Изучение информативности диагностики онкологических заболеваний определением антител к рецептору α-фотопротеина и роли рецептора α-фотопротеина в противоопухолевом иммунитете тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Астахов, Дмитрий Владимирович

• Астахов, Дмитрий Владимирович
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Астахов, Дмитрий Владимирович

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. а-Фетопротеин

1.1.1. Обнаружение АФП

1.1.2. Свойства и структура АФП,

1.1.3. Связывающие свойства АФП и его транспортная роль

1.1.4. Регуляторное влияние на иммунитет

1.1.5. Влияние АФП на рост клеток

1.1.6. Регуляция генной экспрессии АФП

1.2. АФПР, моноклональные антитела к АФПР

1.2.1. Доказательства существования АФПР

1.2.2. Очистка АФПР

1.2.3. Свойства АФПР

1.2.4. АФПР в сыворотке крови

1.2.5. Антитела к АФПР в сыворотке крови

1.2.6. Моноклональные антитела против АФПР

1.3. Использование АФП, АФПР и МАт к АФПР в медицине

1.3.1. Использование АФП в качестве опухолевого

маркёра

1.3.2. Использование АФП для локализации опухолей

1.3.3. Использование АФП в качестве белка-вектора

при лечении злокачественных опухолей

1.3.4. Использование МАт в гистологических исследованиях

1.3.5. Ингибирование пролиферации злокачественных

клеток МАт к АФПР

1.3.6. Возможность использования АФПР для иммунизации онкологических больных

1.4. Некоторые направления в иммунопрофилактике и

иммунотерапии опухолевых заболеваний

1.4.1. Иммунные факторы и механизмы, вызывающие деструкцию опухолей. Нарушение в иммунной

системе при опухолевых заболеваниях

1.4.2. Неспецифическая иммунотерапия

1.4.2.1. Препараты растительного и животного происхождения

1.4.2.2. Эндотоксины бактерий и препараты, разработанные

на их основе

1.4.2.3. Синтетические фармакологические препараты

1.4.2.4. Фототерапия

1.4.2.5. Цитокины

1.4.3. Специфическая иммунотерапия

1.4.3.1. Пассивная специфическая иммунотерапия

1.4.3.2. Адоптивная специфическая иммунотерапия

1.4.3.3. Активная иммунотерапия аутологичными иммуномодуляторами

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Иммуноферментный анализ

2.2. Определение цитотоксической активности сывороток крови онкологических больных и больных

ангиитами кожи

2.3. Очистка АФПР

2.4. Электрофорез в ПААГ

2.5. Определение концентрации белка (АФПР)

2.6. Иммунизация мышей АФПР

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Определение уровня АФПР и АТ к АФПР в сыворотке крови больных различными заболеваниями

3.1.1. Определение уровня АФПР в сыворотке

крови онкологических больных

3.1.2. Определение уровня АТ к АФПР в сыворотке

крови здоровых доноров

3.1.3. Определение уровня АТ к АФПР в сыворотке

крови больных опухолевыми заболеваниями

3.1.4. Определение уровня АТ к АФПР в сыворотке крови больных ангиитами кожи и

некоторыми другими заболеваниями

3.2. Исследование цитотоксической активности некоторых сывороток крови онкологических

больных и больных ангиитами кожи

3.3. Изучение влияния иммунизации животных

АФПР и фотоиммунизации на рост опухоли

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АТ - антитела

АТЗКОЦ - антителозависимая клеточно-опосредованная

цитотоксичность

АФП - а-фетопротеин

АФПР - рецептор а-фетопротеина

ВЭЖМ - висцеральная энтодерма желточного мешка

ГКГС - главный комплекс гистосовместимости

ГЦР - гепатоцеллюлярный рак

ДР - доксорубицин

ИЛ - интерлейкин

ИФА - иммуноферментный анализ

Кон А - конканавалин А

ЛАК - лимфокинактивированные клетки

МАт - моноклональные антитела

МТТ - бромид 3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилгетразолия

ОФД - ортофенилендиамин

Г1ААГ - полиакриламидный гель

ПНЖК - полиненасыщенные жирные кислоты

СА - сывороточный альбумин

СПЖ - средняя продолжительность жизни

ТБ - тератобластома

ТЕМЕД - тетраметилэтилендиамин

ТРФр - трансформирующий ростовой фактор Р

УСПЖ - увеличение средней продолжительности жизни

ФИТЦ - фенилизотиоцианат

ФСБ - фосфатно-солевой буферный раствор

ФСБТ - фосфатно-солевой буферный раствор с 0.02% Т\уееп

ФЦ (Со) - фталоцианин кобальта

ЦТА - цитотоксическая активность

чАФП - человеческий а-фетопротеин

Бв-Ш - додецилсульфат натрия

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение информативности диагностики онкологических заболеваний определением антител к рецептору α-фотопротеина и роли рецептора α-фотопротеина в противоопухолевом иммунитете»

ВВЕДЕНИЕ

В настоящее время онкологическим заболеваниям принадлежит второе место среди заболеваний, приводящих к летальному исходу, а успешность лечения связана с возможностями ранней диагностики и наблюдением за успешностью лечения для безрецидивного, в течение 5-10 и более лет, течения онкологического заболевания. В связи с этим, большое практическое значение для ранней диагностики онкологических заболеваний приобрел поиск новых опухолевых маркеров.

"Идеальным маркером" считается такой онкомаркер, который обладает высокой специфичностью и чувствительностью в отношении определенного вида опухоли, а его содержание в биологических жидкостях отражает изменения, происходящие в процессе лечения опухоли.

Современные биохимические и иммунологические методы позволяют выявить новообразование, когда число опухолевых клеток достигает Ю9-Ю10, сама опухоль весит ~ 1г, минимальный уровень маркера - несколько фемтомолей (10"15) на 1.0 мл сыворотки крови [3,9]. Клинический диагноз ставится при минимальном размере опухоли 10-100 г. Однако ни один из известных онкомаркеров не является идеальным, большинство из них не отвечает всем предъявляемым к ним требованиям. Поэтому, оправдан как поиск новых онкомаркеров, так и разработка оптимального сочетания при применении уже известных онкомаркеров.

Первым веществом, которое можно было назвать онкомаркёром, явился а-фетопротеин (АФП) - онкофетальный белок, определение

которого в сыворотке крови информативно для диагностики гепатоцеллюлярного рака, тератобластом и некоторых патологий внутриутробного развития [1,19]. Дальнейшие работы в области химии этого бежа, регуляции его биосинтеза и клинического использования определения его содержания в сыворотке крови привели к достаточно полной картине в этих областях [1,29,47]. Однако, физиологическая роль АФП, за исключением транспортной - участие в транспорте полиненасыщенных жирных кислот и других лигандов, остается не вполне ясной. Вероятно, это полифункциональный белок [47].

Особенный интерес вызывают обнаруженное в последнее время влияние АФП на рост клеток [39,45] и его иммуносупрессорное (модуляторное) влияние на иммунитет [44,59]. Вероятно, в реализации этих эффектов определенная роль принадлежит рецептору АФП (АФПР) [91]. АФПР, обнаруженный относительно недавно (1984г) [104], изучен значительно хуже, как в отношении структуры, так и в отношении его физиологической роли и возможностей клинического использования. Однако выявлена его экспрессия дифференцирующимися и неопластическими клетками широкого ряда опухолей [41,49,101].

Обнаружены антитела к АФПР в сыворотке крови [83]. Эти данные позволяют поставить вопросы о возможном применении определения рецептора и антител к нему в диагностических целях. Также вероятно участие рецептора в формировании противоопухолевого иммунитета, как это показано для некоторых специфических опухолевых антигенов [71].

Эти представления позволили сформулировать цели настоящей работы:

1) изучить возможность использования определения уровня рецептора а-фетопротеина (АФПР) и антител (АТ) к АФПР в качестве опухолевых маркеров.

2) определить возможность усиления иммунной реакции на прививаемую злокачественную опухоль после предварительной вакцинации животного раствором онкофетального антигена -АФПР.

При этом были поставлены следующие задачи исследования:

1) оценить диагностическую значимость определения АФПР в сыворотке крови онкологических больных;

2) определить уровни АТ к АФПР у здоровых доноров, у больных с ангиитами кожи и другими неопухолевыми заболеваниями;

3) оценить диагностическую значимость определения уровня АТ к АФПР при онкологических заболеваниях;

4) исследовать сыворотки крови онкологических больных и больных с ангиитами кожи, с высокими титрами антител, на цитотоксическую активность;

5) оценить возможность усиления противоопухолевого иммунитета в эксперименте по иммунизации мышей линии ЭВА/2 АФПР, выделенным из ткани легкого человека.

ГЛАВА1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. а-Фетопротеин.

1.1.1. Обнаружение АФП.

АФП - доминирующий белок эмбриональной сыворотки крови млекопитающих, впервые обнаруженный в 1957 году. Уровень АФП снижается до следовых количеств в крови взрослых особей, но вновь поднимается в случае развития гепатоцеллюлярного рака (ГЦР) или тератобластом (ТБ) яичка или яичника [1].

Уровень АФП также повышен по сравнению с нормой у беременных женщин, но примерно на порядок меньше, чем при опухолях. Определение уровня АФП в сыворотке крови беременных женщин используется для диагностики некоторых врождённых аномалий плода. Его уровень повышается при врождённом дефекте нервной трубки плода и уменьшается при болезни Дауна [1].

При нормальном развитии у млекопитающих АФП синтезируется главным образом висцеральной энтодермой желточного мешка (ВЭЖМ) и фетальной печенью. Иммуноцитохимически было показано присутствие АФП во многих эмбриональных тканях, отличных от фетальной печени и ВЭЖМ, что связано с поступлением этого бежа из экстрацеллюлярного пространства [94,103].

Продукция АФП при гепатоцеллюлярном раке была впервые описана на экспериментальных моделях Г.И.Абелевым [19], а затем Ю.С.Татариновым у человека [16]. Г.И.Абелев первым предложил использование АФП в качестве опухолевого маркёра [20]. Обнаружение АФП в сыворотке крови онкологических больных способствовало проведению исследований этого бежа.

1.1.2. Свойства и структура АФП.

АФП выделен в чистом виде и охарактеризован. Относительная молекулярная масса АФП колеблется от 67 до 74 кДа, что может быть связано как с различными степенями гликозилирования этого бежа, так и с различиями в методах определения его относительной молекулярной массы. АФП различной видовой принадлежности представляет собой одноцепочечный белок, состоящий примерно из 590 аминокислотных остатков и содержащий углеводную часть, составляющую около 4% от его относительной молекулярной массы.

Показано сходство эмбрионального бежа с бежом, выделенным из опухолевых тканей [1,29].

Для АФП различных видов отмечена большая гомологичность последовательностей аминокислот [49].

Данные анализа последовательностей и структурной гомологичности между мРНК АФП и сывороточного альбумина (СА) показывают, что АФП принадлежит к семейству бежов, филогенетически наиболее тесно связанных с СА. Так первичная, вторичная и третичная структуры АФП сходны с 3-х доменной моделью, предложенной для С А [49,52].

Для АФП характерна микрогетерогенность. Электрофорез в полиакриламидном геле (ПААГ) в неденатурирующих условиях выделяет две чётко разделяемые подфракции АФП, иммунологически идентичные [20]. С помощью изоэлектрофокусирования выявляется 67 по-разному заряженных форм бежа. Электрическая гетерогенность в некоторых случаях устраняется после обработки АФП нейраминидазой. Вероятно, микрогетерогенность АФП играет важную роль в функциях АФП. АФП, синтезируемый в фетальной печени и ГЦР, отличается по реакции с конканавалином А (КонА) от АФП, продуцируемого ВЭЖМ. АФП сыворотки крови при хроническом гепатите отличается от АФП, продуцируемого ГЦР, по реактивности с лектином из Lens Culinaris. Вероятно, вклад в микрогетерогенность вносят углеводный компонент АФП и низкомолекулярные лиганды, главным образом, полиненасыщенные жирные кислоты (ПНЖК), прочно связывающиеся с АФП [1,25,29].

Вариабельность углеводных компонентов АФП, полученных из различных тканей, очевидно, не затрагивает структуру самого бежа. При обработке трипсином АФП человека, полученного от плода или из клеток гепатомы, и анализе полученных пептидов оказалось, что пептидные карты идентичны [29].

В настоящее время методы аффинного электрофореза и аффинной хроматографии с применением лектинов находят всё большее применение для дифференциальной диагностики первичных гепатом, опухолей желточного мешка, метастазах в печень при опухолях желудка, а также других новообразованиях и опухолях из герминативных клеток. АФП, происходящие из клеток гепатомы или желточного мешка, могут быть также определены с помощью моноклональных антител (МАт), которые способны отличать разные

олигосахариды, принадлежащие этим бежам из разных источников. Антитела с такой специфичностью полезны для диагностики типов опухолей на ранних стадиях определённых неопластических процессов [1,29].

Гетерогенный характер имеет также 1М-концевой участок молекулы. Для этой области были отмечены М-концевые остатки -серин, треонин и гистидин [29].

Как видно из табл.1 [47], человеческий АФП (чАФП) имеет большое сходство (идентичность структуры или гомологию) с некоторыми бежами не только семейства альбуминоидов. Отдельные домены имеют свою специфичность и гомологичные участки с очень многими бежами (табл. 2) [47]

Интересно, что белки, выполняющие столь различные функции -обладают такой значительной структурной гомологией, на основании чего было сделано предположение, что АФП является полифункциональным бежом, модификатором биологического ответа, подобно цитокинам [47].

1.1.3. Связывающие свойства АФП и его транспортная роль.

Подобно СА, АФП обнаруживает относительно сильную аффинность к самым разнообразным лигандам [47,58].

Было установлено, что АФП способен связываться с эстрогенами, что особенно выражено у грызунов [65,97]. У новорожденных комплекс АФП-эстроген лишает эстрогенчувствительные ткани, такие как матка, чувствительности к свободному эстрогену [65,89,97].

Важная особенность АФП - способность связываться с жирными кислотами. Отмечено высокое сродство АФП к ПНЖК, из которых основная часть приходится на арахидоновую (С20:4) (предшественнику простагландинов и лейкотриенов) и декозагексеновую (С22:6) кислоты [32,100].

Показана более высокая аффинность человеческого АФП к полиненасыщенным жирным кислотам, по сравнению с СА (разница ~ 5 порядков). В то же время насыщенные жирные кислоты значительно прочнее связываются с СА, нежели с АФП [1,63].

Поскольку ПНЖК не синтезируются в организме плода (и матери) и поступают в организм с пищей, можно предположить, что АФП осуществляет транспорт ПНЖК из кровотока матери в кровоток плода. Связывание ПНЖК может осуществляться в плаценте.

АФП из фетальных тканей человека характеризовался относительно высоким содержанием полиненасыщенных жирных кислот, тогда как для гепатомных материалов было характерно низкое их содержание. Аналогичная картина наблюдается и для АФП мышей и крыс [1,63].

У АФП человека и крыс была обнаружена высокая аффинность к билирубину вследствие наличия участка связывания для этого соединения [47].

Билирубин, по-видимому, до некоторой степени угнетает связывание АФП с арахидоновой кислотой, очевидно, в результате образования

Таблица 1.

Последовательности аминокислот а-фетопротеина человека (чАФП) по сравнению с некоторыми другими белками человека [47].

Полная аминокислотная последовательность (590 аминокислот)

чАФП по сравнению с другими белками человека

Белок Протяжение Идентичность (%) Подобие(%)

аминокислот

Альбумин 1-590 39.96 59.34

человека 42.28

Глутатаон 1-513 24.19 42.27

пероксидаза 38.00

Белок 1-3000 19.43 40.43

ретинобластомы

Витамин О - 1-536 19.00

связывающий

Белок

Лейцин 1-8305 16.99

аминопептцдаза

Сравнение доменов чАФП с доменами других бежов человека

Белок Область 1 Область 2 Область 3

Название / тип Идентичность / Идентичность / Идентичность /

подобие(%) подобие(%) подобие(%)

Альбумин 32/44 41/45 47/41

Глутатаон 24/49 21/47 28/48

пероксидаза 22/55 15/48 19/44 *

Белок 20/49 22/46 24/45

ретинобластомы 18/44 17/36 16/33

Витамин Б -

связывающий

белок

Миелопероксидаза

^Относится к 103 аминокислотным остаткам на С-конце.

Таблица 2

Белки, в структуре которых найдены аминокислотные последовательности, гомологичные (или идентичные) участкам доменов АФП. [47]

чАФП домен 1 ЧАФП домен 2 чАФП домен 3

1. Фибрин-связывающий белок Сериновые протеазы Сериновые протеазы

2. Ингибиторы протеазы Ингибиторы протеазы Ингибиторы протеазы

3. - Белки внеклеточного -

матрикса

4. - - Белки клеточной

адгезии

5. Микрофибриллы, ответственные Филаменты, связанные с -

за сокращение филаментов актином

б. Промежуточные филаменты -

7. Факторы транскрипции Факторы транскрипции -

8. Белки - супрессоры опухоли - -

9. Гомодоменные белки Гомодоменные белки Гомодоменные белки

10. Белки, связывающие жирные Белки, связывающие Белки, связывающие

кислоты жирные кислоты жирные кислоты

И. Белки, связывающие билирубин Белки, связывающие -

билирубин

12. - - Белки, связывающие

ретиноады

13. - - Белки, связывающие

стероиды

14. - - Белки, связывающие

ворфарин

15. Белки, связывающие тяжелые Белки, связывающие -

металлы тяжелые металлы

16. - Белки, связывающие Белки, связывающие

лекарства лекарства

17. - Белки, связывающие -

актин

18. ПСГС белки (Класс П) ГКГС белки (Класс \ П) -

19. Белки - рецепторы Т-клеток Белки - рецепторы Т- Белки - рецепторы Т-

клеток клеток

20. 1§ рецептор - рецептор

21. - Тяжелые цепи Тяжелые цепи

22. Ростовые факторы - Белки, подавляющие

рост

23. Лектин-связывающие белки Лектин-связывающие -

белки

24. - - Рецептор ацетилхолина

25. Са2+-связывающие белки Белки, связывающие Са2+ Белки, связывающие

Са2+

комплекса на участке, расположенном в непосредственной близости от места, ответственного за связывание полиеновых жирных кислот [47].

Ретиноиды непосредственно конкурируют с жирными кислотами за связывание с АФП. Наличие в АФП 3-х участков связывания для производных ретинола и арахидоновой кислоты, билирубина и эстрогена, видимо, может характеризовать поведение 3-х доменов этого бежа [29].

Для АФП обнаружена способность связывать фенилбутазон и, в меньшей степени, ворфарин [1,29].

Также была установлена способность АФП человека связывать медь и никель, что может свидетельствовать в пользу того, что этот белок начинается с последовательности "треонин - лейцин - гистидин" [29].

1.1.4. Регуляторное влияние на иммунитет.

Многие исследователи проводили изучение влияния АФП на различные типы иммунных реакций [55,81].

Если АФП ингибирует нормальные процессы узнавания антигенов у плода, тем самым предотвращая образование антител, то это могло бы объяснить отсутствие иммунитета у плода к чужеродным веществам и выработку толерантности к собственным антигенам [36].

Первым и непосредственным подходом к этой проблеме следует считать работу, в которой описывается, что сыворотка крыс с гепатомой Морриса 7777 могла предотвращать стимуляцию

фитогемагглютинином культуры лимфоцитов крысы [29]. В одном из исследований, использующем АФП, выделенный из амниотической жидкости мышей, показано, что АФП влияет на супрессию определённых, зависимых от Т-клеток функций. Такое влияние может осуществляться через индукцию Т-клеток-супрессоров, с одновременной возможностью угнетения и Т-клеток-хелперов. При этом также была отмечена супрессия образования клеток-киллеров к опухолевым клеткам [29].

Позже было показано, что АФП индуцирует супрессию цитотоксичности, связанной с деятельностью Т-клеток, а в другой работе из этой же лаборатории было установлено, что мышиный белок угнетает первичные и вторичные реакции смешанных лимфоцитов у тех же животных [47]. Лимфоциты, подвергнутые реакции "трансплантат против хозяина", так же, как было отмечено, связывались с АФП [47].

Результаты этих исследований показывают, что АФП может действовать в качестве важного фактора, регулирующего иммунитет in-vivo, а также, что влияние АФП осуществляется через Т-клетки.

Влияние АФП на иммунитет нашло подтверждение в более поздних экспериментальных и клинических работах [26,27,33,36,68,81].

Одним из ключевых моментов является то, что под влиянием АФП подавляется экспрессия 1-а бежа системы гистосовместимости (ГКГС). Этот белок участвует в презентации фрагментов антигена Т-хелперам, т.е. АФП подавляет начальный этап иммунного распознавания антигена. Контакт непроцессированного антигена с Т-клетками стимулирует образование Т-супрессоров. Таким образом подавляется специфический иммунитет, как гуморальный, так и

клеточный [44,55,66]. АФП также вовлечён в регуляцию продукции цитокинов, активирующих Т-хелперы; АФП способен подавлять продукцию фактора некроза опухоли а на 58% и интерлейкина-1 р на 67%, вероятно, по механизму, зависимому от простагландинов, повышая продукцию простагландина Е2 [109] (нелишне вспомнить, что простагландины синтезируются из полиненасыщенных жирных кислот, транспортируемых АФП), т.е. гуморально также подавляет активацию Т-хелперов. Таким образом, АФП вовлечён в иммунный ответ гуморального и клеточного типов, причём влияние его можно назвать иммуносупрессорным. С этим положением согласуются данные изучения АФП при различных аутоиммунных заболеваниях: отмечают ремиссии при таких заболеваниях у беременных женщин, в сыворотке крови которых повышено содержание АФП до 80 нг/мл, и при введении АФП. Этот феномен наблюдали при ревматоидном артрите, миастении, рассеянном склерозе, системной красной волчанке и др. [33,59,68,70].

1.1.5. Влияние А ФП на рост клеток

В последнее время накапливаются данные о влиянии АФП на рост клеток. АФП способен усиливать пролиферацию клеток даже в присутствии некоторых факторов роста (эпидермального, инсулиноподобного) [39,45,92].

1.1.6. Регуляция генной экспрессии АФП.

Во взрослых организмах АФП синтезируется в очень незначительных количествах, однако, его содержание может существенно увеличиваться при токсических повреждениях печени, циррозе и частично - гепатэктомии, а также при возникновении вышеупомянутых ГЦР и ТБ яичка и яичника. Правда, увеличение синтеза АФП наблюдается не у всех больных, перенесших частичную гепатэктомию. В онтогенезе синтез АФП индуцируется ретиноевой кислотой, клетки гепатомы крыс сохраняют способность к индукции синтеза АФП ретиноевой кислотой [108].

Повышение уровней АФП было обнаружено у некоторых пациентов с острым и хроническим гепатитами, а также при массивном некрозе печени [1].

Значительный интерес представляет собой механизм геномной репрессии синтеза АФП в гепатоцитах в процессе созревания печени, а также явление дерепрессии во взрослых гепатоцитах при регенерации или динамике их превращения в клетки гепатомы.

Тесно связанные гены АФП и СА составлены из 15 экзонов, содержащих около 2 тысяч нуклеотидов (тн), и 14 интронов длиной около 20 тн. Эти 2 гена, по-видимому, произошли от одного предшественника. Распределение экзонов и интронов сохранилось в процессе эволюции и сходно у АФП и СА. Гены как АФП, так и СА, в своих некодирующих участках содержат множество повторяющихся последовательностей. Фетальные гепатоциты осуществляют синтез АФП и альбумина в довольно больших количествах, в небольших количествах мРНК для этих двух белков обнаруживается в различных

других тканях, как плода, так и новорожденного, а также и у взрослых особей, что свидетельствует и о внепечёночном синтезе этих белков. Однако уровень экспрессии в таких тканях, как правило, не превышает 2% от уровня экспрессии в печени плода [69,79].

Ген АФП также экспрессируется в небольших количествах в печени взрослых, где отмечены мРНК 2,2, 1,7 и 1,5 тн для данного бежа.

Показано, что механизм ответа гена АФП на стероидные сигналы в нормальных клетках отличается от механизмов, действующих в опухолевых клетках. При этом было отмечено несходство ответов гена АФП на стероиды в различных злокачественных клетках. По всей видимости, существует некий механизм, благодаря которому ген АФП в нормальной клетке может реагировать на сигналы гормонов, а в некоторых опухолевых клетках проявляет свою устойчивость к таким сигналам [28,96].

Промоторный участок генов альбумина и АФП может связывать очень сходные, а возможно и идентичные, ядерные бежовые факторы т-уйго. Для промоторных участков генов АФП человека, мыши и крысы характерна выраженная консервативность последовательностей ДНК. Регуляторный элемент, которым в настоящее время определён А/г — 2, обеспечивающий тканевую специфичность, расположен на расстоянии от 53 до 85 тн - против хода транскрипции, от места её начала, в хромосоме 5 у мышей. Снижение транскрипции гена АФП у взрослых мышей до низкого базального уровня находится под контролем продукта, до недавнего времени называвшегося Яф1. Этот ген расположен в хромосоме 15 и, что весьма интересно, находится в непосредственной близости от протоонкогенного с - туе. Другой ген,

п/, контролирует продукцию субстанции, влияющей на способность к индукции гена АФП во время регенерационного процесса в печени.

Промоторный элемент обнаружен в гене лягушки, грызунов и человека. Имеются свидетельства, что ряд белков печени, связываясь с промоторной областью гена АФП, обеспечивают регуляцию его экспрессии, полная активация транскрипции, похоже, требует задействованности элементов, расположенных далеко от головного конца в направлении хода транскрипции. Эта область содержит последовательности, характеризующие тканевую специфичность и дифференцировку в печени.

5; фланговая область гена АФП мыши содержит специфические промоторные участки и 3 элемента, расположенных против хода транскрипции, поведение которых соответствует функции классических энхансеров (усилителей). Ген АФП мыши имеет 3 энхансера. Эти энхансеры имеют длину от 200 до 300 тн и располагаются на расстояниях - 2,5, 5,0 и 6,5 тн. Энхансеров АФП недостаточно для регуляции гена АФП мышей, и они не обладают этапной специфичностью.

Энхансеры АФП человека состоят из двух функциональных доменов, обозначенных А и В.

Управление геном АФП является результатом многочисленных взаимодействий регулирующих факторов, среди которых представлены как энхансеры, так и промоторы. Экспрессия гена АФП также, по-видимому, в некоторых случаях связана со степенью его метилирования, вероятно, по цитозиновым остаткам. В печени плода и в гепатомных клетках различных линий, очевидно, существует корреляция между степенью метилирования внутренних

последовательностей генов АФП и С А и их экспрессией [29]. Возможна независимая регуляция генов АФП и СА [107].

Таким образом, АФП представляет собой одноцепочечный 3-х-доменный белок, синтез которого происходит в эмбриональной печени и ВЭЖМ, но репрессирован во взрослом организме, однако возможна дерепрессия синтеза бежа. Регуляция синтеза осуществляется группой промоторов и энхансеров, независимо от регуляции синтеза родственно эволюционно СА. В физиологической роли АФП возможно отметить, по крайней мере, две важные функции: транспортную и иммуносупрессорную, возможно тесно связанные с ростом и дифференцировкой организма. Определение уровня АФП в сыворотке крови нашло применение в диагностике.

1.2.АФПР, монотональиые антитела к АФПР.

1.2.1. Доказательства существования АФПР.

Клетки разных видов тканей из всех зародышевых листков у эмбрионов млекопитающих, новорожденных и опухолевые клетки обладают способностью поглощать АФП, которая коррелирует со степенью клеточной дифференцировки [1,57]. Было показано, что интернализация АФП осуществляется с помощью рецептор -опосредованного механизма [49,86].

АФПР представлены в разнообразных опухолевых клетках в больших количествах, в то время как, например, раковоспецифические антигены - только в клетках опухолей определённого вида [102]. В нормальных и медленно пролиферирутощих клетках взрослого организма АФПР экспрессируются крайне незначительно [49].

Первое прямое доказательство существования АФПР было получено УШасатра е! а1. с использованием МСР-7 клеток карциномы молочной железы человека [104]. Результаты изучения кинетики взаимодействия АФПР с АФП, полученные на разных клеточных линиях, находятся в соответствии с моделью двух-трех сайтов рецептора, показывающих положительную кооперацию. Причем, сайтов с высоким сродством к АФП (Кс1 = 2.2-5.0 ' 10"11 М) на порядок и более меньше, чем сайтов с низким сродством (Кс1 = 2.2-8.6 ' 10"7М) [22,56,91,104].

Был сделан вывод о существовании 2-х-З-х типов участков связывания с различным сродством.

1.2.2: Очистка АФПР.

В работах Sarcione E.J., Villacampa M.J., Naval J. et. al. было показано, что АФП существует как комплекс с АФПР. Эти комплексы разделяли в присутствии высокой концентрации КС1 [56,78,79,104].

Из эмбриональной ткани человека и из биопсийного материала различных опухолей человека был выделен, очищен до близкого к гомогенному состоянию и частично охарактеризован АФПР [38,41,42,82].

Препараты АФПР, выделенные из эмбриональной и опухолевой ткани, весьма сходны по физико-химическим свойствам, таким как: сложная субъединичная структура, в поддержании которой принимают участие Б-Б связи; К<1 комплексов АФП-АФПР и др., а также по антигенным характеристикам [38]. Было также установлено, что АФПР из обоих источников содержат АФП-подобный домен [38,42,91]. АФПР способен связывать гетерологичный АФП [50].

1.2.3. Свойства АФПР.

Как уже отмечалось выше, АФПР получен в высокоочищенном виде [38,42,91]. Это гликопротеин, обладающий, подобно АФП некоторой гетерогенностью, с молекулярной массой от 62 до 67 кДа. АФПР так же, как и АФП, не исчезает полностью во взрослом организме [31,38,91,93].

Была показана высокая степень сродства СА к АФПР клеток мышиной Т-лимфомы, что может являться результатом структурного сходства между АФП и С А [48,75]. Это согласуется с проведенными ранее исследованиями, показывающими, что внутриклеточное поглощение АФП и СА некоторыми линиями неопластических клеток, а именно: крысиной рабдомиосаркомы [98], карциномы молочной железы человека [99] и ЕЬ-4 мышиной тимомы [56] протекает сходным образом, хотя некоторые особенности, связанные с поглощением АФП клеткой, наблюдались как в экспериментах со связыванием, так и с флюоресцеирующими производными АФП.

Важным является то обстоятельство, что нормальные зрелые копии клеток УАС-1 (тимоциты и Т-лимфоциты) почти (или совсем)

не экспрессируют АФПР. Нормальные зрелые, и опухолевые Т-лимфоциты могут поглощать значительное количество ФИТЦ (фенилизотиоцианат) - производных некоторых белков плазмы (а2-макроглобулина, 1§С), в то время, как только опухолевые Т-лимфоциты способны поглощать АФП [56].

В противоположность поведению АФПР было обнаружено, что специфические рецепторы других белков плазмы функционируют как в опухолевых, так и в нормальных клетках. Это наблюдается в случае трансферрина [34,37,40], а2-макроглобулина [64].

1.2.4. АФПР в сыворотке крови.

В одной из работ было сделано предположение, что АФПР или его фрагменты могут выделяться из раковых и зародышевых клеток во внеклеточную среду и, в конце концов, в кровоток [51]. Исходя из этого, было сделано заключение о возможности обнаружить увеличенное количество АФПР в сыворотке крови онкологических больных. Были получены сообщения, что АФПР может быть выделен из сыворотки пуповины человека [51] и обнаружен в жидкостях, таких как: плевральная жидкость больных с метастазами в лёгкие рака молочной железы [41,51,64] или из цитозолей рака молочной железы [23]. Однако в последующие годы больше не появилось ни одной работы подтверждающей эти результаты.

1.2.5. Антитела к АФПР в сыворотке крови.

У взрослых людей к АФПР обнаружены антитела [83]. Физиологическая значимость присутствия АТ к АФПР, также как и возможная диагностическая значимость определения их уровня при онкологических заболеваниях неизвестны.

1.2.6. Моноклональные антитела против АФПР.

Хотя АФПР может быть обнаружен с использованием меченого АФП, этот подход имеет несколько недостатков.

Прежде всего, рецептор нуждается в функциональной интактности. Например, замороженные опухолевые срезы и злокачественные клетки в суспензии связьюают меченый АФП, а парафиновые срезы - нет.

Во-вторых, молекулы рецептора, уже состоящие в комплексе с АФП, можно не обнаружить, так как меченый АФП имеет равное или меньшее сродство к рецептору, чем природный АФП, присутствующий в комплексе.

В-третьих, относительно низкие константы сродства означают, что отношение: сигнал/шум в анализах (пробах) связывания -относительно низкое.

В-четвёртых, выделение чистого АФП в больших количествах достаточно трудно в практическом плане [51].

Альтернативой является обнаружение АФПР с использованием МАт к АФПР. И.Мого были получены клоны, антитела которых ингибируют связывание АФП со злокачественными клетками и

связывание которых с АФПР ингибируется излишком АФП [51]. МАт к АФПР были, также, получены С.Е.Севериным, В.К.Сологубом и др. [85].

К.Мого е!а1. выделили рецептор из сыворотки пуповины человека и показали, что очищенные фракции реагировали как с МАт, так и с меченым АФП, т.е. МАт направлены против АФП-связываюшего сайта на рецепторе [51]. Гистохимические исследования, выполненные с одним из этих МАт (167Н.4) на парафиновых срезах, выявили рецептор в мышцах зародыша человека и карциномы молочной железы человека [51].

Достаточно интересно, что эти МАт также распознавали и собачьи раковые клетки [51]. Эта перекрёстная реактивность находится в согласии с предыдущими данными о том, что АФП из одного вида поглощается клетками из других видов [50,56].

С помощью МАт к АФПР стало возможным изучать наличие АФПР в клетках.

Рецепторопосредованный механизм поглощения АФП имеет отношение к неопластическим и нормально дифференцирующимся клеткам. Несмотря на отсутствие рецепторов АФП в нормальных Т-лимфоцитах, они могут появляться вновь при их митотической стимуляции [93].

1.3. Использование АФП, АФПР и МАТ к АФПР в медицине.

1.3.1. Использование А ФП в качестве опухолевого маркёра.

Как уже упоминалось выше, АФП используется в качестве опухолевого маркера при выявлении гепатоцеллюлярного рака и тератобластом яичка и яичников, врождённом дефекте нервной трубки плода и болезни Дауна [1].

1.3.2. Использование АФП для локализации опухолей.

Свойство большинства опухолевых клеток поглощать АФП с участием специфических АФПР открывает возможность для использования этого поглощения в медицине.

Показана специфичность накопления АФП опухолевыми клетками аденокарциномы молочной железы. Для этого мышам вводили 1251- АФП и 1-СА. Накопление АФП было значительно выше, чем СА, во всех опухолевых тканях. 50% радиоактивности

1 АС

накапливалось в опухоли в случае 1-АФП и значительно меньше в случае 1251-СА. По накоплению радиоактивности можно провести фотоскрининг локализации опухоли и её метастазов [101].

1.3.3. Использование АФП в качестве белка-вектора при

лечении злокачественных опухолей.

В связи с поглощением АФП клетками различных злокачественных опухолей, был проведен ряд работ по изучению

возможности использования этого бежа в лечении злокачественных опухолей в качестве белка-вектора для направленной доставки цитостатических препаратов в раковые клетки.[84]

Большим аргументом в пользу использования АФП в качестве бежа-вектора служит то, что он, являясь физиологическим компонентом сыворотки крови, не будет вызывать иммунного ответа и связанных с ним осложнений, тогда как при использовании с этой целью МАт высока вероятность развития нежелательных иммунных реакций.

Работы в этой области были основаны на способности АФП поглощаться раковыми клетками через специфические АФПР. С этой целью можно использовать в качестве лекарственных препаратов конъюгаты АФП с цитостатиками.

Так, в экспериментах in vitro, было показано, что при использовании конъюгата доксорубицина (ДР) с АФП происходило его накопление клетками карциномы яичника человека линии SKOV3. карциномы молочной железы человека линии MCF-7, меланомы мыши линии В16, Т-клеточной лимфомы человека линии СЕМ [14].

Цитотоксическая активность конъюгатов АФП-ДР по сравнению со свободным ДР по отношению к клеткам карциномы яичников человека линии SKVLB и карциномы молочной железы MCF-7 возрастала в 10 и 4 раза соответственно [14].

Необходимо также подчеркнуть, что при использовании в качестве цитотоксических агентов АФП-конъюгатов с ДР наблюдался заметный эффект даже в отношении линий опухолевых клеток, резистентных к данному антибиотику [53].

Также был получен конъюгат АФП и эсперамицина Aib, извлеченного из микроорганизмов штамма Actinimadura

verrucosospora. Цитотоксичность такого конъюгата в 3-4 т. раза превышала цитотоксичность АФП-конъюгатов с ДР [14].

Весьма высокая противоопухолевая активность конъюгатов АФП-ДР была также подтверждена авторами в экспериментах от vivo на модели перевиваемых опухолей мышей при внутривенном введении препарата [14]. Было проведено исследование in vivo противоопухолевой активности конъюгата дисульфохлорида кобальта фталоцианина (ФЦ (Со)) с АФП на мышах линии DBA/2 с привитыми солидными опухолями линии перевиваемого мышиного лейкоза Р388. Было показано, что цитотоксическая активность конъюгата АФП-ФЦ (Со) значительно более высока, чем свободного ФЦ (Со), в отношении этих опухолей [8].

Поглощение АФП клетками злокачественных тканей представляет, несомненно, очень перспективный

химиотерапевтический подход, способный обеспечить целенаправленный транспорт цитотоксических средств непосредственно к раковым клеткам.

1.3.4. Использование МАт в гистологических исследованиях.

Очень перспективным может быть использование МАт к АФПР (в качестве тканевого опухолевого маркера) в гистологических исследованиях. R.Moro, используя 167Н.4 МАт к АФПР и иммунофлюоресценцию, на парафиновых срезах обнаружили положительный результат в 6 из 6 исследованных карцином молочной железы, тогда как в 3 из 3 исследованных доброкачественных аденом результат был отрицательным [51].

Сходные результаты были обнаружены при использовании иммунопероксидазной технологии: положительные результаты были обнаружены в 21 из 23 карцином молочной железы, в 14 из 15 случаев рака лёгкого, в 8/8 карцином толстой кишки и приблизительно в 90% случаев разнообразных других злокачественных опухолей [51].

1.3.5. Ингибирование пролиферации злокачественных клетокМАтк

АФПР.

Мышиные МАт к АФПР человека перекрёстно реагируют с мышиными злокачественными клетками [41,51]. Показано, что 167Н.4 МАт реагируют с EL-4, YAC-1 (две мышиных Т-лимфомы), ТА-3 (клеточная линия карциномы молочной железы) и Р-388 (злокачественная клеточная линия дендритового происхождения) клетками [51].

АФП из одного вида связывается или поглощается клетками из других видов [50,56], что предполагает, что сайты связывания как на АФП, так и на его рецепторе, сохраняются, по крайней мере, частично. Вышеупомянутые МАт распознают участки (сайты) связывания АФП на рецепторе. Это позволяет надеяться на то, что появляется возможность иммунизации хозяина против его опухоли, используя гетерологичный АФПР как антиген.

J. Naval et. al. заметили, что бычий АФП, который присутствует в сыворотке плода коровы, добавленный к среде культуры злокачественных клеток мыши стимулирует клеточную пролиферацию, что создаёт конкуренцию с МАт за связывание с мышиным АФПР [51,56].

Ингибирование клеточной пролиферации МАт было обнаружено на L0V0 клетках (аденокарцинома толстой кишки) в свободной от сыворотки среде. Трансформация фитогемагглютинином нормальных периферических лейкоцитов человека также ингибируется 167Н.4 МАт [41]. Опираясь на эти in-vitro результаты, R.Moro et. al. выполнили серии in-vivo экспериментов с EL-4 клеточной линией С57 чёрных мышей и обнаружили, что клеточная репликация радикально ингибировалась МАт. В 5 из 6 экспериментов, все леченные животные остались свободными от опухоли, в одном случае даже спустя 8 месяцев, тогда как все контрольные животные погибали в течение 3 недель. В других экспериментах у леченных животных развились опухоли и, в конце концов, они умерли от них, хотя их продолжительность жизни была значительно дольше, чем продолжительность жизни контрольных животных. Анализ, проведенный на культуре EL-4 клеток, которые использовались для пересадки животным в этих экспериментах, показал, что

125

специфическое поглощение I-АФП составило 20% в случае обработки МАт, тогда как достигало 60-80% в отсутствие МАт [51].

In-vitro и in-vivo результаты показывают, что антитела, направленные против АФПР могут замедлять или прекращать клеточную пролиферацию. Некоторые из МАт к АФПР стимулируют активацию клеточной гибели по механизму апоптоза [43].

Так как потенциальное использование таких антител у онкологических больных представляется очевидной задачей, важно учесть, что использование мышиных (или другого происхождения) МАт для человека не является желательным из-за возможных иммунных реакций.

1.3.6. Возможность использования АФПР для иммунизации онкологических больных.

Другой подход может заключаться в активной иммунизации онкологических больных гетерологичным АФПР. Циркулирующие антитела, производимые таким образом, должны перекрёстно реагировать с АФПР человека и ингибировать пролиферацию злокачественных клеток. Возможна также стимуляция клеточного иммунитета.

Активная иммунизация против АФПР может быть использована как адъювантная терапия наряду с операцией и (или) другими методами лечения, такими как: лучевая терапия, химиотерапия и гормонотерапия.

Не исключено, что этот тип вакцинации может предохранять от очень многих типов рака; вполне возможно, что этот метод может использоваться в качестве профилактики при высоком риске возникновения заболевания.

Можно предположить, что МАт, использующиеся для связывания с АФПР, должны быть доставлены с клеточной поверхности к ядрам для того, чтобы объяснить ингибирование клеточной пролиферации. Можно также предположить, что рецептор самостоятельно переносится в некоторые места (точки), например, из клеточной поверхности в цитоплазму или даже на ядерную мембрану. МАт в вышеупомянутых экспериментах могут "блокировать" рецептор, таким образом предотвращая достижение им места назначения.

Эта стратегия широко применяется в гормональной терапии, использующей тамоксифен, нефункциональную, эстроген-подобную молекулу, которая ингибирует клеточную пролиферацию, блокируя

доступ натуральных эстрогеновых гормонов к их рецепторам на эстроген-зависимых раковых клетках.

1.4. Некоторые направления в иммунопрофилактике и иммунотерапии опухолевых заболеваний.

1.4.1. Иммунные факторы и механизмы, вызывающие деструкцию опухолей Нарушение в иммунной системе при опухолевых заболеваниях

Нерегулируемый и инвазивный рост злокачественных опухолей связан с наличием нескольких мутаций в клоне таких клеток [13,24]. Системой организма, которая призвана отличать чужеродное и элиминировать его, является иммунная система. Поэтому существование в организме измененных опухолевых клеток связано, с одной стороны, с нарушением в работе иммунной системы (врожденные и приобретенные иммунодефициты).

Это представление сформулировано ещё в 70-е годы Р.В.Петровым, который утверждал, что «тот, кто научится лечить иммунодефицит, тот научится лечить рак». С другой стороны, у некоторых злокачественно перерожденных клеток имеются механизмы, блокирующие успешное проявление иммунной реактивности. В тех случаях, когда у опухолевых клеток происходит делеция генов I и II классов ГКГС, специфические для опухоли антигены не могут экспрессироваться в иммуногенной форме для их распознавания и последующего цитолиза Т-клетками.

У большинства опухолей отсутствуют костимулируюшие и адгезивные молекулы, что также препятствует активности Т-клеток.

Некоторые типы опухолей способны секретировать трансформирующий ростовой фактор р (ТРФр), который может подавлять активность Т-клеток воспаления и активировать Т-супрессоры, препятствуя тем самым полноценному развитию клеточного иммунитета [4].

Антитела к специфическим опухолевым антигенам могут выполнять двоякую роль. Как показано в табл. 3, они могут принимать участие в деструкции опухолевых клеток (прямо или опосредованно). С другой стороны, антитела могут блокировать специфические опухолевые антигены и делать трансформированные клетки недоступными для взаимодействия с другими факторами иммунной системы [13]. Иммунные факторы и механизмы, способные вызывать деструкцию опухолей, обобщены в табл. 3.

Таблица 3

Иммунные факторы и механизмы, вызывающие деструкцию опухолей [11]

№п/п Фактор, механизм

1. Лизис, опосредованный антителами и комплементом

2. Прямой клеточно-опосредованный лизис

3. Цитотоксические Т-лимфоциты

4. Лектинзависимая клеточная цитотоксичность

5. Натуральные (естественные) киллеры

6. Антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность (АТЗКОЦ)

7. Лимфокинактивированные клетки (ЛАК)

8. Лизис, опосредованный макрофагами

9. Токсические медиаторы, выделяемые лимфоцитами, макрофагами и другими иммунными клетками

Представления о существовании иммунодефицита при развитии опухолевого заболевания подтверждены многочисленными клиническими наблюдениями. Главная цель иммунопрофилактики и иммунотерапии злокачественных новообразований - изменить биологическое взаимоотношение опухоли и организма в благоприятном для больного направлении. Основу её составляют неспецифические и специфические воздействия на системы иммунного гомеостаза.

1.4.2. Неспецифическая иммунотерапия

1.4.2.1. Препараты растительного и животного происхождения

Эффекты лечения препаратами растительного и животного происхождения значительно уступают действию химио- или радиотерапии или влиянию препаратов других групп иммунотерапевтического действия. Они, обычно, снижают вероятность распространения раковых клеток, стабилизируют соматический статус больного, потенцируют действие цитостатиков, ослабляют токсическое действие других химиотерапевтических лекарственных препаратов. Это препараты - адаптогены. Они, как правило, относятся к анаболикам, антиоксидантам и энергодающим соединениям (препараты из женьшеня, элеутерококка, мумиё и др.). Многие из них богаты каротиноидами (масло облепихи, солодки, шиповника). Их рекомендуется применять либо в ходе предоперационной подготовки больных, либо (и) после операции.

Среди растений имеются и такие, которые оказывают непосредственное влияние на опухолевые клетки, стимуляцию противоопухолевого иммунитета (например, чистотел большой, омела белая, чеснок и др.). Описано несколько цитостатиков растительного происхождения: винбластин, колхамин [6,15]

1,4.2.2. Эндотоксины бактерий и препараты, разработанные

на их основе

В 1995 году на Международном конгрессе по применению иммуномодуляторов в клинической практике был представлен ряд работ, посвященных использованию различных бактериальных препаратов. Препарат, полученный из культуры стрептококков, оказывает выраженное иммуностимулирующее действие в организме опухоленосителя: стимулирует активность NK-клеток, потенцирует выработку у-интерферона, ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-6, продуцирует образование противоопухолевых макрофагов, нейтрофилов, цитотоксических Т-лимфоцитов, обладает прямым цитотокеическим действием на опухолевые клетки. Введение препарата в опухоль сопровождалось регрессией опухолевого роста [77].

Препарат из мембран микобактерий Nocardia opaca стимулирует выделение интерферонов, индукцию ИЛ-1, активацию NK-клеток и макрофагов. Выявлена способность пептидогликановых дериватов Nocardia ингибировать рост метастазов при раке молочной железы [21].

1.4.2.3. Синтетические фармакологические препараты

Группа синтетических препаратов, действующих неспецифически на иммунную систему и ориентированных на онкологическую практику, постоянно расширяется. Это, например, левамизол, действие которого тем сильнее, чем больше была выражена иммунодепрессия у пациентов [67]. Препарат АБ-КИ обладает выраженным влиянием на звенья иммунитета, которые страдают при опухолевом росте [90] и др.

1.4.2.4. Фототерапия

Фототерапия или светолечение, является важным методом в комплексной терапии опухолей. Последние 3 десятилетия используется в клинической практике низкоэнергетическое излучение лазеров для лечения заболеваний (в том числе опухолевых), связанных с нарушениями иммунитета. В последние годы стали использоваться и другие источники света, в частности лампы и светоизлучающие диоды.

В онкологии применяют следующие виды светолечения:

1) собственно фототерапия - поверхностное облучение тела;

2) фотогемотерапия - облучение крови;

3) фото(гемо)химиотерапия - облучение поверхности тела (крови) в сочетании с препаратами, повышающими чувствительность к свету;

4) фотодинамическая терапия.

На основании проведенных исследований [11] проводится облучение поверхности тела больных со злокачественными опухолями в период рентгенотерапии для ликвидации выраженного вторичного

»0ССИ«10МЭ

иммунодефицита. Применяется облучение в диапазоне длин волн 340440 нм при мощности источника излучения 750 Вт/м2.

Для фотогемотерапии применяют красный свет гелий-неонового лазера и ультрафиолетовое облучение. Лучевое воздействие активирует Т-лимфоциты, нормализуя их хелперные и цитотоксические функции, увеличивается выработка цитокинов. Иммуномодулирующее действие лазера зависит от исходного иммунного статуса: его эффект более выражен у больных со сниженными показателями. Применяется также облучение крови ультрафиолетовыми лучами и лучами красного света в качестве вариантов неспецифической иммунотерапии.

Фотогемохимиотерапию и фотодинамическую терапию в принципе уже можно отнести к специфическим методам иммунотерапии. Фотогемохимиотерапия состоит в сорбции лейкоцитами и лимфоцитами, извлеченными из крови, псоралена, облучении их УФ-светом и реинфузии в кровь больного. Метод позволяет избирательно воздействовать на ДНК лимфоцитов и лейкоцитов крови, не влияя на другие клетки.

Фотодинамическая терапия основана на введении в организм химического вещества, избирательно накапливающегося в опухолевой ткани и поглощающего свет определенной длины волны. При этом, молекулярный кислород, получая энергию от фотосенсибилизатора, переходит в активную форму и разрушает окружающие структуры. Производные гематопорфирина, хлорина являются известными фотосенсибилизаторами. Используются в случае фотодинамической терапии аргоновый лазер - излучатель в области 457 и 514 нм, комбинация аргонового и родаминового лазера, генерирующего свет

длиной волны 630 нм и др. Общая доза световой энергии должна быть не менее 90-100 Дж [11].

1.4.2.5. Цитокины

Широко применяются для лечения больных со злокачественными новообразованиями интерфероны, интерлейкины, фактор некроза опухоли, иммуномодуляторы, механизм действия которых достаточно хорошо изучен [7].

Разрабатываются способы комплексной терапии опухолевых заболеваний, где более радикальные методы лечения: оперативное, химио- и радиотерапия сочетаются с иммунотерапией.

Синтетические препараты иммунотропного действия, методы фототерапии опухолей, препараты, созданные на основе токсинов бактерий и цитокинов, являются более радикальными неспецифическими средствами в борьбе с опухолями. Их действие обусловлено активацией многочисленных популяций клеток иммунитета, затрагивает многие звенья и механизмы его работы, в том числе и противоопухолевой защиты.

1.4.3. Специфическая иммунотерапия 1.4.3.1. Пассивная специфическая иммунотерапия

В данную группу воздействий на опухолевый рост можно отнести методы и препараты, обладающие высокой специфичностью в отношении конкретных антигенов опухолевых клеток [74]. Используются сами МАт и конъюгаты МАт к опухолевым антигенам с

токсинами или каким-либо противоопухолевым препаратом. Действие таких коиъюгатов направлено против опухоль-ассоциированных антигенов. Например, антитела OVB3, конъюгированные с эндотоксином А из Psendomonas, применяли для лечения 23 женщин с карциномой яичников [62]. Существенным недостатком этих препаратов является возможность перекрестных реакций с нормальными клетками, имеющими сходные с опухолями антигены, а также их высокая иммуногенность. Большинство МАт представлено мышиными белками, способными вызывать иммунные реакции у людей. Снижение иммуногенности достигается использованием химерных моноклональных антител, состоящих из константных доменов человека и вариабельных доменов мыши. [61] Уже упоминалось о попытках использования МАт к АФПР

1.4.3.2. Адоптивная специфическая иммунотерапия

Адоптивная специфическая иммунотерапия осуществляется в виде трех основных методических приемов:

1. Перенос лимфоидных клеток периферической крови, стимулированных in vitro ИЛ-2 (лимфокинактивированные клетки) [72] в кровяное русло больного.

2. Использование в качестве эффекторных клеток лимфоцитов, выделенных из опухоли и длительно культивируемых [73].

3. Перенос лимфоцитов, стимулированных in vitro сингенными опухолевыми клетками в присутствии ИЛ-2 и других цитокинов, ростовых факторов [60].

1.4.3.3. Активная иммунотерапия аутологичными иммуномодуляторами

Активная иммунотерапия аутологичными иммуномодуляторами и антигенами чаще всего применяется после хирургического лечения -удаления опухоли. Во многих случаях при использовании комплексного подхода иммунизации аутологичной опухолью или антигенами опухоли и стимуляции иммунитета наблюдаются хорошие результаты вплоть до регрессии опухоли [11].

Распространению и внедрению методов иммунотерапии способствует их физиологичность. Если в основу химиотерапии заложено токсическое воздействие на живые клетки, то иммунотерапия осуществляет свое действие посредством активации собственных механизмов защиты организма.

Таким образом, АФП - онкомаркёр. белок, функция которого возможно более всего связана с пролиферацией и дифференцировкой организма и развитием иммунной системы в онтогенезе, АФПР -также тканевой маркер недифференцированных и опухолевых клеток, к которому вырабатываются антитела во взрослом организме. Изучение рецептора и иммунитета к нему может быть полезным в диагностических и терапевтических целях.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Астахов, Дмитрий Владимирович

выводы

1. Обнаружено увеличение уровня АТ к АФПР в сыворотке крови при опухолевых заболеваниях.

2. Обнаружено увеличение уровня АТ к АФПР в сыворотке крови при ангиитах кожи и некоторых других заболеваниях.

3. Антитела к АФПР при опухолевых заболеваниях представлены преимущественно ^М, при ангиитах - ^О.

4. Измерение уровня АТ к АФПР при онкологических заболеваниях не может служить диагностическим тестом.

5. Соотношение ^-б/^М при ангиитах кожи согласуется с тяжестью заболевания.

6. АФПР - аутоантиген, иммунизация которым стимулирует противоопухолевый иммунитет.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Астахов, Дмитрий Владимирович, 1999 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Абелев Г.И. Альфа-фетопротеин: биология, биохимия, молекулярная генетика // Иммунология. - 1994. - № 3. - С. 4-10.

2. Баранов A.A., Жилкина Н.П., Насонов Е.М. и др. Клиническое значение антител к фосфолипидам при узелковом периартериите. // Ревматология. - 1992. - № 2-4. - С. 27-32.

3. Бассалык JI.C., Любимова Н.В., Пашинцева Л.П. Клиническое использование опухолевых маркеров. Критическая оценка. -Москва: Медицина и здравоохранение, серия: онкология. - 1989.

4. Галактионов В.Г. Иммунология. - Издательство Московского Университета, 1998. - С. 348-354.

5. Иванов О.Л., Гурдус В.О. Современные представления об ангиитах кожи. - 1991. -№ 1. - С. 32-37.

6. Каданер В.Я. О списках новых путей лечения опухолей. - М: «Медицина», 1994. - 429 с.

7. Кешлинский С.А., Симбирцев A.C., Воробьев A.A. Эндогенные иммуномодуляторы. - Санкт-Петербург: «Гиппократ», 1992.

8. Луценко C.B., Фельдман Н.Б., Финакова Г.В. и др. Направленный транспорт фталоцианина (Со) к опухолевым клеткам-мишеням с помощью а-фетопротеина и эпидермального фактора роста. /У Вопр. биол. мед. и фарм. химии. - 1999. - № 1. - С. 40-44.

9. Медицинская лабораторная диагностика. Под редакцией А.И.Карпищенко. - Санкт-Петербург: «Интермедицина». - 1997. -Стр. 228-245.

Ю.Насонов Е.М., Бекетова Т.В., Баранов E.H. Антинейтрофильные цитоплазматические антитела при системных васкулитах. // Клин, мед. - 1992. - № 10-11. - С. 21-26.

П.Новиков В.И., Карандашов В.И., Сидорович И.Г. Иммунотерапия при злокачественных новообразованиях. - М: «Медицина», 1999. -С. 60-68.

12,Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование. - М: Издательство «Наука», 1981. - С. 56-76.

13.Петров Р.В. Иммунология. - М: «Медицина», 1987. - С. 337-351.

14.Северин С.Е., Катуков В.Ю., Муйжнек Е.М. Проблемы избирательной регуляции клеточной активности: от фундаментальных основ к практическим результатам. // Вопр. биол. мед. и фарм. химии. - 1998. - № 2. - С. 3-12.

15.Синюков А.Ф. Фитотерапия против рака. - М: «Советский спорт», 1997.-445 с.

16.Татаринов Ю.С. // Всесоюзный биохимический конгресс, 1-й: Тезисы.- 1963.-Т.2.-С. 59.

17.Хасан Хамад А., Глухов А.И., Гордеев С.А. и др. Анализ содержания геномной ДНК некоторых вирусов герпетической группы в мононуклеарных клетках крови пациентов с кожной Т-клеточной лимфомой. // Вопр. биол. мед. и фарм. химии. - 1998. - № З.-С. 25-28.

18.Хасан Хамад А., Глухов А.И., Гордеев С.А. и др. Исследование вирусной этиологии ангиитов кожи. // Вопр. биол. мед. и фарм. химии. - 1999. - № 1. - С. 27-29.

19.Abelev G.I., Perova S.D., Khramkova N.I. et.al. Production of embryonal alpha-globulin by transplantable mouse hepatomas. !! Transplantation. - 1963. - Vol. 1. - P. 174-180.

20.Abelev G.Y. Alpha-fetoprotein in association with malignant tumors. // Adv. Cancer. Res. - 1971. - Vol. 14. - P. 295-357.

21.Barot-Ciorbary R., Bona C. Immunomodulators from Nocardia opaca. // Forum of Immunomodulators, edit. M. Guenounou, John Libbey Eurotext Paris. - 1995. - P. 63-78.

22.Biddle W., Sarcione E.J. Specific cytoplasmic alpha-fetoprotein binding protein in MCF-7 human breast cancer cells and primary breast cancer tissue. // Breast Cancer Res. Treat. - 1987. - Vol. 11. - P. 279-286.

23.Biddle W., Sarcione E.J. Cytoplasmic AFP receptors in MCF-7 human breast cancer cells and primary breast cancer tissue from postmenopausial women. // In: Biological activities of Alpha-Fetoprotein. - CRC Press, Boca Raton, FL. - 1989. - Vol. 2. - P. 129138.

24.Boon T. Tumor antigens and Perspectives for Cancer Therapy. H The Immunol. - 1995. - N. 5-6. - P. 262-264.

25.Breborowicz J. Microheterogeneity of human alpha-fetoprotein. if Tumor Biol. (Switzeland). - 1988. - Vol. 9. -N. 1. - P. 3-14.

26.Brenner T., Beyth Y., Abramsky O. Inhibitory effect of alpha-fetoprotein on the binding of myasthenia gravis antibody to acetylcholine receptor. // Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. - 1980. - Vol. 77. - N. 6. - P. 3635-3639.

27.Brenner T., Evron S., Soffer D. et. al. Treatment of experimental allergic encephalomyelitis in rabbits with AFP. // Isr. J. Sci. - 1985. - Vol. 21. -P. 245-249.

28.Cook J.R., Chin J.F. Mechanism of the dexamethasone effect on alpha-fetoprotein gene expression in McARH8994 rat hepatoma cells. // J. Biol. Chem. (USA). - 1986. - Vol. 26. - N. 10. - P. 4663-4668.

29.Deutsch H.F. Chemistry and biology of alpha-fetoprotein. // Adv. Cancer Res. - 1991. - Vol.56. - P. 253-312.

30.Esteban C., Geuskens M., Uriel J. Activation of an alpha-fetoprotein (AFP) receptor autoorine loop in HT-29 human colon carcinoma cells. // Int. J. Cancer (United States). - 1991. - Vol. 49. -N. 3. - P. 425-430.

31.Esteban C., Trojan J., Macho A. et. al. Activation of an alpha-fetoprotein receptor pathway in human normal and malignant peripheral blood mononuclear cells. // Leukemia (England). - Nov. 1993. - Vol. 7. - N. 11.-P. 1807-1816.

32.Geuskens M., Naval J., Uriel J. Ultrastructural studies of the intracellular translocation of endocytosed alpha-fetoprotein (AFP) by cytochemistry and of the uptake of 3H-arachidonic acid bound to AFP by autoradiography in rat rhabdomiosarcoma cells. // J. Cell. Physiol. (USA). - 1986. - Vol. 128. -N. 3. - P. 389-396.

33.Gliaschera M., Biver P., Brunori E. et. al. Myastenia gravis and pregnancy. Review of the literature and considerations on the immunoprotective effect of alpha-fetoprotein through the observation of a clinical case. // Ann. Ostet. Ginecol. Med. Perinat. (Italy). - Jan-Feb. 1989. - Vol. 110. - N. 1. - P. 20-27.

34.Harding C., Heuser J., Stahl P. Receptor-mediated endocytosis of transferrin and recycling of the transferrin receptor in rat reticulocytes. // J. Cell. Biol. - 1983. - Vol. 97. - P. 41-51.

35.Hellstrom J., Hellstrom K.E. Tumor immunology: an overview. H Ann. N. Y. Acad. Sci. - 1993. - Vol. 690. - P. 24-33.

36.Hoskin D.W., Margita R.A. Specific maternal anti-fetal lymphoproliferative responses and their regulation by nature immunosuppressive factors. // Clin. Exp. Immunol. - 1989. - Vol. 76. -P. 262-277.

37.Iacopetta B.J., Morgan E.H., Yeoch G.C.T. Receptor-mediated endocytosis of transferrin by developing erythroid cells from the fetal rat liver. // J. Histochem. Cytochem. - 1983. - Vol. 31. - P. 336-338.

38.Kanevsky V. Yu., Pozdnyakova L.P., Aksenova O.A. et al. Isolation and characterization of AFP-binding proteins from tumor and fetal human tissues. // Biochem. Mol. Biol. int. - 1997. - Vol. 41. - P. 1143-1151.

39.Keel B.A., Eddy K.B., Cho S. et. al. Synergistic action of purified a-fetoprotein and growth factors on the proliferation of porcine granulosa cells in monolayer culture. // Endocrinology. - 1991. - Vol. 129. - P. 217-225.

40.Klausner R.D., Van Renswoude J.V., Ashwell G. et al. Receptor-mediated endocytosis of transferrin in K562 cells. // J. Biol. Chem. -1983. - Vol. 258. - P. 4715-4720.

41.Laderoute M.P. The characterization of a novel, widespread, PNA-reactive tumor-associated antigen: The Alpha-Fetoprotein receptor/binding protein. University of Alberta Thesis, 1991.

42.Laderoute M., Williams D., Wegmann T. et. al. The identification, isolation and characterization of a 67 kilodalton, PNA-reactive autoantigen commonly expressed in human adenocarcinomes. /7 Anticancer Research. - 1994. - Vol. 14. - P. 1233-1246.

43.Laderoute M.P., Pilarski L.M. The inhibition of apoptosis by alpha-fetoprotein (AFP) and the role AFP receptors in anti-cellular senescence. // Anticancer Res. - Nov.-Dec. 1994. - Vol. 14. - N. 68. - P. 2429-2438.

44.Lu C.Y., Changelian P.S., Unanue E.R. AFP inhibits macrophage expression of la antigens. // J. Immunol. - 1984. - Vol. 132. - P. 17221726.

45.Mizejewski G.J., Warner A.S. Alpha-fetoprotein can regulate growth in the uterus of the immature and adult ovariectomized mouse. // J. Reprod. Fertil. - 1989. - Vol. 85. - P. 177-185.

46.Mizejewski G. Alpha-fetoprotein signal sequences; a proposed mechanism for subcellular localization and organella targeting. // J. Theor. Biol. (England). - 1995. - Vol. 176. - N. 1 - P. 103-113.

47.Mizejewski G.J. a-fetoprotein as a biologic response modifier: relevance to domain and subdomain structure. Structure / Function of AFP // Proc. Soc. Exp. Biol. - 1997. - Vol. 215, N 4. - P. 333-362.

48.Morinaga T., Sakai M., Wegman T.G. et al. Primary structures of human a-fetoprotein and its mRNA // Proc. Natl. Sci. U.S.A. - 1983. - Vol. 80. -P. 4604-4612.

49.Moro R. The AFP receptor - a widespread oncofetal antigen. // Biological Activities of Alpha-Fetoprotein. - Boca Roton, Fl., 1989. -Vol. 2. - P. 119-127.

50.Moro R., Fielitz W., Esteves A. et al. In vivo uptake of heterologous AFP and serum albumin by ependymal cells of developing chicken embryos. // Int. J. Devi. Neuroscience. - 1984. - Vol. 2. - P. 143-148.

51.Moro R., Tamaoki T., Wegmann T.G. et. al. Monoclonal antibodies directed against a widespread oncofetal antigen: the alpha-fetoprotein receptor. // Tumor Biol. - 1993. - Vol. 14. - P. 116-130.

52.Moro R., Villacampa M.J. Short sequences of high homology between primary structures of alpha-fetoprotein and albumin. // Tumor Biol. -1986.-Vol. 7.-P. 115-121.

53.Moskaleva E., Posypanova G., Shmyrev I. et. al. Alpha-fetoprotein-mediated targeting of anti-cancer drugs - the new strategy to overcome multidrug resistance of tumor cells. // Intern. Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine Meeting 24-th Coronado.. 1996.-P. 121.

54.Mossman T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and cytotoxicity assays // J. Immunol. Meth. 1983, v.65, p.55-63.

55.Murgita R.A., Wigzell H. Selective immunoregulatory properties of alpha-fetoprotein. // Ric. Clin. Lab. - 1979. - Vol. 9. - P. 327-342.

56.Naval J., Villacampa M.J., Goguel A.F. et al. Cell type specific receptors for AFP in a mouse T-lymphoma cell line. // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. - 1985. - Vol. 82. - P. 3301-3305.

57.Naval J., Villacampa M.J., Goguel A.F. et. al. Endocytosis of alpha-fetoprotein by normal and tumoral lymphoid cells. // Biological Activities of Alpha-Fetoprotein. - Boca Raton, 1989. - Vol. 2. - P. 189203.

58.Nunez E.A., Benassayag C., Vallette G. et. al. The physicochemical and biological properties of alpha-fetoprotein depend of ins ligand environment. // J. Nucl. Med. Allied Sci. (Italy). - Jul.-Sep. 1989. - Vol. 33.-N.3Suppl.-P. 18-26.

59.Ogata A., Yamashita Y., Koyata Y. et. al. Supression of experimental antigen-induced arthritis in transgenic mice producing human alpha-fetoprotein. // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1995. - Vol. 213. - P. 362-366.

60.0smond M.E., Ross S. Problems in the investigation study and clinical use of cancer immunotherapy. // Immunol. Today. - 1991. - Vol. VII. -N.6.-P. 193-195.

61.Owens R.J., Scheinberg D.A., Houghton A.N. The genetic engineering of monoclonal antibodies. // J. Immunol. Methods. - 1994. - Vol. 168. -P. 149-165.

62.Paj L.H., Bookman M.A., Ozols R.J. et. al. Clinical evaluation intraperitoneal Psendomonas exotoxin immunoconjugate OVB-PE in patients with metastatic colon cancer. // J. Clin. Oncol. - 1991. - Vol. 9. -N. 12.-P. 2095-2103.

63.Parmelu D.C., Evenson M. et. al. The presence of fatty acids in human a-fetoprotein. // J. Biol. Chem.. - 1978. - Vol. 253. - P. 2114-2117.

64.Pastan I., Willingham M., Anderson W. et al. Localization of serum derived a2-macroglobulin in cultured cells and decrease after Moloney sarcoma virus transformation. // Cell. - 1977. - Vol. 12. - P. 609-612.

65.Payne D.W., Katzenellenbogen J.A. Binding specificity of rat alpha-fetoprotein for series of estrogen derivatives: studies using equilibrium and nonequilibrium binding techniques. // Endocrinology (United Ststes). - Sep. 1979. - Vol. 105. -N. 3. - P. 1976-1980.

66.Peck A.B., Murgita R.A., Wigzell H. Cellular and genetic restriction in the immunoregulatory activity of AFP I. Selective inhibition of anti-Ia-assoeiated proliferative responses. // J. Exp. Med. - 1978. - Vol. 147. -P. 667-672.

67.Perez C.A., Baner M., Enami B.N. et. al. Thoracic irradiation with or without levamicole (NSC-177023) in unresectable non-small cell carcinoma of the lung phase III randomized trial of the RTOG. // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. - 1988. -N. 15. - P. 1337-1346.

68.Petri M., Ho A.C., Patel J. et. al. Elevation of maternal AFP in systemic lupus esythematosus: it controlled study. // J. Rheum. - 1995. - Vol. 22. -P. 1365-1368.

69.Pineiro A., Calvo M., Iquaz F. et. al. Characterization, origin and evolution of alpha-fetoprotein and albumin in postnatal rat brain. // Int. J. Biochem. - 1982. - Vol. 14. - P. 817-822.

70.Regfeld S.J. The interaction of albumin and concanavalin-A with normal and sickle human erythrocytes. // Boichem. Biophys. Res. Commun. -1975.-Vol. 60.-P. 586-591.

71.Robbins P.E., Kawakami Y. Human tumor antigens recognized by T~ cells. // Curr. Opin. Immunol. - 1996. - Vol. 8. - P. 628-636.

72.Rosenberg S.A. Adoptive immunotherapy of cancer using lymphokine activated killer cells and recombinant interleukin-2. // Important Advances in Oncology Philadelphia, Lippincott J.D. - 1986. - P. 55-91.

73.Rosenberg S.A. Principles and application of biologic therapy in Cancer5 principle and practice of Oncology. // Edit. V. T. De Vitta et. al. -1993.-P. 293-324.

74.Rosseli M., Guadagni F., Buonomo O. et.al. Tumor markers as targets for selective diagnostic and therapeutic procedures. // Anticancer Research. - 1996. - Vol. 16. - P. 2187-2192.

75.Rouslahti E., Seppala M. Alpha-fetoprotein in cancer and fetal development. // Adv. Cancer Res. - 1979. - Vol. 29. - P. 275-279.

76.Ruoslahty E., Seppala M. Studies of carcinofetal proteins: III Development of a radioimmunoassay for AFP. Demonstration of AFP in serum of healthy human adults. // Int. J. Cancer. - 1971. - Vol. 8. - P. 374-378.

77.Saito M. OK-432, a killed streptococcal preparation, in the treatment of animals and human cancer and its mechanisms of action. // Forum of Immunomodulators, edit. M. Guenounou, John Libbey Eurotext Paris. -1995.-P. 13-30.

78.Sarcione E.J., Zloty M., Delluomo D.S. et al. Detection and measurement of AFP in human breast cancer cytosol after treatment with 0.4M KC1. // Cancer Res. - 1983. - Vol. 43. - P. 3739-3741.

79.Sarcione E.J., Hart D. Biosynthesis of alpha-fetoprotein by MCF-7 human breast cancer cells. // Int. J. Cancer (Denmark). - 1985. - Vol. 35. -N. 3.-P. 315-318.

80.Schnitzer J.E., Carley W.W. Palade G.E. Albumin interact specifically with a 60 kD microvascular endothelial glycoprotein. // Proc. Natl. Acad. Sei. (USA). - 1998. - Vol. 85. - P. 6773-6777.

81.Scmenluk D.J., Boismenn R., Tan J. et. al. Immunoregulation by recombinant AFPs produced in eukaryotic and prokaryotic expression systems (abstract). // Fed. Proc. Exp. Biol. Part. 1. - 1994. - Vol. 8. - P. 2799-2815.

82.Severin S.E., Kanevsky V.Y., Sologub V.K. et al. The purification of human alpha-fetoprotein receptor from fetal and cancerous tissues. // International Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine. Meeting, 22-nd: Presented. - Groningen, 1994. - P.3120.

83.Severin S.E., Kanevsky V.Y., Sologub V.K. et al. The natural immunity against alpha-fetoprotein receptor (AFPR). // Presented at the XXIII Meeting of the ISOBM Montreal, 1995.

84.Severin S.E., Moskaleva E. Yu., Shmyrev I.I. et al. Alpha-fetoprotein-mediated targeting of anti-cancer drugs to tumor cells in vitro. // Biochem. Mol. Biol. int. - 1995. - Vol. 37. - P. 385-392.

85.Severin S., Sologub V., Posypanova G. et. al. Human alpha-fetoprotein receptor (AFPR) and antibodies to AFPR as a tool for tumor screening. // XVI Congress of Clinical Chemistry London, 1996, UK, P. 143.

86.Smalley J.R., Sarcione E.J. Synthesis of AFP by immature rat uterus // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1980. - Vol.92. - P. 1429-1434.

87.Sologub V., Koromyslova I., Kanevsky V. et. al. Monoclonal antibodies (MAb's) to human a-fetoprotein (AFP) reacting with antibodies against receptor of AFP (R-AFP). Their possible application for the diagnostic of oncological states. H Int. J. on Immunorehabilitation. - 1996. -N. 3. - P. 58.

88.Sologub V.K., Koromyslova I.A., Pozdnyakova V.Yu. et. al. Study of antigenic determinants and the binding site for the human alpha-fetoprotein receptor using monoclonal antibodies. // Presented at XXV Meeting of the ISOBM, 1997. - Montreux, Switzerland, P. 104.

89.Sonnenschein C., Uce A.A., Soto A.M. Growth inhibition of estrogen-sensitive rat mammary tumors. Effect of an alpha-fetoprotein-secreting hepatoma. // J. Nail. Cancer Inst. (United States). - May 1980. - Vol. 64. -N. 5.-P. 1147-1152.

90.Sredni B., Albeck M., Kalechman Y. The Immunomodulating and therapeutic properties of AS-101. // Forum of Immunomodulators, edit. M. Guenounou, John Libbey Eurotext Paris. - 1995.

91.Suzuki Y., Carl Q.Y., Alpert E. Isolation and partial characterization of a specific AFP receptor in human monocytes. // J. Clin. Invest. - 1992. -Vol. 90.-P. 1530-1536.

92.Toder V., Bland M., Gold-Gefter L. et. al. The effect of alpha-fetoprotein on the growth of placental cells in vitro. I I Placenta. - 1983. -Vol. 4.-P. 79-86.

93 .Torres J.M., Laborda J., Naval J. et. al. Expression of alpha-fetoprotein receptors by human T-lymphocytes during blastic transformation. // Mol. Immunol. (England). - Sep. 1989. - Vol. 26. - N. 9. - P. 851-857.

94.Trojan J., Uriel J. Immunocytochemical localization of alpha-fetoprotein and serum albumin in ecto-, meso-, and endometrial tissue derivates of the developing rat. // Oncodev. Biol. Med. - 1982. - Vol. 3. - P. 13-22.

95.Tsen-Fang Tsai, Rong-Long Chen, Jh-Jen Sn. et. al. Epstein-Barr virus-associated lymphoproliferative disorder of granular lymphocytes presenting initially as cutaneous vasculitis. // J. Amer. Acad. Dermatol. -1994.-Vol. 30.-P. 339-344.

96.Turcotte B., Meyer M.E., Bocquel M.T. et. al. Repression of the alpha-fetoprotein gene promoter by progesterone and chimeric receptors in the presence of hormones and antihormones. // Mol. Cell. Biol. (United States). - Sep. 1990. - Vol. 10. - N. 9. - P. 5002-5006.

97.Uriel J., Bouillon D., Russel C. et. al. AFP: The major high affinity estrogen binder in rat uterine cytosols. // Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. -1976. - Vol. 73. - P. 1452-1456.

98.Uriel J., Villacampa M.J., Geunskens M. Alpha-fetoprotein uptake by cloned cell lines derived from a nickel-induced rat rhabdomyosarcoma. // Br. J. Cancer. - 1983. - Vol. 48. - P. 261-269.

99.Uriel J., Failly-Crepin C., Villacampa M.J. et al. Incorporation of AFP by the MCF-7 human breast carcinoma cell line. // Tumor Biol. - 1984. -Vol. 5.-P. 41-51.

100. Uriel J., Naval J., Laborda J. Alpha-fetoprotein - mediated transfer of arachidonic acid into cultured cloned cells derived from a rat rhabdomyosarcoma. // J. Biol. Chem. (USA). - 1987. - Vol. 262. - N. 8. - P. 3579-3585.

101. Uriel J.; Laborda J., Naval J. et al. AFP receptors in malignant cells: an overview. // Biological Activities of Alpha-Fetoprotein. - Boca Raton, Fl„ 1989.-Vol. 2.-P. 103-117.

102. Van den Eynde B., Van der Bruggen P. T-cell defined tumor antigens. // Curr. Opin. in Immunol.. - 1997. - Vol. 9. - P. 684-693.

103. Villacampa M.J., Lampreave F., Calvo M. et. al. Incorporation of radiolabeled AFP in the brain and other tissues of the developing rat. // Dev. Brain. Res. - 1984. - Vol. 12. - P.77-82.

104. Villacampa M.J., Moro R., Naval J. et al. AFP receptors in a human breast cancer cell line. // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1984. -Vol. 122.-P. 1322-1327.

105. Villacampa M.J., Alava M.A., Uriel J. et. al. Characterization of a membranoreceptor for alpha-fetoprotein in rat fetal tissues. // Presented at XIII Meeting of the ISOBM Paris, 1985.

106. Vishi S., Watabe H., Hirai H. Immunological and chemical correlation between AFP from human and several mammalian species. // Ann. N. Y. Acad. Sci. - 1975. - Vol. 259. - P. 109-117.

-95107. Wan Y.J., Wu T.C. The effects of retinoic acid on the expression of alpha-fetoprotein and albumin genes in rat hepatoma cell lines. // Differentiation (Germany). - Jun. 1992. - Vol 50. - N. 2. - P. 107-111.

108. Wan Y.J., Pan T., Wang L. et. al. 9-cis retinoic acid is more effective than all-trans-retinoic acid in upregulating expression of alpha-fetoprotein gene. // J. Mol. Endocrinol. (England). - Feb. 1995. - Vol 14. -N. l.-P. 101-108.

109. Wang W., Alpert E. Downregulation of phorbol 12-myristate 13-acetate-induced tumor necrosis factor - alpha and interleukin-1 beta production and gene expression in human monocytic cells by human alpha-fetoprotein. // Hepatology (United States). - Sep. 1995. - Vol. 22. -N.3.-P. 921-928.