Клеточная селекция пшеницы Triticum aestivum на устойчивость к УФ-Б тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Лапшин, Петр Владимирович

• Лапшин, Петр Владимирович
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Лапшин, Петр Владимирович

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. УЛЬТРАФИОЛЕТОВАЯ РАДИАЦИЯ В ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЕ

1.1.1. Поступление солнечного излучения к земной поверхности

1.1.2. Факторы влияющие на баланс УФ-радиации в атмосфере

1.1.3. Искусственные источники УФ-Б излучения.

1.2. ВЛИЯНИЕ УЛЬТРАФИОЛЕТОВОЙ РАДИАЦИИ НА РАСТИТЕЛЬНЫЕ ОРГАНИЗМЫ.

1.2.1. Действие УФ-Б радиации на уровне целого растения.

1.2.2. Действие УФ-Б радиации на уровне тканей и органов растений.•.

1.2.3. Действие УФ-Б радиации на клеточном уровне.

1.2.4. Действие ультрафиолета на уровне генома.

1.3. КУЛЬТУРА ТКАНЕЙ ЗЕРНОВЫХ ЗЛАКОВ IN VITRO И ЕЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В СЕЛЕКЦИИ

1.3.1. Морфогенез в культуре клеток злаков.

1.3.2. Сомаклональная изменчивость каллусных тканей в культуре злаков in vitro.

1.3.3. Клеточная селекция у растений к абиотическим стрессорам.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Условия стерилизации экспланта.

2.2.2. Питательные среды.

2.2.3. Условия культивирования.'.

2.2.4. Условия селекции.

2.2.5. Биохимические исследования.

2.2.6. Морфо-физиологические исследования.

3. МОРФО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ДВУХ ГЕНОТИПОВ ЯРОВОЙ МЯГКОЙ ПШЕНИЦЫ В УСЛОВИЯХ IN VITRO.

3.1. ПРОЛИФЕРАЦИЯ КАЛЛУСНЫХ ТКАНЕЙ ПШЕНИЦЫ СОРТА ТАЕЖНАЯ И ЛИНИИ ФОТОС

3.2. МОРФОГЕНЕТИЧЕСКАЯ СПОСОБНОСТЬ КАЛЛУСНЫХ КУЛЬТУР ПШЕНИЦЫ СОРТА ТАЕЖНАЯ И ЛИНИИ ФОТОС

4 . КЛЕТОЧНАЯ СЕЛЕКЦИЯ ПШЕНИЦЫ СОРТА ТАЕЖНАЯ И ЛИНИИ ФОТОС НА УСТОЙЧИВОСТЬ К УФ-Б.

4.1. РАСЧЕТ УСЛОВИЙ ОБЛУЧЕНИЯ УФ-Б

4.2. ВЛИЯНИЕ УФ-Б НА ПРОЛИФЕРАЦИЮ КАЛЛУСНЫХ ТКАНЕЙ ПШЕНИЦЫ СОРТА ТАЕЖНАЯ И ЛИНИИ ФОТОС

5. ХАРАКТЕРИСТИКА КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЙ ПШЕНИЦЫ, УСТОЙЧИВЫХ К ДЕЙСТВИЮ УФ-Б РАДИАЦИИ.

5.1. М0РФ0-ФИЗИ0Л0ГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР

5.2. БИОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клеточная селекция пшеницы Triticum aestivum на устойчивость к УФ-Б»

Воздействие ультрафиолетовой радиации на растительные объекты приковывает пристальное внимание ученых в связи с усиливающимся антропогенным влиянием на атмосферу и ухудшением состояния озонового слоя, который защищает землю от губительного действия ультрафиолетовой радиации. Установлено снижение концентрации озона над Южным и Северным полюсами, имеются данные об озоновых дырах у Южного полюса. Снижается концентрация озона и над Северным полушарием: резкое уменьшение озонового слоя показано над тропиками Африки, Южной Америки, над водами Антарктики и экваториального пояса.

В результате уменьшения озонового слоя на поверхности земли увеличивается уровень излучения в диапазоне длин волн от 28 0 до 320 нм. Это излучение лежит в ультрафиолетовой области спектра и относится к его "среднему" или "Б"-участку. Это излучение обозначается как "УФ-Б" (UV-B).

Возможное истощение озонового слоя может повлечь за собой большее распространение раковых заболеваний кожи, болезней глаз (катаракты), ослабление защитных функций иммунной системы человека. Установлено, что уменьшение концентрации озона в атмосфере на 5% вызывает увеличение заболеваний раком кожи на несколько десятков тысяч случаев (данные американских ученых) [33] . Кроме того, в слое глубиной до 2 м от поверхности моря не сможет развиваться фитопланктон, являющийся первым звеном пищевой цепи и необходимым элементом для выживания большинства видов морских животных, а также резко ухудшатся процессы воспроизводства и роста растений суши.

УФ-радиация является мощным стрессовым фактором для живых систем, т.к. вызывает разнообразные фотохимические превращения. Все живые организмы и растения чувствительны к ультрафиолетовому облучению и реагируют на УФ радиацию. Ультрафиолет индуцирует не только прямые повреждения ДНК, но и вызывает окислительный стресс, в результате которого образуются радикалы, вызывающие повреждения всех структур и молекул клетки. Все химические компартменты могут быть мишенью для ультрафиолета. И, как следствие, это влечет за собой физиологические нарушения и анатомические изменения. Нарушения в ДНК могут быть причиной повышенного уровня мутаций, что может негативно сказываться на сохранении генофонда живых организмов.

Все поднятые вопросы имеют большое значение для сельского хозяйства. Пшеница является главной зерновой культурой в сельском хозяйстве большинства развитых стран. С ней издавна проводится работа по селекции традиционными методами. Использование биотехнологических методов по отношению к пшенице может существенно ускорить селекционный процесс в силу реализации свойственной растительной клетки тотипонентности и связанной с этим возможности рассматривать неорганизованно растущую культуру клеток как колонию независимых одноклеточных организмов. В неорганизованно растущей культуре, единицей, на которую оказывается селекционное давление, является одиночная клетка, а не целый организм с его половыми клетками, как в традиционной селекции. В традиционной селекции действие мутагенов направлено на половые клетки или на апекальные меристемы, и последующий отбор из них желаемых форм. В неорганизованно растущей культуре соматические клетки, составляющие каллусную (суспензионную) ткань, благодаря свойству тотипотент-ности, могут сами быть объектами селекции, сохраняя принципиальную возможность последующей регенерации из любой клетки популяции целого растения. Поскольку селекционное давление направлено на единичную клетку и она теоретически в состоянии дать начало целому растению, время существования клетки от предыдущего деления до последующего может расматриваться как время существования одного поколения, и в неорганизованно растущей культуре составляет 2-4 суток в зависимости от вида, сорта и условий культивирования, в то время как традиционная селекция оперирует времением жизни поколения по времени жизни растения — от прорастания семени до созревания плодов, что в условиях климата средней полосы занимает целый вегетационный сезон.

Очевидным преимуществом клеточной селекции in vitro является сокращение площадей на проведение работ и со-ответсвенно трудозатрат. При обычной норме высева на квадратном метре посева размещается около 150 растений зерновых культур и на 1 гектаре, соответственно 1,5 млн растений. Это же количество клеток in vitro занимает одну чашку Петри [141].

Цель и задачи исследования. Целью данной работы являлось получение клеточных линий пшеницы, обладающих повышенной резистентностью к ультрафиолетовому облучению в диапазоне длин волн от 28 0 до 320 нм, с использованием методов клеточной селекции in vitro, а также изучение биохимических и морфофизиологических характеристик полученных линий.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

• получить хорошо растущую стерильную каллусную культуру пшеницы на агаризованной питательной среде;

• изучить зависимость каллусогенеза от влияния УФ-Б излучения;

• определить влияние различных доз УФ-Б на пролиферацию каллусной ткани;

• провести клеточную селекцию на устойчивость к воздействию ультрафиолетовым излучением области "Б";

• Изучить воздействие УФ-Б на синтез фенольных соединений в каллусной культуре, а также на морфофизиоло-гические и цитохимические характеристики полученных тканей.

Научная новизна. Разработана схема селекции в каллусной культуре на устойчивость к ультрафиолетовому излучению с использованием искусственного источника излучения. Впервые получены и охарактеризованы линии яровой мягкой пшеницы Т. aestivum сорта Таежная и линии Фотос, обладающие повышенной устойчивостью к УФ-Б. Показано влияние УФ-Б облучения на рост каллусной ткани яровой мягкой пшеницы Т. aestivum сорта Таежная и линии Фотос. Показано влияние УФ-Б на такие биохимические и морфо-физиологические показатели каллусной культуры как содержание растворимых фенольных соединений, свободных аминокислот, размеры клеток и параметры клеточной стенки .

Практическая значимость. Показана принципальная возможность селекции каллусной ткани к УФ-излучению с помощью искусственного источника радиации- Предложенная технология клеточной селекции может быть использована на каллусной культуре других высших растений для отбора толерантных к ультрафиолетовому облучению клеточных культур. Устойчивые клеточные линии сельскохозяйственных растений могут применяться как исходный материал для получения растений-ренерантов, способных произрастать в неблагоприятной экологической обстановке, что может представлять интерес для сельского хозяйства.

Апробация работы. Материалы работы докладывались на Международных конференциях: "Молекулярно-генетические маркеры растений" (Ялта, 1996) ; "Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда" (Москва, ИФР РАН, 1997), на IV съезде Общества физиологов растений России «Физиология растений - наука III тысячелетия» (Москва, ИФР РАН, 4-9 октября 1999); на ежегодных семинарах отдела Биологии клетки и биотехнологии ИФР РАН, на заседаниях Кафедры сельскохозяйственной биотехнологии Московской сельскохозяйственной академии им. К.А.Тимирязева.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Лапшин, Петр Владимирович

выводы

1. Показана зависимость каллусогенеза пшеницы от типа первичного экспланта, гормонального состава и количества элементов питания среды культивирования.

2. Показана зависимость морфогенетических процессов каллусной ткани пшеницы от облучения УФ-Б радиацией, генотипа, происхождения первичного экспланта, гормонального состава среды.

3. Показано влияние генотипа исходного экспланта на каллусогенез, морфогенез и чувствительность к УФ-облучению. Фотос показал большую устойчивость к стрессовому воздействию, чем Таежная.

4. Разработана схема клеточной селекции пшеницы на устойчивость к УФ-Б с использованием искусственного источника излучения.

5. Показана возможность получения клеточной культуры пшеницы, сохраняющей способность к неорганизованному росту в присутствии УФ-Б.

6. Установлена зависимость роста клеточных культур пшеницы от интенсивности и длительности воздействия УФ-Б радиации, а также от генотипа исходного экспланта.

7. УФ-Б радиация вызывает изменения в морфо-физиологических (размеры клеток, параметры клеточной стенки) и биохимических (содержание фенольных соединений, лигнина, изменения в баллансе аминокислот) характеристиках каллусных культур пшеницы, что может быть использовано для селекции новых линий пшеницы, обладающих устойчивостью к данному фактору.

БЛАГОДАРНОСТИ

В заключение этой работы хочу выразить искрению благодарность сотрудникам Института физиологии растений им.К.А.Тимирязева РАН, без участия которых эта работа была бы невозможной:

- Раисе Георгиевне Бутенко за постоянное внимание, идеи, помощь и поддержку при выполнении работы;

Александру Борисовичу Бургутину за неоценимые консультации в ходе проведения экспериментов и подготовке печатных материалов.

- Михаилу Всеволодовичу Добровольскому за помощь в создании установки для облучения и расчете ее параметров .

- Наталье Викторовне Загоскиной за возможность осуществления биохимического и морфо-физиологического анализа клеточных линий и участие при подготовке печатных материалов.

А также сотруднику кафедры с/х биотехнологии МСХА им.К.А.Тимирязева Елене Анатольевне Калашниковой за поддержку на всех этапах подготовки и проведения работы и моральную поддержку.

заключение

Ухудшающаяся экологическая обстановка на планете заставляет обращать на себя внимание исследователей. Нарушение баланса компонентов атмосферы приводит к изменению спектрального состава и уровня солнечного излучения на земной поверхности. В результате растительные организмы часто оказываются неприспособленными к изменяющимся условиям. Это, в частности, касается такой культуры, как пшеница, которая широко применяется в производстве продуктов питания.

Поэтому применение современных методов биотехнологии, в частности клеточной селекции in vitro, на такой важной сельскохозяйственной культуре как пшеница, может иметь большое значение для экономики.

Проведение клеточной селекции на неорганизованно растущей каллусной ткани двух генотипов яровой мягкой пшеницы Т. aestivum - сорте Таежная и линии Фотос, с использованием искусственного источника ультрафиолетового излучения, показало принципиальную возможность успеха такой работы.

Методом индивидуального отбора в популяции неорганизованно растущей ткани, отобраны 13 клеточных линий, ведущих свое происхождение от индивидуальных первичных эксплантов. Отобранные клеточные линии сохраняли рост на уровне контроля в течение длительного времени как под воздействием УФ-Б, так и без него.

Полученные клеточные линии имели существенные отличия по биохимическим показателям, в частности по содержанию веществ фенольной природы. Эти изменения регистрировались на протяжении длительного времени после прекращения стрессового воздействия, что может свидетельствовать о генетическом характере изменений в отобранных на устойчивость в УФ-Б излучению клеточных линиях.

Была продемонстрирована зависимость чувствительности к УФ-Б от генотипа исходного экспланта. Из двух протестированных генотипов пшеницы удалось отобрать устойчивые клеточные линии только у одного из них, что свидетельствует о необходимости индивидуального подхода к селекции применительно к каждому выбранному виду или сорту растений.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Лапшин, Петр Владимирович, 2001 год

1. Ауэрбах Ш. Проблемы мутагенеза М.,Мир,1978, 4 61с.

2. Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М, Наука, 1964, 272с.

3. Бутенко Р.Г., Джардемалиев Ж.К., Гаврилова Н.Ф. Кал-лусообразующая способность эксплантов из разных органов различных сортов озимой пшеницы. Физ. раст., 1986, 33, 2, 350-356.

4. Гапоненко А.К., Маликова Н.И., Охрименко Г.И., Сози-нов А. А. Получение сомаклональных линий у злаков (Тг. aestivum L. , Hordeum vulgare L.). Докл. АН ССС, 1985, 283, 1471-1475.

5. Гапоненко А.К., Мунтян М.А., Маликова Н.И., Созинов А. А. Регенерация растений различных генотипов пшеницы Tr. aestivum L. in vitro. Докл. АН СССР, 1984, 278, N5, 1231-1235.

6. Долгих Ю.И., Шамина З.Б. Современные представления о причинах и механизмах сомаклональной изменчивости. Молекулярные механизмы генетических процессов. М, Наука, 1991, 123-127.

7. Гущин Г. П. Общее содержание атмосферного озона и спектральная прозрачность атмосферы. JI., Гидрометео-издат, 1987г. 109с.

8. Э.Жалилова Ф.Х. Влияние УФ-Б радиации на содержание фи-тогормонов и рост мутантных линий арабидопсиса. Авто-реф. канд. биол. наук. Москва, 1993, 17с.

9. Ю.Жалилова Ф.Х., Ракитина Т.Л., Леасов П.В., Кефели В.И. Действие ультрафиолетовой радиации (УФ-Б) на рост и выделение этилена из трех генетических линий Arabidopsis thaliana. Физ.раст.,1993, 40(8), 764-769.

10. Загорска Н.А., Шамина З.Б. Способность к регенерации в культуре тканей разного происхождения. Культура изолированных органов, тканей и клеток растений, М., Наука, 1970, с.1027-1033.

11. Запрометов М.Н. Фенольные соединения и методы их исследования. М., Наука, 1971, 185с.

12. Канаш Е.В. Изменение продуктивности и содержания пигментов у растений фасоли при ультрафиолетовом стрессе. В кн. "Фотосинтез и продуктивность растений", ВАСХНИЛ, 1990, Саратов, 86-89.

13. Канаш Е.В., Савин В.Н., Осипов Ю.А. Изменение роста и продуктивности растений ячменя при облучении ультрафиолетовой радиации в различные периоды онтогенеза. Физ. раст., 1988, т.35, вып.4, 726-729.

14. Карабаев М.К., Джардемалиев Ж.К., Дарканбаева Г.Т., Бутенко Р. Г. Генетические особенности каллусообразования и регенерации растений в культуре клеток пшеницы и эгилопса. С/х биотехнология, 1991, N3, 69-74.

15. Карабаев М.К. Культивируемые клетки пшеницы и кукурузы: физиологические и биотехнологические аспекты. Ав-тореф. дис. докт. биол. наук, Алматы, 1994, 380с.

16. Кучеренко Л.А. Биологические особенности риса в культуре in vitro и создание на их основе биотехнологии получения исходного селекционного материала. Автореф. дисс. докт. биол. наук, Краснодар, 1991, 230с.

17. Лютенко B.C., Юсухно Т.В., Пастернак Т.П. Количественная оценка способности к каллусообразованию и регенерации трех сортов яровой пшеницы. Совр. мет. и подходы в селекции растений, 1991, 71-76.

18. Мамадриконов А.Ш. Влияние УФ радиации на рост ячменя и транспирацию листьев растений в условиях высокогорий Памира. Изв. АН Тадж. ССР, 1988, Отд. биол. наук, 3, 45-49.

19. Роун Ш. Озоновый кризис. М., Мир., 1993, 317с.3 0.Сидоров В. А. Биотехнология растений. Клеточная селекция, Киев, Наукова Думка, 1990, 280с.

20. Суханов В.М., Папазян Н.Д. Условия получения каллусов и регенерантов в культуре зрелых зародышей пшеницы. Апомиксис и цитоэмбриология растений, 1983, 124-130.

21. Тимощенко А.С., Казуто О.Н., Гордеева Е.Е. Количественные определения путресцина в растительном материале в присутствии свободных аминокислот. Физ. раст., 1980, т.27, V6, с.1308-1314.

22. Филиппов Ю.В. Вобликова В. А. Озонный щит земли М., Знание 1980, 62с.

23. Упельниек В.П., Новосельская А.Ю., Шутка А.Е.,Талиба Г., Метаковский Е.В. Анализ изменчивости электфоре-тических спектров запасных белков зерна у регенерантов пшеницы. Генетика, 1991, 27, N9, с. 1597-1603.

24. Халилов Р.И., Ахмедов И.С. О некоторых особенностях действия УФ света на активность Н+ помпы плазматических мембран клеток растений. Материалы 1-й Респ. биохим. конф., Баку, 1990, с.125.

25. Халилов Р.И., Хомутов Г.Б., Тихоново А.Н. Влияние ультрафиолетового облучения на структурнофункциональные характеристики тилакоидной мембраны. Физ. раст., 1993 40(3), 373-378.

26. Шамансуров С., Акназаров О.А. Влияние УФ-радиации на рост различных органов растений (фасоль). Изв. АН Тадж ССР, 1988, Отд. биол. наук, 33, 41-44.

27. Шульгин И.А. Лучистая энергия и методы ее измерения в светокультуре растений. Учебно-методическое пособие, М., Изд. МГУ, 1962, 60с.

28. Шульгин И.А. Солнечная радиация и растение. Л., Гидрометеоиздат, 1967, 130с.

29. Шульгин И.А. Солнечная радиация и фотоморфогенез зеленого растения. Автореф. докт. биол. наук, 1970, 230с.

30. Шульгин И.А. Растение и солнце Л., Гидрометеоиздат, 1973, 270с.

31. Шульгин И.А., Забиров Р.Г., Щербина И.П., Толибеков Д. Т. О роли ультрафиолетовой радиации высокогорных районов в строении побега и продуктивности пшеницы. Биол. науки, 1990, N7, 107-118.

32. Acosta M., Casas J.L., Arnao M.B. Hydroperoxide and ehtylene formation coupled to 1-aminocyclopropane-l-carboxylic acid oxidation catalyzed by perixidase. Physiol. Plant., 1990, 79(2), 35-39.

33. Ahloowallia B.S. Somatic embrioids in monocots. Their genetics and genetic stability. Rev. cytol.* and biol. veg. bot., 1991, 14, N3-4, p.223-235.

34. Barnes P.W., Flint S.D., Cadwell M.M. Morphological responses of crop and species of different growth forms to ultraviolet-B radiation. Am. J.' Bot., 1990, 77, 1354-1360.

35. Beggs C., Shneider-Ziebert U., Wellman. UV-B radiation and adaptive mechanisms in plant. Photoch. Photobiol., 1986, 3, 243-255.

36. Beggs C.J., Stolzer-Jehle A., Welman E. Isoflavonoid formation as an indicator of Uv-stress in bean (Phaseolus vulgaris L.) leaves. Plant Physiol., 1985, 79(4), 630-634.

37. Beggs C., Wellman E. Analysis of light-controlled anthocyanin formation in coleoptiles of Zea mays L. The role of UV-B, blue and far-red light. Photochem. Photobiol., 1985, 41(2), 481-486.

38. Bornman J.F. UV-radiation as an environmental stress in plants. J. Photochem. Photobiol., 1991, 8(3), 337341.

39. Bornman J.F. Target sites of UV-B radiation in photosynthesis of higher plants. J. Photochem. Photobiol., 1983, 4(2), 145-148.

40. Borman J.F., Bjorn L.O., Akerlund H.E. Action spectrum for inhibition by ultraviolet radiation of photosystem II activity in spinach thylakoids. Photobiochem. Photobiophys., 1984, 8, 305-313.

41. Bruns В., Hahlbrock K., Schafer E. Fluence dependece of the ultraviolet-light-induced accumulation of chalcone synthase mRNA and effects of blue and far-red light in cultured parsley cells. Planta, 1986, 169, 393-398.

42. Butenko R.G., Niciforova I.D., Chernov V.A. Growth and morphogenesis in cell culture of spring wheat ander stress conditions and selection of tolerant cell lines. Postdamer Forschunger Reicher Heft 57 (Potsdam). 1988, p.9.

43. Caldwell M.M. Solar UV irradiation and the growth and development of higher plants. Photophysology, 1971, 6, 131-177.

44. Caldwell M.M., Gold W.G., Harris G., Ashuurt C.W. A modulated lamp system for solar UV-B (280-320nm) supplementation studies in the field. Photochem. Photobiol., 1983, 37, 479-485.

45. Caldwell M.M., Teramura A.H., Tevini M. The chaiging solar ultraviolet climat and the ecological consequences for higher plants. Ecolog., 1989, 4, 363367 .

46. Carman J.G., Jefferson N.E., Campbell W.F. Induction of embryogenetic Tr. aestivum in calli. II Quantification of organic addenda and other culturevariable effects. Plant Cell Tiss. Organ Cult., 1987, 10, p. 115-128.

47. Chang D.C., Campbell W.F. Responses of tradescantia stamen hairs and pollen to UV-B irridation. Environ. Exp. Bot., 1976, 16, 195-199.

48. Chin J.C., Skott K.J. Studies on the formation of roots and shoots in wheat cultures. Ann. Bot. (Gr. Brit.), 1977, 41, N173, 473-481.

49. Cieminis C.G.K., Ranceliene V.N., Prijauskiene A.J., Tiunaitiene N.V., Rudzianskaite A.M., Jancys Z.J. Chromocome and DNA damage and Their repair in Higher plants irradiated with short-wave ultraviolet light. Mutat. Resp., 1987, 181, 9-16.

50. Galiba G., Yamada Y. A novel method for increasing the frequency of somatic embryigenesis in wheat tissue culture by NaCl and Kcl supplementation. Plant Cell Reports, 1988, 7, N1, p.55-58.

51. Dangl J.L., Hauffe K.D., Lipphardl S. et al. Parsley protoplasts retain differential responsiveness to UV light and fungal elisitor. EMBO J., 1987, 6, N9, p2551-2556.

52. Dudits D., Nemet G., Haudi Z. Study of callus growth and organ formation in wheat (Tr. aestivum) tissue cultures. Can. J. Bot., 1975, 53, 957-963.

53. Ensminger P.A., Schafer E. Blue and ultraviolet-B light photoreceptors in parsley cells. Photochem. Photobiol., 1992, 55, 437-447.

54. Feinbaum R.L., Ausubel F.M. Transcriptional regulation of the Arabidopsis chalcone synthase gene. Mol. Cell Biol., 1988, 8(4), 1985-1992.

55. Flint S.D., Caldwell M.M. Influence of floral optical properties on the ultraviolet radiation enviroment of pollen. Am. J. Bot., 1983, 70, 1416-1419.

56. Frederick J.E., Lubin D. The budget of biologically active ultraviolet radiation in the earthatmosphere system. Ecology, 1988, 44, 342-347.

57. Frederick J.E., Snell H.E., Haywood C. Solar ultraviolet radiation at the earths sufase. Photochem. Photobiol., 1989, 50(8), 443-450.

58. Gold W.G., Caldwell M.M. The effects of ultraviolet-B radiation in terrestrial ecosystems. Phys. Plant., 1983, 58, 435.

59. Gosch-Wackerle G., Avivi L., Galun E. Induction callus and differentiation of callus from immature rachises, seeds and embryos of Triticum. Z. Pflanzenphysiol., 1979, 91, N3, 267-278.

60. Green A.E.S., Cross K.K., Smith L. A. Improved analytical characterization of ultravioleet skylight. Photochem. Photobiol., 1980, 31(1), 59-65.

61. Hashimoto Т., Shichijo C., Yatsuhashi H. Ultraviolet action spectra for the induction and inhibition of anthocyanin synthesis in broom sorhum seedlings. Photochem. Photobiol. В., 1991, 11(4), 353-363.

62. Janes L.V., Кок B. Photoinhibition of chloroplast reaction. Kinetic and action spectra. Plant Physiol., 1966, 41, 1037-1042.

63. Kornberg W., Baker A. DNA replication. Mol. Biol., 1992, 45, 771-791.

64. Krishnamutri M., Tlaskal J. Fuji desease resistant Saccharum officinarum var. Pindar subclones from tissue cultures. Proc Int Soc Sugarance Technol., 1974, 15, p. 130-137.

65. Larkin P.J., Skowcroft W.R. Somaclonal variation a novel sourse of variability from cell cultures for plant improvement. Thepr. Appl. Genet., 1981, 60, N4, 197-214 .

66. Lercari В., Sodi F. , Sbrana C. Comparison of photomorphogenic responses to UV-light in red and white cabbage (Brassika oleracea L.). Plant Phys., 1989a, 90(1), 345-350.

67. Li J., Lee T.M.O., Raba R., Amundson R.G., Last R.L. Arobidopsis flavonoid mutant are hypersensitve to UV-B irradiation. Plant Cell, 1993, 5, 171-179.

68. Lindoo S.S., Seeley S.D., Caldwell M.M. Effects of ultraviolet-B radiation stress on the Abscisic Asid status of Rumex patientia leaves. Phys. Plant., 1979, 45(1), 67-75.

69. Liu M.C., Yeh H.S. Regeneration of NaCl-tolerant sugarcance plants from callus re-initiation from precelected differentiated shoots. Proc. Nat. Sci. Counc. Rep. (China, Taiwan), 1984, 8, 11-18.

70. Lu Wen-Liang. Study of the direct regeneration of spiklets and pistil like structures from callus derived from glumella and lemma explants of wheat. Acta biological experimentalis sinica, 1992, 25, N1, 10-13.

71. Lu C., Vasil I.K., Ozias-Akins P. Somatic embriogenesis in Zea mais. Theor. Appl. Genet., 1982, 63, 109-112.

72. Maddock S.E., Lancaster V.A., Risiott R., Franklin J. Plant regeneration from cultured immature embryos and inflorescenses of 25 cultivars of wheat (Tr. aestivum). J. Exp. Bot., 1983, 34, 915-926.

73. McLennan A.G. DNA damage repair and mutagenesis. DNA replication in plants. Mol. Biol., 1987, 44, 543.

74. Meury J.,Robin A. A high-affinity site for glutathione in the cytoplasm of Escherichia coli andits possible role in potassium retention. J. of Biochemis., 1985, 148: 113-118.

75. Mirecki R.M., Teramura A. Effects of ultraviolet В irradiance on soybean. The dependence of plant sensivity on the photosynthetic photon flux density during and after leaf expansion. Plant Phys., 1984, 74(3), 475-483.

76. Morisson R.S., Whitaker K.J., Evans D. Somaclonal variation: Its genetic basis and prospects for crop emproevementio Proc. of 27th Annu. Meet. Phytochem. Soc. Nat. Amer. Tampa, 1988, 1-18.

77. Murashige Т., Scoog F. A revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures. Physiol plantarum, 1962, v. 15, 473-497.

78. Murphy T.M. Membranes as targets of ultraviolet radiation. Phys. Plant., 1983, 58, 381-388.

79. Murphy T.M. Effects of broad-band ultraviolet radiation on hydrogen peroxide formation by cultured rose cells. Phys. Plant., 1990, 80(1), 63.

80. Murphy Т., Hamilton C. A strain of Rosa Damascena Cultured Cell Resistant to Ultraviolet Light. Plant Physiol, 1979, 64, 936-941.

81. Nabors M.W., Heyser J.N., Dykes T.A., De Mott K.J. Long duration, high frequency plant regenerant from cereal tissue culture. Planta, 1983, 157, N5, 385-391.

82. Nedunchezhian N., Kulandaivelu G. Evidence for the ultraviolet-B (280-320nm) radiation induced structural reorganization and damage of photosystem II polypeptides in isolated chloroplast. Phys. Plant., 1991, 81(4), 558-562.

83. О'Нага J.F., Street Н.Е. Wheat callus culture. The initiation growth and organogenesis of callus, derived from various explant sourses. Ann. Bot. (Gr. Brit.), 1987, 42, N181, 1029.

84. Ozias-Akins P., Vasil I.K. Plan regeneration from cultured immature embryos and fluprescences of Tr. aestivum L. (wheat): Evidence for somaticembriogenesis. Protoplasma, 1982, 110, N2, 95-105.

85. Pang Q., Hays J.B. UV-B-inducible and temperature-sensitive photoreactivation of cyclobutane pyrimidine dimers in Arabidopsis thaliana. Plant. Phys., 1991, 95, 536-543.

86. Pang Q., Hays J.B. UV-B-inducible and temperature-sensitive photoreactivation of cyclobutane pyrimidine dimers in Arabidopsis thaliana. Plant. Phys., 1991, 95, 536-543.

87. Peak J.J., Peak J.G. Use of action for identifying molecular targets and mechanisms of action of ultraviolet light. Phys. Plant., 1983, 58, 360-366.

88. Quaite F.E., Sutherland B.M., Sutherland J.C. Action spectrum for DNA-damage in alfalfa lowers predicted impact of ozone depletion. Natire, 1992, 358, 576-578.

89. Redway F.A., Vasil V., Lu D., Vasil I.K. Identification of callus tipe for long-term maintenance and regeneration from commercial cultivars of wheat (Tr. aestivum L.). Theor. Appl. Genet., 1990, 79, 609617 .

90. Robberecht R., Caldwell M.M. Leaf epidermal transmittance of ultraviolet radiation and its implication for plant sensitivity to ultraviolet-radiation induced injiry. Oecologia, 1978, 32, 277-287.

91. Sears R.G., Decard J., Tissue culture variability in wheat: Callus induction and plant regeneration. Crop Sci., 1983, 22, 546-550.

92. Scoog F., Miller C.O. Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissue cultured in vitro. Symp. Soc. Biol, 1957, 11, 118-131.

93. Scowcroft W.R., Ryan S.A. Tissue culture and plant breeding, Plant Cell Culture Technology, Oxford: Blackwell Sci Publ., 1986, p.67-95.

94. Shepard J.F., Bidney D., Shaning E. Potato protoplasts in crop emproevement. Science, 1980, 208, N4439, p.17-24.

95. Shimada Т., Yamada Y. Wheat plant regeneration from embrio cell cultures. Jap. J. Gen., 1979, 54, N5, 379385.

96. Schulze-Lefrt P., Becker-Andre M., Schulz W., Hahllbrock K., Dangl J.L. Functional architecture of light-responsive chalcon-synthase promoter from parsley. Plant Cell, 1989, 1, 707-714.

97. Sillivan J.H., Teramura A.H., Ziska L.H. Variation in UV-B sensitivity in plants from 3000 m elevational gradient in Hawaii. Am. J. Bot., 1992, 79, 737-743.

98. Sisson W.B., Caldwell M.M. Atmospheric ozone depletion reduction of photosysthetic and growth of a sensitive higher plant exposed to enhanced UV-B radiation. Exp. Bot., 1977, 28(104), 691-697.

99. Skirvin R.M., Janick J. "Velvet Rose" pelargonium a scented geranium. Hort. Sci, 1976, 11, p.61-62.

100. Teramura A.H. Effects of ultraviolet-B radiation on growth and yield of crop plants. Phys. Plant., 1983, 58, 415-427.

101. Teramura A.H., Silivan J.H. Soybean growth responses to enhanced levels of ultraviolet-B radiation under greenhouse condition. Am. J. Bot., 1987, 26, 8995.

102. Teramura A.H., Murali N.C. Intraspecific differences in growth and yield of soybean exposed to ultraviolet radiation under greenhouse and field conditions. Environ. Exp. Bot., 1986, 26, 89-95.

103. Tevini M. The effects of UV radiation on plants. J. Photochem. Photobiol., 1988, 2, 401-403.

104. Tevini M., Braun J., Fieser G. The protective function of the epidermal layer of rye seedlings against ultraviolet-B radiation. Photochem. Photobiol., 1991, 53(3), 329-333.

105. Tevini M., Teramura A.H. UV-B effects on terrestrial plans. Photochem. Photobiol., 1989, 50, 479-487.

106. Tevini M., Iwanzik N., Thoma U. Some effects of enhanced UV-B irradiation on the growth and composition of plans. Planta, 1981, 153, 388-394.

107. Tevini M., Steinmuller D. Influence of light, UV-B radiation, and herbicides on wax biosynthesi of cucumber seedlings. Plant Physiol., 1987, 131, 111-121.

108. Toyoda H., Chatani K., Matsuda Y, Hirai H. Efficient isolation of tobacco mosaic virus-resistant somaclones regenerated from infected tobacco callus tissue. Abstr. 1st Int Congr of Plant Mol Biol. 1985, p.61.

109. Tyrell R.M., Pidoux M. Endogenous glutathione protects human skin fibroblasts against the cytotoxisaction of UV-B, UV-A and near-visible radiation. Photochem. Photobiol., 1986, 44, 561-564.

110. Vasil I.K. Somatic embriogenesis and plant regeneration in cereals and grases. Plant Tissue Culture, 1982m Prog. 5-th Int. Congr. Plant Tissue and Cell Culture, Tokyo and Lake Yamanaka, Yuly 11-16, 1982, 101-104.

111. Vasil I.K. Developing cell and tissue culture systems for improevement of cereal and grass crops. Plant Physiol., 1987, 128, 193-218.

112. Vogt Т., Gulr P.G., Reznik H. UV-radiation dependent flavonoid accumulation of Citrus laurifolius. Z. Naturforsch, 1991, c42(l-2), 37-42.

113. Vu C.V., Allen L.H., Garrard L. Effects of supplemental UV-B radiation of growth and leaf photosynthetic reactions of soybean (Glycine max). Physiol. Plant, 1981, 52, 353.1. A'ri

114. Т'ЬбТДДРСТВЕГЛ^ ->.<•,Т//У1Щl-'OJ,