансплантация мезенхимальных стромальных клеток костного мозга для лечения термических ожогов кожи Текст.: дисс. . Дг ра мед. наук М, 2007.-245с.

35. Рахаев, A.M. Лечение пограничных ожогов и донорских ран с применением культивированных аллофибробластов Текст.: дисс.канд. мед. наук.- М., 2000.

36. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ Текст. / под ред. В.П. Фисенко.- М.: Ремедиум, 2000.-398 с.

37. Саркисов, Д.С. Некоторые вопросы гистогенеза опухолей мягких тканей Текст. / Д.С. Саркисов, Е.Г. Колокольчикова, A.A. Пальцын // Патологоанатомическая диагностика опухолей человека.- М.: Медицина,1993.-Т. 1 .-С.374-408.

38. Саркисов, Д.С. Теоретические и практические аспекты использования культивированных фибробластов при восстановлении целостности кожного покрова Текст. / Д.С. Саркисов, A.A. Алексеев // Вестн.РАМН.1994.-№7.-С.6-11.

39. Серов, В.В. Соединительная ткань (функциональная морфология и общая патология) Текст. /В.В. Серов, А.Б. Шехтер.- М.: Медицина, 1982.-312с.

40. Современные методы клеточной терапии при лечении ожогов Текст. / C.B. Смирнов, И.В. Киселев, A.B. Васильев, В.В. Терских // Хирургия.-2003.-№12.-С.58-62.

41. Современные представления о регуляции процесса заживления-ран (обзор литературы) Текст. / C.JI. Вялов, К.П. Пшениснов, П. Куиндоз [и др.] // Анналы пластической, реконстуктивной, эстетической хирургии.-1999Î-№1.-С.49-56.

42. Создание банка кожных клеточных-, трансплантатов: принципы и перспективы Текст. / A.B. Васильев, A.B. Емельянов, В.В. Терских, C.B. Смирнов // Новые медицинские технологии в лечении тяжелообожженных: материалы гор. науч.-практ. конф.-М., 1997.-С.27.

43. Сравнительный анализ кожной пластики традиционный методами и с использованием клеточной культуры фибробластов Текст. / Н.М. Жилина, В.Б. Иванов, H.H. Корень [и др.] // Вестн. новых мед. технологий.-1997.-T.IV.-№l.-C.88-92.

44. Сычевский, М.В. Эффективность модифицированной повязки на основе коллагена типа I при лечении обширных ожоговых ран ША степени Текст.: автореф. дисс. . канд. мед. наук,- М., 2010.-25с.

45. Термические и радиационные ожоги Текст. / Л.И. Герасимова, В.Н. Жижин, Е.В. Кижаев, А.Н. Путинцев.- М.: Медицина, 1996.-244с.

46. Термические и радиационные ожоги: рук-во для врачей Текст. / под ред. Герасимовой Л.И., Назаренко Г.И.-2-e изд., перераб., доп.-М.: Медицина, 2005.-384 с.

47. Трансплантация» культивированных фибробластов Текст. / Е.В. Глущенко, Д.С. Саркисов,.В.Д. Федоров [и др.] // Актуальные вопросы хирургии:сб.науч.трудов ин-та хирургии, им. A.B. Вишневского / под ред. В.Д.Федорова.- М., 1995.-С.153-157.

48. Туманов, В. П. Способ получения трансплантата из культивируемых фибробластов человека для лечения обожженных Текст. / В.П. Туманов // Новые методы лечения ожогов с использованием культивируемых клеток кожи: тез. докл. междунар. симп.- Тула, 1996.-C.il.

49. Хэй, Р. Сохранение и оценка качества клеток Текст. / Р. Хэй // Культура животных клеток / под ред. 3. Фрешни.- М.: Мир, 1989.-С.108-164.

50. Шехтер, А.Б. Морфологическая характеристика рубцовых тканей и новая клинико-морфологическая классификация рубцов кожи человека Текст. / А.Б. Шехтер, А.Е. Гуллер // Арх. патологии.-2008.-№1.-С.6-13.

51. Штамм диплоидных клеток кожи4 и мышц эмбриона человека, используемый для культивирования вирусов / Миронова Л.Л., Преображенская Н.К., Грачев В.П. и др. / Авторское свидетельство №1317021.-1987.

52. Эвтаназия экспериментальных животных: метод, рек. по выведению животных из эксперимента Текст.- М.: МЗ СССР, 1985.-13с.

53. Ямскова, В.П. К вопросу о механизмах, лежащих в основе процессов восстановления и репарации в тканях Текст. / В.П. Ямскова, М.С. Краснов, И.А. Ямсков // Кпет. технол. в биол. и Mefl.-2010.-№1.-C.32L35.

54. Ярыгин, К.Н. Роль резидентных и циркулирующих стволовых клеток в физиологической и репаративной регенерации Текст. / К.Н. Ярыгин // Пат. физиол. иэкспер. терапия.-2008.-№1.-С.2-7.

55. A dermal substitute (Matriderm®) is serving as a scaffold for adipose tissue engineering and keratinocytes: First results of an« in vitro study Text. / M. Keck, D.Haluza; S. Burjak [et al] //Burns.-2009.-Vol.35.-Suppl. 1.-S20.

56. A modification of split-skin graft Text. /S. Dasgupta, S. Sanyal, P. Gupta [et al] // Burns.-1997.-Vol.23.-№6.-P.509-511.

57. A new method of studing epidermalization in vitro Text. / B. Coulomb, P. Satag, E. Bell [et al] // Br. J. Dermatol.-1986.-Vol.l 14-P.91-101.

58. A new type of biomaterial for artificial skin: Dehydrothermally cross-linked composites of fibrillar and denatured collagens Text. / M. Koide, K. Osaki, J. Konishi [et al] // J. Biom. Mat. Res.-1993.-Vol.27.-№l.-P.79-87.

59. Aarabi, S. Hypertrophic scar formation following burns and trauma: new approaches to treatment Text. / S. Aarabi, M.T. Longaker, G.C. Gurtner // J. PLoS. Med.-2007.-Vol.4.-№9.-P. 1464-1470.

60. Abedin, M.Z. Die Angewandte Makromolekulare Text. / M.Z. Abedin, R. Riemschneider // Chem.-1983 .-Vol. 11 .-P. 107-122.

61. Acellular human dermis promotes cultured keratinocyte engraftmentText. / H.O. Rennekampff, V. Kiessig, S. Griffey [et al] // J. Burn. Care Rehabil.-1997.-Vol. 18.-№6.-P.535-544.

62. Adzick, N.S. Cells, matrix, growth factors, and the surgeon. The biology of scarless fetal wound repair Text. / N.S. Adzick, H.P. Lorenz // J'. Ann. Surg.-1994.-Vol.220.-№ 1 .-P. 10-18.

63. Alonso, L. Stem cells of the skin epithelium Text. / L. Alonso, E. Fuchs // PNAS.-2003 .-Vol. 1 OO.-Suppl. 1 .-P. 11830-11835.

64. An adult-fetal skin interface heals without scar formation in sheep Text. / K.M. Sullivan, M. Meuli, T.E. MacGillivray, N.S. Adzick // Surgery.-1995.-Vol.118.-№l.-P.82-86.

65. Anatomic demarcation by positional variation in fibroblast gene expression programsText. / J.L. Rinn, C. Bondre, H.B. Gladstone [et al] // PLoS Genet.-2006.-Vol.2.-№7.-P. 1084-1096.

66. Artificial skin, split-thickness autograft and cultured autologous keratinocytes combined to treat a severe burn injury of 93% of TBSAText. / M. Loss, V. Wedler, W. Künzi [et al] // Burns.-2000.-Vol.26.-№7.-P.644-652.

67. Atiyeh, B.S. Cultured epithelial autograft (CEA) in burn treatment: three decades later Text. / B.S. Atiyeh, Mr Costagliola // J. Burns.- 2007.-Vol.33.-P.405-413'.

68. Badiavas, A. Participation of bone marrow derived cells in cutaneous wound healing Text. / A. Badiavas, V. Evangelos // J. Cell. Physiol.-2003.-Vol.196.-№2.-P.245-250.

69. Beranek, J.T. Histogenesis of the intimal thickening in atherosclerosis and of hyperplastic processes in connective tissue Text. / J.T. Beranek, N.C. Cavarocchi//Human. Pathol.-1990.-Vol.21.-P. 1082-1083.

70. Billingham, R.E. Technique of free skin grafting in mammals Text. / R.E. Billingham, P. Medawar//J. Exp. Biol.-Vol.28.-P.385-402.

71. Bioengineered skin substitutes for the management of burns: a systematic review Text. / C. Pham, J. Greenwood, H. Cleland [et al] // Burns.-2007.-Vol.33.-P.946-957.

72. Böttcher-Haberzeth, S. Tissue engineering of skin Text. / S. Böttcher-Haberzeth, T. Biedermann, E. Reichmann // Burns.-2010.-Vol.36.-№4.-№450-460.

73. Boyce, S.T. Design principles for composition and performance of cultured skin substitutes Text. / S.T. Boyce // Burns.-2001.-Vol.27.-P.523-533.

74. Caplan, A.I. All MSCs are pericytes? Text. / A.I. Caplan // Cell. Stem. Cell.-2008,-Vol.l l-P.229-230.

75. Cellular origin of the dermal-epidermal basement membrane Text. / M.P. Marinkovich, D.R. Keene, C.S. Rimberg, R.E. Burgeson // Dev. Dyn.-1993.-Vol. 197.-№4.-P.255-267.

76. Clinical experience using cultured epithelial autografts lead to an alternative methodology for transferring skin cells from the laboratory to the patient Text.

77. C.A. Hemon, R.A. Dawson, E. Freedlander et al. // J. Regen. Med.-2006.-VoLl.-P.80.

78. Comparative assessment of cultured skin, substitutes, and-native skin, autograft for treatment of full-thickness burns Text. / S.T. Boyce, M.J. Goretsky, D.G. Greenhalgh [et al] //J. Ann. Surg.-1995.-Vol.222'.-P.743-752.

79. Cosmetic improvement in various acute skin defects treated with tissue-engineered1 skin Text. / X. Nie, J.Y. Zhang, K J. Cai [et al] // Artif. Organs.-2007.-Vol.31 .-№9.-P.703-710.

80. CuItured autologous fibroblast and keratinocyte grafts: applications in plastic surgery Text. / A. Scalise, M. Pierangeli, G. Di Benedetto [et al] // J. Ann. Burns Fire Dis.-2001.-Vol.l4.-№2.-P.96-99.

81. Cultured composite skin grafts: biological skin equivalents permitting massive expansion Text. / J. Nanchahal, R. Dover, W.R. Otto, S.K. Dhital // Lancet.-1989.-Vol.334.-№8656.-P. 191-193.

82. Cultured epithelial autografts in extensive burn coverage of severely traumatized patients: a five year single-center experience with 30 patients Text. / H.Carsin, P. Ainaud, H. Le Bever H. [et al] // J. Burns.-2000.-Vol.26.-P.379-387.

83. Cultured keratinocytes in fibrin with decellularised dermis close porcine full-thickness wounds in a single step Text. / H. Bannasch, T. Unterberg, M. Fohn [et al] // Bums.-2008.-Vol.34.-P. 1015-1021.

84. Cuono, C. Use of cultured epidermal autografts and dermal allografts as skin replacement after burn injury Text. / C. Cuono, R. Langdon, J. McGuire // J. Lancet.-1986.-Vol.l7.-P:l 123-1124.

85. Dermal fibroblasts from different layers of human skin are heterogeneous in expression of collagenase and types I and IILprocollagen mRNAText. / M. Ali Bahar, B. Bauer, E.E. Tredget, A. Ghahary // Wound. Repair. Regen.-Vol.12.-№2.-P. 175-182.

86. Direct evidence for spatial and temporal* regulation of transforming growth factor beta 1 expression during cutaneous.wound healing Text. / C.J. Kane, P.A. Hebda, J.N. Mansbridge, P.C. Hanawalt // J. Cell. Physiol.-1991.-Vol.l48.-№l.-P.157-173.

87. Diversity, topographic differentiation, and positional memory in human fibroblasts Text. / H.Y. Chang, J.T. Chi, S. Dudoit [et al] // Proc. Natl. Acad. Sci USA.-2002.-Vol.99.-№20.-P. 12877-12882.

88. Dziewulsk, P. Burn wound healing: James Ellsworth Laing memorial essay for 1991 Text. / P. Dziewulsk // Burns.-1992.-Vol.l8.-№6.-P.466-478.

89. Edmonds, M. European and Australian Apligraf Diabetic Foot Ulcer Study Group, Apligraf in the treatment of neuropathic diabetic foot ulcers Text. / M. Edmonds // Int. J. Low Extrem. Wounds.-2009.-Voh8.-P.l 1-18.

90. Fang, L.J. The experimental study of bone marrow mesenchymal stem cells on the repair of skin wound combined with local radiation injury Text. / L.J. Fang, Y. Shen // J. Zhonghua Shao Shang ZaZhi.-2003.-Vol.l9:-№l.-P.22-24.

91. Fibroblasts induce the assembly of the macromolecules of the basement membraneText. / P. Delvoye, D. Pierard, A. Noel [et al] // J. Invest. Dermatol.-1988-Vol.90.-P.276-282.

92. Fibronectin and fibrin provide a provisional matrix for epidermal cell migration during wound reepithelialization Text. / R.A. Clark, J.M. Lanigan, P. DellaPelle [et al] //J. Invest. Dermatol.-1982.-Vol.79.-№5.-P:264-269.

93. First experiences with the collagen-elastin matrix Matriderm as a dermal substitute in severe burn injuries of the hand'Text. / W. Haslik, L.P. Kamolz, G. Nathschlager [et al] // Burns.-2007.-Vol.33.-P.364-368.

94. Fuchs, C. Stem cells of the skin epitheliumText. / C. Fuchs, L. Alonso, E. Sep //ENAS.-2003.-Vol.l00.-P.l 1830-11835.

95. Gabbiani, G. The myofibroblast in wound healing and fibrocontractive diseases Text. / G. Gabbiani // J. Pathol.-Vol.200.-№4.-P.500-503.

96. Ghalbzouri, A. Crucial role of fibroblasts in. regulating epidermal morphogenesis Text. / A. Ghalbzouri, E. Lamme, M. Ponec // Cell. Tiss. Res.-2002.-Vol.310.-№2.-P. 189-199.

97. Grafting of burns with cultured epithelium prepared from autologous epidermal cells Text. /N. O'Connor, J.B. Mulliken, S. Banks-Schlegel [et al] // J. Lancet.-1981 .-Vol. 1 .-№8210.-P.75-78.

98. Gregoire, F.M. Adipocyte Differentiation: From Fibroblast to Endocrine Cell Text. / F.M. Gregoire // Exp. Biol. Med.-2001.-Vol.226.-P.997-1002.

99. Growth factors in plastic surgeryText. / A. Chajchir, D. Fabrizio, G. Chajchir, E. Celi // Aesthetic. Plast. Surg.-2005.-Vol.29-№4.-P.295-299.

100. Harrison, C.A. The mechanism of skin graft contraction: an update on current research and potential future therapies Text. / C.A. Harrison, S. MacNeil // J. Burns.-2008.-Vol.34.-№2.-P.153-163.

101. Hayflick, L. The serial cultivation of human diploid cell strainsText. / L. Hayflick, P.S. Moorhead // Exp. Cell. Res.-1961.-Vol.25.-№3.-P.585-621.

102. Hypertrophic burn scars: analysis of variables Text. / E.A. Deitch, T.M. Wheelahan, M.P. Rose [et al] // J. Trauma.-1983.-Vol.23.-P.895-898.

103. Influence of bioengineered skin substitutes on diabetic foot ulcer and venous leg ulcer outcomes Text. / C. Barber, A. Watt, C. Pham [et al] // J. Wound Care.-2008.-Vol.17.-P.517-527.

104. Initial experiences using non-cultured autologous keratinocyte suspension for burn wound closure Text. / C .J. Zweifel, C. Contaldo, C. Köhler [et al] // J. Plast. Reconstr. Aesthet. Surg.-2008.-Vol.61.-№9.-P.el-e4.

105. Integra as a dermal replacement in a meshed composite skin graft in a rat model: a one-step operative procedure Text. / C.S. Chu, A.T. McMänus, N.P. Matylevich [et al] // J. Trauma.-2002.-Vol.52.-P. 122-129.

106. Karasek, M. Growth of postembrionic skin epithelial cells on collagen gels Text. / M<. Karasek, M. Charlton // J. Invest. Dermatol.-1971.-Vol.56.-№2.-P.205-210.

107. Karasek, M. In vitro culture of human skin epithelial cell Text. / Karasek, M. //J. Invest. Dermatol.-1966.-Vol.47.-P.533-540.

108. Kearney, J.N. Clinical evaluation of skin substitutes Text. / J.N. Kearney // J. Burns.-2001 .-Vol.27.-P.545-551.

109. König, A. Epithelial-mesenchymal interactions enhance expression of collagen VII in vitroText. / A. König, L. Bruckner-Tuderman // J. Invest. Dermatol.-l 991 .-Vol.96.-P.803-808.

110. Lindblad, W.J. Stem Cells in Wound Healing Text. / W.J. Lindblad. // Stem. Cells. Handbook / eds. S.Sell.-Humana Press, Totowa, NY, 2004.-P.101-106.

111. Living tissue formed in vitro and accepted as skin-equivalent tissue of full thickness Text. / E. Bell, H.P. Ehrlich, D.J. Buttle, T. Nakatsuji // J. Science.-1981.-Vol.211.-P. 1052-1054.

112. Longitudinal assessment of Integra in primary burn management: a randomized pediatric clinical trial Text. / L.K. Branski, D.N. Herndon, C. Pereira [et al] // J. Crit. Care Med.-2007.-Vol.3 5.-№ 11.-P.2615-2623.

113. Long-term regeneration of human epidermis on third degree burns transplanted with autologous cultured epithelium grown on a fibrin matrix

114. Text. / V. Ronfard, J.M. Rives, Y. Neveux et al] // J. Transplantation.-2000.-Vol.70.-P. 1588-1598.

115. Lozano, D.D. The effect of a fibroblast derived skin substitute on keratinocyte proliferationText. / D.D. Lozano // Burns .-2007.-Vol.33-№1.-Suppl.-S62-S63.

116. Maas-Szabowski, N. Keratinocyte growth regulation in fibroblast cocultures via a double paracrine mechanism Text. / N. Maas-Szabowski, A. Shimotoyodome, N.E. Fusenig // J. Cell. Scien.-1999.-Vol.ll2.-№12.-P.1843-1853.

117. MacNeil, S. Progress and opportunities for tissue-engineered skin Text. / S. MacNeil // J. Nature.-2007.-Vol.445.-P.874-880.

118. Mechanism of human dermal fibroblast migration driven by type I collagen and platelet-derived growth factor-BB Text. / W. Li, M. Chen, S. Guan [et al] //Mol. Biol. Cell.-2004.-Vol. 15.-№ 1 .-P.294-309.

119. Mesenchymal-epithelial interactions in the skin: aiming for site-specific tissue regenerationText. / Y. Yamaguchi, V.J. Hearing, S. Itami [et al] // Dermatol. Sci.-2005.-Vol.40.-№1 .-P. 1-9.

120. Meuli, M. Tops and flops using cultured epithelial autografts in children Text. / M. Meuli, M. Raghunath // J. Pediatr. Surg. Int.-1997.-Vol.12.-P.471-477.

121. Minguell, J.J. Mesenchymal Stem Cells Text. / J J. Minguell, A. Erices, P. Conget // Exp. Biol. Med.-2001 .-Vol.226.-P.507-520.

122. Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies Text. / P.A. Zuk, M. Zhu, H. Mizuno [et al] // Tissue Eng.-2001.-Vol.7.-P.211-228.

123. Munster, A.M. Cultured skin for massive burns. A prospective, controlled trial Text. / A.M. Munster // J. Ann. Surg.-1996.-Vol.224.-P.372-375.

124. One-stage skin grafting of the exposed skull with acellular human dermis (AlloDerm) Text. / S.N. Jung, J.W. Chung, Y.M. Yim, H. Kwon // J. Craniofac. Surg.-2008.-Vol. 19.-P. 1660-1662.

125. Pandya, A.N. The use of cultured autologous keratinocytes with Integra® in the resurfacing of acute burns Text. / A.N. Pandya, B. Woodward, N. Parkhouse // J. Plast. Reconstr. Surg.-1998.-Vol.l02.-P.825-828.

126. Parathyroid hormone-related protein is a positive regulator of keratinocyte growth factor expression by normal dermal fibroblasts Text. / Blomme E.A., Sugimoto Y., Lin Y.C. [et al] // Mol. Cell. Endocrinol.-1999.-Vol.l52.-№l-2.-P.189-197.

127. Perivascular ancestors of adult multipotent stem cellsText. / M. Corselli, C. Chien-Wen, M. Crisan [et al] // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol.-2010.-Vol-30-P. 1104-1109.

128. Permanent coverage of large bum wounds with autologous cultured human epithelium Text. / G.G. Gallico, N.E. O'Connor, C.C. Compton [et al] // J. N. Engl. Med.-1984.-Vol.311 .-P.448-451.

129. Preliminary clinical studies of a biological skin equivalent in burned patients Text. / D. Wassermann, M. Schlotterer, A. Toulon [et al] // Burns.-1988.-Vol. 14.-№4.-P.326-330.

130. Prevention and management of hypertrophic scars and keloids after burns in children Text. / B. Berman, M.H. Viera, S. Amini [et al] // J. Craniofac. Surg.-2008.-Vol.l9.-P.989-1006.

131. Reconstruction of burn deformity using artificial dermis combined with thin split-skin grafting Text. / K. Soejima, M. Nozaki, K. Sasaki [et al] // Burns.-1997.-Vol.23.-№6.-P.501 -504 .

132. Rheinwald, J.G. Epidermal growth factor and the multiplication of cultured human epidermal keratinocytes Text. / J.G. Rheinwald, H. Green // J. Nature.-1977.-Vol .265 .-P.421-424.

133. Schor, S.L. Different mechanisms in the attachment of cells to native and denatured collagen Text. / S.L. Schor, J. Court // J. Cell. Sci.-1979.-Vol.38.-P.267-281.

134. Shakespeare, P. Burn wound healing and skin substitutes Text. / P. Shakespeare // J. Burns.-2001.-Vol.27.-P.517-522.

135. Shakespeare, P.G. The role of skin substitutes in the treatment of bum injuries Text. / P.G. Shakespeare // J. Clin. Dermatol.-2005.-Vol.23.-P.413-418.

136. Sheridan, R.L. Skin substitutes in burnsText. / R.L. Sheridan, R.G. Tompkins // J. Bums.-1999.-Vol.25.-P.97-103.

137. Somasundaram, R. Type I, II, III, IV, V, and VI Collagens Serve as Extracellular Ligands for the Isoforms of Platelet-derived Growth Factor (AA, BB, and AB) Text. / R. Somasundaram, D. Schuppan // J. Biol. Chem.-1996.-Vol.271 .-P.26884-26891.

138. Sprayed keratinocyte suspensions accelerate epidermal coverage in a porcine microwound model Text. / F.A. Navarro, M.L. Stoner, C.S. Park [et al] // J. Bum Care Rehabil.-2000.-Vol.21.-P.513-518.

139. Stem cell plasticity: time for a reappraisal? Text. / R.M. Lemoli, F. Bertolini, R. Cancedda [et al] //Haematologica.-2005.-Vol.90.-P.360-381.

140. Stem cells in the hair follicle bulge contribute to wound repair but not to homeostasis of the epidermis Text. / M. Ito, Y. Liu, Z. Yang [et al] // Nature Medicine.-2005.-Vol. 11 .-P. 1351-1354.

141. Stiefel, D. Integra Artificial Skin® for burn scar revision in adolescents and children Text. / D. Stiefel, C. Schiestl, M. Meuli // Burns.-2010.-Vol.36.-№1.-P.l 14-120.

142. Stocum, D.L. Regenerative Biology and Medicine Text. / D.L. Stocum.-New York: Academic Press San Diego/Elsevier, 2006.-435p.

143. Successful use of a physiologically acceptable artificial skin in the treatment of extensive burn injuryText. / J.F. Burke, I.V. Yannas, W.C. Quinby [et al] // J. Ann. Surg.-198r.-Vol.l94.-P.413-428.

144. Survival of Apligraf in acute human wounds Text. / M. Griffiths, N. Ojeh, R. Livingstone [et al] // Tissue Eng.-2004.-Vol.l0.-№7-8.-P.l 180-1195.

145. The intermingled- transplantation of auto- and homografts in severe burns Text.;/ Chih-Chun Yang, Tsi-Siang Shih, .Te-An Ghu [et al] // Burns.-1980.-Vol.6.-№3 .-P. 141-145.

146. The use of cultured autologous fibroblasts in burn wounds healing process Text. / I. Karchilakia, G. Topakasa, O. Castanab [et al] // Burns.-2007.-Voh33.-№6.-P.791-792.

147. Update on the use of collagen/glycosaminoglycate skin substitute—six years of experiences with artificial skin in 15 German burn centers Text. / A. Heitland, A. Piatkowski, E.M. Noah, N. Pallua // J. Burns.-2004.-Vol.30.-P.471-475.

148. Use of dermal regeneration template in contracture release procedures: a multicenter evaluation Text. / J.D. Frame, J. Still, A. Lakhel-LeCoadou [et al] //J. Plast. Reconstr. Surg.-2004.-Vol. 113.-P. 1330-1338.

149. Viability and function of autologous and allogeneic fibroblasts seeded in dermal substitutes after implantation Text. / N. Morimoto, Y. Saso, K. Tomihata [et al] //J. Surg. Res.-2005.-Vol.l25.-№l.-P.56-67.

150. Wainwright, D.J. Use of an accelular allograft dermal matrix (Alloderm) in the management of full-thickness burns Text. / D.J. Wainwright // Burns.-1995.-Vol.21.-№4.-P.243-248.

151. Werner, S. Keratinocyte-fibroblast interactions in wound healingText. / S. Werner, T. Krieg, H. Smola // J. Invest Dermatol.-2007.-Vol.l27.-№5.-P.998-1008.

152. Wong, T. The role of fibroblasts in tissue engineering and regenerationText. / T. Wong, J.A. McGrath, H. Navsaria // Br. J. Dermatol.-2007.-Vol. 156.-P. 1149-1155.

153. Wood, F.M. Clinical potential of cellular autologous epithelial suspension Text. /F.M. Wood//J. Wounds.-2002.-Vol.15.-P. 16-22.

154. Wood, F.M. The use of cultured epithelial autograft in the treatment of major burn wounds: eleven years of clinical experience Text. / F.M. Wood, MX. Kolybaba, P. Allen // J. Burns.-2006.-Vol.32.-P.538-544.

155. Wood, F.M. The use of cultured epithelial autograft in the treatment of major burn injuries: a critical review of the literature Text. / F.M. Wood, M.L. Kolybaba, P. Allen // J. Burns.-2006.-Vol.32.-P.395-401.

156. Wound closure and outcome in extensively burned patients treated with cultured autologous keratinocytes Text. / L.W. Rue, W.G. Cioffi, W.F. McManus, B.A. Pruitt// J. Trauma.-1993.-Vol.34.-P.662-667.

157. Wound repair and regeneration Text. / G.C. Gurtner, S. Werner, Y. Barrandon, M.T. Longaker// J. Nature.-2008.-Vol.453.-P.314-321.

158. Wound-healing gene family expression differences between fetal and foreskin cells used for bioengineered skin substitutes Text. / N. Hirt-Burri, C. Scaletta, S. Gerber [et al] // Artif. C>rgans.-Vol.32.-№7.-P.509-518.

159. Xu, J. Extracellular matrix alters PDGF regulation of fibroblast integrins Text. / J. Xu, R.A. Clark // J. Cell. Biol.-1996.-Vol.l32.-P.239-249.

160. Yu, B.D. Skin and Hair: models for exploring organ regenerationText. / B.D. Yu, A. Mukhopadhyay, C. Wong // Hum. Mol. Genet.-2008.-Vol. 17.-P.54-59.