Проточная ДНК-цитометрия в прогнозировании течения опухолевого процесса при некоторых злокачественных новообразованиях человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, доктор биологических наук Николаева, Тамара Григорьевна

• Николаева, Тамара Григорьевна
• доктор биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации доктор биологических наук Николаева, Тамара Григорьевна

Введение

ОГЛАВЛЕНИЕ

Глава 1. Введение в метод проточной ДНК-цитометрии и принцип анализа ДНК-цитометрических кривых.

1.1. Метод проточной ДНК-цитометрии и принцип анализа ДНК-цитометрических кривых

1.2. Принципы анализа ДНК-цитометрических кривых.

Резюме.

Глава 2. Разработка метода компьютерного анализа

ДНК цитометрических данных.

2.1. Задачи исследования.

2.2. Принцип алгоритма компьютерного анализа распределения клеток по содержанию ДНК.

2.3. Назначение и условия применения алгоритма анализа ДНК-цитометрических данных.

2.4. Проверка работоспособности алгоритма и программы на модельных примерах и в сравнении с другими программами.

2.5. Сравнение результатов компьютерного ДНК-цитометрического анализа с данными экспериментального определения доли пролиферирующих клеток в популяции.

Резюме.

Глава 3. Материалы, использованное оборудование, методики исследований.

3.1. Материалы и использованное оборудование.

3.2. Приготовление материала для исследования.

3.3. ДНК-цитометрия образцов.

3.4. Статистическая обработка данных.

3.5. Сопоставление результатов ДНК-цитометрии опухолей с клиническими данными.

Резюме.

Глава 4. ДНК-цитометрическое исследование некоторых злокачественных опухолей человека. Анализ корреляции ДНК-плоидности опухолевых клеток, морфологических характеристик опухолей и особенностей клинического течения опухолевого процесса.

4.1. Опухоли молочной железы.

4.1.1. ДНК-плоидность в злокачественных новообразованиях молочных желез и ее прогностическая значимость (литературная справка).

4.1.1.1. ДНК-плоидность и ее связь с размером опухоли, стадией заболевания.

4.1.1.2. ДНК-плоидность и ее взаимосвязь с морфологическими характеристиками.

4.1.1.3. ДНК-плоидность и пролиферативная активность и их связь с рецидивированием РМЖ.

4.1.1.4. Связь ДНК-плоидности с чувствительностью к проводимым лечебным мероприятиям.

4.1.1.5. ДНК-плоидность в первичных опухолях и их метастазах.

4.1.1.6. Связь ДНК-плоидности и содержания рецепторов стероидных гормонов.

4.1.1.7. Взаимосвязь между ДНК-плоидностью и выживаемостью больных. ф 4.1.2. Анализ и сопоставление ДНК-цитометрических данных с клиническими факторами прогноза (собственные исследования).

4.1.2.1. Контингент больных.

4.1.2.2. ДНК-плоидность и стадия заболевания.

4.1.2.3. ДНК-плоидность, частота и сроки возвратов заболевания.

4.1.2.4. ДНК-плоидность и гистопатологические параметры.

4.1.2.5. ДНК-плоидность и статус рецепторов стероидных гормонов.

4.1.2.6. ДНК-плоидность и выживаемость больных РМЖ.

4.1.2.7. ДНК-плоидность первичных и метастатических РМЖ.

4.1.2.8. ДНК-плоидность и эффективность химиои лучевой терапии при РМЖ.

4.1.2.9. Многофакторный анализ значимости ДНК-плоидности при РМЖ.

Резюме.

4.2. Раки слизистой оболочки полости рта и гортани.

4.2.1. ДНК-цитометрия и прогнозирование течения опухолевого процесса при раках слизистой оболочки полости рта и гортани (литературная справка).

4.2.1.1. ДНК-анеуплоидия при раках слизистой оболочки рта и гортани.

4.2.1.2. ДНК-плоидность, возраст, пол и локализация опухоли.

4.2.1.3. ДНК-плоидность и стадия заболевания.

4.2.1.4. ДНК-плоидность и гистологическая степень злокачественности.

4.2.1.5. ДНК-плоидность и состояние регионарных лимфатических узлов.

4.2.1.6. ДНК-плоидность и выживаемость больных.

4.2.2. Анализ содержания ДНК в опухолевых клетках и сопоставление лабораторных данных с течением опухолевого процесса больных раком слизистой оболочки орофарингеальной области (собственные исследования).

4.2.2.1. Контингент больных.

4.2.2.2. Опухоли слизистой оболочки полости рта и гортани.

4.2.2.3. Опухоли гортани.

4.2.2.4. Опухоли слизистой оболочки полости рта.

4.2.2.5. Многофакторный анализ значимости ДНК-плоидности. 111 Резюме

4.3. Опухоли легкого.

4.3.1. ДНК-цитометрическая характеристика опухолей легкого (литературная справка).

4.3.2. Анализ и сопоставление ДНК-цитометрических данных с клиническими показателями (собственные исследования).

4.3.2.1. Контингент больных.

4.3.2.2. ДНК-плоидность, стадия заболевания и гистоморфологические характеристики.

4.3.2.3. ДНК-плоидность и частота рецидивирования.

4.3.2.4. ДНК-плоидность и выживаемость.

4.3.2.5. ДНК-плоидность и выживаемость больных раками легкого в зависимости от примененного лечения.

Резюме

4.4. Опухоли прямой и ободочной кишки.

4.4.1. ДНК-плоидность при злокачественных новообразованиях прямой и ободочной кишки (литературная справка).

4.4.1.1. ДНК-плоидность и стадия заболевания.

4.4.1.2. ДНК-плоидность и дифференцировка опухоли.

4.4.1.3. ДНК-плоидность, возраст и пол больных.

4.4.1.4. ДНК-плоидность и локализация опухоли.

4.4.1.5. Плоидность ДНК и продолжительность жизни.

4.4.1.6. Индекс ДНК и прогноз при колоректальном раке.

4.4.1.7. Пролиферативная активность и прогноз колоректального рака.

4.4.2. Анализ и сопоставление ДНК-цитометрических данных с клиническими факторами прогноза при колоректальном раке (собственные исследования).

4.4.2.1. Контингент больных.

4.4.2.2. ДНК-плоидность,пол, стадия заболевания и локализация опухоли.

4.4.2.3. ДНК-плоидность и дифференцировка опухоли.

4.4.2.4. ДНК-плоидность и частота прогрессирования заболевания.

4.4.2.5. ДНК-плоидность и выживаемость больных.

4.4.2.6. Многофакторный анализ значимости ДНК-плоидности в прогнозе колоректального рака.

Резюме

Глава 5. ДНК-плоидность опухолевых клеток важнейший прогностический показатель течения опухолевого процесса в ряду иных клинических прогностических признаков при некоторых злокачественных эпителиальных новообразованиях человека (обсуждение результатов).

Резюме

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Проточная ДНК-цитометрия в прогнозировании течения опухолевого процесса при некоторых злокачественных новообразованиях человека»

Актуальность проблемы. Современный метод проточной цитомет-рии позволяет с высокой точностью на статистически достоверном материале измерить количество исследуемых веществ в клетках и их ядрах. В основе определения - измерение естественной люминесценции или люминесценции специальных красителей, избирательно связывающихся с изучаемыми веществами.

Отдельное место среди методов проточной цитометрии занимает ДНК-цитометрия. Своеобразие этого заключается в том, что содержание ДНК в нормальной жизнеспособной клетке не является постоянным, а зависит от фазы жизненного цикла клетки. При разных формах патологии количество ДНК в покоящейся (неделящейся) клетке не всегда бывает одинаковым (диплоидным), но может отклоняться от нормального содержания (анеуплоидия) в сторону уменьшения (гипоплоидия) или чаще - в сторону увеличения (гиперплоидия). Последнее (гипердиплоидия, трип-лоидия, тетраплоидия и т.д) часто имеет место при злокачественном росте.

При анализе распределения нормальных клеток по содержанию ДНК учитывается как количество ДНК в покоящихся клетках (плоидность), так и изменения количества ДНК (вплоть до удвоения) в делящихся клетках. Поскольку при патологии высока вероятность одновременного присутствия в популяции нормальных (диплоидных) и патологически измененных (анеуплоидных) клеток, а также нормальных и измененных клеток, синтезирующих ДНК, очевидно, что анализ смеси таких субпопуляций является сложной математической задачей, осуществляемой с помощью специально разработанных программ.

ДНК цитометрические характеристики опухолевых клеток являются предметом самостоятельного изучения. Исследованиями указанным методом было показано, что далеко не все злокачественные опухоли характеризовались измененным кариотипом [Зубрихина, 1990]. Многие из них обладали диплоидным хромосомным набором, ДНК-цитометр.ически не отличавшимся от нормального. Разрешающая способность применяемого метода ДНК-цитометрии не позволяла отличить нормальный диплоидный ка-риотип от псевдодиплоидного. В последнем, несмотря на стандартное диплоидное количество ДНК, вероятны структурные перестройки хромосом. Кроме того, было показано, что перестройки в хромосомах могут также происходить на уровне отдельных генов, что, понятно, не может быть зарегистрировано путем суммарного определения ДНК в геноме клеток.

В последние годы получил признание способ прогнозирования течения опухолевого процесса на основании определения плоидности клеток в опухолевом узле. Подвергались изучению различные новообразования человека, их ДНК-цитометрические характеристики сопоставлялись с клиническими данными. В результате такого сопоставления для разных видов опухолей выявлены некоторые общие закономерности: диплоидные опухоли имели более благоприятное течение, чем анеуплоидные. Для ряда опухолей также были отмечены некоторые специфические особенности. Сопоставление с клиническими факторами прогноза показало высокую информативность показателя плоидности ДНК опухолевых клеток и позволило рассматривать его как независимый прогностический признак.

Литература последних лет содержит сведения о высокой информативности ДНК-плоидности опухолевых клеток при различных новообразованиях человека. Приведенные работы подчас противоречивы, не всегда выполнены на достаточном количестве наблюдений, что не позволяет в полном объеме судить о прогностической значимости определения ДНК-плоидности для онкологической клиники.

В настоящее время, несмотря на большое число работ, окончательного мнения не сложилось о прогностической значимости ДНК-цитометрических данных при злокачественных опухолях молочной железы, головы и шеи, легких и толстой кишки. Между тем, заболеваемость перечисленными раками имеем стойкую тенденцию к росту. Для решения вопроса о степени допустимой органосохранности необходимого оперативного вмешательства хирургу требуются прогностические данные. Клинические прогностические критерии (локализация, стадия, форма роста, распространенность и др.) достаточно хорошо изучены и преимущественно характеризуют состояние опухолевого процесса в настоящий момент. В то же время ДНК-цитометрические показатели, характеризующие биологические свойства опухолевых клеток, могут прогнозировать их поведение в будущем. Отсюда, актуальность темы определяется следующими соображениями.

Существующие способы (алгоритмы) математической обработки ДНК-цитометрических данных не всегда дают сопоставимые результаты. Большинство их сложно и требует мощного компьютерного обеспечения. Внедрение метода ДНК-цитометрии в клинику требует создания относительно простого метода расчета ДНК-цитограмм, правильно интерпретирующего клеточную кинетику и выдающего стандартизованные результаты.

Накопленные материалы ДНК-цитометрического изучения новообразований человека в недостаточной степени описывают изучаемые нами злокачественные опухоли. Опухоли указанных локализаций являются достаточно распространенными, их прогрессирование рано приводит к генерализации процесса и гибели больных. Поэтому является актуальным и важным изучение их биологических особенностей и их прогностической значимости с целью поиска объективных прогностических критериев опухолевого процесса.

Цели исследования: разработать метод компьютерного анализа ци-тометрических данных; применить разработанный метод для изучения ДНК-цитометрических характеристик опухолей молочной железы, головы и шеи, легких и толстой кишки человека; выработать и обосновать ДНК-цитометрические критерии прогноза течения изучаемых злокачественных новообразований человека.

Задачи исследования. Для достижения намеченных целей необходимо решить следующие задачи:

1. Разработать алгоритм математического анализа данных ДНК-гистограмм, полученных на проточном цитофлуориметре 1СР-22.

2. Сравнить результаты ДНК-цитометрического анализа, полученного на основе разработанного алгоритма, с данными обработки иными способами.

3. Изучить ДНК-цитометрические характеристики (плоидность) больных раками молочной железы, головы и шеи, легкого и толстой кишки человека.

4. Сопоставить полученные показатели плоидности опухолей с клиническими (стадия заболевания, распространенность процесса, наличие местных и отдаленных метастазов, сроки послеоперационного рецидивирования и метастазирования, сроки выживаемости и др.) и патоморфологическими (форма роста, степень дифференцировки и др.) данными.

5. Сопоставить данные ДНК-цитометрии с клинической эффективностью примененного лечения (химиотерапия, лучевая или комбинированная терапия).

6. Провести многофакторный анализ и определить значимость ДНК плоидности в прогнозе изученных раков человека.

Научная новизна. Впервые в пределах РФ и СНГ разработаны новый алгоритм и программа анализа ДНК-цитометрических данных, позволяющие максимально близко к реальному вычислить в популяции долю ДНК синтезирующих клеток, выделить статистически значимо различающиеся субпопуляции, в едином стандарте охарактеризовать их плоидность.

Впервые с помощью разработанного алгоритма и программы были изучены ДНК-цитометрические характеристики и классифицированы по плоидности новообразования молочной железы, головы и шеи, легкого и толстой кишки.

Впервые путем сопоставления полученных на основе разработанного алгоритма ДНК-цитометрических данных с материалами историй болезни и многофакторного анализа полученных данных определена клиническая значимости ДНК-плоидности в изученных опухолях. Показано, что ДНК-плоидность является одним из высокозначимых информативных прогностических признаков среди других клинических и морфологических критериев прогноза. Анеуплоидия опухоли является неблагоприятным показателем в прогнозе изученных нами новообразований.

Практическая значимость. Разработанный алгоритм и программа озволяет более точно классифицировать изучаемые новообразования по плоидности, что повышает уровень воспроизводимости прогноза. ДНК-плоидность является показателем биологических особенностей изученных нами раков человека.

Наши исследования показали, что анеуплоидные раки протекают в 2-3 раза более агрессивно, чем диплоидные. Плоидность ДНК изученных нами новообразований является важным и независимым, статистически значимым прогностическим фактором. В практической деятельности необходимо учитывать значения ДНК-плоидности при выборе метода лечения и последующих наблюдениях за пациентами.

Практическое использование ДНК-плоидности способствует выделению групп, нуждающихся в более интенсивном лечении, а также поможет оценке эффективности различных вариантов адьювантного и неадью-вантного лечения больных различными опухолями.

Публикации. Результаты исследования были доложены и обсуждены на Республиканских и международных конференциях. По итогам исследований в журналах, сборниках и материалах конференций опубликовано 50 работ.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Николаева, Тамара Григорьевна

выводы

1. Проточная ДНК-цитометрия позволяет исследовать такую биологическую характеристику, как плоидность опухолевых клеток, то есть содержание ДНК в преобладающем классе клеток. Классификация опухолей по плоидности разделяет их на диплоидные и анеуплоидные. Изучена ДНК плоидность 654 опухолей - 280 раков молочной железы, 206 опухолей слизистой оболочки полости рта и гортани, 96 раков легкого и 72 колоректальных рака. При раках молочной железы и легкого анеуплоидные опухоли встречались чаще (60,0% и 80,0%), чем диплоидные. Среди изученных опухолей слизистой оболочки полости рта и гортани и при колоректальных раках диплоидные варианты встречались чаще (60,6% и 58,3%), чем анеуплоидные.

2. ДНК-плоидность не только не противоречила принятым морфологическим факторам прогноза, но была однозначна с ними и часто превосходила их по частоте совпадений и достоверности при прогнозе рецидивов регионарных метастазов и продолжительности жизни при раках изученных локализаций.

3. ДНК-плоидность (анеуплоидия) коррелировала с отсутствием эстро-геновых рецепторов при раке молочной железы. Анеуплоидные ре-цепторотрицательные РМЖ имели худшую выживаемость по сравнению с диплоидными рецепторположительными новооборазованиями.

4. Анеуплоидные опухоли являются неблагоприятным фактором прогноза при раках молочной железы, слизистой оболочки полости рта и гортани, легких и колоректальных раках. Частота рецидивов и метастазов изученных анеуплоидных опухолей в 2-4 раза выше, чем при диплоидных опухолях, а сроки их появления в 2 раза меньше. Сроки и вероятность появления рецидивов и местных метастазов, как и выживаемость больных находилась в прямой связи с ДНК-плоидностью опухолевых клеток, имеющей свойства независимого прогностического признака.

5-летняя выживаемость при анеуплоидных новообразованиях молочной железы, слизистой оболочки полости рта и гортани, легких и при колоректальных раках составила 44,2%; 24,0%; 45,6% и 53,0%, при диплоидных - 73,2%; 92,9%; 74,5% и 70,0%. 10-летняя выживаемость анеуплоидных новообразований (кроме раков легкого) была 38,2%; 8,0% и 28,0%, диплоидных - 63,4%; 74,7% и 59,0%. Продолжительность жизни больных анеуплоидными опухолями была в 1,5-4 раза короче, чем у больных диплоидными карциномами. В результате проведенного многофакторного анализа клинических и лабораторных данных выявлена первостепенная прогностическая значимость и независимость ДНК-плоидности при раке слизистой оболочки полости рта и гортани и при колоректальных раках. При раках молочной железы прогностическая значимость ДНК-плоидности следовала на втором месте за стадией заболевания.

При планировании лечения больных изученных новообразований необходимо учитывать данные ДНК-цитометрии. При анеуплоидных карциномах, учитывая неблагоприятный прогноз, целесообразна дополнительная терапия, направленная на предупреждение возникновения рецидивов и метастазов.

ДНК-цитометрическое прогнозирование течения опухолевого процесса позволит формировать группы повышенного риска раннего рецидивирования и метастазирования среди больных анеуплоидными карциномами.

и III стадией (84 больных) заболевания, наблюдавшихся 4 года, установили, что пациенты диплоидными опухолями показали лучшую безрецидивную выживаемость (р=0,013) и общую выживаемость (р=0,021) по сравнению с больными анеуплоидными опухолями. Авторы отметили, что для пациентов диплоидными опухолями II стадии 5-летняя выживаемость составила 97%. В то же самое время в ряде работ приводятся данные о том, что ДНК плоидность не оказывает влияния ни на продолжительность жизни, ни на длительность безрецидивного периода [Ando и соавт., 1994, Tang и соавт., 1995, Tonouchi и соавт., 1998; Salud и соавт., 2000]. Так, Enker и соавт., (1991), изучая содержание ДНК и пролиферативную активность в 176 колоректальных карциномах (срок наблюдения 5,6 лет) не обнаружили корреляции между содержанием ДНК и продолжительностью жизни больных. Такие же выводы сделали Deans и соавт., (1993). При изучении плоидности ДНК у 312 больных не было выявлено корреляции плоидности с прогнозом ни при одновариантном (р=0,06), ни при многовариантном анализе. На основании анализа полученных результатов авторы сделали заключение о том, что только гистологические показатели являются определяющими в прогнозировании течения злокачественных опухолей толстой и прямой кишок. К аналогичным выводам пришли Bianchi и соавт., (1993) при изучении прогностической значимости ДНК-плоидности. Было показано, что ни плоидность ДНК, ни индекс ДНК, ни доля клеток в S-фазе клеточного цикла не имеют прогностического значения при колоректальных раках. Bottger и соавт., (1993) при изучении плоидности ДНК методом имидж-цитометрии у 137 пациентов, не выявили корреляции данного параметра с длительностью безрецидивного периода. Yamazoe и соавт., (1994) провели изучение плоидности ДНК у 330 пациентов первичными колоректальными аденокарциномами и сравнили полученные данные с известными клинико-патологическими характеристиками. При проведении многофакторного анализа по Коксу 10 клинических прогностических факторов ДНК-плоидность по информативности занимала четвертое место, после таких факторов как степень поражения лимфоузлов, уровеня клеточной дифференцировки и степени инвазивного роста. Проведенный анализ показал, что плоидность ДНК является одним из 5 значимых прогностических факторов определяющих течение опухолевого процесса при данной локализации опухоли. Изучение выживаемости по Mantel-Haenszel не выявило статистически достоверной разницы между продолжительностью жизни пациентов диплоидными и анеуплоидными опухолями. В итоге было сделано заключение о том, ДНК плоидность не является существенным прогностическим фактором и его не стоит принимать во внимание с основными гистопатоло-гическими данными для лучшего прогнозирования исхода заболевания.

Yamamoto и соавт., (1998) при исследовании 230 образцов опухолевых тканей больных колоректальными карциномами не выявили существенного различия в выживаемости пациентов диплоидными или анеуплоидными опухолями (р=0,322). Однако отметили, что у пациентов с высоким индексом ДНК выживаемость была меньше.

4.4.1.6. Индекс ДНК и прогноз при раке толстой кишки

Многие исследователи, занимающиеся изучением клеточно-кинетических параметров в опухолях считают индекс ДНК (ИДНК), более информативным признаком по сравнению с разделением опухолей на диплоидные и анеуплоидные [Harlow и соавт., 1991; Tomita и соавт., 1993; Tomoda и соавт., 1993; Grigolato и соавт., 1994; Yamamoto и соавт., 1998].

Harlow и соавт., (1991) исследуя ИДНК в образцах парафиновых срезов аденокарциномы кишечника в стадии С по Дюксу показали, что ИДНК менее 1,2 является благоприятным прогностическим признаком. Tomoda и соавт., (1993), анализируя значение ИДНК в прогнозировании течения рака прямой и ободочной кишок, показали, что больные, имеющие ИДНК более 1,6, характеризуются более коротким периодом выживания по сравнению с больными, имеющими ИДНК менее 1,6. На основании этого ими было сделано заключение, что ИДНК представляет более важную прогностическую информацию по сравнению с плоидностью ДНК у больных после удаления злокачественной опухоли. Tomita Masao и соавт., (1993) исследовали плоидность ДНК в опухолевых клетках 226 больных колоректальным раком и отметили снижение доли диплоидных раков по мере прогрессии опухолей. Увеличение индекса ДНК более 1,5 указывало на неблагоприятный прогноз раков указанной локализации.

По наблюдениям Pandrea и соавт., (1995) ИДНК коррелировал со стадией, но не был связан с локализацией и гистологической формой опухоли. Kimura и соавт., (1996) пришли к заключению, что ИДНК следует считать важным прогностическим фактором у 412 больных данной патологией. Особенно низкая выживаемость и частое рецидивирование было отмечено в анеуплоидных опухолях с ИДНК более 1,5.

Yamamoto и соавт., (1998) отметили, что ИДНК с учетом стадии процесса может служить прогностическим показателем выживаемости 230 больных колоректальными карциномами. Выживаемость была достоверно ниже у пациентов с высоким ИДНК (>1,5), чем у больных с низким ИДНК (<1,5) (р=0,004). Tomoda и соавт., (1998) провели сравнительное изучение плоидности ДНК, ИДНК и их влияния на выживаемость 201 пациента колоректальными раками. Средний ИДНК составил 1,42. Рецидив был диагностирован у 30 пациентов (14,9%). Проведенный многофакторный анализ установил, что ИДНК, в отличие от плоидности опухоли, является более значимым прогностическим критерием длительности безрецидивного периода. Пациенты с ИДНК больше, чем 1,4 имели более короткий безрецидивный период, чем с ИДНК меньше чем 1,4 (р<0,001), особенно в стадии С по классификации Дюкса (р=0,0033).

К прямо противоположным выводам пришли Bianchi и соавт., (1993). При изучении прогностической значимости ИДНК у 34 больных колоректальными раками был сделан вывод о том, что ни плоидность ДНК, ни индекс ДНК, ни доля клеток в S-фазе клеточного цикла не имеют прогностического значения при опухолях данной локализации.

4.4.1.7. Пролиферативная активность и прогноз колоректального рака

Многие исследователи, изучающие клеточно-кинетические изменения в колоректальных карциномах, рассматривают долю клеток в фазе S клеточного цикла или сочетание этого параметра с плоидностью или индексом ДНК как более значимые прогностические факторы при раках данной локализации. Все предложенные к настоящему моменту математические модели обработки получаемых гистограмм в конечном итоге сводятся к вычленению из общего числа клеток обследованной популяции количества клеток находящихся в G 0\1 и G2+M фазах клеточного цикла. Современные проточные системы, как правило, уже выпускаются со встроенными программами обработки ДНК гистограмм. В виду того, что разными исследователями применяются различные алгоритмы обработки ДНК-гистограмм, данные расчета доли S-фазных клеток могут значительно отличаться друг от друга. Расхождения при определении величины клеточных фракций при этом могут составлять от 10% до 20% и более. В отдельных измерениях величина ошибки для фракции GO/1 может составлять более 40%. Показателем точности единичного измерения является низкое значение коэффициента вариации фракции клеток в GO/1 фазе клеточного цикла (максимальный пик).

Пролиферативную активность клеток опухоли, оцененную по доле клеток в S фазе клеточного цикла, рассматривают как высокоинформативный признак, характеризующий агрессивное поведение злокачественной опухоли. Однако большинство авторов не считают его независимым прогностическим фактором, а связывают его с анеуплоидией ДНК. Установлено, что доля клеток в периоде S значимо выше в анеуплоидных опухолях [Hiddemann, 1989; Agnano и соавт., 1993; Cascinu и соавт., 1998]. По данным разных авторов пропорция S-клеток в диплоидных и анеуплоидных раках сильно различается.

Так по данным Giaretti и соавт., (1989) средняя доля клеток в периоде S для анеуплоидных опухолей составляет 13,6% , в то время как для диплоидных опухолей этот показатель равен 1,2%. По наблюдениям Salud и соавт., (1999); Flati и соавт., (1990) доля клеток в фазе S клеточного цикла для анеуплоидных раков составляла 20%> - 33%>, а при диплоидных раках эта доля не превышала 9-17%>. По наблюдениям Sampedro и соавт. (1999) доля S фазных клеток для диплоидных и анеуплоидных колоректальных раков составила 12% и 16,9%.

Общепринято мнение о том, что анеуплоидные опухоли с высоким содержанием клеток в S фазе характеризуются быстрой прогрессией, ранним метастазированием, большей частотой возвратов заболевания [Зубрихина, 1990; Demirer, 1995]. По данным Harlow и соавт., (1991) больные опухолями с низкой пролиферативной активности имели большую продолжительность жизни, чем больные опухолями с умеренной или высокой пролиферативной активностью. По выводам, сделанным в работе Grigolato и соавт., (1994), изучившими пролиферативную активность в 30 образцах аденокарцином толстой кишки, диплоидные опухоли с высоким содержанием клеток в S-фазе могут предсказать группу риска с возможной генерализацией процесса. По данным Чистяковой и Зубрихи-ной, (1998) на основании изучения плоидности у 67 больных раком прямой и ободочной кишок 5-летняя выживаемость была четко связана с типом ДНК-гистограммы. Наилучшие показатели были отмечены в случае диплоидной опухоли с низкой пролиферативной активностью. Авторы пришли к заключению, что выживаемость больных зависит в большей степени от уровня пролиферативной активности, чем от плоидности опухоли. К такому же выводу пришли Venkatesh и соавт.,(1994), анализируя данные 248 пациентов колоректальным раком.

По их наблюдениям сочетание анеуплоидности с высоким содержанием клеток в S фазе более 20% указывало на неблагоприятный прогноз, чем исследование только плоидности (р=0,00003). Выживаемость больных анеуплоидными опухолями с высокой долей клеток в фазе S клеточного цикла (более 20%) была в 3,7 раз ниже, чем при анеуплоидных опухолях с низкой пролиферативной активностью. Работа Sumpedro и соавт., (1999) подтверждает полученные предыдущими авторами данные на 88 больных колоректальными раками. Больные анеуплоидными опухолями рецидивировали достоверно чаще, чем больные диплоидными новообразованиями (36,9% и 26,1%). При рассмотрении безрецидивного периода было замечено, что диплоидные опухоли с высокой долей S-клеток вели себя как анеуплоидные. На основе полученных результатов выявлено два профиля гистограмм. Прогностически благоприятным профилем признано сочетание диплоидной опухоли и низкой доли S-клеток. Прогностически неблагоприятным было сочетание диплоидной опухоли с высоким содержанием S-клеток и все анеуплоидные опухоли. Последние позволяли различать больных с высоким риском рецидива. Pinto и соавт., (1997) проведя изучение ДНК плоидности и фракции клеток в S-фазе на замороженных образцах, полученных от 61 пациентов колоректальным раком, обнаружили корреляцию между значениями доли клеток в S-фазе и гистологической формой (р<0,0016), поражением лимфоузлов (р<0,0007), наличием отдаленных метастазов (р<0,0001), стадией опухоли (р<0,0001), венозной инвазией (р<0,0002), и инвазией лимфатических сосудов (р<0,01). Не было обнаружено связи с периневральным ростом и инфильтрацией новообразования через стенку кишки. На основании полученных результатов авторы пришли к выводу, что проточноцитометрический анализ плоидности ДНК и определение доли клеток в S-фазе клеточного цикла являются полезными параметрами для биопатологической оценки колоректальных опухолей. Анеуплоидия и высокая пролиферативиая активность, коррелированная с гистопатологиче-скими особенностями, определяя агрессивный характер поведения опухоли и высокую потенцию к рецидиву заболевания. Cosimelli и соавт., (1998) при изучении доли клеток в S-фазе у 120 больных выявили, что при содержании клеток в S-фазе более 17,3% результаты 5-летней безрецидивной выживаемости были хуже, чем при значениях S-фазы ниже 17,3% (44,5% против 85,2%о соответственно; р=0,03). В работе Buglioni и соавт., (1999) проведен многофакторный анализ корреляции между биопатологическими маркерами р53 и Вс1-2, характеризующими агрессивность опухоли, и ДНК-плоидности на материале 171 колоректального рака. Выявлено 2 клинико-биологичес-ких профиля. Первый характеризовался отсутствием накопления р53, экспрессией Вс1-2,диплоидией, низким процентом S-фазных клеток, А-В стадией по Дюксу, высокодифференцированными опухолями и отсутствием рецидивов. Второй соединял следующие показатели - накопление р53, отсутствием экспрессии Вс1-2, анеуплоидией, высоким процентом S-фазных клеток, C-D стадией по Дюксу, плохо дифференцированными опухолями и рецидивами. Общая и безрецидивная выживаемость были лучше в первом варианте. Авторы пришли к заключению, что добавление биологических маркеров р53 и Вс1-2 в сочетании с определением ДНК плоидности может быть полезным для выявления больных с высоким риском рецидивирова-ния, особенно на ранних стадиях для проведения адьювантной терапии.

Работ, в которых бы отрицалась прогностическая значимость определения доли клеток в S-фазе клеточного цикла немного. В исследовании Bianchi и соавт., (1993) при ретроспективном анализе 34 пациентов коло-ректальными опухолями был сделан вывод, отрицающий прогностическую значимость ДНК-плоидности, индекса ДНК, доли клеток в S-фазе клеточного цикла в течении опухолей данной локализации.

Подводя итог обзору литературы, следует отметить, что, несмотря на достаточно обширный накопленный экспериментальный и клинический материал, до сих пор не существует единого мнения о прогностической значимости изучения ДНК плоидности и пролиферативной активности в злокачественных опухолях данной локализации, не определена роль этих факторов в выработке плана лечебных мероприятий.

4.4.2. Анализ и сопоставление ДНК-цитометрических данных с клиническими факторами прогноза при раке ободочной и прямой кишки (результаты собственных исследований)

4.4.2.1 Контингент обследованных

Анализируемую группу составили 72 больных злокачественными опухолями прямой и ободочной кишки, находившимися на лечении в Отделении проктологии Института клинической онкологии Российского онкологического научного центра имени Н.Н. Блохина РАМН с 1983 по 1986 гг.

Соотношение женщин и мужчин в группе обследованных больных было примерно одинаковым и составило соответственно 52,8% и 41,2%. Большинство обследованных больных было в возрасте от 50 до 69 лет - 54 человека (75%). Лиц моложе 49 лет было 12 человек (16,7%), больных в возрасте старше 70 лет - 6 человек (8,3%).

Все 72 пациента были подвергнуты хирургическому или комбинированному лечению. Объем оперативного вмешательства соответствовал локализации патологического очага. Окончательное определение стадии распространенности опухолевого процесса проводилось на основании данных полученных во время оперативного вмешательства и сопоставления их с результатами морфологического исследования удаленного операционного материала. При определении стадии заболевания пользовались общепринятой в нашей стране классификации колоректальных карцином согласно методическим указаниям Ученого совета Министерства здравоохранения (1956).

Распределение больных в соответствии со стадией опухолевого процесса представлено в диаграмме 3.

Диаграмма 3

Распределение больных в зависимости от стадии опухолевого процесса

Па

38

18

11

116

Ша

Шб

IV

Основная масса больных, 56 человека (77,8%), была оперирована в Ша и Шб стадиях заболевания. Из них количество больных в стадии Ша, т.е. без наличия метастазов в регионарных лимфоузлах, было в 2 раза больше, чем число больных с их поражением (стадия III6) и составило 52, 8% и 25,0% соответственно (38 и 18 человек). С IV стадией заболевания было 11 человек (15,3%о). Больные в стадии Па и 116 были представлены группой состоящей из 5 человек, что составило 6,9 % от общего количества пациентов.

Определение принадлежности опухоли к той или иной гистологической форме проводилось в соответствии с современной Международной гистологической классификацией опухолей тонкой и толстой кишки (ВОЗ,

1976 г.). Подавляющее число опухолей носило строение аденокарциномы 66 больных (89,2%). Перстневидно-клеточный рак был отмечен лишь в одном наблюдении (1,4%). Муцинозная аденокарцинома была выявлена у 5 больных, что составило 6,8%.

Высоко дифференцированные опухоли были выявлены у 31 (43,0%) больного, среднедифференцированные у 29 (40,3%), низкодифференциро-ванные у 12 (16,7%) больных (диаграмма 4).

Диаграмма 4

Распределение колоректальных опухолей в зависимости от уровня дифференцировки

50,0%

40,0%

30,0%

20,0%

10,0%

0,0%

40,3% г

1 Ь,/7о

L т

43,0% низкодиф. среднедиф. высокодиф.

Уровни дифференцировки

Как видно из диаграммы, частота опухолей с высокой и средней степенью дифференцировки была примерно одинаковой и составила соответственно 43,0%о и 40,3%. Низкодифференцированный рак был выявлен у 16,7 % больных.

Наиболее частой локализацией опухоли была сигмовидная кишка -32 наблюдения. Второй по частоте встречаемости были опухоли правой половины ободочной кишки - 25 случаев (рак восходящей ободочной кишки - 10, рак слепой кишки - 9, рак печеночного угла ободочной кишки - 6). По поводу новообразований прямой кишки было оперировано 3 больных. В 5 случаях был выявлен рак поперечно-ободочной кишки. Распределение больных в зависимости от локализации патологического очага представлено в диаграмме 5.

Диаграмма 5

Распределение больных колоректальным раком в зависимости от локализации опухоли рак сигмовидной кишки 44% рак прямой кишки 4% рак поперечно-ободочной кишки

Т/о рак низходящеи ободочной кишки 10% рак слепой кишки 13% рак восходящей ободочной кишки 22%

В правой половине ободочной кишки опухоли локализовались в 25 случаях, в левой - в 39 случаях. Полученные нами результаты анализа по локализации патологического очага подтверждают установленный факт о более частом повреждении опухолевым процессом левых отделов ободочной кишки.

Все 72 пациента были подвергнуты различным видам оперативного лечения, объем которого определялся локализацией и степенью распространения опухолевого процесса. Данные о характере проведенного лечения проведенного лечения представлены на диаграмме 6.

Распределение больных колоректальным раком в зависимости от характера лечебных мероприятий

56 лт+оп ОП

В комплексе лечебных мероприятий 16 пациентам в предоперационном периоде была проведена дистанционная гамма-терапия (СОД 20-25 Гр.) в режиме «укрупненного фракционирования» при разовой очаговой дозе в 5 Гр с захватом в поля облучения не только зоны расположения опухоли, но и зон регионарного метастазирования. Оперативное вмешательство, во избежание развития ранних лучевых реакций, выполнялось не позднее 1-3 суток после окончания облучения.

Сроки наблюдения за больными в послеоперационном периоде составили 10 лет и более.

Исследование ДНК плоидности проведено у 72 больных колоректальным раком. Диплоидные опухоли были выявлены у 42 больных (58,3%), ане-уплоидия ДНК была обнаружена у 30 больных (41,7%) (диаграмма 7).

Среди анеуплоидных опухолей гипердиплоидные опухоли были у 4 (13,4%) больных, тетраплоидные - у 15 (50%), гипертетраплоидные опухоли наблюдались у 4 (13,4%) пациентов и поликлоновые у 7 (23,3%) больных.

4.4.2.2. ДНК плоидность, пол, стадия заболевания и локализация опухоли

Распределение больных колоректальным раком в зависимости от плоидности анеуплоидные 42% диплоидные 58%

Диплоидные карциномы у мужчин были отмечены в 21 (61,8%), анеуплоидные - в 13 (38,2%>) случаев. У женщин диплоидные опухоли и анеуплоидные опухоли отмечались в 57,3%о и 42,3% случаев. На основании этого нами было сделано заключение об отсутствии связи ДНК-плоидности с полом больных.

При исследовании связи плоидности со стадией заболевания (таблица 18) обнаружено преобладание диплоидных опухолей над анеуплоид идными у больных в стадии Ilia - 25 (65,8%) против 13 (34,2%). Однако, по мере прогрессии заболевания, в стадии Шб, т. е. при наличии поражения регионарных лимфоузлов было выявлено нарастание частоты анеуп лоидных опухолей по сравнению с больными в предыдущей группе. Анеуплоидные опухоли в Шб стадии были отмечены в 61,1% случаев, диплоидные опухоли отмечены у 38,9% больных. У больных IVa стадией заболевания диплоидные опухоли отмечены у 57,1%, анеуплоидные - у 42,9% больных.

Анализ распределения содержания ДНК в зависимости от локализации опухоли показало, что для правой половины толстого кишечника характерны диплоидные опухоли. Диплоидные новообразования при данной локализации были обнаружены в 60-66,7%>%о, в то время как анеуплоидные в 32,3%>-40,0% случаев. Опухоли левой половины толстой кишки по плоидности распределялись примерно одинаково. Диплоидные опухоли были диагностированы у 50,0-57,1 %% больных, анеуплоидные - у 42,9-50,0%о%

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Николаева, Тамара Григорьевна, 2003 год

1. Абдылаев Д.К. Редкие формы рака молочной железы (диагностика, клиническое течение, лечение и прогноз. Автореферат дис. докт. мед. наук. -М., 2002.

2. Алферов B.C. Органосохраняющие методы лечения рака гортани. Дис. док. мед. наук. -М., 1993.

3. Алферов B.C., Ахундов А.А., Павловская А.И., Николаева Т.Г., Ази-зян Р.Н., Зак У.М, Ротобельская J1.E. Морфологические особенности плоскоклеточного рака гортани // Вестник отоларингологии. М., 1995.-С. 27-31.

4. Алферов B.C., Ахундов А.А., Николаева Т.Г. Биологические особенности плоскоклеточного рака гортани // Conferernita IX a oncologilor din Moldova. Кишинев, 1995. - С. 147-153.

5. Ахундов А.А., Уваров А.А., Николаева Т.Г., Худират С. Содержание ДНК в клетках плоскоклеточного рака полости рта и его прогностическая значимость // Baltijos veido-zandikauliv ir plastines chiruugijos asocijacija. Lietuva, 1996. - P. 144.

6. Басов Б.Н., Добрынин Я.В., Николаева Т.Г. Программа «Анализ распределения клеток одной и смеси популяций» Гос. ФАП N50890001111 от 29.09.89.

7. Бойков В.П. Рак гортани (клинико-морфологические особенности, эффективность лечения и индивидуальный прогноз). Дис. докт. мед. наук. -М., 1989.

8. Богатырев В.Н. Значение количественных методов исследования (морфометрии, проточной цитофлуорометрии, сканирующей мор-фометрии) в клинической онкоцитологии. Дис. докт. мед. наук. -М, 1991.-426 с.

9. Богатырев В.Н., Портной С.М., Лактионов К.П., Летягин В.П. Проточная цитометрия при раке молочной железы Ti2NoM0. Анализ 10-летних наблюдений I съезд онкологов стран СНГ. М., 1996. -С. 482-483.

10. Богатырев В.Н. Анеуплоидные и диплоидные новообразования молочной железы и их взаимосвязь с прогнозом болезни // Лаб. дело. -1989. -№ 11. С. 54-56.

11. Богатырев В.Н., Воротников И.К. Плоидность и пролиферативная характеристики при листовидных опухолях и саркомах молочных желез // II Конгресс Закавказских государств. Баку, 2001. - С. 36.

12. Бычкова Н.В., Пожарисский К.М. Анеуплоидия и пролиферативная активность рака толстой кишки // Вопр. онкол. 1996. - Т. 42. - № 2-С. 57-62.

13. Бычкова Н.В., Мешкова И.Е., Пожарисский К.М. Проточно-цитомет-рическое исследование анеуплоидии и пролиферативной активности клеток рака эндометрия как показателей агрессивности опухоли // Вопр. онкол. 1996. - Т. 42. - № 2. - С. 57-62.

14. Вапник В.Н. Алгоритмы и программы восстановления зависимостей. М.: Наука, 1984. - 399 с.

15. Вапник В.Н., Червоненкис А.Я. Теория распознавания образов. М.: Наука, 1974.-348 с.

16. Гублер У.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. -М.: Медицина, 1978. С. 80-84.

17. Гуляк Н.С., Сергеева Н.С., Франк Г.А., Демидов С., Волченко Н.Н., Пак Д.Д., Джуболеева С.К. Пролиферативная активность и плоидность ДНК как прогностический критерий рака молочной железы.

18. Съезд онкологов стран СНГ. М., 1996. - С. 117,

19. Двойрин В.В., Клименков А.А. Методика контролируемых клинических испытаний. -М.: Медицина, 1985.

20. Демидов С., Сазонов С., Казанцев А. и соавт. Роль проточной цито-метрии при опухолевых заболеваниях молочных желез. I Съезд онкологов стран СНГ. М., 1996. - С. 118.

21. Добрынин Я.В., Николаева Т.Г., Летягин В.П., Алферов И.С., Пророков В.В. Плоидность ДНК опухолевых клеток в прогнозировании течения злокачественных новообразований // Вестн. РАМН. 1995. -№ 4. - С. 45-50.

22. Епифанова О.И., Терских В.В., Захаров А.Ф. Радиоавтография. М., 1977. - С. 246.

23. Еремин В.А., Локтев А.А. Плоидность ДНК и прогноз при колоректальном раке. Новое в патогенезе и лечении заболеваний пищеварительной системы. Мат. Ставроп.мед.инстит. Ставрополь, 1993. -С. 133-137.

24. Заурбекова 3. И., Богатырев В.Н., Летягин В.П. Морфометрические и клинические параметры клеток опухоли как показатели оценки уровня рецепторов гормонов и прогноза рака молочной железы (РМЖ) //

25. Конгресс Онкологов Закавказских государств. Баку, 2001. - С. 166.

26. Зборовская И.Б., Гаспарьян А.В., Чижиков В.В., Татосян А.Г. // Мо-лекулярно-генетические маокеры, ассоциированные с развитием рака легкого. Геномная диагностика в современной медицине. М., 2000.-С. 118.

27. Зубрихина Г.Н., Кузьмина Э.В., Бассалык Л.С., Муравьева Н.И. Изучение содержания ДНК методом проточной цитометрии и рецепторов стероидных гормонов при раке молочной железы // Вопр. онкол. 1989.-Т. 35.-С. 1179-1186.

28. Зубрихина Г.Н. Проточная цитометрия в диагностике и прогнозе злокачественных новообразований. Дисс. докт. мед. наук. М., 1990.-336 с.

29. Зубрихина Г.Н., Чистякова О.В., Роттенберг В.И., Нечипай A.M. Проточная цитометрия в прогнозе рака желудка, толстой и прямой кишок // Вестн. Всесоюзн. Онкол. Научн. центра АМН ССР. 1991. -№ 1. - С. 46-49.

30. Котельников В.М. Факторы влияющие на включение ЗН-тимидина в клетки синтезирующие ДНК // Экспер. онкол. 1986. - Т. 6. - С. 9-15.

31. Лакин Г.Ф. Биометрия // Высшая школа. 1980. - С. 176.

32. Матякин Е.Г. Клинические аспекты регионарного метастазирования рака языка и гортани И Дис. докт. мед. наук. М., 1988.

33. Матякин Е.Г., Ольховская И.Г. Зависимость выживаемости больных раком гортани от некоторых клинических и морфологических факторов, характеризующих регионарные метастазы // Вестн. отолар. -1989.-№5.-С. 57-59

34. Нечушкина В. М. Клиническая оценка параметров ДНК проточнойцитометрии при раке тела матки. Дис. канд. мед. наук. М., 2002. -176 с.

35. Паниченко В.И., Богатырев В.Н., Жордания К.И., Козаченко В.П., Пал-ниди Ю.Г. Значение определения количественных параметров клетое опухоли у больных пограничными опухолями яичников // II Конгресс Онкологов Закавказских Государств. Баку, 2001. - С. 141.

36. Петрова А.С., Богатырев В.Н. Содержание в клетках ДНК при доброкачественных и злокачественных опухолях различной локализации //Архив патологии. 1986. - 48 вып. 4. - С. 86-90.

37. Трапезников Н.Н., Аксель Е.М., Бармина Н.М. // Заболеваемость злокачественными новообразованиями и смертность от них населения стран СНГ в 1998 году. М., 2000.

38. Уваров А.А. Органосохраняющие методы лечения местно-распрост-раненного рака орофарингеальной области. Дисс. докт. мед. наук. -М., 1997.I

39. Урбах В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинскихисследованиях. М.: Медицина, 1975. - С. 163-5.

40. Чиквашвили Б.Ш. Современные подходы к прогнозированию течения и лечения рака молочной железы. Дисс. докт. мед. наук. М., 1993.

41. Adachi J., Kido A., Mori M., Matsushima Т., Shimono, Inoue Т., Sugimachi K. Nuclear DNA content and nucleolar organizer regions in colorectal cancer // J Surg oncol 1995 Jul; 53 (3): 177-180

42. Adder D., Feichter GE, Maier H. Feasibility of DNA impuls cytopho-tometry (ICP) in the diagnosis of squamouse cell cancer of the oral cavity and oropharynx // German Laryngol Rhinol Otol (Stuttg) 1986 Apr; 65(4) p.187-190

43. Agnano I., Cosimelli V., Pera A., Cavaliere F., Vanello E., Gianarelli D., Cavaliero R. Flow cytometric analysis of DNA content and cell kinetics colorectal carcinoma // Anticancer Res 1993, v. 13, N 3, p.699-704

44. Alanen RF., Lintu M., Joensuu H. Image cytometry of the breast carcinomas that are DNA diploid by flow cytometry: Time to revise the concept of DNA

45. Ш diploidy? // Anal Quant Cytol Histol 1998 Jun; 20(3): 178-186

46. Ando Y., Tsuchia A., Oki S, Sato H, Yoshida T, Kimijima I, Abe R. Flow cytometric DNA analysis of malignant potential in colorectal cancer //ii Gan To Kagaku Ryoho 1996 Jun; 23 suppl 1:112-117

47. Ando Y., Tsuchiya A., Katagata N., Kanazawa M, Watanabe F, Sato H, Kikuchi Y, Yoshida T, Abe R. Clinical significance of flow cytometric DNA analysis in metastatic lymph node of colorectal cancer //Gan To Kagaku Ryoho 1994,May; 21 suppl 1:41-6

48. Andre S. Fonseca I, Pinto AE, Cardoso P, Pireira T, Soares I. Male breast cancer reappraisal of clinical and biologic indicators of prognosis // Acta oncol 2001; 40(4): 472-8

49. Alam S., Whitford P., Cushley W., George W,, Campbell A. Aneuploid subpopulation in tumor -invaded lymph nodes from breast cancer patients // Eur J Cancer 1992, 28 (2-3): 357-62

50. Al-Alwan N. DNA proliferative index as a marker in Iraq anneuploid mammary carcinoma // East Mediterr Health J 2000 Sep-Nov 6 (5-6): 1062-72

51. Arai Y, Tsukuda M, Ito К et al. Analysis of DNA ploidy using fresh frozen tissue of head and neck squamous cell carcinomas //Auris Nasus Larynx 1997 Apr; 24(2): 193-198

52. Arvitage N., Robins R., Evans D. et al. The influence of tumour cell DNA abnormalities on survival in colorectal cancer// В J Surg 1985; 72: 828-30

53. Armitage P. and Berry C. Statistical methods in medical research Oxford 1988

54. Armitage N.C, Ballantyne K.C., Evans D.F., Clark P, Sheffild J. The in-flyence of tumor cell DNA content on survival in colorectal cancer- a detailed analysis. //Brit J Cancer 1990, 62, № 5, p.852-856

55. Arnerlov C., Emdin S., Roos G. et al. Prognostic factors in locally advanced breast cancer (ТЗ, T4) with special reference to tumor cell DNA content // Acta Oncol 1988, v. 27, № 3, p 221-26

56. Arnerlov C, Emdin S, Cajander S, Bengtsson N, Tavelin B, Roo G. Intra-tumoral variations in ploidy and S-phase fraction human breast cancer // Anal Cell Pathol 2001; 23 (1): 21-8

57. Asamura H, Ando M, Matsuno Y, Shimasato Y. Histopathologic progno-tic factors in resected adenocarcinomas: is nucleolar DNA content prognostic? // Chest 1999 Apr; 115(4): 1018-24

58. Baildam AD, Zaloudick J, Howell A, Barnes DM, Turnbull L, Swindell R, Moore M, Sellwood RA. DNA analysis by flow cytometry, response to endocrine treatment and prognosis in advanced carcinoma of the breast // Br J Cancer 1987 May; 55(5): 553-559

59. Baish H, Back H, Cristensen I. Et al. A comparison of mathematical methods for the analysis of DNA histograms obtained by flow cytometry // Cell Tissue Kinet 1982, v. 15, p. 235 -249

60. Bagwell C, Clark G, Spyratos F, Chassevent A, Bendahl P, Killander D, Jordan M, Romain S, Hunsberger B, Wrigt S, Baldetorp B. DNA and cell cycle analysis as a prognostic indicators in breast tumors revisited // Clin Lab Med 2001 Dec; 21 (4): 875-95

61. Balzara BR, Borges A., Pandhan S., Rajpal R., Bhisly A. Flow cytometric DNA analysis of squamous cell carcinomas of the oral cavity: correlation with clinical and histopathological features // Eur J Oncol 1994 (30) p. 98-101

62. Barlogie В., Ichuson Т., Drewinko B. Flow cytometry in cancer research // Cancer Res 1983, 43: 3982-3997

63. Barona R. Martoreli M., Basterra J. Flow cytometry, its prognoetic value in cancer of the head and neck // Acta Ottorin Esp 1992, 41 (3), 149-153

64. Bauer K.D., Bagwell C.B., Giaretti W. Consensus review of the clinical utility of DNA flow cytometry in colorectal cancer // Cytometry 1993, v.14, N 5, p. 486-491

65. Bergers E., van Diest P., Baak J. Comparison of five cycle analysis models applied to 1414 flow cytometric DNA histograms of fresh frozen breast cancer // Cytometry 1997, Feb 15; 30 (1): 54-60

66. Beerman Y., Kluin H., Hermans J et al. Prognostic significance of DNA ploidy in a serial of 690 primary breast cancer patients // Int J Cancer 1990, N45, p. 34-39

67. Beltrami C., Desinan L., Rubini C. Prognostic factors in squamous cell carcinoma of the oral cavity. A retrospective study of 80 cases // Phatol Res Pract 1992, v. 188, N 4-5, p. 510-516

68. Borgiani L., Cogorno P., Buccaran G et al. Human breast cancer: prognostic significance of DNA ploidy compared with c-erb2 expression, cathepsin D, and silver-binding nucleolar organizer regions (AgNORs) // Pathologica, 1994, v. 86, p. 350-355

69. Bosari S., Lee A., Tahan S., Figoni M., Wiley В., Hlatley G., Silvestri-ni M. DNA flow cytometric analysis and prognosis of axillary lymph node negative breast carcinoma // Cancer 1992, 70 (7): 1943-50

70. Bottger Т., Potraz D., Stocklr M. et al. Prognostic value of DNA analysis in colorectal carcinoma Cancer 1993, 72 (12): 3579-87

71. Bracko M., Us-Krasovec M., Cufer Т., Lamovec J., Lidar A., Goehde W. Prognostic significance of DNA ploidy determined by high-resolution flow cytometry in breast carcinoma // Anal Quant Cytol Histol 2001. Feb; 23 (1): 56-66

72. Bradford C.R. Predictive factors in head and neck cancer // Hematol Oncol Clin North Am 1999; 13 (4): 777-785

73. Britton L., Wilson Т.О., Gaffety T.A. DNA ploidy in endometrial carcinoma: major objective prognostic factor // May Clin Proc 1990; 65 (5): 643-650

74. Brooks S.A., Leathern AJC., Campleiohn R.S. and Gregory W. Markers of prognosis in breast cancer the relationship between binding of the lectin HPA and histological grade, SPF and ploidy //Breast Cancer Res Treat 1993,25 247-256

75. Bueno R., Glias N., Deldado., Cebollada D., Gonzalez D. Tumor DNA content as a prognostic indicator in squamous cell carcinoma the oral cavity and tonge base // J Head Neck 1998, May; 20 (3):232-239

76. Bungaard Т., Sorensen F., Gaihede M, Sgaard H., Overgaard I. Stereologic, histipatologic, flow cytometric and clinical parameters in the prognostic evaluation of 74 patients with intraoral squamous cell carcinoma//Cancer 1992, Jul; 70 (1): 1-13

77. Camarota H, Yamaguchi B. Analisis du AND cellular en el diagnostica citologico de los tumors mediante la citometria de fluijo // Prensa med Argent 1991,v.78, N 3, p.84-88

78. Carillo R., Batsakis J., Weber R., Luna M., el-Naggar A. Salivary neoplasms of palate: a flow cytometric and clinicopathological analysis // J Laryngol 1993, Sep; 107 (9): 858-861

79. Caruso M.L., Pirrelli M., Armentano R. DNA content in colorectal carcinoma: application of image analysis to archival material //Pathologica 1994, Aug; 86 (4): 376-83

80. Carvalho P.E., Antonangelo L., Bernardi F.D., Leao L.P., Bodrigues O., Capelozzi V.L. Useful prognostic panel marker to express the biological tumor ststus in resected lung adenocarcinomas // Jpn J Clin Oncol 2000 Nov; 30 (11): 478-486

81. Chao Т., Luo Y.F., Chen S.C., Chen M.F. Color Doppler ultrasound in breast carcinomas: relationschip with hormon receptors DNA ploidy, S-phase fraction and histopathology // Ultraound Med Biol 2001 Mars; 27 (3): 351-5

82. Chang J., Ormerod M., Powles P.J., Allred D.C., Ashley S.E., Dowset M. Apoptosis and proliferation as predictors of chemotherapy response in patients with breast carcinoma // Cancer 2000 Dec 1; 89 (11): 2145-52

83. Chapman M.M., Hardcastle J.D., Armitage N.C. Five -year prospective study of DNA tumor ploidy and colorectal cancer survival // Cancer 1995, Aug 1; 76 (3), 383-7

84. Chassevent A., Jourdan M L., Romain S., Descotes F., Colonna M., Martin P.M., Bolla M., Spiratos F. S-phase fraction and DNA ploidy in 633 T1T2 breast cancers: a standartized flow cytometric study // Clin Cancer Res 2001 Apr; 7(4): 909-917

85. Cheng J.Y., Lin 1.С., Lee W. H., Meng C.L. Flow cytometric DNA analysis of colorectal catcinoid // Am. J Surg 1994 Jul; 168 (1): 29-32

86. Chen G.I., Shao Y.F., Shan Y. Assay of DNA content and estrogen receptor status in human breast cancer // Chunghua Chung Liu Tsa Clin 1994 Nov; 16(6): 461-464

87. Chen R.B., Suzuki K., Nomura Т., Nakajama T. Flow cytometric analysis of squamous cell carcinomas of the oral cavity in relation to lymph node metastasis // J Oral Maxillofac. Surg 1993 (53) p. 397-401

88. Clark G.M., McGuire W.L. Steroid reseptors and other prognostic factors in primary breast cancer // Semin Oncol 1988 Apr; 15 (2 supple 1); 20-25

89. Clark G.M., Dressier L.G., Owens M.A., Pounds G., Oldaker Т., McGuire W.L. Prediction of relapse or survival in patients with node-negative breast cancer by DNA flow cytometry // N Engl J Med 1989, v.320, № 10, p. 709-715

90. Cooke L., Cooke Т., Forster G. et al. Ploidy as a prognostic indicator in end stage squamous cell carcinoma of the head and neck region treated with cisplatinum//Clin Otol 1994, v. 19, p. 131-134

91. Cooke L.D., Cooke T.G., Forster G, Macdonald D., Robertson A., Soutar • D. Flow cytometric analysis of DNA content in squamous cell carcinomaof the tonge; relationship to host and tumour factors and survival //Clin Otolaryngol 1994 (19), p. 131-134

92. Corneliss C.J., van de Velde C., Caspers D.G., Moolenar A.J., Hermans J. DNA ploidy and survival in breast cancer patients // Cytometry 1987, v.8,2, p 225-234

93. Cosimelli M, D Agnano I., Tedesco M., D Angeloo C., Botti C., Giaii-j mardin D., Vasseli S. The role of multiploidy as unfavorable prognosticvariable in colorectal cancer // Anticancer Res 1998, May-Jun; 18(3B): 1957-65

94. Costa A., Silvestrini R., Mochen C., Lequaglie C., Boracchi P., Faranda A., Vessecchia G., Ravasi G. P53 expression, DNA ploidy and S -phase cell fraction in operable locally advanced non-small-cell lung cancer // Br J Cancer 1996 Apr; 73(7): 914-9

95. Costello F., Hason В., Collius R. et al. A clinical and flow cytometric analysis of patients with nasopharyngeal cancer // Cancer 1990, v. 66, p.1. Ь 1789-95

96. Corvo R., Margarino G., Sanguineti G., Geido E., Scala M., Mereu P.,

97. Cavallari M., Bonnano S, Garaventa G., Barbieri M., Giaretti W. Cell kinetics analysis in patients affected by squamous cell carcinoma of the head and neck treated with primary surgery and adjuvant radiotherapy //Tumori 2000 Jan-Feb; 86(1): 53-8

98. Coulson P.B., Thornthwaite J. Т., Woolley T.W., Sugarbaker E., Seck-inger D. Prognostic indicator including DNA histogram type, receptor content and staging related to human breast cancer patient survival // Cancer Res 1984 Sep; 44 (9): 4187-4196

99. Cox D.K. Regression models and life table // J R Stat Soc В 34, 187-220

100. Cufer Т., Lamovec J., Bracko M., Lindther J., Us-Krasovec M. Prognostic value of DNA ploidy in breast cancer stage I-II // Neoplasma 1997;• 44(2): 127-132

101. Cuvelliet C., Morson В., Roles H. The DNA Content in cancer and dysplasia in chronic ulcerative colits //Histopatology 1987, v. 11, № 9 p. 317-322

102. Czuba A, Lange D, Chmielik E, Wolozynska K, Wojciechowska E, Snie-tura M, Liszka J. Dna ploidy assessment method applied to primary breast carcinoma FNA biopsies // Folia Histochem Cytobiol 2002; 40 (2): 105-6

103. Daidon M.G., Silvestrini R., Luisi A., Mastore M., Benini E., Veneroni S., Brambilla C., Ferrari L, Greco M., Andreola S. et al. Changes in biological markers after primary chemotherapy for breast cancer // Int J Cancer 1995 May 4; 61 (3): 301-305

104. Dalquen P., Moch H., Feichter G , Lehmann M. , Stulz P., Jordan P., Tor-horst I. Et al. DNA aneuploidy, S-phase fraction, nuclear p 53 positivity and survival in non-small cell lung carcinoma //Wirchous Arch 1997 Sep; 431 (3): 173-9

105. Dansil D., Spanol M., Altavisal P et al. Quality Control study of the Italian group of flow Cytometry DNA content measurements. Factors affecting inter and intralaboratory variability // Cytometry 1997, v. 30, N 2, p. 85-97

106. Dean P.N and Jett J.H. Mathematical analysis of DNA distribution de-• rived from flow microfluorometry // J Cell Biol 1974, 60: 523

107. Dean P.N. A simplified method of DNA distribution analysis //Cell Tissue Kinetics 1980, 13:299-308

108. Dean P.N. Methods of data analysis in flow cytometry // Academic Press Inc, London, 1985, p. 195-225

109. Deans G.T., Williamson K., Heat (у М/. Mamilton P. et al. The role of the flow cytometry in carcinoma of the colon and rectum // Surg Gynocol Obstet 1993 Oct; 177(4): 377-82

110. Demirer Т., Uzunalimoglu O., Anderson T. et al. Flow cytometric of 1 measurment of proliferation-associated nuclear antigen P 105 and DNAcontent in immunoproliferative small intestinal disease (IPSID) // J Surg Oncol 1995; 58 (1): 25-30

111. D hautcourt I.L., Spiratos F., Chassevent A. Quality control study by the French Cytometry Association on flow cytometric DNA content and S-phase fraction (S%). The Association Francaise de Cytometry // Cytometry 1996 Mar 15; 26(l):32-9

112. Diaz Aquirregoitia F., Garci-Alonso M., Iturbuno В., Eehevarria G. Progno-etic value of a nucleus DNA 106 colorectal tumours, determined with mi-crospectrocytophotometry // Rev Esp Enferm Dig 1993 Jun; 83(6): 421-8

113. Dobros W, Lackowska B, Rys J, Niezabitowski A, Stanisz-Wallis K, Olszewski E, Modrzejewski M. Dna analysis of laryngeal carcinoma cells by flow cytometry the histoclinical factors and their significance// J Otolaryngol 2000 Dec; 29 (6): 371-6

114. Dowle C.S., Owainati A., Robins A., Burns E., Ellis J.O., Elston C.W., Blarney R.W. Prognostic significance of the DNA content of Human breast cancer // Br J Surg 1987 Feb; 74 (2): 133-136

115. Dressier L.G., Seamer L.C., Owens M.A. et al. DNA flow cytometry and prognostic factors in 133 frozen breast cancer specimens // Cancer (Philad.) 1988, v.61, p. 420-427

116. Dreyfuss A.J., Clark IR. Analysis of prognostic factors in squamous cell carcinomas the head and neck // Hemathol Oncol Clin North Am 1991 Aug; 5(4): 701-712

117. Dyszkiewicz W., Kasprzyk M., Piwkowski C., Gasiorowski L., Ramla R. The prognostic value DNA content analysis in patients with squamous cell lung cancer treated surgically // Lung Cancer 2000 Sep; 29(3): 161-7

118. Dyszkiewicz W, Kasprzyk M, Piwkowski C. Gasiorowski L. Prognostic significance of DNA ploidy in equamous cell lung carcinoma: is it really worth it? //Ann Thorac Surg 2000 Nov; 70 (5): 1629-33

119. Ellidge R.M., Clark G.M., Chamness G.C., Osborn C.K. Tumor biologic factors and breast cancer prognostic in White, Hispanic and Black women // Breast Cancer Treat Res 1993, 27(1/2): 132

120. El-Naggar A.K., Dinh M., Luna M.A. et al. Genotypic analysis of primary nead and neck squamous carcinoma by combined fluorescence in situ hi-bridization and DNA flow cytometry // Am J Clin Pathol 1996, 105(1): 102-108

121. Enker W, Kimmel M, Cibas E.S., Cranor M. DNA/RNA content and proliferative fractions of colorectal carcinomas a five years prospective study relating flow cytometry to survival // J Nat Cancer Inst 1991, 83, №• 10, p.701-707

122. Ensley J.F. The clinical application and kinetic parameters in the treatment of patients with squamous cell carcinomas of the head and neck //Cancer Metastasis Rev 1996 Mar; 15 (1): 133-41

123. Eminovic-Bedrum S., Trobonjaca L., Petrovecki M et al. Prognostic significance of DNA ploidy pattern and nucleolar organizer regions (Ag-NOR) in colorectal carcinoma // Croat Med 2000 Jun; 41(2): 154-158

124. Eskelinen M., Nordling S., Puittinen J., Pesonen Collan Y. The flow -cytometric analysis of the DNA content and S-phase fraction (SPF) of human breast cancer // Pathol Res Pract 1989, Nov, 185 (5): 694-697

125. Eskelinen M., Lipponen P., Papinaho S., Aaltomaa S. et al. DNA flow cy-^ tometry, nuclear morphometry, mitotic indices and steroid receptors asw independent prognostic factors in female breast cancer // Int J Cancer1992 Jun 19; 51 (4): 555-561

126. Esser D., Anke S., Roessner A., Freigang B. Second carcinoma in cancers of the mouth cavity, pharynx and larynx. Clinical, histopatologic and cell kinetic findings // Laryngorhinootologic 2000 Aug; 79(8): 478-82

127. Ewers S., Langstroem E., Baldetorp В., Killander D. Flow cytometric DNA analysis in primary brest carcinomas and clinicopathologic correlations // Cytometry 1984, v 5, p. 408-19

128. Toole R.V. Follow-up on flow cytometric DNA analysis of squamous cell1.carcinoma of the tonge // Am J Surg 1989 Apr; 157 (4): 374-380

129. Fasano M., Vamvakes E., Delgado Y., Inghirami G., Mitnick J., Roses D., Feiner H. Tubular carcinoma of the breast: immunohistochemical and DNA flow cytometric profile // Brest J 1999 Jul; 5(4): 252-255

130. Ferlito A. Histological classification of larynx and hypohparynx cancers and their clinical implication // Acta Oto-Larynx (Stockh) 1977, v.88, N 6, p. 342-348

131. Ferno M., Baldetorp В., Borg A., Olssen H, Sigurdsson H, Killander D. Flow cytometric DNA index and S-phase fraction in breast cancer in relation to other prognostic variables and to clinical outcome // Acta Oncol 1992; 31 (2): 157-165

132. Fildman A., Silvestrini D, Gatsoni S. et al. Prognostic significance of tumor proliferative fraction and DNA content in stage I non-small-cell lung cancer // Am Rev Respirat Dis 1992; 143: 707-10

133. Fisher E., Siderits R., Sass R., Fischer B. Value of the assessment of ploidy in rectal cancer // Arch Pathol and lab Med 1989, v. 113, N 5, p. 525-528

134. Fisher B, Gunduz N., Costantino J et al. DNA flow cytometric analysis of primary operable breast cancer. Relation of ploidy and S-phase fraction to outcome of patients in NSABP-04 // Cancer 1991, 68: 1465-75

135. Fitzgibbons P.L., Page D.L., Weaver D., Thor A.D., Allred D.C., Clark G.M., Ruby S.G. et al. Prognostic factors in breast cancer. College of American Pathologist Consensus Statement 1999 // Arch Pathol Lab Med 2000 Jul; 124(7): 966-78

136. Flyger H., Larsen J., Nielsen H., Christensen I. DNA ploidy in colorectal cancer, heterogeineity within and between tumors and relation to survival // Cytometry 1999 Dec 15; 38 (6): 293-300

137. Franzen G, Olofsson J, Tytor M, Klintenbrg C, Risberg B. Preoperative irradiation in oral cavity carcinoma. A study with special refrence to DNA pattern, histological response and prognosis //Acta Oncol 1987; 26 (5): 349-55

138. Fraide J. Method for quantitative avaluation of data from flow microfluorometry // Comt. Biomed Res 1976, v. 9, p. 263

139. Fu K., Hammond E, Bajak F. et al. Flow cytometric quantification of the proliferation-associeted nuclear antigen pi05 and DNA cantent in advanced head and neck cancers: result of rtog 91-08 //Int J Radiat Oncol Biol Phys 1994, v. 29, N 4, p. 661-674

140. Fujumaku E.J., Sasaki К, Nakano О. et al. DNA ploidy heterogeneity in early and advanced gastric cancers // Cytometry 1996 Jun; 26(2), 131-6

141. Fykushima T. Flow cytometric analysis of DNA ploidy in oral and pharyngeal carcinomas // Nippon Jibinkoka Gakkai Kaino 1997, V. 100, N 8, p. 870-879

142. Gandour-Advards R.F., Donald P.J., Yu T.L., Howard R.R., Teplitz R.L. DNA content of head and neck squamous carcinoma by flow and image cytometry // Arch Otolaringol Head Nek Surg 1994 Mar; 120 (3): 294-297

143. Giaretti W., Danova M., Giedo E., Mazzini G., Sciallero S. Correlation of flow cytometric DNA ploidy and S- hpase fraction with clinical outcome in colorectal ADK patients // Basic and Appl Histochem 1991, v. 35, N 3, p. 284

144. Diaretti W., Danova M., Geido E. et al. Flow cytometric DNA index the prognosis of colorectal cancer // Cancer (Philad) 1991, v. 67, p. 1921-27

145. Givan A.L. Flow cytometry // First principles 1993, p. 76

146. Geradts J, Fong K, Limmerman P, Minna L. Loss of Fhit expression in non-small-cell lung cancer: correlation with molecular genetic abnormalities and clinicopathological features // Br J. Cancer 2000 Mar: 82(5): 1191-7

147. Goldsmith M, Cresson D, Arnold 1, et al. DNA flow cytometry as a prognostic indicator in head and neck cancer // Otoloryngol Head Nrck Surg 1987, v.96, N 4, p. 307-18

148. Gomez R, El-Naggar A, Byers R, Gransley L, Luna M, Batsakis J. Squamous carcinoma of oral tongue: porgnostic significance of flow cytometric DNA content //Mod Pathol, 1992, v. 5 p. 141-5

149. Gregg C., Beals Т., Clatchy M. et al. DNA content and tumor response to induction chemotherapy in patients with advanced laryngeal squamous cell carcinoma //Otal Head Neck Surg 1993, v. 108, p. 731-7

150. Grigolato P., Berenzi A., Benetti A., Chirico E., Cadei M., Caselli C. Ci-tometria ploidy and proliferative activity in colorectal carcinoma // Eur J Histichem 1994; 38 (2): 163-170

151. Jacobsson P. Glottic carcinoma of the larynx. Factors influencing prognosis following radiotherapy. Stockholm 1973

152. Jaszcz-Gruchala A, Swiatkiewicz I, Lackowska B, Gruchala A, Niezabi-towski A. Comparative analysis of DNA content estimated by flow abd image cytometry in breast tumor samples // Pol J Pathol 2001; 52 (1-2): 15-9

153. Jeanfaiver Т., Chassevent A., Larra F., Tuchais E. Flow cytometry can not predict the survival of small cell lung carcinoma // Sixth International Congress on Anticancer Treatment, Paris France 1996, p. 196

154. Janfaivre T, Chassevent A., Gelsin J., Larra FF., Tuchais E. Prognostic value of flow cytometry in squamous cell bronchogenic cancer. A retrospective study of 61 cases // Bull Cancer 1997 Jun; 84 (6): 597-602

155. Iiang В., Liu C., Wang M et al. DNA content and its relationship with pathology and prognosis of colorectal carcinoma // Chines Med J 1992; 105: 241-6

156. Iones D., Moore M., Schofield P. Prognostic significance of DNA ploidy in colorectal cancer. A prospective flow cytometric study //B J Surg 1988; 75: 25-33

157. Isobe H., Miyamoto H., Shimizu T. et al. Prognostic and significance of the flow cytometric nuclear DNA content in non-small cell lung cancer // Cancer 1990; 65: 1391-5

158. Jonsuu H., Toikkanen S., Klemi P. DNA index and S-phase fraction and their combination as a prognostic factors in operable ductal breast carcinoma // Cancer 1990 Jul 15; 66 (2): 331-340

159. Jonsuu H., Alanen K., Falkmer U., Klemi P., Nordling S., Remvikos Y., Toikkanen S. Effect of DNA ploidy classification on prognosis in breast cancer // Int J cancer 1992; 52 (5): 701-6

160. Haffty В., Tolh M., Flynn S. et al. Prognostic value DNA cytometry in the local recurrent, conservatively treated breast cancer patient // J Clin Oncol 1992; 10: 1839-48

161. Haghbin M., Mc Cue P., Mansfield C. Correlation of flow cytometry to clinical factors, hormone receptors, and histopathological grade in stage I and II invasive breast carcinoma // Am. J Clin Oncol 1996; 19 (1): 54-8

162. Hamper K., Lazar F., Diete M., Caselit Z., Berger J., Arps H., Falkmer U., Auer G., Seifert G. Prognostic factors for adenoid cystic carcinoma of the head and neck: a retrospective evaluation of 969 cases //J Oral Pathol Med 1990 Mar; 19 (3): 101-107

163. Harlow S., Eriksen В., Poggensee L., Chmil J., Scarpelli D. Prognostic of proliferative activity and aneuploidy in astlercoller Dukes stage С colonic adenocarcinomas // Cancer Res 1991; 51 (9): 2403-9

164. Hatschek Т., Wingren S., Carstensen J., Hultborn R. DNA content ans S-phase fraction in male breast carcinomas // Acta Oncol 1994; 33(6): 609-13

165. Headley D.W., Rugg C.A., Ng A.B., Taylor J.W. Influence of cellular DNA content on disease-free survival of stage II breast cancer patients // Canfcer Res 1984 Nov; 44(11): 5395-5398

166. Headley D.W., Rugg C.A., Gelber R.D. Association of DNA index and S-phase fraction with prognosis of nodes positive early breast cancer // Cancer Res 1987 Sep 1; 47 (17): 4729-35

167. Headley D., Fredlander M., Taylor I. Aplication of DNA flow cytometry to paraffin-embedded archival material for the study of aneuploidy and clinical significance // Cytometry 1995, v. 6, p. 327-339

168. Hemmer J., Kreider J. Flow cytometric DNA ploidy analysis of squamous cell carcinoma of the oral cavity. Comparison with clinical staging and histologic grading //Cancer 1990, v. 66, N 2, p.317-320

169. Hemmer J. Kreider J., Thein Т., Haase S. Monitiring of intra-arterial treatment with epirubicin and cisplatin in oral carcinoma by DNA flow cytometry//Chemotherapy 1991; 31 (2): 150-6

170. Hemmer J., Thein Т., Van Heerden W.F. The value of DNA flow cytometry in predicting the development of lymoh node metastasis and survival in patients with locally recurrent oral squamous cell carcinoma // Cancer 1997, 79(12): 2309-13

171. Hemmer J., Prinz K. Comparison of DNA flow cytometry and fluorescence in situ with a set of 10 chromosomespecific DNA probes in four head and neck carcinomas // Cancer Genet Cytogenet 1997, v. 97, p.35-8

172. Hemmer J., Nagel E., Kraft K. DNA aneuploidy by flow cytometry is an independent prognostic factor in squamous cell carcinoma of the oral cavity // Anticancer Res 1999, (19): 1419-22

173. Henick D., Silver K., Heller K., Shaha A., Wolk E. Supraomohyoid neck dissection as a staiging procedure for squamous cell carcinomas of the oral cavity and oropharynx //Head Neck 1995, v. 17, p. 119-23

174. Herman C.J. Cytometric DNA analysis in the management of cancer. Clinical and laboratory consideration // Cancer 1992; 69 (6) suppl; 1553

175. Hiddeman W. Onkogene, zytogenetic und zeilkinetik- potentielle biologische progno-sefaktoren bei kolorektaien karzinomen // Onkologie 1989; 12 (2) supl, 30

176. Hiratsuka H., Miyakawa A., Nakamori K., Kido Y., Sunakawa H., Ko-hama G. Multivariate analysis of occult node metastasis as a prognostic indicator for patient with squamous cell carcinoma of the oral cavity //Cancer 1997 (80): 351-6

177. Но C.M., Lam K.N., Wie W.I., Lau L.K. Occult Lymph node metastasis in small oral tonge cancer // Head Neck 1992 (14): 359-63

178. Hoffmann H., Knoll J, Bahn H, Klapperstuck T, Lautenchlager Neef H. Flow cytometry analysis of DNA content and prolifrtation immunohisto-chemical staining of Ki-67 in non small cell lung cancer // J Cardiovasc• Surg (Torino) 2001 aug; 42(4): 555-60

179. Hood D., Petras R., Edinger M. Deoxyribonucleic acid ploidy and cell cycle analysis of colorectal carcinoma by flow cytometry. A prospective study of 137 cases using fresh whole cell suspensions // Am J Clin Pathol 1990, 93 (5): 615-620

180. Huang M.S., Colby T.V., Thrneau T.M., Daly R c., Gonchoroff N.J. DNA ploidy and protein content in bronchioloalveolar carcinoma multi-variable flow cytometry // Cytometry 1996 Dec 15; 26 (4): 253-9

181. Hungcharek M., Muscat J, Geschwind J. K-ras oncogen mutation as a prognostic marker in non-small cell lung cancer: a combined analysis of 881 cases//Carcinogenesis 1999 Aug; 20(8): 1507-10

182. Hupperts P, Blijham G, Volvics L, Schutte B, Schouten L, Jager J, De Jong J, Schouten H, Hellen H. The prognostic value of flow cytometry (FCM) in node positive cancer patients // Proc Annu Meet Am Soc Clin Oncol 1994,13: A 147

183. Ikonen J. Т., Ogala A, Salenius J.P., Mattila J, Riekkinen H, Wigren T. DNA flow cytometry in surgically treated lung cancer prognostic significance //Scand Cardiovasc J 1999; 33(4): 228-33

184. Iwamoto S, Akajima R, Ryo T, Ishibashi T, Toyoda M, Ichinona T, Osada K, Gon G. Detection of chromosomal aberration using fluorescence in situ hybridization on breast cancer // Gan To Kagaku Ryoho 1995 Jun; 22 suppl 2: 192-196

185. Kang H.S., Youn Y.K., Oh S.K., Choe K.J., Nol D.Y. Flow Cytometric analysis of primary tumors and their corresponding metastatic nodes in breast cancer // Brest Cancer Res Treat 2000 Sep; 63 (1): 81-7

186. Kallioniemi O-P., Blanco G, Alavaikko M. Et al. Tumour DNA ploidy as an independent prognostic factor in breast cancer // Brit J Cancer 1987 Nov; 56 (5): 637-42

187. Kallioniemi O-P., Blanco G., Alavaiko M et al. Improving the prognostic value of DNA flow cytometry in breast cancer by combining DNA index and S- phase fraction // Cancer 1988, 63 (3): 2183-2190

188. Kaspryk M, Dyszkiewicz W, Wiktorowicz K, Piwkowski C, Gasiorowski Z. // Prognoetic significance of DNA analysis in neoplastic cells patientswith squamous cell lung neoplasms treated surgically // Pheumonol Aler-golPol 1999; 67 (3-4): 103-10

189. Kearsley J., Bryson G., Battistutta D. et al. Prognostic importance of cellular DNA content in head and neck squamous cell cancer. A comparison of retrospective avd prospective series //Int J Cancer 1991, 47(1): 31-7

190. Kentero G., Cornelisse C., Aartsen E. et al. DNA ploidy level as prognostic factor in low stage carcinoma of uterine cervix // Gynecol Oncol 1990, v. 39, p. 181-5

191. Kcyhani-Rofagha S„ О Toole R., Farrar W., Sickle-Santanello В., De-Cenzo J., Young D. Is DNA ploidy an indepehdent prognostic indicator in infiltrative node-negative beast adenocarcinoma? // Cancer 1990 Aprl; 65(7): 1577-82

192. Khan E., Mapara L., Khan S., Arsad N., Siddiqui Т., Perkoz S. DNA ploidy analysis in 218 consecutive Pakistani breast cancer patients: does it add anything? // Pathol Oncol Res 2001; 7 (2): 125-8

193. Kimming R., Wimberger P., Kapsner Т., Hillemann S. Flow cytometric DNA analysis using cytokeratin labeling for indentification of tumor cell in carcinoma of the breast and the female genital tract // Anal Cell Pathol 2001; 22(3): 168-78

194. King W., Lam P., Li A. DNA ploidy as predictor of cervical metastasis in advanced squamous carcinoma of the tonge // Acta Otolaringol (stockh) 1995 May; 115(3): 455-8

195. Kimura О., Sugamura К., Kijima Т., Kurayoshi К., Makino M., Kaibara N. DNA index as a significant prognostic indicator of colorectal cancer //Gan To Kagaku Ryoho 1996 Jun; 23 suppl 2: 118-24

196. Kligerman J., Olivatto L., Lima R., Freitas E., Soares E., Dias F., Melo L., Sa G., Duccini E. Elective neck dissection in the treatment of the T3-T4 squamous cell carcinoma of the larynx // Am J Surg 1995, 170, p. 436-9

197. Kodama S., Kase H., Tanaka K. Multivariate analysis of prognostic factors in patients with endometrial cancer // Int J Gynacol Obstet 1995; 53 (1): 23-30

198. Kokal W., Gardine R., Khalil S. et al. Tumor DNA content as a prognostic indicator in squamous cell carcinoma of the nead and neck region // Am J Surg 1988, v. 156, № 4, p. 276-80

199. Kokal W., Sheiban K., Terz et al. Tumor DNA content in the prognosis of colorectal carcinoma //J Am Med Ass 1986; 255: 3123-7

200. Kolotas C., Tonus C., Bailas D., Cernea M., Vogt H., Martin Т., Strassmann G., Lamboglou N. Clinical relevance of tumor ploidy and micronucleus formation for oral cavity cancer // Tumori 1999, Jul-Aug; 85 (4): 253-8

201. Konaka C., Hafo H., Sato M et al. Significance of lymph nodes dissection of lung cancer treatment // Kyoba Geka 1994, 47 (1): 45-8

202. Kuda Т., Tomoda H., Нага N., Ichnose Y., Furusawa M., Ota M. Analysis of DNA content in primary colorectal carcinoma and lung metastasis // Nippon Geka Gakkai Lasshi 1995 Jan; 96(1): 31-5

203. Kolodziejski L., Niezabitowski A., Gasinska A. Clinical and flow cytometric prognostic factors in surgically treated squamous cell lung cancer // Lung Cancer 1997 Mar; 16 (2-3): 172-82

204. Kristensen G., Kaern J., Abeler V. No prognostic impact of flow cytometric measured DNA ploidy and S-phase fraction in cancer of the uterin cervix: a prospective study of 465 patients // Ginecol Oncol 1995; 57 (1): 79-85

205. Kute Т., Hyman M., Hopkins M., Marshal R., Case D., Kammire L. Relationship of flow cytometry results to clinical and steroid receptor status in human breast cancer // Breast Cancer Res Treat 1985, v.6, p.113-121

206. Lammering G., Taher M., Gruenagel H., Borchard F., Porchen. Alteration of DNA ploidy status and cell proliferation induced by preoperative radiotherapy is a prognostic factor in rectal cancer // Clin Cancer Res 2000 Aug; 6(8): 3215-21

207. Lanza G., Gafa R., Santini A., Maestri I., Dubini A., Gilli G., Cavazzini L. Prognostic Significance of DNA ploidy in patients with stage II and stage III colon carcinoma: a prospective flow cytometric study // Cancer 1998 Jan; 82 (1): 49-59

208. Lanza G., Gafe R., Dubini A., Santini A., Maestri I., Caverninin L. Prognostic value of DNA ploidy in TNM stage 2 and stage 3 colon cancer //Int J Biol Markers 1996, v.l 1, N 2, p. 129-30

209. Lanza G., Maestri I., Dubini A., Gafa R. Evaluation of prognostic parameters in colorectal carcinoma. II. Ploidy determination with flow cytometry //Pathologica 1994 Feb; 86 (1): 30-42

210. Larson D., Berg R., Shaw G. Prognostic significance of DNA ploidy iniendometrial cancer // Gynecol Oncol 1994; 74 (3): 356-60

211. Lee J., Litton W. Occult regional metastasis carcinoma of the oral tonge //Laryngoscope 1997; 82: 1273-81

212. Lee G, Ryu K, Rha J, Kim S, Namkoong S, Han K. Multiparametric flow cytometric analysis in a breast cancer cell line (MCF-7) // J Obstet Gynaecol Res 2002 Jun; 28 (3): 141-8

213. Leers M, Nap M. Steroid heterogeneity in relation to DNA index in breast cancer: a multiparameter flow cytometric approach paraffin-embedded tumor samples //Breast J 2001 Jnl-Aug; 7): 249-59

214. Leivonen M., Krogerus L., Nordling S. DNA analysis in advanced breast cancer // Cancer Detect Prev 1994; 18 (2): 87-96

215. Levesque M., Yu H., Clark G et al. Enzyme-linked immunoabsorbent assay-detected p53 accumulation. A prognostic factor in a lerge breast cancer cohort // J Clin Oncol 1998; 16: 2641-50

216. Li Z.X. Prognostic Significance of nuclear DNA content of colonic carcinoma // Chung Hua Wai Ко Tsa Chin 1993 Nov; 31 (11): 648-9

217. Lindberg R. Distribution of cervical lymph node metastasis from squamous cell carcinoma of the upper respiratory and digestive tracts// Cancer 1972; 29: 1446-49

218. Lipponen P., Eskelinen M., Jauhiainen K. et al. Proliferation indices as independent prognostic factors in papillary T1 transitional cell bladder tumors // Br J Urol 1993: 72 (4): 451-7

219. Lo S., Wang H., Shyr Y., Lui C. DNA flow cytometric analysis of primary breast cancer in Chinese women: The relationship of DNA aneuploidy to clinical characteristics // Eur J Surg Oncol 1994 Oct; 20(5): 553-6

220. Lonn U., Lonn S., Nilso В., Stenkwies B. Breast cancer: prognostic significance of c-erb-b2 and int-2 amplification compared with DNA ploidy, S-phase fraction and conventional clinicopathologic features //Breast Cancer Res Treat 1994; 29(3): 237-45

221. Machado- Santelli G., Мог L., Pereira C. Prediction of relapse in patients with breast cancer by DNA cytometry // Anal Cell Pathol 1994 Dec; 7 (4): 321-334

222. Mahmood J., Suzuki K., Nomura Т., Singaki S., Nakajima T. The implication of DNA content on S-phase fraction in oral carcinomas with and without metastasis Hint J Oral Maxillofac Surg 1995 Dec; 24(6): 427-32

223. Martinez-Arriba F, Nunez M, Piqueras V, Lucas A, Sanches J, Tejerina A, Schneider J. Flow cytometry vs. Ki-67 labelling index in breast cancer: a prospective evaluation of 181 cases // Anticancer Res 2000 Jan-Feb; 22 (4A): 295-8

224. Matthews D., Farewell M. Using and Undestanding medical statistics Kargee 1988

225. Mansour E., Ravdin P., Dressier L. Prognostic factors in early breast carcinoma//Cancer 1994; 74 (1 suppl): 381-400

226. Mazzei Т., Tonelli F., Mini E., Mazzoni P., Pesciullesi A., Valanzano R., Ficari F., Biondi C., Perti P. Flow cytometric analysis of DNA ploidy and cell proliferation activity in colorectal carcinoma // Anticancer Res 1995 Sep-Oct; 15 (5B): 2247-53

227. Meyer J., Province M. S-phase fraction and nuclear size in long term prognosis of patients with breast cancer // Cancer 1994; 74 (8): 2287-99

228. Michels J., Duigou F., Marnay J. Flow cytometry in primary breast carcinomas. Prognostic impact of proliferative activity // Breast Cancer Res Treat 2000 Jul; 62(2): 117-26

229. Midulla C., Cenci M., DeJorio P., Pisani Т., Bonaccorsi A., Marchis L., Nofroni I., Vecchione A. DNA ploidy and TLI in association with other prognostic parameters in breast cancer //Anticancer Res 1999 Jan-Feb; 19 (1A): 381-4

230. Miller R. Simultaneous ststistical influence. New York Mc Graw Hill 1981

231. Mirza A, Mirza N, Vlastos G, Singletary S. Prognostic factors in node-negative breast cancer a review studies with sample size more than 200 and follow up more than 5 years// Am Surg 2002 Jan; 235 (1): 10-26

232. Mishra R., Mohanty S. Study of tumour ploidy in early of buccal mucosa cancer // Eur J Surg Oncol 1996 Feb; 22(1): 58-60

233. Miyagi M., Soda Т., Nakashima T. Flow cytometric DNA analysis and chemosensitivity in squamous cell carcinoma of the head and neck // Nippon Jibinkoka Gakkai Kaiho 1994 Dec; 97 (12): 2247-58

234. Morkve О., Halvorsen О., Skjaerven R. et al. Prognostic significance of p53 protein ezpression and DNA ploidy in surgically treated non-small-cell lung carcinomas // Anticancer Res 1993; 13: 571-8

235. Morton R., Fergusson C., Lambie N., Whitloc K. Tumor thickness in early tongue cancer // Acta Otolaryngol Head Nrck Surg 1994, 120: 717-20

236. Mroz R, Chyczewska E, Holownid A, Izycki T, Chyczewski Z, Braszko J. Proliferative activity, DNA ploidy changes of lung cancer cell before and after chemotherapy // Folia Histochem Cytobiol 2001, 39 (suppl 2): 161-2

237. Muguerza J., Diez M., Torres A. Prognostic value of flow cytometric DNA analysis in non small cell lung cancer: rationable of sequential processing of frozen and paraffin-embedded tissue // World J Surg 1997 Mar-Apr; 21(3): 323-9

238. Munoz M., Liuch M., Azagara P., Vizcarra E., Jaraque F., Garcium J. Prognostic value of ploidy and S-phase in 340 breast cancer patients // Sixth International Congress on Anticancer Treatment, Paris, France 1996, p. 158

239. Nagai S., Chiba W., Ikeda S., Matsumoto H., Fijimoto Т., Iscida H., Wazawa H. Flow cytometric analysis of the DNA content of resected non small cell lung with reference to long term follow-up // Gan To Kagaku Ryoho 1996 Jun; 23 (suppl 2): 130-4

240. Noguchi M., Ota N., Koyazaki N., Taniya Т., Miyazaki I., Mizukami Y. Prognostic significance of internal mammary node metastases in breast cancer patients // Nippon Geka Gakkai Lasshi 1992; 93 (3): 295-9

241. Nori O., Merimsky O., Saw D., Cortes E., Chen E., Chassin J. Tumor ploidy as a risk factor for disease recurrence and short survival in surgically treated Dukes B2 colon cancer patients // Tumor Biol 1996; 17 (2): 75-80

242. Nori O., Merimsky O., Somola E., Saw P., Cortes E., Chen E., Torner J. Tumor ploidy as risk factor for disease recurrence and short survival insurgically treated Dukes В colon cancer patients // J Oncol 1995, v.59,1. N 4, p. 239-42

243. О Reilly S., Camplejohn R., Barnes D., Millis R., Allen D., Rubens R., Richards M. DNA index, S-phase fraction, histological grade and prognosis in breast cancer//Br.J.Cancer 1990 May; 61 (5): 671-674

244. Osaki Т., Hirota C., Yoneda K., Yamamoto Т., Ueta E. Clinical andj histopathological characteristics of tonge and gingiva carcinomas with occult and clinically evident cervical lymph node metastasis // Int J Oral Maxillofac Surg 1996; 25: 274-8

245. Ottensen G., Christensen I., Larsen J., Kerndryp G., Hansen В., Andersen J. DNA aneuploidy in early breast cancer // Br J Cancer 1995 Oct; 72 (4): 835-9

246. Ottensen G., Christensen I., Larsen J. Christiansen J., Hansen В., Andersen L. DNA analysis of in situ ductal carcinoma of the breast via flow cytometry//Cytometry 1995 Sep 15; 22 (3): 168-176

247. Overton W., Catalano E., McCoy J., Method to make paraffin-embedded breast and lymph tissue mimic fresh in DNA analysis // Cytometry 1996 Jun; 26(2): 161-171

248. Oya R, Ikemura K. Can flow cytometrically determined DNA ploidy and S-phase fraction predict regional metastasis in squamous cell carcinoma of the oral cavity? // Head Neck 2002, Feb; 24 (2): 136-42

249. Pandrea I., Zugun F., Tarcovenu E., Diaconu C., Mihailovici M., Carasevici E. Flow cytometry DNA index of colorectal carcinomas // Rev Med Chir Soc Med Natlasi 1995 Jan-Jun; 99 (1-2): 112-5

250. Pasini A., Corbella P., Colombo E. Endometrical carcinomas: prognostic significance of cellular ploidy // Minerva Ginecol 2000; 52 (5): 179-184

251. Pedersen L., Larsen I., Christensen I., Lykkesfeldt A., Holek S., Schiodt Т., DNA ploidy and S-phase fraction in medullary carcinoma of the breast a flow cytometria analysis using archival material // Breast Cancer Res Treat 1994; 29(3): 297-306

252. Pelletier M., Edwardes M., Michel R., Halwani F., Morin J. Prognostic markers in respectable non-small-cell lung cancer: a multivariate analysis // Can J Surg 2001 Jun; 44(3): 180-8

253. Pence J., Kerns В., Dodge R., et al. Prognostic significance of the proliferation index in surgically resected non-small-cell lung cancer // Arch Surg 1993; 128 (12): 1382-90

254. Pifarre A., Rosell R., Monzo H., DeAnta J., Moreno I et al. Prognostic value of replication errors on chromosomas 2p and 3p in non-small-cell lung cancer // Br J Cancer 1997; 75 (2): 184-9

255. Piera J., Tugues D., Badia F., Alonso M., Andre L., Ojeda В., Lopez I. Flow Cytometric DNA analysis in N breast cancer: prognostic value and correlation with histologic drade and mitotic activity // Ann Oncol 1992, 3 (suppl): 92

256. Pietra N., Sarli L Themassen В., Coeti R., Sanbastiano G., Peracchia A. Risk factors of local recurrence of colorectal cancer: a multivariate study //Hepatogastroenterology 1998 Sen-Oct; 45 (23): 1573-8

257. Pinto A., Andre; Soares J. Short-term significance of DNA ploidy and cell (proliferation in breast carcinoma: a multivariate analysis of prognostic markers in a series of 308 patients // J Clin Pathol 1999 Aug; 52 (8): 604611

258. Pinto A., Chaves P., Fidalgo P., Oliveira A., Leitao C., Scares J. Flow cytometric DNA ploidy and S-hpase fraction correlate with histopathologic indicators of tumor behavior in colorectal carcinoma //Dis Colon Rectum 1997 Apr; 40(4): 411-9

259. Pinto A., Andre S., Pereira Т., Nobrega S., Soares J. Prognostic comparative study of S-phase fraction and Ki-67 index in breast carcinima // J Clin Pathol 2001 Jul; 54 (7): 543-9

260. Pinto A., Andre S., Noguerra M, Mendonca E., Soares J. Flow cytometric DNA hypertetraploidy is associated with unfavourable prognostic features in breast cancer // J Clin Phathol 1997 Jul; 50(7): 591-5

261. Porchen R., Remy U., Bevers G. et al. Prognostic significance of DNA ploidy in adenocarcinoma of the pancreas. A flow cytometric study of paraffin-embedded specimens //Cancer 1993; 71 (12): 3846-50

262. Prasad A., Divine G., Zabro R. Two-color cytokeratin labeled DNA flow cytometric analysis of 332 breast cancer: lack of prognostic value with 12 year follow-up // Arch Pathol Lab Med 2001 Mar; 125 (3): 364-74

263. Purdie C., Piris J. Histophatolodical grade, mucinous differentiation and DNA ploidy in relation to prognosis in colorectal carcinoma // Histopa-thology 2000 Feb; 36 (2): 121-6

264. Quirke P. Flow cytometry: Methodology and Application in pathology // J Pathology 1986 v. 146, p. 79-87

265. Rapil S., Caldini A., Fanelli A., Berti P., Lizil E. et al. Flow cytometric measerement of DNA content in human solid tumors: a comparison with cytogenetics // Cytometry 1996 Sept; 26 (3): 192-7

266. Reinmuth N, Brandt B, Kunze W, Junker K, Thomas M, Achatzy Scheld H, Semik M. Ploidy, expression of erbBl, erbB2, p53 and amplification on erbBl, erbB2 and егЬВЗ in non small cell lung cancer// Eur Respir 2000 Nov; 16(5): 991-6

267. Risberg В., Baldetorp В., Ferno M., Hansson В., Mossbug L., Roos G., Stal o., Thorthwaite J., Tibell 1. Inter-institutional reproducibility of flow8 cytometric DNA analysis in breast carcinomas // Anal Cell Pathol 19941. Jan; 6 (1): 23-36

268. Roberts H., Komaki R., Allen Р/. El-Naggar. Prognostic significsnce of j DNA content in stage I adenocarcinoma of the lung // INT J Radiat Oncol

269. Biol Phys 1998 Junl; 41 (3): 573-8

270. Robertson J., Ellis J., Pearson D., Alston C., Nicholson R., Blarney R. Biological factors of prognostic significance in locally advanced breast cancer // Breast cancer Res Treat 1994; 29 (3): 259-64

271. Romero H., Scheider J., Burgos J et al. S-phase fraction identifies high-risk subgroups among DNA -diploid breast cancer // Brest Cancer Res Treat 1996; 38 (3): 265-275

272. Rzymovska J., Skierski L, Kurylcio L., Dyrda Z. DNA index as a prognostic factor in breast cancer // Neoplasma 1995; 42 (5): 239-42

273. Rua S., Comino A., Fruttero A. et al. Relatioship between histologic and features DNA flow cytometry and clinical behavior of squamous cell carcinoma of larynx // Cancer 1991; 61(1): 141-9

274. Rugge M., Sonego F., Panozzo M. et al. Pathologic and ploidy in the prognosis of gastric cancer with no extranoded metastasis // Cancer 1994; 74(4): 1127-33

275. Russo A., Baran V., Plaja S., Leonardo P., SeddoG. Prognostic significance of DNA content in operable colorectal catcinoma // 8 Nat Meet Gruppo Ital Citometr (GIC)" Dasic and Appl Histochem 1991; 35(3): 257

276. Saccani J., Fotanesi M., Orsi N., Sarii L., Pietra N., Peracchia A., Sansebas-tiano G., Becchi G. DNA content in human colon cancer and nonneoplastic adjacent mucosa // Int J Biol Markers 1995 Jan-Mar; 10(1): 11-6

277. Salvati F., Teodori L., Trinca M. et al. The relevance of flow cytometric DNA content in the evaluation of lung cancer // J Cancer Res Clin Oncol 1994; 120 (4): 233-9

278. Salud A., Porcel J., Raikundalia В., Complejohn R., Taub N. Prognostic significance of DNA ploidy, S-phase fraction, and P-glycoprotein expression in colorectal cancer // J Surg Oncol 1999 Nov; 71(3): 167-74

279. Sampedro A., Salas-Bustamante A., Lopez-Artimez M., Garcia-Muniz J., Urdiales G. Cell cycle flow cytometric analysis in the diagnosis and management colorectal carcinoma II Anal Quant Cytol Histol 1999 Aug; 21 (4): 347-52

280. San-Roman Machain A. Prognostic value of nuclear content in breast cancer // Dis Abst Int 1993; 54): 1186

281. Sasaki O., Nagahama S., kusano Т., Soejima K. Correlation between in-tratumor DNA ploidy distribution pattern and prognosis by tumor stage in colorectal carcinomas // Gan To Kagaku Ryoho 1996, Jun; 23 suppl 2: 107-111

282. Sarker S., Chufoor K., Patel K., et al. Nuclear DNA content using computerized image cytometry of squamous cell carcinomas of the head and neck // J Laryngol Otol 1997 Jan; 111(1): 43-7

283. Scagliotti G., Masiero P., Pozzi E. Biological prognostic factors in non-small-cell lug cancer // Lung Cancer 1995 Apr; 12 suppl 1: 313-25

284. Seoane J, Asejo J, Bascones A, Varela-Centeeles P, Romero M. Flow cytometric DNA ploidy analysis of oral cancer comparison with histologic grading // Oral Oncol 1999 May; 35(3): 266-72

285. Sgarma S., Mishra M., Kapur В., Verma FC, Nath I. The prognostic significance of ploidy analysis in operable breast cancer // Cancer 1991 Decl5; 68 (12): 2612-16

286. Scheider P., Praewer H., Stoeltzinyo O., Boehm J., Manning J., Metzger R., Fink U., Wegerer S., Hoelscher A., Roth J. Multiple molecular marker testing (p53, c-Ki-ras, c-erB-) improved non-small cell lung cancer // Br J Cancer 2000 Aug ; 83 (4): 473-9

287. Schillaci A., Tirindelli D, Nicolanti V., Ferti M., Chaivellati L. DNA: un nuovo fattore prognostico nel cancro del colonretto 11 2 Corigr Naz Pa-dova 1988, p. 93-99

288. Schimming R., Mlawitschka M., Haroske G. Dna analysis of squamous cell carcinoma in the oral cavity by image cytometry and its rating in the assessment of tumor prognosis // Mund Kiefer Gesichtchir 1997 Mar; 1(2): 108-10

289. Schimming R., Hlawitschka M., Haroske G., Eckelt U. Prognostic relevance of DNA image cytometry in oral cavity cacinoma //Anal Quant Cy-tol Histol 1998 Feb; 20 (1): 43-51

290. Schutte В., Reynders M., Wiggers Th. Et al. Retrospective analysis of the prognostic significance of DNA content and proliferative activity in large bowel carcinoma //Cancer Res 1987, v.47, № 10, p.5494-6

291. Seoane J., Asenjo J., Bascones A., Varela-Centelles P., Romero M. Flow cytometric DNA ploidy analysis of oral cancer comparison with histologic grading // Oral Oncol 1999 May; 35 (3): 266-72

292. Silvestrini R., D Agnano J., Faranda et al. Flow cytometric analysis of ploidy in colorectal cancer: A multicentric experience //B J Cancer 1993; 67:1042-6

293. Silvestrini R., Daidone M., Del Bino G et al. Prognostic Significance, of proliferative activity and ploidy in node-negative breast cancers // Ann Oncol 1993; 4: 213-9

294. Silvestrini R. Quality control for evaluation of the S-phase fraction by flow cytometry: a multicentric study. The SICCAB Group for quality control of cell kinetic determinations // Cytometry 1994 Mar 15; 18(1): 11-6

295. Silvestrini R. Relevance of DNA ploidy as a prognostic instrument for solid tumors //Ann Oncol Mar; 11 (3): 259-61

296. Sinn Y., Haag D., Elemann V., Magener A., Goerttler K., Bastern G., Otto H. DNA cytometry in breast carcinoma. Review of method and value in assessing prognosis // Pathologic 1997 Jan; 18 (1): 19-26

297. Snitcovsky J., Folgueira M., Mourao M., Fassolas G., Brentani M., Fede-rico M. Flow cytometric S-phase fraction, but not ploidy, hormonal receptor status predicts survival in Brazilian breast cancer // Int J Cancer 2002, suppl 13, p. 205

298. Somma D., Gipponi C., Margallo E., Moresco L., Mezzaros P., Schenon G. Prognostic signification of DNA plody in colorectal cancer // Eur J Surg Oncol 1992 (supl 15) 1:39

299. Skotincka В., Hassmann E., Dzeciol J., Musiatowicz B. Tumor DNA content as a prognostic indicator in squamous cell carcinoma of the larynx // Otolaryngol Pol 1999; 53 (1): 23-8

300. Stal O., Dufmats H., Hatschek Т., Carstrnsen J., Klintenberg C., Rutquist L., Skoog L., Sullivan S., Wingren S., Nordenkjold B. S-phase fraction isa prognostic factor in stage I breast carcinoma // J Clin Oncol 1993 Sep; 11 (9): 1717-1722

301. Stal O., Capstensen J., Wingren S., Rutqvist Т., Soog L., Kleintenberg C., Nordenskjold B. Relatioship of DNA ploidy and S-phase fraction to survival after first recurrence of breast cancer // Acta Oncol 1994; 33(4): 423-9

302. Stenmark -Askmalm M., Gentile M., Wingren S., Stal O. Protein accumulation and gene mutation of p 53 in bilateral breast cancer. Southeast Sweden Breast Cancer Group // Acta Oncol 2001; 40 (1): 56-62

303. Stomper P., Bloom J., Winston J., Stewart C. Flow cytometric DNA analysis of specimen mammography-guided fine -needle aspirates of ductal carcinoma in situ // J Exp Clin Cancer Res 2000 Sep; 19 (3): 309-15

304. Struikmans H., Kal H., Hordijkc J., van der Tweel J. Proliferative capacity in head and neck cancer // Head Neck 2001 Jun; 23 (6): 484-91

305. Struikmans H, Hordijkc J, Kal H. DNA oploidy of primary and recurrent irradiated laryngeal tumors // Strahlenther Onkol 2002 Jan; 178 (1): 32-5

306. Susin Т., Rapi S., Massi D. Preoperative evaluation of tumor ploidy in endomertial carcinoma: An accurate tool to identify patients at risk for extrauterine disease and recurrence // Cancer 1999; 86(6): 1005-1012

307. Takanishi D., Hart J., Covarelli P., Chapell R., Michelassi F. Ploidy as a prognostic feature in colorectal adenocarcinoma //Arch Surg 1996; 131 (6): 87-92

308. Tang R., Ho Y., Yon Y., Hsu K., Chem J., Changchien C. Prognostic evaluation of DNA-flow cytometric and histologic parameters of colorectal cancer //Cancer 1995 76 (10): 1724-30

309. Tang R., Ho Y., Chen H., See L., Wang J. Different prognostic effect of postoperative chemoradiation therapy on diplod and nondiplod high-risk rectal cancers // Dis Colon Rectum 1998 Dec; 41 (12): 1494-9

310. Taylor L., Musgrove E., Fridlander M., Foo M., Hedley D. The influence of age on the DNA ploidy levels of breast tumors // Eur J Cancer Clin Oncol 1983, v. 19, p. 623-628

311. Thorud E., Fossa S., Vaage S., Kaalnus O., Knudsen I., Boermer O., Shoaib M. Primary brest cancer flow cytometric DNA pattern in relative to clinical and histopathologic characteristic // Cancer 1986, v. 57, N 4, p. 808-11

312. Toikkanen S., Joensuu H., Klemi P. The prognostic significance of nuclear DNA content in invasive breast cancer- a study with long-term follow-up // Br J Cancer 1989 Nov; 60(5): 693-700

313. Toikkanen S., Joensuu H., Klemi O. Nuclear DNA content as a prognostic factor in T^No breast cancer // Am J Clin Pathol 1990 Apr; 93(4): 471-9

314. Tonouchi H, Matsumoto, Kinoshita Т., Iton H., Suzuki H. Prognostic value of DNA ploidy patterns of colorectal adenocarcinoma: univariate and multivariate analysis //Dig Surg 1998; 15 (6): 687-92

315. Tolentino R, Ang S, Cajacama C, Eufemio G, Talla V, Lo R. The prognostic significance of the S-phase fraction and DNA ploidy in nodenegative estrogen receptor positive breast cancer // Philipp J Surg Spec 1998 Jan-Mar; 53 (1): 25-30

316. Tomoda H., Baba H., Saito Т., Wada S. DNA index as a significant predictor of reccurence in colorectal cancer // Dis Colon Rectum 1998 Mar; 41 (3): 286-90

317. Tomoda H., Kokeji Y., Furosawa M., Prognostic signification of flow cytometric analysis of DNA content in colorectal cancer: a prospective study // J Surg Oncol 1993; 53(3): 114-48

318. Tomita M., Obatake M., Souai Т., Hatana K., Matsumoto Y. Malignant potential in the analysis of DNA ploidy pattern in with colorectal cancer // Acta Med Nagasak 1993; 38 (2-4); 103-5

319. Tsychiya A., Nihei M., Audo Y., Suzuki S., Kimijima 1., Abe R. The relationship of estrogen reeptor status to DNA ploidy in Brest cancer // Surg Today 1992; 22 (2): 105-9

320. Tsutsui S., Ohno S., Murakamis S., Hachitanda Y., Oda S. Prognostic value of DNA ploidy in 653 Japanease women with node-negative breast cancer// Int J Clin Oncol 2001 Aug; 6 (4): 177-82

321. Tsushima K., Nagorney D., Cha S., Reiman H. Correlation of DNA ploidy, histopathology, stage and clinical outcome in gastric carcinoma // Surg Oncol 1992 (1): 17-25

322. Tsutsui S, Ohno S, Murakami S, Kataoka A, Kinoshita J, Hachita Y. Flow cytometric analysis of DNA ploidy in primary metastatic and recurrent breast cancer // Oncol Rep 2002 Jul-Aug; 9 (4): 793-9

323. Tytor M., Wigren S., Oloffson J. Heterogenety of squamous cell carcinoma of the oral cavity studied by flow cytometry // Pathol Res and Pract 1991, v. 187, N l,p. 30-35

324. Tytor M., Oloffson J., ledin Т., Brunk U., Klintenberg C. Squamous cell carcinoma of the oral cavity. A review of 176 cases with application ofmalignancy grading and DNA measurements 11 Clin Otolaringol 1990 Jun; 15 (3): 235-52

325. Van Dam P., van Bockstaele D., Keersmaeckers G. Flow cytometric detection of multifocal DNA aneuploid cell populayion in mastectomy specimens containing a primary breast carcinoma // Cytometry 1990, v.l 1, p.300-307

326. Van de Vaart P., Belderbog J., de Jong D., Sneeum K., Majoor D., Barte-lin K., Begg A. Dna adduct levels as a predictor of outcome for NSCLC patients receiving daily cisplatin and radiotherapy И Int J Cancer 2000 Mar 20; 89 (2): 160-6

327. Vijayan V., Ho J., Gon H., Comparison study of DNA content of primary and metastatic lymph node lesions of colorectal cancer // Am Acad Med Singapore 1995 May; 24 (3): 347-52

328. Visakorpi Т., Holli К., Наката M. High cell proliferation activity determined by DNA flow-cytometry and prognosis in epidermoid lung carcinoma//Acta Oncol 1995, 34: 605-9

329. Van de Linden L., Lindeman J., Baak J., Meijer C., Herman C. The multivariate prognostic index and nucleolar DNA content are independent prognostic factors in primary breast cancer patients //Cytometry 1989 Jan; 10(1): 56-61

330. Venkatesh K., Weingart D., Ramanujam P. Comparison of double and single parameters in DNA analysis for staging and as a prognostic indicator in patients with colon and rectal carcinpma // Dis Colon Rectum 1991 Nov; 37 (11): 1142-7

331. Von Rosen A. Aneuploidy as a prognostic factors in breast Cancer // Med Oncol Tumor Pharmacoter 1989; 6 (2): 117-120

332. Volm H. Prognostic applications of DNA aneuplody and proliferative activity in solid human tumors // Tumor Diagnistic Therapie 1989, N 10, p. 229-232

333. Wang D., Liao S., Gao Z. Multivariate analysis of prognostic factors in non-small cell lung cancer // Chung Hua J Hsuen Tsa Clin 1997 Jul; 77(7) p. 497-500

334. Welkoborsky H., Gluckman J., Jacob R., Bernaner H., Mann W. Tumor biologic prognostic parameters in TINoMo squamous cell carcinoma of the oral cavity // Laryngorhinootologie 1999 Mar, 78 (3); 131-8

335. Welkoborsky H., Mann W., Sanal C., Freije J. DNA measyrements for monitoring chemotherapy in advanced head and neck carcinomas // Head Neck 1994 May-Jun; 16 (3): 240-5

336. Wenger C., Beardslee S., Owens M., et al. DNA ploidy, S-phase and steroid receptors in more than 12000 cancer patients // Breast Cancer Res 1993; 28 (1): 9-20

337. Wennerberg J., Baldetorp В., Wahelberg P. Distribution of non-diploid flow cytometric DNA indicis and their relation to the nodal metastasis in squamous cell carcinomas of the head and neck // Invasion Metastasis 1998-99; 18(4); 184-91

338. Whitzig Т., Ingle J., Cha S., Schaid D., Tabey R., Wold L., Grant C., Gonctroroff N., Katzmann J. DNA ploidy and percentage of cell in S-phase as a prognostic factors for women with lymph node negative breast cancer // Cancer 1994; 74 (6): 1752-61

339. Winter K., Eidlmann H., Jonat W. Flow cytometry detected S-phase fraction and ploidy as prognostic parameters in primary node-negative breast cancer// Gebartshilfe Frauenheilkd 1994; 54 (5): 291-4

340. Wisscher D., Zabro R., Greenwald K., Crissman J. Prognostic significance of morphological parameters and flow cytometric DNA analysis in carcinoma of the breast //Pathol Annu 1990; 25 Pt 1:171-210

341. Wolf G., Fischer S., Truelson J et al. DNA content and regional metastases in patients with advanced laringeal sqamouse carcinoma //Laringoscope 1994, v. 104, p. 479-83

342. Wong G., Stidley C., Dressier et al. Predictive value of flow cytometric analysis in DNA content in patients with locally advanced head and neck carcinoma // J Laryngol Otol 1996 Mar; 110(3): 243-8

343. Wong S., Rangan A., Bilous A., Boyages J., Gebski V., Benson E. The value of S-phase and DNA ploidy analysis as prognostic markers for node-negative breast cancer in the Australian setting //Pathology 1999 May; 31 (2): 90-4

344. Uner A/. Gunel N., Akcali Z., Akbulut H., Sezer C., Ergue L., Mentes В., Comert M., Cihan A. DNA ploidy and other biological markers in breast cancer// UICC Cancer Menagment Meeting, Austria, Viennal997, p.37

345. Uvarov A., Nikolaeva Т., Achundov A. Influence of DNA content in squamous cell carcinoma of the oral cavity on prognosis //Jubill Congress of the European Association for Cranio-Maxcillofacial Surgery. Zurich, Switzerland 1996, post. 159I

346. Xia Y., Luo Z., Liang M. Biological study on prognosis of laryngeal carcinoma with regional metastatic lymph node. Chung laryngeal carcinoma with regional metastatic lymph node// Chung Hua Erh Pi Yen Hou Ко Tsa Chin 1994; 29 (4): 234-7

347. Xue F., Jia O., Zhao F. A study on DNA content and cell cycle phase analysis in endometrial carcinoma // Zhohghua Fu Ch; an Ke Za Zhi 1996; 31 (4): 216-9

348. YamaguHi A., Ishida Т., Takegawa S., Nishimura G., Kanno M. Flow cytometric analysis of colorectal cancer with hepatic metastasis and its relationship to metastatic characteristic and prognosis // Oncology 1990; 47 (6): 478-82

349. Yamamoto Т., Matsumoto K., Iriyama K. Prognostic significance of the DNA index in a colorectal cancer //Surg Today 1998; 28 (8): 792-6

350. Yamazaki K., Sato K., Hirata S., Ikeda K„ Kubo Y., Maysui H., Ogawa K. Molecular oncological study on DNA ploidy, Ki-ras point mutation and p21 expression in colorectal cancer // Nippon Geka Gakkai Zasshi 1994 Apr; 95 (4): 242-7

351. Yamazoe Y., Maetani S., Nishikawa Т., Onodera H., Tobe Т., Imamoto H. The prognostic role of the DNA ploidy pattern in colore-cyal cancer analysis using paraffm-embeded tissue by an improved method // Surg Today 1994; 24 (1): 30-36

352. Yiken J., Hennessay C., Corbett J., Dykin R., Givan A., Shenton В., Henry J., Wright C., Lennard T. Node negative breast cancer: the prognostic value of DNA ploidy for long-term survival // Br J Surg 1991 Jul; 78 (7): 844-48

353. Yu J., Ahaeffer J., Zhu A. et al. Flow cytometric DNA content and clinical outcome in patient with non-small cell lung cancer given postoperative radiation therapy // Cytometry 1993; 14 (4): 428-32

354. Zackrisson В, Flygare P, Gustafsson H, Sjostrom B, Wilson G. Cell kinetic changes in human squamous cell carcinomas during radiotherapy studied using the in vivo administration of two halogenated pyrimidines // Eur J Cancer 2002 May; 38 (8): 1100-6

355. Zaino R., Davis A., Ohlsson-Wilhelm B. DNA content is an independent prognostic indicator in endometrial adenocarcinoma. A Gynecologic Oncology Group Study // Int J Gynecol Phathol 1998; 17 (4): 312-319

356. Zarbo R., Nakhleh R., Braun R., Kubus J., Ma C., Mackowiak P. Prognostic significance of DNA ploidy and proliferation in 309 colorectal carcinomas as determined by two-color multiparametric DNA flow cytometry // Cancer 1997 Jun 1; 79 (11): 2073-86

357. Zatterstrom U., Wennerberg J., Ewers S., Willen R., Attwell R. Prognostic factors in head and neck cancer: Histologic grading, DNA ploidy and nodal status //Head Neck 1991, nov-Dec; 13 (6): 477-87

358. Zhao F., Lui S., Yu S. Flow cytometry analysis of 67 squamous cell carcinoma of the tonge //Chung Hua Kou Chiang Hsuen Tsa Clin 1995 Mar 30(2); 67(9): 127

359. Zimmerman O., Bint M., Hawson G., Parson P. Ploidy as a prognostic determinant in surgically treated lung cancer // Lancet 1987 v.l 1, p. 530-3

360. Zoras O., Curri G., Cooke Т., Vlachonikolis I., Forster G., McArdle C., Stanton P. Prognostic value of ploidy of primary tumor and nodal secondaries in colorectal cancers //Surg Oncol 1994 Dec; 3 (6): 345-9