Клинико-диагностическое значение показателей автоматизированного исследования ретикулоцитов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.46, кандидат медицинских наук Коленкин, Сергей Миронович

• Коленкин, Сергей Миронович
• кандидат медицинских наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Коленкин, Сергей Миронович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общие сведения о ретикулоцитах

1.2. Основы эритропоэза и стадии созревания ретикулоцитов

1.3. Ручные методы исследования ретикулоцитов

1.4. Автоматизированные методы исследования ретикулоцитов

1.5. Физиологические вариации при подсчете ретикулоцитов

1.6. Клиническое применение результатов исследования ретикулоцитов

1.7. Лабораторная диагностика анемий

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. КЛИНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИССЛЕДОВАННЫХ ПАЦИЕНТОВ И ОПИСАНИЕ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Клиническая характеристика исследованных пациентов

2.2. Метод подсчета ретикулоцитов с помощью световой микроскопии

2.3. Принцип работы гематологического анализатора GEN-S

2.4. Показатели исследования ретикулоцитов на анализаторе

2.5. Лабораторные методы, использованные для диагностики анемий

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИИ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

ГЛАВА 3. ХАРАКТЕРИСТИКА АВТОМАТИЗИРОВАННОГО МЕТОДА ИССЛЕДОВАНИЯ РЕТИКУЛОЦИТОВ

3.1. Сравнение различных методов подсчета ретикулоцитов

3.2. Внутрисерийная и межсерийная воспроизводимость анализатора GEN-S по основным гематологическим и ретикулоцитарным показателям

3.3. Влияние условий и сроков хранения проб крови на показатели ретикулоцитов

3.4. Референтные величины показателей ретикулоцитов для взрослых мужчин и женщин

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ РЕТИКУЛОЦИТОВ ПРИ АНЕМИЯХ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА

4.1. Показатели гемограммы и ретикулоцитов у больных с железодефицитной анемией

4.2. Показатели гемограммы и ретикулоцитов у больных с Ви-дефицитной анемией

4.3. Показатели гемограммы и ретикулоцитов у больных с анемией при ХПН

4.4. Показатели гемограммы и ретикулоцитов у больных с аутоимунной гемолитической анемией

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клинико-диагностическое значение показателей автоматизированного исследования ретикулоцитов»

Актуальность исследования

Анемия является наиболее распространенным симптомом, сопровождающим течение различных заболеваний. Распознавание патогенетического варианта анемий базируется на данных лабораторного исследования и зависит во многом как от уровня и качества этих исследований, так и от правильной интерпретации полученных результатов.

Одним из основных гематологических тестов, оценивающих активность костномозгового эритропоэза, является исследование рети-кулоцитов периферической крови. Оно используется в диагностике, классификации и мониторинге лечения анемии, оценке восстановления эритропоэза после химиотерапии и в динамике лечения реком-бинантным эритропоэтином. До настоящего времени основным методом оценки ретикулоцитов является микроскопический с подсчетом их относительного количества в суправитально окрашенном мазке крови. Однако указанный метод трудоемок, недостаточно стандартизирован, отличается низкой воспроизводимостью из-за подсчета небольшого числа ретикулоцитов. Коэффициент вариации по данным различных авторов составляет от 25% до 50% [79,112]. Кроме того, визуальная оценка ретикулоцитов является достаточно субъективной и зачастую не позволяет уловить слабо выраженные зернисто-сетчатые структуры [52], что необходимо для динамического мониторинга активности эритропоэза.

На протяжении последних 70 лет предпринимались попытки получения дополнительной информации о степени созревания ретикулоцитов при использовании микроскопического метода с целью более глубокой оценки состояния эритропоэза у больных анемией, однако они не нашли практического применения в клинико-диагностических лабораториях [10,88].

На современном этапе все больше внимания уделяется автоматизированному анализу ретикулоцитов, открывающему новые перспективы для оценки состояния эритропоэза.

Автоматизированные методы имеют значительно большую точность в подсчете, коэффициент вариации составляет около 6% [42]. Основными факторами повышения точности являются исследование большого числа эритроцитов (до 30 ООО и более) и четкое улавливание незначительного количества РНК-содержащих структур в клетках. Современные гематологические анализаторы позволяют получить кроме классических относительного и абсолютного количества ретикулоцитов дополнительные показатели, характеризующие клеточный объем и степень зрелости ретикулоцитов. Большинство из этих показатели недостаточно изучено, во многом неясной остается их интерпретация при различных анемических состояниях [13,63,68].

Кроме того, до настоящего времени для новых ретикулоцитар-ных показателей не определены референтные величины и не изучено влияние условий и сроков хранения на стабильность проб крови.

Активное использование в клинике современных методов лечения (трансплантация почки и костного мозга, применение эритропо-этина и других факторов роста) требует внедрения новых, более доступных и дешевых способов оценки эффективности терапии на ее ранних этапах.

Все вышеизложенное определяет актуальность проблемы и позволяет обозначить цель и задачи настоящего исследования.

- 8

Цель исследования

Изучить информативность результатов автоматизированного исследования ретикулоцитарных показателей периферической крови для оценки состояния эритропоэза и мониторинга терапии при различных видах анемий.

Задачи исследования

1. Провести сравнительный анализ результатов микроскопического и автоматизированного методов исследования ретикулоцитов в периферической крови.

2. Изучить влияние сроков и условий хранения проб крови на показатели ретикулоцитов.

3. Определить референтные величины показателей ретикулоцитов автоматизированного метода для взрослых мужчин и женщин.

4. Исследовать закономерности изменения ретикулоцитарных показателей в динамике проводимой терапии при железодефицитной, В12-дефицитной, аутоиммунной гемолитической анемиях и анемии при хронической почечной недостаточности.

5. Определить оптимальные сроки проведения исследования показателей незрелых ретикулоцитов в современной схеме диагностики и оценке эффективности лечения анемий различного генеза.

Научная новизна работы

Научная новизна настоящего исследования заключается в том, что впервые изучены и подробно охарактеризованы возможности автоматизированного метода исследования для оценки состояния эритропоэза в костном мозге.

Впервые изучено влияние сроков и условий хранения проб крови на результаты исследования незрелых форм ретикулоцитов.

Впервые определены референтные величины для показателей незрелых ретикулоцитов.

Впервые исследованы изменения ретикулоцитарных показателей при анемиях различного генеза до начала лечения и их значение для выявления степени выраженности неэффективного эритропоэза.

Впервые продемонстрированы закономерности изменения показателей ретикулоцитов, характеризующих клеточный объем и степень зрелости, в динамике терапии при различных видах анемий. Показана определяющая роль абсолютных величин ретикулоцитов и незрелых форм ретикулоцитов для наиболее полной характеристики степени восстановления нарушенного эритропоэза.

Впервые доказано, что при лечении анемий различного генеза повышение фракции незрелых ретикулоцитов и количества незрелых ретикулоцитов на 2-3 дня опережает увеличение общего количества ретикулоцитов в периферической крови.

Впервые предложены оптимальные сроки проведения автоматизированного анализа ретикулоцитов для мониторинга проводимой терапии.

Практическая значимость работы

В работе охарактеризованы преимущества автоматизированного анализа ретикулоцитов по сравнению с микроскопическим методом.

Установлены референтные величины ретикулоцитарных показателей для взрослых мужчин и женщин.

Определены оптимальные сроки и условия хранения проб крови для исследования ретикулоцитов.

Показатели ретикулоцитов, характеризующие объем клеток и степень зрелости, предоставляют дополнительную информацию о состоянии эритропоэза, что позволяет использовать их для динамического мониторинга течения различных форм анемии и проводимой терапии.

Возможности современных многопараметровых гематологических анализаторов диктуют необходимость широкого использования в клинической практике результатов автоматизированного анализа ретикулоцитов.

Применение показателей исследования ретикулоцитов дает возможность более рационально подходить к диагностике и лечению больных с анемией различного генеза.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Исследование ретикулоцитов на гематологическом анализаторе превосходит по воспроизводимости микроскопический метод подсчета ретикулоцитов, что позволяет более точно оценить состояние эритропоэза и выявить изменения, характерные для различных видов анемии.

2. Для повышения достоверности результатов исследования ретикулоцитов следует строго соблюдать сроки и условия хранения проб крови.

3. Показатели автоматизированного исследования ретикулоцитов (фракция незрелых ретикулоцитов, количество незрелых ретикулоцитов, средний объем ретикулоцитов и сферулированных эритроцитов) позволяют получить более точную информацию о состоянии эритропоэза.

4. Увеличение количества незрелых ретикулоцитов предшествует увеличению общего количества ретикулоцитов при повышении эритропоэтической активности костного мозга, что дает возможность раньше оценить эффективность проводимого лечения.

5. Для оценки активности эритропоэза при мониторинге течения анемии и результатов лечения более рациональным является использование всех дополнительных характеристик автоматизированного анализа ретикулоцитов, особенно их абсолютных значений.

Апробация работы Материалы диссертации доложены на совместной конференции кафедры клинической лабораторной диагностики РМАПО МЗ РФ, кафедры иммунологии РМАПО МЗ РФ, Медицинского центра Банка России, Лабораторного центра Главного военного клинического госпиталя имени акад. Н.Н.Бурденко и клинико-диагностической лаборатории ГКБ им.С.П.Боткина 31 октября 2003 года, на научно-практическом симпозиуме «Принципы и способы лабораторного обеспечения внебольничной помощи и актуальные проблемы лабораторной медицины» 8.10.2001 года, на научно-практическом симпозиуме «Рациональное применение лабораторных тестов в диагностике и мониторинге наиболее распространенных форм патологии» 8.10.2002 года. По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ.

Реализация и внедрение результатов работы Результаты исследования внедрены в Медицинском центре Банка России, 574 Военном клиническом госпитале, 25 Центральном военном клиническом госпитале РВСН.

Клинические и лабораторные исследования, связанные с решением поставленных задач, проведены на базе Медицинского центра Банка России.

Структура и объем диссертации Диссертация изложена на 124 страницах машинописного текста, иллюстрирована 41 рисунком и 20 таблицами. Работа состоит из введения, пяти глав, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Библиографический указатель включает 157 источников, из которых 34 отечественных и 123 зарубежных авторов.

Заключение диссертации по теме «Клиническая лабораторная диагностика», Коленкин, Сергей Миронович

- 105 -ВЫВОДЫ

1. Автоматизированный метод исследования ретикулоцитов периферической крови, основанный на определении объема клеток и содержания остаточной РНК в эритроцитах, позволяет с достаточной воспроизводимостью получить количество ретикулоцитов и новые информативные показатели, характеризующие их объем и степень зрелости. Коэффициент вариации для количества ретикулоцитов составляет 2,1-9,2 %. Достоверность результатов исследования ретикулоцитов определяется оптимальными сроками хранения проб крови (при комнатной температуре не более 6-ти часов, в холодильнике — 48-ми часов после взятия).

2. Определены референтные диапазоны для относительного и абсолютного количества ретикулоцитов, средних объемов ретикулоцитов и сферулированных эритроцитов, фракции незрелых ретикулоцитов, относительного и абсолютного количества незрелых ретикулоцитов у взрослых мужчин и женщин, позволяющие правильно оценивать и интерпретировать полученные результаты.

3. Регенераторная стадия железодефицитной анемии характеризуется нормальными значениями относительного и абсолютного содержания ретикулоцитов и незрелых ретикулоцитов, что свидетельствует об активном эритропоэзе, а также снижнным средним объемом ретикулоцитов и сферулированных эритроцитов, коррелирующим со средним объемом эритроцитов.

4. Наиболее информативными данными при В^-дефицитной анемии являются: снижение абсолютного количества ретикулоцитов и незрелых ретикулоцитов, что отражает изменение пролиферативного потенциала эритрокариоцитов; увеличение среднего объема ретикулоцитов и сферулированных эритроцитов, соответствующее макроцитозу эритроцитов.

5. Анемия при ХПН и аутоиммунная гемолитическая анемия характеризуются повышением фракции незрелых ретикулоцитов, их относительного и абсолютного количества, что может служить индикатором эритропоэтической активности костного мозга.

6. В динамике лечения анемий увеличение фракции незрелых ретикулоцитов, относительного и абсолютного их количества на 2 — 3 дня опережает подъем общего числа ретикулоцитов крови, что позволяет использовать данные показатели как более чувствительные индикаторы оценки эффективности терапии.

7. Оптимальными сроками проведения исследования показателей незрелых ретикулоцитов являются при ЖДА - 14-16 дни лечения, при В^-дефицитной анемии - 3-4 дни лечения, при ХПН — 6-7 дни лечения.

- 107

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При выборе метода исследования ретикулоцитов необходимо отдавать предпочтение автоматизированному методу, имеющему существенные преимущества перед микроскопическим.

2. С целью оптимизации дифференциальной диагностики анемий следует производить автоматизированное исследование ретикулоцитов у всех пациентов, имеющих сниженные эритроцитарные показатели.

3. Для получения качественных и наиболее достоверных результатов при автоматизированном исследовании ретикулоцитов требуется строго соблюдать сроки и условия хранения проб крови.

4. С целью оценки результатов исследования ретикулоцитов рекомендуем использовать разработанные нами референтные величины для взрослых мужчин и женщин.

5. При проведении дифференциальной диагностики анемических состояний необходимо широко использовать показатели, характеризующие степень зрелости и средний объем ретикулоцитов, в первую очередь их абсолютные величины.

6. Более ранняя оценка состояния эритропоэза с помощью дополнительных ретикулоцитарных показателей при лечении анемий диктует необходимость широкого использования в клинической практике современных высокотехнологичных гематологических анализаторов, позволяющих производить исследование ретикулоцитов.

7. Рекомендуем включать в оптимальную схему комплексной диагностики и оценки эффективности лечения анемий многопараметровый анализ ретикулоцитов, что наиболее адекватно отвечает современным требованиям.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Коленкин, Сергей Миронович, 2004 год

1. Байдун Л.В., Логинов А.В. Значение автоматического анализа крови в клинической практике //Гематология и трансфузиология.- 1996.-Т.41, №2.- С.36-40.

2. Бирюкова Л.С., Пурло Н.В. Анемия у больных с терминальной стадией хронической почечной недостаточности на программном гемодиализе // Клиническая лабораторная диагностика.- 2002.- № 9.- С.17.

3. Власов В.В. Эффективность диагностических исследований.- М.: Медицина, 1998.- 256 с.

4. Воробьев П.А. Анемический синдром в клинической практике.- М., 2001.- 168 с.

5. Гуревич К.Я. Человеческий рекомбинантный эритропоэтин (эпокрин) в лечении анемии.- С.-П., 2001.- 80 с.

6. Долгов В.В., Луговская С.А., Морозова В.Т., Почтарь М.Е. Лабораторная диагностика анемий.- М., 2001.- С.10-16.

7. Дягилева О.А., Сарычева Т.Г., Козинец Г.И. Определение содержания ретикулоцитов в периферической крови: клиническое значение и современные методические возможности //Гематология и трансфузиология.- 2000.- Т.45, № 2.- С.35-37.

8. Иделъсон Л.И., Дидковский Н.А., Ермилъченко Г.В. Гемолитическая анемия.- М., 1975.

9. Кассирский И.А., Алексеев Г.А. Клиническая гематология.- М., 1955.

10. Кассирский И.А., Алексеев Г.А. Клиническая гематология.- М., 1970.- 800 с.1L Клиническая гематология /Под ред. Берчану Шт., пер. с румынск.- Бухарест: Мед. изд-во, 1985.

11. Козинец Г.И., Макаров В.А. Исследование системы крови в клинической практике.- М., 1997.- С. 60-71.

12. Козинец Г.И., Погорелое В.М., Шмаров Д. А. и др. Клетки крови. Современная технология их анализа.- М.:Триада-фарм, 2002.-200 с.

13. Кост Е.А. Справочник по клиническим лабораторным методам исследования.- М., 1975.- С.29-31.

14. Кузнецова Ю.В., Ковригина Е.С., Байдун Л.В. и др. Использование эритроцитарных индексов и показателей обмена железа в дифференциальной диагностике микроцитарных анемий // Гематология и трансфузиология.- 2000.- Т.45, №6.- С.46-48.

15. Кузнецова Ю.В., Ковригина Е.С., Токарев Ю.Н. Оценка эритроцитарных параметров автоматического анализа крови для диагностики анемий //Гематология и трансфузиология.- 1996.-Т.41, №5.- С.44-47.

16. Луговская С.А., Миронова И.И., Морозова В.Т., Почтарь М.Е. Гематологические анализаторы в диагностике железодефицитных анемий //Клиническая лабораторная диагностика.- 1996.- №6.-С.7-9.

17. Луговская С.А., Миронова И.И., Почтарь М.Е. и др. Диагностика железодефицита с помощью современных гематологических анализаторов /Гематология и трансфузиология.- 1996.- Т.41, №4.-С.31-33.

18. Луговская С.А., Морозова В.Т., Почтарь М.Е., Долгов В.В. Лабораторная гематология.- М.: Лаб-пресс, 2002.- 120 с.

19. Луговская С.А., Почтарь М.Е. Современная оценка состояния эритрона и метаболизма железа //Клиническая лабораторная диагностика.- 2002.- №9.- С. 16.

20. Меньшиков В.В. (ред.) // Качество клинических лабораторных исследований. Новые горизонты и ориентиры.- М., 2002.- 304 с.

21. Меньшиков В.В. (ред.) Лабораторные методы исследования в клинике.- М.: Медицина, 1987.- С. 118-119.

22. Меньшиков В.В. (ред.) Обеспечение качества лабораторных исследований. Преаналитический этап.- М., 1999.- С.52-53.

23. Морозова В.Т. Гематологические исследования в диагностике заболеваний //Клиническая лабораторная диагностика.- 1996.-№6.- С.3-7.

24. Мосягина Е.Н., Федоров Н.А., Гудим В.И. и др. Нормальное кроветворение и его регуляция.- М., 1976.- С.341 — 457.

25. Назаренко Г.И., Кишкун А.А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований.- М., 2000.- С.37-38.

26. Николаев А.Ю., Козловская JI.B. Эритропоэтин: применение на ранней и диализной стадиях хронической почечной недостаточности //Consilium medicum. Нефрология.- 2000.- Т.З, №7.- С.339-342.

27. Поляков И.В., Соколова И. С. Практическое пособие по медицинской статистике.- Л.: Медицина, 1975.

28. Почтарь М.Е. Клинико-диагностическое значение показателей крови, получаемых на гематологических анализаторах: Диссертация канд. мед. наук.- М., 1996.- 114 с.

29. Почтарь М.Е., Зубрихина Г.Н., Луговская С.А., Долгов В.В. Использование современных гематологических анализаторов в клинико-диагностических лабораториях //Клиническая лабораторная диагностика.- 1996.- №6.- С. 10-24.

30. Почтарь М.Е., Романова JI.A. Диагностическое значение счета ретикулоцитов // Лаборатория.- 1999.- №1.- С.10-11.

31. Руководство по гематологии /Под ред. А.И. Воробьева.: В 2 т.-М.: Медицина, 1985.

32. Тиц Н.У. (ред.). Энциклопедия клинических лабораторных тестов: Пер. с англ.- М., 1997.- С.404-406.

33. Шевченко Н.Г. Лабораторная диагностика нарушений обмена железа //Клиническая лабораторная диагностика.- 1997.- №4.-С.25-32.

34. Abbott Diagnostics Division: Reticulocytes. Methods and Clinical Applications.- May 1996.

35. Aving A.S., Kellermeyer R.W., Tarlov A., Schrier S., Carson P.E. Biochemical and genetic aspects of primaquine-sensitive hemolytic anemia //Annals of Internal Medicine.- 1958.- Vol.49.- P.240-248.

36. Bain В., Cavill I.A.J. Hypochromic macrocytes; are they reticulocytes? //Journal of Clinical Pathology.- 1993.- Vol.46.- P.963-964.

37. Baldini M., Pannacclulli I. The maturation rate of reticulocytes //Blood.- I960.- Vol.15.- P.614.

38. Batjer J.D., Lin L.I., Fritsma G.A. Stability and reproducibility of reticulocyte analysis by flow cytometry. Hematology Monograph III, Baxter Diagnostics.- 1991.- P.l-18.

39. Beckman Coulter Company: Coulter GEN-S System Operator's Guide. Coulter Corporation № PN 42372228B.- Miami, Florida, Nov 1998.

40. Bessis M. Cellules du sang normal et pathologique.- Masson, Paris, 1972.

41. Bessman J.D., Gilmer P.R., Gardner F.H. Improved classification of anemias by MCV and RDW //American Journal of Clinical Pathology.-1983.- Vol.80.- P.322-326.

42. Bowen D., Bentley N., Hoy Т., Cavill /. Comparison of a modified Thiazole Orange technique with a fully automated analyser forreticulocyte counting //Journal of Clinical Pathology.- 1991.- Vol.44.1. P.130-133.

43. Brecher G. New methylene blue as a reticulocyte stain //American Journal of Clinical Pathology.- 1949.- Vol.19.- P.895-896.

44. Brecher G., Stohlman F. The macrocytic response to erythropoietin stimulation, //in "Erythropoiesis" (Eds: Jacobsson, L.O. & Doyle, M.), Grune and Stratton, Orlando.- 1962.- P.216.

45. Brugnara C., Hipp M.J., Irving P.J., Lathrop H., Lee P.A., Minchello E.M., Winkelman J. Automated reticulocyte counting and measurement of reticulocyte cellular indices //American Journal of Clinical Pathology.- 1994.- Vol.102.- P.623-632.

46. Brugnara C., Laufer M.R., Friedman A.J., Bridges K., Piatt O. Reticulocyte hemoglobin content (CHr): early indicator, of iron deficiency and response to therapy //Blood.- 1994.- Vol.83.- P.3100.

47. Brun A:, Gaudernakk G., Sandberg S. A new method for isolation of reticulocytes. Positive selection of human reticulocytes by immunomagnetic separation //Blood.- 1990.- Vol.76.- P.2397-2403.

48. Carstensen H., Ornvold K., Cohen B.J. Human parvovirus B19 infection associated with prolonged erythroblastopenia in a leukemic child //Pediatric Infectious Disease Journal.- 1989.- Vol.8.- P.56.

49. Carter J.M., McSweeney P.Ai, Waken P.J., Nemet A.M. Counting reticulocytes by flow cytometry: Use of thiazole orange //Clinical and Laboratory Haematology.- 1989.- Vol.11.- P.267-271.

50. Cavill /. The assessment of erythropoiesis //Erythropoiesis.- 1992.-Vol.3.- P.90-92.

51. Cavill I. The rejected reticulocyte // British Journal of Haematology.-1993.- Vol.84.- P.563-565.

52. Chasis J.A., Prenant M., Leung A., Mohandes N. Membrane assembly and remodeling during reticulocyte maturation //Blood.- 1989.- Vol.74. -P.l112-1120.

53. Corash L.M., Rheinschmidt M., Lieu S. Enumeration of reticulocytes using fluorescence-activated flow cytomerty //Pathology and Immunopathology Research.- 1988.- Vol.7.- P.381.

54. Crosby C. Reticulocyte count //Archives of Internal Medicine.-1981.- Vol.141.- P.1747-1748.

55. Crosby W.H., Finch C.A., Haurani F.I., Stohlman F., Wasserman L. Modern methods for quantitation of red blood cell production and destruction erythrokinetics //Blood.- 1961.- Vol.18.- P.225-235.

56. Crouch J.Y., Kaplow L.S. Relationship of reticulocyte age to polychromasia, shift cells and shift reticulocytes //Archives of Pathology and Laboratory Medicine.- 1985.- Vol.109.- P.325-329.

57. CSH. // ICSH guidelines for reticulocyte counting by microscopy on supravitally stained preparations.- 1992.- WHO/LBS/92.3.

58. Dacie J. V., Lewis S.M. The reticulocyte count //Practical Haematology.- Churchill Livingstone, Edinburgh.- 1984.- P.58061.

59. Davis B.H., Bigelow N.C. Flow cytometric reticulocyte quantification using Thiazole Orange provides clinically useful reticulocyte maturity index // Archives of Pathology and Laboratory Medicine.- 1989.-Vol.113.- P.684-689.

60. Davis B.H., Bigelow N.C. Clinical flow cytometric reticulocyte analysis //Pathobiology.- 1990.- Vol.58.- P.99-106.

61. Davis B.H., Bigelow N.C. Automated reticulocyte analysis. Clinical practice and associated parameters //Hematology and Oncology Clinics of North America.- 1994.-Vol.8.- P.617-630.

62. Davis B.H., Bigelov N.C. Reticulocyte analysis and reticulocyte maturity index //Methods in Cell Biology.- 1994.- Vol.42.- P.263-274.

63. Davis B.H., DiCorato M., Bigelow N.C., Langweiler M.H. Proposal for standardization of flow cytometric reticulocyte maturity index (RMI) measurements//Cytometry.- 1993.- Vol.14.- P.318-326.

64. Dustin P. Contribution a 1-etude histophysiologique et histochimique des globules rouges des vertebres //Archives Biologique.- Paris, 1944.-Vol.55.- P.285-392.

65. Davies S., Fegan C., Kendall R., Beguin Y., Cavill I. Serum erytropoietin during autologous bone marrow transplantation: relationship to measures of erythroid activity //Clinical and Laboratory Haematology.- 1995.-Vol.17.- P.139-144.

66. Davis B.H., Ornvold K, Bigelow N.C. Flow cytometric reticulocyte maturity index: A useful laboratory parameter of erythropoietic activity in anemia //Cytometry.- 1995.- Vol.22.- P.35-39.

67. Erslev A. Humoral regulation of red cell production //Blood.- 1953.-Vol.8.- P.349-357.

68. Eschbach J., Kelli M., Haley N., Abels R., Adamson J. Treatment of the anaemia of progressive renal failure with recombinant human erythropoietin //New England Journal of Medicine.- 1989.- Vol.322.-P. 1488-1493.

69. European best practice quidelines for the management of anaemia in patients with chronic renal failure /Nephrology, Dialisis, Transplantation.- 1999.- Vol.14, Suppl.5.- P.l-50.

70. McFadzean A.J.S., Davis L.J. Ironstaining erythrocytic inclusions with especial reference to acquired haemolyticanaemia //Glasgow Medical Journal.- 1947.- Vol.28.- P.237.

71. Feelders R., Vreugdenhil G., van Dijk J., Swaak A., van Eijk H. Decreased affinity and number of transferrin receptors on erythroblastsin the anemia of rheumatoid arthritis //American Journal of Hematology.1993.- Vol.43.- P.200-204.

72. Ferguson D.J., Lees S., Gordon P.A. Evaluation of reticulocyte counts by flow cytometry in a routine laboratory //American Journal of Hematology.- 1990.- Vol.33.- P.13-17.

73. Ferrata A., Storti E. Le malattie del sangque. Seconda edizione.-Vallardi, Milano, 1958.

74. Finch C.A. Some quantitative aspects of erythropoesis //Annals of the New York Academy of Sciences.- 1959.- Vol.77.- P.410-416.

75. Finch C.A., Wolff J.A., Rath C.E., Fluharty R.G. Iron metabolism. Erythrocyte iron turnover //Journal of Laboratory and Clinical Medicine.- 1949.- Vol.34.- P.1480-1490.

76. Fourcade C.H., Jary L., Belaouni H. Reticulocyte Analysis Provided by the Coulter GEN.S: Significance and Interpretation in Regenerative and Nonregenerative Hematologic Conditions //Laboratory Hematology.- 1999.- Vol.5.- P. 1-7.

77. Frazier J.L., Caskey H.J., Yojfe M., Seligman P.A. Studies of the transferrin receptor on both human reticulocytes and nucleated cells in culture //Journal of Clinical Investigation.- 1982.- Vol.69.- P.853-865.

78. Gilmer P.R., Koepke J.A. The reticulocyte: An approach to difinition //American Journal of Clinical Pathology.- 1976.- Vol.66.- P.262-267.

79. Gordon A.S., Lobue J., Dornfest B.S., Cooper G.W. Reticulocyte and leukocyte release from isolated perfused rat legs and femurs. // In: Jacobson L.O. and Doyle (Eds), Erythropoiesis, P. 321. Published by Grune and Stratton.

80. Griffin T.C., Squires J.C., Timmons C.F., Buchana G.R. Chronic human parvovirus B19-induced erythroid hypoplasia as the initial manifestation of human immunodeficiency virus infection //Journal of Pediatrics.- 1991.- Vol.118.- P.899.

81. Guyatt G., Oxman A., AH M., Willan A. W.M., Patterson C. Laboratory diagnosis of iron deficiency: an overview //Journal of General and Internal Medicine.- 1992.- Vol.7.- P.145-153.

82. Hackney J.R., Cembrowski G.S., Prystowsky M.B., Kant J.A. Automated reticulocyte counting by image analysis and flow cytometry //Laboratory Medicine.- 1989.- Vol.20.- P.551-555.

83. Hansson G.K, Andersson M., Jarl H., Stemme S. Flow cytometric analysis of reticulocytes using an RNA-binding fluorochrome //Scandinavian Journal of Clinical and Laboratory Investigation.- 1992.-Vol.52.- P.35-41.

84. Hawes J.B. A study of reticulated red blood cell corpuscles by means of vital staining. Its relation to polychromatophilia and stippling //Boston Medical and Surgical Journal.- 1909.- Vol.161.- P.493.

85. Heath C.E., Daland G.A. The life of reticulocytes //Archives of Internal Medicine.- 1930.- Vol.46.- P.533-551.

86. Heilmeyer L. Blutfarbstoffwechselstudien //Deutsches Archiv fur Klinische Medizin.- 1931.- Vol.171.- P.123-153.

87. Hertenstein В., Kurrle E., Redenbacher M., Arnold, Heimpel H. Pseudoreticulocytosis in a patient with myelodysplasia //Annals of Hematology.- 1993.- Vol.67.- P. 127-128.

88. Hillman R.S. Characteristics of marrow production and reticulocyte maturation in normal man in response to anemia. //Journal of Clinical Investigation.- 1969.- Vol.48.- P.443.

89. Hillman R.S., Finch C.A. The misused reticulocyte //British Journal of Haematology.- 1969.-Vol.17.- P.313-315.

90. Hillman R.S., Finch C.A. Red Cell Manual. //FA Davis.-Philadelphia, 1985.

91. Houwen B. Reticulocyte maturation //Blood Cells.- 1992.- Vol. 16.-P.167-186.97. van Hove L., Janik J., Marshall P. Cell-Dyn 3500 Reticulocyte Assay //Abbott Diagnostics Poster.- 1995.

92. Iwamoto N., Kawaguchi Т., Nagakura S. et al. Markedly high population of affected reticulocytes negative for decayaccelerating factor and CD59 in pararoxysmal nocturnal hemoglobinuria //Blood.- 1995.-Vol.85.- P.2228-2232.

93. Kendall R.G., Jeffries R., Cavill I., Norfolk D.R. Relationship between endogenous erythropoietin levels, reticulocyte count and reticulocyte RNA distribution //Annals of the New York Academy of Sciences.-1994.- Vol.718.- P.353-355.

94. Key J.A. Studies on erythrocytes, with special reference to reticulum, polychromatophilia and mitochondria //Archives of Internal Medicine.-1921.-Vol.28.- P.511-549.

95. Khuhapinant A., Bunyaratvej A., Tatsumi N., Pribvai M., Fucharoen S. U Number and maturation of reticulocytes in various genotypes of thalassaemia assessed by flow cytometry.- Acta Haematologia.- 1994.-Vol. 91.- P. 119-125.

96. Koepke J.F. Reticulocyte counting //Practical Laboratory Hematology.- Churchill Livingstone, Edinburgh.- 1991.- P.99-107.

97. Kojima K, Niri M., Setogushi K, Tsuda /., Tatsumi N. An automated optoelectronic reticulocyte counter //American Journal of Clinical Pathology.- 1989.- Vol.92.- P.57-61.

98. Kosenov W. Uber den strukturwandel der basophilen substanz junger erythrozyten in fluoreszenzmikroskop //Acta Haematologica.- 1952.-Vol.7.- P.360-368.

99. Kurtzman G., Frickhofen N., Kimball J. Pure red cell aplasia of 10 years duration due to persistent parvovirus В19 infection and its cure with immunoglobulin therapy //New England Journal of Medicine.-1989.- Vol.321.- P.519.

100. Kurtzman G., Ozava K, Cohen B. Bone marrow failure due to chronic В19 parvovirus infection //New England Journal of Medicine.-1987.- Vol.317.- P.287.

101. Lakomek M., Schroter W., Maeyer G., Winkler H. On the diagnosis of erythrocyte enzyme defects in the presence of high reticulocyte counts //British Journal of Haematology.- 1989.- Vol.72.- P.445-451.

102. Lee L.G., Chen C-H., Chiu L.A. Thiazole Orange: A new dye for reticulocyte analysis //Cytometry.- 1986.- Vol.7.- P.508-517.

103. Lessin L.S., Bessis M. Morphology of the erythron.- //Hematology /Williams, W.J., Beutler, E., Erslev, A.J., Rundles, R.W.- McGraw Hill, 1972.- P.62-93.

104. Levis S.M., Garvey B.J., Rovan R.M. et al Evaluation of Sysmex R1000 automated reticulocyte analyzer //Department of Health, NHS Procurement Directorate.- London, 1990.

105. Lin C., Hsu H., Chau W., Jiang M., Chiu C. Reticulocyte count with maturation fractions in pancytopenic evaluation by a fulli automatedcounter //Journal of Clinical and Laboratory Analysis.- 1993.- Vol.7.-P.371-375.

106. Lofsness K.G., Kohnke M.L., Geier N.A. Evaluation of automated reticulocyte counts and their reliability in the presence of Howell-Jolly bodies //American Journal of Clinical Pathology.- 1994.- Vol. 101.-P.85-90.

107. Lohmann R.C., Crawford L.N., Wood D.E. Proficiency testing in reticulocyte counting //Clinical and aalaboratory Haematology.- 1994.-Vol.16.- P.57-64.

108. London I.M. Metabolism of the mammalian erythrocyte //Bulletin of the New York Academy of Medicine.- I960.- Vol.36.- P.79-96.

109. Losek J., Hellmich Т., Hoffman G. Diagnostic value of anemia, red blood cell morphology, and reticulocyte count for sickle cell disease //Annals of Emergency Medicine.- 1992.- Vol.21.- P.915-918.

110. Ludwig H., Fritz E., Kotzjnann H., Hocker P., Gisslinger H., Barnas U. Erythropoietin treatment of anaemia associated with multiple myeloma //New England Journal of Medicine.- 1989.- Vol.322.- P.1693.

111. Major A., Bauer С., Breymann C., Huch A., Huch R.I. Rh-erythropoietin stimulates immature reticulocyte release in man //British Journal of Haematology.- 1994.- Vol.87.- P.605-608.

112. Makler M.T., Lee L.G., Recktenwald D. Thiazole orange. A new dye for Plasmodium species analysis //Cytometry.- 1987.- Vol.8.- P.568-570.

113. Means R., Olsen N., Krantz S. et al. Treatment of the anaemia ofrheumatoid arthritis with recombinant human erythropoietin: Clinical andin vitro studies //Arthritis and Rheumatism.- 1989.- Vol.32.- P.638-642.

114. Metzger D.K., Charache S. Flow cytometric reticulocyte counting with thioflavin T in a clinical hematology laboratory //Archives of Pathology and Laboratory Medicine.- 1987.- Vol.111.- P.540.

115. Miale J.В. Laboratory Medicine Hematology //CV Mosby Co.-1977.- St Louis. Fifth Edition.- P.561-562.

116. MinotG.R., CohnRJ., MurphyW.P., Lawson H.A. Treatment of pernicious anemias with liver extract: Effects upon the production of immature and mature red cells //American Journal of Medical Science.-1928.-Vol.175.- P.599-621.

117. NCCLS Method for reticulocyte counting; proposed standard //NCCLS Document H16-P.- Villanova, Pennsylvania, 1985.

118. NCCLS Reticulocyte counting by flow cytometry; proposed guideline //NCCLS Document H44-P.- Villanova, Pennsylvania, 1993.

119. NKF-DOQI Work Group. NKF-DOQI clinical practice guidelines for the treatment of anemia of chronic renal failure //Am. J. Kidney Dis.- 1997.- Vol.30, Suppl. 3.- P.192 240.

120. Nobes P.R., Carter A.B. Reticulocyte counting using flow cytometry //Journal of Clinical Pathology.- 1990.- Vol.43.- P.675-678.

121. Osgood E.E., Baker R.L., Wilhelm M.M. Reticulocyte counts in healthy children //American Journal of Clinical Pathology.- 1934.-Vol.4.- P.292-296.

122. Patel V.P., Ciechanover A, Piatt O., Lodish H.F. Mammalian reticulocyte lose adhesion to fibronectin during maturation to erythrocytes //Proceedings of the National Academy of Scyences USA.-1985.- Vol.82.- P.440-459.

123. Paterakis G.S., Lykopoulou L., Papassotirou J., Stamulakatou A., Kattamis C., Loukopoulos D. Flow-cytometric analysis of reticulocytes in normal cord blood //Acta Haematologia.- 1993.- Vol.90.- P.182-185.

124. Peebles D.A., Hochberg A., Clarke T.D. Analysis of manual reticulocyte counting //American Journal of Clinical Pathology.- 1981.-Vol.76.- P.713-717.

125. Paterakis G., Voskaidou E., Loutradim A., Rombosm J., Loukopoulos D. Reticulocyte counting in thalassemic and other conditions with the R-1000 Sysmex analyzer //Annals of Hematology.- 1994.- Vol.63.-P.218-222.

126. Persons E.L. Studies on red blood cell diameter. III. The relative diameter of immature (reticulocytes) and adult red blood cells in health and anemia, especially in pernicious anemia //Journal of Clinical Investigation.- 1929.- Vol.7.- P.615-629.

127. Robertson O.H. The effects of experimental plethora on blood production //Journal of Experimental Medicine.- 1917.- Vol26.- P.221-238.

128. Schimenti K.J., Lacerna K., Wamble A. et al. Reticulocyte quantification by flow cytometry, image analysis, and manual counting //Cytometry.- 1992.- Vol.13.- P.853-862.

129. Seip M. Reticulocyte studies: The liberation of red blood corpuscles from the bone marrow into the peripheral blood and the production of erythrocytes elucidated by reticulocyte investigations //Acta Medica Scandinavica.- 1953.- P.282.

130. Seligman P.A., Allen R.H., Kirchanski S.J., Natale P.J. Automated analysis of reticulocytes using fluorescence staining with both acridine orange and an immunofluorescence technique //American Journal of Hematology.- 1983.- Vol.14.- P.57-66.

131. Sher G.D., Pinkerton P.H., Ali M.A.Q., Senn J.S. Myelodysplastic syndrome with prolonged reticulocyte survival mimicking hemolytic disease //American Journal of Clinical Pathology.- 1994.- Vol.101.-P.149-153.

132. Simpson C.F., Kling J.M. The mechanism of mitochondrial extrusion from phenylhydrazine-induced reticulocytes in the circulating blood //Journal of Cell Biology.- 1968.- Vol.36.- P.103.

133. Takubo Т., Kitano K., Ohto Y., Ikemoto Т., Liluchi Т., Inai S. The usefulnessof the R-1000 automated reticulocyte counter in a clinical hospital laboratory //European Journal of Haematology.- 1989.-Vol.43.- P.88-89.

134. Tanke H.J., van Vianer P.H., Emiliani F.M.F. Changes in erythropoiesis due to radiation or chemotherapy as studied by flow cytometric determination of peripheral blood reticulocytes //Histochemistry.- 1986.- Vol.84.- P.544-548.

135. Tarallo P., Humbert J-C., Mahassen P., Fournier В., Henny J. Reticulocytes: Biological variations and reference limits //European Journal of Haematology.- 1994.- Vol.53.- P.ll-15.

136. Tatsumi N., Tsuda I., Kojima K., Niri M., Setoguchi K. An automated reticulocyte counting method. Preliminary observations //Medical Laboratory Sciences.- 1989.- Vol.46.- P.157-160.

137. The Coulter GEN-S. Reticulocyte and Associated Parameters.-Beckman Coulter, Inc.- Nyon, 2001.

138. Tichelli A., Gratwohl A., Driessen A. et al. Evaluation of the Sysmex R-1000. An automated reticulocyte analyzer //American Journal of Clinical Pathology.- 1990.- Vol.93.- P.70-78.

139. Tsuda I., Tatsumi N. Maturity of reticulocytes in various hematological disorders //European Journal of Haematology.- 1989.-Vol.43.- P.251-254.

140. Valentine W.N. Hemolytic anemia and inborn errors of metabolism.-1979 //Blood.- Vol.14.- P.258-267.

141. Vander J.B., Harris C.A., Ellis S.R. Reticulocyte counts by means of fluorescence microscopy //Journal of Laboratory and Clinical Medicine.- 1963.- Vol.62.- P.132.

142. Vreugdenhil G., Kroos M., van Eijk H., Swaak A. Impaired iron uptake and transferrin binding in the erythroblasts in the anaemia of rheumatoid arthritis //British Journal of Rheumatology.- 1990.- Vol.29.-P.335-339.

143. Watanabe K., Kawai Y., Takeuchi K., Shimizu N., Ikeda Y., Houwen B. Reticulocyte maturity as an indicator for estimating qualitative abnormality of erythropoiesis //Journal of Clinical Pathology.- 1994.-Vol.47.- P.736-739.

144. Whitby L.E.H., Britton C.J.C. Disorders of the blood //Published by J and A Churchill.- 1950.- P. 74.

145. Wells D., Diagneault-Creech C., Simrell C. Effect of iron status on reticulocyte mean channel fluorescence //American Journal of Clinical Pathology.- 1992.- Vol.97.- P.130-134.

146. Wernli M., Tichelli A., von Planta M., Gratwohl A., Speck B. Flow cytometric monitoring of parasitaemia during treatment of severe malaria by exchange transfusion //European Journal of Haematology.-1991.- Vol.46.- P.121-123.

147. Wintrobe M.M. Clinical Haematology //Published by Henry Kimpton.- 1961.- P.92.