Изучение устойчивости Listeria monocytogenes и Yersinia enterocolitica в мясопродуктах при СВЧ - обработки тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, кандидат биологических наук Кожаева, Джульетта Каральбиевна

• Кожаева, Джульетта Каральбиевна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Кожаева, Джульетта Каральбиевна

1. Введение 2

2. Обзор литературы 8

2.1. Некоторые вопросы биологии возбудителя листериоза 8

2.2. Некоторые вопросы биологии возбудителя У еп1егосо1Шса 8 2.3 СВЧ- энергия 37

3. Материалы и методы 3.2. Результаты собственных исследований 56

3.2.1. Разработка оптимальной схемы выделения листерий из мясопродуктов 56

3.2.2. Определение пороговых показателей термичесой инактивации бактерий 3.2.3 Определение эффективности использования

СВЧ печей для термической инактивации листерий 72

3.2.4. Изучение временных параметров СВЧ- обработки на цельные образцы мясопродуктов для целей термоинактивации листерий 79

3.2.5. Определение влияния СВЧ-обработкина биологические свойства используемые при диагностических исследованиях на листериоз 81

3.2.6. Разработка оптимальной схемы выделения

У еп1егосо1Шса из мясопродуктов 83

3.2.7. Определения эффективности использования СВЧ печей для термической инактивации У ег^егосоНйса 91

ИРИЮЖЕ&ЙЕ

ВРЕМЕННОЕ НАСТАВЛЕНИЕ по выделению Listeria monocytogenes из мясофсдусгов.

1. Общие положения.

1.1. Л истер иоз - инфекционное заболевание из групгы зооантропонозоз, характеризующееся полиморфностью клинического фоявления, в последнее время 1<вк пищевая инфекция людей с тенденией к генерализации, сегтгикопиеемии, а так же поражению различных цэганов и систем жизнедеятельности у людей и квотных.

1.2. Листериоз относится к числу широко распссгранённых в мире инфекций, что обуслоаленно выраженной адаптационной способностью возбудителя. Исследования трёх последних десятилетий позволили сфсрмулирсеать заключение о повсеместном распостранении данной инфекции в России.

1.2. Так как по r-лелдунаршной классификации л истериоз относится к числу достаточно расгтостранённых пищевых инфещий последнего десятилетия, то основным путем заражения людей яалякяся пищевые фодукты и в частности мясофодукты.

1.3. Учитывая постоянно разрастающее количество фодуктов гаггания « быстрого фиготовления» и используемых для кулинарной обработки СВЧ - печи, необходима схема быстрого бактериологического метода контроля мясопродуктов на вс8мо)!<ную контаминацию Listeria monocytogenes

2. Материалы для исследования.

2.1. В баетериолсгическую лабораторию награвляюг не менее фа им мяса или мясофодукта, упакованную в водонефоницаемую тару и 'желательно в шрвые 1-3 часа после отбора. Если время доставки образцов свыше указанного срока, то материал допускается нафзлятъ в замороженном виде в термосе со льдом.

3. Порядок исследования материала.

Бактериологическое исследование фоводят з соответствии с филагаемой ниме схемой.

3.1. Первый этап ( 24-48 часа). Изучаемый пищевой фодукг (не менее г.) измельчают и смешивают со средой накопления в соотношении 1:8 (1 часть фодукта и частей среды) встряхивают в течение минуты и культивируют фи 28° С - часов. После чего изучаемый образец оправляют в холодильник на +4° С. Состав накопительной среды: Питательный бульон—16,0г. л Д-глкжоза 5,0 г.

3 Динатрий фосфат- 2,5 г.

4 ^шонийй-железо сульфат - иг. -г. Хлористый натрий ~5 г.

-Хлористый литий -15г.

Полимиксин «В» - тыс. ед. v Дистиллированная вода - 1000 мл. Первые шесть компонентов разводят в дистиллированной воде, доводя pH до 7,3 - 7,4 стерилизуют авггаславированием гри +120 С - минут. Охлаждают и добавляют раствор палимиксина «В» в мл физ.раствсра. Компоненты с по необходимо для поддержания >кизнедеятельности листерий, компоненты и составляют систему, замедляющую рост посторонней минрофлоры.

3.2. Второй этап. Через указанные сроки 1мл полученной бактериальной суспензии смешивают с мл 0,1 - 0,3 %-ного раствора КОН (растворенного в 5%-ном NaCl ) встряхивают и через минуту высевают на селективный агар.

В качестве твердей солективной питательной среды для вь¡деления листерий наилучшие результаты из дешевых, доступных по составу дала среда имеющую следующую рецептуру: .Агар «Д»

2.Хлористый натрий

3.Д - глюкоза

4.Аммоний - железо (И!) сульфат

5. Глицин

6. Хлористый литий

7. Пол им иксин « В» З.Дистиллированная вода Компоненты с по растворяют в дистиллированной воде доводя pH до 7,3 - 7,4, стерилизуют автоклавированием при +121 С - минут. Охлаждают до +50 С и добавляют раелвер палимиксина в мл физ. раствора. Селективными агентами являются компоненты с по номер. Хлористый литий и глицин ингибировали рост знтеробактёрий и бактерий семейства Pseudomones. Полимиксин подавлял рост энтера<а<ксе. температуре

22-С-проводяхклонирова ники-щ еншфикацмювыросших колоний по тестам указанным в таблице.

- 30,0 г.

- 5,0 г.

- 5,0 г.

- 50,0 мг

- 2,0 г.

- 15,0 г.

- 500тыс.ед.

- 1000мл.

Табл.

Характеристика биологических свойств листерий, штаммов первой серогругпы(шт.766) и второй серогрупгы(шт 634).

Шт. Шт. 634 i.W tUT iiii

Окраска по Граму + +

Подвижность: 37° С -

22 °С + + в - гемолиз + + каталаза + + ферментация: лактозы + + сахарозы + + глюкозы + + мальтозы + + манн ига - рамнозы + + дульцита - - арабинозы - ■ инозита - сорбита - ■ салицин + + галаетозы - ксилозы - раффинозы - эскулина + + фру1сгозы + +

Коньюсгивальная проба + + фоба .Антона)

Оптимальным решением является постановка на исследование не одной фобы исследуемого образца, а целой серии в 10-12 фоб. фи исследовании по третьему этап/ фозодят одновременно постансесу по всем необходимым тестам, что сокращает сра<и исследования еь!деленной культуры.

4,Оцен!са результатов бактериологического исследования.

4.1. Гр'А соответствии полученных результатов пэ тестированию выделенной культуры с вышеуказанными данными полученный бастериальный штамм физнают как бактериальную культуру вида Listeria rronocytogenes.

4.2. В случае если изучаемая бактериальная культура не типируется как бактерии вида Listeria monocytogenes, возможен вариант повторного использования бактериальной суспензии со средой накопления храня щейся в холодильнике фи +4° С.

4.3. Общие сроки бактериологического исследования материала в феделах суток.

Временное наставление разработали: от УГСХА соискатель "Меркулов А В., от КБГСХА - соискатель Ксмззева Д .К

Карашаев М.Ф.

ВРЕМЕННОЕ НАСТАВЛЕНИЕ по выделению Yersinia enterocolitica из мясофодуктов.

1. Общие положения.

И.Иерсиниоз -острое инфекционное заболевание из групгы зооантропонозов, характеризующееся тлиморфностью клинического фоявления, в первую очередь как гмщевая инфекция людей с тенденией к генерализации, сегттикопиеемии, а так >ie пфа>кению различных сргансв и систем жизнедеятельности у людей и животных. '

1.2. Иерсиниоз относится к числу широко расгюстранённых в мире инфекций, что обу'слсаленно выраженной адаптационной сгюсобнсстъю 'возбудителя. Исследования последнего десятилетия позволили сфермулироватъ заключение о повсеместном распостранении данной инфекции в России.

1.3. Так !сак по международной ¡слассификации кишечный иерсининиоз входит в число наиболее распостранённых пищевых инфекций, опережая по некоторым паозателям сальмонелл ёз, то основным путём заражения людей являются пищевые продукты и в частности глясогродуюъ!.

1.4. Учитывая постоянно разрастающее количество фодуктсе гмтания «. быстрого приготовления» и используемых для кулинарной обработки СВЧ - печи, необходима схема быстрого бактериологического метода контроля мясопродуктов на возмст-кную контаминацию Yersinia enterocolitica.

2. Материалы для исследования.

2.1. В бактериологическую лабораторию натравляют не менее грамм мяса или мясогродукта, упакованную в водонегроницаемую тару и >нелательно в первые 1-3 часа после отбора. Если время доставки образцов свыше указанного срока, то материал допускается нагрвлять в замороженном виде в термосе со льдом.

3. Порядок исследования материала.

Бактериологическое исследование гюсеодят в соответствии с прилагаемой них© схемой.

3.1. Первый этап ( 24-48 часов). Изучаемый мясофодукт(не менее г.) измельчают и смешивают со средой накопления - солевой - фосфатно-буферный раствор (0,85% Nad, КН2РО4 -0,45 г.,1Ча2НР04 -6,34г., ЬЬО - 1000 мл.) с % спиртовым раствором генцианвиолетта, в соотношении 1:5 (1 часть продукта и частей среды) встряхивают в течение минуты и культивируют фи +4°-С - часов. Через указанные сроки (24 часа в первую очередь, с дальнейшим сохранением в холодильнике исследуемой суспензии) мл полученной бактериальной суспензии смешивают с мл 0,5 %-ного раствора

КОН ( фиготсвленного по следующей методике: готовят стерильный 40% раствор КОН, из него в пробирку содержащего 7,9 мл., 5% стерильного раствора Nad, добавляют 0,1 мл. ) встряхивают и через минуту высевают на селективный агар. Параллельно на селективные сред& высевают и со среды накопления хранящейся в холодильнике, причём посев делают с верхней трети суспензии ( но не с поверхности) не взбалтывая среду. 3.2. Второй этап. Рост на селективных средах (24-48 массе).

В качестве селективного агара используют несколько сред.

На агаре Эндо parr изучаемых иерсиний- колонии мелкие, гладкие, слегка грозрачные. К часам, удаётся их детальнее рассмотреть.

Среда Серова даёт хорошие результаты к - часам - колонии интенсивно - красного цвета, матовые шероховатые, центр выпуклый.

Однако какйедсстаток данной селективной среды достаточно слоенный, по структуре состава : глюкоза -0,5 г., мочееина-0,5г., мопиоденово - кислый аммоний - 0,1 г.углекислый натрий безводный - 0,1 г., 30% водный, стерильный растЕср сухой >®лчи -2мл., 1,6 % водный раствор краски конгорот - 0,9 мл., 1,0% водный раствор генцианвиолета - 0,1 мл., сухой питательный агар -4,5 г., дистиллированная вода -100 мл., не все реактивы мо>кно найти.

Среда Иркутского НИИПЧИ (аналог БТС), сна выг^'скается как коммерческая и имеет следующий состав : >иелчь медицинская мл.,раствор NaOH 4% -10-12 капель, сухой питательный агар - г., глюкоза -10 г. мочевина 5г. 1,6% сгмртовый раствор бромтимолового синего - в мл., дистиллированная вода 1000 мл. В случае трудностей с её фиобретением её состав достаточно доступен и она легко готовится в лаборатории. К мглитру воды добавляют сухой питательный агар, медицинскую м-элчь, автаславфугат ?.линут гри. 0, атм. После охлаждения до 80°С добавляют глюкозу, мочевину, индикатор бром тимоловый синий и всё смешивают. Среда зеленоватого цвета. И хранится неделю. Иерсинии разлагая мочевину изменяют цвет среды на сине - зелёный, а колонии будут синего цвета. Те микроорганизмы, что "не разлагают мочевину, растут в виде >иёлтых колоний . Через - 4S часов культивирования фи температуре 22° С фсводят идентификацию выросших колоний. Преимущество среды и в том, что выявляет уреазную активность.

3.3. Третий этап. Клонирование, выделение чистой культуры (от часов), биохимическая идентификация Деленных штаммов.

Из еыделенной, по морфологии и окраске, колони частично берут бакмассу для мазка, окрашивают по Граму. Если фи микроскопии наблюдают грамотрицательные, полиморфные палочки, с закруглёнными краями, без спср и капсул, одиночные, возможно кскксемдные, режэ озоидные, то, оставшуюся башассу колонии переносят в МПБ, ресуспендируют, подращивают при 24-26°С и фсводят идентификацию по биохимическим тестам.

Г$эи положительной уреазной активности, ферментации и отсутствии газообразовании глюкозы, в первые часа фи 37° С, исключают все газообразующие энтеробактёриии родов: Escherichia, Edwardsieila, Citrobacter, Salmonella, Enterobacter, Hafnia. Способность ферментировать арабинозу ис!<лючает ещё два рода Prcteus, Serratia , отсутствие {ферментации инозита исключает род Kiebssieila. Внутри родовая дифференциация Yersinia грсводится с использованием следующих биохимических тестов: поло>!<ительные результаты ферментации сахарозы, целлобиозы.сорбозы, сорбита и сприцательные показатели ферментации рамнозы, мелибиозы, раффинозы гри положительном тесте на уреазу и подвижность фи 25°С могут свидетельствовать о финадпеж-юсти выделяемой культуры к бактериям вида Yersinia enterocciitica.

Внутри видовая дифференциация выделенных культур Yersinia enterocciitica делается с целью типирсеания бисеариантсв и фоводится по следующим тестам : пол общительные результаты на индол, ксилозу, салицин, трегалозу указывают на принадлежность штаммов к.1 Товару, отрицательные результаты г» этим тестам свидетельствуют о финадлежности штамме© к биоезру. Штаммы биовара из указанных 4-х тестов дают отрицательные показатели только то салицину/. Штаммы биоварианта имеют из данных 4-х тестов попо>кительный результат только по трегалозе. Штаммы бисвара дают отрицательные результаты по тестам на салицин и индол и полоя<ительные результаты по тестам на ксилозу и лрегалозу. Бисеарианты 2, 3, являются наиболее патогенными для человека.

Гри исследовании по третьему этап/ фоводят одновременно постановку по всем необходимым тестам, что сокращает сро;<и исследования выделенной культуры.

4. Оценка результатов бастериологического исследования.

4.1. Гри соответствии полученных результатов по тестированию выделенной культуры с вышеуказанными данными полученный бактериальный штамм физнают как бактериальную культуру вода Yersinia enterocditica.

4.2. В случае если изучаемая бактериальная культура не типируется как бактерии вида Yersinia enterocdiUca, возможен вариант ncBTqoHoro использования бактериальной суспензии со средой накопления храня щейся в холодильнике гри +4° С.

4.3.Оптимальным решением является постановка на исследование не одной гробы исследуемого образца, а целой серии фоб.

4.4. Общие сра<и бактериологического исследования материала в феделах суток.

Временное наставление разработали от УГСХА - , • ' аспирант Померанцев ДА, от КБГСХА - соис!<атель - Кошева Д.К., Умаров К К -

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение устойчивости Listeria monocytogenes и Yersinia enterocolitica в мясопродуктах при СВЧ - обработки»

Значение мясопродуктов в питании человека определяется тем, что они служат источником полноценных белков, жира, минеральных и экстрактивных веществ, некоторых витаминов, потребление которых является необходимым для нормального функционирования организма.

В группу разнообразных факторов, характеризующих жизненный уровень населения (экономическая обеспеченность, условия труда, жилищные условия и др.), влияющих на заболеваемость, продолжительность жизни и трудоспособность людей, питанию и пищевым продуктам принадлежит важнейшее место.

Хорошее питание - основа народного здоровья, так как оно увеличивает сопротивляемость организма болезнетворным влияниям и от него зависит умственное и физическое развитие народа, его рабочая способность и боевая сила», - говорил видный советский гигиенист Г. В. Хлопин.

Многочисленные наблюдения подтверждают несомненную связь продуктов питания с заболеваемостью, физическим развитием людей, выносливостью и устойчивостью организма к различным неблагоприятным факторам внешней среды, в том числе и к инфекциям.

Степень восприимчивости человека к инфекционному агенту находится в прямой зависимости от пищи, которую организм получил до внедрения в него возбудителей инфекции. Недостаточное количество в рационах белков, жиров, углеводов, минеральных веществ и витаминов, нарушения в питании, резко снижает иммунобиологические свойства организма. Некачественный пищевой продукт, полученный от больного животного или испорченный в результате его контаминации патогенной микрофлорой не только не поддерживает работу иммунной системы, а наоборот, ослабляет защитные функции этой системы. Данный продукт является одной из причин проникновения болезнетворного агента в организм человека. 3

Необходимо подчеркнуть, что пищевые продукты, получаемые от животных, болевших любым инфекционным или неинфекционным заболеванием могут содержать микроорганизмы, вызывающие пищевые отравления. Поэтому изучению бактериальной контаминации мяса и мясных продуктов уделяется большое внимание.

Существует значительная группа пищевых инфекций, которые известны человеку тысячелетия это в первую очередь ботулизм, сальмонеллёзы и другие. Данные заболевания и вызывающие их инфекционные агенты достаточно изучены за последние сто лет. Однако появляются новые, малоизученные пищевые инфекции. Инфекционные агенты которых только начинают изучать. К таким микроорганизмам относятся бактерии Listeria monocytogenes и Yersinia enterocolitica. Данные микроорганизмы, несмотря на всё их таксономические различия объединяет одна особенность - наличие положительного «холодового» эффекта. При температуре хранения в холодильниках указанные бактерии, в отличие от других не только не замедляют свое размножение, а наоборот размножаются и в определённой степени повышают показатели своей вирулентности. Учитывая широкое расспостранение в последние годы «быстрых» продуктов питания, полуфабрикатов готовых или почти готовых к употреблению в пищу после незначительной кулинарной обработке и хранящихся до этого момента в домашнем холодильнике важное значение приобретают вопросы, связанные с исследованиями по бактериологическому контролю и обеззараживанию мяса контаминированного листериями и возбудителем кишечного иерсиниоза, что в свою очередь, связано с устойчивостью упомянутых бактерий к различным физическим и химическим факторам.

Технологическая обработка мяса требует соблюдения санитарно-гигиенических условий, гарантирующих полную безвредность готовых продуктов для потребителя. Достигнуть этого можно только при совершенствовании существующих технологических процессов и разработки 4 новых, обеспечивающих рациональное использование сырьевых ресурсов, повышение выхода массы и улучшение качества выпускаемой продукции.

Помимо существующих способов обеззараживания (проварка, заморозка, посол), в последние годы для этих целей предложено использование ультрафиолетовых лучей, ионизирующей радиацией, электромагнитного нагрева и др. Бесспорно, что этим целям полностью отвечает и сверхвысокочастотный нагрев или СВЧ - обработка пищевых продуктов.

По данным В.Я.Щабли и Я.П.Шлипакова (1981) и других авторов СВЧ-обработка мясных продуктов позволяет получить более быстрый и равномерный нагрев, что обеспечивает готовность продукта за короткий промежуток времени. Кроме того, при СВЧ - обработке денатурационные изменения белков мышечной ткани менее глубокие, чем при нагревании обычным способом, содержание свободной воды в мясе бывает больше на 1415%, что обеспечивает больший выход массы, выше сохранность аминокислот и экстрактивных в т.ч. и биологически активных веществ.

Одним из основных направлений в использовании СВЧ-энергии является использование ее в качестве фактора активного воздействия на клетки микроорганизмов с целью их уничтожения. В последнее время в связи с разработкой СВЧ-генераторов открылась возможность использования СВЧ-энергии с целью стерилизации и пастеризации пищевых продуктов, Рогов И.А., Некрутман C.B. (1976); Филипов P.JI. (1984), еще в 70-х и 80-х годах в своих исследованиях указывали на бактерицидное действие СВЧ-полей не только большой (тепловой), но и малой (нетепловой) мощности, а также возможность использования СВЧ-энергии в стерилизации продуктов биологического происхождения.

Имеются сообщения о стерилизации с помощью СВЧ нагрева различных продуктов, упакованных в пластиковые мешочки под небольшим давлением (О. Meara et. Al 1976., J. Ayob 1974).

N. Assinder (1974); сообщаил о положительных результатах полученных по СВЧ пастеризации молока, пива и других напитков. 5

Kase Y. (1978) сообщает о широком использовании СВЧ нагрева для стерилизации пищевых продуктов в Японии.

Таким образом, ширится использование СВЧ печей для быстрого приготовления продуктов питания готовых сразу же к употреблению в пищу.

Данные обстоятельства задают вопросы, а насколько эффективен метод термического обеззараживания микроорганизмов в СВЧ печах, и в частности этих бактерий, вызывающих пищевые инфекции.

Цель и задачи исследований.

В связи с вышеизложенным целью данной работы явилось разработка быстрых методов выделения и идентификации бактерий Listeria monocytogenes и Yersinia enterocolitica из мясопродуктов. Изучение эффективности их инактивации в бытовых СВЧ-печах. Тем самым установление санитарной безопасности использования продуктов в домашних условиях после СВЧ - обработки.

Исходя из указанной цели были поставленны следующие задачи:

1. Разработать быстрые методы выделения и индентификации бактерий Listeria monocytogenes и Yersinia enterocolitica из мясопродуктов.

2. Определить показатели термической устойчивости данных микроорганизмов.

3. Разработать и предложить оптимальные режимы обеззараживания мясопродуктов, контаминированных бактериями Listeria monocytogenes и Yersinia enterocolitica, с помощью СВЧ нагрева.

Научная новизна.

Научная новизна работы заключается в том, что:

• В результате проведённых исследований впервые в практике предложены достаточно быстрые бактериологические методы выделения и идентификации бактерий Listeria monocytogenes и Yersinia enterocolitica из мясопродуктов.

• В результате проведённых исследований установлении пороговые показатели термической устойчивости бактерий Listeria monocytogenes и Yersinia enterocolitica.

• В результате проведённых исследований экспериментально доказана надёжность использование для целей инактивации бактерий Listeria monocytogenes и Yersinia enterocolitica бытовых СВЧ - печей, тем самым обоснованна эффективность их применения в условиях быта с целью профилактики вспышки данных заболеваний.

• Изучено обеззараживающее действие СВЧ энергии на мясопродукты (свинина, говядина, баранина, куры) контаминированные бактериями из рода Listeria monocytogenes и Yersinia enterocolitica

• Разработаны и предложены оптимальные режимы обеззараживания мясопродуктов контаминированные бактериями Listeria monocytogenes и Yersinia enterocolitica с помощью СВЧ нагрева.

Практическая ценность. При выполнении данной работы получены результаты имеющие определённую практическую значимость:

1 .На основании проведенных исследований разработаны схемы бактериологического исследования мясопродуктов на наличие бактерий Listeria monocytogenes и Yersinia enterocolitica.

2. Разработаны и апробированы селективная и накопительная среды для выделения листерий из мясопродуктов.

3. Установленны режимы обеззараживания мясопродуктов, контаминированных бактериями из рода Listeria monocytogenes и Yersinia enterocolitica посредством СВЧ- обработки.

Тем самым предложен ещё один барьер предупреждения вспышки пищевых инфекций данной этиологии.

4. Материалы диссертации используются при чтении лекций в КБГСХА. 7

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

• Методы выделения и идентификации бактерий Listeria monocytogenes и Yersinia enterocolitica из мясопродуктов.

• Установление пороговых показателей термоинактивации данных микроорганизмов.

• Эксперементальное обоснование надёжность использование для целей инактивации бактерий Listeria monocytogenes и Yersinia enterocolitica бытовых СВЧ - печей и установления эффективности их применения в условиях быта с целью профилактики вспышки данных заболеваний.

• Определение обеззараживающего действия СВЧ энергии на мясопродукты (свинина, говядина, баранина, куры) контаминированные бактериями, из рода Listeria monocytogenes и Yersinia enterocolitica

• Схема оптимальных режимов обеззараживания мясопродуктов контаминированных бактериями Listeria monocytogenes и Yersinia enterocolitica с помощью СВЧ нагрева.

Апробация работы и публикация результатов исследования.

Результаты исследований доложены на 4 республиканских, международных,вузовских научно-практических конференциях

По результатам исследований опубликовано 4 печатных работ. Объём и структура работы.

Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и практических предложений, иллюстрирована 37 таблицами, 6 рисунками. Список использованной литературы включает 132 наименований из них 38 отечественных и 94 зарубежных.

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Кожаева, Джульетта Каральбиевна

5. Выводы

1. Разработан оптимальный метод выделения бактерий L monocytogenes из мясопродуктов в три этапа за 48-72часа.

2. Разработана простая, надежная, дешёвая среда накопления для выделения и идентификации листерий, позволяющая её эффективно использовать для определения контаминации листериями мясопродуктов .

3. Разработана простая, надежная, дешёвая селективная среда для выделения и идентификации листерий. Доказана эффективность её использования для определения контаминации листериями мясопродуктов.

4. Определены показатели термической инактивации листерий и иерсиний, которые соответствовуют следующим величинам: для листерий 70° С -16,9 мин.,75° С - 5,9 мин, 80° С - 0,4 мин., для иерсиний - 70° С -18 мин., 75° С -7,0 мин., 80° С-0,2 мин.

5. Установлено, что при воздействии СВЧ облучения мощностью в 410 вт. и в 540 вт. в диапазоне от 5 мин до 8 минут происходит инактивация листерий находящихся в физиологическом растворе при концентрации 106 м.т. в мл. Инактивация листерий, находящихся в цельном куске мяса или фарша весом 200 г., под воздействием СВЧ - обработке происходит при 14 и 12 минутной экспозиции соответственно.

Видовые особенности мясного фарша (говядина, свинина, баранина, курятина) практически не влияют на экспозицию воздействие СВЧ - обработки. Полученные экспериментальные данные свидетельствуют, что практически параметры инактивации листерий не зависят от серогрупповой принадлежности бактерий и от типа обработки мяса.

6. Установлено, что воздействие СВЧ - обработки на бактерии вида L. Monocytogenes не несёт изменения тех биологических свойств которые используются при идентификации листерий данного вида.

7. Разработан оптимальный метод выделения иерсиний вида Yersinia enterocolitica из мясопродуктов за 3 - 4 суток. Доказана эффективность его использования для определения контаминации иерсиниями мясопродуктов.

8. Установлено, что при воздействии СВЧ облучения мощностью в 410 вт и в 540 вт в диапазоне от 6 мин до 10 минут приосходит инактивация У enterocolitica находящихся в физиологическом растворе при концентрации 10 6 м.т в мл. Инактивации У enterocolitica в образце мяса или мясного фарша весом 200 грамм происходит за12 -13 и 8-12 минут соответственно. Видовая принадлежность мясного фарша (говядина, свинина, баранина, мясо кур) влияют на показатели экспозииции СВЧ - обработки. Так в фарше из мяса кур весом 200 грамм бактерии У enterocolitica инактивируются при экспозиции 8-9минут, а в фарше из мяса свинины за 11-12 минут. Эксперементально установленно, что временные параметры СВЧ -обработки для инактивации У

129 enterocolitica не зависят от серовариантной принадлежности бактерий и от типа обработки мяса.

5. Практические предложения.

1. Предложен метод выделение и идентификацию листерий вида L monocytogenes из мяса и мясопродуктов, который рекомендуется для бактериологических лабораториях КБР утверждённый Управлением ветеринарии республики.

2. Выделение и идентификацию иерсиний вида Y enterocolitica из мяса и мясопродуктов рекомендуется в бактериологических лабораториях проводить по схеме предложенной автором и утверждённой Управлением ветеринарии республики.

3. Для повышения эффективности метода выделения и идентификации листерий рекомендуется в бактериологических лабораториях использовать накопительную и селективную среды предложенные автором.

4. Предложены режимы обеззараживания мясопродуктов, контаминированных бактериями из рода L monocytogenes и Y enterocolitica, посредством СВЧ- обработки, что является ещё одним барьером по предупреждению вспышки пищевых инфекций данной этиологии.

5. Результаты исследований нашли своё отражений в в нормативно -технической документации, утверждённые Управлением ветеринарии КБР.

6. Материалы диссертации используют при проведении учебного процесса в КБГСХА.

130

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Кожаева, Джульетта Каральбиевна, 2000 год

1. Абрамова Н.В., Макеев Ю.В., Тенк Ф.А. «Влияние электромагнитных волн миллиметрового диапазона (8,2 мм) на выживаемость хлебопекарских дрожжей». Ж. /Электрическая обработка материалов/ 1978, № 2, с. 74-75.

2. Ананьин И. А. «Исследование качества пива, пастеризованного в сверхвысокочастотном поле». Автореф. Дисс.канд.техн.наук М.,ин-т нар.хоз-ва им. Плеханова, 1975.

3. Бакулов И.А. «Листериоз сельскохозяйственных животных». М. 1967.

4. Бутко М.П. «ВСЭ продуктов убоя животных при инфекционных болезнях». ВКН. «Руководство по ВСЭ и гигиене производства мяса и мясных продуктов». М. 1983. 158-163.

5. Вышеллеский А.Н., Козьмина Е.П., Некрутман C.B. «Новый вид тепловой обработки». /Общественное питание/ 1968, № 10, с. 46.

6. Гершун В.И. «Листериоз сельскохозяйственных животных». Алма-Ата. 1981.

7. Гусева И.И., Фин Л.М., Каданер Я.Д. «Влияние СВЧ поля на микрофлору пива и безалкогольных напитков». - В сб. /Электрическая обработка материалов/. М., 1972, Т.4, № 46, с. 32-85.

8. Декаро К. «Стерилизация». Перевод с англ. Под редакцией Э.Д. Шлифера. М. /Мир, 1971, Т.2, с.128-132 /СВЧ электроника/.

9. Дулатова М.В. «Кишечный иерсиниоз». Ленинградб 1989.

10. Игнатов В.В., Панасенко В.И., Пиденко А.П., Радин Ю.П., Шендеров Б.А., «Влияние ЭПМ сверхвысокочастотного диапазона на бактериальную клетку», /Изд-во Саратовского университета/, 1978, с.80.

11. Исмаилов Э.Ш., «О влиянии микроволн на ». Автореф. На соиск.учён.степ.канд.биол.наук. JL, ЛГУ, 1967.

12. Кузнецов В.Г. Заселённость овощей и внешней среды овощехранилищ Приморского края бактериями рода Yersinia // Гигиена и санитария. 1986. № 5. С. 69.

13. Кузнецов В.Г. Багрянцев В.Н. Пастеризованное молоко как фактор передачи возбудителей иерсиниозов. Ж-л «Микробиология, эпидемиология и иммунология» № 4 с. 22-26, 1992.

14. Меньшикова З.Н. «Электромикроскопическое изучение морфологии листерий и эризипелотриксов». Автореф. дисс. на соиск. учён. степ. к. б. н. Покров. 1971.

15. Наттерман Х.,Хорш Ф. Этиология и патогенез иерсиниоза // Ветеринария. 1987. № 10 . С.76—78.

16. Нетушил A.B., Жуховицкий Б.Я., Кудин В.Н. «Высокочастотный нагрев в электрическом поле.», Гос.изд. /Высшая школа/ М., 1961.

17. Одинцов А.И., Пиденко А.П. «Перспективы использования СВЧ энергии в пищевой промышленности и общественном питании.» /В кн. Новые физические методы в пищевой промышленности, тезисы работ межвузовской конференции./М., 1967, с.33-45.

18. Остапенков A.M., Матисон В.А., Кантерева Ю.В., Беловолов A.B., Лаврова В.Л. «Исследование воздействия ЭМП СВЧ малой интенсивности на», /ж. Научные доклады высшей школы/ Биологические науки. 1976, № 6, с.47-50.

19. Остапенков A.M., Носиков B.C. «Применение СВЧ техники в пищевой промышленности». /Зарубежная радиоэлектроника/ 1979, № 7, с. 94-101.

20. Остапенков A.M. «Стерилизующие свойства электромагнитных полей СВЧ диапазона волн», /ж. Электрическая обработка материалов/ 1981, № 1, с. 68-71.132

21. Остапенков A.M. «К вопросу о воздействии электромагнитных полей на микроорганизмы», /ж. Электрическая обработка материалов/ 1981, № 2, с.62-65.

22. Пресман A.C. «Электромагнитные поля и живая природа». М. /Наука/, 1968.

23. Рогов И.А., Некрутман C.B. «Сверхчастотный нагрев пищевых продуктов». М., «Пищевая промышленность», 1972, с.212.

24. Рыбникова В.И. «К вопросу влияния микроволн и каталазную активность Staphylococcus aureus 209. /В кн. Влияние магнитных полей на биологические объекты/ Материалы 3-го Всесоюзного симпозиума. Калининград, 1975, с. 6667.

25. Счастная П.И. «Влияние радиоволн СВЧ на кишечную палочку». /Труды Харьковского мединститута/ Харьков, 1958, Т. 16, вы.37, с.359.

26. Счастная П.И. «Действие электромагнитных волн сверхвысокой частоты на микроорганизмы». /Труды Харьковского мединститута/ Харьков, 1957, Т. 15, вып. 36, с. 239.

27. Теляшевский Б., Шишкина Н. «Электрические характеристики мясопродуктов при обработке их в переменном поле высокой частоты». /Мясная индустрия СССР/ 1956, № з, с. 21-22.

28. Теляшевский Б. «Применение токов высокой частоты в колбасном производстве». /Труды ВНИИМПа/, 1958, вып. 8, Пищепромиздат, с. 13-18.

29. Филиппов P.JI. «Новый способ стерилизации воска»./ ж. «Электрическая обработка материалов»/ 1984, № 2, с. 73-76.

30. Хлебников В.Е., Махонина В.Н., Абаддова В.А., Проценка В.Ф. "«Тепловая обработка мясопродуктов в электромагнитном поле СВЧ» / ж. «Электрическая обработка материалов», 1981, № 1, с. 72-76.133

31. Чернова А.С., Ароне P.M. «Изменчивость микробов под влиянием СВЧ-энергии». / В сб. Труды Саратовского зооветинститута,/ 1969, Т.19, с. 184-190.

32. Шаблий В.Я., Шлипакова Я.П. «Ветеринарно-санитарная экспертиза и гигиена консервирования мяса и мясопродуктов». /В кн. «Ветеринарно-санитарная экспертиза с основами технологии переработки продуктов животноводства»/ М., Колос, 1981, с. 279-345.

33. ШуваловаЕ.П. Инфекционные болезни, М.:»Медицина», 1995.

34. Ющенко Г.В. Иерсиниозы //Руководство по эпидемиологии инфекционных болезней. М., 1993. С. 133-148.

35. Ющенко Г.В. «Актуальные вопросы эпидемиологии и клиники иерсиниоза». Обзорная информация. Москва, 1984.

36. Adachi R.R., Sheffner L., Spector H. The in vitro digestibility and nutritional quality of dehydrated beef fish and beans. \\ Food Research. 1958. - v. 23. P. 401.

37. Allair R.P. New approaches. Potential applications for the microwave heat exchange.WJ. Food Technology. 1965. V. 19. N. 8. P. 40.

38. Allerbergen. F.et. al. "Listeriosis in Austria". "Asta microbiol. hung.". 1989.36. N 2-3. 149-152.

39. Assinder N. Microwave pasteurisation of milk. WTrans . J. MPJ. 1974. N 2. P. 92.

40. Ayoub .J., Berkowitz D., Kenyon E., Wandsworth C. Continuous microwave sterilisation of meat in flexible pouches.W J. Food Sci. 1974. V. 39. N 2. P. 309-311.

41. Balsechi E. "Bacteriologia y serologia de la infection listeria". "Asta bioqnim. clin.latinoamer". 1981. 15. N4. 565-569.

42. Beams. R. "The effect, of. pasteurization on L.m." "Can. J. Microbiol". 1958. 4. N1. 55-61.

43. Beams R.E. ,Girard K.F. On the isolation of Listeria monocytogenes from biological specimens. Am. J. Med. Tech. 25.1959.120-126.

44. Binning V.1988. "Thermal inactivation. of. L.m. within bovine milk phagocytes". "Appl.and Environ. Microbiol". 1988. 54. N 2. 364-370.134

45. Bockemuhl J., Seeliger H.P.R.,Kathke R. Acridinfarbstotte in Selektivnahrboden zur Isolierung von Listeria monocytogenes. Med. Microbiol. Immunol. 157. 1971. 84-95.

46. Bockemuhl J., Feindt E., Hohne K., Seeliger H.P.R. Acridinfarbstoffe in Selektivnahrboden zur Isolierung von Listeria monocytogenes. Med. Microbiol. Immunol. 159. 1974. 289-299.

47. Bouvet E.Et. al. "Severe meningitis dne to L. monocytogenes". "Scand. J. Intec. Diseases". 1982. 14. N4. 267-270.

48. Bowie D. et.al. "Ataxia in L.m. infections of the central nervous sys. Tem". "South. Med. J." 1983. 76. N5. 567-570.

49. Bradshaw J.'Thermal resistance of L. monocytogenes in milk". "J. Food. Protect." 1985.48.743-745.

50. Braveny I., Grote R. Selektivsubstrat zur Isolierung von Listeria monocytogenes. Experientia 29. 1973. 1553-1555.

51. Campbell D."Listeriosis in Scotland". "Lancet". 1989. N8636. 492.

52. Carpenter S."Survival of. L. monocytogenes on processel poultrg". "J. Food. Sei". 1989.54.3.556-557.

53. Cateau M. Methodes rapides d analyse en microbiologic alimentaire // Rev. Fr. Lab. 1994. Vol. 22. N 264. P. 25-28.

54. Cathcard W.H. High frequency heating produces mold-free bread.// J. Food Industry.- 1946. V.18. N 6. P. 864.

55. Cherubin C. et.al. "Listeria and gram-negativbactllars meningitis". "Amer. J. Med.". 1981. 71. N8. 199-209.

56. Christensen S.Y. enterocolitica in Danish pigs // Journal of Applied Bakteriology. 1980. N48. S. 377-382.

57. Copson D.A. Microwave energy in food procedures. "J.R.E. Transactions -Medical electronics., PGME 4", 1956. P. 27; // J. Amer. Diet. Assoc. - 1960. V. 37. P. 462.135

58. Couse K., Fenton F. Effect of reheating on palatability, nutrivite value and bacterial cjunt of frozen cjjked foods. I.Vegetables. 2. Meat dishes. // J. Amer. Diet. Assoc. 1951. V. 27. Pp. 390, 491; 1960. V. 37. P. 230.

59. Dedie K.et.al. "Die Hitzeresistenz von L. monocytogenes in Milch". BMTW. 1957. B.d. 70. N10. 231-232.

60. Despierres. M. Isolation de Listeria monocytogenes dans un milieu defavorable a Streptococcus faecalis. Ann. Inst. Pasteur 121. 1971. 493-501.

61. Dessel M.M. Bacteria in electronically cooked Foods. //J. Amer. Diet. Assoc. -1960. V. 37. P. 230.

62. Donker-Voet J. "Listeriosis in animalis". BOIE. 1965. 64. N1. 757-764.

63. Donker-Voet J."L. monocytogenes in der Milch". "Probl. Der Listeriose". 1969. 249-251.

64. Donnely C. et. al. "Comparison of. heat resistance of L.m. in milk as determined by two methods". " J. Food. Ptotect. 1987. 50. 14-17.

65. Doyle M.P., Schoeni J.L., Selective ernichment procedures for isolating Listeria monocytogenes form fecal and biologic specimens. Appel. Environ. Microbiol. 51.1986. 1127-1129.

66. Doyle M.P., Schoeni J. L. Comparisen of procedures for isolating Listeria monocytogenes in soft, surface-ripened cheese. J. Food. Protect. 50. 1987. 4-6.

67. Doyle M. et. al. "Survival of. L.m. in milk". "Appl. Und Environ. Microbiol.".1987. 53. N7. 1433-1438.

68. Doyle, M.P.& Hugdahl, M.B. 1983 Improved procedures for recovery of Yersinia enterocolitica from meati. Applied and Environmental Microbiology 45, 127-135.

69. Elischerova K. "Some ecologicfl aspect, of. L.m. in meat industry". "Probl. In Listeriosis". 1979. 148-155.

70. Farben J. Et. al. "The presence of Listeria in raw milk". "Can. J. Microbiol.".1988. 34. N2. 95-100.

71. Farben J.et.al. "Thermal resistanse of. L. monocytogenes", "int. J. Food. Microbiol.". 1988. N4. 7. 277-286.136

72. Feeiey J., Lee W., Morris G. Yersinia enterocolitica // In Recommended Methods for Examiiination of Foods /Ed. Speck M. Washington DC: American Publis Health Association. 1976. P. 351-357.

73. Fleming D. "Pasterizet milk asa vehiche of infektion listeriosis". "J. Am. Vet.-med. Ass.". 1985. 186. N11. 1220.

74. Forray A. "Vjabb. Adatoka a szarvasmarha-licteriodulasarol kulonos tekintettel abakteriologia i husvizsgalatra". "Maggar allatorv.". 1969. 24. 11. 585-587.

75. Frederiksen W. A study of some Y. Pseudotuberculosis-like bacteria (Bacterium enterocoliticum and Pasterella X) // In Proceedings of the 14 Scandinavian Congress of Pathology and Microbiol. Oslo. 1964. P. 103-104.

76. Frollin A. "Listeria ecologie et. epidemiologic". "Cah. Nutr. Et. Diet.". 1989. 24. N4. 302-305.

77. Garayzabal J. "L. monocytogenes dans le lait pastenrise". "Can. J. Microb.". 1986. 32. 2. 141-150.

78. Gledol J. "Chygiene du lait cru". "Loanniv. CEPLL". 1987. 213-221.

79. Govlet V. Et. al. "La listeriose en. Franse en 1986". "Pathol.-biol.". 1989. 37. N 3. 206-211.

80. Gray M.L., Stafseth H.J., Thorp F.Jr., Sholl L.B., Riley W.F.Jr. A new technique for isolating Listerellae from bovine brain. J. Bacteriol. 55. 1948. 471-476.

81. Gray M.L., Stafseth HJ., Thorp F. Jr. The use of potassium tellurite, sodium azide, and acetic acid in a selective medium for the isolation of Listeria monocytogenes. J. Bacteriol. 59. 1950. 443-444.

82. Harrison M."Survival of. L.m. on microwave cooked poultry". "Food Microbiol." 1989. 6. N 3. 153-157.

83. Herrero J. Et. al. "L. monocytogenes infektion in renal tranplant.". "Transl. And Clin. Immunol.", v. 20. 1980.

84. James C. Et.al. "Listeriosis outbreak associated with Mexican-Style cheese". California. Morb. Mortal Week. Rep. 1985. 34. 357-359.

85. Jay J.M. A new selective medium for the recovery of Listeria spp. From foods. Abstr. Annu. Med. Amer. Soc. Microbiol. 87. 1987. P. 278.137

86. Johnson J. Et. al. "Fate of L. monocytogenes in hard salami". "Appl. And Environ. Microbiol.". 1988. 54. 2. 497-501.

87. Kampelmacher E."Listeriosis in humans and animals in the Netherlands". "Zblt. Bakteriol." 1980. Abt. I. Orig.

88. Kampelmacher E.H., Noorle Jansen L.M. van. Isolation of Listeria monocytogenes from feces of clonically healthy humans and animals. Zblt. Bakt. I Abt. Orig. 211. 1969.353-359.

89. Karaionnoglou P. "Survival of L. monocytogenes in meatballs". "Hell. Med.". 1980. 22. 111-117.

90. Khan M.A., Seaman A., Woodbine M. Differential media in the isolation of Listeria monocytogenes. Zbl. Bakt. Hyg., I. Abt. Orig. A 224. 1973. 362-375.

91. King T.Et. al. "Phagocytosis and Killing L.m. byalveolar macrophages". J. Infec. Diseases. 1988. 158. N6. 1309-1316.

92. Kurz J. "Zum Problem der Listeriose". "Z. Arg. Forthild". 1990. 84. N 3. 8-84.

93. Kwantes W. "Listeria infection in West Glomorgan". "Probl. In Listeriosis". 1975. 112-114.

94. Lamaire V. "Heat. Resisfance of L. monocitogenes". "Acta microb. Hung". 1989. 36. N2-3. 281-284.

95. Larsson S., Walder M.N., Glonberg S.N., Forsgren A.B., Moestrup I. Antimicrobial susceptibilities of Listeria monocytogenes strains isolated from 1958 in Sweden Antimicrob. Agents Chemother. 28. 1985. 12-14.

96. Larsson S.Et. al. "L.m. causin hospitalacqired". "Brit. Med. J.". 1978. N 6. 6135. 473-474.

97. Lee W.H., Mociain D. Improved isteria monocytogenes selective agar. Appel. Environ. Microbiol. 52. 1986. 1215-1217.

98. Lehnert C.H. Bakteriologische, serologische und tierexperimentelle Untersuchungen zur Pathogenese Epizootologie und Prophylaxe der Listeriose. Arch. Exp. Vet. Med. 18. 1964. 981-1027.

99. Lovett J., Francis D.W., Hunt J.M. Listeria monocytogenes in raw milk: Detection, incidence, and pathogenicity. J. Food. Protection 50. 1987. 188-192.138

100. Lung B. "Destruction of. L. monocytogenes". "Lancet". 1989. 1. N 8631. 218.

101. Mavrothalassitis P. A method for the rapid isolation of Listeria monocytogenes from infected material. J. Appl. Bacteriol. 43. 1977. 47-52.

102. McBride M.E., Girard F. A selective method for the isolation of Listeria monocytogenes from mixed bacterial population. J. Lab. Clin. Med. 55. 1960. 153157.

103. McClain D., Lee W.H. A method to recover Listeria monocytogenes from meats. Abstr. Annu. Mtg. Amer. Soc. Microbiol. 87. 1987. P. 278.

104. Meara J., Tinga W. Et.al. Food sterilisation in microwave pressure reactor. // J. Microwave Power. 1976, v. 11, N.2, p. 212-213.

105. Mehiman I.,Aulisio C., Sanders A. Problems in the recovery and identification of Yersinia from food //Journal of Association of Official Analyticfl Chemists. 1978. N 61. P. 761-771.

106. Mollaret H., Thal E. Yersinia // Bergey's Manual of Determinative Bacteriology 8-th edn. Ed. Buchanan R., Gibbons N. Baltimore: Wiliams and Wikins. 1974. P. 330-332.

107. Morel A. Et. al. "La listeriose dans la region de Rouen". "Sem. Hop. Paris". 1979. 55. N9-10. 506-510.

108. Nicolas J. Et. al. "Contribution a 1 etude des Listeria presentes dans les denrees d origine onimale". "Ree. Med. Vet.". 1987. 163. 283-285.

109. Palumbo S.A.//J. Food Prot- 1986, Vol. 49, N12-P. 1003-1009.

110. Pini P.et.al. "The occurrense in the V.K. of Listeria in ram chickens". "Int. J. Food. Microb". 1988. 6. N 4. 317-326.

111. Potel J., Alex R. "Geburtsh ifliche Erfahrungen nach Listeria infection Geburtsh". Franenheiek. 1955. 16. 1002-1008.

112. Qaglio F. Et.al. "Considerazioni sulla epidemiologia e profilassi delle infezioni da L. monocytogenes". "Teen. Sanit". 1979. 17. N 4. 375-397.

113. Qintavalla. "Resistenza térmica d: L. innocua ed. L. monocytogenes". "Ind. Conserva". 1989. 64. N1 8-12.139

114. Ralovich B., Forray A., Meroe., Malovics H., Szazados I. New selective medium for isolation of L. monocytogenes. Zbl. Bact., I. Abt. Orig. 216. 1971. 88-91.

115. Reed-Hamer Beth, West Thomas P. Effect of complex nitrogen sources on pullulan production reiative to carbon source // Microbios 1994. Vol. 80. N 1-2. P. 83-90.

116. Sanchez C.Et. al. "La listeriosis del udulto". J. "Med. Din". 1983. 80. N 5. 196200.

117. Schlech W.F. et.al. Epidemis listeriosis. Evidence for transnission by food. New. Engl. J. Med. 308. 1983. 203-206.

118. Schleifstein J., Coleman M. An unidentified microorganism resombling B. Lignieri and Past. Pseudotuberculosis, and pathogenic for man // New York State Journal of Medicine. 1939. N39. 1749-1753.

119. Schonberg A. "Serovars of L.m. and L. in. From . Food." Acta. Microb. Hungar. 1989. 36(2-3). 249-253.

120. Seeliger H.P.R. Listeriosis, 2 nd ed. Hafner Publishing Co., Inc. New York. 1961.

121. Seeliger H.P.R., Jones D. Genus Listeria Pirie 1940. In: Sneath P.H.A., Mair N.S., Sharpe M.E., Holt J.G. (eds.): Bregey's Manual of Systematic Bacteriology, Vol.2. Williams & Wilkins, Baltimore 1986. Pp. 1235-1245.

122. Shahamat M. "Influence of sodium chloride, pH and tempereture on L. monocytogenes". "Microb. Growhh. 1978". 1980. 226-237.

123. Sherman V.W. Electronic sterilisation in the package. //J. Modern Packaging. -1944, v. 17, N.6, p. 99.

124. Shimizu K., Otsuka G., Oka M. Guanofuracin media for isolation of L. monocytogenes and its practical application. Japn. J. Vet. Res. 2. 1954. 3-10.

125. Vidon,D.J.M & Delman, C.L. 1981 Incidence of Yersinia enterocolitica in raw milk in Eastern France. Applied and Environmental Microbiology 41, 355-359.

126. Welshimer H.J. The genus Listeria and related organisms. In:Starr M., Stolp H., Truper H.G.,Balows A., Schlegel H.G. (eds.): The Prokaryotes. Springer-Verlang, Berlin. 1981.pp. 1680-1687.