Характеризация комплекса BBS белков и его роли в формировании и функциональной активности ресничек и микротрубочек клеток человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Локтев, Александр Валерьевич

• Локтев, Александр Валерьевич
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Локтев, Александр Валерьевич

Содержание.

Список сокращений.

Введение.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Характеризация комплекса BBS белков и его роли в формировании и функциональной активности ресничек и микротрубочек клеток человека»

Цель и задачи исследования.8

Научная новизна и практическая ценность.8

Положения, выносимые на защиту:.10

Апробация работы.10

Объем и структура диссертации:.10

Благодарности:.11

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Локтев, Александр Валерьевич

Выводы

1. Открыт стабильный белковый комплекс, состоящий из 7 высоко консервативных BBS белков (BBS1, BBS2, BBS4, BBS5, BBS7, BBS8 и BBS9), получивший название ББсома.

2. Впервые установлено, что белки BBS1, BBS5 и BBIPIO, формирующие ББсому, необходимы для построения первичных ресничек в клетках.

3. Получены доказательства связывания ББсомы с белком Rabin8, активатором ГТФазы Rab8, а также показано участие белков Rabin8 и Rab8 в образовании мембраны первичных ресничек.

4. Предложена единая модель функциональной активности ББсомы, которая заключается в регуляции построения мембраны реснички посредством активации белка Rab8, что обеспечивает направление мембранного транспорта к основанию реснички.

5. Обнаружен новый консервативный белок BBIPIO и показано, что BBIPIO является новой стехиометрической субъединицей ББсомы.

6. Установлено, что BBIP10 в составе ББсомы функционирует сходно с BBS белками, и он необходим для формирования и функционирования первичных ресничек в клетках и модельном организме.

7. Обнаружено, что часть свободного внутриклеточного BBIP10 необходима для поддержания стабильности и ацетилирования цитоплазматических микротрубочек.

8. Доказано, что ВВЕРЮ регулирует ацетилирование тубулина на уровне ферментов, катализирующих ацетилирование/диацетилирование и получены экспериментальные данные, показывающие, что возможным механизмом регуляции является ингибирование активности тубулин диацетилазы - HDAC6.

3.3. Заключение

Результаты, представленные в настоящей работе, свидетельствуют о успешности использования подхода, основанного на поиске новых белок-белковых взаимодействий, для исследования молекулярных механизмов плейотропных генетических заболеваний человека, на примере синдрома Барде-Бидля. Данный подход является алтернативным по отношению к классическим генетическим исследованиям. Его использование позволило получить новые знания о функциональной активности белковых продуктов 12-ти BBS генов предопределяющих развитие синдрома Барде-Бидля.

Для реального использования этого подхода была получена уникальная линия клеток человека RPE-[JIAO]BBS4, экспрессирующая белок BBS4, который был модифицирован для очистки и идентификации взаимодействующих с ним белков. С использованием этой линии впервые была показана локализация BBS белков в первичных ресничках позвоночных, помимо их присутствия в ЦС, что хорошо согласуется с данными о локализации BBS белков у нематод (Ou G. et al, 2005). Очистка и идентификация белков, ассоциированных с BBS4, из клеток RPE[JIAO]BBS4 методом тандемной аффинной очистки в комбинации с тандемной масс-спектроскопией позволила получить целый комплекс новых знаний о молекулярных свойствах BBS белков. В частности, впервые было выявлено, что 7 из 12 самых эволюционно консервативных BBS белков способны взаимодействовать между собой. Физико-химическая характеристика этого взаимодействия позволила заключить, что белки BBS1, BBS2, BBS4, BBS5, BBS7, BBS8 и BBS9 формируют стабильный мультисубъединичный белковый комплекс, который получил название ББсома. In vivo, эти белки присутствуют исключительно в составе ББсомы в стехиометрических количествах, кроме того также было обнаружено кратковременное связывание ББсомы с основным белком ЦС - РСМ-1.

Технология подавления экспрессии белков с помощью миРНК была успешно использована для установления основных функций ББсомы в клетках человека. Впервые были получены доказательства, что ББсома необходима для сборки первичных ресничек, и не играет существенной роли в функции ЦС. Было установлено, что в певичных ресничках ББсома ассоциирована с мембраной, возможно путем непосредственного связывания с липидами мембраны, опосредованного взаимодействием BBS5 с фосфатидил инозитолами.

Дальнейшее детальное изучение роли ББсомы в формировании первичных ресничек позволило выявить взаимодействие между ББсомой (BBS1 субъединица) и белком Rabin8, являющимся активатором ГТФазы Rab8. Функциональная важность этого взаимодействия была подтверждена тем фактом, что Rabin8, как и ББсома, необходим для формирования первичных ресничек. Из этого следует, что ББсома может быть необходима для активации Rab8 и это регулирует построение мембран первичных ресничек. Важно также отметить, что ГТФазы семейства Rab являются хорошо охарактеризованными регуляторами мембранного транспорта в клетке.

Проведенные исследования позволили впервые показать, что белок Rab8 входит в состав локализован в реснички, а экспрессия конститутивно-активного варианта Rab8[67L] вызывает удлинение мембран и аксонем ресничек. Было установлено, что ингибирование функции белка Rab8 приводит к ингибированию образования первичных ресничек. Наши данные о зависимости локализации Rab8 в реснички от присутствия белка Rabin8 свидетельствуют, что только активированная форма Rab8 находится в первичных ресничках. Таким образом, совокупность полученных результатов свидетельствует, что сбалансированая активация Rab8 играет важную роль в образовании мембраны первичных ресничек.

Исходя из вышесказанного, можно предположить, что функциональная активность ББсомы в клетке включает в себя следующие этапы. Сначала ББсома связывается с РСМ-1 и транспортируется центриольными спутниками к базальному тельцу, где происходит ее диссоциация с РСМ-1. Затем, происходит взаимодействие ББсомы с Rabin8, что обуславливает строго локализованную активацию ГТФазы Rab8. Активация Rab8 у основания реснички стимулирует направленный транспорт и слияние мембранных пузырьков, предназначенных для формирования мембраны реснички. На следующем этапе ББсома направляется^ внутрь реснички, где может осуществлять координацию субъединиц ВРТ и, возможно, обеспечивать координацию роста мембраны и аксонемы первичной реснички.

Предложенная нами модель была поддержана последующими исследованиеми других групп. Так, в мышах с делегированным геном BBS4 было обнаружено отсутствие трансмембранных рецепторов соматостатина и серотонина в первичных ресничках нейронов мозга, где они • находятся в норме (Berbari N.F. et al, 2008). Ингибирование функции Rab8 в фоторецепторных нейронах приводит к массивному накоплению мембранных пузырьков содержащих родопсин у основания перетяжки (Moritz*O.L. et al, 2001).

Дальнейшее изучение BBS белков, идентифицированных в результате очистки ББсомы, привело к открытию нового белка, получившего название BBIP10. Открытый нами белок является чрезвычайно консервативным и присутствует в геномах человека, млекопитающих и далее вплоть до геномов одноклеточных жгутиковых. При этом BBIP10 не содержит никаких доменов с уже известной функцией. Исследование взаимодействия между ББсомой и BBIP10 дало основание считать, что BBIP10 является стехиометрической субъединицей ББсомы, вместе с описанными выше семью BBS белками. Однако надо отметить, что значительная часть внутриклеточного BBIP10 не связана с ББсомой.

В отличие от BBS4, BBIP10 не наблюдается на ЦС, а локализован непосредственно в первичной ресничке, BBIP10 также обнаруживается в цитоплазме. Подавление экспрессии BBIP10 в клетках человека вызывало ингибирование формирования первичных ресничек, а в эмбрионах D.rerio - появление типичных BBS фенотипов. Таким образом, полученные данные позволяют предположить, что BBIP10 в составе ББсомы выполняет важную функцию в процессе формирования первичных ресничек. Тем не менее, сравнительный анализ эффектов подавления экспрессии BBIP10 и BBS белков позволил установить, что BBIP10 также играет важную роль в регуляции стабильности микротрубочек цитоскелета и ацетилирования тубулина.

Полученные нами экспериментальные данные свидетельствуют, что при ингибировании экспрессии BBIP10 происходит значительное снижение количества полимеризованного и ацетилированного тубулина в клетках. Причем другие посттрансляционные модификации тубулина остаются неизменными. Принципиально важная роль BBIP10 в регуляции ацетилировании тубулина была подтверждена в экспериментах с клетками, характеризующимися высоким уровнем экспрессии BBIP10.

Механизм с помощью которого BBIP10 оказывает воздействие на стабильность цитоплазматических МТ остается неясным, так как, согласно полученным данным, динамика полимеризации МТ в клетках с ингибированной экспрессией BBIP10 является нормальной. Возможными механизмами, получившими некоторое экспериментальное подтверждение в настоящей работе, могут быть нарушение прикрепления МТ к центросоме и/или прямое связывание BBIP10 с МТ.

Совокупность результатов, полученных в серии экспериментов по искусственной полимеризации/деполимеризации МТ позволяет предположить, что BBIP10 осуществляет контроль над ацетилированием тубулина на ферментативном уровне. Более того, удалось установить, что ингибирование деацетилазы тубулина HDAC6 частично восстанавливает ацетилирование тубулина в клетках с подавленной экспрессией BBIP10, из чего следует, что BBIP10 ингибирует HDAC6. Дальнейшее исследование механизма контроля ацетилирования затрудняется отсутствием информации о свойствах фермента осуществляющего ацетилирование тубулина, поэтому нельзя исключить возможности того, что BBIP10 активирует ацетилтрансферазу. В будущем, продолжение исследования роли BBIP10 в регуляции ацетилироваиия тубулина может привести к получению новых знаний о молекулярных компонентах и функции этой пост-трасляционной модификации.

Можно предположить, что функцией BBIP10 в составе ББсомы является стабилизация МТ аксонемы реснички путем контроля диацетилирования или ацетилироваиия. В пользу этой гипотезы говорит тот факт, что нами было обнаружено нарушение координации между образованием мембран и ацетилированием аксонем ресничек в клетках с гиперактивированным Rab8. Другими авторами было показано, что HDAC6 стимулирует резорбцию ресничек (Pugacheva E.N. et al, 2007). Исходя из выше сказаного, интересной гипотезой-представляется то, что ролью ББсомы, как белкового комплекса в ресничке, является координация формирования мембраны и аксонемы реснички.

Полученные в настоящей работе данные являются важным вкладом в понимание механизмов патогенеза BBS на молекулярном уровне. Открытие стабильного комплекса из 7 BBS белков и белка ВВГРЮ позволяет значительно упростить возможное моделирование BBS на уровне молекулярных взаимодействий. Можно предположить, что ББсома, и выполняемая ею роль в функционировании ресничек, является принципиально важной точкой развития сидрома Барде-Бидля и других заболеваний с сходными симптомами. Мутация одной из субъединиц ББсомы может привести к нарушению функции всего белкового комплекса. Представляется возможным, что остальные 5 BBS белков, которые не входят в состав комплекса, также оказывают1 влияние на функцию ББсомы. Дальнейшие исследования патогенеза BBS и фундаментальной биологии ресничек должны быть направлены, на наш взгляд, на развитие настоящей работы в следующих направлениях: исследование процесса контроля сборки ББсомы в виде белкового комплекса, оценку роли других BBS белков, выявление других белков, взаимодействующих с ББсомой.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Локтев, Александр Валерьевич, 2009 год

1. Afzelius В. Electron microscopy of the sperm tail; results obtained with a new fixative. // J Biophys Biochem Cytol. 1959. - V. 5. - P. 269-278.

2. Afzelius B.A. A human syndrome caused by immotile cilia. // Science. 1976. - V. 193. -P. 317-319.

3. Allen R.A. Isolated cilia in inner retinal neurons and in retinal pigment epithelium. // J Ultrastruct Res. 1965. - V. 12. - P. 730-747.

4. Alvarez-Buylla A., Garcia-Verdugo J.M., Mateo A.S., and Merchant-Larios H. Primary neural precursors and intermitotic nuclear migration in the ventricular zone of adult canaries. // J Neurosci. 1998. - V. 18. - P. 1020-1037.

5. Amemiya T. Significance of appearance of cilia in the retinal pigment epithelium (author's transl). //Nippon Ganka Gakkai Zasshi. 1977. - V. 81. - P. 355-359.

6. Ang A.L., Folsch H., Koivisto U.M., Pypaert M., and Mellman I. The Rab8 GTPase selectively regulates AP-IB-dependent basolateral transport in polarized Madin-Darby canine kidney cells. // J Cell Biol. 2003. - V. 163. - P. 339-350.

7. Archer F.L., and Wheatley D.N. Cilia in cell-cultured fibroblasts. II. Incidence in mitotic and post-mitotic BHK 21-C13 fibroblasts. // J Anat. 1971. - V. 109. - P. 277-292.

8. Argarana C.E., Barra H.S., and Caputto R. Release of 14C.tyrosine from tubulinyl-[14C]tyrosine by brain extract. Separation of a carboxypeptidase from tubulin-tyrosine ligase. //Mol Cell Biochem. 1978. - V. 19. - P. 17-21.

9. Badano J.L., Ansley S.J., Leitch C.C., Lewis R.A., Lupski J.R., and Katsanis N. Identification of a novel Bardet-Biedl syndrome protein, BBS7, that shares structural features with BBS1 and BBS2. // Am J Hum Genet. 2003a. - V. 72. - P. 650-658.

10. Badano J.L., Mitsuma N., Beales P.L., and Katsanis N. The ciliopathies: an emerging class of human genetic disorders. // Annu Rev Genomics Hum Genet. 2006. - V. 7. - P. 125148.

11. Barnes B.G. Ciliated secretory cells in the pars distalis of the mouse hypophysis. // J Ultrastruct Res. 1961. - V. 5. - P. 453-467.

12. Barnett S., Reilly S., Carr L., Ojo I., Beales P.L., and Charman T. Behavioural phenotype of Bardet-Biedl syndrome. // J Med Genet. 2002. - V. 39. - P. e76.

13. Barr M.M., DeModena J., Braun D., Nguyen C.Q., Hall D.H., and Sternberg P.W. The Caenorhabditis elegans autosomal dominant polycystic kidney disease gene homologs lov-1 and pkd-2 act in the same pathway. // Curr Biol. 2001. - V. 11. - P. 1341-1346.

14. Barr M.M., and Sternberg P.W. A polycystic kidney-disease gene homologue required for male mating behaviour in C. elegans. //Nature. 1999. - V. 401. - P. 386-389.

15. Beales P.L., Elcioglu N., Woolf A.S., Parker D., and Flinter F.A. New criteria for improved diagnosis of Bardet-Biedl syndrome: results of a population survey. // J Med Genet. 1999. - V. 36. - P. 437-446.

16. Berbari N.F., Lewis J.S., Bishop G.A., Askwith C.C., and Mykytyn K. Bardet-Biedl syndrome proteins are required for the localization of G protein-coupled receptors to primary cilia. // Proc Natl Acad Sci USA.- 2008. V. 105. - P. 4242-4246.

17. Blacque O.E., and Leroux M.R. Bardet-Biedl syndrome: an emerging pathomechanism of intracellular transport. // Cell Mol Life Sci. 2006. - V. 63. - P. 2145-2161.

18. Bobinnec Y., Khodjakov A., Mir L.M., Rieder C.L., Edde В., and Bornens M. Centriole disassembly in vivo and its effect on centrosome structure and function in vertebrate cells. // J Cell Biol. 1998. - V. 143. - P. 1575-1589.

19. Brailov I., Bancila M., Brisorgueil M.J., Miquel M.C., Hamon M., and Verge D. Localization of 5-HT(6) receptors at the plasma membrane of neuronal cilia in the rat brain. // Brain Res. 2000. - V. 872. - P. 271-275.

20. Cellis J.E. (2006). Cell Biology, a Laboratory Handbook, Vol 1 (London: Elsevier Academic Press).

21. Cheeseman I.M., and Desai A. A combined approach for the localization and tandem affinity purification of protein complexes from metazoans. // Sci STKE. 2005. - V. 2005. -P. pll.

22. Clamp M., Cuff J., Searle S.M., and Barton G.J. The Jalview Java alignment editor. // Bioinformatics. 2004. - V. 20. - P. 426-427. :

23. Cole D.G. The intraflagellar transport machinery of Chlamydomonas reinhardtii. // Traffic. 2003. - V. 4. - P. 435-442.

24. Corbit K.C., Aanstad P., Singla V., Norman A.R., Stainier D.Y., and Reiter J.F. Vertebrate Smoothened functions at the primary cilium. // Nature. 2005. - V. 437. - P. 1018-1021.

25. Dammermann A., and Merdes A. Assembly of centrosomal proteins and microtubule organization depends on PCM-1. // J Cell Biol. 2002. - V. 159. - P. 255-266.

26. Bardet-Biedl syndrome 1 M390R mutation has cilia defects, ventriculomegaly, retinopathy, and obesity. // Proc Natl Acad Sci USA.- 2007. V. 104. - P. 19422-19427.

27. Di Paolo G., and De Camilli P. Phosphoinositides in cell regulation and membrane dynamics. // Nature. 2006. - V. 443. - P. 651-657.

28. Eisen M.B., Spellman P.T., Brown P.O., and Botstein D. Cluster analysis and display of genome-wide expression patterns. // Proc Natl Acad Sci USA.- 1998. V. 95. - P. 1486314868.

29. Fauser S., Munz M., and Besch D. Further support for digenic inheritance in Bardet-Biedl syndrome. // J Med Genet. 2003. - V. 40. - P. el04.

30. Fawcett D.W. (1981). The Cell, 2nd edition edn (Philadelphia, USA: W. B. Saunders Co.).

31. Fawcett D.W., and Porter K.R. A study of the fine structure of ciliated epithelia. // Journal of Morphology. 1954. -V. 94. - P. 221-281.

32. Fisher S.K., and Steinberg R.H. Origin and organization of pigment epithelial apical projections to cones in cat retina. // J Comp Neurol. 1982. - V. 206. - P. 131-145.

33. Follit J.A., Tuft R.A., Fogarty K.E., and Pazour G.J. The intraflagellar transport protein IFT20 is associated with the Golgi complex and is required for cilia assembly. // Mol Biol Cell. 2006. - V. 17. - P. 3781-3792.

34. Gaertig J., Cruz M.A., Bowen J., Gu L., Pennock D.G., and Gorovsky M.A. Acetylation of lysine 40 in alpha-tubulin is not essential in Tetrahymena thermophila. // J Cell Biol. -1995.-V. 129.-P. 1301-1310.

35. Gibbons I.R., and Rowe A.J. Dynein: A Protein with Adenosine Triphosphatase Activity from Cilia. // Science. 1965. - V. 149. - P. 424-426.

36. Haggarty S.J., Koeller K.M., Wong J.C., Grozinger C.M., and Schreiber S.L. Domain-selective small-molecule inhibitor of histone deacetylase 6 (HDAC6)-mediated tubulin deacetylation. // Proc Natl Acad Sci USA.- 2003. V. 100. - P. 4389-4394.

37. Hattula K., Furuhjelm J., Arffman A., and Peranen J. A Rab8-specific GDP/GTP exchange factor is involved in actin remodeling and polarized membrane transport. // Mol Biol Cell. -2002. -V.13. -P. 3268-3280.

38. Haycraft C.J., Banizs В., Aydin-Son Y., Zhang Q., Michaud E.J., and Yoder B.K. Gli2 and Gli3 localize to cilia and require the intraflagellar transport protein polaris for processing and function. // PLoS Genet. 2005. - V. 1. - P. e53.

39. Hoskins B.E.,.Thorn A., Scambler P .J., and Beales P.L. Evaluation of multiplex capillary heteroduplex analysis: a rapid and sensitive mutation screening technique. // Hum Mutat. -2003.-V. 22.-P. 151-157. t

40. Hou Y., Qin H., Follit J.A., Pazour G.J., Rosenbaum J.L., and Witman G.B. Functional analysis of an individual IFT protein: IFT46 is required for transport of outer dynein arms into flagella. // J Cell Biol. 2007. - V. 176. - P. 653-665.

41. Huangfu D., Liu A., Rakeman A.S., Murcia N.S., Niswander L., and Anderson K.V. Hedgehog signalling in the mouse requires intraflagellar transport proteins. // Nature. -2003. V. 426. - P. 83-87.

42. Hubbert C., Guardiola A., Shao R., Kawaguchi Y., Ito A., Nixon A., Yoshida M., Wang X.F., and Yao T.P. HDAC6 is a microtubule-associated deacetylase. //Nature. 2002. - V. 417.-P. 455-458.

43. Jiang X.R., Jimenez G., Chang E., Frolkis M., Kusler В., Sage M., Beeche M., Bodnar

44. A.G., Wahl G.M., Tlsty T.D., and Chiu C.P. Telomerase expression in human somatic cells does not induce changes associated with a transformed phenotype. // Nat Genet. 1999. -V. 21. - P. 111-114.

45. Jones C., Roper V.C., Foucher I., Qian D., Banizs В., Petit C., Yoder B.K., and Chen P. Ciliary proteins link basal body polarization to planar cell polarity regulation. // Nat Genet.- 2008. V. 40. - P. 69-77.

46. Katsanis N. The oligogenic properties of Bardet-Biedl syndrome. // Hum Mol Genet. -2004. V. 13 Spec No 1. - P. R65-71.

47. Kozminski K.G., Beech P.L., and Rosenbaum J.L. The Chlamydomonas kinesin-like protein FLA 10 is involved in motility associated with the flagellar membrane. // J Cell Biol. 1995. - V. 131. - P. 1517-1527.

48. Kozminski K.G., Diener D.R., and Rosenbaum J.L. High level expression of nonacetylatable alpha-tubulin in Chlamydomonas reinhardtii. // Cell Motil Cytoskeleton. -1993a.-V. 25.-P. 158-170.

49. Kozminski K.G., Johnson K.A., Forscher P., and Rosenbaum J.L. A motility in the eukaryotic flagellum unrelated to flagellar beating. // Proc Natl Acad Sci USA.- 1993b. -V. 90.-P. 5519-5523.

50. Kubo A., Sasaki H., Yuba-Kubo A., Tsukita S., and Shiina N. Centriolar satellites: molecular characterization, ATP-dependent movement toward centrioles and possible involvement in ciliogenesis. // J Cell Biol. 1999. - V. 147. - P. 969-980.

51. L'Hernault S.W., and Rosenbaum J.L. Chlamydomonas alpha-tubulin is posttranslationally modified by acetylation on the epsilon-amino group of a lysine. // Biochemistry (Mosc). -1985.-V. 24.-P. 473-478.

52. Leeuwenhoek A.V. (1932). Antony Van Leeuwenhoek and His "Little Animals" (New York: Harcourt Brace).

53. Li X., Luo Y., Starremans P.G., McNamara C.A., Pei Y., and Zhou J. Polycystin-1 and polycystin-2 regulate the cell cycle through the helix-loop-helix inhibitor Id2. // Nat Cell Biol. 2005. - V. 7. - P. 1202-1212.

54. Мак H.Y., Nelson L.S., Basson M., Johnson C.D., and Ruvkun G. Polygenic control of Caenorhabditis elegans fat storage. //Nat Genet. 2006. - V. 38. - P. 363-368.

55. Marszalek J.R., Liu X., Roberts E.A., Chui D., Marth J.D., Williams D.S., and Goldstein L.S. Genetic evidence for selective transport of opsin and arrestin by kinesin-II in mammalian photoreceptors. // Cell. 2000. - V. 102. - P. 175-187.

56. Maruta H., Greer K., and Rosenbaum J.L. The acetylation of alpha-tubulin and its relationship to the assembly and disassembly of microtubules. // J Cell Biol. 1986. - V. 103.-P. 571-579.

57. McMahon A.P., Ingham P.W., and Tabin C.J. Developmental roles and clinical significance of hedgehog signaling. // Curr Top Dev Biol. 2003. - V. 53. - P. 1-114.

58. Mikule K., Delaval В., Kaldis P., Jurcyzk A., Hergert P., and Doxsey S. Loss of centrosome integrity induces p38-p53-p21-dependent Gl-S arrest. // Nat Cell Biol. 2007. -V. 9.-P. 160-170.

59. Minotti A.M., Barlow S.B., and Cabral F. Resistance to antimitotic drugs in Chinese hamster ovary cells correlates with changes in the level of polymerized tubulin. // J Biol Chem. -1991. -V. 266. P. 3987-3994.

60. Morrissey J.H. Silver stain for proteins in polyacrylamide gels: a modified procedure with enhanced uniform sensitivity. // Anal Biochem. 1981. - V. 117. - P. 307-310.

61. Murcia N.S., Richards W.G., Yoder B.K., Mucenski M.L., Dunlap J.R., and Woychik R.P. The Oak Ridge Polycystic Kidney (orpk) disease gene is required for left-right axis determination. // Development. 2000. - V. 127. - P. 2347-2355.

62. Mykytyn K., Nishimura D.Y., Searby C.C., Beck G., Bugge K., Haines H.L., Cornier A.S., Cox G.F., Fulton A.B., Carmi R., Iannaccone A., Jacobson S.G., Weleber R.G., Wright

63. A.F., Riise R., Hennekam R.C., Luleci G., Berker-Karauzum S., Biesecker L.G., Stonei

64. E.M., and Sheffield V.C. Evaluation of complex inheritance involving the most common Bardet-Biedl syndrome locus (BBS1). // Am J Hum Genet. 2003. - V. 72. - P. 429-437.

65. Nachury M.V. Tandem affinity purification of the BBSome, a critical regulator of Rab8 in ciliogenesis. //Methods Enzymol. 2008. - V. 439. - P. 501-513.

66. Nakane Т., and Biesecker L.G. No evidence for triallelic inheritance of MKKS/BBS loci in Amish Mckusick-Kaufman syndrome. // Am J Med Genet A. 2005. - V. 138. - P. 32-34.

67. Nonaka S., Shiratori H., Saijoh Y., and Hamada H. Determination of left-right patterning of the mouse embryo by artificial nodal flow. // Nature. 2002. - V. 418. - P. 96-99.

68. North B.J., Marshall B.L., Borra M.T., Denu J.M., and Verdin E. The human Sir2 ortholog, SIRT2, is an NAD+-dependent tubulin deacetylase. // Mol Cell. 2003. - V. 11:;- P. 437444.

69. Orozco J.T., Wedaman K.P., Signor D., Brown H., Rose L., and Scholey J.M. Movement of motor and cargo along cilia. // Nature. 1999. - V. 398. - P. 674. С

70. Ou G., Blacque O.E., Snow J.J., Leroux M.R., and Scholey J.M. Functional coordination of intraflagellar transport motors. //Nature. 2005. - V. 436. - P. 583-587.

71. Palazzo A., Ackerman В., and Gundersen G.G. Cell biology: Tubulin acetylation and cell motility. // Nature. 2003. - V. 421. - P. 230.

72. Peranen J., Auvinen P., Virta H., Wepf R., and Simons K. Rab8 promotes polarized membrane transport through reorganization of actin and microtubules in fibroblasts. // J Cell Biol. 1996. - V. 135. - P. 153-167.

73. Piperno G., LeDizet M., and Chang X.J. Microtubules containing acetylated alpha-tubulinin mammalian cells in culture. // J Cell Biol. 1987. - V. 104. - P. 289-302.

74. Praetorius H.A., and Spring K.R. Bending the MDCK cell primary cilium increasesintracellular calcium. // J Membr Biol. 2001. - V. 184. - P. 71-79.

75. Pugacheva E.N., Jablonski S.A., Hartman T.R., Henske E.P., and Golemis E.A. HEF1dependent Aurora A' activation induces disassembly of the primary cilium. // Cell. 2007. 1. V. 129.-P. 1351-1363.

76. Reed N.A., Cai D., Blasius T.L., Jih G.T., Meyhofer E., Gaertig J., and Verhey K.J. Microtubule acetylation promotes kinesin-1 binding and transport. // Curr Biol. 2006. - V. 16.-P. 2166-2172.

77. Rigaut G., Shevchenko A., Rutz В., Wilm M., Mann M., and Seraphin B. A generic protein purification method for protein complex characterization and proteome exploration. // Nat Biotechnol. 1999. - V. 17. - P. 1030-1032.

78. Ringo D.L. Flagellar motion and fine structure of the flagellar apparatus in Chlamydomonas. // J Cell Biol. 1967. - V. 33. - P. 543-571.

79. Rohatgi R., Milenkovic L., and Scott M.P. Patchedl regulates hedgehog signaling at the primary cilium. // Science. 2007. - V. 317. - P. 372-376.

80. Rosenbaum J.L., and Child F.M. Flagellar regeneration in protozoan flagellates. // J Cell Biol. 1967. - V. 34. - P. 345-364.

81. Rosenbaum J.L., and Witman G.B. Intraflagellar transport. // Nat Rev Mol Cell Biol. -2002.-V.3.- P. 813-825. -112

82. Sali A., and Blundell T.L. Comparative protein modelling by satisfaction of spatial restraints. // J Mol Biol. 1993. - V. 234. - P. 779-815.

83. Schatz C.A., Santarella R., Hoenger A., Karsenti E., Mattaj I.W., Gruss O.J., and Carazo-Salas R.E. Importin alpha-regulated nucleation of microtubules by TPX2. // Embo J. -2003. V. 22. - P. 2060-2070.

84. Singla V., and Reiter J.F. The primary cilium as the cell's antenna: signaling at a sensory organelle. // Science. 2006. - V. 313. - P. 629-633.

85. Slavotinek A.M., Stone E.M., Mykytyn K., Heckenlively J.R., Green J.S., Heon E., Musarella M.A., Parfrey P.S., Sheffield V.C., and Biesecker L.G. Mutations in MKKS cause Bardet-Biedl syndrome. // Nat Genet. 2000. - V. 26. - P. 15-16.

86. Soding J., Biegert A., and Lupas A.N. The HHpred interactive server for protein homology detection and structure prediction. // Nucleic Acids Res. 2005. - V. 33. - P. W244-248.

87. Sorokin S. Centrioles and the formation of rudimentary cilia by fibroblasts and smooth muscle cells. // J Cell Biol. 1962. - V. 15. - P. 363-377.

88. Sorokin S.P. Reconstructions of centriole formation and ciliogenesis in mammalian lungs. // J Cell Sci. 1968. - V. 3. - P. 207-230.

89. Stoetzel C., Laurier V., Faivre L., Megarbane A., Perrin-Schmitt F., Verloes A., Bonneau D., Mandel J.L., Cossee M., and Dollfus H. BBS8 is rarely mutated in a cohort of 128 Bardet-Biedl syndrome families. // J Hum Genet. 2006b. - V. 51. - P. 81-84.

90. Stone D.L., Slavotinek A., Bouffard G.G., Banerjee-Basu S., Baxevanis A.D., Barr M., and Biesecker L.G. Mutation of a gene encoding a putative chaperonin causes McKusick-Kaufman syndrome. //Nat Genet. 2000. - V. 25. - P. 79-82.

91. Supp D.M., Witte D.P., Potter S.S., and Brueckner M. Mutation of an axonemal dynein affects lefit-right asymmetry in inversus viscerum mice. //Nature. 1997. - V. 389. - P. 963-966.

92. Tayeh M.K., Yen H.J., Beck J.S., Searby C.C., Westfall T.A., Griesbach H„ Sheffield V.C., and Slusarski D.C. Genetic interaction between Bardet-Biedl syndrome genes and implications for limb patterning. // Hum Mol Genet. 2008. -. -.

93. Thompson J.D., Gibson T.J., Plewniak F., Jeanmougin F., and Higgins D.G. The CLUSTALX windows interface: flexible strategies for multiple sequence alignment aided by quality analysis tools. //Nucleic Acids Res. 1997. - V. 25. - P. 4876-4882.

94. Verhey K.J., and Gaertig J. The tubulin code. // Cell Cycle. 2007. - V. 6. - P. 2152-2160.

95. Warner F.D., and Satir P. The structural basis of ciliary bend formation. Radial spoke positional changes accompanying microtubule sliding. // J Cell Biol. 1974. - V. 63. - P. 35-63.

96. Webster D.R., and Borisy G.G. Microtubules are acetylated in domains that turn over slowly. // J Cell Sci. 1989. - V. 92 ( Pt 1). - P. 57-65.

97. Webster D.R., Gundersen G.G., Bulinski J.C., and Borisy G.G. Differential turnover of tyrosinated and detyrosinated microtubules. // Proc Natl Acad Sci USA.- 1987. V. 84. -P. 9040-9044.

98. Wessel D., and Flugge U.I. A method for the quantitative recovery of protein in dilute solution in the presence of detergents and lipids. // Anal Biochem. 1984. - V. 138. - P. 141-143.

99. Westermann S., and Weber K. Post-translational modifications regulate microtubule function. // Nat Rev Mol Cell Biol. 2003. - V. 4. - P. 938-947.

100. Wheatley D.N. Cilia in cell-cultured fibroblasts. I. On their occurrence and relative frequencies in primary cultures and established cell lines. // J Anat. 1969. - V. 105. - P. 351-362.

101. Wheatley D.N. Cilia in cell-cultured fibroblasts. 3. Relationship between mitotic activity and cilium frequency in mouse 3T6 fibroblasts. // J Anat. 1971. - V. 110. - P. 367-382.

102. Yen H.J., Tayeh M.K., Mullins R.F., Stone E.M., Sheffield V.C., and Slusarski D.C. Bardet-Biedl syndrome genes are important in retrograde intracellular trafficking and Kupffer's vesicle cilia function. // Hum Mol Genet. 2006. - V. 15. - P. 667-677.

103. Zeigel R.F. On the occurrence of cilia in several cell types of the chick pancreas. // J Ultrastruct Res. 1962. - V. 7. - P. 286-292.

104. Zerial M., and McBride H. Rab proteins as membrane organizers. // Nat Rev Mol Cell Biol.-2001.-V. 2.-P. 107-117.

105. Алиева И.Б., and Узбеков P.E. Центросома полуфункциональный мультибелковый клеточный комплекс. // Биохимия. - 2008. - V. 73. - Р. 626-643.

106. Узбеков Р.Е., and Алиева И.Б. Центросома загадка "клеточного процессора". // Цитология. - 2008. - V. 50. - Р. 91-112.