Исследование биофизических аспектов пространственной динамики роста фибринового сгустка in-vitro тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.02, кандидат биологических наук Карамзин, Сергей Сергеевич

• Карамзин, Сергей Сергеевич
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Карамзин, Сергей Сергеевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Система свертывания крови.

1.1.1. Общее представление о системе гемостаза человека.

1.1.2. Плазменное звено системы гемостаза.

1.1.2.1. Активация системы свертывания.

1.1.2.2. Пространственный рост гемостатического сгустка.

1.1.2.3. Торможение роста и локализация сгустка.

1.1.2.4. Влияние диффузии на свертывание.

1.1.2.5. Роль тромбина в регуляции процесса свертывания.

1.1.2.6. Влияние потока на плазменное звено системы гемостаза.

1.2. Нарушения системы свертывания крови.

1.2.1. Гемофилии.

1.2.2. Гиперкоагуляционные состояния.

1.2.2.1. Гиперкоагуляционные состояния при инфекции и сепсисе.

1.2.2.2. Злокачественные заболевания.

1.2.3. ДВС синдром.

1.3. Методы лабораторной диагностики нарушений плазменного звена системы гемостаза.

1.3.1. Физическая основа современных методов диагностики.

1.3.2. Скриннинговые коагуляционные тесты.

1.3.3. Тесты активации свертывания.

1.3.4. Тесты комплексной оценки состояния гемостаза.

1.3.4.1. Тромбоэластография.

1.3.4.2. Тест генерации тромбина.

1.3.5. Сравнение существующих методов диагностики.

1.3.6. Метод пространственной динамики свертывания крови.

1.4. Постановка задачи.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Материалы.

2.2. Доноры крови.

2.3. Получение плазмы крови.

2.4. Рекальцификация плазмы.

2.5. Метод измерения.

2.6. Активатор свертывания.

2.7.Измерительная кювета.

2.8. Измерительный прибор.

2.9. Программное обеспечение.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.1. Прибор для исследования пространственной динамики свертывания.

3.1.1. Измерительная кювета.

3.1.2. Активатор свертывания.

3.1.3. Структурно-функциональная схема прибора для исследования пространственной динамики свертывания.

3.1.4. Основные узлы и блоки измерительного прибора.

3.1.4.1. Блок термостатирования.

3.1.4.2. Блок освещения.

3.1.4.3. Блок регистрации.

3.1.4.4. Блок управления.

3.1.4.5. Внутренняя компоновка прибора.

3.2. Обработка результатов и вычисление количественных характеристик фаз.

3.2.1. Пространственная динамика роста фибринового сгустка.

3.2.2. Двумерная кинетика образования тромбина.

3.3. Выходные характеристики прибора и протоколы проведения исследования.

3.3.1. Внешний вид и технические характеристики прибора.

3.3.2. Протокол измерения пространственной динамики роста фибринового сгустка

3.3.3. Протокол исследования кинетики генерации тромбина.

3.3.4. Измерение эндогенного тромбинового потенциала.

3.4. Измерение параметров пространственной динамики свертывания у здоровых доноров.

3.5. Примеры измерения пространственной динамики свертывания в случае различных патологий.

3.5.1. Пространственная динамика свертывания плазмы у больных тяжелой формой гемофилии А.

3.5.2. Пространственная динамика свертывания при сепсисе.

3.5.3. Пространственная динамика свертывания при онкологических заболеваниях и химиотерапии.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. Фазы процесса пространственного роста сгустка.

4.2. Применение прибора в клинической практике.

4.3. Применение прибора в научно-исследовательской работе.

4.4. Перспективы развития.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование биофизических аспектов пространственной динамики роста фибринового сгустка in-vitro»

Основная задача системы свертывания крови - предотвратить кровопотерю при нарушении целостности сосудистого русла, «залепив» место повреждения плотным гемостатическим сгустком. Это достигается за счет локального перехода плазмы крови из жидкого в гелеобразное состояние в районе места повреждения. Любое повреждение сосудистого русла приводит к тому, что кровь вступает в контакт со специальным трансмембранным белком — тканевым фактором, и запускает систему ферментативных реакций свертывания, приводящую к формированию непроницаемого для жидкости гемостатического сгустка. Система реакций свертывания состоит из нескольких десятков белков, взаимодействующих друг с другом во множестве реакций. Такое устройство системы необходимо для эффективного управления процессом образования фибринового сгустка. В норме сгусток фиксированного размера формируется только в месте повреждения, и свертывание крови не затрагивает другие области кровотока. Теоретические работы по модульной декомпозиции данной системы позволяют выделить три основные фазы процесса свертывания: фазу активации, фазу пространственного роста и фазу торможения роста сгустка. При этом в каждой фазе существенную роль играют разные биохимические реакции, а сами фазы выделены как во времени, сменяя друг друга, так и в пространстве, происходя в разных частях сгустка. Представления о фазах процесса свертывания и роли различных белков и реакций в каждой из фаз сформировались в основном в результате работ по математическому моделированию данной системы и лишь частично подтверждены экспериментально. Эффективным методом экспериментальной проверки гипотезы о многофазности процесса свертывания, который позволил бы получить количественные характеристики этих фаз, может служить метод исследования пространственной динамики свертывания in-vitro. Сущность метода заключается в локальной активации свертывания и регистрации светорассеяния от растущего фибринового сгустка в тонком . слое неперемешиваемой плазмы крови. Однако качественной технической реализации данного экспериментального метода до сих пор предложено не было. Созданные ранее экспериментальные системы имели ряд существенных недостатков, приводящих к большим погрешностям при измерении параметров пространственной динамики свертывания. А использование культуры клеток (фибробластов) в качестве активатора свертывания делало метод трудоемким и снижало воспроизводимость результатов измерения.

Задача дифференцировки и количественной оценки фаз процесса свертывания становится особенно актуальной в свете представлений о том, что различные патологии по-разному влияют на активность отдельных компонент системы свертывания, приводя к выраженным изменениям в различных фазах процесса. Нарушения в механизмах свертывания клинически проявляются либо кровотечением, либо тромбозом, либо одновременно обоими этими явлениями и являются одной из ведущих причин смертности в мире. Во многом это обусловлено тем, что существующие методы диагностики нарушений свертывания далеки от совершенства. В основе большинства из них лежит принцип определения времени полного свертывания образца крови или плазмы при добавлении вещества-активатора и его полном перемешивании в пробирке. Однако в организме сгусток пространственно образуется не во всем объеме крови, а строго локально — только в небольшой зоне повреждения стенки кровеносного сосуда. При этом диффузия факторов свертывания играет важную роль в процессе пространственного роста сгустка и его локализации. Основным недостатком существующих методов является то, что они плохо отражают реальное состояние гемостаза in-vivo и мало чувствительны к гиперкоагуляционным состояниям системы свертывания. Эти методы не позволяет учесть пространственную неоднородность процесса свертывания: разделить фазы инициации, пространственного роста и остановки роста сгустка и тем более провести их количественную оценку.

Цель работы: экспериментальное исследование пространственной динамики роста фибринового сгустка in-vitro в условиях, близких к условиям свертывания крови in-vivo, и создание измерительного прибора для количественной оценки основных фаз процесса свертывания крови в норме и патологии.

Задачи исследования:

1. Разработать и создать измерительный прибор, способный регистрировать и количественно оценивать пространственную динамику свертывания плазмы крови in-vitro.

2. Проверить теоретические представления о существовании фазы активации и фазы пространственного роста фибринового сгустка.

3. Определить границы основных количественных характеристик фаз пространственного роста фибринового сгустка у здоровых лиц и показать чувствительность прибора к гипо- и гиперкоагуляционным состояниям в случае различных нарушений в системе гемостаза.

Научная новизна:

Разработан и создан новый измерительный прибор, позволяющий исследовать пространственную динамику роста фибринового сгустка в плазме крови in-vitro (заявки №2008144908, №2008144909 о выдаче патента РФ на изобретение - положительное заключение о выдаче патентов от 02.11.2009 и 03.12.2009). Получено экспериментальное подтверждение существования основных фаз процесса свертывания и предложены способы их численной оценки. Показана высокая чувствительность прибора как к гипо-. так и гиперкоагуляционным состояниям, возникающим при различных патологиях (гемофилии, сепсис, онкологические заболевания). Показана возможность измерения прибором не только пространственных особенностей формирования конечного продукта работы системы свертывания - фибринового сгустка, но и возможность одновременного исследования кинетики образования главного фермента этой системы - тромбина, определяющего конечные физические свойства сгустка. Прибор также позволяет проводить измерение кривой генерации тромбина в гомогенной постановке и вычислять эндогенный тромбиновый потенциал — основной параметр, вычисляемый в диагностическом тесте генерации тромбина, получающем широкое распространение в лабораторной диагностике нарушений гемостаза.

Научно-практическое значение:

Разработанный прибор позволяет регистрировать нарушения в плазменной системе гемостаза, недоступные для существующих ныне подходов, и служит важным дополнением к существующим методам диагностики. Возможность in-vitro измерять все пространственно-динамические параметры образования фибринового сгустка в плазме конкретного человека - плотность сгустка, скорость его роста и др. — предоставило в руки врача инструмент огромной предсказательной силы. Использование данных приборов в клинической практике позволит коренным образом улучшить качество диагностики нарушений гемостаза и снизить смертность и инвалидность среди населения. Кроме того, прибор позволяет in-vitro изучать влияние лекарственных препаратов на систему свертывания в условиях близких к физиологическим условиям, предоставляя важную информацию о механизмах их действия. Применение флуорогенных субстратов позволяет получать детальную информацию о> пространственной кинетике отдельных факторов свертывания в процессе роста фибринового сгустка (тромбина) и тем самым верифицировать математические реакционно-диффузные модели процесса свертывания.

Положения, выносимые на защиту:

1. Проведено экспериментальное исследование пространственной динамики свертывания плазмы крови in-vitro в условиях, близких к условиям свертывания крови in-vivo. Подтверждена гипотеза о существовании фазы активации и фазы пространственного роста фибринового сгустка. Получены количественные характеристики фаз.

2. Сформулированы технические требования к прибору, позволяющему проводить диагностику нарушений свертывания при различных патологиях. Созданы опытные образцы приборов.

3. Показана высокая информативность результатов измерения параметров пространственной динамики свертывания при различных патологиях гемостаза и чувствительность прибора как к гипо-, так и к гиперкоагуляционным состояниям.

4. Прибор позволяет исследовать пространственную кинетику образования тромбина в процессе роста фибринового сгустка, а также измерять эндогенного тромбиновый потенциал исследуемого образца плазмы.

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Карамзин, Сергей Сергеевич

Выводы

1) Разработанный прибор позволяет регистрировать пространственную динамику свертывания плазмы крови in-vitro в условиях близких к условиям in-vivo и исследовать двумерную кинетику образования тромбина в процессе роста фибринового сгустка.

2) Процесс свертывания крови состоит из нескольких фаз, выделенных во времени и в пространстве. Получены количественные характеристики фазы активации и фазы пространственного роста фибринового сгустка.

3) Прибор обладает чувствительностью как к гипо-, так и к гиперкоагуляционным состояниям системы свертывания, возникающим при различных патологиях.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Карамзин, Сергей Сергеевич, 2010 год

1. Шмидт Р, Тевс Г. Физиология человека (том 2). Москва: Мир, 1996.

2. Perry D, Pasi KJ. Hemostasis and thrombosis protocols. Totowa, N.J: Humana Press, 1999.

3. Colman RW, Hirsh J, Marder VJ. Saltzman EW. Hemostasis and Thrombosis:Basic Principles and Clinical Practice. Philadelphia: Lippincott Company, 1994.

4. Dempfle CE, Knoebl P. Blood coagulation and inflammation in critical illness the importance of the protein С pathway. Bremen u.a.: UNI-MED Vei l, 2008.

5. Долгов BB, Свирин ПВ. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза. Москва: ООО «Издательство «Триада», 2005.

6. Шиффман ФДж. Патофизиология крови. СПб: Бином, 2000.

7. Victor W.M.van Hinsbergh. The endothelium: vascular control of haemostasis. European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology 2001; 95: 198-201.

8. Becker BF, ITeindl B, Kupatt C. Zahler S. Endothelial function and hemostasis. Z Kardiol 2000; 89: 160-167.

9. Alan D.Michelson. Plateletes, second edition. Elsevier, 2007.

10. Heemskerk JW, Bevers EM, Lindhout T. Platelet activation and blood coagulation. Thromb Haemost 2002; 88: 186-193.

11. Smith RD, Owen WG. Platelet responses to compound interactions with thrombin. Biochemistry 1999; 38: 8936-8947.

12. Butenas S, Mann KG. Blood coagulation. Biochemistry (Mosc ) 2002; 67: 3-12.

13. DeLoughery TG. Hemostasis and thrombosis. Georgetown, Tex: Landes Bioscience, 2004.

14. Kalafatis M, Swords NA, Rand MD, Mann KG. Membrane-dependent reactions in blood coagulation: role of the vitamin K-dependent enzyme complexes. Biochim Biophys Acta 1994; 1227: 113-129.

15. Bajzar L. Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor and an antifibrinolytic pathway. Arterioscler Thromb Vase Biol 2000; 20: 2511-2518.

16. Butenas S, Branda RF, van't Veer C, Cawthern KM, Mann KG. Platelets and phospholipids in tissue factor-initiated thrombin generation. Thromb Haemost 2001; 86: 660-667.

17. Mann KG, Brummel K, Butenas S. What is all that thrombin for? J Thromb Haemost 2003; 1: 1504-1514.

18. Nesheim M. Thrombin and fibrinolysis, est 2003; 124: 33S-39S.

19. Shrivastava S, McVey GH, Dorling A. The Interface Between Coagulation and Immunity. American Journal of Transplantation 2007; 7: 499-506.

20. Strukova S. Blood coagulation-dependent inflammation. Coagulation-dependent inflammation and inflammation-dependent thrombosis, ont Biosci 2006; 11: 59-80.

21. Ryan J, Geczy C. Coagulation and the expression of cell-mediated immunity, munol Cell Biol 1987; 65 (Pt 2): 127-139.

22. Colman RW, Schmaier AH. Contact system: a vascular biology modulator with anticoagulant, pro fibrinolytic, antiadhesive, and proinflammatory attributes. Blood 1997; 90: 3819-3843.

23. Пантелеев MA, Атауллаханов ФИ. Свертывание крови: биохимические основы. Клиническая онкогематология 2008; 1(1): 50-62.

24. Баркаган ЗС, Момот АП, Тараненко ИА, Шойхет ЯП. Основы пролонгированной профилактики и терапии тромбоэмболий. Москва: "Ньюдиамед", 2003.

25. Котельников MB. Ведение больных с венозными тромбоэмболиями. Москва: 2006.

26. Балуда ВП, Балуда MB, Деянов ИИ, Тлепшуков ИЛ. Физиология системы гемостаза. Москва: 1995.

27. Mann KG. Biochemistry and Physiology of Blood Coagulation. Thromb Haemost 1999; 82: 165-174.

28. Andrews DA. Low PS. Role of red blood cells in thrombosis. Curr Opin Hematol 1999; 6: 76-82.

29. Bajaj SP, Harmony JA, Martinez-Carrion M, Castellino FJ. Human plasma lipoproteins as accelerators of prothrombin activation. Biol Chem 1976; 251: 5233-5236.

30. Moyer MP, Tracy RP, Tracy PB, van't Veer C. Sparks CE, Mann KG. Plasma lipoproteins support prothrombinase and other procoagulant enzymatic complexes. Arterioscler Thromb Vase Biol 1998; 18: 458-465.

31. Tracy PB, Eide LL, Mann KG. Human prothrombinase complex assembly and function on isolated peripheral blood cell populations. Biol Chem 1985; 260: 2119-2124.

32. Jespersen J, Bertina RM, Haverkate F. Laboratory techniques in thrombosis a manual. Dordrecht: Kluwer Academic Publishers, 1999.

33. Ataullakhanov FI, Guria GT, Sarbash VI, Volkova RI. Spatiotemporal dynamics of clotting and pattern formation in human blood. Biochim Biophys Acta 1998; 1425: 453468.

34. Атауллаханов ФИ, Лобанова EC, Морозова OJI, Шноль ЭЭ, Ермакова ЕА, Бутылин АА, Занкнн АН. Сложные режимы распространения возбуждения и самоорганизации в модели свертывания крови. Успехи физических наук 2007; 177: 87-104.

35. I-Ioffman М, Monroe DM. A cell-based model of hemostasis. Thromb Haemost 2001; 85: 958-965.

36. Hoffman M, Monroe DM. Coagulation 2006: a modern view of hemostasis. Hematol Oncol Clin North Am 2007; 21: 1 -11.

37. Mackman N. Role of Tissue Factor in Hemostasis, Thrombosis, and Vascular Development. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology 2004; 24.

38. Wiiger MT, Prydz H. The changing faces of tissue factor biology. Thromb Haemost 2007; 98: 38-42.

39. Girard TG, Nicholson NS. The role of tissue factor/factor Vila in the pathophysiology of acute thrombotic formation. Current Opinion in Pharmacology 2001; 1: 159-163.

40. Furie В, Furie ВС. Thrombus formation in vivo. J Clin Invest 2005; 115: 3355-3362.

41. Revak SD, Cochrane CG, Bouma BN, Griffin JH. Surface and fluid phase activities of two forms of activated Hageman factor produced during contact activation of plasma. Exp Med 1978; 147: 719-729.

42. Owen CA, Nichols WL, Bowie EJW. A history of blood coagulation. Rochester, Minn: Mayo Foundation for Medical Education and Research, 2001.

43. Renne T, Nieswandt B, Gailani D. The intrinsic pathway of coagulation is essential for thrombus stability in mice, ood Cells Mol Dis 2006; 36: 148-151.

44. Пантелеев MA, Котова ЯН, Токарев AA, Атауллаханов ФИ. Механизмы регуляции свёртывания крови. Терапевтический архив 2008; 7: 88-91.

45. Brummel К, Paradis SG, Butenas S, Mann KG. Thrombin functions during tissue factor-induced blood coagulation. Blood 2002; 100: 148-152.

46. Butenas S, Mann KG. Kinetics of human factor VII activation. Biochemistry 1996; 35: 1904-1910.

47. Monkovic DD, Tracy PB. Activation of human factor V by factor Xa and thrombin. Biochemistry 1990; 29: 1118-1128.

48. Hill-Eubanks DC, Lollar P. von Willebrand factor is a cofactor for thrombin-catalyzed cleavage of the factor VIII light chain. Biol Chcm 1990; 265: 17854-17858.

49. Gailani D, Broze GJ. Jr. Factor XI activation in a revised model of blood coagulation, ience 1991; 253: 909-912.

50. Gailani D, Ho D, Sun MF, Cheng Q, Walsh PN. Model for a factor IX activation complex on blood platelets: dimeric conformation of factor XIa is essential. Blood 2001; 97:3117-3122.

51. Butenas S, van't Veer C, Mann KG. "Normal" thrombin generation. Blood 1999; 94: 2169-2178.

52. Hoffman M, Monroe DM, Oliver JA, Roberts HR. Factors IXa and Xa play distinct roles in tissue factor-dependent initiation of coagulation. Blood 1995; 86: 1794-1801.

53. Ovanesov MV, Lopatina EG, Saenko EL, Ananyeva NM, Ul'yanova LI, Plyushch OP, Butilin AA, Ataullakhanov FI. Effect of factor VIII on tissue factor-initiated spatial clot growth. Thromb Haemost 2003; 89: 235-242.

54. Ovanesov MV, Ananyeva NM, Panteleev MA, Ataullakhanov FI, Saenko EL. Initiation and propagation of coagulation from tissue factor bearing cell monolayers to plasma: initiator cells do not regulate spatial growth rate. J Thromb Haemost 2004; In press.

55. Ovanesov MV, Krasotkina JV, Ul'yanova LI, Abushinova KV, Plyushch OP, Domogatskii SP, Vorob'ev AI, Ataullakhanov FI. Hemophilia A and В are associated with abnormal spatial dynamics of clot growth. Biochim Biophys Acta 2002; 1572: 4557.

56. Ovanesov MV, Ananyeva NM, Panteleev MA, Ataullakhanov FI, Saenko EL. Initiation and propagation of coagulation from tissue factor-bearing cell monolayers to plasma: initiator cells do not regulate spatial growth rate. J Thromb Haemost 2005; 3: 321-331.

57. Zarnitsina VI, Pokhilko AV, Ataullakhanov FI. A mathematical model for the spatio-temporal dynamics of intrinsic pathway of blood coagulation. II. Results. Thromb Res 1996; 84: 333-344.

58. Пантелеев MA, Атауллаханов ФИ. Свертывание крови: методы исследования и механизмы регуляции (часть 2). Клиническая онкогематология 2008; 1(2): 174-181.

59. Bajaj MS, Birktoft JJ, Steer SA, Bajaj SP. Structure and biology of tissue factor pathway inhibitor. Thromb Haemost 2001; 86: 959-972.

60. Walker FJ, Fay PJ. Regulation of blood coagulation by the protein С system. SEB J 1992; 6: 2561-2567.

61. Kastrup CJ, Shen F, Runyon MK, Ismagilov RF. Characterization of the Threshold Response of Initiation of Blood Clotting to Stimulus Patch Size. Biophys J 2007; 93: 2969-2977.

62. Shen F, Kastrup С J, Liu Y, Ismagilov RF. Threshold response of initiation of blood coagulation by tissue factor in patterned microfluidic capillaries is controlled by shear rate. Arterioscler Thromb Vase Biol 2008; 28: 2035-2041.

63. Turitto VT, Iiall CL. Mechanical factors affecting hemostasis and thrombosis. Thromb Res 1998; 92: S25-S31.

64. Caro CG, Pedley IJ, Seed WA. Cardiovascular physiology. In: Guylon AC (editor). Mechanics of Circulation. London: Medical and Technical Publishers, 1974.l'T

65. Weiss HJ, Turitto VT, Baumgartner HR. Role of shear rate and platelets in promoting fibrin formation on rabbit subendothelium. Studies utilizing patients with quantitative and qualitative platelet defects. J Clin Invest 1986; 78: 1072-1082.

66. Воробьев АИ. Рациональная фармакотерапия заболеваний системы крови. Москва: Литтера, 2009.

67. Протоколы ведения больных: болезнь Виллебранда (ГОСТ Р 52600.1-2008) Гемофилия (ГОСТ Р 52600.3-2008). Москва: НЫОДИАМЕД, 2009.

68. Ованесов MB, Красоткина ЮВ, Абушинова KB, Лопатина ЕГ, Коротина НГ. Независимо от пути инициации свертывания при гемофилии нарушена пространственная динамика роста сгуска. Тромбоз, гемостаз и реология 2002; 1: 8791.

69. Атауллаханов ФИ, Воробьев АИ, Бутылин АА, Синауридзе ЕИ, Ованесов MB. Почему дефициты факторов внутреннего пути свертывания приводят к гемофилии. Проблемы гематологии и переливания крови 2003; 1: 7-13.

70. Андреев ЮН. Многоликая гемофилия. Москва: НЫОДИАМЕД, 2006.

71. Bone RC, Balk RA, Cerra FB, Dellinger RP, Fein AM, Knaus WA, Schein RM, Sibbald WJ. Definitions for sepsis and organ failure and guidelines for the use of innovative therapies in sepsis, est 1992; 101: 1644-1655.

72. Schouten M, Wiersinga WJ, Levi M, van der Poll T. Inflammation, endothelium, and coagulation in sepsis. Journal of Leukocyte Biology 2008; 83.

73. Esmon CT, Fukudome K, Mather T, Bode W, Regan L, Steams-Kurosawa D, Kurosawa S. Inflammation, sepsis, and coagulation. Haematalogica 1999; 84: 254-259.

74. McGilvray ID, Rotstein OD. Role of the Coagulation System in the Local and Systemic Inflammatory Response. World J Surg 1998; 22: 186.

75. Levi M, Opal SM. Coagulation abnormalities in critically ill patients. Critical Care 2006; 10.

76. Zeerleder S, Hack E. Wuillemin WA. Disseminated Intravascular Coagulation in Sepsis, est 2005; 128:2864-2875.

77. Carey MJ, Rodgers GM. Disseminated Intravascular Coagulation: Clinical and Laboratory Aspects. American Journal of Hematology 1998; 59: 73.

78. Amaral A, Opal SM, Vincent J-L. Coagulation in sepsis. Intensive Care Med 2004; 30: 1032-1040.

79. Esmon CT. Role of Coagulation Inhibitors in Inflammation. Thromb Haemost 2001; 86: 51-56.

80. Mammen EF. Antithrombin III and sepsis. Intensive Care Me 1998; 24: 649-650.

81. Stief TW, Ijagha O, Weiste B, Herzum I, Renz H. Max M. Analysis of hemostasis alterations in sepsis. Blood Coagulation and Fibrinolysis 2007; 18: 179-186.

82. Letai A, Kuter DJ. Cancer, Coagulation, and Anticoagulation. The Oncologist 1999; 4: 443-449.

83. Zwicker JI, Furie В, Furie ВС. Cancer-associated thrombosis. Critical Reviews in Oncology/Hematology 2007; 62: 126-136.

84. Баркаган ЗС, Шилова АН, Ходоренко CA. Аититромботическая профилактика и терапия в онкологии. Бюллетень сибирской медицины 2003; 3: 9-18.

85. Ruiz MA, Marugan I, Estelles A, Navarro 1, Espana F, Alberola V, Juan LS, Aznar J, Garcia-Conde J. The influence of chemotherapy on plasma coagulation and fibrinolytic system in lung cancer patients. Cancer 1989; 63: 643-648.

86. Баркаган ЗС. Патогенез, диагностика и принципы терапии ДВС синдрома. Materia Medica 1997; 1: 5-14.

87. Васильев СА, Воробьев API, Городецкий ВМ. Протокол диагностики и лечения острого ДВС синдрома. Проблемы гематологии и переливания крови 1999; 3: 4044.

88. Баркаган ЗС, Момот АП. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. Москва: Ныодиамед, 2001.

89. Sterling T.Bennett, Christopher M.Lehman, George M.Rodgers. Laboratory hemostasis a practical guide for pathologists. New York: Springer, 2007.

90. BORN GV. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal. Nature 1962; 194: 927-929.

91. Deutsch HF. PHOTOELECTRIC STUDY OF SOME FACTORS RELATED TO BLOOD CLOTTING. J Clin Invest 1946; 25: 37-44.

92. Kita R, Takahashi A, Kaibara M, Kubota K. Formation of fibrin gel in fibrinogen-thrombin system: static and dynamic light scattering study. Biomacromolecules 2002; 3: 1013-1020.

93. Gogstad GO, Dahl KH, Christophersen A, Bjerke A. Turbidimetric determination of prothrombin time by clotting in a centrifugal analyzer. Clin Chem 1986; 32: 1857-1862.

94. Connelly J A, Buckler MJ. The continuous measurement of resistivity and permittivity of human blood plasma during coagulation. Med Biol Eng 1975; 13: 523-530.

95. Theiss W, Ulmer A. Comparative and direct measurement of the electrical impedance in blood coagulation (author's transl). Thromb Res 1978; 13: 751-765.

96. Ur A. Changes in the electrical impedance of blood during coagulation. Nature 1970; 226: 269-270.

97. Evans PA, Hawkins K, Lawrence M, Williams RL, Barrow MS, Thirumalai N, Williams PR. Rheometry and associated techniques for blood coagulation studies. Med Eng Phys 2008; 30: 671-679.

98. Luddington RJ. Thrombelastography/thromboelastometry. Clin Lab Haematol 2005; 27: 81-90.

99. Wohner N. Role of cellular elements in thrombus formation and dissolution. Cardiovasc Hematol Agents Med Chem 2008; 6: 224-228.

100. Goldsmith HL, Bell DN, Braovac S, Steinberg A, Mcintosh F. Physical and chemical effects of red cells in the shear-induced aggregation of human platelets. Biophys J 1995; 69: 1584-1595.

101. Dubois C, Panicot-Dubois L, Gainor JF, Furie ВС, Furie B. Thrombin-initiated platelet activation in vivo is vWF independent during thrombus formation in a laser injury model. J Clin Invest 2007; 117: 953-960.

102. Falati S, Gross P, Merrill-Skoloff G, Furie ВС, Furie B. Real-time in vivo imaging of platelets, tissue factor and fibrin during arterial thrombus formation in the mouse. Nat Med 2002; 8: 1175-1181.

103. Cardinal DC, Flower RJ. The electronic aggregometer: a novel device for assessing platelet behavior in blood. J Pharmacol Methods 1980; 3: 135-158.

104. Balan C, Balut C, Gheorghe L, Gheorghe C, Gheorghiu E, Ursu G. Experimental determination of blood permittivity and conductivity in simple shear flow. Clin Hemorheol Microcirc 2004; 30: 359-364.

105. Beving H, Eriksson LE, Davey CL, Kell DB. Dielectric properties of human blood and erythrocytes at radio frequencies (0.2-10 MHz); dependence on cell volume fraction and medium composition. Eur Biophys J 1994; 23: 207-215.

106. HASCHEMEYER AE. A POLAR INTERMEDIATE IN THE CONVERSION OF FIBRINOGEN TO FIBRIN MONOMER. Biochemistry 1963; 2: 851-858.

107. Ignacio Tinoco Jr. The Conversion of Fibrinogen to Fibrin. XVI. Electrical Birefringence of Fibrinogen and Activated Fibrinogen. Journal of the American Chemical Society 1955; 77 : 3476-3480.

108. Cady P. Dufour SW, Shaw J, Kraeger SJ. Electrical impedance measurements: rapid method for detecting and monitoring microorganisms. J Clin Microbiol 1978; 7: 265-272.

109. Gomes HLLRBARSPCML. A microelectrode impedance method to measure interaction of cells. Sensors Proceedings of IEEE 2004; 1011-1013.

110. Wheeler TG, Goldschmidt MC. Determination of bacterial cell concentrations by electrical measurements. J Clin Microbiol 1975; 1: 25-29.

111. Toth O, Calatzis A, Penz S, Losonczy H, Siess W. Multiple electrode aggregometry: a new device to measure platelet aggregation in whole blood. Thromb Haemost 2006; 96: 781-788.

112. Mackie IJ, Jones R, Machin SJ. Platelet impedance aggregation in whole blood and its inhibition by antiplatelet drugs. J Clin Pathol 1984; 37: 874-878.

113. Гуревич ВС, Михайлова ИА, Иванов ВИ, Казённова НИ. Адгезия тромбоцитов в цельной крови к коллагену: простой и быстрый количественный метод исследования. Лабораторные новости Дальнего Востока 1999; 2.

114. Russell D. Cerebral microemboli and cognitive impairment. J Neurol Sci 2002; 203-204: 211-214.

115. Ringelstein EB, Droste DW, Babikian VL. Evans DH, Grosset DG, Kaps M, Markus HS, Russell D, Siebler M. Consensus on microembolus detection by TCD. International Consensus Group on Microembolus Detection. Stroke 1998; 29: 725-729.

116. Markus HS, Harrison MJ. Microembolic signal detection using ultrasound. Stroke 1995; 26: 1517-1519.

117. SaloojaN, Perry DJ. Thrombelastography. Blood Coagul Fibrinolysis 2001; 12: 327-337.

118. Ройтберг ГЕ, Струтынский AB. Лабораторная и инструментальная диагностика внутренних органов. Москва: Бином, 2003.

119. Hemker HC, A1 Died R, Beguin S. Thrombin generation assays: accruing clinical relevance . Curr Opin Hematol 2004; 11: 170-175.

120. Kuhlen R. Controversies in Intensive Care Medicine. MWV Medizinisch Wissenschaffliche Verlagsgesellschaft OHG, 2008.

121. Mosesson MV. Fibrinogen and fibrin structure and functions. J Thromb Haemost 2005; 3: 1894-1904.

122. Cesarman-Maus G, Hajjar KA. Molecular mechanisms of fibrinolysis. British Journal of Haematology 2005; 129: 307-321.

123. Hartert H. Blutgerinnung studien mit der thromboelastographie, einen Neuen Untersuchingsverfahren. Klin Wochenschr 1948; 26: 577-583.

124. Wolberg AS, Campbell RA. Thrombin Generation, Fibrin Clot Formation and Hemostasis. Transfus Apher Sci 2008; 38: 15-23.

125. Hemker HC, Beguin S. Phenotyping the clotting system. Thromb Haemost 2000; 84: 747-751.

126. Hemker НС, A1 Dieri R, De Smedt E, Beguin S. Thrombin generation, a function test of the haemostatic-thrombotic system. Thromb Haemost 2006; 96: 553-561.

127. Hemker НС, Giesen PL, Ramjee M, Wagenvoord R, Begum S. The thrombogram: monitoring thrombin generation in platelet-rich plasma. Thromb Haemost 2000; 83: 589591.

128. A1 Dieri R, Peyvandi F, Santagostino E, Giansily M, Mannucci PM, Schved JF, Beguin S, Hemker HC. The thrombogram in rare inherited coagulation disorders: its relation to clinical bleeding. Thromb Haemost 2002; 88: 576-582.

129. Dargaud Y, Trzeciak MC, Bordet JC, Ninet J, Negrier C. Use of calibrated automated thrombinography +/- thrombomodulin to recognise the prothrombotic phenotype. Thromb Haemost 2006; 96: 562-567.

130. Козинец ГИ, Макаров В А. Исследование системы крови в клинической практике. Москва: Триада-Х, 1997.

131. Faxalv L, Tengvall Р, Lindahl TL. Imaging of blood plasma coagulation and its propagation at surfaces. Biomed Mater Res A 2007.

132. Sinauridze EI, Kireev DA, Popenko NY. Pichugin AV, Panteleev MA, Krymskaya OV. Ataullakhanov FI. Platelet microparticle membranes have 50- to 100-fold higher specific procoagulant activity than activated platelets. Thromb Haemost 2007; 97: 425-434.

133. Ataullakhanov FI, Krasotkina JV, Sarbash VI, Volkova RI, Sinauridse EI, Kondratovich AY. Spatio-temporal dynamics of blood coagulation and pattern formation. An experimental study. Int J Bifurcation and Chaos 2002; 1969-1983.

134. Kondratovich AY, Pokhilko AV, Ataullakhanov FI. Spatiotemporal dynamics of contact activation factors of blood coagulation. Biochim Biophys Acta 2002; 1569: 86-104.

135. Sinauridze EI, Volkova RI, Krasotkina JV, Sarbash VI, Ataullakhanov FI. Dynamics of clot growth induced by thrombin diYusing into nonstirred citrate human plasma. Biochim Biophys Acta 1998; 1425: 607-616.

136. Шулутко EM, Ованесов MB, Атауллаханов ФИ. Факторы риска катетер-ассоциированных тромбозов центральных вен. Проблемы гематологии и переливания крови 2002; 1: 102.

137. Копылов КГ, Плющ ОП, Лопатина ЕГ. Северова ТВ, Атауллаханов ФИ, Пантелеев МА. Дромашнее лечение концентратом фактора VIII больных гемофилией А. Проблемы гематологии и переливания крови 2003; 2: 5-11.144.145.146.147.148.

138. Campbell RA, Overmyer КА, Bagnell CR. Wolberg AS. Cellular Procoagulant Activity Dictates Clot Structure and Stability as a Function о Г Distance From the Cell Surface. Arterioscler Thromb Vase Biol 2008; 28: 2247-2254.

139. Ataullakhanov FI, Zarnitsina VI, Pokhilko AV, Lobanov AI, Morozova OL. Spatio-temporal dynamics of blood coagulation and pattern formation. A theoretical approach. Int J Bifurcation and Chaos 2002; 12: 1985-2002.

140. Атауллаханов ФИ, Зарницина ВИ, Кондратович АЮ, Лобанова ЕС, Сарбаш ВИ. Особый класс автоволн автоволны с остановкой - определяют пространственную динамику свертывания крови. Успехи физических наук 2002; 172: 671-690.

141. Krasotkina JV, Sinauridse El, Ataullakhanov FI. Spatiotemporal dynamics of fibrin formation and spreading of active thrombin entering non-recalcifed plasma by diffusion. Biochim Biophys Acta 2000; 1474: 337-345.

142. Negrier C, Dargaud Y, Bordet JC. Basic aspects of bypassing agents. Haemophilia 2006;12: 48-53.