Клиническое значение генетических и количественных показателей клеток опухоли при раке яичников тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, доктор медицинских наук Паниченко, Игорь Валерианович

• Паниченко, Игорь Валерианович
• доктор медицинских наук
• 2007

Оглавление диссертации доктор медицинских наук Паниченко, Игорь Валерианович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Диагностика и выбор тактики лечения больных раком яичников

1.12 Хирургическое лечение первичных бальных раком янчнюсов.„

1.1.3. Химиотерапия первой линии при раке якчннков.~.„.-.

1.2. Определен не количественных параметров клеток опухоли методом лазерной ДНК-проточной иитофлуорометрнн у больных раком янчннкоа--------------------------------------------------—

1.3. Определение делений в различных хромосомных локусах опухшей янчников.„-.

1.4. Значение молекулярно-биологичсского маркера р53 для больных раком яичников . г . . . и ц птти и

ГЛАВА И. КЛИНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Клиническая характеристика больных.

2.2. Методика лазерной ДНК-проточной нитофлуорометрии.

2.3. Методика определения делений различных хромосомных локусов в новообразованиях яичников.

2.4. Метод определения экспрессии р53 мутаитного типа в опухолевых клетках .■■—■.—.■■.—

ГЛАВА III. Комбинированное лечение больных раком яичников.

3.1. Результаты первичного лечения больных раком янчннкон ! стадии

3.2. Результаты первичного лечения больных раком яичников [[ стадии

33- Результаты первичного лечения больных раком яичников III стадии

3.4. Результаты первичного лечения больных раком яичников IV стадии .—.—„„„„„.„,„—

3.5, Заключен ие.„,..„„.„„„.

ГЛАВА IV. ДНК-проточно цнтофлуорометрнческие параметры в пограничных и злокачественных эпителиальных опухолях яичников,,—

4.1. Определение плоидности, числа клеток в СО/1, в, 02+М фазах клеточного цикла и пролифератнвной активности в пограничных опухолях янчннков.„.

4.2. Определение плоидности, числа клеток в СО/1, 3, С2+М фазах клеточного цикла и пролнфератиьной активности опухолей у больных раком яичников .„„

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клиническое значение генетических и количественных показателей клеток опухоли при раке яичников»

Актуальность проблемы. В структуре заболеваемости злокачественными новообразованиями у женщин в России в 2004 году рак яичников занимал 7 ранговое место (4,9%), под наблюдением находилось 72,5 тыс. больных. При этом годовая летальность составила 7400 больных (5,7% больных злокачественными новообразованиями), занимая пятое ранговое место по смертности среди всех злокачественных новообразований у женщин (Аксель Е.М., 2006). Бессимптомное течение заболевания на начальных этапах приводит к тому, что о 75-80% наблюдений рак яичников диагностируется в III-IV стадии болезни, когда отдалённые результаты лечения малоутешительны (Ozols R.F., 2005; Heinlz A.P.M., 2001). В первую очередь именно неудовлетворительные отдалённые результаты лечения, сложность диагностики на ранних стадиях заболевания диктуют интерес исследователей к данной проблеме.

Подавляющему количеству больных проводится комбинированное или комплексное лечение, в котором хирургическому методу отводится одно из основных мест, В настоящее время считается общепризнанным тот факт, что размер остаточной опухоли после хирургического лечения во многом определяет прогноз у больных раком яичников, Поэтому широкое внедрение в практику комбинированных и расширенных хирургических вмешательств может позволить улучшить отдалённые результаты лечения, но это обстоятельство, в свою очередь, требует проведения лечения в специализированных клиниках, где имеются специалисты высокой квалификации,

Эффективность лечения больных РЯ во многом зависит от адекватной опенки клинических и морфологических параметров, имеющих прогностическое значение. Нельзя не отметить чрезвычайно важную роль адекватного интраолерацнонного стаднрования, которое на практике проводится далеко не всегда. Вместе с тем, используемые в настоящее время традиционные клнннко-морфологнческне факторы не позволяют реально оценить злокачественный потенциал конкретной опухоли Известно, что даже в пределах одной стаднн заболевания н морфологической формы опухоли прогноз может существенно варьировать Появившиеся в последнее время современные методики позволяют объективно определять биологические параметры опухоли различных локализаций, Какие из »их наиболее предпочлчтельны для применения в широкой клинической практике? На основании каких из них можно прогнозировать эффект химиотерапии и в зависимости от этого своевременно корригировать план лечения? Как выделить группу больных с наиболее злокачественным и агрессивным течением заболевания?

В этой связи логичными выглядят исследования, которые стали возможны благодаря внедрению метода лазерной ДНК-проточной цитофлуоро-метрни, Определяемое с его помощью содержание ДНК в клетках опухоли, её илоидность, соотношение клеток в различных фазах клеточного цикла, исключают субъективизм исследования и позволяют выявить особенности пролиферации и аномальное содержание ДНК в ядрах клеток {Винокуров В.Л., 2004; Randall М„ 2005). В последнее время появились данные о применении метода лазерной ДНК-проточной питофлуорометркн при раке молочной железы, почки, желудка, эндометрия и шейки матки, толстой кишки, подчёркивается прогностическая значимость данных показателей (Не чушки на В.М., 2002; Малиев Ф.М., 2005; Богатырев В.Н., 2005; Хайленко В А, 2005; Abou-Rebyeh Ч. 2001; KIorin G., 2003).

В настоящее время морфологическая диагностика некоторых форм пограничных опухолей ян чинков и их дифференциальная диагностика со злокачественными новообразованиями яичников вызывает затруднения, что влияет на выработку правильной лечебной тактики (Карселадзе А.И. 2000; Коэачснко В-П-, 2005; Rao G.G. et al.» 2005). Вместе с тем по данным Ozols R.F- с» al., 2005, они составляют 12-15% среди всех опухолей яичников. Поэтому есть необходимость щучить достаточное количество материала для объективной характеристики клеток пограничных опухолей и рака яичников с целью последующего использования банка количественных параметров а дифференциальной диагностике,

В настоящее время не существует цельного н научно обоснованного представления о патогенезе опухолей янчннков, знание которого значительно приблизило бы как к решению проблемы ранней диагностики, так и к возможности проведения патогенетической терапии. Определение геномных нарушений, детерминирующих развитие опухоли, степень её злокачественности. метастатический потенциал и скорость прогрессии, янляется приоритетной областью молекулярно-генетическнх исследований в современной онкологии. В настоящее время известно несколько классов генов, нарушения которых приводят к злокачественной трансформации клоткн. Решающая роль в этом процессе отводится протоонкогенам и гснам-супрессорам (антнонкогс-на«Х являющимися нормальными клеточными генами с ключевыми функциями регуляции клеточного роста и дифференцирован, В норме некоторые протоонкогены стимулируют процессы, связанные с клеточным делением, а гены-су прессоры отвечают за era подавление. Суммарным эффектом активации онкогенов и инактивации геиан-супреесоров является возрастающая пролнфератнвная активность клеток н нарушение их днфференцнровкн. Одним in возможных механизмов инактивации гена-су прессора является утрата хромосомного локуса (деления). Считается, что делении участков хромосом отражают инактивацию расположенных в них супрессорных генов, причём последние могут оставаться неидентнфиинрованнымн (Хансон К.П., Имянн-тов Е.Н., 2000). Для определения делеций, изучения известных и выявления потенциальных генов-су прессоров опухолевого роста, в последние годы широко используется метод определения потерн гетерознготностн (Loss of heterozygosity) с использованием микросателлнтных маркеров для амплификации л о кусов, содержащих микросателлнтные шмели. Определение делеций в хромосомных локусах опухолях может идентифицировать гены-су прессоры, участвующие в процессе канцерогенеза при раке яичников. Исследования делеций некоторых локусов при злокачественных опухолях янчникое демонстрируют значительную вариабельность результатов, что диктует необходимость собственных исследований, Другим аспектом исследования может служить клиническая оценка найденных нарушений.

Одним m основных компонентов в регуляции системы аггоптоза (программируемой гибели клетки) н клеточного цикла является ген-сунрессор опухолевого росга р53 Однако» в результате приобретенных мутаций, продуцируется уже мутантная форма белка р53, которая не выполняет возложенных на нее функций н процесс деления опухолевых клеток приобретает неуправляемый характер (Райхлнн H I'., 2006; Cloven N,, 2004), Важно подчеркнуть, что мутации р53 могут быть как инициальным событием (синдром Ли-Фраумени) нлн детерминировать начальные этапы канцерогенеза* так и возникать н отбираться уже в ходе роста опухоли, обеспечивая приобретение новых агрессивных свойств н устойчивости к тсрапнн (Копнил Б.П., 2000), Наличие мутантиого р53 определяется во многих злокачественных новообразованиях: при опухолях толстой кншкн (60%), желудка (60%), молочной железы (20%)» легких (70%) (Райхлнн НХ, 2006; Soussi Т. 2000). В злокачественных эпителиальных опухолях яичников экспрессия р53 достигает 80% при III-1V стадиях (Pieretti М, et аЦ 2002; Terada К. et al„ 2004),

Появление производных Pt и таксанов в арсенале лекарственных средств, используемых в химиотерапии рака янчнмков, позволило значительно улучшить непосредственные н отдаленные результаты лечения, Вместе с тем, около 20-25% опухолей являются платннорезнстентными н требуют применения других схсм лечения. Однако выделить заранее группу больных с такими опухолями в настоящее время практически невозможно. Существуют публикации о том, что экспрессия р53 в опухолевой ткани может служить маркером резистентности прн РЯ к адъювантно" терапии препаратами платины, а также фактором прогноза выживаемости больных (Vasey Р.А,, 2003; Siddik Z.H., 2003; Gadducci A, et а!„ 2002). Таким образом, исследование мутанта ой формы р53 в опухоли является приоритетным для оценки клеточного апоптоза у больных раком яичником.

На основании вышесказалиото можно заключить, тто комплексное исследование генетических н количественных параметров клеток опухоли, сопоставление их с известными клинико-морфологическнмн данными, изучение их прогностической значимости, является своевременным и актуальным.

Целью настоящего исследования явилось изучение клннико-морфологнческнх особенностей эпителиальных новообразований яичников, количественных показателей клеток опухай и (плоидноеть, распределение их по фазам митотинсского никла, наличие делений в некоторых хромосомных локусах, а также экспрессия р53 мутантного типа) необходимых для оптимизации методов диагностики, лечения и прогнозирования течения рака яичников.

Для достижения указанной цели было необходимо решить следующие задачи:

1. Определить плоидноеть, распределение клеток опухолей яичников по фазам клеточного цикла, индекс пролиферации злокачественных новообразований.

2. Установить роль показателей лазерной ДНК-проточной Цнтоф-луоромстрнн в дифференциальной диагностике доброкачественных, пограничных и злокачественных эпителиальных опухолей яичников.

3. Оценить эффективность проводимой химиотерапии с учётом показателей плоидностн, числа опухолевых клеток в различных фазах клеточного цикла, а также определить прогностическое значение данных лазерной ДНК-проточной цитофлуорометрии для больных раком яичников,

4- Исследовать, с использованием мнкросателлнтных маркеров, потерю гетерогзиготности и мнкросателл итную нестабильность в зонах локализации некоторых известных и предполагаемых генов-супрессоров, ассоциированных с развитием и прогрессией рака яичников (хромосомные локусы: lp32-3ó, 7q31, llplS, J7ql2-2lr 18q2]-23). Сопоставить результаты молеку-лярно-генетнческого анализа с традиционными клиническими и морфологи» ческими параметрами в злокачественных, пограничных и доброкачественных опухолях яичников, оценить прогностичсскос значение найденных изменений.

5. Определить экспрессию молекулярно-бнологнческого маркёра аиоитоза р5Э мутантиого типа в злокачественных и пограничных опухолях яичников, сопоставить прогностическую значимость изученных показателей с традиционными клнннко-морфологическими параметрам и.

6- Установить влияние экспрессии р53 мутантиого типа на результаты химиотерапии н отдалённые результаты лечения больных раком яичников.

7. Путём многофакторного анализа выявить наиболее значимые с прогностической точки зрения параметры, позволяющие индивидуально прогнозировать течение опухолевого процесса и планировать лечебные мероприятия у больных раком яичников.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые в нашей стране на большом клиническом материале выполнено комплексное изучение количественных параметров клеток опухоли у больных злокачественными и пограничными опухолями яичников. Изучение шюидиости, индекса пролиферации опухолей с использованием метода лазерной ДНК-ПЦМ, сопоставление полученных результатов с клнннко-морфологическими параметрами позволило установить преобладание анеун-лоилных новообразований у больных раком янчинков, более агрессивное их течение по сравнению с диплоидными опухолями. Полный зффект от проводимой химиотерапии с применением производных Р1 достоверно чаще достигался в группе пациентов с диплоидными опухолями. Вместе с тем, эффективность химиотерапии у больных с анеуплондным раком яичников выше при использовании комбинаций производных И н таксанов. Среди больных с пограничными опухолями янчннков, у которых диагностирован рецидив заболевания, среднее количество опухолевых клеток, находящихся в 5-фазе клеточного цикла в 2 раза больше по сравнению с аналогичным показателем у больных, находящихся а ремиссии. Исследование уровня делений в хромосомных локусах с использованием микросателлнтных маркеров показало, что в локусах 11 р] 5, 12-21 локализованы гены-су нрсссоры, участвующие в процессе канцерогенеза н прогрессии опухолей у больных серозным н муцн-нозным раком яичников. Уровень экспрессии р53-ти1 в опухолевых клетках коррелирует со стадией заболевания, ИДНК и степенью лифференцнровки опухолей у больных раком яичников. В группе больных с р53-исгативными опухолями полная регрессия остаточных образований в результате проводимой химиотерапии по схемам, включающим в себя производные Р[, отмечалась достоверно чаше по сравнению с группой пациентов с р5 3 - позитивными новообразованиями. Показатели общей и безрецндивной выживаемости больных раком яичников с наличием р53-ти1 и опухоли достоверно меньше по сравнению с аналогичными показателями у пациентов с р53-негативнымн образованиями.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Полученные в результате данного исследования данные позволяют рекомендовать определение количественных параметров клеток опухоли с использованием метода лазерной ДНК-проточной цитофлуорометрнн в качестве дополнительного метода для проведения дифференциальной диагностики между пограничными и злокачественными эпителиальными опухолями яичников в затруднительных случаях, а также выделить группу больных с пограничными опухолями яичников с высоким риском развития рецидива заболевания. требующих тщательного мониторинга. Аксуплондный тип опухоли у больных РЯ Ш-П/ стадий заболевания диктует необходимость проведения химиотерапии комбинациями, включающими производные Р1 И таксоны. На основании всего комплекса полученных клинических и лабораторных данных разработана математическая модель, позволяющая индивидуально прогнозировать риск прогрессирования заболевания у больных раком яичников.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Паниченко, Игорь Валерианович

ВЫВОДЫ

1. Исследование подтвердило прогностическую значимость следующих клинических параметров:

• стали я заболевай ня - 5-летняя выживаемость больных при 1 стадии составила 73,5*6,9%, при 11 - 54,4±9,&%, при III - 24,3*3,8% и при IV -13,7*3,2%, (р«0,05);

• размер остаточной опухоли прн распространённых стадиях заболевания- при III стадии 5-летняя выживаемость больных, оперированных без остаточной опухоли составила 41,4* 10,2%, с остаточной опухолью более 2 см - 20,1*7,9%, (р<0,05);

• возраст больных при распространенных стадиях заболевания -при Ш стадии 5-летняя выживаемость молодых больных (до 45 лет) составила 43,7*5,5%, а пожилых (> 60 лет) - 14,1*5,5%, (р<0,05).

2. ИДНК злокачественных опухолей яичников коррелирует со стадией заболевания: диплоидные опухоли чаше встречаются у больных РЯ 1-II стадии (39,3%), чем у пациентов с III-IV стадиями (19,6%), (р<0,05). Количество анеуплондных клеток не зависит от распространенности опухолевого процесса.

3. Из изученных морфологических вариантов РЯ чаще всего анеуп-лоидные опухоли определялись в светлоклеточных (94,8%) и серозных аде-нокарциномах (76,6%), реже в эндометрноидных (68,8%) и муцннозиых (60,7%), Диплоидные опухоли чаще всего встречались среди муцннозиых аденокарцииом (393%), реже всего - среди светлоклеточных (5,2%),

А. Диплоидные пограничные н злокачественные эпителиальные опухоли яичников достоверно различаются по количеству клеток в синтетической фазе клеточного цикла (соответственно 5,2*0,3% и 7,8*0,4%, р<0.05); для аналогичных анеуплондных опухолей - соответственно 7,6±0,7% и 10,4*0,3%, р<0.05). Эти данные могут служить дополнительным объективмым критерием для дифференциальной диагностики пограничных опухолей н рака яичников.

5. У больных с анеуплоиднымн новообразованиями полный эффект химиотерапии с производными платины достигнут в 57,0%, а у больных с диплоидными опухолями - в 83,6% наблюдении, (р<0,05). Прогрессировал не основного заболевания на фоне проводимого лечения соответственно отмечено в 25,9%, И а 7,3% случаев (р<0.05).

6. Плондность опухоли при раке яичников является важным прогностическим фактором, Общая пятилетняя выживаемость больных распространённым РЯ при диплоидных опухолях составила 42,1%, при анеуплоид-ных - 20,5%, (р<0.05).

7. Потеря генетического материала в локусе 17ч 12-21 (зона локализации гена ВКСЛГ) ассоциирована с развитием злокачественных эпителиальных серозных опухолей яичников. В процессе прогресснровання заболевания степень повреждения данного участка хромосомы 17 достоверно увеличивается.

8. При II1-1V стадиях РЯ отмечается общее усиление генетической нестабильности, что выражается в увеличении количества делений во всех исследованных локусах, кроме 18^21-23.

9. Общая и безрецнднвная 5-летияя выживаемость больных РЯ с делениями в локусе 17я12-21 более чем в два раза ниже, по сравнению с аналогичными показателями у пациентов, в опухолях которых делении не определялись <р<0,05), что свидетельствует о нахождении в данных локусах ге-нов-супрессоров опухолевого роста.

0. Экспрессия р53-ти! коррелирует со стадиен заболевания, степенью лнфференшфовкн и ИДНК злокачественных опухолей яичников. Среднее количество опухолевых клеток, экспрессирующих р53, достоверно увеличивается при распространенных стадиях болезни (при 1-11 стадиях -29,1 ±8,2%, при III-IV - 59,7±3,6%, р<0,05). При низкой степени дифференцирован доля опухолей, экспрессирующих р53-гтн, составила 56,2±3,2%, при высокой - 28,0*7,2%, (р<0,05). Частота выявляемое™ р53-гтИ а диплоидных опухолях составила 16,9*5,6%, в аиеуплоидиых - 56,9*2,9%, (р<0,05).

11. Экспрессия р53-ти1 а опухоли у больных РЯ имеет клиническое значение, В труппе больных с р53-негативными опухолями полный эффект химиотерапии с производным платины, отмечался достоверно чаще по сравнению с группой пациентов с р53-позитивными новообразованиями (91,7% н 56,8%, соответственно), (р<0,05).

12. Экспрессия р53-гпШ в опухоли при РЯ имеет важное прогностическое значение. Пятилетняя выживаемость в группе больных РЯ Ш-ГУ стадии с р53(-) новообразованиями составила 50,9*18,6%, в группе больных с р53(+) опухолями этот показатель составил 8,5*6,3%, (р<0,05).

13- При многофакторном анализе выявлено, что наиболее важны в прогностическом плане (в порядке убывания): 1) стадия заболевания, 2) пдо-илностъ опухоли, 3) ИДНК, 4) нндекс пролиферации опухоли, 5) размер остаточной опухоли после хирургического лечения, 6) экспрессия р53-тш, 7) число клеток опухоли в $-фазе клеточного цикла, 8) число анеуплондных клеток в опухоли, 9) степень дифференцнровкн опухоли, число клеток в в0/1 фазе клеточного цикла, 10) морфологический вариант новообразования. 11) возраст больной. Точность анализа составила 86,4%, специфичность - 87%, чувствительность - 86,3%.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проблема злокачественных эпителиальных опухолей яичников остается актуальной вследствие высокой летальности и неуклонного роста заболеваемости данной патологией.

Отсутствие чётких знаний патогенеза, пвтогоомоннчных симптомов для ранних стадий заболевания и, соответственно, поздняя диагностика, а также низкая эффективность лечения при Ш-1У стадиях заболевания, разнообразие гистологических типов опухолей являются основными причинами низкой эффективности многочисленных усилий по улучшению отдаленных результатов лечения больных раком яичников.

Чрезвычайная сложность проблемы рака яичников требует более точных и принципиально новых критериев, характеризующих особенности развития данной патологии. Это заставляет исследователей выйти за пределы традиционных, подчас консервативных представлений и искать новые критерии в морфологии, биохимии, генетике, молекулярной биологии и других смежных науках, Расширение исследований биологии опухолевого роста при раке яичников может позволить виявнть факторы, которые имеют значение для понимания патогенетических механизмов развития, мстастаэнровання и репидивирования опухоли. В данном исследовании с помошью современных методов мы постарались найти новые критерии, отражающие течение опухолевого процесса, злокачественный потенциал новообразований, на основании использования которых клиницист мог бы прогнозировать эффект от проводимого лечения и вовремя вносить необходимые коррективы.

По-видимому, улучшения отдалённых результатов лечения можно добиться путём индивидуализации тактики ведения каждой больной, основанной на совокупности традиционных факторов прогноза (возраст больной, стадия заболевания, размер остаточной опухоли, гистологический тип и степень днфференцнровкн опухоли) и биологических критериев опухоли, отражающих ее клиническое поведение.

В настоящее время стадия заболевания является тем основополагающим критерием» на основании которого строится весь план дальнейших лечебных мероприятий, В нашем исследовании I стадия заболевания диагностирована у 21.4% больных, II - в 14,5%, III - в 49,9% и IV - в 14,2% случаев, Такая низкая выявляемое™ больных начальных стадий вызвана отсутствием патогномоничных для рака яичников симптомов заболевания, что обуславливает позднюю обращаемость пациентов в специализированные лечебные учреждения Возраст заболевших женщин находился в пределах от 21 до 77 лет, в среднем он составил 53,В±0,64 года, при этом большинство женщин были среднего (46,4%) и пожилого (30,8%) возрастов. Это совпадает с данными литературы <Огок Я Р, 2005, Неши А Р М., 2001).

В ходе проведённого исследования мы оценили значение традиционных клин ико-морфологических факторов прогноза у больных раком яичников. Вне всякого сомнения, что стадия заболевания является тем основополагающим фактором, на основании которого вырабатывается план как диагностических. так н лечебных мероприятий. Однако этот показатель обладает ещё и прогностической значимостью. В нашем исследовании показатель общей пятилетней выживаемоегн составил у больных I стадии 73,5*6,9%, II -54.4*9,8%, III - 24,3*3,8% и IV - 13,7*3,2% (р<0,05). Также достоверно отличаются и показатели безрецнднвной выживаемости. Эти данные сопоставимы с результатами, опубликованными Отадосю ,1,, 2003; Нст1г А.Р.М., 2001,

При оценке прогностической значимости возрастного фактора на отдалённые результаты лечения были получены следующие данные. При I стадии заболевания, когда в большинстве случаев имеется возможность выполнить радикальное хирургическое вмешательство независимо от возраст пациента, прогностическая ценность этого фактора не так значима как при распространённых стадиях болезни, В нашем исследовании не выявлено достоверных различий в общей и безрецнднвной выживаемости больных ранних стадий заболевания в группах пациентов молодого, среднего и пожилого возрастов.

В тоже время при III и IV стадиях болезни хирургу для выполнения оптимальной циторедуктивной операции приходится выполнять комбинированные или расширенные хирургические вмешательства, и тогда именно выраженная экстрагеннтальная патология у пациентов пожилого и старческого возраста может служить противопоказанием для выполнения запланированных объёмов вмешательства. С другой стороны, наличие остаточных опухолевых образований больших размеров диктует проведение большего количества курсов химиотерапии по сравнению с таковым при I и II стадиях болезни, когда, как правило, макроскопически опухолевые образования в брюшной полости не определяются. ВсС вышеперечисленное может стать частичным объяснением того факта, что в нашем исследовании были получены достоверные различия в выживаемости больных 111 стадии молодого (до 45 лет) и пожилого возрастов (от 60 лет и старше), Показатели общей 5-летней выживаемости в данных группах составили соответственно 43,7*10,1% и 14,1*5,5% (р<0,05). Аналогичные результаты были получены и среди больных IV стадии болезнн; показатель общей 5-летней выживаемости в группе больных до 60 лет составил 21,8*6,1%. в то время как в группе пациентов от 60 лет и старше - только 5,5*3,2% (р<0,05). Таким образом, возрастной фактор имеет большую прогностическую значимость при распространённых стадиях болезнн. В своих работах это подтвердили и Chan J.K., 2003.

В нашем исследовании всем больным на I этапе лечения выполнялось хирургическое вмешательство различного обьйма. Причём если при начальных стадиях всем больным удалось выполнить экстирпацию или яцдвлага-лнщную ампутацию матки с придатками и удаление большого сальника, то прн III стадии данный объём удалось выполнить только в 91,2% случаев, а при IV - в 82%, Именно при II1-1V стадиях заболевания большое прогностическое значение играет размер остаточной опухоли после хирургического вмешательства. Ещё в 1975 году Griffiths С.Т. впервые убедительно показал корреляцию между этим параметром и отдалёнными результатами лечения больных РЯ, С тех пор менялись только градации данного признака, неизмснным оставался результат - больные без остаточной опухоли или с её минимальными проявлениями жнлн достоверно больше по сравнению с пациентами, у которых максимальный размер опухоли превышал 2 см, (von Georgi R-, 2003, Trope С, 2000). В нашем исследовании данная закономерность подтвердилась - среди больных с III стадией болезни н без макроскопических проявлений опухоли в брюшной полости показатель общей пятилетней выживаемости составил 41,4±10,2%, «по значительно превышает аналогичные показатели в группах больных, у которых максимальный размер остаточной опухоли был менее 2 см (23,5±4,8%), а также у тех пациентов, где опухоль была более 2 см (20,1±7,9%) (р<0,05). Достоверные отличия получены и при анализе медиан выживаемости - они составили соответственно 46,5±5,3 мес., 38,2±1,4 мес, н 29,9±1,3 мес. соответственно в описанных выше группах (р<0,05). Даже среди больных IV стадии заболевания этот фактор имеет прогностическое значение. Общая 5-летняя выживаемость в группе пациентов, у которых размер остаточной опухоли не превышал 2см, составила 21,2±6,]%, в то время как аналогичный показатель в группе больных, где остаточная опухоль превышала 2 см, составил только 5.2±2,7% (р<0,05). Показатели медиан выживаемости в данных группах составили 20,6±1,9 мес. и 1],4±2,4 мес. (р<0,05). Показатель размера остаточной опухоли после хирургического лечения является одним из тех немногих параметров, которые в большой степени зависят от квалификации оперирующего хирурга. Широкое внедрение в практику комбинированных н расширенных хирургических вмешательств, целью которых служит достижение оптимальной цитородук-цнн у больных РЯ, может значительно улучшить отдаленные результаты лечения данной категории пациентов. С другой стороны, проведение неоадъю-вантной химиотерапии на I этапе лечения может также способствовать минимизации остаточных проявлений опухолевого процесса после проведённого на II этане хирургического вмешательства.

Морфологическая структура опухоли также является важным прогностическим фактором у больных РЯ, Правда, сразу следует оговориться, что он имеет большее' значение при ранних стадиях болезни. При Ш-Г1/ стадиях, когда опухолевый процесс днссеминнрован по всей брюшной, а зачастую и по плевральной полостям, этот фактор имеет второстепенное значение. В нашем исследовании среди больных I стадии наибольшая пятилетняя выживаемость отмечалась среди пациентов с муцинознымн аденокарцнномамн — 90,5*6,6%, в группе больных с эндометрнандными опухолями этот показатель был равен 88,2*6,1%, а в группе пациентов с серозными аденокарцнномамн - 62,1 ±7,4% (р<0,05). Следует подчеркнуть, что ни одна больная со светлоклеточным раком яичников (п=5) не пережила описываемого срока наблюдения - все они погибли от про!ресснровання основного заболевания в течение четырех лет. Таким образом, наличие эндометрнондной нлн муци-иозной аденокарцнномы является благоприятным прогностическим фактором для больных РЯ, в то время как серозный или с встлоклсточный варианты значительно отягощают данный прогноз,

Степень дифференцнровкн опухоли также является важным прогностическим фактором. В нашем исследовании выживаемость больных с ниэ-коднфференцнрованнымн адснокарпнномами была достоверно ниже по сравнению с аналогичным показателем у больных с высокодифференциро-ванными новообразованиями при всех стадиях, кроме IV. Например, при I стадии заболевания пятилетняя выживаемость больных с высокодифферен-цированнымн опухолями составила 84,1%, в то время как аналогичный показатель в группе больных с низкодифференцнрованными опухолями составил 68,2% (р<0,05). в своём исследовании БстпяЬКи 1 ег а£., 2001, после проведения многофакторного анализа показали, что для больных РЯ ранними стадиями заболевания именно степень дифференцнровкн опухоли является самым информативным критерием для прогнозирования течения заболевания.

На II этапе лечения всем больным РЯ проводилась алъювантная нлн индукционная химиотерапия. В исследование целенаправленно включили группу больных, которым проводилось лечение по схемам, не включающим препараты платины, в качестве группы исторического контроля. Следует подчеркнуть, что полный эффект от проводимого лечения при ГО-1У стадии заболевания достоверно чаще наблюдался в группе больных, которым проводилось лечение по схемам, включающим производные платины и твксаиы. Вместе с тем, при I стадии заболевания, у всех больных, которым проводилось лечение с применением производных платины, отмечен полный эффект от проводимого лечения. Это сопоставимо с аналогичным результатом в группе больных, которым проводилось лечение по схемам, включающим таксаны и производные платины.

На следующем этапе было проведено изучение количественных параметров клеток опухолей (плондность, число опухолевых клеток в различных фазах клеточного цикла) с использованием метода лазерной ДНК-ПЦМ, который позволяет объективно производить измерение содержания ДНК в десятках тысяч клеток за считанные секунды

Исследованне бноптатов ПОЯ с использованием метода лазерной ДНК-ПЦМ позволило определить, что у 62,5% пациентов опухоли имели диплоидный набор хромосом н у 37,5% - анеуплоидный. При этом количество анеуплондных новообразований достоверно меньше по сравнению с аналогичным показателем у больными РЯ, 37,5% и 75,1% р<0,05, Чаще всего имела место анеушюидия в пределах мнтотического цикла - 63,6%. в отличие от злокачественных опухолей тетраплондные и гиперанеуплондные новообразования не определялись вовсе.

Проведённый анализ распределения опухолевых клеток по фазам клеточного никла с учётом плондности опухоли показал, что анеуплондные и диплоидные новообразования достоверно отличаются друг от друга. Среди анеуплондных опухолей большее количество клеток находится в Б-фазе клеточного цикла, чем среди диплоидных (7,6% и 5,2% соответственно), В анеуплондных новообразованиях достоверно больше индекс пролиферации клеток (16,1% и 10,2%), (р<0,05). Полученные данные подтвердились и при анализе с учётом морфологического варианта - как серозного, так и муцннозно-го. Вместе с тем интересно отметить, что индекс пролиферации в днплоидних h анеуплондных ПОЯ достоверно мскыне по сравнению с аналогичными показателями в злокачественных опухолях, Полученные данные могут быть использованы для дифференциальной диагностики пограничных и злокачественных опухолей яичников в затруднительных случаях.

Среди 309 злокачественных новообразований в 75,1% случаев определялись аиеуплоидные опухоли и в 25,1% - диплоидные, В тоже время среди пограничных опухолей наоборот, диплоидные новообразования встречались достоверно чаще - а 62,5% наблюдений (р<0,05>. По данным различных авторов количество анеуплондных новообразований при РЯ колеблется от 50 до 80%, при этом минимальное количество наблюдений 19, максимальное -284 (Kildal W. el al,, 2005; Ozols R,F. el al., 2005; Mohanly S K-, 2004; Kris-tensen G,B„ 2003).

Группа анеуплондных хлокачествипшх опухолей яичников сама по себе является крайне неоднородной и по своему качественному составу - чаще веет наблюдается анеупдондня в пределах мнтотического цикла (62,7%), реже определялась анеушюндня с потерей хромосом (22,8%), ещё реже - тет-раплоидные (8,4%), многоклоновые (7,7%) н гиперансуплоншше новообразования (3%).

Аиеуплоидные и диплоидные опухоли яичников различаются между собой не только по индексу ДИК, во н по количеству опухолевых клеток, находящихся в различных фазах клеточного цикла. Среднее число опухолевых клеток, находящихся в синтетической (ЗЬфазс клеточного цикла анеуплондных опухолей составило Ю,4±0,3%, в то время как аналогичный показатель в диплоидных опухолях оказался равен 7,8±0,4% (р<0,05). Помимо этого, индекс пролиферации (показатель, отражающий скорость деления опухолевых клеток) больше в анеуплондных, чем в диплоидных аденокарциномах (20,4±0,5% и |4,4±0,6%, соответственно). Эти показатели свидетельствуют О более агрессивном течении анеуплоцдного рака яичников по сравнению с диплоидным, что подтверждается и клиническими данными (Тгоре С., 2000, Val verde JJ^ 2001),

Сравнительный анализ количественных параметров опухолевых клеток в первичных опухолях и их метастазах у больных раком яичников показал абсолютно полное совпадение И ДНК в этих образованиях (100%), в тоже время количество анеуплондных клеток выше в метастатических очагах. Совпадение ИДНК в опухолевых очагах различных локализаций может иметь большое практическое значение; в сомнительных случаях можно использовать данные о плоцдностн опухоли для того, чтобы провести дифференциальный диагноз между неоплазиямн и распространённым опухолевым процессом.

Интересные результаты были получены при сравнении распределения клеточного цикла первичных опухолей и нх метастазов. Оказалось, что индекс пролиферации в первичном очаге меньше, чем в метастатическом (20,9±1,8% и 24,4±0,6%, соответственно), Данный факт служит доказательством того, что метастатические очаги формируются наиболее злокачественным пулом опухолевых клеток.

Сравнительный анализ распределении количественных показателей клеток опухолей у больных раком яичников с традиционными клиннко-морфологичсскимн параметрами позволил выявить следующие закономерности, Аксуплондныс новообразования чаше встречаются при П1-1\/ стадиях болезни (80,4%), чем прн 1-11 (60,7%), (р<0,05). Однако ИДНК анеуплондных опухолей и количество анеуплондных клеток не связаны со стадией заболевания. Другим важным параметром, определяемым при помощи метода лазерной ДНК-ПЦМ, является число опухолевых клеток в различных фазах клеточного цикла. Для клинициста наиболее важны такие показатели как число клеток в синтетической фазе клеточного цикла, а также индекс пролиферации опухолей. Так, индекс пролиферации у больных РЯ 1 стадии заболевания составил 16,4*1,1%, что достоверно меньше по сравнению с аналогичным показателем у больных IV стадии - 19,7*1,0% (р<0,05). Среднее число клеток опухоли в 5-фазе клеточного цикла прн I стадии равно 8,0±0,б%, что меньше аналогичного показателя при IV стадии заболевания - Ю,3±0,5% (р<0(05}.

Исследование плондиостн опухоли выполнено при всех морфологических вариантах злокачественных новообразований- При этом оказалось, что диплоидные опухоли чаше встречаются среди муцннозных аденокарцнном (5,2%) и реже всего - среди светлоклеточных опухолей (39,3%) (р=0,01). Анеуплоидные новообразования чаще наблюдаются при светлоклеточных (94,8%) и серозных (76,6%) опухолях. Особенно стоит подчеркнуть тот факт, что индекс пролиферации опухоли также был наименьшим среди муцннозных опухолей (¡4,3±0,9%), в то время как аналогичный показатель в группе светлоклеточных аденокарцнном составил 10,3±1,3% (р<0,05), Полученные результаты могут служить объяснением относительно более благоприятного клинического течения заболевания у больных с муцинозным раком яичников.

Выяачена корреляция между плоидностью опухоли и степенью днффе-реицировкн опухоли. Среди низкодиффереицироваиных аденокарцнном количество аксупдондных новообразований достоверно больше по сравнению с аналогичным показателем в высокодифференцнрованных опухолях (84% и 63%, соответственно). Количество же диплоидных опухолей больше среди нысокодкффсренцнрованиых аденокарцнном (36,8% и 16%, соответственно), При этом число как диплоидных, так и анеуплоидных опухолевых клеток, находящихся в 5-фаэе клеточного цикла, достоверно больше в низкодиффереицироваиных новообразованиях, чем в высокоднффереицнрованных. Данный показатель среди диплоидных низкодиффереицироваиных опухолей составил 9,1*0,9%, а среди высокодифференцнрованных - 6,7±0.5% (р<0,05).

Несколько неожиданным оказался тот факт, что плондность новообразования коррелирует с размером остаточной опухоли после хирургического вмешательства. Среди больных, не имевших макроскопически определяемых опухолевых образований после хирургического лечения, количество диплоидных новообразований было достоверно больше - 28,9% по сравнению с аналогичным показателем у больных, у которых максимальный размер остаточной опухоли превышал 2 см - 12 (16,6%) (р<0,05). Вместе с тем дальнейший анализ числа опухолевых клеток в различных фазах клеточного цикла у больных раком яичников с учётом размеров остаточной опухоли с учетом их плондностн не выявил достоверных различий.

Таким образом, плоидностъ опухолей у больных раком яичников коррелирует со стадией заболевания, морфологическим вариантом и степенью днфференцнровки опухоли, а также размером остаточной опухоли после хирургического вмешательства. Индекс пролиферации опухоли меньше у больных с начальными стадиями заболевания, муцннозным типом новообразования и высокоднфферсннированных аденокарцнномах.

Исследование эффективности проводимой химиотерапии у больных РЯ с учётом плондностн опухоли показало, что полный эффект от проводимого лечения достоверно чаще диагностировался среди больных с диплоидными опухолями (83,6%) по сравнению с аналогичным показателем у больных с анеунлоиднымн новообразованиями (7,3 V«) (р<0,05). Прогрессировал не заболевания на фокс проводимого лечения чаще отмечалось у больных с анеуп-лоидиыми опухолями (25,9% и 7,3%, соответственно), (р<0,05). К аналогичным заключениям пришли и Kimmig R., 2002, Ozalp S, 2001, Silvesuini R., 1998. Вместе с тем, у больных РЯ III-IV стадии заболевания и ансуплоидны-ми опухолями полный эффект от проводимого лечения достигнут достоверно чаще в группе пациентов, которым проводилось лечение по схемам, включающим производные платины и таксаны - 72,5%. В тоже время аналогичный показатель в группе больных, получавших лечение по схемам, включающим производные платины, но без таксанов, составил 43,1%, а в группе пациентов, получавших лечение без производных платины, только 16,7% (р<0,05)- Кроме этого оказалось, что среднее время беэрецнднвного периода в группе больных, получавших лечение с включением производных платины и таксаны, равнялось 15,б±3,б мес., что значительно превышает аналогичные показатели в остальных двух группах (8,7±1,2 мес, и б,6±3,5 мес,), (р<0,05). Па основании полученных результатов мы считаем, что для больных РЯ ШI

IV стадии заболевания и аиеуплоиднымн опухолями целесообразно проведение химиотерапии по схемам, включающим производные платины и таксаны.

Среди количественных параметров, определяемых методом ДПК-ПЦМ, не только плондноеть, но к число клеток опухоли ь S-фаэе клеточного цикла, а также индекс пролиферации опухолей являются показателями, на основании которых можно прогнозировать эффект химиотерапии у больных РЯ. В группе больных с полным эффектом от проводимого лечения индекс пролиферации диплоидных опухолей был равен 7,2±0,4%, в то время как в группе пациентов, где огмечалось прогресснрованне основного заболевания — 11,2±1,4% (р<0,05). Аналогичные данные получены и среди больных с анеу-плоиднымн опухолями.

При анализе отдалённых результатов лечения больных РЯ с учётом плоидности опухолей оказалось, что 5-летняя выживаемость пациентов I стадии заболевания и диплоидными опухолями составила 100%, с ансуплоид-ными - 54,7±10,2%; у больных стадией - 88,9±10,4% н 33,1-11,9%, соответственно; III - 20,5*4,1% и 42,1*11,8%, соответственно; IV - 24,3*5,2% н 12,8±5г8%, соответственно, (р<0.05 при сравнении показателей при одной стадии болезни). Аналогичные результаты получены н при анализе безреии-дивной выживаемости, Прогресснрованне основного заболевания в сроки до 6 месяцев отмечалось у 54,4% больных с анеуплоиднымн опухолями, в то время как данный показатель среди пациентов с диплоидными новообразованиями за этот же период времени составил 35,7% (р<0,05). Полученные результаты имеют с нашей точки зрения важное клиническое значение: плонд-ность опухоли во многом определяет не только саму возможность прогресси-рования болезни, но и скорость этого процесса.

Вместе с тем, i-pynna анеуплоидных опухолей также является гетерогенной по ИДНК. Проведённый анализ отдалённых результатов лечения больных РЯ с анеуплондным типом опухоли показал, что к 5-летнему сроку наблюдения наибольшая выживаемость отмечена в группе пациентов с тет-раплондными опухолями (ИДНК=2,0) - 60,0412,8%, в тоже время все больные с пшеранеуплоидными опухолями (ИДНК>2,0) погибли от прогрессиро-вания основного заболевания к 4 годам наблюдения.

Анализ отдаленных результатов лечения больных РЯ с учетом количества анеуплондных клеток не выявил достоверных различий в сравниваемых группах. Полученные результаты позволяют сделать заключение о том, что для больных РЯ важен сам факт наличия анеунлонднн в опухоли, а не его количественные показатели.

Число клеток опухоли, находящихся в S-фазе клеточного цикла коррелирует с отдалёнными результатами лечения. Пятилетняя выживаемость больных III стадии заболевания, у которых количество клеток опухоли, находящихся в S-фазе клеточного цикла было меньше или равно 10%, составила 21,0±6,]%, что превышает аналогичный показатель в группе больных, у которых число опухолевых клеток в S-фазе превышало 10% - 9,6±3,5% (р<0,05). Медиана выживаемости составила 38,3*1,1 мсс. и 28,0*1 мес., (р<0,05). Таким образом, число клеток опухоли, превышающее 10%, является неблагоприятным пропюстическим фактором для больных РЯ. Следует подчеркнуть, что данное заключение справедливо как для больных с анеу плоид-ными, так и к диплоидными опухолями.

Показатель индекса пролиферации также важен с прогностической точки зрения, 5-летняя выживаемость больных РЯ III стадии заболевания и ИЛ анеуплондных опухолей не превышающим 16% составила 26,9*4,2%, что достоверно превышает аналогичный показатель у пациентов с ИП более 16% - 16,0*3,3% (р<0,05). Достоверно отличались и медианы выживаемости -38,1*1,5 и 29,4*1,3 мес„ соответственно.

Таким образом, проведённое исследование свидетельствует, что основные показатели, определяемые при помощи лазерной ДНК-проточной ци-тофлуорометрни, могут быть использованы в качестве дополнительных, а подчас и основных прогностических критериев индивидуально у каждой больной раком яичннков, Существенна возможность метода и для проведения дифференциального диагноза между пограничными опухолями и раком яичников, при которых применяются различные терапевтические подходы и которые отличаются друг от друга прогнозом заболевания.

Метод лазерной ДНК-ПЦМ позволяет оценить количественные изменения карнотипа опухоли. В тоже время метод нолимеразной псиной реакции с использованием мнкросателлнтиых маркёров позволяет определить делении (потерн гетерозиготностн) в отдельных хромосомных докусах и локализовать возможные участки нахождения генов-супрсссоров при раке яичников. В соответствии с целью работы и поставленными задачами проведено определение делецнй в хромосомных локусах ]р32-36, 7цЗЗ „ Ир15, 17ч 12-21, 18ц21 -23 у больных с различными эпителиальными новообразованиями яичников, сопоставление выявленных нарушений с клинико-морфологическимн параметрами.

Делецнй в лок>сах7ч31-53, 11р15, 17<| 12-21 возникают чаше в злокачественных опухолях по сравнению с ПОЯ и доброкачественными новообразованиями, что указывает на возможное наличие в этих областях генов-супрессоров, являющихся одним из звеньев канцерогенеза. Необходимо отмстить, что наибольшая частота потерн гстсрознготности была обнаружена в локусе 17^12-21 - 77,8%, а наименьшей (20,4%) - в 1р32-3б. Таким образом, гены картированные в области 1р32-3б (в т.ч. (,-тус1 и р73), не играют принципиального значения в процессе формирования злокачественных эпителиальных новообразований яичников. Полученные результаты совпадают с данными Чрг»е(:ге1 е1 а!., 1994. Большое количество делецнй в локусе 17я 12-21, свидетельствует о том, что ген ВИСЛ!, вовлечён в канцерогенез не только наследственных, но и спорадических форм РЯ. Это подтверждается и сравнительным анализом распределения делецнй в серозных морфологических вариантах доброкачественных, пограничных и злокачественных опухолей янчннков. Выявлено, что утрата данного локуса достоверно выше при серозном РЯ (90,4%). чем в пограничных серозных опухолях (25%), (р<0,05), Следует отметить, что нарушения гена В НС АI часто сопровождаются потерей генетического материала на других хромосомных участках, делецнй которых не определяются в отсутствии альтераций в локусе 17q21 (Vetleneuve J., t999; Shelling A,, 1995). С другой стороны, в укатанном локусе уже сейчас картированы и другие гены: STAT3, МАРЗК14, COL1A1, ERBB2 и др. По-видимому, выяснение нх роли в процессе канцерогенеза при РЯ может стать предметом дальнейших исследований. Получены достоверные различия в частоте делений в локусе 11р15 среди муцинозных новообразований. Если в доброкачественных муцинозных опухолях не было выявлено ни одного случая потери гетерознготностн, то среди пограничных опухолей уже в 25%, а в злокачественных - 66,6% (р<0,05). Таким образом, в данном локусе находится ген(ы)-супрессор(ы), участвующие в канцерогенезе при муцинозном раке янчннков

Невысокая. близкая к фоновой, потеря гетерознготности а локусах 1р32-3б и lSq21-23, практически исключает наличие в этих областях генов, участвующих в канцерогенезе при РЯ. Вместе с тем, в данных локусах отмечается общая тенденция по нарастанию количества разнообразных генетических нарушений при III-IV стадиях заболевания, однако данные изменения неспецифнчны для развития РЯ.

При анализе количества делецнй в зависимости от стадии заболевания выявлена тенденция увеличения потери гетерознготноети практически во всех изучаемых локусах при распространённых стадиях, наибольшее количество делений также наблюдалось в локусе 17q 12-21 - 90%. Падуче иные результаты совпадают с данными Launonen V. ct al-, 2000,

Не выявлено корреляции между степенью днфферекцнровкн злокачественных новообразований, размером остаточной опухоли после хирургического вмешательства и количеством делецнй во всех изучаемых локусах.

При анализе общей н безрецнднвной 5-летней выживаемости больных РЯ оказалось, что имеются достоверные различия между группами пациентов в опухоли которых определялись делении и без таковых по локусам 11р15 и 17q 12-21. Как уже отмечалось выше, в локусе 11р15 находится, в том числе и онкоген H-ras-i, который, вероятно, ответственен за прогрессировамне заболевания при РЯ. К подобным заключениям пришли и Launonen V. et al., 2000.

В делом, полученные данные о разнице в частоте потерн гетерознгот-ности в -злокачественных новообразованиях яичников позволяют более полно охарактеризовать отдельные гистологические типы опухолей с молекулярное генетической точки зрения, определить локусы, содержащие онкогены и гс-ны-супрессоры, участвующие в канцерогенезе при РЯ, с клинической точки зрения - выделить группу пациентов с неблагоприятным прогнозом.

Одним из основных компонентов в регуляции системы апоптоза (программируемой гибели клетки) является гсн-супрессор опухолевого роста р53 Однако в результате приобретённых мутаций, продуцируется уже мутантная форма белка р53, которая не выполняет возложенных на неё функций и процесс размножения опухолевых клеток приобретает неуправляемый характер. Определение экспрессии мутантной формы белка р53 было выполнено у 94 больных раком яичников, из них в 69 (73,4%) случаях отмечалась положительная нммуноинтохнмнческая реакция. Полученные результаты совпадают с литературными данными, в которых экспрессия p53-mut колеблется от 49% до 82% (Nielsen J,S. et al., 2004; Shahin SM-, 2000; Reles A, 2001, Ravid A,, 2002). Такая вариабельность результатов может быть объяснена использованием как различных моноклональных антител (DO-7, Ab-6, РаЬ 240), так и зачастую небольшим количеством наблюдений (например, в некоторых случаях п=48 или п=33). Экспрессия p53-mui возрастает с увеличением стадии заболевания; при S стадии этот показатель составил 24,5%, при П - 77,8%, при III - 80,4%, при IV - 100%, (р<0,05), В своём исследовании Lassus H. et al., 2003, также подтвердили данную закономерность, изучив экспрессию p53-mut в опухолях у 522 больных РЯ. Аналогичного мнения придерживаются и Dogan Е. et al., 2005, Cloven N. et al., 2004, Schuijer M. et al., 2003,

Вместе с тем1 не выявлено корреляции между экспрессией р53 и возрастом больных, а также размером остаточной опухоли после хирургического вмешательства. Нельзя не отметить тот факт, что в некоторых работах авторы обнаружили корреляцию между самим фактом наличия остаточной опухоли и экспрессией p53-mut (Dogan Е et al., 2005; Femmdina С. et al.,

1999). В тоже время достоверно чаше экспрессия р53 отмечалась среди сает-локлеточиых и серозных аленокарцнном по сравнению с му иинозными и зн-дометрноидными новообразованиями. Помимо этого, р53-1юзитивные наблюдения достоверно реже обнаруживались у больных с высокой степенью днфференцировки опухолей по сравнению с аналогичными показателем у пациентов с ннзкоднфференцнрованными аленокарцнномамн (47,6% н 92,5%, соответственно). Аналогичные выводы в своих работах делают Scimisdottir I. et а]„ 2001; Nakayama К et al., 2003; Antälta MA. el al., 1999.

Экспрессия p53-mut коррелирует и с количественными параметрами клеток опухолей яич инков, определяемых при помощи метода лазерной ДНК-проточной цитофлуоромегрин. Например, с ИДНК опухолевых клеток - в аисуплондных новообразованиях данный показатель достоверно выше по сравнению с диплоидными (85,7% и 33,4%, соответственно). (р<0,05). Причем. чем больше количество анеуплондных клеток в опухоли, тем выше уровень экспрессии р53. С другой стороны, экспрессия р53 коррелирует с количеством клеток опухоли яичников, находящихся в S-фазе клеточного цикла и индексом пролиферации опухолевых клеток - чем больше эти показатели, тем выше экспрессия р53. Это не противоречит результатам исследований, проведённых Scirnisdottir 1 et а]., 2001 В тоже время часть исследователей не обнаружили взаимосвязи между указанными параметрами (Geisler J.P, ei al.

2000)

Вместе с тем определение р53 мутантного типа в опухоли у больных РЯ имеет и клиническое значение, В группе больных с р53-нсгативными опухолями полный эффект от проводимой адъювантной химиотерапии по схемам, включающим в себя производные платины, отмечался достоверно чаше по сравнению с группой пациентов с р53-познтивпымн новообразованиями (91,7% и 56,8% соответственно), (р<0,05). В тоже время прогрессировав ие болезни на фоне проводимого лечения отмечалось в 8,3% и 31,4% случаях больных I и Fl групп соответственно (р<0,05). Таким образом, эффект проводимой химиотерапии у больных РЯ коррелирует с р53-стзтусом опухоли, К аналогичным выводам по окончанию своих исследований пришли н Rclcs А- ei al, 2001; Nakayama К el aL, 2003. которые также отметили большую эффективность проводимой химиотерапии в группе больных с р53-негатнвными опухолями. Следует оговориться, что речь идёт только о схемах лечения, содержащие производные платины. Вместе с тем имеются публикации, где авторы не подтверждают наличие корреляции между эффектом химиотерапии н наличием p53-mut в опухоли (Nielsen J et al,, 2004). В исследовании Wang Y et al., 2004, иммуногнстохимнческнм методом определялась экспрессия p53-mut в опухолях 178 больных РЯ MI стадии заболевания. Авторами не выявлено корреляции р53-статуса опухали и стадии заболевания, степенью дифференцнровкн и морфаюгнческнм вариантом опухоли, а также её плондностью, Эффект от проведённого лечения н отдаленные результаты также не зависели от р53 статуса опухали. Следует отмстить, что не всем пациентам в данном исследовании проводилась химиотерапия по одинаковым схемам, в том числе части in них - без производных платины.

Отдалённые результаты лечения также коррелируют с экспрессией р53. Показатель общей 5-летней выживаемости среди больных с р53-негативными новообразованиями и I1I-IV стадией болезни составил 50,9±18,6%, что достоверно больше по сравнению с аналогичным показателем в группе больных с р53-познтнвнымн новообразованиями - 8,5*6,3%. Прогностическую значимость определения экспрессии p53-mui в своих работах подтвердили и Shahin MS. el al,, 2000; Reles A. et al., 2001; Nielsen J.S. cl al, 2004. Следует оговориться, что не во всех работах при многофакторном анализе подтвердилась прогностическая значимость указанного параметра (Saqarra R.A. ei al., 2002; de Graeff P, cl al„ 2006; Faltows S. ei al., 2001), однако, окончательную точку в этом вопросе может поставить только рандомизированное многоцентровое исследование.

На основании приведённых данных можно сделать заключение о том, что экспрессия р53 мутантного типа а опухолях больных РЯ является неблагоприятным прогностическим фактором. Вместе с тем, ген р$3, кодирующий данный белок, в будущем, вероятно, может стать мишеныо для проведения специфической таргетной биотерапин.

Многофакторный анализ прогнозирования течения заболевания у больных РЯ позволил определить, что наиболее значимыми для прогнозирования прогрессировали* заболевания у больных РЯ являются следующие факторы (в порядке убывания); стадия заболевания, плондность опухоли, ИДНК, индекс пролиферации опухоли, размер остаточной опухоли после хирургического лечения, экспрессия р53-ти1, число клеток опухоли в 5-фазе клеточного цикла, число анеуплондных клеток в опухоли, степень днффе-ренцнровки опухоли, число клеток в 00/1 фазе клеточного цикла, морфологический вариант новообразования и возраст больной. Точность данною анализа составила 86,4%, специфичность - 87%, чувствительность - 86,3%.

Предлагаемая нами методика индивидуального прогноза течения заболевания, основанная на коэффициентах веса наиболее значимых факторов, учитывает не только клнннко-морфологическнс показатели, но и количественные параметры опухоли, отражающие её злокачественный потенциал, что представляется крайне важным для планирования адекватного лечения больных раком яичников.

С развитием клинических и фундаментальных исследований в области онкологии появляется всё больше новых донных, свидетельствующих о чрезвычайно сложном механизме возникновения, развития и прогрессирования злокачественных опухолей. Описанные выше результаты исследования с применением современных методов не являются конечным пунктом в решении проблемы лечения злокачественных эпителиальных опухолей яичников, но вносят существенный вклад в перспективу её исследования.

Список литературы диссертационного исследования доктор медицинских наук Паниченко, Игорь Валерианович, 2007 год

1. Аксель Е.М. И Статистика злокачественных новообразований женских половых органов. В кн.: Образовательный курс Европейского общества по медицинской онкологии. Москва, 20-21 нюня 2006, с. 196-198.

2. Ахмедова А.С. // Совершенствование клнннко-лабораториой концепции использования СА-125 у больных раком яичников // Автореф, лнсс, канл- бнол. наук, -М„ 2003,25 с.

3. Беришвнли А.И, И Расширенные и комбинированные операции в комплексном лечении рака яичников ИГ-1У стадии /У -М,, 2001. Дисс, канл мед наук, 152с.

4. Блюменберг А-Г, П Дисссмнннрованные формы рака яичников (лечение и факторы прогноза) // -М, 2002, Дисс. д-ра мед наук, 284с.

5. Богатырёв В.Н. Портной С.М. // Использование компьютерной морфоденснтометрин н лазерной ДНК-проточной цнтофлуорометрнн для диагностики н прогнозирования при раке молочной железы /I В кн.; Рак молочной железы, нзд-во «РАМН», с 228-244,

6. Бохман Я. В., Лившиц И. А., Винокуров В. Л. и др. // Новые подходы к лечению гинекологического рака. И С--П6-, 1993; 8—13; 90—94.

7. Буланова И.М. Эффективность клннико-лучевых методов исследования при мониторинге больных раком яичников после первичного специального лечения // Дисс. канд. мед. наук, -М: 2006, '152с.

8. Буторина О.Д // Применение ДНК-цнтометрни с целью повышения эффективности лечения больных раком яичников. В кн: Новые медицинские технологии в области лучевой диагностики, лучевой терапии и интервенционной радиологи и // С-Петербург, 1995, с 107-109.

9. Винокуров В-Л. /I Закономерности мстзстаэнровання рака яичников и выбор адекватного лечения больных II Паллиативная медицина и реабилитация 2002, Лй-З, с 70.

10. Винокуров В.Л. // Рак яичников: закономерности метастазирова-ння и выбор адекватного лечения больных И С-Петербург, нзд-во «Фолиант», 2004, с 170-173.

11. Гарнн А.М. // Химиотерапия и бнотералня опухолей Н В кн. «Канцерогене*!» под ред. Заряд» Д.Г. И -М. «Научный мир», с, 396-406,

12. Горбунова В.А. И Лекарственное лечение рака яичников: стандарты и перспективы П Современная онкология Л»4, т.2, 2000г., стр. 108-112.

13. Горбунова S.A. // Рак яичников. В кн.: «Химиотерапия опухолевых заболеваний (краткое руководство)». Под ред. проф. Н И. Переводчико-вой;//М„2000:с. 138-140

14. Горбунова В. А. //Новые цитостатнкн в лечении злокачественных опухолей платиновые производные. Под. ред. проф. Горбуновой В.А, // -М. 1998, стр.) 1-19.

15. Горбунова В.А., Кузнецов В.В., Козаченко В.П. и др. // Комбинированное и комплексное лечение больных раком яичников Н Пособие для врачей -М., 2003, ГУ РОНЦ им. Н.Н Блохнна РАМН, -40с.

16. Горбунова В. А., Переводчнкова Н.И. // Современные возможности химиотерапии злокачественных опухолей. В кн.: Этюды химиотерапии (5 лет спутя), Изд-о «Лнттерра» 2006, с, 16-27.

17. Давыдов МП, Аксель Е.М. // Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ в 2004г. // Вестник Российского онкологического научного цетнра нм, Н,Н. Блохнна 2006, т.17, с. 47,49,60,

18. Ельчева H.A.t Гаспарьян А.Г., Карселадзе А.И с соавт. // Молскулярно-генетическис нарушения в зоне локализации гена BRCA1. ассоциированные с карциномами яичников // Молекулярная биология 1998, 32 (2), с. 286-293.

19. Жордэннл К.И, // Злокачественные эпителиальные опухоли яичников // Современная онкология 2000; 2 (2): 51-55.

20. Жорданиа К.И. I! Некоторые аспекты хирургического лечения рака яичников // В кн.: Практическая онкология: избранные лекции. Под ред. Тюлянднна С.А., Монсеенко В.М. Изд-во: «Центр Томм», С-Петербург, 2004, с 338-344,

21. Жорданна К,И., Герштейн Е.С. Блюменберг А.Г, и др. // Опухоли яичников. И В кн «Клиническая онкогинекология» под ред. Проф. Коэаченко В.П. -М-, 2005, Изд-ао «Медицина», стр. 220-269.

22. Карселадэе А,И, Н Некоторые проблемы клинической морфологии эпителиальных опухолей яичников // Практическая онкология, 2000, №4, с. 14-18.

23. Кедрова А.Г., Горбунова В.А., Кузнецов В.В. с соавт, // Оггыт применения гексалена в качестве консолидирующей терапин при лечении распространённого рака яичников // Эффективная фармакотерапия 2006, №3. с. 18-23.

24. Коэаченко В.П. // Клиническая онкогинекология / Рук-во для врачей / -М.: ОАО «Изд-ао Медицина», 2005. с.232-33.

25. Копннн Б, П. // Опухолевые супрессоры и мутаторные гены // В кн. «Канцерогенез» под ред. Заридэе ДГ. // М., «Научный мир» 2000, с. 7984.

26. Коржевская Е.В, Н Эидометриоидный рак яичников (клиника, диагностика, лечение, факторы прогноза) // -М., 1997. Дисс, канд. мед. наук, 120 с.

27. Малиев Ф.М, // Клиническое использование проточной ДНК-цнтофлурометрнн при дисплазиях к раке шейки матки //Дне. канд.мел-наук -М , 2005 -152с,

28. Нечушкнна В.М. // Клиническая оценка параметров ДНК-проточной цитометрин прн раке тела матки // Дне. канд.мед.наук М,, 2002.-176с.

29. Новикова ET,, Корнеева И.А. II Нсоадъювантная химиотерапия при злокачественных опухолях яичников: «за» и «против» //Совр. Онкология 2003,5(1), с. 11-17.

30. Новикова Е.Г., Роиииа Е.А. //Особенности эпидемиологии и современные методы диагностики злокачественных опухолей яичников// Гинекология, 1999, №2, с. 42-45

31. Новикова Е.Г., Чиссов В.И, Чулкова О.В, и лр // Оргаиосохра-няющее лечение в оикогинекологин IIМ.: Нзд-во «ВИДАР», 2000. 10S с.

32. Орлова Р.В. Н Современное стандартное лечение больных раком яичников // Практическая онкология, 2000, №4, стр.42-44.

33. Подушкина И.Н. II Биомолекулирные маркеры как факторы про-ноза при серозном раке яичников ГИ-IV стадии // Днсс. канд. мед. Наук, М- -2002,110с.

34. Порханова Н.В. II Рецидивы серозного рака яичников (факторы прогноза и диагностика) // Днсс. канд. мед. наук, М. 1999.

35. Райхлнн Н.Т., Райхлнн А.Н. И Регуляция и проявления апоптоза в физиологических условиях и в опухолях. // В кн.: «Рух-во по иммуногисто-химической диагностике опухолей». Казань 2006 г., нзд-во «Титул», с. 350356.

36. Стенина М-Б. // Химиотерапия первой линии при раке яичников: стандарты и нерешённые вопросы // В кн.: Практическая онкология: избранные лекции. Под ред. Тюлянднна С.А., Моисееико В. М- Иэд-во: «Центр Томм», С-Пстербург, 2004, с. 345-358.

37. Степанова Е.В., Барышников АЛО. // Молекулярно-биологичес-кие маркеры рака яичников И Сборник статей, приуроченный к ЕШО. под редакцией проф, Горбу новой ВА„ Москва, сентябрь 2001г., стр. 32-37.

38. Тамаева З.Э. Рецидивы рака яичников 1-IIA стадий (факторы прогноза, лечение) .// Автореф. Дисс. канд. мед. наук // -М. -2006,31с,

39. Тамаева 3,3., Жорданиа К.И., Харитонова Т.В. с соавт. // Зависимость возникновения рака яичников от прогностических факторов И Совр. онкология 2005, 7(2), с. 76-78.

40. Тюля «дни С.А. И Выбор химиотерапии первой линии у больных распространённым раком яичников // Во пр. Онкологии 1999, т.4, с. 16-20.

41. Урманчеева А.Ф. // Таксаны в оптимальной химиотерапии раком яичников И Совр. онкология 2002, 4(4), с. 165-167.

42. Урманчеева А.Ф., Мешкова НЕ. // Вопросы эпидемиологии и диагностики рака янчннков // В кн.; Практическая онкология: избранные лекции. Под ред. Тюлянлнна С.А., Моисеенко В.М. Изд-во: «Це1гтр Томм», С-Петербург, 2004, с.318-328.

43. Урманчеева А,Ф„ Ульрнх Е.А. // Антраииклнны в лечении опухолей жеискнх половых органов // Совр. Онкология 2005,7(4), с. 171-175.

44. Флейшмаи F.В. Практические выходы молекулярной генетики // В кн. «Канцерогенез)» иод ред. Зарндзе Д-Г. // М., «Научный мир» 2000, с 357.

45. Хайленко В.А., Комов Д.В„ Богатырев ВН. И Диагностика рака молочной железы It Изд-во: «Медицинское информационное агенство», с. 162-177.

46. Хансои К.П-, Имяннтов E.H. // Молекулярная генетика рака яичников Н Практическая онкология 2000, №4, с. 3-649. Чекалова М.А, //Ультразвуковая диагностика рака яичников //

47. Современные экспериментальные и клинические подходы к диагностике и рациональному лечению рака яичников // сентябрь 2001г. Сборник статей, приуроченный к ЕШО, под редакцией проф. Горбуновой В.А,, -М., стр.47-57,

48. Шаталова Т.М. // Рак яичников у женщин пожилого и старческого возраста возраста (клиника, лечение, прогноз) И Днсс, канд. мед. наук, -М, 2002, с. 100-109,

49. Шелепова В М, Порханова Н.В., Соколов А-В. и др. //Значение определения СА-125 в диагностике и прогнозировании рецидивов рака яичников // Вестник ОНЦ АМН России М., №1. 1997,с.21-25.

50. Abou-Rcbyeh Н„ Borgmann V. Nagel R„ Hussein Al-Abadi // DNA ploidy is a valuable predictor for prognosis of patients with resectcd renal cell carcinoma // Cancer 2001,92(9), p.80-2285.

51. Alberts D.S. /.-Treatment of refractory and recurrent ovarian cancer.II Semin. Oncol 1999 Feb; 26(t Suppl 1), p, 8-14.

52. Allred D,C,, Harvey J.M., Berardo M, Clare G.M. // Prognostic and predictive factors in breast cancer by immunohistochemical ananlysis // Mod. Pathol. 1998.2, p. 155-168,

53. Alvarez A,, Lambers R., Lancaster M, c coasr, Allele Loss on Chromosome tp36 in Epithelial 'Ovarian Cancers U Gynecologic Oncology, Vol. 82, Issue I July 2001, p. 94-98.

54. Boyd J, Sonoda Y, Fcderichi M ct al, // Clinicopathologic features of BRCAI sporadic ovarian cancer// JAMA 2000, 283, p2260-5.

55. Braly P. it DNA contení and S-phase fraction in epithelial ovarian cancer: what information do they really add? H Gynecol Oncol 1998, 71, p, 1-2.

56. Brislow R.E., del Carmen MG., Pannu H.K, ei at // Clinically occult recurrent ovarian cancer: patient selection for secondary cytoreductive surgery using combind PET/CT it Gynecol Oncol 2003, 90. p.519-528,

57. Brislow R.E., Duska L.R., Lambrou N.C. et al. // A model for predicting surgical outcome in patients with advanced ovarian cancer using computed tomography it Cancer 2000,89, p. 1532-1540.

58. Byrom J, Mudaliar V. Redman CW. Jones P, Strange RC, Ho ban PR. // Loss of heterozygosity at chromosome 9q22-31 is a frequent and early event in ovarian tumors. Int J Oncol. 2004 May; 24(5):1271-7,

59. Cabelguennc A-, Blons H., de Wafers I. ii p53 alterations predict tumor response to neoadjuvant chemotherapy in head and neck squamous cell carcinoma: a prospective series US Clin Oncol. 2000 Apr; 18(7): p. 1465-73.

60. Caduff R.F., Swoboda-Newman S.M., Ferguson N.W. // Comparison of mutations of Ki-RAS and p53 immnoreactivity in borderline and malignant epithelial ovarian tumors // Am J Surg Pathol 1999,23, p.23-328.

61. Cass L, Baldvin R, Varkcy T et al, ti Improved survival in women with fiÄC4-associated ovarian carcinoma ft Cancer 2003,97(9), p.2187-2195.

62. Casstnelli G., Supino R., Perego P. et al. // A role for loss of p53 function in sensitivity of ovarian carcinoma cells to taxancs // Int J Cancer. 2001 Jun t; 92(5): p. 738-47.

63. Cecearon i M„ Chieco P., AI bom C. et al, H p53 expression, DNA ploidy and mitotic Index as prognostic factors in patients with epithelial ovarian carcinoma // Tumori 2004,90(6), p.600-606.

64. Chan J.K., Loiaori V., Lin Y-G. et al. // Stages III and IV Invasive epithelial ovarian cancer: what prognostic factors are important? Obstet Gynecol 2003,102< I), p. 156-61.

65. Chi D.S., Hoskins W.X /1 Ovarian cancer H Rubin J., USA, 2001, p. 241-265.

66. Chu S., Morgan M„ Randall T. el al. // Survival of BRCAt ovarian cancer patients based on family history // Gynecologic Oncology 2001, S3, p. 109114.

67. Cloven N., Kyshtoobayeva A., Burger R- et al. // In vitro chemorests-tance and biomarkcr profiles are unique for histologic subtypes of epithelial ovarian canccr // Gynecol Oncol 2004,92, p. 160-&5.

68. Coley H-M-, Sargent J.M„ Tillcy J, // Lack of prognostic significance

69. Concin N. Stimpfl N„ Zeil linger C. et at. // Role of p53 in G2/M cycle arrest and apoptosis in response to gamma-irradiation in ovarian carcinoma cell lines// Int i Oncology 2003.22: p. 51-57.

70. Creasman W.T.t Abu-Ghazaleh S. Schmidt H.I. //Retroperitoneal metastatic spread of ovarian cancer// Gynecol Oncol 1978; 6: p.447

71. Cui J.Q., Shao N. Chai Y,L,, Wang H , Reddy E.S.P., and Rao V.N. // BRCAI splice variants BRCAla and BRCAlb associated with CBP.coactivator. // Oncol. Report <1998b). 5T 591-595.

72. Di Saia, Creasman W.T. H Epithelial ovarian cancer; in book: Clinical Gynecologic Oncology, 6th ed. Mosby, Inc, 2002, p. 289-350.

73. Dietel M-, Hauptmann S. // Serous tumors of low malignant potential of the ovary // Virchows Arch. 2000 May; 436<5): p.403-12.

74. Dimascio j., Schilder R. II Early stage management II In book: Ovarian canccr // Ed, by BC Decker Inc. London, 2003., p, 176-213,

75. Easton DF, Ford D, Bishop.T, Crockford GP.and the Breast Cancer Linkage Consortium. H Genetic onset familial breast and ovarian cancer, results from 214 families. // Am J Hum Genet 1993; 52: 678-701.

76. Eecles D, Gruber L, Stewart M ct al. // Allele toss on chromosome 1 Ip.is associated with poor survival in ovarian cancer // Dismareers 1993, 10, p95-99.

77. Edetson MI,, Scherer S W., Tsui LC c coaer, // Identification of a 13 00 kilobase deletion unit on chromosome 7q3t.3 in invasive epithelial ovarian carcinomas // Oncogene 1997, 14,p2979-2984.

78. Richhorn J.H„ Bell D,A„ Young R,H, el al, H Ovarian serous borderline tumors with micro papillary and cribriform pattern: a stuly of 40 cases and comparison with 44 cases without these patterns // Am J Surg Pathol 1999, 23, p.14-18.

79. Eissa S., Khalifa A., Laban M. el al, // Comparison of flow cytometric DNA content analysis in fresh and paraffin-embedded ovarian neoplasms: a prospective study // Br J Cancer 1998; 77(3): p.421-5.

80. Enchev V. // DNA ploidy and morphometric features of normal, hypr-pastic, premalignant and malignant specimens. // Anal Quant Cytology and Histology 1998, 20(4), p.288-296,

81. Fallows S. Price J. Atkinson R.J. et al. fl P53 mutation does not affect prognosis in ovarian epithelial malignancies U J Pathol 200.; 194(1): p.68-75.

82. Faulkner S, Fricdlaoder M t> Molecular genclic analysis of malignant germ cell tumors 1/ Gynecol Oncol 2000+ 77, p283-288.

83. Ferrandirva G., Fagotti A„ Salerno M, II p53 ovcrcxpcssion is assoti-ated with cytoreduction and response to chemotherapy in ovarian cancer II Br J Cancer 1999, 81(4); p. 733-740,

84. Flezar M.S., But I., Kavalar R. 1/ Flow and image cytometric DNA ploidy, incluin 5c esceeding cells, of serous borderline malignant ovarian tumors If Anal Quant Cytology and Histology 2003, 25(3), p. 139-145

85. Frank TS. // Testing for hereditary' risk of ovarian cancer tt Cancer Control 1999,6, p327-334.

86. Franke F.E., Munstedt K., von Georgî R. // Influence of surgeiy and postoperative therapy and tumor characteristics on patient prognosis in advanced ovarian carcinomas U Eur J obstct Gynecol Rcprod Biol 2003, 111(2), p. 189-96,

87. Freed J.A. U Improved correction on quantitative nuclear DNA (ploidy) measurements in tissue sections // Anal Quant Cytology' and Histology 1999,21 {11 p.l 03-112.

88. Fritsche H.A., Bast R.C. CA 125 in ovarian cancer: advances and controversy II Clinical Chemistry 199S; 44 7:1379-1380.

89. Gabra H, Talor L, Cohen B et al. // Chromosome 11 allele imbalance and clinicopatholoogical correlates in ovarian tumours // Br J Cancer 1995, 72, p367-75.

90. Gadducci A-, Cosio S,, Muraca S. // Molecular mcchanisms of apop-tosis and chemosensitivity to platinum and pacfitaxel in ovarian cancer: biological data and clinical implications. II Eur J Gynaecol Oncol- 2002; 23(5): p. 390-6,

91. Griffiths C.T. II Surgical resection of tumor bulk in the primary treatment of ovarian carcinoma: seminars on ovarian cancer I I Natl. Cancer Inst. 1975, 42, p.101-104,

92. Heintz A.P.M., Odicino F., Bel ler U, et al, // Carcinoma of the ovary t! J Epidemiology and biostatistks200l, 16(1), p. 109-138.

93. Hermeking H, Eick D. // Mediation ofc-myc-indused apoptosis of p53 // Science, 1994, 294, p,209l-3,

94. Ho E.S., Lai C.R., Hsieh Y.T. et a1. // p53 mutation is infrequent in clear cell carcinoma of the ovary // Gynecol Oncol 2001; 80(2): p. 189-93.

95. Holt J.T, Thompson M,E,, Szabo C, et al. // Growth regulation and tumour inhibition by BRCAI. // Nature genetics 1996, March 12: 298-302.

96. Hornung R-, Eppenbcrgcr If., Eppcnberger S, et at. // Analysts of potential prognostic factors in 111 patients with ovarian cancer // Cancer Letters 2004, V 206(1), p.97-106.

97. Iba T-, Kigawa J., Kanamori Y et al, H Expression of c-myc gene as a predictor factor chemotherapy response and a prognostic factor in patients with ovarian cancer // Cancer Science 2004, Vol 95, №5. p.418-423.

98. Ikeda K-, Sakai K-. Yamamoto R. et al, // Multivariate analysis for prognostic significance of histologic subtype, GST-pi, MDR-I, and p53 in stages ll-IV ovarian cancer // Int J Gynecol Cancer 2003, 13, p.776-784.

99. Imyanitov EN, Birrell GW, Filippovich I. et al. // Frequent loss of heterozygosity at Ip36 in ovarian adenocarcinoma but the gene encoding p73 is unlikely to be the target. Oncogene 1999; 18, p,4640 -2.

100. Irie T-, Kigawa J., Minagawa Y, et al. // Alteration of a p53 gene status affects outcome of patients with recurrent ovarian cancer H Oncology 2000; 58(3): p.23 7-41.

101. Ishioka S.4 Sagae S4 Terasawa K. el al. // Comparison of the usefulness between a new universal grading system for ovarian epithelial cancer and the FJGO staging system // Gynecol Orvcol 2003, 89T p. 447-452.

102. Jeong Y.Y„ Outwatcr HX„ Kang H-K. et al. // imaging evaluation of ovarian masses // Radiographics 2000,20. p, 1445-1470,

103. Kaern J.T Aghmesheh M., Nesland J.M. el al. // Prognostic factors in ovarian carcinoma stage III patients. Can biomarkers improve the prcdilion of short- and long-term survtors? // Int J Gynecol Cancer 2005, 15 (6), p. 1014-1022.

104. Kato II, Arakawa A, Suzumori К et al. // FISH analysis of BRCA1 copy number in paraffin-embedded ovarian cancer tissue samples // Exp.Mol Pathol 2004, Apr;76(2), p.l38-42.

105. Kennedy A.W., Maicman M., Webster K.D. et al. U Combinton chemotherapy of ovarian and fallopian tube cancer and primary peritoneal carci-nomawith carboplatin and docetaxel // Proc. ASCO. 2000, Abstr. 1563.

106. Kerr J-, Lcary J., Antajis Т. с соавт. // Allelic loss on chromosome 7q in ovarian adenocarcinomas: two critical regions and a rearrangement of the PLANH1 locus//Oncogene 1996,13,р.1815-18.

107. Kiehle-Swarz M., Bauknecht T,, Wiennker T,c соавт, H Loss of constitutional heterozygosity on chromosome 11 p.in human ovarian cancer // Cancer 1993, 72(8), p,2423-243l.

108. Kildal W., Risberg В., Abeler V.M // beta-catenin expression, DNA ploidy and clinicopathological features in ovarian cancer a study in 253 patients // Eur J Cancer. 2005 May; 41(8): p. 1127-34.

109. Kim Y. M. Zhao, Kim S.H., Lee C.S.// Prognostic significance of DNA quantification by (low cytometry in ovarian tumors // int J Gyn Obst 2005, V88, (3): p,286-291.

110. Kristensen G.B-, Kildal W., Abeler V.M. et aL // Large-scale genomic instability predicts long-term outcome for women with invasive stage I ovarian cancer H Annals of Oncology 2003,14: p. 1494-1500.

111. Lassus H., Letninen A., Lundin J, et aL It Distinct subtypes of serous ovarian carcinoma identified by p53 determination ft Gynecol Oncol 2003, 91, p.504-512.

112. Launonen V, Mannemiaa A, Stenback F et al. // Loss of heterozygosity at chromosomes 3, 6, 11, 16 and 17 in ovarian cancer: correlation to clinicopa-thological variables // Cancer Genetic Cytogenetic 2000, 122(1), p.49-54.

113. Lavarlno C,, Pilotti S,, Oggionni M, et al. // p53 gene status and response to platinum/paclitaxel-based chemotherapy in advanced ovarian carcinoma //) Clin Oncol. 2000 Dec I; 18(23): p.393<M5.

114. Lee J, Kavanagh J, Wharton T et at. ft Allele loss at the c-Ha-rasl locus in human ovarian cancer// Cancer Res 49, p. 1220-22.

115. Lcitao M.M., Soslow R.A., Bacrgen R.N. et at. // Mutation and expression of the TP53 gene in early stage epithelial ovarian carcinoma // Gynecol Oncol. 2004 May; 93(2): p.301-6.

116. Liu T.J., McDonnell TJ.t El-Naggar A,K, et at. // Apoptosis induction mediated by wild-type p53 adenoviral gene transfer in squamosus cell carcinoma of the head and neck // Cancer Res 1995, 55, p.3J 17-22.

117. Liu Y, Gariesan T /1 Tumour supressor genes in sporadic epithelial ovarian cancer // Reproduction 2002,123, p. 341-353.

118. Lodhi S-, Najam S-, Pervez S. It DNA ploidy analysis of borderline epithelial ovarian tumours H\ Pak Med Assoc. 2000 Oct; 50(10): p,349-51,

119. Lodhi S., Najam S., Pervez S, // DNA ploidy analysis of borderline epithelial ovarian tumours Hi Pak Med Assoc. 2000 Oct; 50(10): p.349-51.

120. Lynch HT, Casey MJ, Lynch J et al. tt Genetics and ovarian carcinoma //Sem in Oncol 1998,25: p.265-280.

121. Marchenco N.D., Zaika A., Moll U.M. // Death signal-induced localisation of p53 protein to mitochondria. A potential role in apoptotic signaling // J Biol Chcm 2000, 275, p. 16202-16212.

122. Marehctti P., Urien P., Cappetlini G. H Weekly administration of paclitaxel; theoretical and clinical basis // Critical reviews in oncology/hetnatology 2002,44, p.S3-SI3.

123. Matsushima M, Kobayashi K, Emi M et at. H Mutation analysis of the BRCAI gene in 76 Japanese ovarian cancer patients: four germline mutations, but no evidence of somatic mutation. H Human Molecular Genetics 1995, Vol.4 (10), p. 1953-1956.

124. Mauila R., Alanen K., Syi^anen S, // DNA content as a prognostic marker of oral lichen planus with a risk o cancer of cancer development // Anal Quant Cytology and Histology 2004,26(5), p.278-284.

125. MeGuire W.P., Hoskins W.L, Brady M F., el al. // Cyclophosphamide and cisplatin compared with paclitaxel and cisplatin in patients with stage II1-IV ovarian cancer Jl N. Engl. I. Med. 1996,334: pp. 1-6.

126. MeGuire W.P., Hoskins W.L, Brady M-F., et al. IlCyclophosphamide and cisplatin compared with paclitaxel and cisplatin in patients with stage I1I-IVovarian canccr// N, Engl, I. Med, 1996, 334: pp.-6

127. Micha J.P. Goldshtcin B.H., mattison J.A. et al. It Experience with single agent paclitaxel consolidation following primary chemotherapy with carbo-platin, paclitaxel and hemcitabhe in advanced ovarian cancer U Gynecol Oncol 2005; 96{ I), p-132-5,

128. Missel J.L., Vcnnin P„ Chollel P. et al. tt 111 study of Oxaliplan plus Cyclophosphamide vs. Cispatin plus Cyclophosphamide in advanced ovarian cancer patients: final results U Proc, ASCO. -2000. V.19, p. 1502.

129. Mohanty S.K., Dip.N.B., Dey P. et al, // Mean nuclear volume in ovarian papillary' serous cystadenocaicinoma // Anal Quant Cytology and Histology 2004. 26(1), p. 28-30.

130. Monk B J„ DLSaia PJ. // Conservaive primary surgical management of ovarian canccr in United States U Int J Gytvecol Cancer 2005, 15(3), p. 199-205.

131. Mosfchi R-, Chu W-, Karlan B. ei aJ. H BRCAi and BRCA2 mutation analysis of 208 Aslikenasi Jewish women with ovarian cancer // Am J Hum Genet 2000, 66, p. 1259-1272.

132. Muggia F.M., Braly P.S., Brady M.F., et al. Phase HI of cisplatin or paclitaxel versus their combination in suboptimal stage III snd IV epithelial ovarian cancer: Gynaecologic Oncology Group.Sludy II Proc ASCO 1997; 16 (abs. 1257), 352a,

133. Nagai N., O&hita T., Fujii T. et al, // Are DNA ploidy and epidermal growth factor receptor prognostic factors for untreated ovarian canccr? A prospective study // Am J Clin Oncol, 2001 Jun; 24(3): 215-21.

134. Nakayama K., Takebayashi Y., Nakayama C. et al. // Prognostic value of overcxpression of p53 in human ovarian carcinoma patients receiving cisplatin H Cancer Letters 2003,192, p. 227-235,

135. Narad S.A., Boyd J. // Current understanding of the epidemiology and clinical implications of BRCAI ami BRCA2 mutations for ovarian cancer it Curr Opin Obstci Gynecol 2002, 14. p. 19-26.

136. Narad S.A., Ford D., Devilee c coaBT. // An Evaluation of genetic Heterogeneity in 145 Breast-Ovariancancer Families// Am J, Hum. Genet. 1995, 56: 254-264.

137. Neijt J.P., Engelholm S.A., Tuxen M.K. // Exploratore phase ill study of pactitaxel and cisplatin versus paclltaxel and carboplatin in advanced ovarian cancer Hi. Clin, Oncol, 2000, 18, p. 3084-92.

138. Nielsen J.S. Jacobsen E., Hol und B. et al. il Prognostic significance of p53, Hcr-2 and EGFR overexpression in borderline and epithelial ovarian cancer // Int J Gynecol Cancer 2004,14: p. 1086-96,

139. Okada S, Tsuda H, Takaiabe T et al. II AUelotype analysis of common epithelial ovarian cancers with special reference to comparison between clear cell adenocarcinoma with other histological types H Jpn J Cancer Res 2002, 93(7), p798-806.

140. Okuda T., Otsuka J,, Sekizawa A. et al. tí p53 mutation and overexpression affect prognosis of ovarian endometrioid cancer, but not clear cell cancer // Cancer Res 2003,88, p. 318-325.

141. Ozalp.S,, Yakin O.T., Gulbas Z, // EfTect of cellular DNA content on the prognosis of epithelial ovarian cancers // Gynecol Obstet InvesL 2001; 52(2): 93-7,

142. Ozols R.F., Rubin c.S., Thomas G.M., Robboy S-I- // Epithelial ovarian cancer. Chapter 34 Section III, Disease Sites,, 2001, p.981-1057

143. Ozols R.F., Rubin S.C, Tomas G.M., Robboy S.G. ft Epithelial ovarian cancer// In book: Principles and practice of gynecologic cancer, 4TH Ed, 2005.p, m-m,

144. Prowse A., Frolov A. Godwin A. // Genetics, in book: Ovarian cancer. Ed, by Gzols R-F. it London, BC Decker Inc, 2003, p. 49-83.

145. Quezado M.M., Moskaluk C,A, Bryant B. ei at. ii Incidence of loss of heterozygosity at p53 and BRCA1 loci in serous surface carcinoma ii Hum Pathol 1999; 30(2): p.203-7.

146. S Ragnarsson G., Eiriksdoftir G., Johanns G, ct at // Loss oFheterozygosity at chromosome Ip.in different solid human tumours: association with survival. it Br J Cancer 1999; 79: p. 1468-74.

147. Ramus S. Si BRCAI/2 mutation status influences somatic genetic progression in inherited and sporadic epithelial ovarian cancer cases ii Cancer Res 2003, 63(2), p417-23.1£7. Randal I M. // The biology of Gynecologic Cancer //47.

148. Rao G.G., Skinner E.N., Gehrig P.A. et al. ii Fertility-sparing surgery for ovarian low malignant potential tumors // Gynecol Oncol. 2005; 98(2): p.263-6

149. Rasheed BK, Wiltshire RN, Bigner SH, Bigner DD, Molecular pathogenesis of malignant gliomas, Cuit Opin Oncol 1999;11:162-166,

150. Reles A., Gee C„ Schellschmidt L et al, it Prognostic significance of DNA content and S-phasc fraction in epithelial ovarian carcinomas analyzed by image cytometry // Gynecol Oncol 1998, 73, p.3-13,

151. Reles A., Wen H. Schmider A. et al. ii Correlation of p33 mutations with Resistance to Platinum-based Chemotherapy and Shortened Survival in Ovarian Cancer II C1Ln Cancer Res 2001, Vol. 7,2984-2997,

152. Resnik £., Trujillo Y.P., Taxy J.B. il Long-term survival and DNA ploidy in advanced epithelial ovarian cancer // J Surg Oncol, 1997 Apr; 64(4); 299303.

153. Risch H.A., McLaughlin J.R., Cole D-E. et al. // Prevalence and penetrance of germline BRCAI AND BRAC2 mulattos in a population series of 649 women with ovarian cancer // Am . Human Genetics 2001,68, p. 700-710.

154. Ravjd A., Barshach I., Suldbei J. el al. // Immunochemical analyses of sporadic and familial ovarian cancer in Israel // Eur J Cancer 2002, 36, p. 1120-24.

155. Rowinsky E.K., Donchower R,C // Paclitaxel // N Eng J Med 1995, 332, p. 1004-14.

156. Rowinsky E>IC, Tolcher A.W. // Antimicrobule agents // In book: Cancer: principles and practice of oncology. Ed.: de Vita V.T, et al. // 6th ed Philadelphia: Lippincott. Williams and Wilkins 2001, p. 431,

157. Roy WJ., Watson R.H., Hitchcock A.( Campbell I.G. // Frequent loss of heterozygosity on chromosomes 7 and 9 in benign epithelial ovarian tumours // Oncogene 1997, l5,p203t-2035,

158. Russell P. Robboy S.J., Anderson M.C. // Ovarian tumors: clarification and clinical perspective // In book: Pathology of the female reproductive truct. London: Churchill Livingstone, 2002,

159. Russo A,, Bazan V., Migliavacca M. el al. Il DNA aneuploidy and high proliferative activity but not K-rai-2 mutations as independent predictors of clinical outcome in operable gastric carcinoma // Cancer 2001.92(2), p.294-302.

160. Rustin G-, Nelstrap.A,, Crawford M, et al, // Phase II trial of oral altre-tamine for relapsed ovarian carcinoma: evaluation of defining response by serum CA 125//J Clin Oncol 1997, v 15, p. 172-176.

161. Rustin G-J. Nclstrap.A, Mc Clean P, //Use of serum CA 125 to define response to first and second line chemotherapy for ovarian cancer/I ASCO 1996, 15, p. 8-14.

162. Sacgusa M., Machida D, Okayasu I. II Loss of DCC gene expression during ovarian tumorigenesis: relation to tumour differentiation and progression // Br J Cancer. 2000 Feb; 82(3); p,57l -8.

163. Sagarra R., Andrade L., Martine/. E. el at. // p53 and Bcl-2 as prognostic predictors in epithelial ovarian cancer II Int J Gynecol Cancer 2002, 12, p.720-7,

164. Santosa J.T., Tang D.C., Lane C.B. et al. // Adcnovirus-based p53 gene therapy in ovarian cancer II Gynecol Oncol 1995,59, p. 171-8.

165. Saqarra R.A., Andrade L.A, Martinez E.Z. et al. // P53 and Bcl-2 as prognostic predictors in epithelial ovarian cancer // Int J Gynecol Cancer 2002, 12(6), p, 720-7.

166. Saretzki G., Hoffmann U„ Rohlke P. et al. // Identification of allelic losses in benign, borderline and invasive epithelial ovarian tumors and correlation with clinical outcome // Cancer 1997, 80(7), pi241-49.

167. Sato Y., Shimamoto Т., Amada S. H Prognostic value of histologic grading of ovarian carcinomas // Int J Gynecol Pathol 2003, 22, p. 52-56.

168. Schueler J.A., Trimbos J.B., Hermans J. and Flcuren GJ. ft The yield of surgical staging in presumed early stage ovarian cancer; benefits or doubts H Int J Gynecol Cancer 1998, 8:95-102.

169. Schueler J.A., Trimbos J.B., vd Burg M. et al. И DNA index reflects the biological behavior of ovarian carcinoma stage 1-1 la If Gynecol Oncol. 1996 Jut; 62(1 ):59-66.

170. Schuijer M. Berns M.J. Н TP53 and ovarian cancer // Human mutation 2003, 21, p. 285-291.

171. Scimisdotlir B.S., Sorbes В., Seidal T. // p53, bcl-2and bax; their rela-tionship.and effect on prognosis in early stage ovarian carcinoma // tnt J Gynecol Cancer2001, ll:p.|47-58.

172. Shahin S-M-, Hughes HJ., Sood K.A., Duller E. If The prognostic significance p53 tumor suppressor gene alterations in ovarian carcinoma Si Cancer 2000,89,2006-17,

173. Siddik ZJt // Cisplatin: mode of cytotoxic action and molecular basis of resistance !f Oncogene 2003, 22, p. 7265-7279,

174. Tavassoli F.A., Devilee P. // World Health Organization (WHO) Classification of tumours, Pathology and Genetics//1 ARC press, Lyon 2003,

175. Tempany C.M., Zou K-H„ Silverman S.G„ et al. Staging of advanced ovarian cancer: comparison of imaging modalities report from the Radiological

176. Diagnostic Oncology Group.ll // Radiology 2000; 215 (3), p.761-767.

177. Torada K., Nakayama A,, Kanzaki A. el at // Prognostic Value of the Cu-Transporting ATPase in Ovarian Carcinoma Patients Receiving Cisplatin-Rased Chemotherapy // Clinical Cancer Research 2004, Vol, 10. p 2804-2811.

178. Tewari K., Mehta R., Yu I, ct al. // Biomarkcr conservation in primary and metastatic epithelial ovarian cancer //Gynecol Oncol 2000,78, p. 130-136.

179. Thomas N.A, Choong D.Y-, Jokubaítis VJ., Neville PJ., Campbell l,G. // Mutation of the ST7 tumor suppressor gene on 7q3l,l is rare in breast, ovarian and colorectal cancers. II N'al Genet. 2001 Dec; 29(4):379-S0.

180. Thompson F.H., Emerson J., Alberts D,, et al. Clonal chromosome aberration in 54 cases of ovarian carcinoma. // Cancer Genet Cytogenet 1994, 73: 3345.

181. Thompson M.E., Jensen R,A., ObeimiUer P.S. Page D.L., and Holt J.T. // Decreased expression of BRCA1 accelerates growth and is often present during sporadic breast cancer progression^ 1995) II Nature Genet- 9,444-450,

182. Tingulstad S., Skjeldestad F„ Halvorsen T. el al. // Survival and prognostic factors in patients with ovarian cancer // Obstetrics and gynecology 2003, 101(5), p. 885-891,

183. Tingulstad S-, Skjelstad F.E., Hagen B. // The effect of centralization of primary surgery on survival in ovarian cancer patients // Obste» Gynecol 2003, 102, p. 499-505.

184. TNM c lassi fications of mal ignant tumors. New-York, 2002.

185. Tong D„ Stimpfl M„ Reinthaller A, // BRCAI gene mutations in sporadic ovarian carcinomas: detection by PCR and reverse allele-specific oligonucleotide hybridization II Clin Chem 1999,45: p976-8I

186. Tripodi S.A., Minacci C-, Amato T. et al. // DNA/nuclear protein content In the evaluation of cell cycle modifications during colon carcinogenesis // Anal Quant Cytology and Histology 2000, 22(2), p. 133-138,

187. Trope C. H Prognostic factors in ovarian cancer // Cancer Treat Res 1998, 95,287-352.

188. Trope C., Kaem J., HogbergT. // Randomized study on adjuvant chemotherapy in stage I high-risk ovarian cancer with evaluation ofDNA-ploidy as prognostic instrument U Ann Oncol 2000; 11(3): 281-8.

189. Valverde J,J., Martin M., Garcia-Asenjo J,A. et al. // Prognostic value of DNA quantification in early epithelial ovarian carcinoma // Obstet Gynecol. 2001; 97(3): 409-16.

190. Vasey P A. // Prciiminay results of SCOTROC trial: a phase 111 comparison of paclitaxel-carboplatin (PC) and docetaxel-earboplatin (DC) as first-line chemotherapy for stage IC-JV epithelial ovarian cancer // Proc. ASCO 20: 202A, 2001 (abstr),

191. Vasey P.A // Resistance to chemotherapy in advanced ovarian cancer:

192. Vergote I., De Brabantcr J,, Fyles A. et al. Prognostic importance of degree of differentiation and cyst rupture in stage I invasive epithelial ovarian carcinoma Lance! 2001; 357; p.l 76-182.

193. Vilella-Bach M, Nuzzj P. Fang Y, Chen J. The FKBP12-rapamycinbinding domain is required for FKBP12-rapamycin-associated protein kinase activity and GI progression. J Biol Chem 1999; 12:4266 -72.

194. Weitzet J.N., Patel J., Smith D. // Molecular genetic changes assoti-atcd with ovarian cancer // Gynecologic Oncology 1994, 55, p.245-252.

195. Young R.C., Decker D.G., Wharton l.T. et al. 11 Staging laparotomy in early ovarian cancer //JAMA, 1983,250, p,3072-3076.

196. YuLi Chai, Jian-qiT Ningsheng Shao et at // The second BRCT domain of BRCA1 proteins interacts with p53 and stimulates transcription from the p21WAF1 /CI P1 promoter- // Oncogene 1999 18:263 -268,

197. Zborovskaja I., Gasparian A., Karseladze A. et al. // Somatic genetic alterations in benign, borderline and invasive ovarian tumors; intratumoral molecular heteroheneity // Int. J. Cancer 1999, 82, p822-826.

198. Zelada-Hedman M., Wasteson Arvcr B., Claro A- et al, // A screening for BRCAI mutations in breast and breast -ovarian cancer families from the Stockholm region. it Cancer Res 1997, Jun 15: 57(12), p.2474-2477.

199. Zenklusen L, Thompson J,, Conti J et al, // Frequent loss of heterozygosity in human primary squamous cell and colon cancer at 7q31.1: evidence for a broad range tumor su pressor gene it Cancer Res 1995, 55, p. 1347-50.

200. Zenklusen I., Weitzel J.N., Hairison G, et al. // Allelic loss at 7q31 in human primary ovarian carcinomas suggests the existence of a tumor suppressor gene // Oncogene 1995,11,359-363.

201. Zheng J, Robinson W, Hhlen T. et al. // Histologically benign or low-giade malignant tumors adjacent to high-grade ovarian carcinomas contain molecular characteristics of high-grade carcinomas // Cancer Res 19931 53, p.4138-42.