Регенерационная активность разных генотипов пшеницы и эгилопса в культуре in vitro тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.12, кандидат биологических наук Файзиева, Садаф Абдулхаковна

• Файзиева, Садаф Абдулхаковна
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Файзиева, Садаф Абдулхаковна

ВВЕДЕНИЕ.4.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.8.

1.1. Культура изолированных тканей растений.8.

1.2. Каллусогенез и морфогенез в культуре in vitro.15.

1.3. Роль фитогормонов в регуляции роста и развития растений .;.22.

1.4. Универсальность путей морфогенеза при формировании нового организма в естественных условиях и в культуре in vitro.28.

1.5. Методы сравнительного анализа генома пшениц и ее сородичей .33.

1.5.1. Морфологические методы.33.

1.5.2. Цитогенетический подход.34.

1.5.3. Молекулярно-цитогенетические методы.34.

1.5.4. Изоферменты.35.

1.5.5.Использование цитоплазматического генома в сравнительном анализе пшениц.36.

1.5.6. Определение нуклеотидной последовательности ДНК.36.

1.5.7. Молекулярные маркеры.37.

1.5.7.1. RFLP-маркеры.37.

1.5.7.2. RAPD-маркеры.38.

1.5.7.3. AFLP-маркеры.40.

1.5.7.4. SNP-маркеры.41.

1.5.7.5. Использование повторяющихся последовательностей ДНК в сравнительном анализе генома злаков.42.

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

УСЛОВИЯ, ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.,.45.

2.1. Краткая характеристика объектов исследования.45.

2.2. Основные морфологические характеристики видов рода Aegilops L. .46.

2.3. Характеристика сортов, с эффективной регенерационной способностью в культуре иг vitro.50.

2.4. Методы исследования.52.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Культивирование зародышей пшеницы и эгилопса и их регенерация in vitro.58.

3.2. Пролиферация и морфогенез зародышей разных генотипов злаков in vitro.62.

3.3. Характеристика маркировки каллусов по морфогенетическому потенциалу.69.

3.4. Транскрипционная активность в каллусах пшеницы и эгиЛопса in vitro.74.

3.5. Изучение полиморфизма ДНК проростков и каллусных культур пшеницы и эгилопса.80.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Регенерационная активность разных генотипов пшеницы и эгилопса в культуре in vitro»

АКТУАЛЬНОСТЬ РАБОТЫ

Генофонд дикорастущих зерновых злаков Таджикистана, местных сортов зерновых культур, прежде всего пшеницы, богат и многообразен. Генофонд пшеницы ежегодно пополняется интродуцированными сортами этой культуры. Поэтому использование злаковых растений в молекулярно-биологических исследованиях имеет как фундаментальное, так и прикладное значение для создания высокоадаптивных сортов пшеницы.

Метод культивирования изолированных клеток и тканей на искусственных питательных средах в стерильных условиях (in vitro) получил название культуры изолированных тканей и приобрел особое значение в связи с возможностями использования его в биотехнологии (Кулаева, 2000). Биотехнология известна с давних времен, но как самостоятельная прикладная наука сформировалась в середине 70-х годов XX столетия, когда человечество осознало необходимость первоочередного решения на принципиально новых основах главнейших проблем современности -продовольственной, энергетической, ресурсной, загрязнения окружающей среды (Просад, 2003; Каримов, 2005; Алиев и др., 2005; Алиева, Умаров, 2005).

Развитие традиционной селекции злаковых растений способствовало значительному увеличению урожайности многих злаковых и бобовых культур и было ознаменовано эрой Зеленой революции, по сути, -предшественницы биотехнологической революции, основанной на молекулярной биологии и молекулярной генетике (Кулаева, 2000; Шумный, 2005). Первым важнейшим этапом развития биотехнологии растений явилась реализация методов культивирования клеток, тканей, органов и установление принципа тотипотентности, т.е. возможности получения полноценного организма из любой клетки или органа растения в системе in vitro. В специальных искусственных условиях любая дифференцированная клетка может повторить весь путь онтогенеза. Возможности применения метода 4 культуры изолированных клеток и тканей в биотехнологии с практической точки зрения очень велики (Глеба, 1998). Этот принцип можно использовать в случае, когда исчерпана внутривидовая изменчивость и не удается усилить до желаемого уровня селекционируемые признаки, такие как устойчивость к биотическим факторам (заболевания, вредители), абиотическим факторам среды (засоленность, температура), устойчивость к полеганию, урожайность и т.д., для получения гибридных растений от скрещиваний, обычно не дающих жизнеспособного потомства, а также для ускорения селекционного процесса (культура изолированных зародышей) и оздоровления посадочного материала.

На молекулярном уровне морфогенез сопряжен с активностью пролиферации, роста и дифференциации клеток в очагах органогенеза. Направленность морфогенеза, характерная для интактного растения, может нарушаться в условиях культивирования in vitro и во многом зависит от генотипа донорного растения и взятого от него экспланта. Соотношение активности пролиферации каллусных клеток и частоты морфогенеза мало изучено. В частности, для каллусных клеток пшеницы такие данные редки и противоречивы, что и побудило нас заняться данными исследованиями.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ

Цель работы состояла в изучении процессов пролиферации и морфогенеза в каллусных культурах разных генотипов пшеницы и дикорастущих видов рода Эгилопс in vitro в зависимости от гормонального статуса культуральной среды, а также изучении поли(А)-содержащих РНК в процессе каллусогенеза и органогенеза.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

• подбор культуральной среды для незрелых зародышей пшеницы и зрелых зародышей эгилопса и выявление оптимальных соотношений ауксинов и цитокининов для каллусогенеза, эмбриогенеза и регенерации в культуре in vitro;

• выявление генотипов зерновых злаков, обладающих высоким эмбриогенным потенциалом и получение из них растений-регенерантов;

• анализ соотношения пролиферации и морфогенеза каллусных культур пшеницы и эгилопса;

• изучение накопления поли(А)-содержащих РНК на стадии каллусогенеза и органогенеза злаковых растений при различных сочетаниях фитогормонов; сравнительный ПЦР-анализ пшеницы и эгилопса, выращенных в обычных условиях и их каллусных культур, для выявления внутривидового генетического полиморфизма в связи с сомаклональной изменчивостью, возникающей в процессе культивирования клеток и тканей растений- в условиях in vitro.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Показано, что морфогенетическая способность в культуре in vitro и реализация потенции клетки в ходе регенерации определяются не только генетической особенностью объекта, но и составом питательной среды, в частности, соотношением ауксинов и цитокининов.

Подобран оптимальный состав питательных сред, способствующих интенсивному формированию морфогенных структур каллусных культур у различных генотипов злаковых растений (пшеницы и эгилопса). Установлено различие в действии ауксинов и цитокининов на экспрессию разных фракций РНК в процессе каллусогенеза и органогенеза, что может свидетельствовать о независимом влиянии этих двух типов гормонов на экспрессию поли(А)-содержащих РНК (мРНК) у представителей разных групп злаковых растений. С помощью ДНК-маркеров показана эффективность (SSR-праймер 513) б выявления генетического различия между исходными растениями и их каллусными культурами.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ

Разработаны составы питательных сред, оптимальные для каллусогенеза, эмбриогенеза и длительного поддержания каллусов в среде in vitro, а также для регенерации растений (пшеницы и эгилопса) из каллусов. Изменение синтеза поли(А)-содержащих фракций РНК в зависимости от содержания в среде цитокининов и ауксинов может служить маркером эмбриогенеза в культуре in vitro. Показано, что ДНК-маркеры (SSR) могут служить надежным способом выявления генетического полиморфизма пшеницы и эгилопса in vitro и in vivo и отбора перспективных генотипов в селекции.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Материалы диссертации были доложены (или представлены) на: республиканском симпозиуме "Экономика и наука Горно-Бадахшанской автономной области: прошлое, настоящее, будущее" (Хорог, 2005); "научно-теоретической конференции профессорско-преподавательского состава и студентов, посвященной 60-летию Победы в Великой отечественной войне "Во имя мира и счастья на земле" (Душанбе, 2005); республиканской конференции "Адаптационные аспекты функционирования живых систем" (Душанбе, 2007); симпозиуме "Клеточная биология и биотехнология" (Сыктывкар, 2007); конференции "Чавонон ва илми муосир" (Душанбе, 2007); научной конференции, посвященной 120-летию со дня рождения академика Н.И. Вавилова (Душанбе, 2007); научной конференции, посвященной памяти академика Академии наук Республики Таджикистан Ю.С. Насырова "Достижения современной физиологии растений: теоретические и прикладные аспекты" (Душанбе, 2008).

Заключение диссертации по теме «Физиология и биохимия растений», Файзиева, Садаф Абдулхаковна

выводы

1. Подобран состав питательных сред, оптимальных для каллусогенеза, эмбриогенеза и длительного поддержания каллусных культур зародышей

Г' пшеницы и эгилопса, а также для регенерации растений.

2. Незрелые и зрелые зародыши дикорастущих (эгилопс) и культурных растений (пшеница) при их культивировании в определенных условиях формируют каллус и различные органогенные структуры в зависимости от состояния детерминированности каллусных клеток. Показано, что для интенсивной инициации каллусной ткани и регенерации из нее растений следует учитывать как генотипические, так и эпигенетические особенности злаковых растений. Выход морфогенных каллусов можно стимулировать, применяя гормоны в различных сочетаниях.

3. Наиболее эффективными по регенерационной способности оказались экспланты незрелых зародышей сортов пшеницы Стекловидная-24, Алекс, Сете-Церрос-66, Истравшан, Джагер, топкроссный гибрид ЭСИ-24 (Nal60/HEINEVII/Buc/3/F59.71/GHK); зрелых зародышей видов эгилопса: Ае. taushii - образцы под каталожными номерами 3-1; 8-1; 8-2; 10-1; 10-2; 11-1; 11-2; 17-1; 35-1; Ае. cylindrica - 61-1; 69; 71; 72; Ае. triuncialis - 52; 53; 54. Причем в культуре in vitro проявилась большая регенерационная способность у незрелых зародышей пшеницы, в отличие от зрелых зародышей эгилопса.

4. Полученные нами экспериментальные данные свидетельствуют в пользу существования различной зависимости между гормональным статусом, ростом каллусов и морфогенетической спецификой сортов пшеницы и эгилопсов в культуре in vitro. При каллусогенезе сорта пшеницы проявляют цитокининовую зависимость, а дикорастущие злаки (эгилопс) -ауксиновую зависимость, т.е. первые можно классифицировать как цитокининтрофные, а вторые как ауксинотрофные растения.

5. Каллусообразующая и регенерационная способность незрелых и зрелых зародышей злаковых растений in vitro на молекулярном уровне выражается в изменении синтеза РНК, особенно поли(А)-содержащей фракц^ти РНК (мРНК), вызываемого дифференцированной активностью генов.

6. Переход от каллусообразования к морфогенезу сопряжен с усилением синтеза поли(А)-фракций РНК. Накопление поли(А)-содержащей РНК существенно выше у пшеницы и на стадии каллусообразования и на стадии морфогенеза, чем у эгилопса на этих стадиях соответственно. Показано цитокинин-зависимое накопление поли(А)-содержащей РНК у пшеницы, а у эгилопса ауксин-зависимое.

7. С помощью ДНК-маркеров (SSR-праймер 513) выявлены определенные генетические различия между исходными растениями и культурой in vitro (каллусами).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Ресурс эффективных генов, обуславливающих устойчивость к болезням, в генофонде мягкой пшеницы крайне ограничен. Один из возможных путей его расширения - интрогрессия генов от дикорастущих сородичей. Среди них важную роль играют виды рода Aegilops L. Использование нетрадиционных технологий в повышении продуктивности и устойчивости к абиотическим стрессам зерновых культур является эффективным благодаря фундаментальным знаниям в области молекулярной биологии и биотехнологии. Вместе с тем, попытка их использования у зерновых культур пока еще до конца не решена в связи с трудностями методического характера. Достижения последних лет дают надежду на преодолимость имеющихся методических затруднений и возможность использования методов клеточной биотехнологии для создания новых типов растений, устойчивых к экстремальным природным воздействиям (засоление, засуха, высокая температура).

В нашей работе большое внимание уделено регенерации растений в культуре незрелых зародышей пшеницы и зрелых зародышей эгилопса. К важному позитивному результату работы можно отнести получение эмбриогенной культуры каллусных клеток и их регенерацию. На наш взгляд, представляет интерес разработка гормональной системы для пшеницы и эгилопса, эффективно влияющей на каллусогенез, эмбриогенез и регенерацию растений in vitro. Полученные результаты свидетельствуют о разном гормональном статусе питательной среды при культивировании каллусов пшеницы и эгилопса, что может являться основой для разработки перспективных методов биотехнологии злаковых растений.

Наиболее сложными и мало изученными вопросами являются процессы морфогенеза клеток in vitro у зерновых злаков. Это направление является решающим для разработки методов регенерации злаковых культур и реконструкции растений in vitro с целью получения устойчивых к стрессовым воздействиям растений, обладающих высокой продуктивностью.

Кроме того, использование методов биотехнологии позволяет Привести к достижениям в понимании вопросов каллусогенеза, эмбриогенеза и регенерации растений в условиях in vitro.

Нами разработаны селективные среды для каллусогенеза, эмбриогенеза и регенерации злаковых растений in vitro. Экспланты зародышей сначала выращивались в среде для каллусогенеза, затем переносились в среду для морфогенеза, а уже потом в селективную регенерационную среду. Регенерированные растения переносились в торфо-почвенную среду на 3-4 недели при температуре +3.+40С и затем высаживались в почву. Процессы каллусогенеза и формирования эмбриогенных структур пшеницы и эгилопса различались по потребности в гормонах в системе in vitro. Было установлено, что каллусогенез и образование адвентивных почек эгилопса больше зависят от наличия в культуральной среде ауксина, а пшеницы - цитокинина.

Анализ поли(А)-содержащих фракций РНК показал, что ее содержание в клетках каллуса и эмбриоидных клетках эгилопса также увеличивается при наличии в культуральной среде выращивания ауксина. При каллусогенезе и органогенезе пшеницы в среде, содержащей цитокинин, наблюдается наибольшее количество поли(А)-содержащих РНК. Таким образом, полученные результаты указывают на различия транскрипционного уровня регуляции синтеза РНК в системе in vitro, связанного, возможно, со специфичностью зависимости синтеза белковых факторов транскрипции от ауксина и цитокинина, характерных для представителей разных групп злаковых. Существенным шагом в понимании механизмов органогенеза могут служить данные о различиях в копийности некоторых генов, выявляемых в ходе ПЦР-анализа ДНК пшеницы и эгилопса. Высокий уровень каллусогенеза и органогенеза у некоторых видов злаковых растений и сортов пшеницы, видимо, зависит от вариабельности белкового индекса. г

Полученные результаты, возможно, указывают на различие в активации генов при каллусогенезе, органообразовании и соматическом эмбриогенезе, которые зависят от гормонального статуса среды. В культуре in vitro может также проявляться активность специфичных генов, экспрессия которых связана с активацией транскрипции и посттранскрипции in vitro под влиянием экзогенных гормонов. Возможно, в культуре in vitro также имеет место явление снятия организменного уровня контроля генной экспрессии, которое играет важную роль в растениях. Гены, контролирующие морфогенез in vitro, могут служить инструментом для повышения эффективности методов биотехнологии злаковых растений. Возможно, по этим причинам проявлялось различие на посттранскрипционном уровне у пшеницы и эгилопса в культуре in vitro, что может служить основой для создания новых форм злаковых растений с признаками высокой устойчивости к неблагоприятным факторам. Это требует дальнейшего специального исследования.

Для Таджикистана, с его резко контрастными природно-экологическими зонами, биотехнологические подходы будут играть более важную роль в повышении урожайности путем создания пластичных сортов злаковых культур (особенно пшеницы) в условиях возрастающего действия абиогенных стрессов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Файзиева, Садаф Абдулхаковна, 2009 год

1. Алиев К.А., Каримов Б.К., Каримов Б.Б. Возделывание оздоровленного картофеля в Таджикистане // Душанбе. 1997. 36 с.

2. Алиева С.К, Умаров Х.У. Роль биотехнологии в решении проблем бедности // Мат. Республ. научн.-практ. конференции "Продовольственная безопасность Республики Таджикистан". Душанбе. 2005. С. 206-209.

3. Анапилев Б.Б. Влияние генотипа на частоту регенерации растений в культуре микроспор Triticium aestivum L. II Генетика. 2000. Т. 36. № 4. С. 505-509.

4. Анварова М.А. Морфо-физиологические особенности регенерации генотипов картофеля in vitro // Автореферат дис. канд. биол. наук. Душанбе. 1998. 24 с.

5. Ахметов P.P., Иванцов А.И. Применение достижений биотехнологии в народном хозяйстве // Уфа: Изд-во БашГУ.1987. 156 с.

6. Ашуров С.Х. Особенности каллусогенеза у хлопчатника (Gosspium hirsutum L.) // Автореферат дис. канд. биол. наук. Душанбе. 1995". 22 с.

7. Багрова A.M., Ежова Т.А., Хартина Г.А., Гостимский С.А. Получение длительно культивируемых морфогенных каллусов и анализ сомаклональной изменчивости у регенерантов зерновых и овощных сортов гороха//Вест. МГУ. Сер. 16. Биология. 1991. № 1. С. 28-33.

8. И.Белянская C.JI., Шамина З.Б., Кучеренко JI.A. II Физиология растений. 1994. Т. 41. №4. С. 573-577.

9. Близнюк Л.Г., Кондрацкая И.П. Биотехнологические методы селекции клевера лугового // VIII International Conference "The Biology of Plant Cells In vitro and Biotechnology". Saratov, September, 9-13. 2003. P. 49.

10. Биотехнология растений: Культура клеток // Пер. с англ. М.: Агропромиздат. 1989. 280 с.в.Бишимбаева Н.К Морфологическая гетерегенность и регенерационная способность каллусной ткани ячменя // Автореферат дис. канд. биол. наук. Душанбе. 1989. 22 с.

11. VIII International Conference "The Biology of Plant Cells In vitro and Biotechnology". Saratov, September, 9-13. 2003. P. 51.

12. Ю.Брежнев Д. Д. Национальный генофонд растений СССР для селекции // В кн.: "Общая генетика". М., 1978. 5 с.21 .Брокш В.П., Моналова М.А., Жилин A.M. Цитогенетическая нестабильность картофеля//Доклады ВАСХНИЛ. 1989. № 12. С. 10-13.

13. Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений // М.: Наука. 1964. 272 с.

14. Бутенко Р.Г. Технология in vitro в сельском хозяйстве // С.-х. биология. 1983. №5. С.3-7.

15. Бутенко Р.Г. Новые направления в физиологии растений // М.: Наука. 1985.411с.

16. Бутенко Р.Г. Клеточные технологии в селекционном процессе // Л., 1986. 216 с.

17. Бутенко Р.Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнологии на их основе // М., ФБК Пресс. 1999. 159 с.

18. Винклер Г.Н., Бутенко Р.Г. Применение черенкования при выращивании безвирусных растений картофеля методом культуры меристемы // Физиология растений. 1970. Т. 17. № 4. С. 851-853.

19. ГлебаЮ.Ю., Сытник К.Т. Клеточная инженерия растений // Киев: Наукова думка. 1983.187 с.

20. Гумерова Е.А., Галеева Т.И., Гуенкова С.А., Румянцева Н.И. Соматический эмбриогенез и гоммогенез в культуре тканей гипокотилей Fagopurum esculentun // Физиология растений. 2003. Т. 50. № 5. С. 716-721.

21. ЪЪ.Ежова T.A., Багрова A.M., Гостимский C.A. Изучение наследуемости сомаклональных изменений у регенерантов посевного гороха // Генетика. 1989. Т. 25. № 5. С. 878-885.

22. Жексембекова М.А. Соматический эмбриогенез в культуре тканей амаронта // Автореферат дис. канд. биол. наук. Алма-аты. 1996. 41 с.

23. Иванова И. Физиологические основы микроклонального размножения растений // Международный агропромышленный журнал. 1990. № 3. С. 3540.

24. Калашникова Е.А. Клеточная селекция растений на устойчивость к биотическим факторам // VIII International Conference. The Biology of Plant Cells In vitro and Biotechnology. 2003. P. 131.

25. АЪ.Козырева О.Г., Дунаева С.Е. //Генетика. 1994. Т. 30. № 10. С. 1432-1440.

26. Кокаева З.Г., Боброва В.К, Валъхео-Роман КМ. и др. RAPP-анализ сомаклональной и межсортовой изменчивости гороха // Докл. Акад. наук. Т. 355. № 1. 1997. С. 134-136.

27. Кузнег{ова О.И., Am О.И., Xapmuna Г.А., Гостимский С.А. RAPD-анализ сомаклонов гороха (Pisum sativum L.) I/ Биотехнология овощных, цветочных и малораспространенных культур: Сб. научн. трудов междунар. научн.-практ. конф. М., 2004. С. 161-169.

28. Кузнецова О.И., Аш О.И., Хартина Г.А., Гостимский С.А. Исследование растений-регенерантов гороха (Pisum sativum L.) с помощью молекулярных RAPD- и ISSR-маркеров // Генетика. 2005. Т. 41. № 1. С. 71-77.

29. Кулаева О.Н. Карликавые мутанты и их роль в "Зеленой революции" // Соровский образовательный журнал. 2000. № 8. С. 18-23.

30. Медведев С.С. Физиология растений. Учебник, СПЧ 2004. 366 с.

31. Мигушова Э. Ф. К вопросу о происхождении геномов пшеницы // Тр. по прикл. бот. ген. и сел. 1975. Т. 55. Вып. 3. С. 3-26.

32. Митрофанова М.И. Минимализация роста декоративных растений под воздействием химических факторов в культуре in vitro II VIII International Conference "The Biology of Plant Cells In vitro and Biotechnology". Saratov, September, 9-13, 2003. P. 203.

33. Моисеева H. А. Молекулярные и клеточные механизмы морфогенеза в культуре клеток растений // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М., Наука, 1991. С. 166-185.

34. Муминджанов X.A. Селекция и семеноводство картофеля на основе физиологических тестов и методов клеточной биотехнологии // Автореферат дис. докт. с-х. наук Душанбе. 2000. 51 с.

35. Плотников В.К. Успехи соврем, биол. 1992. Т. 112. С. 186-199.

36. Плотников В.К., Бакалдина Н.Б., Сметанин Д.В. Физиология растений // 2000. Т. 47. С. 203-209.

37. Пылънева П.Н. Использование биуретового метода определения зерна для определения селекционного материала // Биохимические методы исследования селекционного материала. Одесса. 1979. Вып. 15. С. 25-28.

38. Сидоров В.А., Сидорова Н.В. Сомаклональная изменчивость — источник генетического разнообразия у растений // Цитология и генетика. 1987. Т. 21. №3.

39. А.Сидоров В.А. Биотехнология растений. Клеточная селекция. Киев. Наукова думка. 1990. 280 с.

40. Скауфорт У.Р. Мобильность генома растений//М.: Агропромиздат. 1990. С. 228-260.

41. Ступницкий В.А., Глеба Д.М. Индукция in vitro морфогенеза у банана карликового // Тез. докл. Межд. конф. "Биология культ, клеток и биотехнология" Новосибирск 2 62. 1988. С. 325-326.

42. Уоринг Ф., Филипс Н. Рост растений и дифференцировки // М.: Мир. 1984. 512 с.

43. Фелалиев А. С. Физиологические основы микроклонального размножения ореха грецкого in vitro II Автореф. дисс. канд. биол. наук. Душанбе. 1990.

44. Филиппова В.Н. Морфогенез в культурах In vitro Cypripedium calceolus L. II VIII International Conference "The Biology of Plant Cells In vitro and Biotechnology". Saratov, September, 9-13. 2003. P. 101.

45. Флейвелл P. Амплификация, делеция и перегруппировка последовательностей: основные источники изменчивости в процессе дивергенции видов // Эволюция генома. М.: Мир, 1986. С. 291-311.

46. Френкелъ-Конрат X., Гейзен Г., Диз П. и др. Мобильность генома растений // М.: Агропромиздат, 1990. 272 с.

47. Фролова JI.B. Особенности популяций культивируемых клеток // Культура клеток растений М.: Наука. 1981. С. 5-15.

48. Хотамов. Физиологические особенности оздоровленных сортов картофеля в условиях Гиссарской долины Таджикистана // Автореф. дис. канд. биол. наук. Душанбе. 1997. С 9-11.

49. Хромова и др. Клеточная селекция картофеля // С.-х. биология. 1986. № 6. С. 3-11

50. ЯО.Хурматов Х.Х., Сергеев Д. А., Кавракова З.Б., Файзиева С.А., Наймов С.Н., Насырова Ф.Ю. Молекулярные маркеры ДНК в генетико-популяционныхисследованиях // Журн. Известия АН РТ., Отд. биол. и мед. наук. 2007. № 1 (158). С. 32-38.

51. Цвелев Н.Н. Злаки СССР. Л.: Наука, 1976. 788 с.

52. Цвелев Н.Н. Система злаков (Роасеае) и их эволюция // Комаровские чтения. XXXVII. Л.: Наука, 1987. 75 с.

53. Цвелев Н. Н. Проблемы теоретической морфологии и эволюции высших растений // М.; СПб., 2005. 407 с.

54. Шамина Э.Б. Андрогенез и получение гаплоидов в культуре пыльников и микроспор // Культура клеток растений. М.: Наука, 1981. С. 124-136.

55. Шульгина И.В. Соматический эмбриогенез в культуре клеток люцерны // Автореферат дис. канд. биол. наук. Алматы. 1999. 25 с.9в.Шумный В.К. Генная и хромосомная инженерия для растений // Цифровой вариант. 2005. № 28. С. 12-18.

56. Юсуфов А.Г. Культура изолированных листьев // М.: Мир. 1980. 218 с.

57. Abe Т., Futsuhara Y. Genotypic variabililaty for callus formation and plan regeneration in rise (Oruza sativa 1.) Theor and Appl. Genet. 1986. 72 № 1. P. 3-10.

58. Ahloowalia B.S. Plant regeneration from callus culture in wheat //, Crop Sci. 1982. V 22. P. 405.

59. Ammizato P.V. Embryogenesis I I Handbook of Plant Cell Culture. Ed. Evans. I Techigues for propagation and Breeding. 1983. P. 82-123.

60. Batygina T.B. Problems of Morphogenesis in situ, in vivo and in vitro II Proc. Int. Symp. "Plant Tissue and Cell Culture: Application to Crop Improvement". Prague: Czechoslovakia. Acad. Sci., 1984. P. 19-24.

61. Becker J., Vos P., Kupier M., Salamini F., Heun M. Combined mapping of AFLP and RFLP markers in barley // Mol. Gen. Genet. 1995. V. 249. P. 65-73.

62. Botstein D., White R.L., Scolnick M., Davis R.V. Constructions of genetic linkage map in man using restriction fragment lengh polymorphisms // Am. J. Hum. Genet. 1980. V. 32. P. 314-331.

63. Button J., Kochba J., Borman. Fine Structure of an Embryoid Development from Emferyogenic Ovular Callus of "Shamonti" orange (Citrus sinensis Osb.) // J. Exp. Bot. 1974. V. 25. P. 446-457.

64. Castilho A., Heslop-Harrison J.S. Physical mapping of 5S and 18S-25S rDNA and repetitive DNA sequences in Aegilops umbellulata II Genome. 1995. V. 38. P. 91-96.

65. Devos K.M., Gale M.D. The use of random amplified polymorphic DNA markers in wheat // Theor. Appl. Genet. 1992. V. 84. P. 567-572.

66. Dubcovsky J., Dvorak J. Ribosomal RNA multigene loci: nomads of the Triticeae genomes //Genetics. 1995. V. 140. P. 1367- 1377.

67. Duncan D.R., Widholm J.M. II Plant Breeding Reviews. V. 4. 1986. P. 314.

68. Dvorak J., Zhang H.-B., Kota R.S., Lassner M. Organization and evolution of the 5S ribosomal RNA gene family in wheat and relative species // Genome. 1989. V. 32. P. 1003-1016.

69. WO. Evans DA., Sherp W.R., Flick C.E. Growth and Behaviour of Cell Cultures. Embryogenesis and organogenesis // Plant Tissue Culture: Methods and Applications in Agriculture // Ed. Thorpe T.A. N.Y.: Acad. Press, 1981. P. 45-113.

70. Gana G.A., Sharma G.C., Zipf A. et al. II Plant Cell, Tissue and Organ Cult. 1995. 40. №3. P. 217-224.

71. Guadagnuolo R., Bianchi D.S., Felber F. Specific genetic markers for wheat, spelt, and four wild relatives: comparison of isozymes, RArDs, and wheat microsatellites // Genome. 2002.V. 44. P. 610.

72. Gupta P.K., Varshney R.K., Sharma P.S., Ramesh B. Molecular markers and their applications in wheat breading I I Plant Breed. 19996. V. 118. P. 369-390.

73. Gupta P.K., Roy J.K., Prasad M. Single nucleotide polymorphism: a new paradigm for molecular marker technology and DNA polymorphism with emphasis on their use in plants // Current Sci. 2001. V. 80. P. 524-535.

74. Haberie-Bois E. In vitro haploid formation from pollen a critical review // Theor. Appl. Genet. V. 71. 1985. P. 361-374.

75. Halperin W. Population Density Effects on Embryogenesis in Carrot Cell Cultures II Exp. Cell Res. 1967. V. 48. P. 170-173.

76. Halperin W. Embryos from Somatic Plant Cells // Control Mechanism in the Expression of Cellular Phenotypes / Ed. Padykula RA. N.Y.: Acad. Press, 1970. V.9.P. 169-191.

77. Heslop-Harrison J. Molecular cytogenetics, cytology and .genomic comparisons in the Triticeae II Hereditas. 1992. V. 116. P. 93-99. !

78. Jaaska V. Aspartate aminotransferase and alcohol dehydrogenase isozymes: intraspecific differentiations in Aegilops tauschii and the origin of the D genome polyploids in the wheat group // PI. Syst. Evol. 1981. V. 137. P. 259273.

79. Jones A.M., Petolino J.F. Effect of donor plant genotype and growth environment on anther culture of sofired winter wheat (Triticum aestivam L.) // Plant cell Tissue and Organ Culture. 1987. V. 8. P. 215-223.

80. Kellog E., Apples R. Intraspecific and interspecific variation in 5S RNA genes are decoupled in diploid wheat relatives // Genetics. 1995. V. 140. P. 325343.

81. Khlestkina E.K., Salina E.A. Genome-specific markers of tetraploid wheats and their putative diploid progenitor species // Plant Breading. 2001. V. 120. P. 227-232.

82. Koebner R.M.D., Krisch F., Thorpe C., Prins R. AFLP and source of STS markers in alien introgression // Proc. IX Intern. Wheat Genet. Symp., Sashatoon, Canada, 1998. V. 1. P. 118-122.

83. Kohlenbach H.W. Comparative somatic embryogenesis // Fronties of Plant tussue Cultures // Ed. Thore T.A. Calgary Univ.: Calgary Press. 1978. P. 59-66.

84. Komamine A., Kawahara R., Matsumoto M., Sunabori S.,Toya T.,

85. Fujiwara A., Tsukahara M., Smith J., Ito M., Fukuda M., Nomura K.,

86. Fujimura T. Mechanisms of Somatic Embryogenesis in Cell Cultures: Physiology, Biochemistry and Molecular Biology // In vitro Cell Dev. Biol. 1992. V. 28. P. 11-14.

87. Konar R.N., Nataraja K Experimental Studies m Ranunculus sceleratus L. Development of Embryos from the Stem Epidermis // Phyftsnorfbology. 1965. V. 15. P. 132-137.

88. Konar R.N., Nataraja K. Experimental Studies in Ranunculus sceleratus L. Plantlets from Freely Suspended Cells and Groups // Phytomorphology. 1985. V. 15. P. 206-211.

89. Lapitan N.L. V. Organization and evolution of higher plant nuclear genomes // Genome. 1992. V. 35. P. 171-181.

90. Larkin P.J., Scowcroft W.R. Somaclonal variation — a novel source of variability from cell cultures for plant improvement // Theor. Appl. Genet. 1981. V. 60. P. 197-241. , '

91. Leitch I., Heslop-Harrison J. Physical mapping of the 18S, 5.8S, 26S rRNA genes in barley by in situ hybridization // Genome. 1992. V.35. P. 1013-1018.

92. Ma Z.Q., Lapitan N.L. V. A comparison of amplified and restriction fragment length polymorphism in wheat // Cereal Res. Com. 1998. V. 26. P. 7-13.

93. Maheswaran G., Williams E.G. Origin and Develop ment of Somatic Embryos 'Formed Directly on Immature Embryos of Trifolium repens in vitro // Ann. Bot. 1985. V. 57. P. 109-117.

94. Mclntyre C. Variations at isozyme loci in Triticeae // PI. Syst. Evol. 1988 V. 160. P.123-142.

95. Miller T.E. Systematics and evolution / In: Wheat breeding (ed. Lupton) // London, New York. 1987. P. 1-30.

96. Morgante M., Olivieri A.M. PCR-amplified microsatellites as markers in plants genetics // The Plant Journal. 1993. V. 3(1). P. 175-182.

97. Murashige T., Skoog F.A. Rivised for rapid grown and bioassays with tobaco tissue cultures // Physiologiav planta -rum. V.15. 1952. P. 473-497.

98. Pedersen C., Rasmussen S., Linde-Laursen I. Genome and chromosome identification in cultivated barley and related species of Triticeae (Poaceae) by in situ hybridization with GAA-satellite sequences // Genome. 1996. V.39. P. 93-104.

99. Pierik R.L. In vitro culture of higher plant wageningen: Martinus nijhoff pubeshers. 1987. 344 p.

100. Plaschke J., Ganal M. W., Roder M.S. Detection of genetic diversity in closely related wheat using microsatellite marcers // Theor. Appl. Gen., 1995. 91. P. 1001-1007.

101. Roder M.S., Korzun V., Wendehake K. et al. A microsatellite map of wheat// Genetics J., 1996. 149. P. 2007-2023.

102. Saiki R.K., Scharf S., Faloona F., Mullis K.B., Horn G.T., Erlich H.A.,

103. Arncheim N. Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences andt■restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia // Sciense. 1985. V. 230. P. 1350-1354.

104. Sebastiani et al. Somaclonal variation for resistanse to Verticillilium dahlia in Potato (S.tuberasum L.) plants regenerated from callus // Euahytica. 1994.

105. Sharp WJR, Sondahl M.R., Cadlas LS., Maratta SB. The Physiology of in vitro Asexual Embryogenesis I I Hort. Rev. 1980. V. 2. P. 268-310.

106. Sharp W.R., Evans D.A., Sondahl M.R. Application of Somatic Embryogenesis to Crop Environment // Plant Tissue culture / Ed. Fujuwara A. Tokyo: Jap. Assoc. Plant Fissue Culture, 1982.

107. Skoog F., Miller C.O. Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro I I Simp. Soc. Exptl. Biol. 1957. № 11. P. 118 — 131.

108. Tsunewaki K. Plasmon analysis as the counterpart of genome analysis / In: Methods of genome analysis in plants (ed. Jauhar P.P.) // CRC Press. 1996. P. 271-299.

109. Tyrka M. A. simplified AFLP method for fingerprinting of common wheat (Triticum aestivum L.) cultivars // J. Appl. Genet. 2002. V. 43 (2). P. 131-43.

110. Vasil L. Cell culture and somatic cell genetics of plant. Vol.8. Academic Press. San Diego. 1991. P. 321-350.

111. Vogt P. Potential genetic function of tandem repeated DNA sequence block in the human genome are based on a highly concerved "chromotin folding code" // Hum. Genet. 1990. V. 84. P. 301-336.

112. Vos P., Hogers R, Rejans M, Van de Lee T., Homes M., Friters A., Pot J., Peleman J., Kupier M., Zabeau M. AFLP: a new technique for DNA fingerprinting //Nucl. Acids Res. 1995. V. 23. P. 4407-4414.

113. Wang Z. Y. and Tanksley S. D. Restriction length polymorphism in Oryza sativa L. // Genome. 1989. V. 32. P. 1113-1118.

114. Welsh J., McClelland M. Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers //Nucl. Acids Res. 1990. V. 18. P. 7213-7218.

115. West J., Mclntyre C., Appels R. Evolution and systematic relationships in the Triticeae (Poaceae) //PI. Syst. Evol.1988. V. 160. P. 1-28.

116. Williams J.G.K., Kubelik A.R., Livak K.J., Rafalski J.A., Tingey S.V. DNA polymorphism amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers // Nucl. Acids Res. 1990. V. 18. P. 6531-6535.

117. Woo S.H., Naiz A., Adachi T., Campbell C.G. Plant generation from Cotyleolon tussues of Common Back wheat // In vitro cell. Dev. Biol. 2000. V. 36. P. 358-361.

118. Yang Yen, Baenziger P.S., Morris R. Genomic constitution of bread wheat: current status / In: Metods of genome analysis in plants (ed. Jauhar P.P.) // CRC Press. 1996. P. 359- 373.

119. Zimmerman J.L. Somatic Embriogenesis: A Model for Early development in Yigher Plants // Plant Cell. 1993. V. 5. P. 1411-1423.

120. Zok S. Multiplication vegetative in vitro por culture opex chez les cafeires coffea arabica L. II12 Collog. Sei. Int cafe Montreux, 29 juin-3 juili., 1987. Paris. 1988. P. 791-800.