Изучение возможности применения ловастатина для защиты растений от болезней и разработка технологии производства статинов на основе использования новых штаммов-продуцентов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.11, кандидат биологических наук Джавахия, Вахтанг Витальевич

• Джавахия, Вахтанг Витальевич
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Джавахия, Вахтанг Витальевич

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Использование статинов в качестве ингибиторов биосинтеза стеринов.

1.1.1. Физико — химическая характеристика ловастатина и компактина.

1.1.1.1. Ловастатин и его свойства.

1.1.1.2. Компактин и его свойства.

1.1.2. История открытия и исследования статинов.

1.1.3. Стерины и их роль для растений, патогенов и вредителей.

1.1.3.1. Фитостсрины - растительные стерины.

1.1.3.2. Биологическая роль стеринов в клетках растений.

1.1.4. Роль фитостеринов для стеринзависимых организмов.

1.1.5. Продуценты статинов родов Aspergillus и Penicillium.

1.2. Культивирование грибов — продуцентов экономически важных вторичных метаболитов.

1.2.1. Основные способы культивирования штаммов-продуцентов.

1.2.2. Аэрация микроорганизмов.

1.2.3. Техника для проведения ферментации.

1.2.4. Вспомогательные операции.

1.2.5. Сырье для микробиологических процессов.

1.2.6. Культивирование грибов A. terreus и P. citriiium в лабораторных ферментерах.

1.3. Количественный анализ статинов в культуральной жидкости.

1.4. Оптимизация условий биосинтеза ловастатина в культурах

Aspergillus terreus.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Патогенны.

2.2. Штаммы-продуценты статинов.

2.3. Методы изучения антивирусной активности и фунгнтоксичности ловастатина in vitro.

2.4. Метод нммуноферментного анализа.

2.5. Методы исследования влияния ловастатина на развитие возбудителей септориоза и стеблевой ржавчины на изолированных листьях растений пшеницы.

2.6. Вегетационные опыты по оценке фптотоксичности ловастатина на проростки пшеницы.

2.7. Методы проведения ферментаций штаммов-продуцентов.

2.8. Методы хроматографического анализа содержания ловастатина и компактина в культуральнон жидкости.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1.1.Влияния ловастатина на грибы фитопатогены in vitro.

3.1.2. Влияние ловастатина на развитие септориоза и стеблевой ржавчины па отрезках листьев пшеницы.

3.1.3. Изучение активности ловастатина против вируса табачной мозаики.

3.1.4. Исследование влияния ловастатина на устойчивость картофеля к вирусам в полевых условиях.

3.1.5. Влияние ловастатина на развитие проростков пшеницы в вегетационных экспериментах.

3.2. Оптимизация процессов производства ловастатнна и компактина с использованием новых высокопродуктивных штаммов продуцентов.

3.2.1. Подбор оптимальных параметров для ферментации гриба Aspergillus terreus - продуцента ловастатина.

3.2.1.1. Влияние количества растворенного кислорода (рСЬ) на биосинтез ловастатина.

3.2.1.2. Влияние количественного и качественного состава питательной среды на биосинтез ловастатина.

3.2.2. Подбор оптимальных параметров для ферментации гриба Penicillium citrinum продуцента компактина.

3.2.2.1. Влияние количества растворенного кислорода (рСЬ) на биосинтез компактина.

3.2.2.2. Влияние количественного и качественного состава питательной среды па биосинтез компактина.

3.3. Разработка модифицированной методики очистки и выделения ловастатина для получения препаратов защитного свойства, пригодных для использования в сельском хозяйстве.

4. ВЫВОДЫ.

5. СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение возможности применения ловастатина для защиты растений от болезней и разработка технологии производства статинов на основе использования новых штаммов-продуцентов»

Актуальность проблемы. Защита растений от патогенов и вредителей является экономически значимой проблемой и важным направлением научных исследований. Преобладающими методами защиты растений до сих пор являются различные способы обработки посевов и семенного материала синтетическими пестицидами, созданными на основе химических соединений. Химические пестициды обеспечивают эффективную защиту сельскохозяйственных культур от широкого спектра вредителей и фитопатогенных микроорганизмов, но являются ксенобиотиками, которые могут загрязнять окружающую среду и сельскохозяйственную продукцию и представлять опасность для здоровья человека и животных. Во многих случаях для достижения надежного защитного эффекта необходимо проводить многократную обработку пестицидами, что усиливает нежелательные последствия их применения. Существенным недостатком защитных технологий, использующих синтетические пестициды, является возникновение резистентных к ним форм патогенов и вредителей. Это снижает эффективность применения препаратов, вынуждает увеличивать дозы и количество обработок, что в конечном итоге приводит к потере экономической целесообразности применения химических пестицидов.

Использование веществ биологического происхождения, по-видимому, является более безопасным для окружающей среды методом защиты растений от патогенов и вредителей, позволяющим преодолеть некоторые нежелательные последствия химического метода. В частности, одним из путей решения проблемы резистентности может быть создание защитных средств «непрямого действия» па основе природных соединений, мишенью которых являются не ключевые этапы метаболизма самого патогена, вмешательство в которые вызывает его гибель, а биохимические процессы взаимодействия с растением-хозяином, например, нарушение питательной цепочки в системе растение-паразит, или те пути биосинтеза у микроорганизма, которые необходимы для реализации его патогенных свойств.

В качестве защитных препаратов «непрямого действия» могли бы быть использованы ингибиторы биосинтеза стеринов в растительных тканях (Тарлаковский, 1977; Метлицкий и др. 1980; Лутова и Ходжайова, 1998). Известно, что фитопаразитические нематоды и насекомые, а также оомицеты (сем. Phythiaceae) не способны синтезировать необходимые для своего развития стерины и (или) их предшественники (Метлицкий и др., 1976; Щербакова JI.A., и др. 1980; Зиновьева и др. 1989). Эти организмы получают стерины из растительных тканей, то есть, в этом смысле, они полностью зависят от стеринов, синтезируемых растениями-хозяевами. Вмешательство в биосинтез фитостеринов может приводить к нарушению жизненного цикла у данных патогенов и вредителей. Известно так же, что некоторые широко используемые в сельском хозяйстве фунгициды являются ингибиторами биосинтеза стеринов в грибах (Kato, 1986; Koller, 1987).

В течение последних десяти лет интенсивно изучаются вещества, относящиеся к новому поколению высокоспецифичных ингибиторов биосинтеза стеринов — так называемых статинов, которые представляют собой продукты вторичного метаболизма у ряда грибов. Эти соединения являются лидерами продаж на мировом фармацевтическом рынке в категории препаратов снижающих уровень холестерина. Статины отличаются от вышеупомянутых фунгицидов чрезвычайно высокой специфичностью действия и способностью ингибировать фермент окси-3-метилглутарил-КоА-редуктазу (ОМГ-КоА-редуктазу), функционирующий на ранних этапах биосинтеза стеринов (Serizawa and Matsuoka, 1991). Недавно было обнаружено, что компактен тормозит рост некоторых грибов, поражающих растения, и ослабляет проявление симптомов вызванных ими заболеваний (Украинцева и др., 2007) В этой связи представляется актуальным изучение действия другого типичного представителя статинов - ловастатина на фитопатогенные грибы, а также, на их растения-хозяева.

В Лаборатории молекулярной биологии ВНИИФ в течение многих лет проводятся исследования грибов из рода Aspergillus и Penicillium, которые синтезируют структурно сходные ингибиторы биосинтеза стеринов, относящиеся к группе статинов. Ловастатин и компактин, образуемые этими грибами, являются типичными представителями данной группы. Выбор этих статинов в качестве объектов исследований для изучения возможности их применения в сельском хозяйстве, помимо способности данных веществ специфически ингибировать синтез стеринов, обусловлен также отсутствием у этих соединений антибиотической активности и выраженной токсичности по отношению к теплокровным.

К началу наших исследований, старшим научным сотрудником лаборатории молекулярной биологии ВНИИФ Т.М. Воиновой были получены стабильные мутанты грибов A. terreus и P. citrinum, способные продуцировать, соответственно, ловастатин и компактин в количествах, в сотни раз превышающих исходную продуктивность коллекционных штаммов. Полученные высокопродуктивные штаммы A. terreus и Р. citrinum значительно отличались от исходных коллекционных штаммов по морфолого-культуральным свойствам и потребностям в компонентах питательной среды. Продуктивность этих мутантов при выращивании в качалочных колбах оказалась достаточной для их использования в промышленных целях, однако было необходимо разработать технологии производства ловастатина и компактина в ферментационных установках.

Актуальной являлась также разработка простой и сравнительно дешевой схемы выделения и очистки целевого продукта ловастатина из получаемой при ферментации культуральной жидкости, поскольку опубликованные в научной литературе или запатентованные методы выделения и очистки статинов, рассчитанные на получение высокоочшценных медицинских препаратов, отличаются сложностью и дороговизной. Сравнительно простая и дешевая схема получения ловастатина могла бы найти применение при создании препаратов для защиты растений, поскольку в сельском хозяйстве могут быть использованы вещества с менее высокой степенью очистки, чем в фармакологии.

Цели и задачи. Основной целью исследований было изучение возможного защитного действия ловастатина против фитопатогенов. Кроме того, была поставлена цель разработать оптимальную технологическую схему ферментации для вновь полученных мутантных штаммов-продуцентов ловастатина и компактина и разработать простую и сравнительно дешевую технологическую схему выделения и очистки ловастатина.

Задачи исследований:

1. Изучение фунгитоксичности ловастатина по отношению к фитопатогенным грибам.

2. Изучение защитного действия ловастатина против возбудителей септориоза, стеблевой и бурой ржавчины пшеницы.

3. Сравнение действия ловастатина и фунгицидов триазолового ряда Дивиденда и Фоликура.

4. Изучение влияния ловастатина на болезни, вызываемые фитовирусами.

5. Оценка влияния ловастатина на рост и развитие растений.

6. Поиск оптимальных концентраций компонентов питательной среды для достижения максимальной продуктивности штаммов грибов - продуцентов ловастатина и компактина.

7. Подбор оптимальных параметров аэрации способствующих максимальной продуктивности этих штаммов.

8. Разработка простой и дешевой технологической схемы получения целевого продукта для использования его в качестве средства защиты растений.

Новизна научной работы. Впервые показана способность ловастатина подавлять рост фитопатогенных грибов Stagonospora nodorum, Magnaporthe grisea, Colletolrichum atramentarhim и Bipolaris sorokiniana. Впервые обнаружено, что ловастатин может блокировать биосинтез грибного меланина. Впервые продемонстрирована антивирусная активность ловастатина.

Подобраны оптимальные параметры ферментации для глубинного культивирования в ферментерах вновь полученных высокопродуктивных штаммов грибов A. terreus и Р. citrinnm.

Разработана простая и сравнительно дешевая технологическая схема выделения и очистки ловастатина, на которую получен патент №2261901 (Джавахия и др., 2005).

Практическое значение. Данные по защитному действию ловастатина против патогенов растений были подтверждены в исследовательском отделе итальянской фирмы ISARGO (Милан, Италия). Подписан договор о совместных испытаниях, планируется патентование пестицидной активности ловастатина и технологии производства ловастатина для использования его в качестве средства защиты растений от патогенов и вредителей.

На основе данных по оптимизации процессов ферментации, выделения и очистки ловастатина был разработан лабораторно-технологический регламент производства ловастатина, на базе которого совместно с сотрудниками Института биохимии и физиологии микроорганизмов РАН и фирмы ООО «БИОБЭК» был разработан полупромышленный регламент на производство ловастатина. Налажено производство пробных партий ловастатина на производственной базе ООО «БИОБЭК» -Ефремовском заводе биопрепаратов (получена справка о внедрении). Разработанная технология выделения ловастатина запатентована (совместный патент с ООО

БИОБЭК»). Разработанные технологии ферментации, выделения и очистки ловастатина, прошли успешные пилотные испытания и масштабируются на фармацевтическом предприятии ОАО «Красфарма» (получена справка о внедрении).

Апробация работы. Результаты работы были доложены на 26-й конференции по передовым биотехнологиям в России (Япония, Токио, 2003); на первой и второй Международной конференции «НАУКА - БИЗНЕС - ОБРАЗОВАНИЕ, Биотехнология -Биомедицина - Окружающая среда» (Пущино, 2004, 2005); на втором Московском международном конгрессе "Биотехнология: состояние и перспективы развития" (Москва, 2003).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ.

Заключение диссертации по теме «Защита растений», Джавахия, Вахтанг Витальевич

4. ВЫВОДЫ

1. Обнаружена фунгитоксичность ловастатина при контактном действии in vitro на фитопатогенные грибы Stagonospora nodorum, Magnaporthe grisea, Colletotrichum atramentarium и Bipolaris sorokiniana.

2. Показано ингибирующее действие ловастатина на меланиногенез у фитопатогенных грибов, что свидетельствует о существовании у данного статина механизма, позволяющего использовать его в качестве фунгицида непрямого действия.

3. Установлено, что обработка листьев табака ловастатином приводит к подавлению вирусной инфекции, вызванной ВТМ.

4. Антивирусный эффект ловастатина, выражавшийся в задержке накопления антигенов МВК, подтвержден в полевых опытах на картофеле.

5. Показана способность ловастатина снижать степень развития возбудителей септориоза, стеблевой и бурой ржавчины на листьях пшеницы.

6. Установлено что, минимальная эффективная защитная доза ловастатина от септориоза для пшеницы существенно (на два порядка) ниже минимальной дозы, вызывающей ретардантный эффект.

7. В результате оптимизации параметров культивирования мутантов гриба А. terreus был увеличен выход целевого продукта ловастатина с 6,2 до 9,7 г/л.

8. Был оптимизирован процесс биосинтеза компактина новыми мутантами гриба Р. citrinum, что позволило увеличить выход целевого продукта компактина с 6,4 до 10,2 г/л.

9. Разработан лабораторный технологический регламент производства ловастатина, который послужил базой для разработки сотрудниками ИБФМ им. Г. К. Скрябина по заказу ООО «БИОБЭК» опытно-промышленного регламента на производство ловастатина.

5. СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Джавахия В. В., Воинова Т. М. "Оптимизация условий культивирования гриба Aspergillus terreus - продуцента ловастатина - вещества оказывающего защитное влияние на растения". Современные системы защиты растений от болезней и перспективы использования достижений биотехнологии и генной инженерии // Материалы Всероссийского совещания, Голицыно, 16-18 июля 2003, с. 198-201.

2. Dzhavakhiya V.V. Voinova Т.М. "Optimization of fermentation conditions of culture Aspergillus terreus". 2-й Московский Международный Конгресс Биотехнология: состояние и перспективы развития, Москва 10-14 ноября 2003, ч. 1, с.286.

3. Джавахия В. В., Украинцева С. Н., Воинова Т. М. "Технологии получения микробиологическим путем холестерин-ингибирующих реагентов-статинов'7/ Сборник тезисов Международной Конференции «Наука и Бизнес: поиск и использование новых биомолекул: биоразнообразие, окружающая среда, биомедицина.» Пущино, 10-12 марта, 2004, с.235

4. Dzhavakhiya V.V„ Voinova Т.М. Newly developed strains-producers of cholesterol-lowering drugs - statins - with industrial level of productivities, Fermentation Technology for industrial production and Recovery Technologies of statins // The Proceedings for the 26th ISTC Japan Conference on Advanced Biotechnologies in Russia/CIS. Япония, Токио, 19 сентября, 2003, с. 149-159.

5. V.V. Dzhavakhiya, Т.М. Voinova. Optimization of Fermentation Conditions for High Lovastatin Producing Mutant 45-50 of Fungus Aspergillus terreus II Biotechnology and Industry. Nova Science Publisher Inc. New York, ISBN1-59454-116-7, 2004, pp. 81-87.

6. Джавахия В .В., Воинова Т.М., Украинцева С.Н. Изучение процесса ферментации штамма гриба Penicillium crustosum - продуцента компактина // Сборник 2-я

Международной конференции «Наука - Бизнес - Образование» Пущино, 10-13 мая 2005, с.71-73.

7. Джавахия В.В., Воинова Т.М., Подбор оптимальных условий для культивирования мутантов гриба Penicillium citrinum - продуцента компактина // Сборник тезисов 3-й Московского Международного конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития». Москва 14-18 марта 2005, с. 95

8. V.V. Dzhavakhiya., Т.М. Voinova. Development of optimal conditions for production of compactin by strain 18-12 of Penicillium citrinum in labscale fermenter // Biotechnology in Biology and Medicine. Nova Science Publishers Inc. New York, ISBN: 1-60021-092-9, 2006, pp.285-292.

9. Джавахия В .В., Петелина Г.Г. Влияние ловастатина на фитопатогенные грибы // ArpoXXI, Вып. 4-6, 2008, с. 33 -35.

10. Патент RU 2261901 «Штамм гриба Aspergillus terreus 44-62 — продуцент ловастатина, промышленный способ выделения ловастатина и способ лактонизации статинов» 2005. Авторы: Джавахия В.Г., Воинова Т.М., Вавилова Н.А., Санцевич Н. И., Винокурова Н. Т., Кадомцева В. М, Джавахия В. В., Мишин А. Г.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Джавахия, Вахтанг Витальевич, 2008 год

1. Аиба Ш., Хемфри А., Миллс Н. Биохимическая технология и аппаратура. М., 1975. стр. 78.

2. Аверьянов А.А., Лапикова В.П., Петелина Г.Г. Защита грибными меланинами от фотодинамического повреждения. Известия Академии Наук СССР. 1986. №4: стр. 541 -549.

3. Аверьянов А. А., Лапикова В. П., Петелина Г. Г. 1989. Повышенная чуствительность пигментных мутантов Pyricularia oryzae к токсическим выделениям листьев риса. Физиология растений, т 36, в. 6: стр. 1088 — 1095.

4. Билай В. И., Основы общей микологии, Высшая школа, 1989. стр. 154-166.

5. Билай В. И., Коваль Э. 3., Аспергиллы. Киев. Наук. Думка, 1988. стр. 177179.

6. Бирюков В. В., Кантере В. М. Оптимизация периодических процессов микробиологического синтеза. М., 1985. стр. 97-114.

7. Васюкова Н. И., Платонова Т. А., Неполноценность тканей растений в качестве среды для питания паразита как одна из защитных реакций растений к фитопатогенным организмам. Биохимия иммунитета, покоя, старения растений. Москва. Наука. 1984 Гл 4.

8. Васюкова Н. И., Давыдова М. А., Озерецковская О. JL, Метлицкий Л. В., Сегаль Г. М. Микология и фитопатология. 1977. 11, 6, 480.

9. Васюкова Н. И., Щербакова Л. А., Чаленко Г. И., Озерецковская О. Л., Метлицкий Л. В. Прикладная биохимия и микробиология. 1978. 14, стр. 4.

10. П.Воинова Т.М., Вавилова Н.А., Терехова В.А., Деблова З.Н., Дьяков Ю.Т. Изменчивость фитопатогенного гриба Pyricularia oryzae cav. И. Характеристика морфологических мутантов гриба. Биологические науки. 1984. №1: стр. 78-82

11. Виестур У. Э., Кристапсонс М. Ж., Былинкина Е. С., Культивирование микроорганизмов, Москва, Пищевая промышленность, 1980. стр. 157-168.

12. Виестур У. Э., Кузнецов А. М., Савенков В. В., Системы ферментации. -Рига: Зинатне, 1972. стр. 304.

13. Гальцева Р. Д. Стеринообразование у дрожжевых организмов. Москва. Наука. 1980. стр.244.

14. Гальцова Р. Д., Вакина И. П., Микробиология. 1964. стр. 33, 390.

15. Инге-Вечтомов. Метаболизм стеринов и защита растений. Билиогия. 1997. стр 64-67.

16. Дорофеев В. Л., Арзамасцев А. П., Садчикова Н. П. Проект общей фармакопейной статьи «Высокоэффективная жидкостная хроматография». Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация. 2004. стр. 166-172.

17. Жуков Ю.Н., Вавилова Н.А., Воинова Т.М., Хурс Е.Н., Хомутов P.M. Аминоалкилфосфинаты новые эффективные ингибиторы меланиногенеза и фунгициды. Доклады Академии Наук СССР, Биохимия, Биофизика, Молекулярная Биология. 2004. т. 398, № 5: стр. 1 - 3.

18. Кантере В. М. Учебники и учебные пособия для студентов высших учебных заведений М. Теоретические основы технологии микробиологических производств. Агропромиздат, 1990.-271с.

19. Лапикова В. П. и Джавахия В.Г. Ранние стадии развития Pyricularia oryzae Cav. на листьях риса. Микология и фитопатология. 1987. 21,4: стр. 358 365.

20. Лутова Л.А., Ходжайова Л.Т. "Молекулярно-генетические аспекты устойчивости высших растений к вредителям сельского хозяйства", Генетика, 1998, том 34, №6, стр. 719-729.

21. Межиня Г. Р., Кристапсонс М. Ж., Управляемее получение инокулята при глубинном культивировании микроорганизмов. М.,: ОНТИТЭИ микробиопром, 1977. стр. 42.

22. Матвеев В. Е. Научные основы микробиологической технологии. Кинетика развития и инактивации микробных популяций, асептика, масштабирование. — М., Агропромиздат, 1985. стр. 224.

23. Матвеев В. Е., Смирнов Е. В. Термическая стерилизация растворов Сахаров. М., ОНТИТЭИ микробиопром, 1976. стр. 64.

24. Метлицкий Л. В., Озерецковская О. Л., Васюкова Н. И. Фитостерины и их роль во взаимоотношениях растений с паразитарными грибами (на примере грибов Pythiaceae). Успехи современной биологии. 1980. Т.89. стр. 28-41.

25. Метлицкий Л. В., Озерецковская О. Л., Васюкова Н. И., Давыдова М. А., Сегаль Г. М. Роль стеринов во взаимоотношениях картофеля и Phytophtora infestans. Доклады АН СССР, 1976. 276, № 1, 244.

26. Озерецковская О. Л., Ильинская Л. И., Васюкова И. И. Механизмы индуцирования элиситорами системной устойчивости растений к болезням. Физиология растений. 1994. стр. 103-107.

27. Озерецковская О.Л. Клеточные и молекулярные механизмы иммунитета картофеля. Генная и клеточная инженерия М: Наука, 1990. стр. 46-52.

28. Пасешниченко В. А. Биосинтез и биологическая активность растительных терпеноидов и стероидов. Итоги науки и техники. Сер. Биохимия. М., 1987. стр. 187-188.

29. Печуркин Н.С., Тресков И. А. Анализ кинетики роста и эволюции микробных популяций (в управляемых условиях). Новосибирск, 1975. стр. 88-94.

30. Платонова Т. А, Васюкова Н. И., Давыдова М. А. Прикладная биохимия и микробиология. 1977.13, 6, 907.

31. Перт С. Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. М., 1978. стр. 321-318.

32. Работнова И. JL, Позмогова И. Н. Хемостатное культивирование и ингибирование роста микроорганизмов. М., 1979. стр. 231-232.

33. Работпова И. JI. Теория и практика непрерывного культивирования. М., 1980. стр. 69-73.

34. Тарлаковский С.А. Стерины: их метаболизм, функции и роль во взаимоотношениях растений с вредными организмами. Биохимические аспекты проблем защиты растений от болезней, вредителей и сорняков: Тр. ВИЗ Ра. 1977. стр. 156-169.

35. Хефтман Э., Биохимия стероидов, Москва. 1972. стр. 44.

36. Ходжайова Л.Т., Левашина Е.А., Усольцева М.Ю., Бондаренко Л.В., Лутова Л.А. "Изменение содержания растительных стеринов как биологической борьбы с фитостерин-зависимыми организмами." Генная инжененрия и экология, 2000, №1 стр. 124-128.

37. Физер Л., Физер М. Стероиды, Москва. 1964. стр. 137-144.

38. Федосеев К. Г. Физические основы и аппаратура микробного синтеза биологически активных соединений. М., 1977. стр. 304.

39. Abid Ali Khan М.М., D.C. Jain, R.S. Bhakuni, Mohd Zaim and R.S. Thakur. 1991. Occurrence of some antiviral sterols in Artemisia annua. Plant Science, 75:161 -165.

40. AltshulR., Hoffer A., Stephen J.D. Influence of nicotinic acid on serum cholesterol in man. Archive of Biochemistry and Biophysics, 1955.54: 558 — 559.

41. Benveniste P., Rahier A. Target Sites of Sterol Biosynthesis Inhibitors on Plants. Target Sites of Fungicidal Action. Ed. Roller W. D. London CRC Press, 1991.

42. Bizukojc, M., Pawlowska, В., and Stanislaw Ledakowicz Supplementation of the cultivation media with B-group vitamins enhances lovastatin biosynthesis by Aspergillus terreus. J. Biotechnol., 2007. 127:258-268.

43. Buckland. B.C., H. Fasten, K. Gbewonyo. G. Hunt and D. Jain. 1985. Fermentation exhaust gas analysis using mass spectrometry. Bio/Technology. 1985. 3: 92-98.

44. Buckland B.C. The translation of scale in fermentation processes: the impact of computer process control. Biotechnology. 1984. 2: 875-893.

45. Bean G. A. Phytosterols, «Advances in Lipid Research», 1973, v. II.

46. Bri G. Т., Drew S.W., and B.C. Buckland. Fermentation process development within a computer controlled pilot plant. Computers in Fermentation

47. Technology: Progress in Industrial Microbiology Vol. 25 (Bushnell, M.H., ed.) Science Publishers. Amsterdam. 1988. 151-194.

48. Calam С. T. Secondary metabolism as an expression of microbial growth and development. Folia Microbiology. 1979. 24:276-85.

49. Casas Lopez, J.L., Sanchez Perez, J.A., Fernandez Sevilla, J.M., et al. Production of lovastatin by Aspergillus terreus: effects of C:N ratio and the principal nutrients on growth and metabolic production. Enzyme Microbial Technol., 2003. 33, 270277.

50. Casas Lopez, J.L., Sanchez Perez, J.A., Fernandez Sevilla, J.M., et al. (2004) Fermentation optimization for the production of lovastatin by Aspergillus terreus: use of the response surface methodology. J. Chem. Technol. Biotechnol., 79, 1119-1126.

51. Casas Lopez, J.L., Sanchez Perez, J.A., Fernandez Sevilla, J.M., et al. (2005) Pellet morphology, culture rheology, and lovastatin production in cultures of Aspergillus terreus. J. Biotechnol., 116, 61-77.

52. Child J. J., Defago G., Haskins R. H. Canadian J. The effect of cholesterol and polyene antibiotics on the permeability of the protoplasmic membrane of Pythium PRL2142 Microbiology. 1969. 15: 599.

53. Chisti, Y. (2003) Sonobioreactors: using ultrasound for enhansed microbial productivity. Trends Biotechnol., 21: 89-93.

54. Costet al., Importance of sterols acquired through host feeding in synovigenic parasitoid oogenesis. ScienceDirect. 1987. 79-84.

55. Endo, A. The discovery and development of HMG-CoA reductase inhibitors.1.pid Res. 1978. 33: 1569-1582.

56. Endo, A., M. Kuroda and Y. Tsujila. ML-236A, M1,-236B and MI.-236C, New inhibitors of cholesterogenesis produced by Pinicillium citrinum. J. Anlibiot. 1976. 29: 1346 -1348.

57. Endo A., N. Kitano and S. Fuji. Effects of ML-236B, a competitive inhibitor of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase, on cholesterol metabolism. Advances of Experimental and Medical Biology. 1978. 109: 376.

58. Endo A. Mevinolin a new hypocholesterolemic agent, produced by a Monascus species. J. Antibiotics. 1979. 32: 852 854.

59. Endo A. and M. Kuroda. Citrinin, an inhibitor of cholesterol synthesis. Journal of Antibiotics (Japan) 1976. 29: 841-843.

60. Endo A., Kuroda M. and Tanawn K. Competitive inhibition of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase by ML-236A and ML-236B fungal metabolites having hypocholesterolemic activity. FHBS Lett. 1976. 72: 323-326pp.

61. Elliot C. G., Hendrix M. R., Knights B. A., Parker W. Interactions between steroids in the growth of Phytophthora Nature. 1964. 203-427.

62. Hajjaj, H., Niederberger, P., and Duboc, P. (2001) Lovastatin biosynthesis by Aspergillus terreus in a chemically defined medium. Appl. Env. Microbiol., 67: 2596-2602.

63. Hasie-wood G. A. Steroids in organisms, «Annals of the New York Academy of Sciences», 1960, v. 90: 877.

64. Hendrix J.W., Esterification of 4-14C-cholesterol by Phytophthora cactorum Mycologia. 1970. 58: 307.

65. Heftmann E., Biochemistry of plant steroids, «Annual Review of Plant Physiology», 1963, v. 14; Bean G. A., Phytosterols, «Advances in Lipid Research», 1973, v. 11.

66. Herran, N.S., Casas Lopez, J.L., Sanchez Perez, J.A., and Yusuf Chisti Effects of ultrasound on culture of Aspergillus terreus. J. Chem. Technol. Biotech. 2004. 8993.

67. Hieb W.F. Sterol Requirement for Reproduction of a Free-Living Nematode. Science. 1968. 778-780.

68. Hollander W. and Chobanian A. Effect of an inhibitor of cholesterol biosynthesis. Boston Medicine Quarter. 1959. 10: 37-44.

69. Gbewonyo K., Hunt G., Buckland B. Interactions of cell morphology and transport process in the lovastatin fermentation. Biopress Engineering. Rahway, USA, 8 1992. 1-7.

70. Goldfarb S., H.C. Pitot. Improved assay of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase. Journal of Lipid Research. 1971. 12: 512-515.

71. Goldsmith G. A., Hamilton J.G. and Miller O.N. Lowering of serum lipid concentrations. Mechanisms used by unsaturated fats, nicotinic acid and neomycin: excretion of sterols and bile acids. Archives of International Medicine, 1960. 105: 512-517.

72. Jain D.C., M.M. Abid Ali Khan, Mohd. Zaim and R.S. Thakur. 1990. Antiviral evaluations of some steroids and their glycosides of medicinal plant origin: A new report. National Academy of Sciences Letters. 13:41 -42.

73. Kumar, M.S., Jana, S.K., Senthil, v., et al. Repeated fed-batch process for improving lovastatin production. Process Biochem., 2000. 36: 363-368.

74. Lai LST, Kuo CM, Tsai SY, Influence of increased dissolved oxygen tensions by agitation on the secondary metabolite production by a mutant Aspergillus terreus in a 5L fermenter. J Chin Inst Chem Eng. 2001. 32: 42-135.

75. Lai, L-S.T., Pan, C.-C., and Tzeng, B.-K. (2003) The influence of medium design on lovastatin production and pellet formation with a high-producing mutant of Aspergillus Terreus in submerged cultures. Process Biochem., 38: 1317-1326.

76. Lai, L-S.T., Tsai, T.-H., Wang, T.C., Cheng, T.-Y. The influence of culturing environments on lovastatin production by Aspergillus terreus in submerged cultures. Enzyme Microbiol. Technol., 2005. 36: 737-748.

77. Manzoni, M., Bergomi, S., Rollini, M., et al. Production of statins by filamentous fongi. Biotechnol. Lett. 1999. 21: 253-257.

78. Maxwell. M. C. Principles of fermentation technology. Bergamo International Library of Science, Technology, Engineering and social Studies. 1992. 172-185p.

79. Novak N., Gerdin S., Berovic M., Increased lovastatin formation by Aspergillus terreus using repeated fed-batch process. Biotechnology. 1997. 19: 947.

80. Kato T. Sterol Biosynthesis in Fungi, a Target for Broad Spectrum Fungicides // Sterol Biosynthesis Inhibitors and Anti-Feeding Compounds. 1. Chemistry of Plant Protection Berlin, 1986. 288-312.

81. Koller W. Antifungal Agents with Target Sites in Ste-rols. Function and Biosynthesis. Target Sites of Fungicide Action/Ed. Koiler W. London: CRC Press, 1991. 70-82.

82. Kubo Y., Suzuki K., Furusawa I., Ishida N. and Yamamoto M. Relation ofappressorium pigmentation and penetration of nitrocellulose membranes by Colletotrichum lagenarium. Phytopathology. 1982. 72: 498 501.

83. Kubo Y., Suzuki K., Furusawa I. and Yamamoto M. Effect of tricyclazole on appressorial pigmentation and penetration from appressoria of Colletotrichum lagenarium. Phytopathology. 1982. 72: 1198 1200.

84. Kubo Y., Furusawa I. and Yamamoto M. Regulation of melanin biosynthesis during appressorium formation in Colletotrichum lagenarium. Experimental Mycology. 1984. 8: 364-369.

85. Kysilka R. Determination of lovastatin (mevinolin) and mevinolinic acid in fermentation liquid. Chromatograph. 1993.415.

86. Laughlin R. C. and T. F. Carey. Cataracts in patients treated with triparanol. The Journal of American Medical association. 1962. 181: 339-340.

87. Long-Shan T. Lai, Chen-Chang Pan, Bo-Kun Tzeng. The influence of medium design on lovastatin production and pellet formation with a high producing mutant of Aspergillus terreus in submerged cultures. Process Biochemistry. 2003. 1-10 pp.

88. Manzoni M., Rollini R., Bergomi S, Cavazzoni C. Production and purification of statins form Aspergillus terreus strains. Biotechnology Techniques, 1998, 529532.

89. Matsuoka, T. S. Miyakoshi, K. Tanzawa, K. Nakahara, M. Hosobuchi & N. Serizawa: Purification and characterization of cytochrome P-450 from

90. Streptomyces carbophilus. Biochemistry. 1989.184: 707-713.

91. Michniewicz, Kamienska. Cytokinin levels in leaves, leaf exudate and shoot apical meristem of Arabidopsis thaliana during floral transition. Naturwissenschaften. 1965. 52: 623.

92. Metz В., Kossen N., The growth of molds in the form of pellets a literature review. Biotechnology Bioengineering. 1983. 781-797.

93. Pollak О.J. Reduction of blood cholesterol in man ccirculation. Archives of International Medicine, 1953. 7: 702 706.

94. Kobayashi Т., Moo-Yong M., Oxygen transfer into mycelia pellets. Biotechnology Bioengineering. 1973. 15:27-45.

95. Keys A. Seven Countries: A Multivariate Analysis of Death and Coronary Heart Disease. Harvard University Press, Cambridge, MA. 1980. 381.

96. Raper J. R., Amer J., Heterokaryon incompatibility in imperfect species of Aspergillus Botanic. 1940. 26: 639.

97. Rodriguez Porcel, E.M., Casas Lopez, J.L., Sanchez Perez, J.A., et al. Effects of pellet morphology on broth rheology in fermentations of Aspergillus terreus. Biochem. Eng. J., 2005. 26: 139-144.

98. Serizawa N., Nakagawa K., Tsujita Y., Terahara A. and Kuwano H. 3a-hydroxy-ML-236B (3a-hydrocompactin) microbial transformation product of ML-236B (compactin). J. Antibiotic. 1983. 36:608-610.

99. Serizawa N., Nakagawa K., Furava K., Okazaki T. and Terahara A. Microbialhydroxylation of ML-236B (compactin): Studies on microorganisms capable of 3B-hydroxylation of ML-236B. J. Antibiot.1983. 36: 887-871.

100. Svoboda I., Feldlaufiter M. Neutral Sterol Metabolism in Insects Lipids. 1991. 26: 614-618.

101. Smedley McLean. Sterol metabolism of micro-organisms J. Biochemistry. 1922. 16: 370.

102. Starr P., Roen P., Freibrun J.L. Reduction of serum cholesterol by sodium D-thyroxin. Archives of International Medicine, 1960. 105: 830 842.

103. Shlosser E., Gottieb D. Sterols and the Sensitivity of Pythium Species to Filipin. Bacteriology. 1966. 91: 1080- 1968.

104. Siperstein M.D. Regulation of cholesterol biosynthesis in normal and malignant tissues. Current Topics of Cellular Regulations. 1970. 2: 65 — 100.

105. Siperstein M.D. and V.M. Fagan. Feedback control of mevalonate synthesis by dietary cholesterol. Journal of Biological Chemistry. 1966. 241: 602 609.

106. Sutherland, A., Auclair, K., and Vederas, J.C. (2001) Recent advances in the biosynthetic studies of lovastatin. Curr. Opin. Drug Discov. Dev., 4: 229-236.

107. Szakacs, G., Morovjan, G., and Tengerdy, R.P. Production of lovastatin by a wild strain of Aspergillus terreus. 1998. Biotechnol. Lett., 20: 411-415.

108. Tanazawa К., M. Kuroda and A. Endo. Time-dependent, irreversible inhibition of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase by citrinin. Biochimica et Biophysica. 1977. 488: 97 101.

109. Taupitz A. and K. Otaguro. The effects of estrogens on the serum cholesterol of male rats. Symposium der Deutschen Gesellschaft fur Endokrinologie, 1959. 430 — 432.

110. Takahashi J., Yamada K., Studies on the effects of some physical conditions on the submerged mold culture. Agricultural Chemistry. 1980. 100-103.

111. Thom C., Raper К. В., A manual of Aspergilli. London: Bailliere Tindal, Cox, 1945-373.

112. Thorm C., Church M. В., The Aspergilli. Baltimore: Williams, Wikins, 1925. 272.

113. Thorp J.M. and W.S. Warning. Modification of metabolism and distribution of lipids by ethyl chlorophenoxyisobutyrate. Nature, 1962. 194: 948 949.

114. Tennet, D.M., Siegel, M. E., Zanetti G. W., Kuron W. H., and Waif FJ. Plasma cholesterol lowering action of binding polymers in experimental animals. Journal of Lipid Researches. 1960 1:469-473.

115. Tennet, D.M., Siegel, M. E., Zanetti G. W., Kuron W. H., and Waif F.J. Plasma cholesterol lowering action of binding polymers in experimental animals. Journal of Lipid Researches. 1960. 1:469-473.

116. Venken M., Asard H., Geuns J. Senescence of oat leaves: changes in the three sterol composition and enzyme activities of the membrane. Plant science. 1991. 79: 3-11.

117. Wheeler M.H. and Greenblatt G.A. The inhibition of melanin biosynthetic reactions in Pyricularia oryzae by compounds that prevent rice blast disease. Experimental Mycology. 12: 151 160.

118. Whitaker A., Long P., Fungal pelleting. Process Biochemistry. 1988. 11: 27-31.

119. Yano Т., Kodama Т., Yamada K., Fundamental studies on the aerobic fermentation. Part 7. Oxygen transfer within a mold pellet. Agriculture. Biology. Chemistry. 1961. 558-580.

120. Zook M. N., Kuc J. Induction of sesquiterpene cyclase and suppression of squalene synthetase activity in elicitor treated or fungal - infected potato tuber tissue. Physiology. Molecular and Plant Pathology. 1991. 39: 377.