Мясо как фактор передачи инфекции при иерсиниозе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Киселева, Ирина Сергеевна

• Киселева, Ирина Сергеевна
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Киселева, Ирина Сергеевна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Краткие сведения о возбудителе кишечного иерсиниоза.

1.2. Культурально-морфологические свойства Y. enterocolitica.

1.3. Биохимические свойства иерсиний.

1.4. Антигенное строение и серологические свойства иерсиний.

1.5. Патогенность У. enterocolitica.

1.6. Психрофильные свойства иерсиний.

1.7. Устойчивость во внешней среде и влияние на Y. enterocolitica различных факторов.

1.8. Роль сельскохозяйственных животных в эпидемиологии и эпизоотологии иерсиниоза.

1.9. Y enterocolitica в мясе и мясопродуктах.

1.10. Лабораторная диагностика иерсиниоза.

Глава 2. Экспериментальная часть.

2.1. Материалы и методы.

2.1.1. Штаммы и биопрепараты.

2.1.2. Питательные среды.

2.1.3. Тест-системы для изучения биохимических свойств.

2.1.4. Методика выделения Y. enterocolitica из мяса и мясопродуктов, изучение и идентификация выделенных штаммов.

2.1.5. Изучение влияния параметров холодильной обработки и режимов хранения мяса на выживаемость Y.enterocolitica.

2.1.6. Исследование выживаемости Y.enterocolitica при температурах +2.+4 °С в мясном фарше в зависимости от различных концентраций NaCl.

2.1.7. Методика определения влияния нитрита натрия, фосфатов и лактата на жизнеспособность У.еМегосо1Шса в мясном фарше.

2.1.8. Исследование антагонистического действия стартовых культур и сушки на выживаемость У.еШегосоИНса в традиционных сыровяленых колбасах.

2.1.9. Непрямой метод флуоресцирующих антител для быстрого обнаружения У.еЫегосоИИса в мясе.

2.2. Результаты исследования и их обсуждение.

2.2.1. Исследование мяса и мясопродуктов на наличие иерсиний.

2.2.2. Изучение влияния низких температур на динамику размножения У.еМегосоИНса в мясном фарше.

2.2.3. Определение эффективности пищевых добавок (соли, нитрита натрия, фосфатов, лактата) и стартовых культур для подавления роста У.еШегосо1Шса в мясопродуктах при созревании фарша.

2.2.4. Влияние стартовых культур и сушки на жизнеспособность У.еМегосоИНса в традиционных сыровяленых колбасах.

2.2.5. Индикация У.еМегосоИНса в мясе непрямым методом флуоресцирующих антител.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Мясо как фактор передачи инфекции при иерсиниозе»

Актуальность темы

Интерес к проблеме кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза возрастает с каждым годом, что обусловлено не только широким распространением этих заболеваний, но и большим экологическим значением их возбудителей. До недавнего времени они считались достаточно редкими и не привлекали к себе особого внимания специалистов. Но с 60-70 гг. ситуация изменилась, когда была доказана их повсеместная распространенность.

Для специалистов мясной промышленности важно то, что мясо и мясопродукты являются частыми факторами передачи при иерсиниозе. По современным представлениям, кишечный иерсиниоз относится к пищевым зооно-зам, то есть к болезням, источником инфекции при которых являются больные сельскохозяйственные, домашние и дикие животные, а факторами передачи — пищевые продукты. Установлено, что при кишечном иерсиниозе потенциальными факторами передачи бактерий являются пищевые продукты животного происхождения (мясо, молоко), а также корма, овощи, фрукты, которые могут быть контаминированы на всех этапах их получения, хранения и реализации (Покровский, 1993; Ющенко, 1997; Ленченко, 2002).

По данным ВОЗ (1977) распространенность иерсиниоза носит глобальный характер, и эта болезнь регистрируется более чем в 30 странах мира, но чаще в странах с более прохладным климатом. В частности, в Финляндии абсолютное число заболевших в 1999 г. составило 634 человека, в 2001г.- 720 человек; в Швеции в 1999 г.—549 человек, в 2001 г.-579 человек; в Дании соответственно 337 и 285 человек. В Латвии, Литве, Эстонии и Архангельской области уровень заболеваемости характеризуется средними показателями, но имеет тенденцию к повышению. Например, в Латвии в 1999 г. абсолютное число заболевших составило 181 человек, а 2001 г. — 204 человека, в Архангельской области 100 и 220 человек. Число заболевших иерсиниозом в Санкт-Петербурге в 1999 г. - 478 человек, в 2001 - 321 человек.

Заболеваемость иерсиниозом в РФ на протяжении многих лет остается на достаточно высоком уровне. По данным Центрального НИИ Эпидемиологии Минздрава России этот показатель варьирует по отдельным регионам страны и на некоторых территориях сохраняется достаточно высоким — до 40-50 и даже 138 на 100 тыс. населения.

В странах северного полушария - Нидерландах, Бельгии, Дании, Норвегии, Финляндии, а также в Германии, Канаде, Австралии кишечный иерси-ниоз по уровню заболеваемости занимает третье место среди ОКИ после сальмонеллеза и кампилобактериоза (Garrigue, Poveda, Carniel, 1993; Logue et al., 1996; Померанцев, Васильев, 1998; Ленченко, 2000). В России иерсинио-зы занимают второе место после сальмонеллезов, а в некоторых странах превосходят по распространенности сальмонеллез, колибактериоз и шигеллез (Куликовский, Джентемирова, 1993; Куликовский, Соснина, 1995; Черкасский, 1995; Померанцев, Васильев, 1998; Шумилов, Мельниченко, 1998).

По данным Саратовского областного центра санэпиднадзора за период с 1997 по 2002 гг. в области систематически регистрируется иерсиниоз среди людей, причем доля детей среди заболевших составляет 60 %. Наблюдается рост заболеваемости: 1999 г. - 10 случаев, 2000 г. - 26, 2001 г. — 18. В 2001 г. с целью изучения иммунной прослойки среди населения по иерси-ниозам в 17 районах Саратовской области сотрудниками областного центра санэпиднадзора г. Саратова были обследованы 534 человека. Из них у 13 человек (2,4 %) обнаружены антитела к Y. enterocolitica ОЗ серовара в диагностических титрах, в том числе у 10 человек — 1:200: у 2 — 1:400, у 1 — 1:800. Лица с диагностическими титрами были выявлены в Аркадакском районе — 3, в Хвалынском - 4, в Петровском - 6. Причем, отмечается профессиональная принадлежность серопозитивных лиц в Петровском районе - доярки, свинарки, конюхи, что хорошо согласуется с данными Е.С. Осипчук (2003) о широком распространении кишечного иерсиниоза среди сельскохозяйственных животных в этом районе и подтверждает мнение некоторых авторов об иер-синиозе как о профессиональном заболевании (Колос, 1989).

Проблема иерсиниозов является актуальной как для здравоохранения, так и для предприятий пищевой промышленности. Центр Госсанэпиднадзора г. Москвы сообщает, что экономический ущерб, нанесенный иерсиниозами в 1997 г., составил 1 млрд. 208 млн. рублей (Зайцев и соавт., 1999; Шаханина, Осипова, Радуто, 2001). Н.М. Хакимов (1999) указывает, что 3-15 % всех ОКИ приходится на долю иерсиниоза и псевдотуберкулеза. Однако следует отметить, что по количеству выявленных случаев нельзя судить об истинном распространении заболеваний, так как в связи с клиническим полиморфизмом они нередко проходят под другими диагнозами: дизентерия, сальмонел-лез, вирусный гепатит А, аппендицит и др. (Догель, Карплюк, 1984; Ценева, 1997; Зайцев и соавт., 1999; Ленченко, 2002). В.И. Покровский (1999) отмечает, что, несмотря на выраженную тенденцию к увеличению числа заболеваний иерсиниозами, данные часто являются заниженными из-за недостаточно полной их регистрации.

Официальная регистрация иерсиниоза животных в РФ стала проводиться лишь с 1996 г. (Санитарные правила СП 3.1. 094 - 96; Ветеринарные правила ВП 13.3.1318 - 96). До этого появлялись только единичные публикации об изоляции Г. enterocolitica от сельскохозяйственных животных (Васильев, 1986; Кирьянов, Савчук, 1989; Стефанов, 1989; Писаренко, Куцева-лов, Проценко, 1990; Каландадзе, 1991).

Иерсиниоз сельскохозяйственных животных впервые был обнаружен в Саратовской области Л.Ф. Зыкиным и соавт. в 1997 году. В течение последних семи лет на кафедре микробиологии и ветсанэкспертизы Саратовского государственного аграрного университета проводятся исследования по иер-синиозу сельскохозяйственных животных. Их результаты обобщены в диссертациях З.Ю. Хапцева, C.B. Иващенко, Е.С. Гвинджилия, многочисленных отчетах, докладах и публикациях.

За последние десятилетия отечественными и зарубежными исследователями получены новые результаты, позволяющие иначе рассматривать некоторые вопросы этиологии, патогенеза и эпидемиологии иерсиниоза.

Но, несмотря на определенные успехи в проблеме изучения кишечного иерсиниоза, особенно в медицинском аспекте, остается много неизученных вопросов, например, касающихся роли мяса и мясопродуктов как факторов передачи при этой инфекции.

Анализируя современную литературу, можно сделать выводы, что исследования по обнаружению иерсиний в мясе и мясопродуктах проводятся постоянно. Также опубликованы данные по влиянию различных факторов: рН, упаковки, молочно-кислых бактерий, СВЧ-энергии на выживаемость иерсиний в мясе и мясопродуктах.

Но эти сведения носят несистематизированный, разрозненный характер и не создают цельного представления обо всех аспектах проблемы. В связи со свойством психрофильности, стандартные условия хранения мясопродуктов при низких положительных температурах способствуют размножению и накоплению У. еМегосоНИса. Поэтому актуальна выработка условий хранения мясопродуктов, препятствующих накоплению в них возбудителя. Как было сказано выше, иерсиниоз был включен в перечень официально регистрируемых лишь в 1996 году (СП 3.1.094-96, ВП 13.3.1318-96). В связи с этим работники животноводческих хозяйств и мясоперерабатывающих предприятий мало информированы о кишечном иерсиниозе и путях его распространения. В основную группу риска попадают ветеринарные работники (работники хозяйств по уходу и обслуживанию скота, животноводы, зоотехники) и работники мясокомбинатов, птицеферм, птицефабрик, мясоперерабатывающих предприятий.

В Саратовской области исследования по обнаружению иерсиний в мясе и мясопродуктах не проводились. Кроме того, не изучен вопрос о механизмах контаминации иерсиниями мясопродуктов и разработке методов, препятствующих этому процессу. Выяснение всех этих вопросов представляет научный и практический интерес.

Целью диссертационной работы явилось выяснение роли мяса и мясопродуктов как факторов передачи возбудителя при иерсиниозной инфекции, а также установление влияния различных технологических факторов и пищевых добавок на выживаемость У. enterocolitica в процессе производства колбасных изделий.

Задачи исследования:

1. Исследовать мясо и мясопродукты, отобранные из хозяйств Саратовской области и магазинов г. Саратова, на наличие Y. enterocolitica.

2. Изучить динамику размножения кишечных иерсиний в мясном фарше при различных режимах охлаждения и хранения мяса и мясопродуктов.

3. Определить эффективность применения ряда добавок, используемых в мясоперерабатывающей промышленности, для подавления размножения Y. enterocolitica в мясопродуктах.

4. Провести исследование антагонистического действия молочнокислых микроорганизмов на выживаемость Y. enterocolitica в условиях производства сыровяленых колбас.

5. Апробировать непрямой метод флуоресцирующих антител для экспресс-индикации Y. enterocolitica в мясе и мясопродуктах.

Научная новизна

1. Впервые в Саратовской области из мяса и мясопродуктов изолированы культуры Y. enterocolitica: 10 штаммов обладали признаками вирулентных иерсиний, у остальных четырех маркеры вирулентности носили вариабельный характер.

2. Доказано, что сыровяленые и сырокопченые колбасы являются благоприятными объектами для размножения в них кишечных иерсиний.

3. Показано, что использование некоторых штаммов молочно-кислых бактерий оказывает задерживающее действие на рост Y. enterocolitica в сыро-вяленых колбасах.

4. Установлено, что при стандартных режимах охлаждения и хранения происходит значительное накопление возбудителя иерсиниоза в мясе, что может способствовать передаче иерсиниозной инфекции.

5. Пищевые добавки, используемые в технологии изготовления мясопродуктов, в определенных концентрациях оказывают ингибирующее действие на размножение У. еМегосоНИса.

6. Показано преимущество непрямого метода флуоресцирующих антител для индикации У. еШегосо1Шса в мясе по сравнению с бактериологическим методом по чувствительности и скорости проведения анализа.

Практическая значимость

Впервые показано, что мясо из 10 различных районов Саратовской области, а также мясной фарш из сети магазинов розничной торговли г. Саратова контаминированы иерсиниями, то есть могут являться вероятными причинами инфекции. Обращают внимание случаи изоляции иерсиний из мяса, полученного из животноводческих объектов Петровского района, неблагополучного по иерсиниозу.

Установлено, что быстрое охлаждение мяса при —3.—5 °С и последующее его хранение при —1.-2 °С оказывают задерживающее действие на размножение У. еМегосоИйса и могут быть рекомендованы технологам мясоперерабатывающих производств как наиболее эффективные для подавления размножения этих бактерий в мясе.

В результате проведенных исследований определены концентрации пищевых добавок, препятствующие накоплению в мясопродуктах возбудителя иерсиниоза: хлорид натрия в концентрации 4,5 %, нитрит натрия — 0,01 %, фосфаты - 0,5 %, лактат натрия - 0,3 %.

Непрямой метод флуоресцирующих антител является более информативным и эффективным методом обнаружения У. епгегосоИйса в мясе и мясопродуктах по сравнению с культуральным методом, позволяет существенно сократить время проведения анализа и рекомендуется как экспресс-метод при выявлении иерсиний в мясе.

Апробированные схемы выявления возбудителя иерсиниоза в мясе и мясопродуктах: экспресс-индикация и бактериологическое исследование рекомендуются к использованию практическим лабораториям при контроле мяса и мясопродуктов.

По результатам исследования подготовлены «Методические рекомендации по обнаружению У. еМегосоИНса в мясе и мясопродуктах», утвержденные УМК Института ветеринарной медицины и биотехнологии ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ» им. Н.И. Вавилова (протокол № 34 от 17 декабря 2004 г.). Разработанные методические рекомендации позволяют получить полное представление о проведении исследования мяса на наличие К еМего-соННса и могут быть использованы специалистами всех уровней, связанными с проведением экспертизы мяса и мясопродуктов, а также при обучении студентов специальностей «Технология мяса и мясопродуктов», «Ветеринария» и «Биотехнология».

На защиту выносятся следующие положения:

1. Инфицированность мяса и мясопродуктов К еМегосоИИса на территории Саратовской области составляет 9, 92 %.

2. Наиболее эффективным режимом холодильной обработки для подавления жизнеспособности иерсиний в мясе и мясопродуктах является охлаждение при —3.-5 °С с дальнейшим подмораживанием.

3. Хлорид натрия, нитрит натрия, фосфаты и лактат в определенных концентрациях (4,5 %, 0,01 %, 0,5 %, 0,3 % соответственно) значительно уменьшают количество кишечных иерсиний в мясном фарше.

4. Препарат ПБ-МП, в состав которого входят штаммы Ь.р1аМагшт, оказывает сильное ингибирующее действие на размножение У.еШегосо1Шса.

5. Непрямой метод флуоресцирующих антител обладает высокой чувствительностью (1x104 КОЕ/мл) и является в два раза более информативным, чем бактериологический метод.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на Межрегиональных научных конференциях молодых ученых и специалистов системы АПК Приволжского федерального округа «Вавиловские чтения» (Саратов, 2003; 2004), на Международной конференции молодых ученых «От фундаментальной науки — к новым технологиям. Химия и биотехнология биологически активных веществ, пищевых продуктов и добавок. Экологически безопасные технологии» (Тверь, 2003), а также на 2-ой региональной конференции молодых ученых «Стратегия взаимодействия микроорганизмов с окружающей средой» (Саратов, 2004).

Материалы диссертации представлены в отчетах НИР Института ветеринарной медицины и биотехнологии в рамках ассоциации аграрного образования и науки за 2003 - 2004 гг.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 7 работ.

Структура и объем диссертации

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Киселева, Ирина Сергеевна

Выводы

1. При исследовании 113 проб заглоточных и подчелюстных лимфоузлов от убойных свиней и крупного рогатого скота из различных районов Саратовской области и 28 проб свино-говяжьего фарша, отобранных из розничной сети магазинов г. Саратова выделено 14 культур У.еШегосоИИса: 11 штаммов - из лимфоузлов (9,7 %) и 3 штамма - из фарша (10,7 %). Общий процент инфицированности составил 9,92 % проб.

2. Серотипирование показало: семь штаммов относились к серовару ОЗ, семь — к 09. Биотипирование позволило отнести два штамма к биовару 1А, один к 1Б, два к биовару 2, семь — к 4 и два- к 5 биоварам. Установлено, что 10 культур У.еМегосо1Шса обладали основными маркерами вирулентности, у 4 штаммов признаки вирулентности носили вариабельный характер.

3. Из пищевых добавок, используемых в технологии изготовления колбас, наиболее сильным ингибирующим действием на У.еМегосо1Шса обладали 4,5 %-й хлорид натрия, 0,01 %-й нитрит натрия, 0,5 %-й тринатриевый пи-рофосфат и лактат натрия в концентрации 3 %.

4. Наиболее эффективным температурным режимом холодильной обработки, препятствующим накоплению У.еМегосоИИса в мясопродуктах является быстрое охлаждение (-3.-5 °С) с подмораживанием (-1.-2 °С).

5. Установлено, что бактериальный препарат ПБ-МП, в состав которого входят штаммы Ь. р1аШагшт, обладает более сильным антагонистичесим действием в отношении У.еМегосоИНса, чем СН-81аг18Ь-67, который ингиби-рует рост иерсиний лишь частично. В совокупности с холодным способом созревания и сушки сыровяленых колбас ПБ-МП может быть рекомендован для предотвращения размножения У.еМегосоННса.

6. Для ускоренной индикации У.еШегосоНИса в мясе и мясопродуктах рекомендуется непрямой метод флуоресцирующих антител, который позволяет сократить время исследования от 3 недель до 7 дней и в два раза повысить эффективность обнаружения возбудителя иерсиниоза.

Заключение

Проблема иереиниозов в настоящее время остается актуальной как для здравоохранения, так и для ветеринарии и пищевой промышленности. Многочисленные зарубежные и отечественные источники свидетельствуют о практически повсеместном распространении этой инфекции в России и за рубежом.

Исследователями Центрального НИИ Эпидемиологии Минздрава России отмечается высокий уровень заболеваемости иерсиниозами в РФ — 50 —138 на 100 тыс. населения. Большинство заболеваний регистрируется в странах с умеренным и прохладным климатом, что связано, по-видимому, с психрофильностью возбудителя иерсиниоза (ВОЗ, 1977).

В Саратовской области иерсиниоз среди населения регистрируется постоянно, что находит подтверждение в материалах статистической отчетности Саратовского областного центра санэпиднадзора. За период с 1997 по 2003 г.г. в области постоянно выявляются случаи иерсиниоза среди людей: 1997 г.- 6 случаев; 1998 г. - 14; 1999 г. - 10; 2000 - 26; 2001 - 18; 2002 - 4. Необходимо отметить, что из-за разнообразия клинических проявлений кишечный иерсиниоз нередко проходит под другими диагнозами (вирусный гепатит А, аппендицит, дизентерия и др.); это приводит к большому количеству диагностических ошибок и недостаточно полной регистрации заболеваемости среди людей (Ценева, 1997; Зайцев и соавт., 1999; Ленченко, 2002). По этой причине, как отмечает В.И. Покровский (1997), данные по заболеваемости иерсиниозами нередко являются заниженными.

Согласно данным Саратовского областного центра санэпиднадзора источники заболевания, пути и факторы передачи инфекции точно не были установлены. Многие отечественные и зарубежные исследователи привлекают внимание к тому, что мясо и мясные продукты часто инфицированы Y.enterocolitica (Стефанов, 1989; Quaglio et al., 1989; Mickova, 1990; Boer et al.,1991; Kwaga Jacob et al., 1992; Кузнецова и соавт., 1995). Возбудитель иерсиниоза высевается из мясных продуктов на мясокомбинатах в 8 % случаев, из полуфабрикатов — 10, 7 %, из мяса и особенно субпродуктов на санитарной бойне в 19,5 %, из мясных изделий, изъятых в магазинах — в 10 % случаев (Ющенко, 1986).

Большим фактором риска контаминации иерсиниями продукции является технология изготовления некоторых видов колбасных изделий (сыровя-леных и сырокопченых колбас), при которой исключается высокотемпературный нагрев. В связи с психрофильностью и солеустойчивостью иерси-ний, созревание фарша при низких положительных температурах благоприятствует активному размножению иерсиний, а дальнейшие режимы обработки этих видов колбас могут быть недостаточными для устранения Т.еШегосоИНса (Гречищева, 1981; Дулатова, 1989; Куликовский и соавт., 1993).

Наиболее частым источником инфекции для человека считают свиней, а свиное мясо многие авторы рассматривают как важный фактор при инфицировании человека (РгеёепкБЗОп-АЬошаа, 1999; Ющук и соавт., 2003). В связи со всем вышесказанным в основную группу риска попадают ветеринарные работники (работники хозяйств по уходу и обслуживанию скота, животноводы, зоотехники), работники мясокомбинатов и мясоперерабатывающих предприятий, птицеферм, птицефабрик, которые вследствие недостаточной информированности об иерсиниозе слабо представляют пути заражения и меры профилактики этой инфекции.

В Саратовской области иерсиниоз сельскохозяйственных животных впервые был обнаружен Л.Ф. Зыкиным и соавт. (1997). В нашем регионе исследования мяса и мясопродуктов на У.еМегосоИНса не проводились. Между тем, случаи иерсиниоза в Саратовской области, как было отмечено выше, систематически регистрируются как у людей, так и у животных.

Сотрудниками кафедры микробиологии и ветсанэкспертизы СГАУ имени Н.И. Вавилова постоянно проводятся целенаправленные исследования по изучению свойств иерсиний и выделению возбудителя от сельскохозяйственных животных и из продуктов животноводства, результаты которых позволяют сделать выводы о широком распространении иерсиниоза на территории области, особенно в свиноводческих хозяйствах, а также среди поголовья крупного рогатого скота. Иерсинии были изолированы не только от самих животных, но и из молока, причем большинство этих штаммов относились к вирулентным, то есть были способны вызвать инфекционный процесс (Хапцев, 1999; Осипчук, 2003).

За период с 5.09.02 по 1.09.2004 было исследовано 113 проб заглоточных и подчелюстных лимфоузлов от убойных свиней и крупного рогатого скота из 10 районов Саратовской области и 28 проб свино-говяжьего фарша, изъятых из розничной сети магазинов г. Саратова. В результате с помощью бактериологического метода было выделено 14 культур У.еп1егосо1Шса: 3 штамма из лимфоузлов от КРС, 8 штаммов — из лимфоузлов от свиных полу-туш и 3 штамма — из фарша. Все изолированные из мяса и мясопродуктов штаммы У.еМегосоННса обладали типичными культурально-морфо-логическими, биохимическими и серологическими свойствами. Большинство были лактозоотрицательны, за исключением двух изолятов У еЫегосоНиса (Е572, Ф692, Е 1372). Это совпадает с мнением некоторых авторов о том, что иногда могут выявляться и лактозопозитивные варианты У.еШегосоИНса (Це-нева, 1997). По результатам биотипирования два штамма (Е 572, М 60) были отнесены к биовару 1А, один штамм (Ф 692) к биовару 1В, два (П 1092, П 113,) - ко 2, семь (П 802, М 97, П 115,, К120,, ПТ 1342, Е 1372, М 138) - к 4 и два (П 812, П 107г) - к 5 биоварам. Наши данные совпадают с результатами исследований Т.В. Спиряхиной (2004), которая при изучении 45 штаммов У.еМегосоИНса, выделенных от сельскохозяйственных животных Саратовской области определила, что культуры от павших и больных поросят чаще относились к четвертому биовару.

На основании биохимических реакций и тестов на вирулентность большинство изолятов отнесены к вирулентным. Определяющим является установленный факт, что патогенными для человека считают представителей биоваров 1 В, 2, 3 и 4, дающих отрицательные реакции (одновременно) на индол, ферментацию эскулина, рамнозы и являющихся положительными в тестах на сахарозу и сорбит (Кузнецов, 2000; Ценева, Солодовникова, Воскресенская, 2002; Смирнов, 2004). Согласно нашим данным, 10 штаммов из 14 (Е 572,П812,П 1072,П 1092,П 113ЬК 120,, ПТ 1342, Е 1372, М 60, М 138) обладали рядом признаков вирулентных иерсиний и являлись патогенными. У остальных изолятов признаки вирулентности носили вариабельный характер.

Обращает также на себя внимание тот факт, что 6 штаммов были выделены из лифоузлов КРС и свиней хозяйств Петровского района. Е.С. Осипчук (2003) из молока КРС различных хозяйств Петровского района изолировала 29 штаммов У.еШегосоНИса, 8 из которых были отнесены к серовару ОЗ, три к 09. Это подтверждает непрерывную циркуляцию УеШегосоПИса вышеназванных сероваров в животноводческих объектах Петровского района с включением в эпизоотическую цепь, как животных, так и продуктов животного происхождения.

Таким образом, результаты наших исследований позволяют утверждать, что мясо и мясные продукты могут являться возможными факторами передачи при иерсиниозной инфекции человека и животных.

Следующим этапом явилось изучение влияния низких положительных температур на динамику развития У.еп1егосо1Шса в фарше колбасных изделий при различных режимах охлаждения и хранения мяса. Известно, что иер-синии относятся к психрофильным, неприхотливым бактериям, обладающим способностью длительно существовать и накапливаться в пищевых продуктах, а температура +2.+4 °С, являющаяся стандартной при хранении и охлаждении мяса и мясопродуктов, наиболее благоприятна для интенсивного размножения У.еМегосо1Шса (Сомов, Литвин, 1988; Сомов, Тимченко, 1997). В связи с этим, возникла необходимость в подборе режимов холодильной обработки и хранения мяса, способствующих подавлению жизнедеятельности иерсиний.

При изучении влияния режимов охлаждения на жизнеспособность У. еШегосоИНса в мясном фарше установлено, что более эффективными являются быстрый и, в меньшей степени, ускоренный режимы охлаждения мяса. Медленное одностадийное охлаждение (+2.+4 °С, 26 — 28 ч) благоприятствует быстрому увеличению количества иерсиний в фарше.

Исследование динамики выживаемости У. еМегосоНИса в мясном фарше при различных режимах хранения показало, что режим хранения с подмораживанием (-1.-2 °С) по сравнению со стандартными технологиями хранения мяса (0.+2 °С) обеспечивает быстрый эффект торможения роста иерсиний и значительно снижает риск заражения иерсиниозом.

Таким образом, результаты исследований позволяют заключить, что стандартные режимы хранения мяса при температуре +2 °С создают условия для интенсивного размножения иерсиний в фарше, что соответствует мнению многих авторов о психрофильной природе возбудителя иерсиниоза (Сомов, Варвашевич, Тимченко, 1991; Кузнецов, Багрянцев, Клименко, 1992). Поэтому быстрое одностадийное охлаждение (—3.-5 °С, 12-16 ч) и последующее хранение охлажденного мяса при температуре —1.-2 °С могут быть рекомендованы как эффективный способ ингибирования У. еШегосоШюа в мясе.

С целью предотвращения размножения иерсиний в фарше в процессе его созревания было проведено исследование влияния ряда пищевых добавок на выживаемость иерсиний и изучена динамика изменения их количества в зависимости от введения различных концентраций соли, нитрита натрия, фосфата и лактата натрия. Анализируя результаты эксперимента, мы заключили, что возбудитель иерсиниоза относится к умеренно солеустойчивым бактериям и размножается при концентрациях соли 2-4 %. Медленное подавление роста У. еШегосо1Шса происходит лишь при концентрации соли 4,5 %. Наши результаты частично расходятся с литературными источниками, в которых указано, что иерсинии в условиях низких положительных температур выдерживают концентрации соли 10 % (СП 3.1. 094-96, ВП 13.3131896).

Установлено, что независимо от концентрации нитрита натрия на третьи сутки иерсинии в образцах фарша не обнаруживали, что соответствует сообщениям некоторых исследователей о том, что NaNC>2 является сильнейшим ингибитором патогенной микрофлоры (Люк, Ягер, 2000). По сравнению с нитритом натрия фосфаты оказывают умеренное подавляющее действие на размножение Y. enterocolitica. Даже при максимальной концентрации фосфата (0,5 %) иерсинии высевали в количестве 1,2 х 103 КОЕ/г фарша.

В результате исследования действия лактата натрия было установлено его сильное ингибирующее действие в отношении Y. enterocolitica. Уже на 2-е сутки отмечали эффект торможения роста иерсиний, а на 5-й день при содержании лактата натрия в фарше 5 % наблюдали их полное отмирание. Наши данные соответствуют результатам исследований других авторов (Сарай-кина, Козина, Лебедева, 2001; Красуля, 2002), которые показали, что лактат натрия PURASAL производства фирмы «PURAC biochem bv» (Нидерланды) тормозит развитие таких патогенов, как листерии, клостридии, сальмонеллы, псевдомонады, и является безопасным консервантом с сильным антибактериальным эффектом. Необходимо отметить, что L. monocytogenes, так же как и Y enterocolitica является психрофильным микрорганизмом.

С целью установления степени влияния бактериальных препаратов на рост иерсиний в условиях производства традиционных сыровяленых колбас была проведена сравнительная оценка двух методов сушки и созревания (холодного и горячего) на устойчивость Y. enterocolitica в модельных образцах сыровяленой колбасы «Московская» при добавлении коммерческих бактериальных препаратов ПБ-МП и GN-StartSL-67. Результаты исследований показали, что препарат ПБ-МП оказался более сильным ингибитором роста Y. enterocolitica, чем GN-StartSL-67. Это связано, по-видимому, с тем, что в состав ПБ-МП входят штаммы L. plantarium. По мнению Jakubczak et al. (1996) штаммы лактобацилл обладают сильным антагонистическим действием по отношению к Y. enterocolitica ОЗ сероварианта, выделенных из туш забитых свиней. Что касается выбора способа созревания и сушки, то холодный способ рекомендуется как наиболее эффективный для подавления жизнедеятельности иерсиний, так как общая концентрация иерсиний в продукте в процессе холодного созревания меньше в среднем на два порядка. Таким образом, анализируя результаты исследования о влиянии бактериальных препаратов при созревании фарша и в процессе сушки, можно заключить, что при совокупном использовании культур-антагонистов и процесса сушки можно обеспечить достаточно сильный эффект торможения роста Y. enterocolitica. Сообщения других авторов о том, что штаммы Lactobacillus plantarium и Leuconostoc spp. (продуценты молочной кислоты) при определенных условиях могут проявлять антагонизм в отношении Y.enterocolitica (Смирнов, 2004), также согласуются с нашими данными.

Необходимо отметить, что возможность заражения иерсиниозом при употреблении колбас без термической обработки является малоизученным вопросом. Многие авторы обращают внимание на то, что большим фактором риска при иерсиниозной инфекции человека является нарушение технологии приготовления некоторых колбас с процессом созревания мясного фарша с добавлением 3 %-го хлористого натрия в условиях хранения в холодильнике в течение 2-3 суток (Дулатова, 1989; Куликовский, Джентемирова, 1993). Такими изделиями как раз являются сыровяленые и сырокопченые колбасы, режимы термической обработки которых недостаточны для подавления Y. enterocolitica.

Таким образом, в результате проведенной работы нам удалось выяснить условия, которые препятствуют размножению Y. enterocolitica в сырье в процессе производства сыровяленых и сырокопченых колбас.

Заключительным этапом исследования явилось определение возможности и целесообразности использования НМФА для быстрого обнаружения Y. enterocolitica в мясе. Установлено, что НМФА, выгодно сочетающий принципы иммунологического и морфологического исследований с люминесцентным анализом, отличается высокой чувствительностью и информативностью. Чувствительность метода составила 1x104 КОЕ/мл, что соответствует данным литературы. С помощью НМФА исследовано 34 пробы заглоточных лимфоузлов свиней. Паралельно с НМФА проводили бактериологическое исследование отобранных проб, в результате которого было выделено три культуры У. еМегосоИНса. НМФА дал положительные результаты в 7 случаях, включая культуры, выделенные культуральным методом. Установлено, что два штамма принадлежали к ОЗ серогруппе, пять - к 09. Необходимо отметить, что три штамма выделены из лимфоузлов свиней из хозяйств Петровского района, где ранее изолировались У. еп1егосо1Шса. Эти данные совпадают с результатами других авторов (Ценева, 1992) и подтверждают, что НМФА в два раза более эффективен для быстрой индикации У еМегосо1Шса в мясе, чем бактериологический метод.

Таким образом, показано, что основными преимуществами НМФА являются высокая чувствительность и возможность быстрого выявления возбудителя кишечного иерсиниоза при исследовании в материале со среды накопления.

Резюмируя результаты исследований, можно констатировать тот факт, что одними из факторов передачи иерсиниозной инфекции являются мясо и мясопродукты. Об этом свидетельствуют данные, полученные при исследовании мяса и мясопродуктов из хозяйств Саратовской области и магазинов г. Саратова. Бактериологическим методом из мяса изолировано 14 штаммов У еШегосоНИса (9,92 %), причем большая часть культур являлись вирулентными. Можно также утверждать, что применение стандартных режимов холодильной обработки не только не подавляют рост кишечных иереиний в мясном сырье, но и значительно увеличивают количество клеток У. еШегосо-1Шса, и как следствие повышают вероятность заражения иерсиниозом. Изучение влияния пищевых добавок на выживаемость возбудителя кишечного иерсиниоза в процессе производства колбасных изделий показало, что ЫаС1, нитрит натрия, фосфаты, лактат натрия и бактериальные препараты в определенных концентрациях обладают ингибирующим действием на размножение кишечных иерсиний.

Таким образом, в результате проведенных исследований нам удалось выявить условия, которые препятствуют накоплению в мясопродуктах возбудителя кишечного иерсиниоза и подавляют дальнейшее размножение У.еМегосоИНса в процессе производства и хранения колбасных изделий. Для идентификации У. еМегосоИНса в мясе и мясопродуктах можно рекомендовать НМФА, который имеет ряд преимуществ перед классическим бактериологическим методом.

97

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Киселева, Ирина Сергеевна, 2005 год

1. Актуальные проблемы эпидемиологии инфекционных болезней в Сибири // под ред. Г.Г. Онищенко М., 1999. - С. 128 - 132.

2. Белая О.Ф., Черкасов В.Л., Белая Ю.А. и др. Реакция коагглюти-нации при кишечных инфекционных заболеваниях // Методические рекомендации. — М., 1990. — 12 с.

3. Белова М.А., Ющенко Г.В. Случай выделения У.еМегосоИНса от человека // ЖМЭИ. 1968. - № 9. - С. 148 - 150.

4. Березкина Г.В. Иерсиниозы в Омской области // Актуальные аспекты природно-очаговых болезней. — Омск, 2001. — С. 201 — 203.

5. Бузолева Л.С., Сомов Г.П. Об эпидемиологической опасности хранения пищевых продуктов при низкой температуре // Гиг. и санитария. — 2000.- №3. —С. 31 -34.

6. Ващенок Г.И. Болезни с природной очаговостью // Труды ЛНИИЭМ им. Пастера. Л., 1983. - С. 82 - 87.

7. Головчак Г.С. Проблема иерсиниозов. Эколого-эпидемиологические аспекты // Междунар. мед. журн. — Харьков, 1999. -№2.-С. 128- 130.

8. Гордейко В.А., Воронцова Т.А., Литвин В.Ю. Сероэпидемиоло-гическое изучение кишечного иерсиниоза у работников свинокомплексов // ЖМЭИ. 1990. - №3. - С. 111 - 112.

9. Гордейко В.А., Литвин В.Ю., Шустрова И.М. Иерсинии в почве полей, орошаемых сточными водами свинокомплекса // Гиг. и санитария. -1991.-№1.-С. 28-30.

10. Гречищева Т.С. Кишечные иерсиниозы (псевдотуберкулез и иер-синиоз) у людей в Егорьевском районе Московской области // Актуал. вопр. инф; патологии. Саратов, 1981. - С. 46 - 48.

11. Гурлева Г.Г. Упрощенный способ определения серологических вариантов У.еШегосоИНса II Лаб. дело. 1989. - №7. - С. 70 — 72.

12. Гурлева Г.Г., Колпинова Л.Д. Сравнительная оценка роста Y.enterocolitica на различных элективных средах // Лаб. дело. — 1989. — №4. — С. 71-72.

13. Джентемирова К.М. Экология Y.enterocolitica во внешней среде // Автореф. дисс. . канд. вет. наук. — М., 1990. 24 с.

14. Догель Л.З., Карплюк И.A. Y.enterocolitica как возможный возбудитель пищевых токсикоинфекций // Вопр. питания. — 1984. — № 3. — С. 3 — 6.

15. Дулатова М.В. Кишечный иерсиниоз. Л., 1989. - 126 с.

16. Дунаев В.И., Амиркулов А.И. Антигенное родство Y.enterocolitica с родом Brucella II Актуал. вопр. инф. патологии. — Саратов, 1981 С. 58-60.

17. Зайцев Б.Е., Маненкова Г.М., Лыткина И.Н., Родина Л.В. Заболеваемость псевдотуберкулезом и иерсиниозом в г. Москве // Актуал. вопр. эпидемиол. инф. заболеваний. Сборник научных трудов (вып.З). — М., 1999. — С. 67-77.

18. Зыкин Л.Ф., Оркин В.Ф., Щербаков А.А. и др. Распространение иерсиниозов сельскохозяйственных животных в Саратовской области // Экологические аспекты эпизоотологии и патологии животных. — Воронеж, 1999.-С. 22-24.

19. Зыкин Л.Ф., Щербаков A.A. Кишечный иерсиниоз и псевдотуберкулез в патологии сельскохозяйственных животных // Матер, научно-производ. конфер. по актуал. проблемам ветеринарии и зоотехнии. — Казань, 2001. 4.1. — С. 35-38.

20. Зыкин Л.Ф., Щербаков A.A., Хапцев З.Ю. Иерсиниоз и псевдотуберкулез сельскохозяйственных животных. — Саратов, 2002. — 67 с.

21. Иерсиниоз // Учебно-методическое пособие / Под ред. Ющук Н.Д., Галимзянова Х.М. Астрахань-Москва, 2001. - 48 с.

22. Иерсиниозы // Лекции по инфекционным болезням/ Под ред. Н.Д. Ющук, В.Я. Венгерова. М., 1999. - Т. 1. - С. 339 - 354.

23. Инструкция по эпидемиологии, лабораторной диагностике иер-синиозов, организации и проведении профилактических и противоэпидемических мероприятий // Утв. зам. нач. ГЭУ МЗ СССР Онищенко Г.Г., приказ № 15-6/42 от 30.10.90.-48 с.

24. Иммунолюминесценция в медицине // Под ред. E.H. Левина. — М.: Медицина, 1977. С. 46 - 71.

25. Каландадзе Е.П. Псевдотуберкулез и иерсиниоз в крупном птицеводческом комплексе // Автореф. дисс. . канд. мед. наук. — М., 1991. — 21 с.

26. Кожаева Д.К., Померанцев Д.А. Разработка оптимальной схемы выделения У.enterocolitica из мясопродуктов // Сб. научных работ Ульяновской сельскохозяйственной академии. — Ульяновск, 2000. — С. 23 — 25.

27. Колос E.H., Тутов H.H., Ющенко Г.В., Дунаев В.И. Сельскохозяйственные животные как источник иерсиниозов // ЖМЭИ. — 1985. — № 4. — С. 77-79.

28. Корчагин Г.А. Сравнительная характеристика лабораторных методов диагностики кишечного иерсиниоза // Автореф. дисс. . канд. биол. наук. — Ульяновск, 2002. —16 с.

29. Красуля О.Н. Соли молочной кислоты надежный барьер для безопасности мясных продуктов. - Мясн. индустрия. - 2002. - № 5. — С. 19-21.

30. Костенко Ю.Г., Солодовникова Г.И., Кузнецова Г.А., Самойлен-ко В.А. Новый бактериальный препарат — основа ускоренной технологии производства сырокопченых колбас. — Мясн. индустрия. — 1997. № 1. — С. 9-10.

31. Кузнецов В.Г. Сигнальная идентификация потенциально патогенных иерсиний // Клин. лаб. диагн. 2000. - №. 1. - С. 46 - 48.

32. Кузнецов В.Г., Багрянцев В.Н., Клименко В.В. Роль рефрижераторов в распространении бактерий рода Yersinia II Гиг. и санитария. 1992. -№ 2. - С. 43 - 46.

33. Кузнецова Т.Г., Ленченко Е.М., Штукарева М.Ю. О роли пищевого пути передачи возбудителя иерсиниоза // Пища, экология, человек: Матер. Междунар. научно-практ. конф. М., 1995. - С. 208.

34. Куликовский A.B., Джентемирова K.M. Иерсиниоз актуальная проблема ветеринарной медицины // Ветеринария. - 1993. - №11 -12. -С. 28-35.

35. Куликовский A.B., Соснина В.В. Пищевые зоонозы — актуальная проблема ветеринарии // Актуал. проблемы ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции. — М., 1995. С. 3 - 4.

36. Лакин Г.Ф. Биометрия // Учебное пособие для биологических специальностей вузов. М.: Высш. школа, 1980. - 293 с.

37. Ленченко Е.М. Биология и экология иерсиний — возбудителей пищевых токсикоинфекций // Дисс. докт. вет. наук МГУПБМ. — 2000. — 300 с.

38. Ленченко Е.М. Иерсиниоз. Этиология, диагностика, меры борьбы и профилактика (проблемная лекция). М., 2002. — 42 с.

39. Ленченко Е.М., Штукарева М.Ю. Сравнительная оценка трех методов выделения иерсиний из пищевых продуктов // Пища, экология, человек: Матер. Междунар. научно-технич. конф. М., 1995. — С. 215.

40. Литвин В.Ю. Сапрофитическая фаза в экологии возбудителей инфекционных заболеваний // ЖМЭИ. 1985. - № 6. - С. 98 - 101.

41. Литвин В.Ю. Экология возбудителей сапронозов. М., 1998. -С. 20-34.

42. Литвин В.Ю. Эколого-эпидемиологические аспекты случайного паразитизма некоторых патогенных бактерий // ЖМЭИ. — 1986. — № 1. — С. 85-91.

43. Люк Э., Ягер М., Консерванты в пищевой промышленности. — СПб.: ГИОРД, 2000. 256 с.

44. Мясо. Методы бактериологического анализа. ГОСТ 21237 — 75. М., «Издательство стандартов», 1976. — 45 с.

45. Наставление по диагностике бруцеллеза животных. Рекомендации по дифференциальной диагностике бруцеллеза и иерсиниоза и меры по их профилактике. М.: ФГИУ «Росинформагротех», 2000. - 96 с.

46. Наттерман X. Этиология и патогенез инфекции Y.enterocolitica // Ветеринария. 1987. -№ 10. - С. 20 - 24.

47. Опочинский Э.Ф., Мохов Ю.В., Лукина З.А. Лабораторная диагностика иерсиниозов // Матер. VIII съезда ЭМП. — М. — 2002. — С. 307 — 308.

48. Определитель бактерий Берджи. М.: Мир, 1997. - Т.1. - С. 195 -196, 227-229.

49. Осипчук Е.С. Молоко как фактор передачи возбудителя кишечного иерсиниоза // Дисс. канд. биол. наук. — Саратов, 2003. 114 с.

50. Петрова H.A. В кн.: Эпидемиология и профилактика инфекционных болезней. Л., 1982. - С. 37 - 39.

51. Писаренко И.И., Куцевалов С.И., Проценко С.Л. Характеристика иерсиний, выделенных от овец // Ветеринария. 1990. — №2. - С. 43 - 46.

52. Медицинская микробиология // Под ред. В.И. Покровского. — М., 1999.- С. 105- 153.

53. Покровский В.И. Руководство по зоонозам. — СПб., 1983. — С. 150- 153.

54. Померанцев Д.А., Васильев Д.А. Золотухин С.Н. Разработка ускоренной схемы выделения и идентификации бактерий вида Y enterocolitica II Вопросы микробиологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы. Ульяновск, 2000. — С. 19-21.

55. Попов Ю.А. Конструирование и использование ДНК зондов на представителях рода Yersinia II Генетика, микробиология и совершенствование методов лабораторной диагностики ООИ. — Саратов, 1991. - С. 3 — 13.

56. Практическое пособие для подготовки врачей-бактериологов и эпидемиологов по вопросам противодействия биотерроризму // Под ред. Г.Г. Онищенко. Волгоград, 2004. - С. 179 - 191.

57. Профилактика инфекционных болезней. Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных. Иерсиниозы. Санитарные правила СП 3.1. 094 — 96. Ветеринарные правила ВП 13.3.1318 — 96. -М., 1996.-С. 175-188.

58. Распространение инфекций, вызываемых Y.enterocolitica II Хроника ВОЗ, 1977. -Т.31. —№ 4 — С. 216 — 218.

59. Руководство по профилактике чумы // Под ред. A.B. Наумова и JI.B. Самойловой. Саратов, 1996. - 278 с.

60. Руководство по эпидемиологии инфекционных болезней // Под ред. В.И Покровского. М.: Медицина, 1993. - Т.2. - С. 133 -148.

61. Сабурин В.А. Иерсиниоз животных в правобережной части Среднего Поволжья: (эпизоотология, меры борьбы) // Автореф. дисс. . канд. вет. наук. СПб., 1995. - 23 С.

62. Сапрыкина Н.В. Распространенность иерсиний редких видов и эпидемиология иерсиниозов в условиях крупного города // Автореф. дисс. . канд. мед. наук. М., 1990. - 21 С.

63. Сарайкина Е.А., Козина З.А., Лебедева Л.И. Лактат натрия повышает срок хранения продукта. — М., Мясная индустрия. — 2001. — № 9. — С. 19-21.

64. Системы анализов рисков и определение критических контрольных точек: НАССР/ХАССП. Государственные стандарты США и России. — М., 2003. -594 с.

65. Смирнов И.В. Возбудитель иерсиниоза и близкие к нему микроорганизмы // Клин, микробиол. и антимикроб, химиотерапия. 2004. — Т.6. — №1. — С. 10-21.

66. Смирнов И.В. Генетические аспекты вирулентности Yersinia еп-terocolitica и их значение для микробиологической диагностики иерсиниоза. -Рязань, 1991.-290 с.

67. Смирнов И.В., Горохов В.И. Диагностическая сыворотка с антителами к вирулентным иерсиниям // Лаб. дело. — 1990. № 10. - С. 66 — 68.

68. Смирнов И.В., Ценева Г.Я. Культуральные свойства и вирулентность иерсиний //ЖМЭИ. 1991. - № 9. - С. 13 - 16.

69. Сомов Г.П. Выделение группы сапрозоонозов // Тез. докл. XII Всесоюзн. конфер. по природной очаговости болезней. — Новосибирск, 1989.-С. 42-44.

70. Сомов Г.П. Особенности экологии внеорганизменных популяции патогенных бактерий и их отражение в эпидемиологии инфекций // ЖМЭИ. — 1997. № 5. — С. 7 - 11.

71. Сомов Г.П., Варвашевич Т.Н., Тимченко Н.Ф. Психрофильность патогенных бактерий // Новосибирск, «Наука». 1991. - С. 14-16.

72. Сомов Г.П., Литвин В.Ю. Сапрофитизм и паразитизм патогенных бактерий // Экологические аспекты. Новосибирск, 1988. - С. 35 — 38.

73. Сомов Г.П., Тимченко Н.Ф. Основные итоги изучения психро-фильности патогенных бактерий // ЖМЭИ. — 1997. — № 5. — С. 12 — 16.

74. Спиряхина Т.В. Биотипирование Yersinia enterocolitica, изолированных от сельскохозяйственных животных в Саратовской области // Ветеринарная практика. 2004. - № 9. — С. 26 —29.

75. Спиряхина Т.В., Хапцев З.Ю., Осипчук Е.С., Зыкин Л.Ф. Характеристика свойств Yersinia enterocolitica, выделенных от животных из хозяйств Саратовской области // Практик. 2004. — № 9-10. - С. 12 —14.

76. Сыпченко А .Я., Прокопьева Л.С., Гаранина Е.И. и др. Распространение во внешней среде иерсиний и роль иерсиниоза в кишечной патологии больных // Пищевые зоонозы: Матер, междунар. симпоз. — М., 1995. — С. 73-75.

77. Тимченко Н.Ф. Патогенетическое значение психрофильности Y. pseudotuberculosis // Автореф. дисс. . докт. мед. наук Владивосток, 1989.-44 с.

78. Тимченко Н.Ф., Павлова Т.Н., Андрюков Б.Г. Опыт клинического использования родоспецифического иерсиниозного эритроцитарного ди-агностикума для РНГА // Клин. лаб. диагн. — 1998. № 7. - С. 24 — 34.

79. Хайруллина Р.Г., Черепанова Г.В., Нафеев А.А. Изоляция культур Yersinia enterocolitica с объектов внешней среды за период с 1994 по 1999 гг. // ЖМЭИ. 2002. - № 3. - С. 111 - 112.

80. Хакимов Н.М. Проявление эпидемиологического процесса иерсиниоза и псевдотуберкулеза в Казани // Гиг. окруж. среды и экол. чел. — Саратов, 1999.-С. 81-82.

81. Хапцев З.Ю. Усовершенствование лабораторной диагностики кишечного иерсиниоза сельскохозяйственных животных // Дисс. канд. биол. наук. — Саратов, 2000. — 124 с.

82. Хотько Н.И., Коломиец В.В., Добло А.Д. и др. Опыт диагностики диарейных заболеваний иерсиниозной этиологии в Среднем Поволжье // Инфекции, обусловленные иерсиниями: Матер. Междунар. конфер. СПб., 2000.-С. 64-65.

83. Ценева ГЛ. Варианты проявления основных патогенных свойств иерсиний в эксперименте и их сопоставление с изменениями у больных // Инфекции, обусловленные иерсиниями: Матер, междунар. конфер., СПб., 2000.-С. 66.

84. Ценева Г.Я. Иерсиниоз и псевдотуберкулез. СПб., 1992. — 60 с.

85. Ценева Г.Я. Лабораторная диагностика псевдотуберкулеза и иерсиниоза. СПб., 1997. - 62 С.

86. Ценева Г.Я., Солодовникова Н.Ю., Воскресенская Е.А. Молекулярные аспекты вирулентности иерсиний // Клин, микробиол. и антимикроб, химиотерапия. 2002. - № 3 - Т.4. - С. 248 - 266.

87. Черкасский Б.Л. Теоретические аспекты проблемы надзора за пищевыми зоонозами // «Пищевые зоонозы». — М., 1995. — С. 16 17.

88. Шаханина И.А., Осипова Л.А., Радуто О.И. Экономический ущерб, наносимый инфекционными болезнями в РФ по состоянию на декабрь 2000 г. // Эпид. и инф. бол. 2001. - № 6. - С. 58.

89. Шеффер А.П., Шишкина H.H., Белоусов A.A. Сверхбыстрое охлаждение и его влияние на качество мяса. — Мясн. индустрия. — 1973. -№4.-С. 20-23.

90. Шпилюк Г.Ф., Головешкина Т.Н., Володина И.К. и др. Имму-ноглобулиновые латексные препараты для экспресс-диагностики иерсинио-зов // ЖМЭИ. 1993. - № 6. - С. 92 - 93.

91. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни. М., 1982. — С. 376-383.

92. Шумилов К.В., Мельниченко Л.П., Селиверстов В.В. Современные данные об иерсиниозе животных // Ветеринария. — 1998. — № 4. — С. 7-13.

93. ЮничеваЮ.В., Брудный P.A., Буланова Е.Е. и др. Природно-очаговые инфекции в субтропической зоне Краснодарского края // Актуальные аспекты природно-очаговых болезней: Матер, межрегион, научно-практич. конфер. Омск, 16-17 октября 2001. — С. 284.

94. Ющенко Г.В. Актуальные вопросы эпидемиологии и клиники иерсиниоза (обзорная лекция). — М., 1984. — 52 с.

95. Ющенко Г.В. К проблеме острых кишечных инфекций, вызываемых некоторыми условно патогенными микробами // Пищевые токсико-инфекции. Саратов, 1997.- С. 220-225.

96. Ющенко Г.В. Некоторые аспекты эпидемиологии и экологии иерсиниоза // Современные проблемы зоонозных инфекций: Тез. докл. Все-союзн. межведом, конфер. — Симферополь. М., 1981. — С. 69 — 70.

97. Ющенко Г.В. Род Yersinia // Энтеробактерии (Руководство для врачей под ред. В.И. Покровского).— М.: Медицина, 1985. — С. 220 — 239.

98. Ющенко Г.В. Современное состояние проблемы иерсинио-зов // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 1998. № 6. - С. 8 — 11.

99. Ющенко Г.В. Экологические аспекты эпидемиологии иерсиниоза и псевдотуберкулеза // Автореф. дисс. . докт. мед. наук. М., 1989. — 43 с.

100. Ющенко Г.В., Дунаев В.И. Методика выделения и идентификации Y. enterocolitica и Y.pseudotuberculosis II Лаб. дело. — 1980. — № 6. — С. 367-370.

101. Ющенко Г.В., Дунаев В.И. Новый метод выделения иерсиний от больных и из объектов окружающей среды и сравнительная оценка его с общепринятыми // Вопросы физиологии, метаболизма и идентификации микроорганизмов.-М., 1987.-С. 115-119.

102. Ющук Н.Д., Венгерова В .Я. Иерсиниозы // Лекции по инфекционным болезням. М., 1999.-Т.1.-С. 339-354.

103. Ющук Н.Д., Кареткина Г.Н. Иерсиниоз // Советская медицина. 1987. - № 9. - С. 54-58.

104. Ющук Н.Д., Ценева Г.Я., Кареткина Г.Н., Бродов Л.Е. Иерсиниозы. М.: Медицина, 2003. - 208 С.

105. Янковский К.С., Костенко Ю.Г., Ерофеева Ю.К. Контроль пищевых продуктов на наличие листерий М., Мясная индустрия — 2003. — № 1- С. 26 -29.

106. Andersen G.K. Contamination of freshly slaughtered pig carcases with human pathogenic Yersinia enterocolitica II Food Microbiol. 1988. — Vol. 7, №3.- P. 193-202.

107. Aulisio C.C.G., Lanier J. M., Chappel M.A. Yersinia enterocolitica 013 associated with outbreaks in three southern states // J. Food Prot. 1982. -Vol. 45.-P. 1263.

108. Aulisio C.C.G., Mehlman I.J., Sanders A.C. Alcali method for rapid recovery of Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis from foods//Appl. Environ. Microbiol. 1980.-Vol. 39.-P. 135-140.

109. Aulisio C.C.G., Stanfield J.T., Hill W.E. Yersiniosis associated with tofu consumption: serological, biochemical and pathogenicity stadies of Yersinia enterocolitica isolates // J. Food Prot. 1983. - Vol. 46. - P. 226 - 230.

110. Black R.E., Jackson R.J., Tsai T. Epidemic Yersinia enterocolitica infection due to contaminated chocolate milk // N. Engl. J. Med. 1978. -Vol. 278.-P. 76-79.

111. Bockemuhl J., Wong J. Yersinia. In: Murray P.R., Baron E.J., Jor-gansen J.H., Pfaller M.A. Yolken R.H. // Manual of clinical microbiology. 8th ed. Washington (DC): ASM Press, 2003. P. 672 - 683.

112. Boer de E., Nows J.F.M., Nijland E., Smulders A.N.S. Varkens (Vlees) als bron van pathogene Yersinia enterocolitica // Tijdschr. Diergenels. — 1991.-Vol. 116, №6.-P. 227-280.

113. Bottone E.J. Yersinia enterocolitica: overview and epidemiologic correlates// Microb. Infect. 1999. - Vol. 1. - P. 323 - 333.

114. Bozhkova K. Production of haemolysins by Yersinia enterocolitica strains // Scr. sei. med. 1996. - Vol. 29. - P. 71 - 73.

115. Bult M. et al. Является ли мясо, контаминированное Y.enterocolitica, патогенным для человека? // Fleischwirtschaft. 1992. — Vol. 72. - №9. - P. 1267 - 1270. Цит. РЖБ. -1993. - ЗБ, 4052.

116. Cabedo L., Sofos J.N., Schmidt G.R., G.C. Smith. Attachment of Escherichia coli 0157:H7 and other bacterial cells grown in two media to beef adipose and muscle tissues // J. Food Prot. 1997. - Vol. 60. - P. 102 - 106.

117. Carter P.B., Collins F.M. Experimental Y.enterocolitica infection in mice: kinetics of growth // Infect. Immun. 1974. - Vol. 9. — P. 851 - 857.

118. Cornelis G.R., Boland A., Boyd A.P., et al. The virulence plasmid of Yersinia, antihost genome // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1998. - Vol. 62. -P. 1315- 1352.

119. Cox P., Rossel R., Gaya A., Prats G. Research not: the presence of Yersinia enterocolitica and other Yersinia species on the carcasses of market broilers // Poultry Sei. 1990. - Vol. 69, № 3. - P. 482 - 485.

120. Czernomysy-Furowicz D., Furowicz A. J, Karakulska J., Nawro-tek P., Peruzynska A., Kalisinska E. A case of isolation Yersinia enterocolitica from dack muscles // Adv. Agr. Sei. 1999. - Vol. 6, № 1. - P. 19 - 23.

121. De Boer E. Characteristion of Y. enterocolitica in the Netherland // Int. J. Food Microbiol. 1986. - №3. - P. 217 -224.

122. Doyle M.P., Hagdahl M.B., Taylor S.L. Isolation of virulent Yersinia enterocolitica from porcine tongues // Appl. Environ. Microbiol. — 1981. -Vol. 42.-P. 661-666.

123. Frederiksson — Ahomaa M. Contamination carcasse, oflals and environment with Yad- A positive Y.enterocolitica in pig slaughterhouse // J. Food Prot.-2000.-Vol. 63, № l.-P. 31 -35.

124. Frederiksson Ahomaa M. High prevalence Yad - A positive Y.enterocolitica in pig tongues and minsedmeat at retail level in Finland I I J. Food Prot. - 1999. - Vol.62, № 2. - P. 123 - 127.

125. Fukushima I., Hoshina K., Itogowa H., Gomyoda M. Introduction into Japan of pathogenic Yersinia through imported pork, beef and towe // Int. J. Food Microbiol. 1997. - Vol.35, № 3. - P. 205 - 212.

126. Fukushima I., Marugama K. Omori I. et al. Kontamination von Schweinen mit Yersinia im Schlachthaus // Fleischwirtschaft. 1990. - Vol.70, № 10.-P. 1330-1332.

127. Garrigue G., Poveda F., Carniel E. Yersiniosis: Rappel bacteriologique, epidemiologique et clinique. Etude de serologic en France // Feniel. Biol. 1993. - Vol. 190. - P. 25 - 28.

128. Gemski P., Lazere J. R., Casey T. Plasmid associated with pathogenicity and calcium dependence of Yersinia enterocolitica // Infect. Immun. — 1980. Vol. 27. - P. 682 - 685.

129. Greer G.G. Acid decontamination of pork // W. Hog. J. 1995. -Vol. 16,№4.-P. 36-46.

130. Heesemann J. Enteropathogenic yersiniosis: pathogenicity factors and new diagnostic methods Germany. // Infect. Immun. 1990. - Vol.18. -P. 186-191.

131. Heesemann J., Keller C., Morawa R., Schmidt N., Seimens H.J., Laufs R. Plasmid of human strains of Yersinia enterocolitica: molecular related-ness and possible importance// J. Infect. Dis. 1983. — Vol. 147. — P. 107 — 115.

132. Jagow J., Hill Walter E. Enumiration by DNA colony hybridization of virulent Yersinia enterocolitica colonies in artificially contaminated food // Appl. and Environ. Microbiol. 1986. - Vol. 51, № 2. - P. 441 - 443.

133. Jakubczak A., Kot В., Bukowski К. Antagonistic activity of lactic acid bacteria on strains of Yersinia enterocolitica ОЗ, isolated from slaughtered pigs//Adv. Agr. Sei. 1996.-Vol. 5, № 1.-P. 31 -35.

134. Joshi N., Singh A. Detection of Yersinia enterocolitica by isolation and fluorescent antibody test from meat and infected tissues // J. Res. / Punjab. Agr. Univ. 1999. - Vol. 36, № 3-4. - P. 257 - 262.

135. Kandolo K., Wauters G. Pyrazinamidase activity in Yersinia enterocolitica and related organisms // J. Clin. Microbiol. 1985. - Vol. 21. —1. P. 980-982.

136. Kwaga Jacob K.P., Iversen John O. Laboratory investigation of virulence among strains of Yersinia enterocolitica and related species isolated from pigs and pork products // Can. J. Microbiol. 1992. - Vol. 38, № 2. - P. 92 - 97.

137. Lian C.J., Hwang W.S., Kelly J.K., Pai C.H. Invasiveness of Yersinia enterocolitica lacking the virulence plasmid: an in vivo study // J. Med. Microbiol. 1987. - Vol. 24. - P. 219-226.

138. Logue C.M., Sheridan J. J., McDowell D.A., Blair I.S. The use of a sarface adhesion immunofluorescent (SAIF) method for the rapid detection of Yersinia enterocolitica serotype 03 in meat // J. Appl. Microbiol. — 1998. — Vol. 85, №4. -P. 737 -745.

139. Marth E. H. Extended Shelf life refrigerated foods: Microbiological quality and safety. Food Tech., 1998. - Vol. 52. - P. 59 - 66.

140. Mickova V. Vyskyf Yersinia enterocolitica, zvlaste serovaru 0:3, biovaru 4 ve veprovem a hovezim mase // Cs. Epidemiol., microbial., immunol. — 1990. Vol. 39, № 4. - P. 222-227.

141. Miller V.L., Falkow S. Evidens for two genetic loci from Yersinia enterocolitica that can promote invasion of epithelian cells // Infect. Immun. —1988. Vol. 56. - P. 1242 - 1248.

142. Naktin J., Beavis K.G. Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis II Clin. Lab. Med. 1999. - Vol. 19. - P. 523 - 536.

143. Nattermann H., Horsch F., Seeger M., Schingmann H. Orientierend Untersuchungen zur Immunprophylaxe der Yersinia-enterocolitica-lnfoktion des Schweines II Mh. Veter.-Med. 1990. - Vol. 45. - P. 709 - 713.

144. Nesbakken T., Jensen J.S. Salmonella, Campylobacter and Yersinia in pork // 4 th Intern. Symposium on the Epidemiology and Control of

145. Salmonella and Other Food Pathogens in pork, 2-5 September 2001, Polish. -Leipzig, 2001.-P. 26-28.

146. Nilehn B., Ericson C. Studies on Yersinia enterocolitica bacteriophages liberated from chloroform treated cultures // Acta path. Microbial. Scand., Sect. B. 1969. - Vol.75, № 1. - P. 177 - 187.

147. Norbert K., Untermann F., Beissher H. Zum vorkommen von Salmonella und Yersinia spezies sowie Listeria monocitogenes in Harkfleisch // Fleischwirtschaft. 1989. - Vol. 69, № 9. - P. 1474 - 1476.

148. Pederson K.J., Carlson S., Pierson D.E. The ClpP protein, a subunit of the Clp protease, modulating ail gene expression in Yersinia enterocolitica II Mol. Microbiol. 1997. - Vol. 26. - P. 99 - 107.

149. Pierson D.E., Falkow S. The ail gene of Yersinia enterocolitica has a role in the ability of the organism to survive serum killing// Infect. Immun. — 1993.-Vol. 61.-P. 1846-1852.

150. Quaglio P., Aggazzotti G., Fabio A. et al. Presenza di batteri ap-partenenti al genere Yersinia in agna superficiali e di falda //Ann. Ig.: Med. prev. comunita- 1989. -Vol. 1,№ 1,2.-P. 157-162.

151. Quaglio P., Aggazzotti G., Messi P. et al. Presenza di batteri ap-partenenti al genere Yersinia in alimenti carnie in vendita al dettaglio // Ril. Ital. Ig. 1988. - Vol. 48, № 5, 6. - P. 376-378.

152. Saikia G.K., Thapliyal D.C. Enterotoxigenicity as an attribute of virulence in Yersinia enterocolitica I I Indian. J. Experiment.Biol. — 1997. — Vol. 35.-P. 1108-1110.

153. Schiemann D.A. Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis II In: Foodborne Bacterial Pathogens. 1989. — P. 601 — 672.

154. Segomelo К., Kain M.L., Belk K.E., Belliger G.R., Scanga J.A., Sofos J.N., Smith G.C. Changes in inoculated bacterial pathogens on fresh pork stored at temperatures to simulate mild distribution abuse // J. Food Prot. — 2000. — Vol. 31.-96-99.

155. Slee K.J., Skilbeck N.W. Epidemiology of Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis infection in ship in Australia // J. Clin. Microbiol. 1992.-Vol. 30,№3.-P. 712-715.

156. Straley S.C., Perry R.D. Environmental modulation of gene expre-tion and pathogenesis in Yersinia II Trends in Microbiology. — 1995. № 3. — P. 310-317.

157. Wauters G., Goosens V., Janssens M., Vandepitte J. New enrichment method for isolation of pathogenic Yersinia enterocolitica serogroup ОЗ from pork I I Appl. Environ. Microbiol. 1988. - Vol. 54. - P. 851 - 854.

158. Wauters G., Kandolo K., Janssens M. Revised biogrouping scheme of Yersinia enterocolitica II Contrib. Microbiol. Immunol. — 1987. № 9. -P. 14-21.

159. Wauters G., Le Minor L., Chalon A.M., Lassen J. Supplement au Schema antigenique de Yersinia enterocolitica II Ann. Inst. Pasteur. — 1972. — Vol. 122. -№ 5.-P. 951 -956.

160. Weagant S. D. A screening procedure and medium for the presumptive identification of Yersinia enterocolitica II FDA Laboratory Information Bulletin.- 1982.-№2617.

161. Васильев П. Йерсиния ентероколитика в гърлени секрета на свине//Ветеринарнасбирка.- 1986. — № 2.-С. 30-31.

162. Стефанов И. Изолирана на Yersinia spp. от тонзили и езици на рядовно заклани свине // Ветеринарна сбирка. — 1989. — № 8. С. 41 — 43.

163. Стефанов И. Йерсинии и йерсиниози по животните // Ветеринарна сбирка. 1989. - № 7. - С. 39 - 40.

164. Zutter L., de, van Hoff J. Isolation Yersinia enterocolitica from meat and meat products. Flegschwirtschafl, 1988. — Vol. 68. - № 1. - P. 73.