Характеристика иммуномодулирующих свойств тритерпеновых гликозидов голотурий тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Седов, Александр Михайлович

• Седов, Александр Михайлович
• кандидат биологических наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Седов, Александр Михайлович

ВВЕДЕНИЕ. 3

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. 8

Глава I. Биологическое действие тритерпеновых гликозидов голотурий.8

ГЛАВА 2. Адъювантная активность тритерпеновых гликозидов (сапонинов).26

ЧАСТЬ П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.42

Глава I. Мат ериалы. 42

Глава 2. М е т о д ы. 45

ЧАСТЬ Ш. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ. 59

Глава I. Оценка токсичности тритерпеновых гликозидов из голотурий. 59

Глава 2. Иммуномодулирутощая активность тритерпеновых гликозидов из голотурий по отношению к растворимым и корпускулярным антигенам.78

Глава 3. Стимуляция тритерпеновыми гликози-дами из голотурий неспецифической устойчивости к бактериям.98

Глава 4. Иммуномодулирующее действие тритерпеновых гликозидов из голотурий при иммунизации бактериальными вакцинами. 135

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Характеристика иммуномодулирующих свойств тритерпеновых гликозидов голотурий»

Актуальность теш исследования. Рациональное комплексное использование биологических ресурсов Мирового океана включает в себя, помимо выработки продуктов питания, максимальное вовлечение в производство непищевых отходов в качестве не только кормовых и технических продуктов, но и продукции медицинского назначения. Острая потребность практической медицины в источниках биологически активных веществ (БАБ), на основе которых разрабатываются новые препараты медицинского назначения, служит стимулом для интенсивного изучения БАБ гидробионток; К настоящему времени проведен (фармакологический скрининг БАБ не более 1% морских организмов (26), однако получен уже ряд биологически активных соединений с оригинальной, зачастую уникальной химической;; структурой и фармакологическим эффектом, на порядок превосходящим активность соединений аналогичной природы, выделенных из наземных организмов (107). Многие из них находят цри-менение в медицинской практике (15).

Среди разнообразнейших по своему химическому^строению и фармакологическому действию БАБ гидробионтов имеются соединения, обладающие иммунотропным действием. Например, препараты, полученные из оболочников Ecteinascidia turbitata , вызывают у экспериментальных животных снижение продукции антител, увеличение времени отторжения кожного трансплантата, замедление или отмену бласттрансформации лимфоцитов, вызванную <Ш?А, а также изменение некоторых других показателей тщунитета* Б основе ишлуномодулирушего действия данных соединений лежит стимуляция популяции Т-супрессоров. Кроме того они выступают как активаторы макрофагальной системы (246);

Каррагинан-полисахарид из некоторых видов бурых водорослей вызывает супрессию гиперчувствительности замедленного типа, ин гибирует C-I компонент комплемента, оказывает цитотоксическое действие на макрофаги (98, 112, 120, 260). Липополисахариды из сине-зеленых водорослей Spirulina platensis (14), липиды из печени акул-рестим и рестим 3(39, 169), эндокапептид эледоизин, выделяемый из моллюсков (193), напротив, оказывают, выраженное стимулирушее действие, усиливая фагоцитарную активность микро-и макрофагов и способствуя элиминации из организма инфецируше-го агента.

Богатейшим источником БАБ являются также иглокожие, в частности, голотурии шш морские огурцы - многочисленная группа обитателей Мирового океана. Зарубежными исследователями, а также в нашей стране в Тихоокеанском институте био|органической химии ДВБЦ АН СССР под руководством члена-корреспондента АН СССР Г.Б.Елякова из голотурий выделены и идентифицированы гомарин, карнитин, допамин и норадреналин, гистамин, стерины, пептиды, жирные кислоты, терпеноиды, ароматические соединения, сапонины ■ и другие биологически активные вешества (26). Из них наибольший интерес представляют тритерпеновые гликозиды (сапонины), обладаI юшие широким спектром биологического действия - цитостатической, не.йротропной, гемолитической, цитотоксической, антифунгальной и другими видами активности.

Б научной и патентной литературе отсутствуют данные об им-мунотропной активности тритерпеновых гликозидов животного происхождения, за исключением некоторых работ Lesley et al. (190, 191), в которых показано, что тритерпеновый гликозид голотурин А in vitro стимулирует в определенных дозах фагоцитарную активность и миграционную способность лейкоцитов человека. Б то же время известно, что тритерпеновые гликозиды (сапонины) растительного проивхождения на протяжении многих лет используются в ветеринарии в качестве иммунологических адъшвантов вакцин против рада вирусных, бактериальных и паразитарных заболеваний. Хотя механизм их действия практически не изучен, сапонины включаются в большинство вакцин против ящура, производимых во всем мире. Однако, несмотря на ярко выраженный адъювантный эффект использование коммерческих препаратов сапонинов встречает практические затруднения. Главным образом,это связано с тем, что производство зарубежными фирмами сапонинов не предусматривает их применения в качестве иммунологических адъюван-тов. Основным назначением выпускаемых препаратов сапонинов является их использование в качестве детергентов и эмульгаторов (в лабораторной практике, пищевой и парфюмерной промышленности и т.д.), что и определяет предъявляемые к ним требования. Сапонины широка представлены в растительном мире, но только немногие из них обладают имцуностимулирушим действием. Поэтому коммерческие препараты сапонинов, представлявшие собой смесь сапонинов из различных сапонино содержащих растений, отличаются нестабильностью состава и, как следствие этого, различной иммуностимулирующей активностью, а также содержанием большого количества балластных веществ и целым рядом побочных эффектов.

Выбранный нами объект исследования - тетрациклические тритерпеновые гликозиды (сапонины), из дальневосточной голотурии Cucumaria japonic а (кукумариозид) привлекли к себе внимание значительно большей фармакологической активностью, чем гликозиды растительного происхождения, которая обусловлена существенными отличиями химического строения; надежной сырьевой базой и возможностью его получения из отходов пищевой промышленности; отработанными схемами выделения и идентификации.

Его иммунотропное действие не было исследовано.

Б связи с этим цель данной работы состояла в изучении способности отечественного препарата кукумариозида, получаемого из дальневосточной голотурии С. japonic а , модулировать иммунный ответ и стщулировать неспецифическую устойчивость к бактериям.

В задачи экспериментальных исследований входило изучение следующих вопросов:

1. Острая и хроническая токсичность кукумариозида.

2. Модуляция кукумариозидом иммунного ответа на корпускулярные (эритроциты барана) и растворимые (бычий сывороточный альбумин) антигены,

3. Иммуномодулирущее действие кукумариозида при введении с бактериальными вакцинами,

4 . Стимуляция кукумариозидом не специфической устойчивости К Salmonella typhiraurium.

Научная новизна и практическая значимость. Б итоге проведенных исследований получены следующие оригинальные результаты. Установлено, что кукумариозид обусловливает выраженную модуляцию иммунного ответа на корпускулярные антигены, В зависимости от дозы и сроков введения кукумариозид усиливает цротективное действие бактериальных вакцин и ускоряет очищение организма животных от возбудителя. При введении за 14 и 21 день до заражения кукумариозид без вакцины стимулирует неспецифическую устойчивость мышей к Salmonella typhimurium, активирует макрофаги перитонеального экссудата и повышает их устойчивость к цитопа-тогенному действию сальмонелл. Токсические дозы кукумариозида значительно превышают дозы, необходимые для модуляции иммунного ответа и неспецифической стимуляции антибактериальной устойчивости, Одним из основных механизмов стимулирующего действия кукумариозида является, по всей вероятности, активация клеток мононуклеарной фагоцитарной системы.

Перечисленные положения выдвигаются на защиту.

Практическое отсутствие токсичности кукумариозида в дозах, обеспечивающих выраженную модуляцию иммунного ответа и стимуляцию неспецифической антибактериальной устойчивости, обусловливает перспективность применения этого препарата в иммунологических исследованиях и вакцинно-сывороточном деле. Кукумарио-зид в нетоксичных концентрациях может найти применение в медицинской и ветеринарной практике для усиления протекгивного действия бактериальных вакцин и стимуляции неспецифической устойчивости к микроорганизмам, способным к паразитированию в клетках мононуклеарной фагоцитарной системы.

По результатам данного исследования получено авторское свидетельство на изобретение № 1066602 от 15 сентября 1983 г. "Средство для изучения состояния имцунной-системы на экспериментальных моделях" с формулой изобретения "Применение тритер-пеновых гликозидов в качестве средства для изучения состояния иммунной системы на экспериментальных моделях".

Совокупность полученных результатов можно квалифицировать как новое решение актуального для практической и теоретической медицины вопроса о расширении арсенала эффективных нетоксичных иммуномодуляторов и стимуляторов неспецифической антибактериальной резистентности.

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Седов, Александр Михайлович

ВЫВОДЫ

1.Тетрациклические тритерпеновые гликозиды из дальневосточных голотурий Cucumaria japonica (кукумариозид) в экспериментах на мышах проявляют выраженное ишуномодулирушее действие и стимулируют неспецифическую антибактериальную устойчивость.

2. Кукумариозид стимулирует антительный ответ мышей на корпускулярный антиген - эритроциты барана, но не проявляет стимулирующего действия на образование антител к растворимому антигену -бычьему сывороточному альбумину.

3. Кукумариозид усиливает протективное действие вакцин из Salmonella typhimurium и Bordetella pertussis и ускоряет элиминацию сальмонелл из организма животных.

4. При иммунизации корпускулярной коклюшной вакциной, имму-номодулирушее действие кукумариозида, изученное в тесте розет-кообразования, выражается в стимуляции или подавлении спонтанных и ищунных РОК в зависимости от доз и времени после введения препаратов.

5. Кукумариозид, введенный без вакцины за 14 и 21 день до заражения мышей вирулентной культурой Salmonella typhimurium штамм № 415 значительно увеличивает выживаемость животных и ускоряет, очищение внутренних органов от бактерий.

6. Тритерпеновые гликозиды голотурий увеличивают фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов и повышают их устойчивость к цитопатогенному действию бактерий Salmonella typhimurium.

7. Инактивация и деградация бактерий клетками мононуклеарной фагоцитарной системы при введении кукумариозида обусловлены стимуляцией образования активных форм кислорода и активацией лизосомального аппарата клеток.

8. Активация клеток мононуклеарнои фагоцитарной системы является, по всей вероятности, одним из основных механизмов стимулирушего действия кукумариозида.

9. Практическое отсутствие токсичности кукумариозида в дозах, обеспечивающих его выраженное иммуномодулирушее действие и стимуляцию неспецифической антибактериальной устойчивости обусловливает перспективность применения этого препарата в иммунологических исследованиях и вакцинно-сывороточном деле.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Тритерпеновые гликозиды (сапонины) животного происхождения, получаемые из голотурий, обладают высокой'биологической активностью. Установлено их цитостатическое (205), нейротроп-ное (152), гемолитическое (263), цитотоксическое (102), анти-фунгальное (187) действие.

Многими исследователями показано, что биологическое действие тритерпенозыхгликозидов связано, главным образом, с их высокой мембранотропностью и, в первую очередь, с взаимодействием со стеринами клеточных мембран (162). Авторы объясняют фармакологическую активность тритерпеновых гликозидов их способностью нарушать целостность мембраны клетки, будь то мембрана опухолевой клетки, мицелия грибов или эритроцита, и образоо вывать сквозные поры диаметром 40-80 А, через которые происходит утечка макромолекулярного содержимого клетки (II, 142). Обычно в экспериментах используют тритерпеновые гликозиды в концентрациях 10 М и выше и при этом наблюдают такие явления, как лизис клетки-мишени (205, 206), нарушение или полная блокада проводимости нервного волокна (151), гемолиз эритроцитов (263) и т.д.

Необходимо отметить, что исследованию фармакологического действия тритерпеновых гликозидов голотурий в малых концентрациях (ниже 10~^М) посвящено незначительное число научных публикаций. Между тем, установлено, что тритерпеновые гликозиды голотурий в низких концентрациях не вызывают необратимый изменений клеточной мембраны. Так, голотурин А в концентрации 5 мкг не оказывает необратимой блокады цроведения нервного возбуждения и морфологических изменений в миелиновой оболочке и перехватах

Ранвье (261). В той же концентрации голотурин А усиливает in vitro фагоцитарную активность лейкоцитов человека (190), а в концентрации 0,02 мкг/мл стимулирует миграцию лейкоцитов в микрокапилярах (191). Как было нами показано, голотурин А и кукует Г) мариозид в низких концентрациях (10 - 10 М), взаимодействуют, преимущественно, с белковыми компонентами мембраны саркоплазматического ретикулума, изменяя активность мембраносвязанр. ных ферментов, в частности Са - АТФ-азы. Или другими словами, в низких концентрациях тритерпеновые гликозиды голотурий оказывают качественно иное действие, выступая в роли регуляторов метаболических процессов клетки. о

Нами установлено, что кукумариозид в концентрациях 10-10 мкг на мышь, т.е. в дозах, в 5-500 тысяч раз меньших, чем средняя токсическая, обладает защитным действием, усиливая естественную резистентность мышей к сальмонеллезной инфекции, вызываемой вирулентным штаммом S.typhimurium $ 415. Протективное действие кукумариозида выражается в увеличении числа выживших животных в острых опытах экспериментального заражения, ускорении клинического выздоровления больных животных и полной элиминации возбудителя из организма мышей. Увеличение естественной резистентности мышей к сальмонеллезной инфекции сопровождается усилением фагоцитарной активности клеток перитонеального экссудата и снижением цитопатогенноп) действия сальмонелл по отношению к макрофагам.

Принимая во внимание то, что сальмонеллы мышиного тифа являются факультативно-клеточными паразитами (180, 223, 266) и освобождение организма-хозяина от сальмонелл связано, главным образом, с функционированием клеточного звена иммуниета и, в первую очередь, с состоянием мононуклеарной фагоцитарной системы (126, 180, 200, 258), можно предположить, что в основе наблюдаемой стимуляции кукумариозидом естественной резистентности мышей к сальмонеллезной инфекции лежит активация системы моно-нуклеарных фагоцитов. *

Активация макрофагов - это генерализованное усиление их защитных функций (92), включающее в себя скоординированную цепь внутриклеточных событий. Точкой приложения действия макрофагак-тивируюших агентов является плазматическая мембрана макрофага, изменение которой и представляет сущность процессам активации (24, 87), С функциональной точки зрения, мембрану можно представить как сложную ферментативную систему, которая контролирует внутриклеточный гомеостаз и опосредует его изменения в ответ на внешние- раздражители (49). Биологическое действие кукумариозида сопровождается структурно-функциональными сдвигами в плазматической мембране, многие из которых играют ключевую роль в развитии клеточных реакций. Развертывающиеся внутриклеточные события при действии кукумариозида на плазматическую мембрану фагоцита, гипотетически можно представить, исходя из схемы, предложенной А.Н.Маянским и Д.Н.Маянским (49). Можно предположить, что кукумариозид вызывает конформационные изменения в структуре рецепторов плазматической мембраны фагоцита, которые улавливаются инициирующим ферментом, входяцим в состав рецепторного узла. Один рецептор может быть связан с несколькими ферментами, а однотипные ферменты могут кооперировать с разными'рецепторами. Взаимодействуя по принципу каскадного механизма, эктоферменты трансформируют реакцию плазматической мембраны в реакцию внутриклеточных посредников. Например, взаимодействие кукумариозида с мембраносвязанным ферментом Са - АТФ-азои может привести к р. изменению активного транспорта ионов Са , активно участвующих в регуляции метаболических. процессов клетки. Это конечное звено в системе медиаторов, которое непосредственно выходит на эффекторные механизмы, обеспечивающие внешние проявления обшей реакции фагоцита (49). Результатом подобных изменений метаболизма фагоцита является усиление его бактерицидной и пере варивашей способности по' отношению к фагоцитированным сальмонеллам.

Одним из механизмов бактерицидного действия макрофагов является продуцирование перекисных анионов, образование перекиси водорода и других кислородсодержащих метаболитов (97, 100, 236). Отмеченное нами усиление интенсивности хемилюминесценции активированных кукумариозидом макрофагов в процессе фагоцитоза сальмонелл мышиного тифа отображает процесс мобилизации фагоцита, повышения его бактериттугдных свойств, обусловленных интенсивной наработкой супероксиданионрадикала О2» который не стабилен, высокореактивен и легко превращается спонтанно в синглетный кислород К>2 (49). Образуемые в процессе спонтанной дисмутации 0g в ^ кванты хемилюминесценции, регистрируемые на приборах, и являются критерием оценки активирующего действия кукумариозида.

Судьба фагоцитированных бактерий, кроме того, в значительной степени зависит и от преобразований лизосом фагоцита и активности лизосомальных ферментов, обеспечивающих переваривание фагоцитированного материала (49): Дезактивация лизосомальных ферментов сальмонеллами является одной из причин нарушения внутриклеточного переваривания фагоцитированных микроорганизмов (16), вследствие чего фагоцитоз цри сальмонеллезах носит незавершенный характер и возбудитель длительно персистирует в ретику-лоэндотелиальной системе (67, 223), В основе показанного нами снижения кукумариозидом цитопатогенного действия сальмонелл мышиного тифа на фагоцит лежат, по всей вероятности, не только кислородзависимые процессы разрушения, но и кислороднезависи-мая деградация возбудителя ферментами лизосом активированных макрофагов.

Lesley (190) высказал предположение, что голотурин А при взаимодействии in vitro с лейкоцитами человека, проникая через плазматическую мембрану клетки, оказывает воздействие непосредственно или опосредовано на внутриклеточные гранулы, что приводит к освобождению гидролитических ферментов. Есть данные, согласно которым, сапонины способны регулировать освобождение ферментов из лизосом макрофагов (90).

Полученные нами результаты свидетельствуют о том, что ку-кумариозид вызывает усиление активности лизосомального фермента макрофагов jQ -глюкозидазы и увеличение проницаемости мембран лизосом. Из активированных макрофагов формируется барьер, защищающий организм от инфекции. Первичный контакт макрофага с чужеродным агентом может последовательно включать ступенчатую систему саморегуляции макрофагов и регуляции шли других клеточных систем (92). Внешним проявлением описанных выше внутриклеточных процессов и является увеличение кукумариозидом естественной антибактериальной резистентности животных к сальмонеллезной инфекции.

Изучение иммунного ответа животных, иммунизированных антигенами различной природы с кукумариозидом, показало, что данное соединение неспецифически усиливает иммунный ответ на специфические антигены, т.е. действует как иммунологический адъювант (40).

Адъювантный эффект наиболее близких к кумариозиду по химическому строению сапонинов растительного происхождения хорошо известен (114, 117), Они широко применяются в ветеринарии в качестве адъювантов вакцин против ряда вирусных (III, 137, 161, 167, 199), бактериальных (143, 173) и паразитарных инфекций (139, 167, 184, 227). Механизм их действия практически не изучен. Многие исследователи связывают адъювантное действие с воспалительной реакцией в месте введения сапонина с вакциной (28, 255). Значение местной воспалительной реакции в неспецифической стимуляции имзууногенеза было изучено рядом авторов, которые считают, что необходим какой-то оптимальный уровень воспаления, чтобы оно оказывало благоприятное влияние на иммуногенез. Слабая воспалительная реакция не сказывается на уровне антителооб-разования, а чрезмерная может привести к его угнетению (24, 90). Большинство исследователей полагают, что главную роль в этом играет клеточная инфильтрация в месте введения адъюванта, поскольку клетками мононуклеарной фагоцитарной системы осуществляется захват и переработка антигена (90).

Коммерческим препаратам сапонинов, выпускаемым за рубежом, свойственны чрезмерная воспалительная реакция в месте их введения и ряд других побочных эффектов, возникновение которых, обусловлено наличием в них примесей (136 , 249). Делаются попытки выделения из коммерческих препаратов фракций, обладающих высоким адъювантным и минимальным побочным действием (126, 131).

Б наших экспериментах кукумариозид в дозах, не вызывающих патологических изменений тканей, стимулирует антителообразование к корпускулярным антигенам (эритроциты барана, эритроциты лошади) , но не усиливает синтез антител к растворимым антигенам (бычий сывороточный альбумин, комплексный антиген S.typhimurium). Сходные результаты получены для растительного сапонина из коры дерева Quillaj a saponaria (115, 116). Есть данные, согласно которым стимуляция иммуногенеза адъювантнми происходит в результате вмешательства в самые начальные этапы анти-телообразования, предшествующие образованию специфической молекулы антитела. На этих этапах существенную роль в инициации иммунного ответа играют клетки мононуклеарной фагоцитирующей системы (90). Установлено, что корпускулярные антигены, активно фагоцитируемые макрофагами, проявляют большую иммуно-генность, чем растворимые антигены (90). Корпускулирование растворимых антигенов облегчает поглощение антигена макрофагами и способствует развитию полноценного имщшного ответа, конечным этапом которого является выработка специфических к данному антигену антител (24). Как было показано выше, куку-мариозид вызывает активацию клеток мононуклеарной фагоцитарной системы или генерализованное усиление их функциональный: способностей (72), включающих в себя не только генерирование бактерицидного потенциала, но и интенсификацию "переработки" антигена и перевода его в более иммуногенную форму (90), то-есть, имеет место стимуляция начальных этапов иммунного ответа.

Действие кукумариозида не ограничивается влиянием на клетки мононуклеарной фагоцитарной системы. Нами установлено, что кукумариозид при формировании иммунного ответа к коклюшной корпускулярной вакцине оказывает стимулирующее действие на Т и В-лимфоциты, уменьшая супрессивное действие больших доз коклюшной вакцины (300 MEM) и стимулируя образование спонтанных и иммунных РОК лимфоцитами селезенки мыши.

По отношению к коклюшной корпускулярной вакцине, которая сама по себе обладает сильным иммуномодулируюшим действием (73), адъювантный эффект кукумариозида отмечен только в узких оптимальных соотношениях "вакцина-адъювант".

Изучение адъювантного действия кукумариозида по отношению к сальмонеллезной вакцине (комплексному антигену s.typhimurium) Г показало, что кукумариозид в широком диапазоне доз (10-10 мкг на мышь) значительно усиливает цротективное действие вакцины. Все исследованные концентрации кукумариозида, вводимого с комплексным антигеном в дозе 0,02 мкг на мышь, увеличивали выживаемость животных при введении за 14 дней до экспериментального заражения вирулентным штаммом s.typhimurium № 415 (10 TOjqq) с 21% (одна вакцина) до 94-98% (вакцина с кукумариозидом). Совместное введение сальмонеллезной вакцины с кукумариозидом позволило снизить: ее цротективную дозу более, чем в 100 раз. Необходимо отметить, что эффективные концентрации кукумариозида, усиливающие приобретенную резистентность животных к сальмонеллам- мышиного тифа, в 40-40 млн раз меньше, чем его средняя токсическая доза (ДПзд кукумариозида составляет 426,6 + 0,02 о мкг на мышь при внутрибрюшинном введении). В дозе 10 мкг кукумариозид значительно ускоряет клиническое выздоровление вакцинированных животных, зараженных'Жа 14 сутки сублетальной дозой s.typhimurium^- 415 и обусловливает полную элиминацию возбудителя из организма мышей. Так, если введение мышам вакцины в дозе 0,02 мкг на мышь без кукумариозида не вызывает даже к 21 суткам после заражения (последнему дню наблюдения) очищения от сальмонелл лимфатических узлов, селезенки, тонкого кишечника, то совместное их введение обусловливает полную элиминацию сальмонелл уже к 7 суткам из крови, селезенки, тонкого кишечника и печени, а к 14-21-м суткам также из лимфатических узлов брыжейки. Усиление кукумариозидом приобретенной резистентности к сальмонеллезной инфекции не сопровождается значительным увеличением синтеза антител к 0- и Н-антигенам. Отмечено 2-х - 3-х кратное увеличение числа антителообразуюших клеток селезенки мышей к 7 и 14 суткам после иммунизации комплексным антигеном s. Syphimurium с кукумариозидом.

Рядом авторов показано, что гуморальный иммунитет при саль-монеллезах обеспечивает нейтрализацию эндотоксина бактерий, но не препятствует их размножению (93). Многие исследователи отводят главенствующую роль механизмам клеточного иммунитета и, в первую очередь, макрофагам, в локализации и элиминации факультативно-клеточного паразита - сальмонелл мышиного тифа (126, 258, 266).

Очевидно, в основе стимуляции кукумариозидом приобретенной резистентности мышей к сальмонелл езной инфекции, так же как и при усилении естественной резистентности, лежит стимуляция, главным образом, клеток мононуклеарной фагоцитарной системы, но в первом случае защитные реакции усиливаются и за счет формирования специфического иммунного ответа с подключением лимфоцитов.

Таким образом, в результате проведенных нами исследований впервые установлено, что кукумариозид - тетрациклический тритер-пеновый гликозид из дальневосточной голотурии С. japonica обладает выраженным иммуномодулирушшл действием и способностью усиливать не специфическую антибактериальную;/ устойчивость к сальмонеллезной инфекции.

Принимая во внимание высокое тщгнотропное действие кукумариозида,. незначительные побочные реакции в активных концентрациях, обширную сырьевую базу, возможность его получения из отходов пищевой промышленности, а также отработанные схемы выделения, очистки и идентификации, можно считать возможным, после соответствушей апробации, широкое использование кукумариозида в медицине, ветеринарии и вакцинно-сывороточном деле.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Седов, Александр Михайлович, 1984 год

1. Андреев Е.В., Филатов И.П., Михайлюк А.П., Лебедева Р.И., Ефимов Н.И., Попкова Р.И. Антитела у крупного рогатого окота, привитого противоящурными ГОА- и ГОА-сапонин-формол-вакцинами. Акт.воцр.вет.вирусол., 1967, I, 177-178.

2. Андреев Е.В., Бойко А.А., Луцевич Ф.Ф., Филатов И.П., Михайлюк А.П., Попкова Р.И., Морев Ю.Б., Голота Н.Д. Сапониновая вакцина из лапинизированного вируса ящура варианта А0. Ветеринария, 1968, I, 28-31.

3. Андреев Е.В., Сюсюкин А.А., Дрягалин Н.Н., Онуфриев В.П., Швецов Ю.Ф., Дороговцев А.А. Противоящурные вакцина, применяемые в ветеринарной практике. Обзор литературы. М., 1968, 100 с.

4. Андреев Е.В. Активная иммунизация против ящура / Материалы, по изучению и применению вакцины из инактивированного вируса. Автореф.дис.докт., Харьков, 1971 f 31 с.

5. Анисимов М.М., Прокофьева Н.Г., Кузнецова Т.А., Пере-толчин Н.В. Влияние некоторых тритерпеновых гликозидов на синтез белка в культуре клеток костного мозга. Изв.АН СССР, Сер.биологич., 1971, 1,137.

6. Анисимов М.М., Щбглов В.В., Стоник В.А., Кульга А.Л., Левина Э.В., Левин B.C., Еляков Г.Б. Сравнительное изучение антигрибковой активности тритерпеновых гликозидов тихоокеанских голотурий. Докл.АН СССР, 1972, 207, 3, 7II-7I3.

7. Анисимов М.М., Щеглов В.В., Кузнецова Т.А.,Еляков Г.Б. Чувствительность клеток Candida albicans к действию тритерпеновых гликозидов дальневосточного трепанга stichopus japonicus

8. Selenka . Микробиология, 1973, 42, 4, 667-671.

9. Анисимов М.М., Щеглов В.В., Киселева М.И. Влияние некоторых тритерпеновых гликозидов на проницаемость плазматических мембран для аминокислот в дрожжевых клетках Sacharo-myces carlsbergenes . -Антибиотики, 1978, I, 66-69.

10. Анисимов М.М., Чирва В.Я. О биологической роли тритерпеновых гликозидов. Успехи совр.биол., 1980, 90, 3/6/, 351-364.

11. Антонов В.Ф. Липиды и ионная проницаемость мембран. М.: Наука, 1982

12. Ашмарин И.П., Воробьев А.А.Статистические метода в микробиологических исследованиях. Гос.изд.мед.лит.,, Л. ,1962,180

13. Батраков С.Г., Гиршович Е.С., Дрожжина Н.С.Т^итерпе-новые гликозиды с антигрибковой активностью, выделенные из морской кубышки Cucumaria japonica. Антибиотики, 1980, 6, 408411.

14. Бе се дно ва Н.Н., Смолина Т.П., Михейская Л.В., Оводо-ва Р.Т. Иммуностимулирующая активность липополисахаридов сине-зеленых водорослей. Ж.микробиол., 1979, 12, 75-79.

15. Биологически активные вещества гидробионтов новый источник лекарств./ Частные вопросы теории и практики/. Под ред.О.Г.Саканделидзе, Р.Е.Кипиани. - Кишинев: Штиинца, 1979, 247 с.

16. Бдюгер А.Ф., Векслер Х.М., Новицкий И.Н. Клиническая иммунология кишечных инфекций.- Рига: Звайгзне, 1980, I06-II8.

17. Буркин А.А. Поадшение чувствительности метода выявления иммунотропной активности. Хим.-фарм.курн., 1978 , 7, 14.

18. Вальдман А.А. Об изучении инфекционных заболеваний при помощи экспериментальных моделей. Вестн.АМН СССР, 1951, 3, 31-37.

19. Вальдман А.А. Опыт экспериментального анализа инфекционного процесса. Медгиз, 1964, 216 с.

20. Ванеева Н.П., Цветкова Н.В., Жукова Л.Ф., Елкина С.И., Сергеев В.В. Антигенный состав цротективных фракций s.typhimurium . Ж.микробиол., 1978, 10, 73-76.

21. Ван дер Варден Б.Л. Математическая статистика. М.;

22. Йзд.иностр.лит., I960, 434 с.i

23. Водопьянов С.О. К характеристике первичного иммунологического ответа при иммунизации коклюшными антигенами с помощью реакции розеткообразования. В кн.: Совет студенческого научного общества им.И.Р. Тархяишвили, Тбилиси, 1978, 71-72.

24. Воробьев А.А., Васильев Н.А. Адъюванты (неспецифические стимуляторы иммуногенеза). М.: Медицина, 1969, 206 с.

25. Губанов И.А., Либизов Н.й., Гладких А.С. Поиски сапо-нинсодержащих растений во флоре Средней Азии и Южного Казахстана. Фармация, 1970, 19, 3, 23-31.

26. Гурин И.О., Ажгихин И.О. Биологически активные вещества гидробионтов источник новых лекарств и препаратов. - М. : Наука, 1981, 5.

27. Гусев А.А., Муравьев В.К., Михалусев В.И., Коган Л.М., Вечерко Л.П. Гипсофилин адъювант в противоящурной вакцине. -В кн.: Актуальные проблемы ветеринарной вирусологии,-Владимир,1977, 166-168.

28. Гусев А.А. Сравнительное изучение импортных и отечественных адъювантов иг класса гликозидов. Дис.канд. .-Владимир,1978, 162 с.

29. Гусев А*А., Муравьев В.К. Изучение зависимости между адьювантным, гемолитическим, токсическим и раздражающим действием сапонинов. В кн.: Актуальные проблемы ветеринарной вирусологии. Владимир, 1978, 72-73.

30. Елкина С.И. Значение фазового состояния Н-антигена сальмонелл мышиного тифа в экспериментальной инфекции и иммунитете. Дис.канд., Москва, 1969,, 129 с.

31. Еляков Г.Б., Стоник В.А., Афиятуллов Ш.Ш., Калиновс-кий А.И., Шарыпов В.Ф., Коротких Л.Я. Нативные генины из голотурий. Докл.АН СССР, 1981, 259, 6, 1367-1369.

32. Жизнь животных. М.: Просвещение, 1968, 2, 212.

33. Жукова Л.Ф., Энтеральная иммунизация антигенными комплексами сальмонелл и шигелл в эксперименте. Дис.канд. fМосква, 1980 , 167 с.

34. Загороднов М.В., Салажов Е.Л. Получение диагностической ящурной сыворотки от морских свинок и определение адыовант-ных свойств сапонина. Бюлл.ВИЭВ, 1976, 24, 28-30.

35. Зайцев В.П., Ажгихин И.С., Гандель В.Г. Комплексное использование морских организмов. М.: Пищевая промышленность1980, 191.

36. Иммунологические адъюванта. Доклад Научной группы ВОЗ. Всемирная организация здравоохранения, 1978, 44 с.

37. Клишевич В.П., Зайкова Э.Ф. Неспецифические реакции ивщунитета в цроцессе формирования брюшнотифозного бактерионосительства. В кн.: Воцросы краевой инфекционной патологии, Тюмень, 1974, 61-63.

38. Козловский Г.А., Носов Н.й., Ибрагимов А.Н. Влияние количества сапонина, степени очистки и режима инактивации на иммуногеннук активность вакциаы. Тезисы докладов научно-производственной конференции ВГНКИ. М., 1972, 50-51.

39. Кондратенко Г.П., Тарадайко И.В., Жадинский Н.В. Влияние рифампицина, продигиозана, пирогенала и их комбинаций на взаимодействие перитонеалышх макрофагов с сальмонеллами. -Микробиологич.журн.» 1979, 41, 6, 679-683.

40. Корепанова Е.А., Попов A.M., Анисимов М.М. Действие три-терпеновых гликозидов на ионную проницаемость холестеринсодер-жащих бислойных липидных мембран. Докл.АН СССР, 1980, 252, I26I-I263.

41. Кост Е.А. Сцравочник по клиническим лабораторным методам исследования.- М.: Медицина, 1975, 382 с.

42. Кудаева О.Т., Лозовой В.П., Козлов В.А. Гетерогенность антителообразуюпдах клеток у высокоотвечавщи± и нивкоотвечающих линий мышей. Иммунология, 1980, 5, 27-29.

43. Кузнецов Е.А., Ширко Г.Н. Особенности формирования про-тивококлюшного иммунитета в эксперименте. Ж.микробиол., 1980, 4, 60-65.

44. Ляшенко В.А., Воробьев А.А. Молекулярные основы иммуно-генности антигенов. М.: Медицина, 1982, 9, 213.

45. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофяле и макрофаге. Новосибирск: Наука СО, 1983 , 254 с.

46. Миллз Е.Л., Куи П.Г. Метаболическая активность грануло-цитов при фагоцитозе. В кн.: Исследование фагоцитоза в клинической практике. М.;, Медицина, 1983, 78-91.

47. Мошиашвили И.Я. Ультразвуковые растворимые антигены и эритроцитарные диагностикумы микробов рода Bordetella. Дис. канд., Москва, I969-, 189 с.

48. Мошиашвили И.Я. Способ получения жгутиковых антигенов.- Авторск.свидет. № 506622 от 7.06.1974г.

49. Мошиашвили И.Я. Способ получения О-антигена. Авторск. свидет. № 555575 от 27.12.1976г.

50. Мошиашвили И.Я. Способ получения эритроцитарных диаг-ностикумов. Авторск.свидет. & 648228 от 27.09.1977г.

51. Муравьев В.К., Онуфриев В.П., Шоршнев В.И., Никонов В.И. О цротивоящурном иммунитете у крупного рогатого скота.-Ветеринария, 1974, I, 43-44.56. 1У{уратова К.П. К биологии микробов паратифозной группы.- Арх.биол.наук, 1929, 29, 4, 521-536.

52. Нейрохимия. Под ред.цроф. М.И.Прохоровой. Л.: из-во ленинградского университета, 1979, III-I30.

53. Николаенко Н.И. Практическая ценность хлороформвакцины в борьбе с ящуром. Сов.ветеринария, 1938, 4, 5.

54. Николаенко Н.И. Изыскание биологических методов активной борьбы с ящуром. Сб.реф.научн.конф., Омск, 1941, 2, 39-43.

55. Пантелеев Э.И., Егорова О.С. Генетическая детерминированность антителогенеза. В кн.: Общие вопросы патологии. Итоги науки и техники, М., 1972, 3, 44-84.

56. Першин Б.Б. Вакцинация и местный иммунитет. Л.: Медицина, 1980, 3.

57. Петров Р.В., Хаитов P.M., Батырбеков А.А. Миграция стволовых клеток Т- и В-лимфоцитов у высоко- низкоотвечающих на эритроциты барана линий мышей. Ж.микробиол., 1976, 9, 51-54.

58. Петров Р.В., Хаитов P.M., Манько В.М., Михайлов А.А. Контроль и регуляция имадунного ответа. Л. .- Медицина, 1981,310 с.

59. Петров Р.В., Кабанов В.А., Хаитов P.M., Некрасов А.В., Алексеева Н.Ю., Апарин П.Г., Елкина С.И. Способность конъюгатов бактериального полисахарида с синтетическими полиэлектролитами давать иммунизирующий эффект. Иммунология, 1983, 5, 40.

60. Петров Р.В., Хаитов P.M., Атауллаханов Р.И. Иммуногенетика и искусственные антигены. М.: Медицина, 1983, 192.

61. Покровский А.А., Тугельян В.А. Лизосомы. М.: Наука, 1976, 310.

62. Покровский В.И., Авербах М.М., Литвинов В.И., Рубцов И.В. Приобретенный иммунитет и инфекционный процесс. М.: Медицина, 1979, 270 с.

63. Покровский В.И. Актуальные проблемы сальмонеллеза. В кн.: Актуальные вопросы эпидемиологии, микробиологии, иммунологии кишечных инфекционных заболеваний. - Ташкент, Медицина УзССР, 1980, 36-38.

64. Попов A.M., Анисимов М.М., Иванов А.С. Особенности мембранной активности некоторых тритерпеновых гликозидов. Антибиотики, 1982, 27, 4, 36-40.

65. Попов A.M., Ровин Ю.Г., Лихапкая Г.Н., Анисимов М.М., Руднев B.C. Особенности действия тритерпенового гликозида голо-турина А на бислойные липид-стериновые мембраны. Докл. АН СССР, 1982, 264, 4, 987-990.

66. Попов A.M. Характеристика мембранной активности тритерпеновых сапонинов. Антибиотики, 1982, 27, 4, 276-280.

67. Последние достижения в клинической иммунологии. Под ред.Р.А.Томпсона. М.: Медицина, 1983 , 389.

68. Прилепин Н.А., Семенов Б.Ф. Неспецифическое действие коклюшной вакцины на иммунологическую реактивность мышей. -Ж.микробиол., 1980, 59-62.

69. Прилепин Н.А., Семенов Б.Ф. Вакцина против коклюша как индуктор клеток-супрессоров, угнетающих местную реакцию трансплантат против хозяина. Ж.микробиол., 1980, 8, 76-79.

70. Прилепин Н.А. Коклюшная вакцина как не специфический модулятор иммунологической реактивности животных. В кн.: Семинар молодых ученых по медицинской микробиологии и инфекционной иммунологии, М., 1981, 19-21.

71. Прилепин Н.А., Семенов Б.Ф. Индукция коклюшной вакциной в эксперименте неспецифических и специфических Т-супрессоров, угнетающих функцию В-клеток. Ж.микробиол., 1981, 9, 91-96.

72. Пронина Н.А. Изучение сапониновой термовакцины из куль-турального вируса ящура А22» -Дис.канд., Владимир, 1969 , 194 с.

73. Рахманов А.И., Павлов В.Г., Удалых М.Г., Дудников А.И. Иммуноморфологические реакции при применении противоящурной вакцины с различным содержанием адъювантов и антигена. Ящур. Тем. сб.работ ВНЙЯИ. Владимир, 1974, 2, I20-I2I.

74. Салов В.Ф. Электронно-микроскопическое и гистохимическое исследование стенки легочной альвеолы, в цроцессе образования иммунитета при вакцинации БЦЙ. Дис.канд., М., 1967, 177 с.

75. Самойлов А.В., Гиршович Е.С. Антибиотические свойства тритерпеновых гликозидов морских животных класса Hoiothuroidea .Антибиотики, 1980, 4, 307-313.

76. Свиридов А.А. Опыты применения сапонина для повышения иммуногенных свойств вирус-вакцины Новосибирской НИВС цротив ящура. Сб.научных работ Новосибирского НИВС, 1968,3, 87-91.

77. Семенов В.Ф. Тенденция в области конструирования вакцин. Ж.микробиол., 1982, I, 3-8.

78. Синяшин Н.И., Лобачева Л.А. Щадящий метод выделения растворимых антигенов из патогенных бактерий. В кн.: Использование разных методов в изучении и изготовлении вакцин и анатоксинов, М., 1964, 8-9.

79. Сметанина О.Ф., Левина Е.В., Стоник В.А. Стерины. некоторых видов бурых водорослей Японского моря.- В кн.: Всесоюзный симпозиум по биоорганической химии, Владивосток, 1975, 24.

80. Тарадайко И.В., Кондратенко Г.П., Мишин В.В., Гриценко Л.З. Взаимодействие макрофагов с сальмонеллами и влияние на этот процесс биологически активных веществ.- В кн.:Стафилококковые инфекции и персистенция микроорганизмов. М., 1980, 46-48.

81. Тетерятников В.П. Изменение функциональной активности клеток мононуклеарной фагоцитирующей системы после воздействия иммуностимуляторов. -Дис.канд., Москва, 1983s 124 с.

82. Уикли Б. Электронная микроскопия для начинающих М.: Мир, 1975 , 324 с.

83. Ухина Т.В. Исследование проницаемости гемато-офтальми-ческого барьера для гормонов и их влияние на лизосомы тканей глаза. Дис.канд., Смоленск, 1980 t 133 с.

84. Учитель И.Я. Макрофаги в иммунитете. М.'Медицина, 1978 , 198 с.

85. Фейгин A.M., Белоусова И.И., Терешин И.М. Роль структуры стерина в комплексообразовании с полиеновыми антибиотиками. Антибиотики, 1978, 12, 1079-1083.

86. Фрейдлин И.С. Некоторые аспекты регуляторных функций макрофагов. Иммунология, 1983, 2, II.

87. Шуба Л.И., Станиславский Е.С. К изучению показателей гуморального иммунитета у больных пищевой токсикоинфекцией сальмонеллезной этиологии. Ж.микробиол., 1970, 5, 97-99.

88. Щеглов В.В. Изучение антифунгальной активности тритер-пеноидов, стероидов и их гликозидов. Дис.канд., Владивосток, 1977, 199 с.

89. Щеглов В.В., Анисимов М.М., Попов A.M., Себко И.Г. Влияние некоторых тритерпеновых гликозидов на проницаемость плазматических мембран для УФ-поглощающих веществ в дрожжевых клетках Saccharomyces carlabergensis. Антибиотики, 1979,1. 49-55.

90. Anderson E.B., Amirault H.J. Important variables in granulocyte chemiluminescence. Proc.Sci.Exp.Biol.Med., 1979, 16?, 139-145.

91. Anisimov M.M., Fronert E.B., Eusnetsova I. A., Elyakov G.B. The toxic effect of triterpene glycosides from Stichopus japonicus Selenka on early embriogenesis of the sea urchin. -Toxicon, 1973, 11, 109-111.

92. Anisimov M.M., Shentsova E.B., Sheglov V.V., Shumilov Yu.H., Rasskazov V.A., Strigina L.I., Chetyrina N.S., Elyakov G.B. Mechanism of cytotoxic action of some triterpene glycosides. Toxicon, 1978, 16 (3), 207-208.

93. Anisimov M.M., Prokofieva K.G., Korotkikh L.Y., Kapws-tina I.I., Stonic V.A. Comparative study of cytotoxic activityof triterpene glycosides from marine organisms. Toxicon, 1980, 18, 221.

94. Assa Y., Gestetner В., Ghet I., Henis Y. Fungistatic activity of lucern saponins and digitonin as releted to sterols. Life Sci., 1972, 11, 637-647.

95. Assa Y., Sh any S., Gestetner В., Tencer Y., Birk Y., Bondi A. Interaction of alfalfa saponins with components of the erytrocyte membrane in hemolisis. Biochim. et biophys., Acta,' 1973, 307, 1, 83.

96. Bangham A.D. Harne R.W. Action of saponin on biological cell membranes. Nature, Lond., 1962, 196, 952.

97. Baslow Ш.Н. Marine Pharmacology. Baltimore, 1968,286 p.

98. Basu N., Rastogi R.P. Triterpenoid saponins and sapo-genins. Ehytochem., 1967, 6, 1248-1270.

99. Berlinschi C., Papadopol M. Immunisation research against Anjeszky disease by means of an adsorbed saponin treated cultuvated virus vaccine. Lucr.Inst.Cereet.Vet.Bioprep.

100. Pasteur, 1964, 3(1), 71-84.

101. Bomford E. Saponin and other haemolysins (vitamin A, aliphatic amines, polyene antibiotics) as adjuvants for SRBC in the mouse. Int.Arch.Allergy appl.Immun., 1980, 63, 170177.

102. Brown P. The use of ac ethylethyleneimine in the production of inactivated FMD vaccines. J.Hyg.(Lond.), 1963, 61, 337.

103. Cairus S.D., Olmsted C.A. Effect of Holothurin on sarcoma-180 and B-16 melanoma tumors in mice. Gulf .Res.Rests., 1973, 4, 2, 205-213.

104. Cantanzaro P.J., Howard M.D., Schwarts H., Craham R. Spectrum and possible mechanism of carrageenan cytotoxicity.-Am.J.Pathol., 1971, 64, 387-404.

105. Chanley J.D., Ledeen R., Wax J., Nigrelli R.P., So-botka H. Holothurin. I. The isolation properties and sugar components of holothurin A. J.Am.Chem.Soc., 1959, 81, 51805183.

106. Chanley J.D., Mazzetti Т., Sobotka H. The holothuri-nogenins. Tetrahedron, 1966, 22, 1857»

107. Chanley J.D., Rossi C. The holothurinogenins.- II Methoxylated neo-holdthurinogenins. Tetrahedron, 1969, 25, 1897-1910.

108. Charlier G., Strobbe R., Debecq J., Leunen J. Studies about the adjuvant activity of saponin fractions in foot-and-mouth desease vaccines. Arch.exp.Vet .Med., 1973, 27, 783.

109. Cohn Z.A. The activation of mononuclear phagocytes: fact, fancy and future. J.Immunol., 1978, 121, 813-816.

110. Collins P.M. Vaccines and cell-mediated immunity.-Bacteriol., Rev., 1974, 38, 371-402.

111. Cunningham A.I. A method of increased sensitivity for detecting single antibody-forming cells. Nature, 1965, 207, 1106-1107.

112. Dalsgaard K. Thin-layer chomatographie fingerprinting of commercially available saponins. Dansk.Tidsskr.Farm., 1970, 44, 327-331.

113. Dalsgaard K. Saponin adjuvants. I The presence of a non-dialysable fraction of Quillaja saponaria Mollina with adjuvant activity in foot-and-mouth disease vaccines. - Bull, off.int.Epiz., 1972, 77, 1289-1295.

114. Dalsgaard K. Saponin adjuvants. II The influence of dialysis of saponin on the local irritating effect.- Bull. Off.int.Epiz., 1972, 77, 1297-1301.

115. Dalsgaard K. Saponin adjuvants. Ill Isolation of substance from Q.uillaja saponaria Moline with adjuvant activity in foot-and-mouth disease. - Arch.ges.Virusforsch., 1974, 44, 243-254.

116. Dalsgaard K., Merethe H., Tensen K.T.Srensen. Saponin adjuvants. 17. Evaluation of the adjuvant Quil-A in the vaccination of cattle against foot-and-giouth disease. Acta Vet.Scand., 1977, 18(3), 349-360.

117. Deply L.P. Sur les anavacins antiaphteux. Bull. Acad.vet.Fr., 1959, 32, 571-577.

118. Desowitz R.S. Plasmodium berghei: immunogenic enchanc-з ment of antigen Ъу adjuvant addition. Expl.Parasit., 1975, 38, 6-13.

119. Dettbarn W.D., Higman H.B., Bartels E., Podleski 0?. Effects of marine toxins on electrical activity and1.* effluxof excitable membranes. Biochem.Biophys.Acta, 1965, 94, 472.

120. Dourmashkin R.R., Dougherty K.M., Harris R.T.C. Electron microscopic observation on Rous sarcoma virus and cell membranes. Uature, 1962, 194, 1116-1119.

121. Eisenstein Т.К., Angerman C.R., O'Donell S., Specter S., Friedman H. Relationship between protective immunity, mitogenicity and B-cell activation by Salmonella vaccins. -Advanc.exp.Med.Biol., 1980, 121 B, 39.

122. Elyakov G.B., Anisimov M.M., Prokofyeva N.G., Kuz-netsova T.A., Pronert E.B. Sensitivity of rat marrow cells in culture to the tfixic effect of stichoposide A from Sticho-pus japoniens Selenka. Toxicon, 1972, 10, 299-300.

123. Elyakov G.B., Stonie V.A., Levina E.V., Slanke V.P., Kuznetsova T.A., Levin V.S. Glycosides of marine invertebrates. I A comparative study of the glycoside fractions of Pacific Sea cucumbers. - Сотр.Biochem.Physiol., 1973, 44 B, 2, 325-336.

124. Elyakov G.B. Some aspects of Echinoderms chemistry. -P.E.C.S: Int.Conf.Chem. and Biotechnol.Biologically Act., Nature Prod., Sofia, 1981, 2, 437-453.

125. Espinet R.G. Nuevo tipo de vacuna antiaftosa a complejo gluco-virico. -Gac.Vet.(B.Aires), 1951» 13, 268.

126. Pargeaud D. Recherches ' sur quelgues proprietes biologiques des saponins en correlation avec leur action adjuvante sur l'immunite. Thise de Docteur Ingenieur, Lyon, 1973.

127. Fishel C.W., Pross S.H., Klein I.W. The effect of Bordetella pertussis on sette-forming cells present in the peritoneal fluids of mice. Y.RES, 1976, 19, 2, 97-108.

128. Friess S.L., Standaert F.G., Whiteomb E.R., Nigrel-li R.F., Chanley T.D., Sobotka H. Some pharmacologic properties of holoturin on active neurotoxin from the sea cucumber.-T.Pharmacol.exp.Therap., 1959, 126, 323.

129. Friess S.L., Parent R.C., Chanley T.D., Mezzetti T. Some structural requirements underlying holoturin A interaction with synaptic chemoreceptors. -Biochem.Pharmacol., 1965, 14, 1237-1247.

130. Friess S.L., Durant R.C., Chanley T.D., Fash F.T. Role of the sulphate charge center in irreversible interaction of holothurin A with chemoreceptors. Biochem.Pharmacol., 1967, 16, 1617-1625.

131. Friess S.L., Chanley J.D., Hudak W.V., Weems H.B. Interaction of the Echinoderm toxin Holothurin A and its de sulfated derivative with the cat superior cervical ganglion preparation. Toxicon, 1970, 8, 211-219.

132. Friess S.L. Mode action of marine saponins on neuromuscular tissues. Fed.Proc., 1972, 31 (3), 1146-1149.

133. Galea M., Tzortzakis. Essai d*immunisation antiaphteu^ se du cobaye a l'aide du virus saponine. C.R.Soc.Biol., 193?, 1, 21-23.

134. Gestetner В., Assa Y., Henis Y., Birk Y., Bondi A. Lucerne saponines. IV. Relationship between their chemical constitution and heamolytie and antifungal activities. J.Sci. Pood, and Agricult., 1971, 22, 168-172.

135. Gestetner В., Assa Y.f Henis Y., Tencer Y., Rotman II., Birk Y., Bondi A. Interaction of lucerne saponins with sterols. -Biochem. et biophys. acta, 1972, 270, 181-187*

136. GtiLrard H.C., Chirutamra U., Smitinondaaa P., Supavi-lai P. A propos du vaccin formole saponin^ contre la F±£vre Aphteuse de type Asia I. Bull.Off.int.Epiz., 1964, 61 (9-10), 1025-1057.

137. De Groof R.C., Ifarahashi T. The effect of Holothurin A Л on the resting membrane porential and conductance of squid axon. Eur.J.Pharmacol., 1976, 36 (2), 337-346.

138. Habermehl G., Volkwein G. Aglycones of the toxins from the Cuvierian organs of Holothuria forskali and a new nomenclature for the aglycones from Holothurioideae. Toxicon, 1971, 9, 319.

139. Mc Hardy N. Immunisation of mice against Trypanosoma cruzi: The effect of chemical treatment of immune serum on epimastigote vaccine. Tropenmed. parasitol., 1978, 29 (2), 215-222.

140. Mc Hardy N. Passive protection of mice against infection with Trypanosoma cruzi with plasma: the use of blood-derife ved and vector bug-derived trypomastigete challenge. Parasitology, 1980, 80, 3, 471-478.

141. Heller J.H., Paslernak V.Z., Ranson J.P., HellerM.S. A new reticuloendothelial system stimulating agent (Restim) from shark livers. Nature, 1963, 129, 904-905.

142. Hiai S., Oura H., Tsukada K., Hirai Y. Stimulating effect of Panax ginseng extract on RNA polymerase activity in rat liver nuclei. Chem. and Pharmac. Bull., 1971, 19, 8, 1656.

143. Hibbs I., Lambert L., Remington I. Possible role of macrophage-mediated nonspecific cytotoxicity in tumor resistance. Nature, 1972, 235, 54, 48-50.

144. Hyplauer A., Tomasec I. Vakzinationsversuche gegen Schweinepest mit saponisierten Virus. Vet.Arch., 1936, 6, 369-372.

145. Hyslop H.St.G., Morrow A.W. The influence of aluminium hydroxide content, dose, volume and the inclussion of saponin on the efficacy of inactivated foot-end-mouth disease vaccines. Res.vet.Sci., 1969, 10, 109.

146. Iensen K.A. Immunitatsstudien . Z.Immun.forsch., 1929, Bd.63, 298-326.

147. Iijima M., Higashi Т., Sanada S., Shoji J. Effect of ginseng saponin on nuclear ribonucleic acid (RHA) metabolism. I. R2JA synthesis in rats treated with ginsenosides. -Chem.pharm.Bull., 1976, 24, 2400.

148. Jakowska Sj. Higrelli R.F., Murray P.M., Veltri A.M. Hemopoietic effects on Holothurin, a steroid saponin from the sea cucumber, Actinopyga agassizi, in Rana pipiens. Anat. Rec., 1958, 132, 459.

149. Jenkin C.R. In antigenic basis for virulence in stams of Salmjtaiella typhimurium. J.Exp.Med., 1962, 115, 4, 731-743.

150. Jenkin C.R., Rowley D. Basis for immunity to typhoid in mice and the question of "cullular immunity". Bacterid. Rev., 1963, 27, 391-404.

151. Jenkin C.R., Rowley D. Partial purification on the "protective" antigen of Salmonella typhimurium and its distribution amongst varions strains of "bacteria. Aust.J.Exptl. Biol, and Med. Sci., 1965, 43, 1, 67-78.

152. Лете И.К., Uordin A.A. Plaque formation in agar Ъу single antibody producing cells. Science, 1963, 140, 3565, 405-412.

153. Johnston R.B., Godzik C.A., Cohn Z.A. Increased superoxide-anion production by immunologicaly activated and chemically elicited macrophage. J.exp.Med., 1978, 148, 115-123.

154. Johnson P., Heal R.A., Gall B. Protective effect of kilied trypanosoma vaccines with incorporated adjuvants. -Nature, bond., 1963, 200, 83.

155. Jolles P., Paraf. Chemical and biological basis of adjuvants. Hew York - Heidelberg-Berlin: Springer-Verlag, 1973, 150.

156. Eauffmami 3?., Mitsui C. Vergleichende Untersuchun-gen in der Typhus-Paratyphus Cruppe. Z.Hyg., 1930, Bd III, 749.

157. Kitagawa I., Sugawara Т., Yosioka I. Saponin and sapogenol. XV. Antifungal glycosides from the cucumber Stichopus japonicus Selenca. 2. Structure of Holotoxin A and Holo-toxin B. Chem.pharm.Bull., 1976, 24, 2, 275-284.

158. Mackowiak C., Peterman H.G., Camand R., Lang R. Un vaccin anti-aphteux trivalent saponine a volume reduit, prepare a parlir du virus de culture. Bull.Acad.Vet., 1959, 31, 313-318.

159. Mackowiak C., Fontaine J., Camand R., Petermann H.G. Etude de la duree de l'immunite conferee par le vaccin antiaphteux. Bull.Off.Intern.Epiz., 1960, 53, 781-790.

160. Maier Т., Oels H.C. Role of the macrophage in natural resistence to salmonellosis in mice. Infection and Immu— nity, 1972, 6, 438-443.

161. Malinowskaya H.Y. Chemical stimulator effect on immunity of ducklings against viral hepatitis. Yyestsi Acad. Havuk BSSR, 1980, 2, 116-118.

162. Mishra K.C., Mallick B.B. Phagocytic activity of cells in non-specific enhansement of resistance of Salmonella enteritidis infection in laboratory mice. Indian YetJ., 1982, 59 (5), 335-340.

163. Mita A., Shida R., Kas IT., Shoji J. Enchancement and suppression in production of IgM-antibody in mice treated with purified saponin. Biomed., 1979, 31, 223-227.

164. Mitchell G.H., Richards W.H.G., Yoller A., Dietrich P.M., Dukor P. Nor-MDP, saponin, Corynebacteria and pertussis organism as immunological adjuvants in experimental malaria vaccination of macaques. Bull. Ш0, 1979, 57, 189-197.

165. Nigrelli R.P. 2?he effect of holothurin of fish andmice with sarcoma 180. Zoologica, 1952, 37, 2, 89-90.

166. Nigrelli R.P., Zahl P.A. Some biological characteristics of holothurin. Proc.Soc.Exptl.Biol.Med., 1952, 81, 379.

167. North R.J. The concept of the activated macrophage. J.Immunol., 1978, 121, 806-809.

168. Olechnowitz A.P. Saponin als Adjuvans in der Maul-und-KLauenseuche vakzine. Arch.exp.Vet.-Med., 1961, 15, 2, 471-472.

169. Olsen R.A. Triterpeneglycosides as inhibitors of fiuigal grown and metabolism. I. Effect on growth endogenous respiration and leakage of UV-absorbing material from various fungi. Ehysiol.Plant., 1971, 24, 534-543.

170. Olsen R.A. Triterpenglycosides as inhibitors of fungal growth and metabolism. 5» Role of the sterol contents of some fungi. Physiol.Plant., 1973, 28, 507-515*

171. Olsen R.A. Triterpenglycosides as inhibitors of fungal growth and metabolism. 8. Induced leakage of nucleotide materials. Physiol.PIant., 1975, 33, 75-82.

172. Osoba D. Some physical and radiobiological properties of immunologically reactive mouse spleen cells. J.Exp.Med., 1970, 132, 368-383.

173. Oura H., Hakashima S., Tsukada K., Ohta Y. Effect of Radix Ginseng extract on serum protein synthesis. Chem* and Pharmac.Bull., 1972, 20, 5, 980.

174. Oura H., Hiai S., JTabetaai S., ZTakagawa H«, Kura-ta Y., Sasaki N. Effect of Ginseng extract on endoplasmic reticulum and ribosome. PI anta med., 1975, 28, 1, 76.

175. Oura H., Hiai S., Odaka Y., Yokozawa T. Studies on the biochemical action of ginseng saponin. I. Purification from ginseng extract of the active component stimulating serum protein biosynthesis. J.Biochem., 1975, 77, 1057-Ю65.

176. Patel V., Tappel Al. J3 -glucosidase and <K-xilosi-dase of rat kidney. Biochem.Biophys.Acta, 1969, 191, 3, 653*662.

177. Pettit G.R., Herald G.L., Herald D.L. Antineoplastic Agents XLV* Sea cucumber cytotoxic saponins. J. of Pharmaceutical Sci", 1976, 65, 10, 1558-1559.

178. Priscilla A.C. Immunocompetent cells in resistance to bacterial infection. Bacterid.Rev., 1976, 40, 2, 284-313.

179. Quie P.G., White J.G., Holmes В., Good R.A. In vitro bactericidal activity of human polymorphonuclear leukocytes: diminnished activity in cronic granulomatous disease. J." Clin.Investigation, 1967, 46, 668-679.

180. Ramon G. Procede*s pour accroitre la production des antitoxines. Ann.Inst.Pasteur, 1926, 40, 1*.

181. Reynolds E.S. The use of lead citrate at high i>H as an electronopaque stain in electron microscopy. J.of Cell Biology, 1963, 17, 208-212.

182. Richards W.H.G. Active immunisation of chicks against Plasmodium gallinaceum by inactivated homologous sporozoites and erytrocytic paracites. Nature, Lond., 1966, 212, 14921494.

183. Richou R., Thibault P. Augmentation de la production l'antitoxine tetanique chez le cobaye par addition a l'anato-xine specifique de quantites variables de saponine. C.R.Soc. Biol., 1936, 121, 748-749.

184. Richou R., Jensen R., Belin C., Schaster G. Recher-ches sur la saponine substance adjuvant et stimulante de 1*immunise. Rev.Immunol., 1964, 28, 1-2, 49-62.

185. Richou R., Richou H. Essais preliminares pour assyer de determiner le mode d*action des substances adjuvantes et stimulants de l'immunite. Rev.Immunol., 1965, 29, 4-5, 221231.

186. Richou R., Lallouette P., Richou H. Activite com-paree de diverses substances adjuvantes de l'immunite. -Rev.Immun., 1969, 33, 155-174.

187. Ruggieri G.D., S.T. and R.P. Nigrelli. The effect of holothurin a steroid saponin from the sea cucumber, on the development of the sea urchin. Zoologica, 1960, 45, 1-6.

188. Sato M., Scheider D. Microscopic-electrophysiolo-gic investigation of internodes of medulated nerve fibers under the influence of saponin and electrolytes. Z.Haturforsch, 1954, 9 b, 644-654.

189. Schadelin J., Schadelin R., Mandell G. Chemilumines-cence of phagocytic cells. Critical Rev.Clin.Lab.Sci., 1980, Hov., 1-19.

190. Schlosser E. Sterol dependent membranlytic action of aaponines. Phytopath.Z., 1972, 74, 91-94.

191. Segal R., Mansour D.M., Zaitschek D.Y. Effect of ester groups on the haemolytic action of same saponins and sapogenins. Biochem.Pharmacol., 1966, 15, 1411-1416.

192. Segal R., Schlosser E. Role of glycosidases in the membranlytic antifungal action of saponins. Arch.Microbiol., 1975, 104, 147-150.

193. Segal R. The protective action of glycyrrhizin against saponin toxicity. Biochem.Pharmacol., 1977, 26, 7, 643-645.

194. Shany S., Bernheimer A.W., Cruschoff P.S., Kim K.S. Evidence for membrane cholesterol as the common binding site for cereolysin, streptolysin 0 and saponin. Mol. and Cell. Biochem., 1974, 3, 179-186.

195. Sharma R.U., Datt H.S. Studies on the inactivated gel, saponified gel and saponified vaccines against type 0, A, С and Asia-I of foot-and-mouth disease in mice. Ind.J.Anim. Sci., 1972, 42, 9, 693-694.

196. Smith R.D., James M.A., Ristic M., Aikawa M., Mur-gui&C.A.V. Bovine babesiasis: Protection of cattle (Bos taurus) with culture-derived soluble" Babesia bovis antigen. Science,1981, 212,(4492), 335-338.

197. Solyom P.A., Makar A., Pazekas, Roith J., Czelleng P. Immunogenicity studies of foot-and-mouth desease vaccines at different concentration of antigen and saponin. An.Rech. Vet., 1980, 11(1), 35-44.

198. Stiffel C., Eouton D., Bouthillier Y., Biozzi G. Genetic modification of macrophage functions in relation to antibody responsiveness and resistance to infection. Advanc. exp.Med.Biol., 1980, 121 B, 3-11.

199. Stonehower Cooper H. Coral Lands quoted by Saville-Kent W. In the Great Barrier Reef of Australia.- London, 1893, 293.

200. Strobbe R., Leunen J., Mammericky M., Debeca J. Valeur a lonque echeance du vaccin anti-aphteux adsorbe saponin trivalent. Bull.Off.int.Epiz., 1964, 61(9-10), 10591077.

201. Sullivan T.D., Ladue K.T., Nigrelli R.F. The effect of holothurin, a steroid saponin of animal origin on Krebs-2 ascites tumors in Swiss mice. Zoologica, 1955, 40, 49-51.

202. Suter E. Interaction between phagocytes and pathogenic microorganisms. Bacteriol.Rev., 1956, 20, 94-132.

203. Tata J.R. Hormones and the synthesis and utilization of ribonucleic acids. In: Progress in nucleic acid research and molecular biology, H.-Y., Acad.Press, 1966, 5, 191-250.

204. Thomson A.W., Horne C.H.W. Toxicity of various car-rageenans in the mouse. Br.J.exp.Pathol., 1976, 57, 455-459.

205. Thron S.D., Patterson R.N., Press S.L. Further biological properties of the sea cucumber toxin Holothurin A. Toxiсol.Appl.Pharmacol., 1963, 5,1-11*

206. Thron S.D., Durant R.C., Fress S.L. Neuromuscular and cytotoxic effect of holothurin and related saponins at lowconcentration levels. Toxicol., Appl. Pharmacol., 1964, 6, 182-196.

207. Thron S.D., Hemolysis by holothurin A, digitonin and quillaja saponin's estimates of the required cellular lysin-up-takes and free lysin concentrations^ J.Pharmac.exp.Therap., 1964, 145, 194.

208. Vacek L., Bretislav S. Comparison of physical, chemical and biological properties of saponins. Gunma.J.Med.Sci., 1962, 11, 1-6.

209. Wehmeyer P. The influence of saponins on the immunizing property of foot-and-mouth disease vaccines of varying ages. Nord.Vet.-Med., 1969, 21, 92-96.

210. WHO Scientific Grou Cell-mediated immunity and resistance to infection. WHO. Techn.Rep., 1973, Ser. no 519, 6-64.

211. Wulff G. Heuere Entwicklungen auf dem Saponingebiet. Apotheker Ztg., 1968, 108, 23, 797.

212. Yamanouchi T. Study of poisons contained in holothu-rians. Teikoku Gakushiin Hohoku, 1942, 17, 73269. Yamanouchi T. Distribution of poison in the bodyof Holothuria vagabunda. Zool.Mag., 1943, 55, 87-88.