Механизм вирусспецифического действия препарата Арбидол тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, доктор биологических наук Ленева, Ирина Анатольевна

• Ленева, Ирина Анатольевна
• доктор биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации доктор биологических наук Ленева, Ирина Анатольевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА I. Структура и репродукция вируса гриппа.

ГЛАВА II. Противогриппозные химиопрепараты этиотропного действия II. 1 .Амантадин и ремантадин

Н.2.3анамивир и озельтамивир.

ГЛАВА Ш.Арбидол.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА IV. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

IV. 1 .Клетки.

IV.2. Вирусы.

IV.3. Химиотерапевтические препараты и химические соединения.

IV.4. Определение цитотоксического действия соединений.

IV.5.Изучение противовирусной активности препаратов с использованием метода ингибирования цитопатического действия вирусов.

ГУ^б.Изучение противовирусной активности препаратов с использованием метода ингибирования бляшкоообразующей активности (БОА) вируса гриппа.

ГУ^7.Изучение противовирусной активности соединений методом иммуноферментного анализа ( ИФА) в культуре клеток MDCK в отношении вирусов гриппа А, В и С.

IV.Б.Изучение противовирусной активности препаратов методом

ИФА в культуре клеток Нер-2 в отношении РСВ.

IV.9. Изучение противовирусной активности препаратов методом ИФА в культуре клеток HeLa в отношении аденовируса человека.типа 5.

IV.10. Изучение противовирусной активности арбидола методом

ИФА в зависимости от времени добавления препарата.

IV.11. Определение содержания арбидола в клетках, клеточных мембранах и внеклеточной среде.

IV. 12. Концентрирование и очистка вирионов вируса гриппа.

IV. 13. Изучение транскриптазной активности рибонуклеопротеида ( РНП) вируса гриппа.

IV. 14. Анализ геномных РНК ( вРНК) вируса гриппа в полиакриламидном геле (ПААГ).

IV. 15. Анализ вирусспецифических белков вируса гриппа в полиакриламидном геле (ПААГ).

IV. 16. Определение действия препаратов на нейраминидазную активность вируса гриппа.

IV. 17. Определение действия арбидола на гемолиз эритроцитов, индуцируемый вирусом гриппа при рН=5,5.

IV. 18. Определение действия арбидола на ранние стадии вирусной репродукции вируса гриппа с использованием метода. рассвечивания флуоресценции (РФ).

A) Синтез флуоресцентного зонда.

Б)Мечение вируса.

B) Измерение связывания вируса с клетками.

Г) Измерение слияния вирусной липидной мембраны с мембранами клеток.

IV.19. Изучение гемолиза эритроцитов, индуцируемого вирусом дикого типа и арбидолрезистентными мутантами.

IV.20. Определение конформационного перехода НА из нативного состояния в состояние при низком рН с использованием конформационных антител (КАТ).

IV.21. Определение конформационных изменений НА с использованием конформационных антител (КАТ).

IV.22.Определение конформационных изменений НА в зависимости от времени инкубации клеток с препаратом.87 IV.23.Определение первичной последовательности генов, кодирующих НА и М белки.

IV.24. Изучение комбинированного действия противогриппозных препаратов методом ИФА.

IV.25. Статистическая обработка результатов.

РЕЗУЛЬТАТЫ.

ГЛАВА V. Изучение противовирусной активности арбидола с использованием метода ИФА.

V.I. Изучение цитотоксического действия арбидола в культурах клеток различного происхождения.

V.2. Отработка условий детекции репродукции вируса гриппа А и В в культуре клеток MDCK.

V.3. Определение возможности вирулицидного действия арбидола.

V.4. Влияние арбидола на репродукцию вируса гриппа А, В и С в культуре клеток MDCK.

V.5. Влияние различных концентраций арбидола на репродукцию вирусов гриппа А/Пуэрто-Рико/8/34 , А/Япония/305/57 и В/Ли

40 в культуре клеток MDCK.

V.6. Влияние арбидола на репродукцию различных антигенных серотипов вируса гриппа А человека в культуре клеток

MDCK.

V.7. Влияние арбидола на репродукцию в культуре клеток MDCK вирусов гриппа птиц А подтипов НА Н5,Н6,Н9.

V.8. Влияние арбидола на репродукцию ремантадин-чувствительного и ремантадинрезистентных вирусов гриппа А в культуре клеток MDCK.

V. 9. Сравнение действия арбидола на репродукцию вируса гриппа А/Аичи/2/68 в клетках MDCK иУего.

V. 10. Влияние арбидола на различные стадии репродукции вирусов гриппа А и В в культуре клеток MDCK.ИЗ

V. 11 .Сравнительное изучение влияния арбидола и других противовирусных препаратов на репродукцию вирусов гриппа А в культуре клеток MDCK.

V.12. Отработка детекции экспрессии РСВ и аденовируса типа 5 в культурах клеток.

V.13. Изучение влияния арбидола, рибавирина и рибамидила на репродукцию РСВ и аденовируса в культурах клеток.

V.14.3аключение

ГЛАВА VI. Изучение противовирусной активности соединений в ряду индолов

VI. 1. Влияние аналогов арбидола на репродукцию вируса гриппа

А/Япония /305/57 в культуре клеток MDCK.

VI.2. Влияние аналогов арбидола на репродукцию РСВ в

Культуре клеток Нер-2.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Механизм вирусспецифического действия препарата Арбидол»

Общая характеристика работы Актуальность проблемы. Грипп является острым респираторным заболеванием, наносящим значительный ущерб здоровью людей и приводящим к огромным экономическим потерям. По данным Всемирной Организации Здравоохранения, каждый год во время эпидемий болеет от 5 до 15% населения, и по приблизительным оценкам, в целом в мире смертность от гриппа достигает 250 ООО - 300 ООО случаев в год, преимущественно среди людей пожилого возраста или страдающих хроническими заболеваниями [8,122,221]. По оценкам Центра Контроля и Профилактики Заболеваний в Атланте, каждый год в США от гриппа и осложнений после него умирает в среднем 36000 человек и госпитализируется около 90 000 человек, а ежегодный экономический ущерб от эпидемий гриппа оценивается в пределах от 71 до 167 миллиардов долларов США. В России на протяжении последних 10-15 лет ежегодно регистрируется от 27,3 до 47, 2 млн. случаев заболеваний ОРВИ, причем удельный вес гриппа в структуре ОРВИ колеблется от 25 до 60% в зависимости от интенсивности эпидемий и пандемий гриппа [34,122,179,221]. Поверхностные белки вируса гриппа гемагглютинин и нейраминидаза подвергаются постоянным изменениям (антигенный дрейф), приводящим к последовательному вытеснению из популяции людей ранее циркулировавших штаммов вируса гриппа А. В случае реассортации между штаммами вируса гриппа А человека, млекопитающих и птиц (шифтовые изменения) могут возникать новые пандемические вирусы гриппа типа А [8, 25, 34, 52,122, 140]. Вспышка заболевания гриппом среди людей в Гонконге в 1997 г., вызванная вирусом гриппа птиц подтипа H5N1, беспрецедентные эпизоотии, вызванные в последнее время вирусами гриппа птиц, в частности в России, а также участившиеся случаи заражения этими вирусами людей в странах Южной и Юго-Восточной Азии, сопровождавшиеся необычайно высокой смертностью, вызывают оправданные опасения, что эти события могут стать началом новой пандемии гриппа. Чрезвычайная изменчивость поверхностных белков вируса гриппа А является причиной, из-за которой может снижаться эффективность вакцинации, рекомендованной в настоящее время Всемирной Организацией Здравоохранения в качестве основного средства борьбы против гриппа [34,122,179, 221]. При появлении новых штаммов, содержащих измененные поверхностные антигены, предшествующий гуморальный иммунитет оказывается недостаточным. Как показывает опыт, для создания, тестирования на безопасность и распространения в достаточном количестве эффективной вакцины к такому вновь возникшему штамму вируса гриппа требуется около 6 месяцев. Этот промежуток времени является чересчур длительным в условиях приближающейся эпидемии гриппа. Кроме того, вакцинация не всегда эффективна у людей пожилого возраста, у пациентов, страдающих хроническими заболеваниями и нарушениями функций иммунной системы [120,169, 178, 186]. В связи с вышеизложенным особую важность и актуальность приобретает проблема разработки и применения препаратов для лечения и профилактики гриппа. Арсенал средств, используемых для этих целей, охватывает практически все возможные способы влияния на инфекционный процесс и включает в себя средства иммунокоррегирующей, патогенетической и симптоматической терапии, вирулицидные препараты, однако ведущее место принадлежит препаратам этиотропного действия, оказывающим непосредственное воздействие на вирусную репродукцию. К настоящему времени в мире и в России для лечения и профилактики гриппа широкое применение получили несколько групп таких препаратов. К первому поколению относятся препараты адамантанового ряда: амантадин и ремантадин. Однако их использование ограничено отсутствием активности в отношении вирусов гриппа В, наличием серьезных побочных эффектов и возможностью возникновения резистентных к ним штаммов вируса гриппа [60,61,107,111]. К препаратам второго поколения относятся ингибиторы нейраминидазы: применяемый в виде ингаляций или аэрозольного спрея занамивир и используемый в виде капсул или таблеток озельтамивир. Наряду с высокой стоимостью этих препаратов к их недостаткам относятся побочные эффекты в виде раздражения носоглотки при приеме занамивира и в виде тошноты и рвоты при приеме озельтамивира[111,136]. Из вышесказанного следует, что существующие препараты не являются идеальными, в связи с чем сохраняется необходимость создания новых с отличным от них механизмом действия. Совместными усилиями ученых Центра по химии лекарственных соединений - Всероссийского научно-исследовательского химико-фармацевтического института, Научно-исследовательского института медицинской радиологии РАМН (г.Обнинск) и Ленинградского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Пастера был разработан оригинальный препарат арбидол, рекомендованный Фармакологическим Комитетом Минздрава России для лечения и профилактики гриппа А и В у взрослых и детей [15, 39, 97]. Клинические испытания, проведенные более чем на 10000 пациентах, а также опыт почти 15-летнего использования в медицинской практике свидетельствуют об эффективности и безвредности арбидола и отсутствии у него побочных эффектов. Высокая терапевтическая эффективность этого представителя из класса индола является результатом разнообразия его биологической активности и обусловлена иммуномодулирующим, интерферониндуцирующим, антиоксидантным и вирусспецифическим действием[ 11, 12,15, 97, 165]. Если иммуномодулирующие, интерферониндуцирующие и антиоксидантные свойства арбидола изучены довольно подробно, наличие вирусспецифического действия у арбидола до сих пор вызывало сомнение у ряда специалистов. Изучение вирусспецифического действия арбидола, его механизмов целенаправленно не проводилось, а касавшиеся этого вопроса данные имели поверхностный характер и были недостаточно аргументированы. Доказательство наличия у арбидола вирусспецифического действия и выявление вирусспецифической мишени, на которую направлено это действие, являлось принципиально важным для того, чтобы поставить арбидол в один ряд с препаратами адамантанового ряда и ингибиторами нейраминидазы. Это определяло актуальность данной проблемы, решение которой позволило получить новую необходимую информацию о противовирусных свойствах арбидола для оптимизации его применения в клинической практике. Доказательство и установление механизма вирусспецифического действия арбидола также может способствовать его более широкому применению и завоеванию достойного места в ряду фармацевтических препаратов.

Целью исследования являлось изучение механизма вирусспецифического действия арбидола в отношении вируса гриппа, определение вирусспецифической мишени, на которую направлено это действие, а также углубленное изучение особенностей вирусспецифической активности, отличающей арбидол от других противогриппозных препаратов. Задачи исследования:

1 .Изучение особенностей вирусспецифической активности арбидола в отношении вирусов гриппа в культуре клеток, включая штаммовую специфичность, широту спектра действия и временные интервалы проявления наибольшей активности. 2.0пределение спектра противовирусного действия арбидола в культуре клеток в отношении других вирусов, вызывающих респираторные инфекции.

3.Определение стадии вирусной репродукции, на которую направлено действие арбидола, и выявление точки приложения его действия (вирус-специфической мишени).

4.Выяснение возможности формирования у вирусов гриппа мутантов, резистентных к арбидолу, подтверждение их резистентности, изучение их свойств, а также определение генетической основы резистентности к арбидолу.

5.Изучение действия арбидола на репродукцию вируса гриппа А в культуре клеток в комбинации с противогриппозными препаратами, имеющими отличный от арбидола механизм действия, а также совместно с симптоматическими средствами.

Научная новизна исследования. 1. Впервые показано отсутствие у арбидола штаммовой специфичности в отношении трех антигенных серотипов вирусов гриппа А человека: H1N1, H2N2, H3N2, наличие активности в отношении вирусов гриппа птиц подтипа H5N1 и H9N2, вызвавших гриппозную инфекцию у людей, и в отношении ремантадинрезистентных штаммов вирусов гриппа.

2. При изучении широты спектра противовирусного действия арбидола впервые установлена способность арбидола ингибировать в различных клеточных культурах репродукцию вируса гриппа С, аденовируса, респираторно-синцитиального вируса (РСВ).

3. Впервые выявлена корреляция между наиболее высоким антивирусным эффектом арбидола и его концентрацией в клетках и клеточных мембранах через 3-4 часа после добавления препарата к клеточной культуре. t 4. Впервые идентифицирована стадия вирусной репродукции, ингибируемая арбидолом. Установлено, что арбидол ингибирует слияние липидной оболочки вируса с мембранами эндосом, происходящее внутри клеток. Показано, что арбидол не оказывает воздействия на адсорбцию, транскрипцию и трансляцию, а также нейраминидазную активность вируса гриппа.

5. Среди 47 изученных производных арбидола из ряда 5-оксииндолов выявлено 17 соединений, обладающих противовирусной активностью в отношении вируса гриппа А. Впервые в химическом ряду 5-оксииндолов выявлены соединения, подобно арбидолу ингибирующие эндоцитоз вируса гриппа А. Впервые в химическом ряду 5-оксииндолов выявлены соединения с противовирусной активностью в отношении РСВ. Из 7 соединений, изученных в отношении их способности ингибировать репродукцию РСВ в культуре клеток, было выявлено 4 соединения с активностью на уровне арбидола.

6. Впервые путем многократных пассажей в клеточных культурах получены и охарактеризованы вирусные мутанты, резистентные к арбидолу, и изучены молекулярно-биологические основы резистентности к нему. Впервые показано, что вирусным белком, на который направлено действие арбидола и который определяет чувствительность к нему, является гемагглютинин (НА) вируса гриппа. Все мутанты, резистентные к арбидолу, имели аминокислотные замены только в субъединице НА2 НА мутантных вирусов гриппа и индуцировали слияние липидной оболочки вируса с клеточными мембранами при более высоком рН, чем вирус дикого типа. Арбидол не вызывал конформационных изменений у НА резистентных мутантов, в то время как его добавление к НА вируса дикого типа вызывало сдвиг конформационного перехода НА.

7. Изучено комбинированное действие арбидола в культуре клеток с каждым из противогриппозных препаратов: амантадином, ремантадином, карбоксилатом озельтамивира, рибавирином и рибамидилом. Показано, что это действие увеличивало эффект препаратов на вирусную репродукцию по сравнению с эффектом, оказываемым каждым их этих препаратов в отдельности. Наибольший ингибирующий эффект при комбинированном действии арбидола с каждым из изученных препаратов был получен при использовании их низких концентраций, а при комбинированном действии с ингибиторами нейраминидазы также и при более позднем добавлении арбидола к клеткам.

8. Впервые изучено совместное действие на репродукцию вируса гриппа А арбидола с применяемыми в качестве симптоматических средств анальгином и ацетилсалициловой кислотой и показано, что добавление этих препаратов не снижало ингибирующего действия арбидола на вирусную репродукцию в культуре клеток. Научно-практическая значимость исследования:

1. Данные о наличии у арбидола активности в отношении различных антигенных серотипов и ремантадинрезистентных штаммов вирусов гриппа А человека, а также в отношении вирусов гриппа птиц подтипа H5N1 и H9N2, вызвавших заболевания людей, являются экспериментальным основанием для его назначения во время вспышек и эпидемий гриппа, вызванных такими вирусами.

2. Данные об ингибировании арбидолом в клеточных культурах репродукции вируса гриппа С, аденовируса, РСВ могут служить обоснованием для использования арбидола как этиотропного препарата в отношении инфекций, вызванных этими возбудителями.

3. Выявление стадии репродукции вируса гриппа, ингибируемой арбидолом, получение резистентных к нему мутантов и установление молекулярно-биологических основ резистентности к арбидолу являются доказательством наличия у него вирусспецифического действия, по механизму отличающегося от действия известных противогриппозных химиопрепаратов, и дают полное основание отнести арбидол к этиотропным препаратам так называемой первой линии защиты против гриппозной инфекции.

4. Данные об увеличении эффективности действия в культуре клеток противо-гриппозных препаратов при сочетанном использовании их с арбидолом открывают перспективу для их клинического изучения при комбинированной терапии гриппозной инфекции и их следует учитывать при разработке доз и схем лечения при комбинированной терапии гриппа в целях более рационального и в то же время эффективного использования этих препаратов в клинической практике.

5. С использованием ИФА разработан, апробирован и внедрен для практического применения в научных лабораториях метод для быстрого и количественного определения противовирусной активности соединений в отношении респираторных вирусов в культуре клеток. Обнаружение в ряду производных 5-оксииндолов значительного количества соединений с высокой противовирусной активностью в отношении вируса гриппа и РСВ, а также обнаружение среди них соединений, способных так же, как и арбидол, ингибировать эндоцитоз вируса гриппа, открывает новое направление в химиотерапии вирусных инфекций и делает перспективным дальнейший поиск новых противовирусных препаратов в этом ряду.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Арбидол обладает широким спектром противовирусной активности, ингибируя репродукцию трех основных антигенных серотипов H1N1, H2N2, H3N2 и ремантадинрезистентных вирусов гриппа А человека, вирусов гриппа птиц подтипов НА Н5, Н9 и Н6, вызвавших заболевания людей или имеющих общие или близкородственные с ними гены, вирусов гриппа В и С, а также респираторно-синцитиального вируса и аденовируса в культуре клеток.

2. Арбидол ингибирует стадию слияния липидной оболочки вируса с мембранами эндосом и не влияет на адсорбцию вируса гриппа и его нейраминидазную активность, а также на вирусную транскрипцию и трансляцию.

3. Впервые получены мутанты, резистентные к арбидолу, все из которых, имели аминокислотные замены в различных положениях субъединицы НА2 НА вируса гриппа. Арбидолрезистентные мутанты индуцируют слияние липидной оболочки вируса с клеточными мембранами при более высоком рН, чем вирус дикого типа, и при добавлении к ним арбидола у них не происходит сдвига конформационного перехода, наблюдаемого у вируса дикого типа.

4. Арбидол - этиотропный препарат, вирусспецифической мишенью которого в цикле вирусной репродукции является НА вируса гриппа. Арбидол, взаимодействуя с НА, увеличивает его стабильность к конформационным изменениям, индуцируемым низким рН и необходимым для осуществления слияния липидной оболочки вируса с мембранами эндосом.

5. Комбинированное использование арбидола с каждым из противовирусных препаратов - амантадином, ремантадином, карбоксилатом озельтамивира, рибавирином и рибамидилом усиливает их эффект на репродукцию вируса гриппа А в культуре клеток по сравнению с эффектом, оказываемым каждым из этих препаратов в отдельности.

6. Химический ряд производных 5-оксииндолов является перспективным для поиска новых препаратов, обладающих противовирусной активностью.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Грипп является острым респираторным заболеванием, наносящим вред здоровью людей, приводящим к огромным экономическим потерям и до настоящего времени плохо поддающимся контролю. По оценкам Центра Контроля и Профилактики Заболеваний в Атланте, ежегодно в США от гриппа и осложнений после него умирает от 20000 до 40000 людей и госпитализируются около 110 000 [122,180,223]. В России на протяжении последних 15-20 лет ежегодно регистрируется от 27,3 до 47, 2 млн. случаев заболеваний ОРВИ, причем удельный вес гриппа в структуре ОРВИ колеблется в зависимости от интенсивности эпидемий гриппа от 10 до 60% [44,46]. Экономический ущерб, причиняемый гриппом и ОРВИ, ежегодно составляет около 86% от всего ущерба, наносимого инфекционными болезнями. Заболевание продолжается от 34 дней до двух недель и сопровождается высокой температурой, лихорадкой, головной болью, миалгией и другими симптомами, характерными для острой респираторной инфекции. Часто грипп приводит к осложнениям и развитию вторичных инфекций [164]. У детей, несмотря на то, что в большинстве случаев исход болезни благоприятен, опасность заболевания гриппом заключается в осложнениях, наблюдаемых в виде поражений центральной нервной системы: от легких неврологических расстройств до поражений головного мозга [30]. Такие осложнения, как бронхит, пневмония, острый средний отит, регистрируются у каждого третьего ребенка, больного гриппом и ОРВИ [46]. Большинство смертельных исходов после заболевания гриппом у людей 65 лет и старше вызвано развитием пневмонии или обострением уже существующих сердечно-легочных и других заболеваний [8,9, 111,179, 180,223].

Всемирной Организацией здравоохранения в качестве основного средства борьбы против гриппа в настоящее время рекомендована вакцинация, однако эффективность ее применения ограничена в связи со способностью поверхностных белков вируса гриппа гемагглютинина (НА) и нейраминидазы (NA) подвергаться быстрым и непредсказуемым изменениям [8, 9, 83,122]. Состав вакцины меняется в зависимости от изменения антигенной структуры циркулирующих вирусов гриппа, предсказать которую заранее практически невозможно. Изменения поверхностных антигенов вируса гриппа, определяющих гуморальный иммунитет к этой инфекции, происходят двумя путями [9, 34, 163, 221,222]. Один из них - антигенный сдвиг, являющийся результатом реассортации сегментов вирусного генома двух различных штаммов вируса гриппа, приводящий к внезапному появлению новых антигенных подтипов вируса гриппа, иммунитет к которым в человеческой популяции отсутствует. Полагают, что именно такие вирусы явились возбудителями трех пандемий, имевших место в XX веке. Наиболее тяжелой была пандемия "испанского гриппа " в 1917-1918 г.г., по разным данным унесшая жизни 20-50 миллионов человек и вызванная вирусом гриппа А антигенного подтипа H1N1. Следующие пандемии гриппа, имевшие место в 1957 году ("азиатский грипп") и в 1968 году ("гонконгский грипп"), были вызваны вирусами гриппа H2N2 и H3N2 соответственно. До недавнего времени считали, что только эти три антигенных подтипа вируса гриппа А человека H1N1 , H2N2 и H3N2 , явившиеся результатом такого антигенного сдвига, могут вызвать развитие инфекции у людей [9,34, 120,219,220, 221] . Однако в 1997 году было установлено 18 случаев заболевания гриппом в Гонконге, вызванных птичьим вирусом H5N1, 6 из которых закончились смертельным исходом

75,88,210]. Через год другой птичий вирус H9N2 был выделен от двух детей с респираторными симптомами [176]. В конце 2003 - начале 2004 года в ряде азиатских стран у людей вновь были зафиксированы вспышки гриппа, вызванного птичьими вирусами H5N1, приведшие к тяжелым заболевания, в том числе и со смертельным исходом [216, 223]. Имеющиеся данные дают возможность предположить, что эти новые штаммы вирусов гриппа возникли путем реассортации между птичьим вирусом гриппа и вирусом гриппа человека или путем непосредственной трансмиссии птичьего вируса в человеческую популяцию [25,34,52,223]. Другой особенностью вируса гриппа является постоянно продолжающийся антигенный дрейф, происходящий в пределах одного подтипа и заключающийся, главным образом, в точечных мутациях в генах поверхностных белков гемагглютинина и нейраминидазы [28, 34, 221]. Этот процесс приводит к возникновению штаммов, мало отличающихся от вируса-предшественника, которые последовательно вытесняют из популяции людей ранее циркулировавшие штаммы. Таким образом, штаммы, вызывающие заболевания, постоянно меняются и поэтому способны вызывать заболевания у людей, не имеющих к ним иммунитета. Как показывает опыт, для создания, проверки на безопасность и распространения в достаточном количестве эффективной вакцины к такому вновь возникшему штамму вируса гриппа требуется около 6 месяцев. Этот промежуток времени является довольно длительным, что создает определенные трудности для своевременной вакцинации населения в условиях приближающейся эпидемии гриппа. Кроме того, вакцинация не всегда эффективна и безопасна для лиц пожилого возраста и пациентов с нарушениями функций иммунной системы [122,170,179,187].

В связи с вышеизложенным особую важность и актуальность приобретает проблема разработки и применения препаратов для лечения и профилактики гриппа. Арсенал средств, используемых для облегчения течения гриппозной инфекции, охватывает практически все возможные способы влияния на инфекционный процесс и включает в себя химиопрепараты этиотропного действия, вирулицидные препараты, средства иммунокоррегирующей, патогенетической и симптоматической терапии. К средствам патогенетической и симптоматической терапии, применяемым при комплексном лечении гриппа, относятся препараты, оказывающие жаропонижающее и противовоспалительное действия, улучшающие функции легких и бронхов, а также десенсилибилизирующие препараты (аспирин, эффералган, панадол, колдрекс, бутадион, метиндол, бронхолитин, солутан, тавегил, диазолин и др.). В основе действия вирулицидных препаратов лежит инактивация внеклеточного вируса. К известным вирулицидным препаратам, применяемым для лечения и профилактики гриппозной инфекции, относятся теброфен, флореналь, оксолиновая мазь и другие [18,19,35]. Особенно широкое распространение получила оксолиновая мазь, обладающая вирулицидной активностью в отношении миксо- и риновирусов, а также вируса герпеса. Для профилактики гриппа используют 0,25% мазь оксолина. Широкое распространение в России для лечения гриппа и ОРВИ получили средства повышения неспецифической резистентности организма, к которым относятся препараты интерферона (ИФН) и иммуномодуляторы [18,20,21,22]. Существующие медицинские препараты ИФН делятся по типу активного компонента на 01-, ft-, у - ИФН, а по времени создания и применения - на природные человеческие лейкоцитарные ИФН ( первое поколение), занимающие в настоящее время лидирующее положение, полученные с помощью современных биотехнологий рекомбинантные ИФН ( второе поколение) и гибридные , синтетические или мутантные ИФН ( третье поколение) [20]. Механизм действия ИФН заключается в индукции синтеза протеинкиназы, фосфорилирующей один из инициирующих факторов трансляции, после чего этот фактор не может обеспечить образование инициирующего комплекса. Избирательное подавление трансляции вирусных матриц обусловлено либо большей чувствительностью вирусной системы трансляции к фосфорилированию инициирующего фактора, либо специфическим выключением трансляции в зараженных клетках. В обработанных интерфероном клетках индуцируется синтез фермента, синтезирующего 2-5-олигоадениловую кислоту 2-5-А-синтетазы, которая вызывает активизацию латентных нуклеаз, разрушающих свободные вирусные и-РНК. В результате те вирусные РНК, которые не смогли связаться с рибосомами, подвергаются разрушению нуклеазами. Подавление ИФН стадии инициации трансляции и разрушение и-РНК вируса обуславливают его универсальный механизм действия при инфекциях, вызванных различными вирусами [20,21,22]. Клинический эффект получен при применении как моновалентных препаратов интерферона (бетаинтерферон, реаферон, реальдирон, роферон А, интрон А, человеческий лейкоцитарный интерферон), так и комбинированных с полимерами или витаминами препаратов (гриппферон, виферон). Параллельно с исследованиями препаратов экзогенного ИФН проводились работы по созданию и испытанию индукторов интерферона, способных индуцировать в организме человека продукцию эндогенного интерферона. Первые из открытых индукторов интерферона обладали высокой токсичностью, однако в результате целенаправленного скрининга было выявлено несколько перспективных индукторов интерферона, имеющих высокий химиотерапевтический индекс и пригодных для профилактики и лечения вирусных инфекций. Для профилактики и лечения гриппа используются синтетические низкомолекулярные соединения: флуорены (амиксин), азотистые основания (камедон и циклоферон), а также природные и синтетические высокомолекулярные полимеры (кагоцел, ридостин, полудан). Все они обладают широким диапозоном противовирусной активности и иммуномодулирующими свойствами. При введении в организм индукторы интерферона вызывают ряд неспецифических и специфических эффектов. Неспецифические эффекты связаны с ингибированием роста клеток, модуляцией их дифференцировки и синтезом мембранных рецепторов, специфические - с действием на различные звенья системы иммунитета, что выражается в активации макрофогов, цитотоксических Т-клеток, антителообразующих В-клеток, естественных киллеров и др. [18,20,22]. Одним из свойств индукторов интерферона является формирование в организме неспецифической резистентности на длительный период времени. Несмотря на общность свойств, каждый из индукторов интерферона имеет свои особенности. Так, например, амиксин вызывает медленную продукцию ИФН Т-лимфоцитами, в то время как циклоферон быструю продукцию ИФН В-лимфоцитами. Циклоферон вызывает образование ряда противовоспалительных цитокинов, что позволяет рассматривать его как регулятор цитокиновой сети [18, 20,21,22]. Особое место среди перечисленных препаратов занимает комплексный препарат цитовир-3. В основе действия входящих в него веществ лежит активация синтеза эндогенного интерферона и предотвращение формирования вторичного иммунодефицитного состояния. Цитовир-3 включает в себя : дибазол-индуктор интерферона, тимоген -иммуномодулятор, усиливающий интерфероногенный эффект дибазола и оказывающий иммунокорригирующий эффект на реакции клеточного, гуморального иммунитета и неспецифическую резистентность организма; а также аскорбиновую кислоту [18]. Однако, несмотря на многообразие препаратов, применяемых для лечения и профилактики гриппа, основное и ведущее место среди них принадлежит химиопрепаратам этиотропного действия. Данные препараты оказывают непосредственное воздействие на репродукцию вируса и направлены на определенную вирусспецифическую мишень в цикле вирусной репродукции. В первой части обзора будут представлены современные данные, касающиеся структуры вируса гриппа и цикла его репродукции.

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Ленева, Ирина Анатольевна

ВЫВОДЫ:

1. Арбидол в клеточных культурах в одинаковой степени ингибирует репродукцию антигенных серотипов вирусов гриппа А человека H1N1, H2N2, H3N2, а также ремантадинчувствительных и ремантадин-резистентных штаммов вирусов гриппа А.

2. Арбидол ингибирует репродукцию вирусов гриппа птиц А : H5N1 и H9N2, вызвавших заболевания у людей, H6N1 и H9N2, имеющих общие с H5N1 и H9N2 внутренние гены, а также H5N2 и H5N3, изолированных от диких птиц на территории России.

3. Арбидол ингибирует в различных клеточных культурах репродукцию вирусов гриппа В и С, аденовируса и респираторно-синцитиального вируса.

4. Максимальный противовирусный эффект арбидола в клеточных культурах наблюдается при его добавлении за 3-4 часа до инфицирования клеточной культуры и коррелирует с моментом достижения его наивысшей концентрации в клетках, что подтверждает особую эффективность использования арбидола на ранних стадиях заболевания, а также в профилактических целях.

5. Арбидол ингибирует одну из ранних стадий вирусной репродукции, подавляя слияние липидной оболочки вируса с мембранами эндосом, происходящее внутри клеток. Арбидол не влияет на адсорбцию вируса гриппа и его нейраминидазную активность, а также на вирусную транскрипцию и трансляцию.

6. Исследования с реассортантами между А/ВЧП/Вейбридж/ (H7N7) и А/Сингапур/1/57 (H2N2), имеющими различный набор генов, показали, что чувствительность реассортантов к арбидолу определяется геном, кодирующим НА.

7. Впервые в культуре клеток получены и охарактеризованы мутанты, резистентные к арбидолу. Определение нуклеотидной последовательности мутантов, резистентных к арбидолу, показало, что все они имеют аминокислотные замены в различных положениях субъединицы НА2 НА вируса гриппа.

8. Слияние липидной оболочки вируса с клеточными мембранами у арбидолрезистентных мутантов происходит при более высоком рН, чем у вируса дикого типа. Арбидол не вызывает конформационных изменений НА у резистентных к нему мутантов, в то время как его добавление к НА вируса дикого типа вызывает сдвиг конформационного перехода НА.

9. Комбинированное использование арбидола с каждым из изученных противогриппозных препаратов (амантадин, ремантадин, рибавирин, рибамидил, карбоксилат озельтамивира) увеличивало их эффект подавления вирусной репродукции в культуре клеток по сравнению с эффектом, оказываемым этими же концентрациями препаратов в отдельности. Во всех случаях наибольшее усиление ингибирующего эффекта было получено при использовании низких доз препаратов, а при комбинированном использовании арбидола с карбоксилатом озельтамивира также и при более позднем добавлении арбидола к клеткам.

10. Добавление симптоматических препаратов анальгина и ацетилсалициловой кислоты совместно с арбидолом не снижало его ингибирующего действия на вирусную репродукцию в культуре клеток.

11. Показано, что химический ряд производных 5-оксииндолов, к которым относится арбидол, является перспективным для поиска соединений, обладающих противовирусной активностью. Из 47 соединений, изученных в отношении их способности ингибировать репродукцию вируса гриппа А, и из 7 соединений, изученных в отношении их способности ингибировать репродукцию РСВ, в культуре клеток, было выявлено соответственно 17 и 4 соединения, сопоставимых по активности с арбидолом.

12. Полученные данные доказывают наличие у арбидола вирусспецифического действия, позволяющего отнести его к этиотропным препаратам первой линии защиты против гриппозной инфекции. Доказательства вирусспецифического действия арбидола являются основанием для включения арбидола в перечень этиотропных средств для химиотерапии ОРВИ и продолжения клинических исследований по оптимизации его применения при моно- и комбинированной терапии ОРВИ. к*

XIV. ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Несмотря на то, что прошло уже больше, чем 70 лет, с открытия вируса гриппа, начала его тщательного изучения и разработки первой вакцины против него, грипп все еще остается серьезным заболеванием, приводящим к огромным экономическим потерям и высокой смертности, особенно среди людей пожилого возраста и людей, относящимся к так называемым группам повышенного риска Изучение огромного количества химических соединений увенчалось разработкой нескольких этиотропных химиопрепаратов, которые в настоящее время используются для лечения и профилактики гриппа. К наиболее изученным и широко применяемым относятся препараты адамантанового ряда , среди которых основными являются амантадин и ремантадин, ингибиторы нейраминидазы занамивир и озельтамивир.

Наши исследования показали, что арбидол обладает широким спектром противовирусной активности, ингибируя репродукцию различных антигенных серотипов и ремантадинрезистентных вирусов гриппа А человека, вирусов гриппа птиц подтипов НА Н5 и Н9, вирусов гриппа В и С, также репродукцию РСВ и аденовируса. Проведенные нами исследования по идентификации стадии вирусной репродукции, игибируемой арбидолом, и получение и изучение свойств мутантов, резистентных к нему, доказывают наличие у арбидола вирусспецифического механизма действия. Арбидол ингибирует процесс слияния липидной оболочки вируса с мембранами эндосом, взаимодействуя с НА вируса гриппа и увеличивая его стабильность к конформационным изменениям, необходимым для осуществления этого слияния. Полученные данные с полным основанием позволяют отнести г арбидол к этиотропным препаратам первой линии защиты от гриппа. Проведенное нами изучение действия арбидола в сочетании с различными противогриппозными препаратами, обладающими отличным от арбидола механизмом действия, показало, что комбинация этих препаратов с арбидолом увеличивает их эффект на вирусную репродукцию в культуре клеток, что позволяет для достижения того же самого эффекта при комбинации арбидола с ремантадином, рибавирином и рибамидилом использовать более низкие концентрации последних или при комбинации с ингибиторами нейраминидазы начинать лечение арбидолом на более позднем этапе.

Разнообразие биологической активности арбидола, выражающееся наряду с его вирусспецифическим действием интерферонидуцирующем, иммуномодулирующем и антиоксидантном действиях, а также обширные данные клинических испытаний свидетельствующие об эффективности и безвредности арбидола делают этот препарат весьма эффективным для лечения и профилактики гриппозной инфекции. Несмотря на опыт 15-летнего применения арбидола в медицинской практике, терапевтические и профилактические возможности арбидола еще не исчерпаны. Арбидол обладает широким спектром активности в отношении ряда ОРВИ, для профилактики и лечения которых в настоящее время не существует вакцин и эффективных препаратов. Дальнейшее изучение эффективности арбидола в отношении этих ОРВИ в клинических испытаниях может привести к позиционированию арбидола как препарата, не требующего проведения предварительной лабораторной диагностики перед началом лечения. Перспективными представляются дальнейшие исследования по изучению комбинированного использования арбидола с другими противовирусными препаратами, обладающими отличным от него механизмом действия, а также изучение возможности комбинации с этими препаратами в одной лекарственной форме. Кроме того, в случае возникновении пандемии, вызванной новым штаммом вируса гриппа, вакцины к которому еще не существует, или при угрозе биотеррористической атаки с использованием высокопатогенных штаммов вируса гриппа необходимо иметь достаточный запас арбидола, что требует изучения его стабильности в условиях длительного хранения.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Ленева, Ирина Анатольевна, 2005 год

1. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях.//Ленинград: Медгиз.- 1962.- 180с.

2. Беляев А.Л., Бурцева Е.И., Слепушкин А.Н. Арбидол-новое средство для профилактики гриппа и острых респираторных вирусных инфекций у детей.// Вестник РАМН.- 1996.- №3.-С. 34-37.

3. Борисова A.M., Артемова О.П., Забаютникова О.Д. Клинико-иммунологическая оценка эффективности применения арбидола у больных вторичными дефицитами. // Иммунология .-1996.- №2.- С. 58-61.

4. Гагаринова В.М., Игнатьева Г.С., Синицкая Л.В., Иванова A.M., Родина М.А., Гурьева А.В. Новый химиопрепарат арбидол: профилактическая эффективность во время эпидемий гриппа. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1993.- №5.-С.40-43.

5. Галегов Г.А., Львов Н.Д., Петрова И.Р., Флорентьев В.Л. Рибавирин как антивирусный химиопрепарат: химия, молекулярный механизм действия,возможности клинического применения. // Вопросы медицинской химии.-1986.-№32.-С. 10-19.

6. Гендон Ю.З. Пандемия гриппа: можно ли с ней бороться? //Вопросы вирусологии.-1995.-№2.- С.8-12.

7. Гендон Ю.З. Стратегия борьбы с гриппом с помощью гриппозных вакцин. // Вакцинация.-2001.-№5 (11).-С.З.

8. Герасина С.Ф., Фарашанян В.П., Фадеева Н.И., Першин Г.Н., Жданов В.М. Синтез вирусспецифических РНК в инфицированных клетках в присутствии бонафтона. // Фармакология и токсикология.-1985.-№4.-С.92

9. Глушков Р.Г., Гуськова Т.А., Крылова Л.Ю., Николаева И.С. Механизмы иммуномодулирующего действия арбидола. // Вестник Р АМН.-1999.-№3.-С.36-40.

10. Гмурман В.Е. Теория вероятностей и математическая статистика. // Москва: Высшая школа.-2002.-479с.

11. Гуськова Т.А. Токсикология лекарственных средств. // Москва, 2003.-103с.

12. Гуськова Т.А.и Глушков Р.Г. Арбидол-иммуномодулятор, индуктор интерферона, антиоксидант.// Москва, 1999.- 93с.

13. Дриневский В.П. Осидак Л.В. Нацина В.К. и др. Химиопрепараты в терапии гриппа и других респираторных вирусных инфекций. // Антибиотики и химиотерапия . 1998.- №9.- С.29-34.

14. Еропкин М.Ю., Еропкина Е.М. Культуры клеток как модельная система исследования токсичности и скрининга цитопротекторных препаратов. // С.-Петербург: Морсар АВ, 2003.-239 с.

15. Ершов Ф.И., Касьянова Н.В. Современные принципы профилактики и лечения гриппа и ОРВИ. Антигриппин. Интернет версия на сайте http://www.antigrippin.ru.

16. Ершов Ф.И. Противовирусные средства. // Клиническая фармакология и терапия. -1995.-№4.-С.72-75.

17. Ершов Ф.И. Интерфероны. // Вопросы вирусологии.-1998.-№6.-С. 247I252.

18. Ершов Ф.И. Этиотропная терапия наиболее распространенных вирусных инфекций. // Вестник РАМН.-2001.-№11.-С.34-39.

19. Ершов Ф.И. Медицинская значимость интерферонов и их индукторов. // Вестник РАМН.-2004.-№2.-С.9-13.

20. Зверев В.В., Киселев О.И., Стукова М.А. Лекарственные препараты против герпесных инфекций. // СПб.- 2002.

21. Иммунологические методы исследований. Под ред. И Лефковитса и Б. Перниса.- Москва: Мир, 1988,- 528с.

22. Каверин Н.В., Смирнов Ю.А. Межвидовая передача вируса гриппа А и пандемии гриппа. //Вопросы вирусологии.-2003.-№3 -С. 4-10.

23. Киселев О.И., Блинов В.М., Козелецкая К.Н., Ильенко В.И., Платонов В.Г., Чупахин О.Н., Стукова М.А., Каршнов В.А. Молекулярный механизм действия антивирусных препаратов адамантанового ряда. //Вестник РАМН.-1994.-№9.-С. 10-15.

24. Киселев О.И., Деева Э.Г., Слита А.В., Платонов В.Г. Антивирусные препараты для лечения гриппа и ОРЗ. // Спб.- 2000.и

25. Киселев О.И., Соминина А.А., Гринбаум Е.Б. Грипп: современное состояние и эпидемиологическая ситуация.// Вестник АМН.-1994.-№8.-С.3-7.

26. Козелецкая К.Н., Каршнов В.А., Киселев О.И., Мишин В.П., Гринбаум Е.Б., Бурмистрова В.В. Происхождение резистентности к химиопрепаратам у природных изолятов вирусов гриппа. // Вестник РАМН.-1995.-№9.-С.З 6-41.

27. Крамарев С.А., Палатная Л.А., Литус В.И. Опыт применения арбидола при лечении и профилактики гриппа и ОРВИ у детей на Украине. //

28. Русский медицинский журнал.-2003.-№21.-С. 1050-1051.

29. Крылова Л. Ю. Эффективность и переносимость арбидола и его аналогов у мышей с гриппозной пневмонией. Диссертация кандидата биол. наук.-Москва, 1998.-131с.

30. Кубарь О.И., Степанова Л.А. , Сафонова Л.С., Розаева Н. Р. Клиническая аппликация иммуномодулирующих свойств арбидола при ОРВИ.-IV Российский Национальный Конгресс 'Человек и Лекарство", 1997.-С. 269.

31. Лозицкий В.П. Экспериментальное обоснование применения ингибиторов протеолиза для лечения и профилактики гриппа и в производстве иммунопрепаратов. // Химиотерапия и химиопрофилактика гриппа и ОРЗ: Ленинград.- 1990.-С.58-65.

32. Львов Д.К., Ямникова С.С., Забережный А.Д., Гребенникова Т.В. Межпопуляционные взаимодействия в системе вирусы гриппа А-животные-человек.// Вопросы вирусологии. -2005.-№4.-С.4-11.

33. Машковский М.Д. Лекарственные средства: В 2т.- Харьков: Торсинг.-1997.

34. Остерман JI. А. Исследования биологических макромолекул электро фокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами. //Москва: Наука, 1983.-304с.

35. Панишева Е.К., Кричевский Э.С., Николаева И.С., Фомина А.Н., Черкасова А.А., Голованова Е.А., Крылова Л.Ю. Аминоалкильные производные 5 и 6 -оксииндола и их противовирусная активность. // Химико-фармацевтический журнал.- 1989.-№2.-С. 189-191.

36. Панишева Е.К., Микерова Н. И., Николаева И.С., Фомина А.Н., Черкасова А.А., Голованова Е.А., Крылова Л.Ю. Синтез ипротивовирусная активность производных 5-оксииндола. // Химико-фармацевтический журнал.- 1988.-№ 12.-С. 1455-1458.

37. Патенты Российской Федерации № 2008004 , № 2033156, № 2033157.

38. Ратникова Л.И., Миронов И.П. Иммунологические факторы патогенеза как основа рефрактерности к лечению часто болеющих ОРВИ. III Российский Национальный конгресс "Человек и лекарство", Москва, 1996.- С. 192-193

39. Селькова Е.П., Грачева И.Ю., Готвянская Т.П., Данилина Г.А., Амарян М.П., Семененко Т.А. Изучение иммуномодулирующей активности арбидола. //Русский Медицинский Журнал.-2001.-Т.9.-С.16-17.

40. Учайкин В.Ф., Новокшонов А.А., Тихонова О.Н. Противовирусный препарат арбидол как перспектива этиотропной терапии ротавирусной инфекции у детей. // Детские инфекции.- 2004.-№ 8.-С. 34-39.

41. Учайкин В.Ф., Харламова С.Г., Чешик С.Г. Применение арбидола и амиксина в качестве этиотропной терапии гриппа и ОРВИ у детей. // Педиатрия .:2004.-№5.-С. 73-77.

42. Чешик С.Г. Вартанян Р.В. Эффективность терапии арбидолом при острых респираторных вирусных инфекциях у детей раннего возраста. // Новые лекарственные препараты.-2004.- №11.-С.37-44.

43. Чистяков В.В., Ермаченков И.А., Голованова И.В. Фармакокинетика арбидола у крыс. // Химико-фармацевтический журнал.-1993.-№9.-С.11-14.

44. Шумилов В.И., Шустер A.M., Лобастов, С.П., Шевцов В. А., Медников Б.Л., Пиявский С. А., Литус В.И. Эффективность арбидола при профилактике и лечении острых респираторных инфекций. //Военно-медицинский журнал.- 2002. -Т.9.-С. 51-53.

45. Хамитов Р.А., Шустер A.M., Логинова С.Я. Экспериментальные данные по эффективности арбидола в отношении возбудителя атипичнойпневмонии ( SARS) in vitro и in vivo. В сборнике: Арбидол-новые данные.- Москва.- 2004.-С. 43-46.

46. Ядровская В.А., Савина Е.П., Цышкова Н.Г., Трофимов Ф.А., Анисимова О.С., Скворцова В.Г., Деденков А.Н. Изучение метаболизма 14С-арбидола. // Химико-фармацевтический журнал.- 1993.- №5 (27)- С.23-24.

47. Ямникова С.С., Ковтун Т.О., Дмитриев Г.А., Аристова В.А., Русанов Г.М., Конечный А.Г. Львов Д.К. Циркуляция вируса гриппа А серотипа Н13 среди чайковых птиц Северного Каспия (1979-1985 г.г.). // Вопросы вирусологии.- 1989.-Т.4.-С.426-430.

48. Anderson L.J., Hierholzer J.C., Bingham P.G., Stone Y.O. Microneurtralization test for respiratory syncytial virus based on an enzyme immunoassay. //Journ. Clinic.Microbiol.-1985.-V.22 (6).-P. 1050-1052.

49. Aoki F.Y., Macleod M.D., Paggiaro P., Carewicz O., Savvy E.L., Wat A. Early administration of oral oseltamivir maximizes the benefits of influenza treatment. //J. Antimicrob. Chemother. -2003.-V 51(1).-123-129.

50. Atkinson P.H., Summers D.F. Purification and properties of HeLa cells plasma membranes.// J.Biol.Chem.- 1971.-V.246.-P.5162-5175.

51. Barnett J.M., Gadman A., Gor D., Dempsey M., Walters M., Candlin A., Tisdale M., Morley P.J., Owens I.J., Fenton R.J., Lewis A.P., Claas E.C., Rimmelzwaan G.F., De Groot R., Osterhaus D.M. Zanamivir susceptibility.

52. Monitoring and characterization of influenza virus clinical isolates obtained during phase II clinical efficacy studies. // Antimicrbial.Agents and Chemotherapy.-2000.-V.44.-P.78-87.

53. Bean W.J., Thelkeld S.C., Webster R.G. Biological potential of amantadine-resistant influenza A virus in an avian model. // J.Infect. Dis.-1989.-V. 159-P. 1050-1056.

54. Beaton A.R., Krug R.M. Transcription antiterminatiom during influenza viral template RNA synthesis requires the nucleocapsid protein and the absence of a 5/capped end. // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-1986.-V.83.-P.6282-4286.i

55. Belshe R.B., Burk В., Newman F.B. Drug resistance and mechanism of action amantadine on influenza A viruses. // J. Inf. Dis.- 1989.-V. 159.-P. 430435.

56. Belshe R.B., Burk В., Newman F., Ceruti R.L., Sim I.S. Resistance of influenza A viruses to amantadine and rimantadine . Results of one decade of surveillance. // J. Infect. Dis.-. 1989. V.159.-P.430-435.

57. Bishop D.H.L., Obijeski I.F., Simpson R.W. Transcription of the influenza ribonucleic acid genome by a virion polymerase. I. Optimal conditions for in vitro activity of the RNA-dependent polymerase. // J.Virology.-1971.-V.8.-P.66

58. Bryson Y.J., Monahan C., Pollack M., Shields W.D. A prospective double blind study of side effects associated with the administration of amantadine for influenza A prophylaxis // Journal of Infectious Diseases.- 1980. V. 141.-P. 543-547.

59. Bodian, D.L., Yamasaki, R.B., Buswell, R.L., Stearns, J.F. , White, J.M., Kuntz, I.D. Inhibition of the fusion-inducing conformational change of influenza hemagglutinin by benzoquinones and hydroquinones. // Biochemistry.-1993.-V. 32- P. 2967-2978.

60. Bouloy M., Plotch S.J., Krug R.M. Globin mRNAs are primers for the transcription of influenza viral RNA in vitro. // Proc.Natl.Acad.Sci. USA.-1978.-V.75.-P.4886-4890.

61. Boya P., Roques В., Kroemer G. New EMBO member's review: viral and bacterial proteins regulating apoptosis at the mitochondrial level. // EMBO J.

62. W 2001 .-V.20.-P.4325-4331.

63. Brooks M. Studies with the antiviral drug Arbidol. Диссертация. Australia, Melburn, 2003.- 140p.

64. Carr, C.M., Kim P.S. Flu virus invasion; halfway there. // Science.- 1994.-V. 266-P.234-236.i

65. Castrucci M.R., Kawaoka Y. Reverse genetics system for generation of an influenza A virus mutants containing a deletion of the carboxyl-terminal residue of M2 protein. // J.Virol.-1995.-V.69.-P.2725-2728.

66. Chou J. Quantitation of synergism and antagonism of two or more drugs by computerized analysis // Synergism and antagonism in chemotherapy: Academic Press, Inc, 1981 .-P.223-241.

67. Claas E.C., Osterhaus A.D., van Beek R., De Jong J.C., Rimmelzwaan G.F., Senne D.A., Krauss S., Shortridge K.F., Webster R.G. Human influenza A H5N1 virus related to a highly pathogenic avian influenza virus. // Lancet.-1998.-V. 351-P. 472-477.

68. Clover R.D., Crawford S.A., Abell T.D., Ramsey C.N., Glezen W.P., Couch R.B. Effectiveness of rimantadine prophylaxis of children with families. // American Journal of Diseases of Children.- 1986 .-V. 140-P. 706-709.

69. Colacino J.M., Stashke K.A. , Laver W.G. Approaches and strategies for the treatment of influenza virus infections. // Antiviral Chemistry and Chemotherapy.- 1999 .-V. 10.-P.155-185.

70. Collins P., Murphy B. Respiratory syncytial virus: Reverse genetics and vaccine strategies.// Virology.-2002.-V.296.-P.204-211.

71. Colman P.M. Influenza virus neuraminidase: enzyme and antigen. //The Influenza Viruses.-1989.-P. 175-218.

72. Colman P.M. Structure and Function of the Neuraminidase. // Textbook of Influenza, K.G.Nicholson, R.G.Webster, A.J.Hay: Blackwell Science UK .-1998.-P. 65-73.

73. Compans R.W., Content J., Duesberg P.H. Structure of the ribonucleoprotein in influenza virus. // J.Virol.-1972.-V. 10.-P.795-800.

74. Daniels R.S., Downie J.C., Hay A.J., Knossow M., Skehel J.J., Wang M.L., Wiley D.C. Fusion mutants of the influenza virus HA glycoprotein. // Cell.-1985.-V. 40-P. 431-439.

75. Davies W.L., Grunert R.R., Haff R.F. et al. Antiviral activity of 1-adamantamine.//Science.- 1964.-V. 144-P.862-863.

76. Dawkins A.T., Gallagher L.R., Togo Y., Hornich R.B., Harris B.A. Studies on induced influenza in man. // Journal of the American Medical Association.-1968.-V. 203-P. 1095-1099.

77. Desselberger U., Racaniello V.R., Zazra J.J., Palese P. The 3;and 5' terminal sequences of influenza A, B, and С virus RNA segments are highly conserved and show partial inverted complementarity. //Gene.- 1980.-V.8.-P.315-328.

78. De Jong J.C., Claas E.C., Osterhaus A.D.M.E., Webster R.G., and Lim W.L. A pandemic warning? //Nature.- 1997.-V. 389-P. 554.

79. Diaz M., Zieman S., Le Beau M., Pitha P., Chilcote R., Rowley J. Homozygous deletion of the alpha- and beta 1-interferon genes in human leukemia and derived cell lines. // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-1988.-V.85.-P.5259-5263.

80. Dolin R., Reichman R.C., Madore H.P., Maynard R., Linton P.M., Webber-Jones J. A controlled trial of amantadine and rimantadine in prophylaxis ofinfluenza A infection. // New England Journal of Medicine.- 1982.- V. 307.-P. 580-584.

81. Egorov A., Brandt S., Sereinig S., Romanova J., ferko В., Katinger D., Muster T. Transfectant influenza A viruses with long deletions in the NS1 protein grow efficiently in Vero cells. // Journal of Virology.-1998.-V.72.-P.6437-6441.

82. FDA. Antiviral Drug Advisory Committee. Gaithersburg: Centre for Drug Evaluation and Research.-2002.-P. 1-266.

83. Garcia-Sastre A. Influenza A virus lacking the NS1 gene replicates in interferon-deficient systems.//Virology.-1998.-V.252.-P.324-330.

84. Glushkov R.G. Arbidol. Antiviral, Immunostimulant, Interferon inducer. //Drug of the Future.- 1992.-№. 17-P. 1079-1081.

85. Gomez-Puertas P., Albo C., Peres-Pastrana E., Vivo A., Portela A. Influenza virus matrix protein in the major driving force in virus budding. // J.Virol.-2000.-V.74.-P. 1153 8-11547.

86. Goto H., Kawaoka Y. A novel mechanism for the acquisition of virulence by a human influenza A virus. // Proc.Natl.Acad.Sci. USA.- 1998.-V.95.-P. 1022410228.

87. Goto H., Wells K., Takada A., Kawaoka Y. Plasminogenbinding activity of neuraminidase determines the pathogenicity of influenza A virus. // J.Virol. -2001 .-V.75 .-P.9297-9301.

88. Grambas S., Benett, M.S. , Hay, A.J. Influence of amantadine resistance mutations on the pH regulatory function of the M2 protein of influenza virus. // Virology.- 1992.-V. 191-P.541-549.

89. Gregoriades A. The membrane protein of influenza virus: extraction from virus and infected cell with acidic chloroform-methanol. // Virology.-1973.-V.54.-P.369-383.

90. Gubareva L.V., Bethell R.C., Hart G.J., Murti K.G., Penn C.R., Webster R.G. Characterization of mutants of influenza A virus selected with the NA inhibitor 4-guanidino-Neu5Ac2en.//J. Virology.- 1996.-V.70.-P. 1818-1827.

91. Gubareva L.V., Robinson M.J., Bethell r.c. et al. Catalyc and framework mutations in the neuraminidase active site of influenza viruses that are resistant to 4-guanidino-Neu5Ac2en. //J.Virology.- 1997- V. 71.-P. 3385-3390.

92. Gubareva L.V., Matrasovich M.N., Brenner M.K., et al. Evidence for zanamivir resistance in an immunocompromised child infected with influenza В virus.// J Infect.Diseases.- 1998.-V.178.-P. 1257-1262.

93. Guskova T.A., Nikolaeva I.S., Zacharova N.G. Experimental and clinical study of arbidol, an antiviral drug. 9-th Mediterranean Congress of Chemotherapy, 1994.- Abs.82.

94. Hay A. Amantadine and Rimantadine-Mechanisms. In book: Antiviral Drug Resistance, D.Richman (ed), John Willey and Sons Ltd, UK.-1996.-P. 4458.

95. Hay A. Virus Genome and its Replication. In book Textbook of Influenza, K.G.Nicholson, R.G.Webster, A.J.Hay , Blackwell Science UK.- 1998.- P. 4353.

96. Hay A. J., Lomniszi В., Bellamy A.R. Transcription of the influenza virus genome. // J.Virology.- 1977.- V. 83.- P. 337-355.

97. Hay A.J., Wolstenholme A.J., Skehel J.J., Smith M.H. The molecular basis of the specific anti-influenza action of amantadine. // EMBO Journal.- 1985.-V. 4.- P. 3021-3024.

98. Hayden F. WHO Guidelines on the Use of Vaccines and Antivirals during Influenza. Annex 5-Considerations for the Use of Antivirals during an Influenza pandemic, Geneva, 2-4 October, 2002.

99. Hayden F.G., Belshe R.B., Clover R.D., Hay A.J., Oakes M.G., Soo W. Emergence and apparent transmission of rimantadine -resistant influenza A in families. //New England Journal of Medicine.- 1989.-V. 281.-P. 579-584.

100. Hayden F.G., Rollins B.S., Hay A.J. Anti-influenza virus activity of the compound LY253963.// Antiviral Res.-1990. -V. 14.-P. 25-38.

101. Hebert M., Gugliemo B. What is the clinical role of aerosolized ribavirin? // Drug Intelligence and Clinical Pharmacy.-1990.-V.24.-P.735-738.

102. Herlocher M.L., Truscon R., Fenton R., Klimov A., Elias S., Ohmit S.E., Monto A.S. Assessment of development of resistance to antivirals in the ferret model of influenza virus infection. // J. Infect.Diseases.- 2003.- V. 188(9).-P.l 355-1361.

103. Hoffman L.R., Kuntz I.D., White Ju.M. Structure-based identification of an inducer of the low-pH conformational change in the influenza virus hemagglutinin: irreversible inhibiton of infectivity. // J.Virol.- 1997.-V.71(11).-P.8808-8820.

104. Horadam V.M., Sharp J.G., Smilack J.D. Pharmacokinetics of amantadinei'hydrochloride in subjects with normal and impaired renal function. // Annals of Internal Medicine 94.- 1981.- 454-458.

105. Kaiser L., Couch R., Galasso G. First International Symposium on influenza and other respiratory viruses: summary and overview. Kapalua, Maui, Hawaii, December 4-6, 1998 // Antiviral Research.- 1999.- 42.- 149-176.

106. Kell W., Niemann H„ Schwars R.T., Klenk H.D. Carbohydrates of influenza virus. Oligosaccharides attached to individual glycosylation sites of the hemagglutinin of fowl plague virus. // Virology.-1984.-V.133.-P.77-91.

107. Kendal A, Klenk H. Amantadine inhibits an early , M2 protein-dependent event in the replication cycle of avian influenza (H7) viruses. // Arch.Virology.-1991.-119.-P.265-273.

108. Kimberlin D.W., Spector S.A., Hill E.A. Assays for antiviral drug resistance. // Antiviral Research.-1995.-V.26.-P.403-413.

109. Kinchington D., Kangro H., Jeffries D. Design and testing of antiviral compounds. In Medical Virology: Oxford University Press, 1997.-P.147-160.

110. Kiso M., Mitamura K., Sakai-Tagawa Y.et al. Resistant influenza A viruses in children treated with oseltamivir: descriptive study. // Lancet .-2004.- V.364.-P. 759-765.

111. Klein T.W., Newton C., Larsen K., Perkins I., Nong L., Friedman H. The cannabinoid system and immune modulation.// J.Leukoc.Biol.-2003.-V.74.-P.486-489.

112. Klein T.W., Newton C., Larsen K., Chou J., Perkins I., Lu L., Nong L., Friedman H. Cannabinoid receptors and T helper cells. // J.Neuroimmunol.-2004.-V. 147.-P.91 -94.

113. Klenk H.D., Rott R., Orlich M., Blodorn J.Activation of influenza A viruses by trypsin treatment. // Virology.-1975.-V.68.-P.426-439.

114. Kolakofsky D., Ortin J. Negative strand RNA viruses come of age. // New Biol.-1991.-V.3.-P.754-758.

115. Krug R.M. Priming of influenza viral RNA transcription by capped heterologous RNAs. // Curr.Top.Microbiol.Immunol.-1981.-V.93.-P.125-149.

116. Lamb R.A. The influenza virus RNA segments and their encoded proteins. // Genetic of Influenza Viruses.Ed.P.Palese, D.W.Kigsbury, Springer-Verlag: Vienna.-1983.-P.21-69.

117. Lamb R.A., Lai C.J., Choppin P.W. Sequences of mRNAs derived from genome RNA segment 7 of influenza virus : collinear and interrupted mRNAs code for overlapping proteins. // Proc.Natl.Acad.Sci USA.- 1981.- V.78.-P.4170-4174.

118. Laver W.G. Crystallization and peptide maps of neuraminidase "heads" from H2N2 and H3N2 influenza virus strains // Virology.- 1978.-V.86.-P.78-87.

119. Laver W.G, Bischofberger N., Webster R.G. Disarming Flu Viruses. // Scientific American.- 1999.- V.280.- P. 78-87.

120. Lawetz C., Liuzzi M. The antiviral activity of the ribonucleotide reductase inhibitor BILD1351 SE in combination with acyclovir against HSV type-1 in cell culture. // Antiviral Research.-1998.-V.39.-P.35-46.

121. Lazarowitz S.G., Choppin P.W. Enhancement of the infectivity of influenza A and В viruses by proteolytic cleavage of the hemagglutininpolypeptide. // Virology.-1975.-V.68.-P.440-454.

122. Lazelari J., Campion К., Keene O., Silagy C. Zanamivir for the treatment of influenza A and В infection in high risk patients. // Arch. Intern. Med.-2001.- V. 161-P.212-217.

123. Leneva I., Roberts N., Govorkova E., Goloubeva O., and Webster R.G.I

124. The neuraminidase inhibitor GS4104 (oseltamivir phosphate) is efficacious against A/Hong Kong/156/97 (H5N1) and A/Hong Kong/1074/99 (H9N2) influenza virus. // Antiviral Research.- 2000.-V. 48. -P. 101-115.

125. Li S., Schulman J., Itamura S., Palese P. Glycosylation of neuraminidase determines the neurovirulence of influenza A/WSN/33 virus. // J.Virol.-1993.-V.67.-P.6667-6673.

126. Littler E. The past, present and future of antiviral drug discovery. // IDrugs.-2004.-V.7.-P.l 104-1112.D

127. Lowry O.H., Resenbrough H.J., Farr A.L. Protein measurement with the Folin phenol reagent. // J.Biological Chemistry.-1951.-V.193.-P.265-268.

128. LuY., Qian X.Y., Krug R.M. The influenza virus NS1 protein: a novel inhibitor of pre-mRNA splicing. // Genes Dev.-1994.-V.8.-P.1817-1828.

129. LuY., Wambash M., Katze M.G., Krug R.M. Binding of the influenza virus NS1 protein to double-stranded RNA inhibits the activation of the protein kibase that phosphorylates the eIF-2 translation initiation factor. // Virology.-1995.-V.214.-P.222-228.

130. Luo G., Colonno R., Krystal M. Characterization of a hemagglutinin -specific inhibitor of influenza virus. // Virology.- 1996. V. 226.- P. 66-76.

131. Marra F., Marra C.A., Stiver H.G. A case for rimantadine to be marketed in Canada for prophylaxis of influenza A virus infection. // Can.Resp.J.-2003.-V.10.-P.381-388.

132. Martin J., Wharton S.A., Lin Y.P., Takemoto D.K., Skehel J.J., Wiley D.C., Steihauer D.A. Studies of the binding properties of influenza hemagglutinin receptor-site mutants. // Virology.-1998.-V.241.-P. 101-111.

133. Martin J., Helenius A. Nuclear transport of influenza virus ribonucleoproteins: the viral matrix protein (Ml) promotes export and inhibits import. // Cell.-1991 .-V.67.-P. 117-130.

134. Meanwell N.A., Krystal M. Taking aim at a moving target: inhibitors of influenza virus. I. Virus adsorption, entry and uncoating. // Drug Discov.Today.-1996.- V.1.-P.316-324.

135. Mendel D.B., Sidwell R.W. Influenza virus resistance to neuraminidase inhibitors. // Drug Resist. Updates.- 1998.- V.l.-P. 184-189.

136. Mills J. Management of respiratory syncytial virus infection. In Antiviral Chemotherapy. Edited by Mills J., Volberding P. &Coreyet L. New York: Plenum Press.-1996. P. 163-174.

137. The MIST Study Group. Randomized trial of effecacy and safety of inhaled zanamivir in treatment of influenza A and В virus infection. // Lancet.- 1998.-V.352.-P. 1877-1881.

138. Monto A.S. Guidelines for the Clinical Use of Antivirals. In book Textbook of Influenza, K.G.Nicholson, R.G.Webster, A.J.Hay , Blackwell Science UK 1998 .-P. 506-517.

139. Monto A.S., Fleming D.M., Henry D Efficacy and safety of neuraminidase inhibitor zanamivir in the treatment of influenza A and В infections. //J.Infect Diseases.- 1999 .- V.180.-P. 254-261.

140. Morris J. Human Immunodefiency virus (HIV) use lipid molecules for many of its processes including: lateral assemblies necessary for entry, avoidance of immune eradication, and budding from membrane rafts. // J.of Mol.Medicine.- 2004.-V.5.-P.11-14.

141. Mosse A.G., Rueckert R.R. Capsid-binding agents. In book Antiviral drug resistance. Edited by Douglas D.Richman. John Wiley & Sons Ltd.- 1996.-P.13-39.

142. Murphy K.R., Eivindson A., Paukens K., Stein W.J., Pellier G., Watts R. Efficacy and safety inhaled zanamivir for treatment of influenza in patients withasthma or chronic obstructive pulmonary disease. // Clin. Drug Invest.- 2000.-V. 20.- P. 337-349.

143. Nakanawa Y., Oda K., Nakada S. The PB1 subunit alone can catalyze cRNA synthesis, and the PA subunit in addition to the PB1 subunit in required for viral RNA synthesis is replication of the influenza virus genome. // J.Virol.-1996.-V.70.-P.6390-6394.

144. Nguyen Van-Tam J. Epidemiology of Influenza. Textbook of Influenza:, K.Nicholson, R.Webster, A.Hay , Blackwell Science UK.- 1998.-P. 181-206.

145. Nicholson K.G. Human Influenza. Textbook of Influenza, K.G.Nicholson, * R.G.Webster, A.J.Hay , Blackwell Science UK.- 1998 .-P. 219-266.

146. Nikolaeva I.S., Guskova T.A. Arbidol-a new antiviral drug . 1993 18 International Congress of Chemotherapy , Stockholm, Sweden.- Abs.190.

147. Nikolaeva I.S., Guskova T.A., Peters V.V., Padeyskaya E.N. Interferon-inducing activity of arbidol, a new antiviral drug. 4-BICON, Prague,i

148. Chechoslovakia, 1992.-Abs.155.

149. Nikolaeva I.S., Peters V.V., Padeyskaya E.N. Arbidol, a new antiviral drug possessing an immunostimulating activity 8-th Mediterranean Congress of Chemotherapy , Athens, Greece, 1992.- Abs.336.

150. Neumann G., Hughes M.T. Kawaoka Y. Influenza A virus NS2 protein mediates vRNA nuclear export through NES-independent interaction with hCRMl. // EMBO J.-2000.-V.19.-P.6751-6758.

151. Ohmit S.E., Arden N.H., Monto A.S. Effectiveness of inactivated influenza vaccine among nursing home residents during an influenza type A (H3N2) epidemic. //J. Am.Geratr.Soc.- 1999.- V.47.-P. 165-171.

152. Oker-Blom N., Hovi Т., Cerinikki P., Palosone Т., Petterson R., Suni J. Protection in man from natural infection with influenza A2 Hong Kong virus by amantadine- a controlled field trial. // British Medical Journal.- 1970. V. 3.-P. 676-678.

153. O'Neill R.F., Talon J., Palese P. The influenza virus NEP (NS2 protein) mediates the nuclear export of viral ribonucleoproteins. // EMBO J.-1998.-V. 17.-P.2888-2296.

154. Ott S., Wunderli-Allenspach H. Effect of the virostatic norakin (triperidin) on influenza virus activities. // Antiviral Research. -1994.- V. 24.-P.37-42.

155. Palese P., Shulman J.L. Inhibitors of viral neuraminidase as potential antiviral drugs . In : Chemoprophylaxis and virus infections of the respiratory tract. Edited by J.S.Oxford Cleveland:CRC Press.- 1977.-V. l.-P. 189-205.

156. Peiris J., Lai S„ Poon L., Guan Y., Yam I., Lim W., Nicholls J:, Yee W. Yan W., Cheung M., Cheng v., Chan K., Tsang D., Yung,R., Yuen K. Coronavirus as a possible cause of severe acute respiratory syndrome.//Lancet.-2003 .-V.3 61 .-P. 1767-1772.

157. Peiris M., Yuen K.Y., Leung C.W., Chan K.H., Ip P.L.S., Lai R.W.M., Orr W.K., Shortridge K.F. Human infection with influenza H9N2. // Lancet.-1999.-V.354.-P. 916-917.

158. Pinto, L.H., Holsinger, L.J., Lamb, R.A. Influenza virus M2 protein has ion channel activity. // Cell.- 1992.- V.69.- P.517-528.

159. Powers D.C., Belshe R. Effect of age on cytotoxic T lymphocyte memory as well as serum and local antibody responses elicited by inactivated influenza virus vaccine. // J. Infect. Dis.- 1993,- V. 167.-P. 584-592.

160. Prevention and control of influenza : recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP). // MMRW Morb Mortal Wkly Rep.- 1999- V. 48 (RR-4)-P. 1-28.

161. Prosch S.H., Heider H., Schroder C., Kruger D.H. Mutations in the hemagglutinin gene associated with influenza virus resistance to norakin. // Arch.Virol. -1988.- V. 102.-P. 125-129.

162. Qian X.Y. Alonso C.F., Krug R.M. Two functional domains of the influenza virus NS1 protein are required for regulation of nuclear export of mRNA. // J.Virol. -1994.-V.68.-P.2433-2441.

163. Qiu Y., Krug R.M. The influenza virus NS1 protein is a poly(A)-binding protein that inhibits nuclear export of mRNAs containing poly A. // J.Virol.-1994.-V.68.-P.2425-2432.

164. Raznikov V., Gazumyan A., Nikitenko A., Ellestad G., Krishnamurty G. RFI-641 inhibits entry of respiratory syncytial virus via interactions with fusion protein. // Chem.Biol.-2001.- V.8.-P.645-659.

165. Robertson J.S., Schubert M., Lazzarini R.A // Polyadenylation sites for influenza virus mRNA. //J.Virol.-1981.-V.38.-P.157-163.

166. Rosen HR, Gretch DR. Hepatitis С virus: current understanding and prospects for future therapies. // Mol. Med. Today.- 1999.-V.5.- No.9.-P.393-399.

167. Ruben F.L. Now and future influenza vaccines. // Inf .Dis.Clin. North Am.-1990.-V.4.-P. 1-10.

168. Schulze I.T. The structure of influenza virus. II.A model based on the morphology and composition of sub viral particles. // Virology.-1972.-V.47.-P.181-196.

169. Shapiro G.I., Krug R.M. Influenza virus RNA replication in vitro: synthesis 1 of viral template RNAs and virion RNAs in the absence of an added primer. //

170. J.Virol.-1988.-V.62.-P.2285-2290.

171. Shigeta S. Recent progress in anti-influenza chemotherapy. // Drugs R&D.-1998.-V.2.-153-164.

172. Sieczkarski S., Whittaker G. Viral Entry. // CTMI.Springer-Verlag.-2004.-* V.285.-P.1-23.

173. Skehel J.J., Hay A.J. Nucleotide sequences at 5/termini of influenza virus RNAs and their transcripts.//Nucl.Acids Res. -1978.-V.5.- P.1207-1219.

174. Skehel J.J., Waterfields M.D. Studies on primary structure of the influenza virus hemagglutinin.// Proc.Natl.Acad.Sci. USA.- 1975.-V.72.-P.93-97.

175. Smee D.F., Sidwell R.W. Peramivir 9 BCX-1812, RWJ-270201): potential new therapy for influenza. // Expert Opinion on Investigational Drugs.- 2002.-V.l 1.-P.859-869.

176. Smith A.E., Helenius A. How viruses enter animal cells. // Science.-2004.-V.3.-P. 237-241.

177. Smith G.L., Hay A.J. Replication of the influenza virus genome. // Virology.-1982.-V. 118.-P.96-108.

178. Smith D.W., Frankel L.R., Mathers L.H. A controlled trial of aerosolized ribavirin in infants receiving mechanical ventilation for severe respiratory syncytial virus infection. //N.Engl.J.Med.- 1991.-V. 325.-P.24-29.

179. Smorodintsev A.A., Zlydnikov D.M., Kiseleva A.M., Romanov J.A., Kazantzev A.P., Rumovsky V.I. Evaluation of amantadine in artificially induced A2 and В influenza. // Journal of the American Medical Association .-1970.-V.213.-P. 1448-1454.

180. Staschke K.A., Hatch S.D., Tang J.C., Hornback W.J., Munroe J.E., Colacino J.M., Muesing M.A. Inhibition of influenza virus hemagglutinin mediated fusion by a compound related to a podocarpic acid. // Virology.-1998.-V.248.-P.264-274.

181. Stebaeva, L.F., Padeyskaya, E.N., Golovanova, E.A. Effect of arbidol on the development of the influenzal virus the cellular immunity factor. 18th International Congress of Chemotherapy , Stockholm, Sweden.- 1993.-Abs.235.г

182. Stebaeva L.F., Guskova t.A., Nikolaeva I.S., Golovanova E.A. A new antiviral chemiotherapeutic arbidol. Electron microscopy data. 6-th Congress for Infectious Diseases, Prague, Chech.Republic.-1994.- Abs.81034.

183. Stegmann Т., Morselt W. , Scholma J., Wilschut J. Fusion of influenza virus in an intracellular acidic compartment measured by fluorescence dequenching. // Biochim.Biophys.Acta.- 1987.- V. 904.- P. 165-170.

184. Steinhauer D.A., Sauter N.K., Skehel J.J., Wiley D.C. Receptor binding and cell entry by influenza viruses. // Semin.Virol.- 1992.-V.3.-P.91-100.

185. Stein, D.S., Creticos, C.M., Jackson G.G., et al. Oral ribavirin treatment ofinfluenza A and B. // Antimicrob.Agents Chemother.- 1987.- V.31.-1285-1287.

186. Stieneke-Grober A., Vey M., Angliker H., Shaw E., Thomas G., Roberts C., Klenk H.D., Garten W. Influenza virus hemagglutinin with multibasic cleavage site is activated by furin, subtilisin-like endoprotease. // EMBO J.-1992.-V.11.-P.2407-2414.

187. Surgue R.J., Hay A.J. Structural characteristics of the M2 protein of influenza A viruses: evidence that it forms a tetrameric channel. // Virology.-1991 .-V. 180.-P.617-624.

188. Treanor J.J., Hayden F.G., Vrooman P.S., Barbarash R., Bettis R., Riff D. Efficacy and safety of the oral neuraminidase inhibitor oseltamivir in treating acute influenza. //JAMA.- 2000.- V.283.-P. 1016-1024.

189. Treanor J., Falsey A. Respiratory viral infections in the elderly. // Antiviral Research.-1999.-V.44.-P.79-102.t>

190. Tominack R.L., Willis R.J., Gustavson L.E., Hayden F.G. Multiple-dose pharmacokinetics of rimantadine in elderly adults. // Antimicrobial Agents and Chemotherapy.- 1988.-V. 32.-P.1813-1819.

191. Togo Y., Hornich R.B., Dawkins A.T Double blind studies designed to assess prophylactic efficacy of amantadine hydrochloride against A2/Rockville/l/65 strain. // Journal of the American Medical Association.-1968.-V.203 .-P. 1089-1094.

192. Van Voris L.P., Betts R.F., Hayden F.G., Christmas W.A., Douglas R.G. Successful treatment of naturally occurring influenza A/USSR/77 H1N1.// Journal of the American Medical Association.- 1981.-V. 245.-P. 1128-1131.

193. Watowich S.J., Skehel J.J., Wiley D.C. Crystal structures of influenza virus hemagglutinin in complex with high-affinity receptor analogs. // Structure.-1994.-V.2.-P. 337-340.

194. Webster R.G., Bean W.J. Evolution and Ecology of Influenza Viruses: Interspecies Transmission. In book Textbook of Influenza, K.G.Nicholson, R.G.Webster, A.J.Hay , Blackwell Science UK.- 1998.-P. 109-119.

195. Webby R.J., Webster R.G. Emergence of influenza A viruses. // Phil.Trans.Roy.Soc.Lond.-2001 .-V.2.-P. 1818-1828.

196. Weekly epidemical record. March, 2003.- 78th.-P. 73-80.h

197. Wharton S.A., Skehel J.J. , Wiley D.C. Studies of influenza haemagglutinin-mediated membrane fusion. // Virology.- 1986.- V. 149.- P.22-35.

198. Weis W., Brown J.H., Gusack S„ Paulson J.C., Skehel J.J., Wiley D.C. Structure of the influenza virus hemaggultinin complexed with its receptors sialic acid. //Nature.-1988.-V.333.-P.426-431.

199. Whittaker G., Skehel J.J. The structure and function of the hemagglutinin membrane glucoprotein of influenza virus. // Annu.rev.Biochem.-1987.-V.56.-365-394.t.

200. Wilson I.A , Skehel J.J., Wiley D.C. Structure of the hemaggultinin membrane glycoprotein of influenza virus at ЗА resolution. // Nature.-1981.-V.289.-P.366-373.

201. Wingfield W.L., Pollak D., Grunert R.R. Therapeutic efficacy of amantadine HCI and rimantadine HCI in naturally occurring influenza A 2 respiratory illness in man. //New England Journal of Medicine.- 1969.-V. 281.-P. 579-584.

202. Yasuda J., Nakada S., Kato A., Toyoda Т., Ishihama A. Molecular assembly of influenza virus: association of the NS2 protein with virion matrix. // Virology.-1993 .-V. 196.-P.249-255,

203. Zambon M., Hayden F. Position statement: global neuraminidase inhibitor susceptibility network. // Antiviral Research.- 2001.-V. 49.- №. 3.-P. 147-156.

204. Zlydnikov D.M., Kubar O.I., Kovaleva T.P., Kamforin L.E. Study of rimantadine in the USSR: a review of the literature. (Review). //Rev. Infect. Dis.- 1981.-V. 3.- P.408-421.

205. Zvonaryov A., Ghendon Yu. Influence of membrane protein on influenza A virus virion transcriptase activity in vitro and its susceptibility to rimantadine. // J. Virology.-1980.-V.33.-P.583-586.