Изучение свойств интерполиэлектролитных комплексов для ингибирования вирусной репродукции in vitro тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат биологических наук Слита, Александр Валентинович

• Слита, Александр Валентинович
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Слита, Александр Валентинович

Введение

Цель исследования

Задачи исследования

Научная новизна

Научно-практическая значимость работы

Основные положения, выносимые на защиту

Апробация работы

Обзор литературы

1. Проблемы химиотерапии вирусных инфекций

1.1. Резистентность вирусов

1.2. Индукторы интерферона в терапии вирусных инфекций

1.3. Побочное действие противовирусных препаратов

2. Физиологически активные полимеры как лекарственные средства

2.2. Обоснование применения полимеров в фармакологии

2.3. Принципы создания полимерных препаратов

2.4. Свойства полимерных препаратовП

3. Генотерапия - новое направление в медицине

3.1. Механизмы действия олигонуклеотидов

3.2. Развитие генотерапевтических подходов от лаборатории к клинике

3.3. Доставка и защита нуклеиновых кислот: проблемы и пути их решения

3.3.1. Клеточные барьеры защиты от чужеродной ДНК

3.3.2. Химическая модификация плазмид и олигонуклеотидов

3.3.3. Недостатки использования модифицированных нуклеиновых кислот

3.4. Векторы для доставки ИНК в клетки

3.4.1. Свойства липосомных векторов

3.4.2. Свойства ретровирусных векторов

3.4.3. Свойства аденовирусных векторов

3.4.4. Достоинства и недостатки вирусных и липосомных векторов

3.5. Белковые трансфекционные векторы

4. Полимерные катионы как транфекционные векторы

4.1. Токсичность трансфекционных поликатионов

4.2. Образование комплексов ДНК-поликатион

4.3. Перемещение ИПЕК через клеточную и ядерную мембраны

4.4. Повышение эффективности трансфекции клеток ИПЕК

4.4.1. Свойства ИПЕК на основе катионных блок-сополимеров

4.4.2. Свойства ИПЕК на основе дендримеров полиамидоаминов

4.4.3. Рецептор-опосредованный транспорт ИПЕК

4.4.4. Перенос ДНК с помощью хитозановых наносфер

Материалы и методы

Клеточные культуры

Вирусы

Плазмиды и олигонуклеотиды

Поликатионы

Получение вируссодержащей жидкости

Получение интерполиэлектролитных комплексов и оценка эффективности связывания поликатионов с ДНК

Исследование физических свойств интерполиэлектролитных комплексов a. Низкоградиентная вискозиметрия b. Динамическое двойное лучепреломление c. Спектральные исследования

Электронная микроскопия

Определение токсичности поликатионов и их комплексов с ДНК

Трансфицирование клеточных культур интерполиэлектролитными комплексами

Оценка эффективности трансфекции

Определение вирусингибирующей активности исследуемых веществ

Исследование вирусингибирующего действия антисмысловых олигонуклеотидов в составе ИПЭК

Результаты и обсуждение

1. Образование и физические свойства интерполиэлектролитных комплексов

1.1. Оценка эффективности связывания поликатионов с ДНК

1.2. Низкоградиентная вискозиметрия

1.3. Спектральные исследования

1.4. Динамическое двойное лучепреломление

1.5. Электронно-микроскопические исследования

2. Биологические свойства интерполиэлектролитных комплексов

2.1. Токсичность поликатионов и их комплексов с ДНК

2.2. Оценка эффективности трансфекции

3. Вирусингибирующая активность исследуемых веществ

3.1. Определение вирусингибирующей активности поликатионов

3.2. Определение вирулицидного действия веществ

3.3.Определение виростатического действия веществ

3.4. Определение влияния веществ на связывание вирусных частиц с клеточной мембраной

3.5. Вирусингибирующий эффект антисмысловых олигонуклеотидов в составе ИГТЭК против ВПГ 1 в культуре инфицированных клеток Уего

3.6. Морфологическое изучение противовирусной активности антисмысловых олигонуклеотидов в составе ИГТЭК против ВПГ

3.7. Ультраструктурное изучение противовирусной активности антисмысловых олигонуклеотидов в составе ИПЭК против ВПГ

3.8. Вирусингибирующий эффект антисмысловых олигонуклеотидов в составе

ИПЭК против цитомегаловируса человека в культуре клеток ФЛЭЧ

Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение свойств интерполиэлектролитных комплексов для ингибирования вирусной репродукции in vitro»

Отсутствие на фармацевтическом рынке достаточного выбора противовирусных химиопрепаратов обусловлено, прежде всего, особенностями жизненного цикла возбудителей: вирусы являются клеточными паразитами, подчиняющими себе репликативный и метаболический аппарат клетки-хозяина, и невозможно влиять на жизненный цикл вируса, не затрагивая клетку, поэтому для большинства веществ существует проблема общей и селективной токсичности. Кроме того, в результате мутаций появляются устойчивые к действию данного вещества вирусные субпопуляции, вакцинопрофилактика вирусных инфекций в ряде случаев затруднена появлением новых антигенных вариантов возбудителя, а значит, химиотерапия вирусных инфекций часто является единственным средством лечения. Поэтому поиск новых препаратов и подходов в терапии инфекционных вирусных заболеваний остается крайне актуальным.

Можно выделить две группы веществ, используемых в терапии вирусных инфекций: вещества, непосредственно ингибирующие вирусную репродукцию на разных стадиях и вещества - индукторы эндогенного интерферона, а также коммерческие препараты интерферона.

Известные индукторы интерферона - циклоферон, неовир, камедон, амиксин (тилорон) - обладают широкой противовирусной активностью, иммуномодулирующим и противоопухолевым действием. Вместе с тем, учитывая разнообразие их фармакологических свойств, изучены они недостаточно.

Поиск новых веществ, имеющих противовирусные свойства, ограничивается, в основном, производными пуринов и пиримидинов, и, как правило, это дериваты уже известных препаратов, например, ацикловира или зидовудина (de Clercq Е., 1997). В то же время, многие проблемы, связанные с применением противовирусных препаратов, можно решить включением их в полимерную матрицу (Платэ Н.А., 1986). Благодаря этому повышается их эффективность, снижается токсичность, преодолевается эффект вирусной резистентности, регулируется продолжительность действия и скорость выведения из клетки и организма.

Одним из направлений в разработке новых препаратов направленного противовирусного действия является использование специфических олигонуклеотидных последовательностей, которые взаимодействуют только с комплементарными нуклеотидными участками соответствующих нуклеиновых кислот. Поскольку используемые олигонуклеотидные последовательности комплементарны участкам кодирующих, т.е. смысловых (sense) цепей нуклеиновых кислот, их принято называть антисмысловыми (antisense) олигонуклеотидами. Антисмысловые олигонуклеотиды могут выступать в качестве ингибиторов вирусной репликации. Так, препарат фомивирсен, представляющий собой антисмысловой олигонуклеотид, эффективен при терапии ретинита, вызванного цитомегаловирусом, у больных СПИД (Wiegand Т. W., Young L. Н., 2006). Однако лишь малая часть чужеродной ДНК проникает через клеточную мембрану, и, попав в цитоплазму, очень быстро деградирует под действием клеточных ферментов. Полимерные катионы образуют с ДНК устойчивые комплексы, с высокой эффективностью транспортируют ее внутрь клетки, защищая от действия эндонуклеаз, и имеют ряд преимуществ: удобство в хранении и очистке, простота тестирования токсичности и безопасности и, что особенно важно для генной терапии, снижение риска патогенетических и иммунологических осложнений. Наиболее широко используются в генотерапевтических исследованиях поли(Ь-лизин), полиэтиленимин (Demeneix В.A., Ghorbel М., 2000) полидиметиламиноэтилметакрилат, полиамидоамины и дендри-меры на их основе, катионные липиды, хитозан - катионный полимер глюкозамина.

Цель исследования. Целью настоящего исследования явилась характеристика биологических и физических свойств комплексов полиалли-ламина, полидиметиламиноэтилметакрилата и их производных с плазмид-ной ДНК и антисмысловыми олигонуклеотидами для ингибирования репродукции вируса герпеса 1-го типа и цитомегаловируса человека.

Задачи исследования.

1. Изучить эффективность связывания исследуемых полиаминов с ДНК.

2. Исследовать токсичность полиаллиламина, полидиметиламиноэтилме-такрилата и их производных в культуре клеток.

3. Изучить трансфекционную активность интерполиэлектролитных комплексов полиамин-ДНК in vitro.

4. Исследовать противовирусное действие полиаминов в культуре клеток

5. Изучить влияние интерполиэлектролитных комплексов полиаминов с антисмысловыми олигонуклеотидами на репродукцию вируса простого герпеса 1-го типа и цитомегаловируса в культуре клеток.

Научная новизна.

1. Впервые показано вирулицидное действие полиаллиламина, полидиме-тиламиноэтилметакрилата и их производных в отношении вируса простого герпеса и цитомегаловируса in vitro.

2. Впервые показано, что низкомолекулярные полиаллиламин и полиди-метиламиноэтилметакрилат в низких концентрациях эффективно переносят ДНК в эукариотические клетки in vitro, не проявляя токсичности.

3. Разработан высокоэффективный способ трансфекции эукариотических клеток.

4. Впервые показано, что антисмысловые олигонуклеотиды в составе интерполиэлектролитных комплексов с полиаллиламином, полидимети-ламиноэтилметакрилатом и их производными способны проникать в клетки и ингибировать вирусную репродукцию.

Научно-практическая значимость работы.

Полученные в рамках проведенных исследований данные о физико-химических и биологических свойствах интерполиэлектролитных комплексов синтетических поликатионов с ДНК имеют большое практическое значение для развития генотерапевтических методов. Разработан быстрый и эффективный способ трансфекции эукариотических клеток с помощью катионных полимеров. В результате проведенных исследований показана возможность использования интерполиэлектролитных комплексов антисмысловых олигонуклеотидов с синтетическими поликатионами для инги-бирования вирусной репродукции, что представляет большой интерес для поиска новых подходов в терапии вирусных инфекций.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Полиаллиламин, полидиметиламиноэтилметакрилат и их производные образуют устойчивые комплексы с ДНК, обеспечивая ее трансмембранный перенос и защиту от клеточных гидролаз.

2. Антисмысловые олигонуклеотиды в комплексе с синтетическими поликатионами способны проникать в инфицированные клетки и ингибиро-вать вирусную репродукцию.

3. Интерполиэлектролитные комплексы полиаллиламина и полидимети-ламиноэтилметакрилата с ДНК способны с высокой эффективностью трансфицировать эукариотические клетки и могут быть использованы для разработки средств генной терапии.

Апробация работы.

Материалы по теме диссертации были представлены:

1. 3-й международный симпозиум "Molecular mobility and order in polymer systems", С.- Петербург, 1999 г.

2. II Всероссийский Каргинский симпозиум "Химия и физика полимеров в начале XXI века", Черноголовка, 2000.

3. Международная конференция «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями», Санкт-Петербург, 2003.

4. III Всероссийская Каргинская конференция "Полимеры - 2004"

5. 5th Int. Symp. «Molecular mobility and order in polymer systems», S.Petersburg, 2005.

6. IV Всероссийская конференция, посвященная 100-летию акад. В.А.Каргина «Наука о полимерах 21-му веку», Москва, 2007.

Обзор литературы.

Лечение вирусных заболеваний в большинстве случаев основано на симптоматической терапии, что обусловлено, прежде всего, отсутствием на рынке лекарственных средств достаточно широкого выбора специфических противовирусных химиопрепаратов. Можно выделить две группы веществ, используемых сегодня в терапии вирусных инфекций: вещества, непосредственно ингибирующие вирусную репродукцию на разных стадиях и вещества - индукторы эндогенного интерферона, а также коммерческие препараты интерферона. Между тем, известные и хорошо зарекомендовавшие себя противовирусные препараты запатентованы более 20-ти лет назад: ацикловир - 1977 г. (Elion G.B. et al, 1977; Schaeffer H.J. et al, 1978), рибавирин (виразол) - 1972 г. (Sidwell R.W. et al, 1972), амантадин и вида-рабин - 1964 г. (de Garilhe М. & de Rudder J., 1964; Schabel F.M, 1968). Индуктор интерферона поли(А-Ц) описан в 1970-е г.г. (de Clercq Е., 1982). Собственно же история противовирусной химиотерапии начинается с 1950 г., когда для противотуберкулезного препарата тиосемикарбазона была описана активность в отношении вируса осповакцины (Hamre D. et al, 1951).

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Слита, Александр Валентинович

Выводы

4. Полиаллиламин, полидиметиламиноэтилметакрилат и его производные образуют стабильные интерполиэлектролитные комплексы с плазмид-ной ДНК и олигонуклеотидами, экранируя ДНК от связывания с бромистым этидием и защищая от действия клеточных эндонуклеаз.

5. Полиаллиламины проявляют значительно более высокую токсичность in vitro по сравнению с полидиметиламиноэтилметакрилатом и его производными. Интерполиэлектролитные комплексы цитотоксичности не проявляют.

6. Полиаллиламин и полидиметиламиноэтилметакрилат обладают виру-сингибирующей активностью.

7. Наибольшей трансфекционной активностью обладают интерполиэлектролитные комплексы на основе гомополимеров - полиаллиламина и полидиметиламиноэтилметакрилата. Включение в состав молекулы поликатиона алкильных заместителей не улучшает его трансфекционных качеств

8. Исследованные поликатионы обеспечивают транспорт ДНК через клеточную мембрану и экспрессию трансгенов.

9. Антисмысловые олигонуклеотиды против ВПГ 1 и ЦМВ в составе ин-теполиэлектролитных комплексов с полиаллиамином и полидиметила-миноэтилметакрилатом эффективно ингибируют вирусную репродукцию в культуре инфицированных клеток, в то время как вирусингиби-рующее действие свободных антисмысловых олигонуклеотидов не наблюдалось.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Слита, Александр Валентинович, 2007 год

1. Биченков Е. Е., Будкер В. Г., Зарытова В. Ф., Иванова Е. М., Лохов С. Г., Савченко Е. В., Теплова Н. М. Биол. мембраны. 1988. -Т. 5. - С. 735-741.

2. Изумрудов В.А. , А.Б. Зезин, В.А. Кабанов. Равновесие интерполиэлек-тролитных реакций и явление молекулярного "узнавания" в растворах ин-терполиэлектролитных комплексов // Успехи химии. 1991. - Т. 60. - С. 1570-95.

3. Кабанов В.А. . Полиэлектролитные комплексы в растворе и в конденсированной фазе // Успехи химии. 2005. - Т. 74. - С. 5-23.

4. Позмогова Г.Е., Д.Г. Кнорре. Белковые и пептидные конструкции для доставки в клетку олигонуклеотидов и ДНК // Вопросы медицинской химии. 1999,- Т.6.

5. Гринева Н.И.,Зарытова В.Ф.,Кнорре Д.Г. Алкилирующие производные компонент нуклеиновых кислот // Известия Сибирского отделения Академии наук СССР. Сер. химических наук. 1968. - Т.12. - С. 118124.

6. Кабанов В.А. Физико-химические основы и перспективы применения растворимых интерполиэлектролитных комплексов // Высокомолекулярные соединения. 1994. - Т. 36(2). - С. 183-197.

7. Фрисман Э. В., Цветков В. Н. // Журн. эксп. и теор. Физики, 1952, т. 23. С. 690 702.

8. Фрисман Э. В., Сибилева М. А., Красноперова А. В. // Высокомолекулярные соединения, 1962, т. 1, с. 597 -606.

9. Abdallah В., Goula D., Ghorbel М., et al. Nonviral gene transfer for studying signaling in comparative developmental biology // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1998.-V. 839.-P. 87-92.

10. Abdallah В., Hassan A., Benoist C., et al. A powerful nonviral vector for in vivo gene transfer into the adult mammalian brain: polyethilenimine // Hum. Gene Ther. 1996. - V. 7 - P. 1947-1954.

11. Anderson WF. Human gene therapy // Nature. 1998 Apr. 30. -392(6679 Suppl)-P. 25-30.

12. Arigita C., Zuidam N.J., Crommelin D.J., Hennink W.E. Association and dissociation characteristics of polymer/DNA complexes used for gene delivery//Pharm. Res. 1999. - V. 16, 10-P. 1534-1541.

13. Baba M., Pauwels R., Balzarini J., Arnout J., Desmyter J., De Clercq E. Mechanism of inhibitory effect of dextran sulfate and heparin on replication of human immunodeficiency virus in vitro // Proc Natl Acad Sci U S A.-1988.- V. 85.(16)-P. 6132-6.

14. Baker JR Jr, Bielinska AU, Kukowska-Latallo JF. Dendrimer-mediated cell transfection in vitro // Methods Mol Biol. 2004. - V. 245. - P. 67-82.

15. Basu S, Wickstrom E. Synthesis and characterization of a peptide nucleic acid conjugated to a D-peptide analog of insulin-like growth factor 1 for increased cellular uptake // Bioconjug Chem. 1997. - V. 8(4). - P. 481-8.

16. Behr JP. Gene transfer with amino lipids and amino polymers // С R Seances Soc Biol Fil.- 1996. V. 190(1). - P. 33-8.

17. Benihoud K., Yeh P., Perricaudet M. Adenovirus vectors for gene delivery.// Curr. Opin. Biotechnol. 1999. - V. 10(5). - P. 440-447.

18. Briones J., Puig Т., Limon A., et al. Retroviral gene transfer into human hematopoietic cells: an in vitro kinetic study // Haematologica. -1999. V. 84(6).-P. 483-488.

19. Brunner S., Sauer Т., Carotta S., et al. Cell cycle dependence of gene transfer by lipoplex, polyplex and recombinant adenovirus // Gene Ther. -2000.-V. 7(5).-P. 401-407.

20. Bueler H. Adeno-associated viral vectors for gene transfer and gene therapy // Biol. Chem. -1999. V. 380(6). - P. 613-622.

21. Carrio M., Romagosa A., Mercade E., et al. Enhanced pancreatic tumor regression by a combination of adenovirus and retrovirus-mediated delivery of the herpes simplex virus thymidine kinase gene // Gene Ther. 1999. — V. 6(4).-P. 547-553.

22. Chen J, Stickles RJ, Daichendt KA. Galactosylated histone-mediated gene transfer and expression // Hum Gene Ther.- 1994. V. 5(4). - P. 429-35.

23. Cheng P.-W., Yin W. Lectin conjugate-directed gene transfer to airway epithelial cells // Biochem Biophys Res Commun. 1994. - V. 30.205 (1). -P. 826-33.

24. Cho MJ, Juliano R. Macromolecular versus small-molecule therapeutics: drug discovery, development and clinical considerations // Trends Biotech-nol. 1996. - V. 14(5). - P. 153-8.

25. Curiel DT, Wagner E, Cotten M, Birnstiel ML, Agarwal S, Li CM, Loechel S, Hu PC. High-efficiency gene transfer mediated by adenovirus coupled to DNA-polylysine complexes // Hum Gene Ther. 1992. - V. 3(2). - P. 14754.

26. De Clercq E. Acyclic nucleoside phosphonates in the chemotherapy of DNA virus and retrovirus infections // Intervirology. -1997. V. 40(5-6). -P. 295-303.

27. De Clercq E. In Search of a selective antiviral chemotherapy // Clin. Microbiol. Rev. 1997. - V. 10(4). - P. 674-693.

28. De Clercq, E. Synthetic interferon inducers // Top. Curr. Chem. 1974. -V. 52.-P. 173-208.

29. De Garilhe M. P., De Rudder J. Effect of 2 arabinose nucleosides on the multiplication of herpes virus and vaccine in cell culture // Bull Soc Chim Biol. 1969.-V. 51(10).-P. 1521-38.

30. Demeneix B, Behr JP. Polyethylenimine (PEI) // Adv Genet. 2005. -V.53. - P. 215-230.

31. Demeneix B.A., Ghorbel M., Goula D. Optimizing polyethylenimine-based gene transfer into mammalian brain for analysis of promoter regulation and protein function // Methods Mol. Biol. 2000. - V. 133. - P. 2135.

32. Demeneix В., Behr J., Boussif O. Gene transfer with lipospermines and polyethylenimines // Adv. Drug. Deliv. Rev. 1998. - V. 30(1-3). - P. 8595.

33. De Smedt S.C., Demeester J., Hennink W.E. Cationic polymer based gene delivery systems // Pharm. Res. 2000.- V.17(2). - P. 113-126.

34. Editorial GT News // Gene Therapy. 1998,- V. 5.- P. 861-862.

35. Elion G. В., Furman P. A., Fyfe J. A., de Miranda P., Beauchamp L., Schaeffer H. J.Selectivity of action of an antiherpetic agent, 9-(2-hydroxyethoxymethyl)guanine // Proc Natl Acad Sci USA. -1977.- V. 74(12).-P. 5716-5720.

36. Ernst N, Ulrichskotter S, Schmalix WA. Interaction of liposomal and polycationic transfection complexes with pulmonary surfactant // J. Gene Med.- 1999.-V. 1(5).-P. 331-340.

37. Findeis MA, Wu CH, Wu GY. Ligand-based carrier systems for delivery of DNA to hepatocytes // Methods Enzymol. 1994. - V. 247. - P. 341-51.

38. Fink DJ, DeLuca NA, Yamada M, Wolfe DP, Glorioso JC. Design and application of HSV vectors for neuroprotection // Gene Ther. -2000. V. 7(2).-P. 115-9.

39. Fisher KJ, Wilson JM. Biochemical and functional analysis of an adenovi-rus-based ligand complex for gene transfer // Biochem J. 1994. - V. 1.299. -P.49-58.

40. Fisher KJ, Wilson JM. The transmembrane domain of diphtheria toxin improves molecular conjugate gene transfer // Biochem J. -1997. V. 1.321. -P. 49-58.

41. Florence Morfin and Danielle Thouvenot. Herpes simplex virus resistance to antiviral drugs // Journal of Clinical Virology.- 2003. V. 26. - P. 29-37.

42. Fominaya J, Uherek C, Wels W. A chimeric fusion protein containing transforming growth factor-alpha mediates gene transfer via binding to the EGF receptor // Gene Ther. 1998. - V. 5(4). - P. 521-30.

43. Fominaya J, Wels W. Target cell-specific DNA transfer mediated by a chimeric multidomain protein. Novel non-viral gene delivery system // J Biol Chem. 1996. - V. 18. - P. 10560-8.

44. Fonseca M.J., Storm G., Hennink W.E. Cationic polymeric gene delivery of beta-glucuronidase for doxorubicin prodrug therapy // J. Gene Med. -1999.-V. 1(6).-P. 407-414.

45. Freeman S., Abboud C. N., Whartenby K. A. et al. The "bystander effect": tumor regression when a fraction of the tumor mass is genetically modified // Cancer Res. 1993. - V. 53. - P. 5274-5283.

46. Frisman E.V., Schagina L.V. Vorob'ev V.I. // Biorheology 1965.- V.2.-P.189 -194.

47. Frisman, E. V., Sibileva, M. A., Krasnoperova, A. V. Hydrodynamic and optical properties of polymers in high concentration solutions. Vysokomolec. Soed. -1959. V. 1. - P. 597-606.

48. Goula D., Becker N., Lemkine G.F. Rapid crossing of the pulmonary endothelial barrier by polyethylenimine/DNA complexes // Gene Ther. -2000. -V. 7(6).-P. 499-504.

49. Guo Z., Shen J., Mital D. Efficient gene transfer and expression in islets by an adenoviral vector that lacks all viral genes // Cell Transplant. 1999. -V. 8(6).-P. 661-671.

50. Haldar J, An D, de Cienfuegos L.A, Chen J, Klibanov A.M. Polymeric coatings that inactivate both influenza virus and pathogenic bacteria // PNAS -2006.-V. 103(47)-P. 17667-71.

51. Hamre D, Brownlee К A, Donovick R. Studies on the chemotherapy of vaccinia virus. II. The activity of some thiosemicarbazones // J Immunol. -1951.-V. 67(4).-P. 305-12.

52. Hatta T, Ishikawa M, Takai K, Nakada S, Yokota T, Hata T, Miura K, Takaku H. Inhibition of influenza virus RNA polymerase by 5-capped short RNA fragments // Biochem Biophys Res Commun. 1998. - V.I0. - P. 103-6.

53. Howard M.K., Kershaw Т., Gibb B. High efficiency gene transfer to the central nervous system of rodents and primates using herpes virus vectors lacking functional ICP27 and ICP34.5 // Gene Ther. 1998. - V. 5(8). - P. 1137-1147.

54. Huckett B, Ariatti M, Hawtrey AO. Evidence for targeted gene transfer by receptor-mediated endocytosis. Stable expression following insulin-directed entry of NEO into HepG2 cells // Biochem Pharmacol. -1990. V. 15. - P. 253-63.

55. Jones J. C., Turpin E. A., Bultmann H., Brandt C. R., and Schultz-Cherry S. Inhibition of Influenza Virus Infection by a Novel Antiviral Peptide That Targets Virai Attachment to Cells // J.Virology. 2006. - V. 80. - P. 119601196.

56. Iida J., Nishi N., Saiki I. Macrophage activation and host augmentation against Sendai or herpes simplex virus (HSV) infections with synthetic polypeptides in mice // Int. J. Immunopharmacol. -1989. V. 11(3). - P. 249-258.

57. Kay MA, Liu D, Hoogerbrugge PM. Gene therapy // Proc Natl Acad Sci USA.- 1997. V. 25. - P. 12744-6.

58. Kinchington D. Recent advances in antiviral therapy // J Clin Pathol. -1999.-V. 52(2).-P. 89-94.

59. Kremer EJ, Perricaudet M. Adenovirus and adeno-associated vims mediated gene transfer // Br Med Bull. 1995. - V. 51(1). - P. 31-44.

60. Kukowska-Latallo J.F., Bielinska A.U. Efficient transfer of genetic material into mammalian cells using Starburst polyamidoamine dendrimers // Proc. Natl. Acad. Sci.U S A. 1996. - V. 93(10). - P. 4897-4902.

61. Langer J.C., Klotman M.E., Hanss В., et al. Adeno-associated virus gene transfer into renal cells: potential for in vivo gene delivery // Exp. Nephrol.1998.-V. 6(3).-P. 189-194.

62. Lee R.J, Huang L. Lipidic vector systems for gene transfer // Crit. Rev. Ther. Drug. Carrier. Syst. 1997. - V. 14(2). - P. 173-206.

63. Lemkine G.F., Goula D., Becker N., et al. Optimisation of polyethylen-imine-based gene delivery to mouse brain.// J. Drug Target. 1999; 7(4): 305312.

64. Leong K.W., Mao H.Q., Truong-Le V.L., et al. DNA-polycation nano-spheres as non-viral gene delivery vehicles // J. Controlled Release. 1998. -V. 53(1-3).-P. 183-193.

65. Li Y., Starr S.E., Lisziewicz J., Ho W.Z. Inhibition of HIV-1 replication in chronically infected cell lines and peripheral blood mononuclear cells by retro virus-mediated antitat gene transfer // Gene Ther. -2000. V. 7(4). - P. 321-328.

66. Lieber A., Steinwaerder D.S., Carlson C.A., et al. Integrating adenovirus-adeno-associated virus hybrid vectors devoid of all viral genes // J. Virol.1999. V. 73(11). - P. 9314-9324.

67. Lin X. Construction of new retroviral producer cells from adenoviral and retroviral vectors // Gene Ther. -1998. V. 5(9). - P. 1251-1258.

68. Ma DD, Wei AQ. Enhanced delivery of synthetic oligonucleotides to human leukaemic cells by liposomes and immunoliposomes // Leuk Res. -1996.-V. 20(11-12).-P. 925-30.

69. Maes R.F., Vieira A., Gomes I., et al. Potentiation of FMD vaccines with polycationic-nucleic acid complexes // Arch. Virol. -1977. V. 55(4). - P. 275-285.

70. Mahato R.I. Non-viral peptide-based approaches to gene delivery 11 J. Drug Target. 1999. - V. 7(4). - P. 249-268.

71. Mahato R. I., Takakura Y., Hashida M. Development of targeted delivery systems for nucleic acid drugs // J. Drug Targeting. 1997. - V.4. - P. 337357.

72. McConnaughie A.W., Spychala J., Zhao M., et al. Design and synthesis of RNA-specific groove-binding cations: implications for antiviral drug design // J. Med. Chem. 1994. - V. 37(8). - P. 1063-1069.

73. Mecs I, Ganti T, Kotai A. Enhancement of interferon induction in mice by polycationic modified polypeptides // Acta Virol. -1976. V. 20(2). - P. 164-166.

74. Mesnil M., Piccoli C., Tiraby G. et al. Bystander killing of cancer cells by herpes simplex vims thymidine kinase gene is mediated by connexins // Proc. natl. Acad. Sci. 124. USA. 1996. - V. 93. - P. 1831—1835.

75. Miyazawa N., Leopold P.L., Hackett N.R., et al. Fiber swap between adenovirus subgroups В and С alters intracellular trafficking of adenovirus gene transfer vectors // J. Virol. -1999. V. 73(7). - P. 6056-6065.

76. Morris MC, Vidal P, Chaloin L, Heitz F, Divita G. A new peptide vector for efficient delivery of oligonucleotides into mammalian cells // Nucleic Acids Res. 1997. - V. 15. - P. 2730-6.

77. Nagahiro I., Mora B.N., Boasquevisque C.H., et al. Toxicity of cationic liposome-DNA complex in lung isograft // Transplantation. -2000. V. 69(9).-P. 1802-1805.

78. Nguyen H.K., Lemieux P., Vinogradov S.V., et al. Evaluation of poly-ether-polyethyleneimine graft copolymers as gene transfer agents // Gene Ther.- 2000. V. 7(2). - P. 126-138.

79. Nielsen РЕ, Egholm M. Strand displacement recognition of mixed ade-nine-cytosine sequences in double stranded DNA by thymine-guanine PNA (peptide nucleic acid) // Bioorg Med Chem. -2001. V. 9(9). - P. 2429-34.

80. Palmer D.H., Chen M.J., Kerr D.J. Taking Gene Therapy into the Clinic // J Biomed Biotechnol. 2003. - V. 1. - P. 71 -77.

81. Pichon C, Freulon I, Midoux P, Mayer R, Monsigny M, Roche AC. Cyto-solic and nuclear delivery of oligonucleotides mediated by an amphiphilic anionic peptide // Antisense Nucleic Acid Drug Dev. -1997. V. 7(4). - P. 335-43.

82. Pollard H, Remy JS, Loussouarn G, Demolombe S, Behr JP, Escande D. Polyethylenimine but not cationic lipids promotes transgene delivery to the nucleus in mammalian cells // J Biol Chem. 1998. - V. 27. - P. 7507-11.

83. Ram Z, Walbridge S, Shawker T, Culver KW, Blaese RM, Oldfield EH. The effect of thymidine kinase transduction and ganciclovir therapy on tumor vasculature and growth of 9L gliomas in rats // J Neurosurg. -1994. V. 81(2). -P. 256-60.

84. Roizman B. The Human Herpesviruses, N.Y. 1993.

85. Rose JK, Buonocore L, Whitt MA. A new cationic liposome reagent mediating nearly quantitative transfection of animal cells // Biotechniques. -1991-V. 10(4).-P. 520-5.

86. Schabel FM Jr. The antiviral activity of 9-beta-D-arabinofiiranosyladenine (ARA-A) // Chemotherapy. 1968. - V. 13(6). - P. 321-38.

87. Schaeffer HJ, Beauchamp L, de Miranda P, Elion GB, Bauer DJ, Collins P. 9-(2-hydroxyethoxymethyl) guanine activity against viruses of the herpes group // Nature. -1978. V. 13. - P. 83-5.

88. Schaffer D.V., Fidelman N.A., Dan N., et al. Vector unpacking as a potential barrier for receptor-mediated polyplex gene delivery // Biotechnol. Bioeng. -2000. V. 67(5). - P. 598-606.

89. Siddhesh D. Patil, David G. Rhodes, Diane J. Burgess. DNA-based Therapeutics and DNA Delivery Systems: A Comprehensive Review // AAPS Journal. 2005 - V. 07(01). - P. 61-77.

90. Sidwell RW, Huffman JH, Khare GP, Allen LB, Witkowski JT, Robins RK.Broad-spectrum antiviral activity of Virazole: 1 -beta-D-ribofuranosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide // Science. 1972. - V. 25. - P. 705-6.

91. Stephenson ML, Zamecnik PC. Inhibition of Rous sarcoma viral RNA translation by a specific oligodeoxyribonucleotide // Proc Natl Acad Sci U S A. 1978. - V. 75(1). - P. 285-8.

92. Tamura M., Nagano Y. Modulation by polymyxin В of the effects of interferon on human myelogenous leukemia cells // Microbiol. Immunol. -1994.-V. 38(5).-P. 407-411.

93. Tomita N, Morishita R, Yamamoto K, Higaki J, Dzau VJ, Ogihara T, Kaneda Y. Targeted gene therapy for rat glomerulonephritis using HVJ-immunoliposomes // J Gene Med. 2002. - V. 4(5). - P. 527-35.

94. Touze A., Coursaget P. In vitro gene transfer using human papillomavi-rus-like particles // Nucleic Acids Res. -1998 V. 26(5). - P. 1317-1323.

95. Turunen M.P., Hiltunen M.O., Ruponen M., Virkamaki L., Szoka F.C. Jr., Urtti A.,Yla-Herttuala S. Efficient adventitial gene delivery to rabbit carotid artery with cationic polymer-plasmid complexes // Gene Therapy. 1999 -V. 6.-P. 6-11.

96. Vile R.G. Viral mediated cell fusion: viral fusion~the making, or breaking, of a tumour// Gene Ther.- 2006. -V. 13(15).-P. 1127-30.

97. Vinogradov S.V., Suzdaltseva Y.G., Kabanov A.V. Block polycationic oligonucleotide derivative: synthesis and inhibition of herpes vims reproduction // Bioconjug. Chem. 1996. - V. 7(1). - P. 3-6.

98. Wagner E, Zenke M, Cotten M, Beug H, Birnstiel ML. Transferrin-polycation conjugates as carriers for DNA uptake into cells // Proc Natl Acad Sci USA. -1990. V. 87(9). - P. 3410-4.

99. Wagstaff M.J., Lilley C.E., Smith J., et al. Gene transfer using a disabled herpes vims vector containing the EMCV IRES allows multiple gene expression in vitro and in vivo // Gene Ther. -1998. V. 5(11). - P. 15661570.

100. Wu CH, Walton CM, Wu GY. Targeted gene transfer to liver using pro-tein-DNA complexes // Methods Mol Med. 2002. - V. 69. - P. 15-23.

101. Wu G. Y., Wu C.H. Receptor-mediated gene delivery and expression in vivo // J Biol. Chem. 1988. - V. 263. - P. 14621-24.

102. Wu G.Y., Wu C.H. Evidence for targeted gene delivery to Hep G2 hepatoma cells in vitro // Biochemistry. -1988. V. 27. - P. 887-892.

103. Wu GY, Zhan P, Sze LL, Rosenberg AR, Wu CH. Incorporation of adenovirus into a ligand-based DNA carrier system results in retention of original receptor specificity and enhances targeted gene expression // J Biol Chem. -1994.-V. 15.-P. 11542-6.

104. Xiao W., Chirmule N., Berta S.C., et al. Gene therapy vectors based on adeno-associated virus type 1 // J. Virol. 1999. - V. 73(5). - P. 3994-4003.

105. Xu M., Chen Q.R., Kumar D., et al. In vivo gene therapy with a cationic polymer markedly enhances the antitumor activity of antiangiogenic genes // Mol. Gen. & Metabolism. 1998. - V. 64. - P. 193-197.

106. Xu R, Li H, Tse LY, Kung HF, Lu H, Lam KS. Diabetes gene therapy: potential and challenges // Curr Gene Ther. -2003. V. 3(1). - P. 65-82

107. Yeh P., Perricaudet M. Advances in adenoviral vectors: from genetic engineering to their biology // FASEB J. 1997 - V. 11(8). - P. 615-23.

108. Yin W, Cheng PW. Lectin conjugate-directed gene transfer to airway epithelial cells // Biochem Biophys Res Commun. 1994. - V. 30. - P. 82633.

109. Yla-Herttuala S., Martin J.F. Cardiovascular gene therapy // Lancet. -2000.-V. 355. -P. 213-222.

110. Zallen D.T. US gene therapy in crisis. TIG, June 2000, V.16, N 6: 272275

111. Zamecnik PC, Stephenson ML. Inhibition of Rous sarcoma virus replication and cell transformation by a specific oligodeoxynucleotide // Proc Natl Acad Sci USA.- 1978. V. 75(1). - P. 280-4.

112. Zhou J, Wu J, Hafdi N, Behr JP, Erbacher P, Peng L. РАМАМ den-drimers for efficient siRNA delivery and potent gene silencing // Chem Commun (Camb). 2006. - V. 14. - P. 2362-4.