Исследование генетических особенностей вируса крымской-конго геморрагической лихорадки, циркулирующего на Юге России тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат биологических наук Петрова, Ирина Дмитриевна

• Петрова, Ирина Дмитриевна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Петрова, Ирина Дмитриевна

Список сокращений. ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Открытие и эпидемиология ККГЛ (исторический аспект).

1.2. Эпидемиологическая ситуация по ККГЛ в России в настоящее время

1.3. Таксономия найровирусов.

1.4. Молекулярно-биологическое исследование вируса ККГЛ.

1.5. S-сегмент геномной РНК и нуклеокапсидный белок.

1.6. М-сегмент геномной РНК и оболочечные гликопротеины.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Материал для исследований.

2.2. Обратная транскрипция полимеразная цепная реакция.

2.3. Секвенирование и филогенетический анализ.

Глава 3. СОСТОЯНИЕ ПРИРОДНОГО ОЧАГА ККГЛ НА ЮГЕ ф РОССИИ.

3.1. Вирусофорность клещей.

3.2. Результаты ИФА клинических образцов.

Глава 4. СТРУКТУРА ГЕНОМА ВИРУСА.

4.1. Структура S-PHK вируса ККГЛ.

4.1.1. Структура участка 310-529 S-сегмента генома вируса ККГЛ.

4.1.2. Структура 825-1290 участка S-сегмента генома вируса ККГЛ.

4.1.3. Полная структура S-сегмента генома вируса ККГЛ.

4.2. Структура М-сегмента генома вируса ККГЛ.

4.2.1. Структура среднего участка М-сегмента генома вируса ККГЛ

4.2.2. Структура 5'-концевого участка М-сегмента генома вируса ККГЛ

4.2.3. Структура З'-концевого участка М-сегмента генома вируса ККГЛ

Глава 5. ДИЗАЙН ПРАЙМЕРОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ

ПЦР-ТЕСТ-СИСТЕМЫ НА РНК ВИРУСА ККГЛ В ОБРАЗЦАХ

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование генетических особенностей вируса крымской-конго геморрагической лихорадки, циркулирующего на Юге России»

Крымская-Конго геморрагическая лихорадка - острое вирусное природно-очаговое заболевание человека с высокой степенью летальности. Вирусная этиология ККГЛ была установлена М.П.Чумаковым при изучении в 1944-45 гг. в Крыму вспышки неизвестного заболевания с геморрагическим синдромом. Этиологический агент был охарактеризован антигенно, физико-химически и морфологически лишь в 1967 году, когда для выделения вируса отечественными исследователями была использована общепринятая методика выделения вируса на белых мышах-сосунках. (Чумаков М.П. и др., 1968). Совместными исследованиями советских (Чумаков М.П. и др., 1969) и американских (Casals J. et al., 1969) экспертов, проведенных в конце 60-х годов, было продемонстрировано, что штаммы вируса Крымской геморрагической лихорадки в антигенном и биологическом отношении очень близки к вирусу лихорадки Конго, впервые выделенного в 1956 году в Заире из крови больного ребенка (Simpson D.L.H. et al., 1967). Этиологический агент, вызывающий то и другое заболевание, получил общее название - вируса конго-крымской гемморагической лихорадки (ККГЛ). В настоящее время он называется вирус Крымской-Конго геморрагической лихорадки.

Географическое распространение вируса довольно широкое. Число стран в Европе, Азии и Африке, где выявлена циркуляция возбудителя ККГЛ, достигло четырех десятков (Hoogstraal Н. 1979, Swanepoel R. 1987).

В молекулярно-биологическом плане вирус ККГЛ ещё недостаточно исследован. Нуклеотидная последовательность всего генома вируса ККГЛ пока не определена, однако, для ряда штаммов ККГЛ, изолированных в Китае, Греции, Нигерии, Пакистане, Уганде, Косово и Сенегале известны полные или частичные последовательности М- и S-сегментов генома.

Филогенетический анализ, проведенный на основе имеющихся частичных нуклеотидных последовательностей (220 нуклеотидов) S-сегмента генома 26 вариантов вируса ККГЛ из различных регионов мира, показал, что все вирусы делятся на 3 большие группы (Rodriguez L.L. et al.,1997). Немногим ранее аналогичная картина была получена при сравнении фрагментов S-сегментов длиной 499 нуклеотидов 13 вирусов ККГЛ (Marriott А.С. et al., 1996). Полученные в этих работах филогенетические деревья не выявляли корреляцию между генетическими группами, местом и источником выделения вируса (человек, клещ, животное). Что касается Российской Федерации и бывшего СССР, то, несмотря на приоритет в открытии данного вируса какие либо данные по молекулярно-эпидемиологическому мониторингу этого вируса отсутствуют. Следовательно, какой-либо возможности оценить преобладающие генетические варианты вируса и генетическое разнообразие его на территории до сих пор не было.

Активизация очагов ККГЛ, начавшаяся в 1999 г. на территории юга России, требует с одной стороны выяснения причин данной ситуации, с другой стороны - выявления ведущих генотипов вируса, циркулирующего на указанных территориях.

Данные по строению части генома вируса ККГЛ (S-сегмент РНК), циркулирующего в России, были получены только для одного штамма Drozdov, выделенного в 1967 году в Астраханской области ( Butenko А. М. et al., 1968). Структура среднего (М) сегмента этого и других российских вирусов не были известны.

Широкое географическое распространение и высокая опасность заболевания ККГЛ для человека делают изучение природных популяций вируса актуальным в плане получения новых данных по генетической вариабельности циркулирующего на юге России вируса, изучения путей эволюции вируса и в плане усовершенствования методов лабораторной диагностики.

Целями настоящего исследования являлись генетическая характеризация полевых и лабораторных образцов вируса ККГЛ, выделенных от клещей Hyalomma marginatum, выживших и умерших больных из Ставропольского края,

• Ростовской, Волгоградской и Астраханской областей России и разработка метода индикации РНК вируса для ранней диагностики ККГЛ на основе обратной транскрипции полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР).

Для выполнения намеченной программы требовалось решить следующие задачи: сбор и иммунохимическая характеризация образцов, потенциально содержащих вирус ККГЛ, от больных и различных видов клещей; выявление наличия в образцах вируса с помощью ИФА", дизайн праймеров и индикация РНК вируса ККГЛ с помощью обратной транскрипции - полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР); определение нуклеотидных последовательностей фрагментов S- и М-сегментов генома полевых образцов и коллекционных штаммов вируса ККГЛ; сравнение полученных нуклеотидных последовательностей с опубликованными и установление филогенетических взаимоотношений между штаммами вируса ККГЛ, циркулирующего в различных регионах мира.

Научная новизна работы

Впервые исследована генетическая вариабельность вируса ККГЛ, циркулирующего на территории южных регионов России на основании изучения частичных нуклеотидных последовательности S- и М- сегментов генома.

Определена полная нуклеотидная последовательность S-сегмента трех коллекционных штаммов вируса ККГЛ: LEIV 29223 Ст. от больного из Ставропольского края, LEIV 28044 Рос. от клеща H.marginatum из Ростовской области и LEIV 10145 Уз. от клеща Н. asiaticum из Узбекистана.

Впервые показано, что на территории России циркулируют генетически близкие варианты вируса ККГЛ, существенно отличающиеся по нуклеотидной последовательности S- и М- сегментов генома от штаммов из других регионов мира.

На основании данных по генетической вариабельности вируса ККГЛ, циркулирующего в южных регионах России, создан набор праймеров для диагностической ПЦР-системы для индикации вируса ККГЛ в клинических образцах.

Практическая ценность

На основе созданного нами набора праймеров и отработанных условий индикации РНК вируса с помощью ОТ-ПЦР выпущена экспериментальная серия диагностических наборов для выявления РНК вируса ККГЛ в клинических образцах.

Получена заявка на изобретение № 2001123408/13, "Набор олигонуклеотидов-праймеров для идентификации РНК вируса ККГЛ" приоритет от 20.08.01, решение о выдаче патента от 11.02.2003. Авторы заявки: 1) Петров B.C., 2) Петрова И.Д., 3) Тюнников Г.И., 4) Серегин С.В., 5) Яшина Л.Н., 6) Кузина И.И.

По результатам работы в базе данных GenBank зарегистрированы 52 нуклеотидные последовательности.

Основные положения, выносимые на защиту

- Популяция вируса ККГЛ, циркулирующего на территории юга Росси в 2000-2001 представлена доминирующим генотипом вируса, имеющим значительные отличия в нуклеотидной структуре от зарубежных аналогов.

- Популяция вируса ККГЛ, циркулирующего на территории России, стабильна.

- Вирусы ККГЛ, циркулирующие на территории России разделяются географически на Волгоградско-Ростовскую и Астраханско-Ставропольскую подгруппы.

Выражаю глубокую признательность моему научному руководителю кандидату биологических наук Петрову Владимиру Семеновичу за постоянное внимание и заботу при выполнении данной работы.

Работа выполнена при финансовой поддержке гранта МНТЦ 1291.

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Петрова, Ирина Дмитриевна

выводы

1. Установлено, что популяция вируса ККГЛ, циркулирующего на юге

России, представлена близкородственными вариантами вируса ККГЛ (гомология не менее 93.5%), формирующими отдельную генетическую группу, которую можно разделить на две географические подгруппы: Волгоградско-Ростовскую и Астраханско-Ставропольскую.

2. Впервые определена полная нуклеотидная последовательность малого сегмента генома вируса ККГЛ для двух современных российских штаммов, выделенных в 2000 году (LEIV 29223 Ст. и LEIV 28044 Рос.), а также коллекционного штамма вируса из Узбекистана (LEIV 10145 Уз).

3. Сравнительным анализом полных и частичных структур S-сегмента генома показано, что популяция циркулирующего в настоящее время на юге России вируса ККГЛ генетически близка штамму Drosdov (гомология - 9697%), выделенному в России на этой же территории в 1967 году, что говорит о

Ф стабильности популяции вируса ККГЛ, циркулирующего на юге России.

4. Впервые получены данные по структуре трех участков М-сегмента генома вируса ККГЛ из России. Показано, что все известные штаммы по нуклеотидной последовательности участков М-сегмента генома можно разделить на четыре генетические группы, причем вирусы из России формируют отдельную группу. Различия по нуклеотидным последовательностям с представителями других генетических групп находится

Ф в пределах от 15 до 55%.

5. По результатам сравнительного анализа всех известных нуклеотидных последовательностей малого сегмента генома предложен набор праймеров для проведения ОТ-ПЦР, на основе которого в настоящее время разрабатывается диагностическая тест-система для выявления РНК вируса ККГЛ в клинических образцах.

Заключение

Судя по данным, представленным в литературе, вирус Крымской-Конго геморрагической лихорадки, на молекулярно- биологическом уровне изучен недостаточно. Полная структура генома до сих пор не определена. Не до конца уточнен процессинг структурных гликопротеинов и не определена стратегия кодирования L сегмента РНК. Проведенные филогенетические исследования на основании полной и частичной нуклеотидной последовательности малого сегмента РНК генома не выявляли корреляцию между генетическими группами и такими факторами как географическое место выделения вируса, время (год) выделения и сам источник (человек, клещ, животное и т.д.). То же самое было показано и на основании сравнения немногочисленных нуклеотидных последовательностей М-сегментов генома вирусов ККГЛ (генетическое разнообразие китайских штаммов). Вирусные популяции Европы и России, в том числе, изучены недостаточно. Сравнительные исследования методов диагностики ККГЛ показали, что ОТ-ПЦР является хорошим диагностическим методом особенно для ранней диагностики, но для эффективного его применения необходимо иметь данные по первичной структуре генетических вариантов вируса, циркулирующих на конкретной территории. Поэтому целью нашего исследования являлась генетическая характеризация полевых и клинических образцов и коллекционных штаммов вируса ККГЛ, выделенных от больных, умерших и клещей Hyalomma marginatum из Ставропольского края, Ростовской, Волгоградской и Астраханской областей России и в качестве дополнения к основному направлению исследований была разработка метода индикации РНК вируса ККГЛ в пробах с помощью ОТ-ПЦР.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2Л. Материал для исследований

Вирус. В работе использовали 4 колекционных штамма вируса ККГЛ из музея Института вирусологии им. Д.И. Ивановского, РАМН, Москва: штамм LEIV 10145 Уз., выделенный из клещей Hyalomma asiaticum в 1985 г. в Узбекистане (прошел 36 пассажей на мышах-сосунках и 3 пассажа на культуре клеток SW-13); штамм LEIV 29223 Ст., выделенный в 2000 г. от больного в Ставрополе (прошел 1 пассаж на культуре клеток SW-13); штамм LEIV 8966 Тадж., выделенный от больного в 1990 г. в Таджикистане (прошел 15 пассажей на мозгах мышей-сосунков и 1 пассаж на культуре клеток SW-13); штамм LEIV 28044 Рос., выделенный от клещей Н. marginatum в Ростовской области в 2000 г (прошел 1 пассаж на культуре клеток SW-13).

Клинические образцы. В данной работе было проанализировано 180 сывороток крови, 17 образцов клинического материала от 6 погибших и 7167 клещей. Пробы от больных и умерших с диагнозом ККГЛ были получены во время локальных вспышек заболевания в Ростовской и Волгоградской областях и в Ставропольском крае в 2000-2001 гг. Пробы представляли собой цельную кровь, сыворотку крови или 20% суспензию секционного материала. Предварительная диагностика заболевания проводилась по совокупности клинических проявлений, а окончательный диагноз ККГЛ ставился на основании данных лабораторных методов исследований. При этом для выявления антигена вируса ККГЛ в клиническом материале от больных или в секционных образцах от умерших использовали иммуноферментную тест-систему (вариант прямого сэндвича) производства лаборатории экологии вирусов НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН. Для выявления специфических IgM-антител использовали вариант ловушки М антител МАС-ELISA (Вышемирский О.И. 1993), для выявления IgG-антител в сыворотках крови больных и реконвалесцентов - вариант непрямого сэндвича, как описано в работе (Лаврова Н.А. 1986). До дальнейших исследований пробы хранились в виде замороженных при минус 70°С аликвот.

Сбор клещей рода Н. marginatum осуществляли в течение 2000 г. в южных регионах европейской части России, включающих 5 административных образования (Калмыкия, Волгоградская, Астраханская, Ростовская области и Ставропольский край). В каждом регионе сбор проводили не менее чем в четырех районах. Клещей для анализа собирали живыми, сортировали по стадиям развития, полу и месту сбора, замораживали в жидком азоте и сохраняли замороженными при минус 70°С.

Протокол обследования клещей на наличие вируса (антигена) ККГЛ состоял в следующем. Замороженные пулы (по 10-12 экз.) клещей растирали, добавляли на один пул 2 мл культуральной среды, суспензию центрифугировали 10 мин при 2000 об/мин. Надосадочную жидкость обследовали в варианте ИФА прямой сэндвич в разведении 1:2 с помощью вышеназванной иммуноферментной тест-системы. Положительные пробы переставляли до # конечного разведения.

Все антигенположительные образцы (клинические и суспензии клещей) были проанализированы методом биопробы на мышах-сосунках или культуре клеток SW-13 и часть из них с помощью ОТ-ПЦР. Происхождение лабораторных и полевых штаммов вируса ККГЛ, использованных в данном исследовании, приведено в таблице 4.

Как видно из таблицы 4 для исследования взяты изоляты вируса ККГЛ с ф различной географической локализацией и источником выделения (клещи, люди).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Петрова, Ирина Дмитриевна, 2003 год

1. Александров А.А., Александров Н.Н., Бородовский М.Ю. и др.(1999).

2. Компьютерный анализ генетических текстов. М., Наука.

3. Аристова В.А., Колобухина Л.В., Щелканов М.Ю. и др. (2001). Экологиявируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки и особенности ее клиники на территории России и сопредельных стран. Вопр. вирусол., т.45(4), с.7-15.

4. Атлас распространения возбудителей природно-очаговых вирусныхинфекций на территории Российской Федерации. Под ред. Львова Д.К. и др. (1995) М.,

5. Василенко С.М., Кацаров Т., Михайлов А. и др. (1971). Изучение КГЛ в

6. Болгарии. Вирусные и геморрагические лихорадки. Труды ИПВЭ АМН СССР, М., т.19, с.100-101.

7. Возжаева А.П., Аваков А.Л., Жигульская И.Ф. и др. (1955). О случаях0 геморрагической лихорадки в Астраханской области. Тезисы докл. 32ой научной сессии Астраханского мед.инст. Астрахань, с.28.

8. Вышемирский О.И. (1993). Анализ антигенной структуры штаммоввируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки с помощью моноклональных антител. Диссертация на соиск уч.ст.канд.мед.н., Москва.

9. Гайдамович С .Я., Львова А.И., Обухова В.Р. и др. (1969). Антитела кф арбовирусам в асците иммунизированных мышей. Вопр. вирусол., №6,с.676-683.

10. Гайдамович С.Я., Мельнткова Е.Э., Шуткова Т.М. и др. (1989).

11. Характеристика моноклональных антител, индуцированных вирусом крымской геморрагической лихорадки. Вопр.вирусол., №2, с. 201-204.

12. Гайдамович С.Я., Клисенко Г.А., Шаноян Н.К. и др. (1974). Реакциянепрямой гемагглютинации с вирусами КГЛ-Конго. Вопр. вирусол., # №6,705с.

13. Гайдамович С.Я., Мельникова Е.Э.,.Шуткова Т.М и др. (1989). Характеристика моноклональных антител, индуцированных вирусом крымской геморрагической лихорадки. Вопр. вирусол., №3, с.201-204.

14. Евченко Ю.М., Львов Д.К., Сысолятина Г.В. и др.(2001). Зараженность клещей Hyalomma marginatum Koch. 1844 вирусом Крымской-Конго геморрагической лихорадки в Ставропольском крае в эпидемический сезон 2000г. Вопр.вирусол., №45(4), с. 18-19.

15. Жарких А.А. (1985). Методы филогенетического анализа генов и белков. Молек.биология. Итоги науки и техники. ВИНИТИ; М.

16. Карапетян P.M., Воробьев А.Т., Семашко И.В. и др. (1971 ).Случай КГЛ в Армянской ССР. Вирусные геморрагические лихорадки. Труды ИПВЭ АМН СССР, М., т. 19, с.260-265.

17. Карась Ф.Р., Герштейн В.И., Чиров П.А. и др. (1980) Материалы изучения кровососущих клещей и хранителей арбовирусов в природных очагах Киргизии. Экология вирусов Казахстана и Средней Азии. Алма-Ата, с. 10-14.

18. Каримов С.К., Кирющенко Г.В., Реформацкая А.Ф. (1975). Случаи лабораторного заражения вирусом крымской геморрагической лихорадки. Журн.Микробиол., №5, с. 136-137.

19. Каримов С.К., Генис Д.Е., Бекзатов К.Н. и др. (1988). Текущее положение и перспективы изучения Крымской лихорадки. Вирусы и вирусная инфекция. Труды НИИ ЕМИБ №35, с. 129-133. Алма-Ата, министерство здравоохранения Казахской советской Республики.

20. Каримов С.К., Дерновой А.Г., Дурумбетов Е.Е. (2001) Арбовирусы и арбовирусные заболевания республики Казахстан. Алматы, с.74-77.

21. Кимура М. Молекулярная эволюция (1985). Теория нейтральности. М.: Мир.

22. Ковальский Г.Н., Рыбкина Л.Г. (1957). Заболевания из группы геморрагических лихорадок в степном районе Краснодарского края. Труды Кубанского медицинского института, Краснодар, т. 15, с.204-209.

23. Колобухина Jl.В., Евченко Ю.М., Вышемирский О.И. и др. (2001). Изоляция трех штаммов вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки от больных в Ставропольском крае во время эпидемической вспышки в 2000г. Вопр.вирусол., №45(4), с. 15-19.

24. Куйма А.У., Пак Т.П. (1975). Биоеценотические взаимоотношения вируса КГ Л, иксодовых клещей и их прокормителей. Медицинская вирусология. Труды ИПВЭ АМН СССР. М., т.22, вып.З, с.107-113.

25. Кучин В.В.(1973). Распространение крымской геморрагической лихорадки. Арбовирусные инфекции на Юго-Востоке Европейской части РСФСР. Ленинград, с.3-13.

26. Лаврова Н.А., Наволокин О.В. (1986). Твердофазный иммуноферментный метод для выявления арбовирусов и антител к ним. Арбовирусы. М., с. 146-153.

27. Лебедев А.Д., Пак Т.П., Бируля Н.Б. (1977). Экологическая география вирусов Крымской геморрагической лихорадки. ВИНИТИ. Итоги науки и техники. Сер.: Медицинская география. М., т.8, с.122-169.

28. Мазрухо Т.В., Громашевский В.Л., Говорухина М.Ю. и др. (2001). Зараженность клещей Hyalomma marginatum Koch. 1844 вирусом Крымской-Конго геморрагической лихорадки в Ростовской области в эпидемический сезон 2000г. Вопр.вирусол., т.45(4), с.20-21.

29. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Д.(1984). Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М.: Мир.

30. Мелиев А., Шермухамедов Д.А., Максумов С.С. и др.(1980). Изучение Крымской геморрагической лихорадки в Кашкадарьинской области Узбекской ССР. Экология вирусов Казахстана и Средней Азии. Алма-Ата, с.30-35.

31. Мирзоева Н.М. (1978). Итоги изучения арбовирусных инфекций в Азербайджане. Арбовирусы. Труды НИИ вирусологии им Д.И. Ивановского АМН СССР. М.,с.27-31.

32. Москвитина Э.А., Водяницкая С.Ю., Ломов Ю.М. и др. (2002). Крымская геморрагическая лихорадка в Ростовской области: эпидемиологическое районирование и активность природного очага. Жур. Микробиол., №6, с.26-30.

33. Онищенко Г.Г., Москвитина Э.А., Ломов Ю.М. и др. (2000). Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, №80, с.3-13.

34. Онищенко Г.Г., Тихонов Н.Г., Смирнова С.Е. и др. (1999). Результаты исследования сывороток крови больных из станицы Обливской Ростовской области. В: Актуальные проблемы медицинской вирусологии. Сб. Тез., 23-25 ноября 1999г., Москва, с.76.

35. Онищенко Г.Г.(2001). Об эпидемиологической ситуации и заболеваемости природноочаговыми инфекциями а Российской Федерации и мерах по их профилактике. Журн.микробиол., №3, с.22-28.

36. Онищенко Г.Г., Марков В.И., Меркулов В.А. и др. (2001). Выделение и идентификация вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки в Ставропольском крае. Журн.микробиол., №6, с.6-11.

37. Онищенко Г.Г., Ефременко В.И., Ковалев Н.Г. и др.(2001). Эпидемиологические особенности крымской геморрагической лихорадки в Ставропольском крае в 1999-2000гг.

38. Пак Т.П., Михайлова Л.И. (1973). Крымская геморрагическая лихорадка в Таджикистане. Душанбе, «Ифрон», -154с.

39. Пак Т.П. (1977). Экология вируса крымской геморрагической лихорадки. Автореф. дисс. соиск. учен. степ. докт. мед. наук. М., 36 с.

40. Пак Т.Щ1980). Обзор контактных заражений Крымской геморрагической лихорадкой и лихорадкой Конго. Экология вирусов Казахстана и Средней Азии. Алма-Ата, с.26-29.

41. Платонов А.Е., Карань Л.С., Тялина Ю.Ю. и др. (2002). ГГТТР-диагностика крымской геморрагической лихорадки. Генодиагностика инфекционных заболеваний. Сб. тезисов, Москва, с.291-292.

42. Смирнова С.Е., Караванов А.С. (1985). Индикация антигена вируса крымской геморрагической лихорадки твердофазным энзимным иммуносорбентным методом. Acta virologyca,, т.29, №1, с.87-90.

43. Смирнова С.Е., Караванов А.С., Зимина Ю.В. и др. (1991). Изучение вирусофорности клещей-переносчиков возбудителя крымской геморрагической лихорадки. Мед.параз. и параз. бол-ни, №1, с.32-34.

44. Смирнова С.Е., Караванов А.С., Гмыль JI.B. (1997). Адаптация вируса Крымской-Конголезской геморрагической лихорадки к культуре клеток Vero-E6 . Вопросы вирусологии, № , с.280-283.

45. Сомов Г.П., Беседнова Н.Н. (1981). Геморрагические лихорадки. М., Медицина, -199 с.

46. Темирбеков Ж.Т., Добрица П.Г., Контарук В.М. и др. (1971). Исследование крымской геморрагической лихорадки в Чимкентской области Казахской ССР. Сообщение 1. Эпидемиологическая характеристика. Труды ИПВЭ АМН СССР. М., т. 19, с. 160-166.

47. Ходукин Н.И. Хозинский В.И. (1949). Исследования при геморрагической лихорадке в Узбекистане. Тезисы докл. 4-ой научной сессии Института неврологии АМН СССР, М.

48. Цилинский Я. Я. (1988). Популяционная структура и эволюция вируса. М.,

49. Чумаков М.П., Бутенко A.M., Шалунова Н.В. (1968). Новые данные о вирусе возбудителе крымской геморрагической лихорадки. Вопр. вирусол., №13, -377 с.

50. Чумаков М.П., Башкирцев В.Н., Голгер Э.И. и др. (1974) Изоляция вирусов крымской геморрагической лихорадки и лихорадки Западного Нила из клещей, собранных в Молдавии. Сб. Медицинская вирусология. М., т.22, вып.2, с.45-49.

51. Шуткова Т.М., Мельникова Е.Э., Гайдамович С.Я. и др.(1989). Гибридомы, продуцирующие моноклональные антитела к вирусу крымской геморрагической лихорадки. Журн.микробиол., т.6, с. 102106.

52. Яровой J1.B.(1965). Клинико-эпидемиологическая характеристика геморрагической лихорадки в Ставропольском крае. Труды ИПВЭ АМН СССР. М., т.7, с.31-34.

53. El-Azazy ОМЕ , Scrimgeour Е.М. (1997) Crimean-Congo haemorrhagic fever virus infection in the western province of Saudi Arabia. Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene, N91, p.275 278.

54. Antoniadis A., Casals J.(1982). Serological evidence of human infection with Congo-Crimean hemorrhagic fever virus in Greece . Am. J.Trop. Med.

55. Hyg., v.31, N 5. p.1066 -1067.

56. Baskerville A, Satti A, Murphy FA, Simpson DI (1981). Congo-Crimean haemorrhagic fever in Dubai: histopathological studies. J. Clin. Pathol., v.34, N.8, p.871-874

57. Beaty D.J, Bishop D.H. (1988). Bunyavirus vector interaction. Virus Res., N19, p.289-302.

58. Buckley S.M. (1974). Cross plaque neutralization test with cloned Crimean Hemorrhagic Congo (CHFC) and Hazara virus. Proc.Soc.Exp.Biol.Med., v.146, p. 594-600.Ф

59. Burney M.I., Ghafoor A., Saleen M. et al. (1980). Nosocomial outbreak of viral hemorrhagic fever caused by Crimean homorrhagic fever-Congo virus in Pakistan, January 1976. Am.J.Trop.Med.Hyg., v.29, p.941-947.

60. Burt F.J, Leman P.A, Smith J.F, Swanepoel R. (1998). The use of a reverse transcription-polymerase chain reaction for the detection of viral nucleic acid in the diagnosis of Crimean-Congo haemorrhagic fever. J Virol Methods v.70, N2, p.129-137.

61. Casals J. (1969). Antigenic similarity between the virus cansing Crimeanhemorrhagic fever and Congo virus .Proc.Soc. Exp. Biol. Med. v. 131, N1. p. 233 236.

62. Casals J., Tignor G.H. (1974). Neutralization and haemagglutination-inhibition test with Crimean Haemorrhagic fever-Congo virus. Pros. Soc. Biol. Med., N145, p.960-966.

63. Clerx J.P, Casals J, Bishop D.H. (1981). Structural characteristics of

64. A nairoviruses (genus Nairovirus, Bunyaviridae). J Gen. Virol., v.55, N 1,p.165-78

65. Darwish MA, Hoogstraal H, Roberts TJ. et al. (1983). A sero-epidemiological survey for Bunyaviridae and certain other arboviruses in Pakistan. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg.,v.77, N4, p.446-50.

66. Digoutte J.P., Saluzzo J.F., Adam F. et al. (1985). Recent data on hemorrhagic fevers in West Africa. Bull Soc Pathol Exot Filiales ,v.78, N.52., p.874-878.

67. Drosten, С., Minnak D., Emmerich P., Schmitz H. (2002). Crimean-Congo hemorrhagic fever in Kosovo. Journal of Clinical Microbiology, v. 40, p.l 122-1123.

68. Hjelle В., Spiropoulou C.F., Torrez-Martinez N. et al. (1994). Detection Of Muerto Canyon virus RNA in peripheral blood mononuclear cells from patients with hantavirus pulmonary syndrome. J.Infect.Dis., v. 170, p. 10131017.

69. Hodgson, L. 1992. The sequence, genomic organization, and expression of the small genomic segment of Crimean-Congo hemorrhagic fever virus for the potential use as a diagnostic antigen. M.S. thesis. Hood College, Frederick.

70. Horling J., Lundguist A., Persson K. et al. (1995). Detection and subsequent sequencing of Puumala virus from human speciment by PCR. J. Clin. Microbiol., v.33, p.277-282.

71. Hoogstraal H. (1979). The epidemiology of tick-borne Crimean-Congo hemorrhagic fever in Asia, Europa, and Africa. J.med. Entomol., v. 15, N4. p. 307-417.

72. Gear JH, Thomson PD, Hopp M, et al. (1982). Congo-Crimean haemorrhagic fever in South Africa. Report of a fatal case in the Transvaal. S. Afr. Med. J.v.62, N16, p.576-580.

73. Gligic A., Stamatovich L., Obradovich M. et al. (1977). The first isolation of Crimean hemorragic fever virus in Yugoslavia. Vojnosanit Pregl., v.34, p. 318-321.

74. Gordon S.W., Linthicum K.J., Moulton J.R. (1993). Transmission of Crimean-Congo hemorrhagic fever virus in two species of Hyalomma ticks from infected adults to cofeeding immature forms. Am. J. Trop. Med. Hyg., v.48, N4, p.576-580.

75. Kumar S., Tamura K., Nei M.(1993). MEGA: molecular evolutionary genetics analysis. Version 1.02 (computer program). University Park, PA: Penn. State Univ.

76. Logan T.M., Linthicum K.J., Bailey C.L. et al. (1989). Experimental transmission of Crimean Congo hemorrhagic fever virus by Hyalomma truncatum Koch. Am. J. Trop. Med. Hyg., v. 40, N2. p. 207 -212.

77. Ma В., Hang C., Papa A. (2001). Sequencing and comparative analysis of the complete glicoprotein gene of three Crimean-Congo hemorrhagic fever virus Chinese isolates (in Chinese). Zhonghua Shi Yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi, v. 15, p. 195-111.

78. Maxam A.M., Gilbert W.G. (1977). A new method for sequencing DNA. Proc.Natl.Acad.Sci.,USA, v.74, N2, p.560-564.

79. Marriott A.C., Ward V.K., Higgs S., Nuttall P.A. (1990). RNA probes detect nucleotide sequence homology between members of two different nairovirus serogroups. Virus Res., v. 16, N1, p.77 81.

80. Marriott A. C., Nuttall P. A. (1992). Comparison of the S RNA segments and nucleoprotein sequences of Crimean-Congo haemorrhagic fever, Hazara and Dugbe viruses. Virology, v. 189, p.795-799.

81. Marriott А. С., Polyzoni Т., Antoniadis A. et al. (1994). Detection of human antibodies to Crimean-Congo haemorrhagic fever virus using expressed viral nucleocapsid protein. Journal of General Virology, v.75, p.2157-2116.

82. Marriott A. C., Nuttall P. A. (1996). Molecular biology of nairoviruses. The Bunyaviridae, p. 91-104. Edited by R. M. Elliott., New York: Plenum Press.

83. Mathiot C.C., Fontenille D., Digoute J.P. et al. (1988). First isolation of Congo-Crimean haemorrhagic fever virus in Madagascar. Ann. Pasteur. Virol., v.139, N2, p. 239-241.

84. Morikawa S., Qing Т., Xinqin Z. et al. (2002). Genetic diversity of M RNA segment among Crimean-Congo Hemorrhagic fever virus isolates in China. Virology, v.296, p. 159-164.

85. Morrill JC, Johnson BK, Hyams C. et al. (1991). Serological evidence of arboviral infections among humans of coastal Kenya. J. Trop. Med. Hyg., v.94, N.3, p.166-168.

86. Morrill J.C, Soliman A.K, Imam I.Z. et al. (1990). Serological evidence of Crimean-Congo haemorrhagic fever viral infection among camels imported into Egypt. J. Trop. Med. Hyg., v.93, N3, p.201-204.

87. Al-Nakib W., Lloyd G., El-Mekki A. et al. (1984). Preliminary report on arbovirus -antibody prevalence among patients in Kuwait: evidence of Congo/Crimean virus infection. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg.,v.78, p. 474476.

88. Oldfield, E. С., M. R. Wallace, К. C. Hyams, et al. (1991). Endemic infectious diseases of the Middle East. Rev. Infect. Dis., v. 13, N.3, p. 199217.

89. Papa A., Bino S., Llagami A. et al. (2002). Crimean-congo hemorrhagic Fever in Albania, 2001. Eur J. Clin. Microbiol. Infect. Dis., v.21, N8, p.603-606.

90. Papa A., Ma В., Kouidou S. et al. (2002). Genetic characterization of the M RNA segment of Crimean Congo hemorrhagic fever virus strains, China. Emerging Infectious Diseases, v.8, p. 50-53.

91. Anna Papa, Bojana Bozovic, Vassiliki Pavlidou, et al. (2002). Genetic Detection and Isolation of Crimean-Congo hemorrhagic fever virus, Kosovo, Yugoslavia. Emerging Infectious Diseases, v.8, p. 852-854.

92. Roderic D.M. Page and Edvard C.Holmes (1998). Molecular Evolution. Blackwell Science Ltd a Blackwell Publishing company.96. "RNA methodologies " Robert E., Farrell. Jr. (1998). Academic Press., p.67-68.

93. Rodrigues FM, Padbidri VS, Ghalsasi GR. Et al. (1986). Prevalence of Crimean haemorrhagic fever—Congo virus in Jammu & Kashmir state. Indian J. Med. Res., v.84, p. 134-8.

94. Rodriguez L.L., Maupin G.O., Ksiazek T.G. et al. (1997). Molecular investigation of a multisource outbreak of Crimean-Congo hemorrhagic fever in the United Arab Emirates. American Journal of Tropical Medicine• and Hygiene, v. 57, p.512 518.

95. Rychlik W., Rhoads R.E. (1989). A computer program for choosingoptimal oligonucleotides for filter hybridization, sequencing and in vitro amplification of DNA. Nucl. Acids Res., v. 17, p. 8543.

96. Salluzo J.F., Digoute J,, Cornet M. (1984). Isolation of Crimean-Congo haemorrhagic fever and Rift Vallery fever virus in Upper Volta. Lancet, v. 1. 119 p.

97. Salluzo J.F, Aurby P., Aubert H., Digoute J. (1985). Crimean-Congo i. hemmorrhagic fever in Africa. Apropos of case with hemorragicmanifestation in Mauritania . Bull. Soc. Pathol. Exot.Filiales., v. 78, N 2, p. 164-169.

98. Salluzo J.F., Le-Gueno B. (1987). Rapid diagnosis of human Crimean -Congo hemorraghic fever and detection of the vims in naturally infected ticks . J. Clin microbiol., v. 25, N 5, p. 922-924.

99. Saluzzo J.F., Leguenno В., Van der Groen G. (1988). Use of heat inactivatidviral haemorrhagic fever antigens in serological assays. J.Virol.Methods, v. 22, N2-3, p. 165-172.

100. Scrimgeour E.M, Zaki A, Mehta F.R. et al. (1996). Crimean-Congo haemorrhagic fever in Oman. Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene, v.90, p.290- 291.

101. Shepherd A.J., Swanepoel R., Leman P.A., Sheferd S.P. (1987). Field and laboratory investigation of Crimean-Congo haemorrhagic fever virus (Nairovirus, family Bunyaviridae) infection in birds. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg., v. 81, N6, p. 1004-1007.

102. Simpson D.L.H., Knight E.M., Courtois G. et al. (1967). Congo virus:a hitherto undescribed virus occurring in Africa. Part 1. Human isolations-clinical notes. East Afr.Med.J., v.44, p.87-92.

103. Smith J.F., Pesik N.T., Hodgson L.A. and R.Bethke (1989). Epytope anlysisjof CCHF virus and related Nairoviruses. Abstr. 2 simposium on Arboviruses in the Mediterranean Countries, 24-29 September, Dubrovnik, p.10.

104. Suleiman MNEN, Muscar-Baron J.M., Harries J.R. et al. (1980). Congo/Crimean hemorrhagic fever in Dubai An outbreak at the Rashid hospital. Lancet ii, p.939-941.

105. Sureau P., Klein J.M. et al. (1980). Arboviruses in Iran. Med. Trop. (Mars). V.40, N.5, p.549-554.

106. Swanepoel R, Struthers JK, Shepherd AJ. et al. (1983). Crimean-congo hemorrhagic fever in South Africa. Am. J. Trop. Med. Hyg.,v.32, N6, p.1407-1415.

107. Swanepoel R., Shepherd A.J., Leman P.A. et al. (1987). Epidemiologic and clinical features of Crimean-Congo hemorrhagic fever in southern Africa. Am. J. Trop. Med. Hyg., v. 36, N1, p. 120-132.

108. Tantawi H.H., Al-Moslin M.U., Al-Janabi N Y. et al. (1980). Крымско-Конголезская гемморагическая лихорадка в Ираке: выделение, идентификация и электронно-микроскопическое изучение вируса . Acta Virol., v. 24, N 6, р.464-467.

109. Tikriti SK, Hassan FK, Moslih IM. et.al. (1980). Congo/Crimean haemorrhagic fever in Iraq: a seroepidemiological survey. J. Trop. Med. Hyg., v.84, N.3,p.l 17-120.

110. Tignor G.H., .Smith A.L, 4 Casals J. et.al. (1980). Close relationship of Crimean hemorrhagic fever-Congo (CHF-C) virus strain by neutralizing antibody assay. Am.J.Trop.Med.Hyg., v.29, N4, p.676-685.

111. Vesenjak-Hiijan J., Punda-Polic V., Dobe M. (1991). Geographical distribution of arboviruses in Yugoslavia. J Hyg Epidemiol Microbiol Immunol., v.35, N2, p. 129-140.

112. Ward V.K., Marriot A.C., El-ghorr A.A. et al. (1990). Coding strategy of the S RNA segment of Dugbe virus (nairovirus, Bunyaviridae). Virology, v. 175, N2, p. 518-524.

113. Yen Y.C., Kong L.X., Lee L. et al. (1985). Characteristics of Crimean-Congo hemorrhagic fever virus (Xinjiang strain) in China . Am. J. Trop. Med. Hyg. v. 34, N 6, p.l 179-1182.

114. Zeller H.G., Karabatsos N., Calisher С.Щ1989). Electron microscopic and antigenic studies of uncharacterized viruses that place viruses in the family Bunyaviridae. Arch. Virol., v. 108, N 2., p.211-227.