Иммуномодулирующие и антиоксидантные свойства биологически активных веществ из морских гидробионтов и их использование в гериатрической практике. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат медицинских наук Шутикова, Анна Леонидовна

• Шутикова, Анна Леонидовна
• кандидат медицинских наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Шутикова, Анна Леонидовна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. Современные представления о состоянии иммунной и антиокси-дантной систем у пожилых людей.

1.1.Иммунная система и старение.

1.2.Активные формы кислорода и антиоксидантная система при старении.

1.3.Коррекция иммунных нарушений и свободнорадикальных процессов у пожилых людей.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. Материалы и методы.

ГЛАВА 3. Экспериментальное обоснование применения БАВ из морских гидробионтов для коррекции иммунных нарушений, свободнорадикальных процессов и профилактики заболеваний органов дыхания.

3.1.Оценка антиоксидантной активности моллюскама и н-ДНК

3.2.Действие моллюскама и н-ДНК на функциональную активность нейтро-филов периферической крови человека в условиях in vitro

3.3.Влияние моллюскама и н-ДНК на мукоциллиарную систему воздухоносного отдела легких, показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты при общем охлаждении.

ГЛАВА 4. Коррекция иммунных нарушений и свободнорадикальных процессов моллюскамом и н-ДНК у пожилых людей.

4.1.Влияние БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» на факторы врожденного и адаптивного иммунитета у пожилых людей.

4.2.Влияние БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» на показатели системы ПОЛ

АОЗ у пожилых людей.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммуномодулирующие и антиоксидантные свойства биологически активных веществ из морских гидробионтов и их использование в гериатрической практике.»

Актуальность проблемы

Старение населения - объективный общемировой процесс, обусловленный сложным комплексом факторов, включающих особенности воспроизводства населения, интенсивность и направленность миграции, санитарно-демографические последствия войн и др. Доля пожилых, старых и очень старых людей в общей популяции населения неуклонно увеличивается [88]. Темп прироста лиц пожилого возраста значительно опережает темп прироста всего населения. В России формирование существенной прослойки пожилых людей, прежде всего, связано со снижением рождаемости и сокращением доли детей в общей численности населения, а также с высокой смертностью людей трудоспособного возраста. Увеличению численности пожилых людей также способствуют внедрение достижений медико-биологических исследований, эффективное лечение онкологических заболеваний, более действенная, чем ранее профилактика инфаркта и инсульта. За период с 1959 г по 2000 г численность лиц старше 60 лет в России увеличилась более чем в два раза и составила в 2000 году 30,18 млн. человек (18,5%), из них лица старше 65 лет - 67,6%, старше 75 лет - 22,3%, старше 80 лет - 10,9%, старше 100 лет -0,05% [62, 88]. По прогнозам Государственного комитета Российской Федерации по статистике, население страны к 2016 году сократится по сравнению с началом 2001 года на 10,4 млн. человек, а численность лиц пожилого возраста возрастет и почти в два раза превысит численность детей.

В тоже время физиологическое старение, не сопровождаемое развитием каких-либо хронических заболеваний, определяется лишь у 3-6% людей пожилого возраста. Снижение резервных, адаптационных возможностей организма пожилых людей, изменения его реактивности, обусловленные постепенно нарастающими сдвигами в структуре и функции клеток, органов и систем создают условия для возникновения множества различных болезней.

Наблюдается значительное увеличение показателей заболеваемости и смертности в старших возрастных группах. Увеличивается частота хронических инфекционно-воспалительных, сердечно-сосудистых, онкологических, бронхолегочных, аутоиммунных и эндокринных заболеваний [3].

Значительную роль в процессе старения играют иммунологические механизмы и свободнорадикальное окисление. Для пожилого возраста характерно снижение противомикробного иммунитета, противовирусной и противоопухолевой защиты [216, 259], Т- клеточного звена иммунитета [37, 89, 133, 168], гуморального иммунного ответа, как на аутологичные, так и на экзогенные антигены [29, 37, 66], изменение рецепторного аппарата иммуноком-петентных клеток и соотношения клеточных субпопуляций [80, 120, 133, 172, 242]. Одной из основных причин ослабления пролиферации и дифференци-ровки Т-лимфоцитов является снижение секреции IL-2 [188, 215, 216, 236].

В многочисленных исследованиях отмечено, что накопление повреждений в клетках и скорость старения зависят также от соотношения процессов образования активных форм кислорода и их обезвреживания ферментативной системой антиоксидантной защиты [16]. Общий анализ данных об участии активных форм кислорода (АФК) в процессе старения позволяет ряду авторов утверждать, что повреждение макромолекул приводит к мутациям, нестабильности генома в целом и развитию ряда возрастных патологий, таких как: онкологические и сердечно-сосудистые заболевания, возрастная им-мунодепрессия, дисфункция мозга, развитие катаракты и многие др. [15, 16, 45,47,59, 180, 262].

В этой связи применение иммунокорректоров и антиоксидантов является одной из наиболее актуальных и в то же время наиболее дискутабельных проблем современной геронтологии. Использование таких препаратов может способствовать разрыву патологической цепи в структуре старение — болезнь, что, в свою очередь, позволит уменьшить предпосылки к развитию патологии в старости и тем самым уменьшить вероятность развития заболеваний. Включение иммунокорректоров и антиоксидантов в базисную терапию при различных заболеваниях у лиц старших возрастных групп способствует расширению адаптационных возможностей организма и профилактике преждевременного старения, обусловленного влиянием болезней старости [85].

В настоящее время наиболее предпочтительным представляется применение у лиц пожилого возраста препаратов, в том числе БАД, природного происхождения, оказывающих мягкое иммуномодулирующее и антиокси-дантное действие и имеющих минимум побочных эффектов.

Морские гидробионты, содержащие биологически активные вещества различной природы, являются замечательной основой для создания лечебно-профилактических пищевых продуктов или лекарственных средств [49, 51, 68]. К числу таких препаратов относятся БАД «ДНКаС» и «Моллюскам», разработанные в ФГУП «ТИНРО-центр». Ранее было показано, что н-ДНК -низкомолекулярная дезоксирибонуклеиновая кислота из молок лососевых рыб, входящая в состав БАД «ДНКаС», обладает общеукрепляющим действием, повышая сопротивляемость организма к действию неблагоприятных факторов внешней среды, увеличивает содержание гемоглобина, оказывает стимулирующее влияние на пролиферацию В-лимфоцитов, усиливает фагоцитоз, снижает уровень холестерина, оказывает стимулирующий эффект на физическую и умственную работоспособность [6, 63, 72]. БАД «Моллюскам» - комплекс свободных аминокислот (60-70%), низкомолекулярных белков и гистидинсодержащих дипептидов, выделенный из двустворчатых и головоногих моллюсков, положительно влияет на процесс кроветворения, усиливает фагоцитарные процессы в полиморфноядерных лейкоцитах, оказывает мягкое иммунокорригирующее действие и обладает антиоксидантными свойствами [19, 20]. Учитывая эти свойства, представляется обоснованным применить «Моллюскам» и «ДНКаС» у пожилых людей для коррекции иммунных нарушений и процессов свободнорадикального окисления.

Цель работы:

Экспериментальное и клинико-иммунологическое обоснование применения БАВ из морских гидробионтов н-ДНК и моллюскама для коррекции иммунных нарушений, свободнорадикальных процессов и профилактики заболеваний органов дыхания у людей пожилого возраста.

Задачи исследования:

1. Исследовать антиоксидантные свойства н-ДНК и моллюскама и их воздействие на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови здоровых доноров в экспериментах in vitro.

2. Изучить морфофункциональную структуру эпителия слизистой оболочки трахеи крыс при прямом холодовом воздействии и на фоне введения н-ДНК и моллюскама.

3. Исследовать действие БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» на популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов (CD3 -, CD4 -, CD8%, CD20 CD 16+- лимфоциты) периферической крови пожилых людей.

4. Изучить влияние БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» на уровень иммуноглобулинов (IgG, IgM, IgA) в сыворотке крови, на фагоцитарную активность и кислородзависимую цитотоксичность нейтрофилов периферической крови у пожилых людей.

5. Исследовать влияние БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» на показатели пере-кисного окисления липидов и антиоксидантной защиты у пожилых людей.

Научная новизна.

Экспериментально доказано, что моллюскам обладает антиоксидант-ным действием, которое проявляется в прямых реакциях нейтрализации свободных радикалов и в опосредованных реакциях накопления вторичных продуктов перекисного окисления липидов in vitro.

Экспериментально обоснована возможность применения БАД «Моллюскам» для профилактики и в комплексном лечении заболеваний органов дыхания. Доказано, что моллюскам защищает слизистую оболочку трахеи экспериментальных животных при холодовом воздействии.

В результате комплексной оценки состояния факторов врожденного и адаптивного иммунитета у пожилых людей установлена эффективность применения БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» для коррекции иммунных нарушений. Установлена направленность действия БАД, зависящая от исходных значений показателей.

Установлено, что БАД «Моллюскам» оказывает антиоксидантное действие, снижая в эритроцитах уровень МДА и повышая АОА плазмы крови у пожилых людей, смещая баланс между процессами перекисного окисления липидов и механизмами антиоксидантной защиты клетки в сторону последней.

Установлено, что БАД «ДНКаС» оказывает регулирующее действие на процессы липопероксидации у пожилых людей, восстанавливая баланс между процессами перекисного окисления липидов и механизмами антиоксидантной защиты клетки.

Практическая значимость.

• Обоснована целесообразность применения биологически активных добавок к пище «ДНКаС» и «Моллюскам», обладающих иммуномодулирующим действием, для коррекции возрастных иммунных нарушений.

• Установлена эффективность применения «Моллюскама» в качестве БАД, обладающей антиоксидантным действием. Рекомендовано ее применение при гиперактивации системы перекисного окисления липидов у пожилых людей.

• Установлена эффективность «ДНКаС» в качестве БАД, оказывающей регулирующее действие на процессы липопероксидации. Рекомендовано ее применение для коррекции свободнорадикальных процессов у пожилых людей.

Внедрение результатов работы.

• Подготовлены и утверждены Департаментом здравоохранения администрации Приморского края методические рекомендации «Использование биологически активных добавок к пище «ДНКаС» и «Моллюскам» для коррекции нарушений иммунной и антиоксидантной систем у пожилых людей» (г. Владивосток, 2007) (Авторы: Шутикова А.Л., Запорожец Т.С. и

ДР-).

• БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» используются в отделении Седанкинско-го дома-интерната для ветеранов для профилактики и коррекции расстройств иммунной и оксидантной систем (акт внедрения от 07.11.2008 г).

• Полученные новые данные по применению в геронтологической практике биологически активных веществ из морских гидробионтов используются при обучении студентов медицинских ВУЗов и факультетов, а также на курсах ФПК (акт внедрения от 10.11.2008 г).

• Отчеты об экспериментальном исследовании моллюскама и БАД на его основе были включены в пакет документов для регистрации в Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, по результатам экспертизы получено свидетельство № 77.99.11.3.У.4071.10.04 от 08.10.04 г.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Моллюскам обладает прямым антиоксидантным действием.

2. Моллюскам защищает слизистую оболочку трахеи экспериментальных животных при общем охлаждении.

3. БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» оказывают модулирующее действие на факторы врожденного и адаптивного иммунитета у пожилых людей, зависящее от исходного уровня показателей.

4. БАД «Моллюскам» оказывает антиоксидантное действие на систему ПОЛ-АОЗ у пожилых людей, смещая баланс между процессами перекис-ного окисления липидов и механизмами антиоксидантной защиты клетки в сторону последней. БАД «ДНКаС» оказывает регулирующее действие на процессы липопероксидации.

Апробация результатов диссертационной работы:

Диссертация апробирована на заседании Ученого Совета ГУ НИИЭМ СО РАМН (протокол №5 от 16.05.2007г.).

Материалы диссертации представлены на II Дальневосточном региональном конгрессе «Человек и лекарство» с международным участием (Владивосток, 2005), Итоговой научно-практической конференции с международным участием: «Вопросы сохранения и развития здоровья населения Севера и Сибири» (Красноярск, 2005), I Международной научно-технической конференции молодых ученых: «Актуальные проблемы технологии живых систем» (Владивосток, 2005), II региональной научной конференции «Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии» (Владивосток, 2006), V Всемирном конгрессе по иммунопатологии и аллергии (Москва, 2007), V Европейском конгрессе по астме (Москва, 2007).

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 9 работ.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 148 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы «материалы и методы исследования», 3 глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы, включающего 294 источника, из них 91 отечественный и 203 иностранных. Работа иллюстрирована 20 таблицами и 14 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Шутикова, Анна Леонидовна

выводы

1. Моллюскам обладает прямым антиоксидантным действием: связывает и инактивирует гипохлорит анион, ингибирует свободнорадикальный катион ABTS*+, снижает уровень МДА в реакционной смеси. Моллюскам и н-ДНК стимулируют in vitro функциональную активность нейтрофилов крови здоровых доноров, увеличивая количество клеток, участвующих в фагоцитозе и усиливая их способность поглощать и переваривать S. aureus.

2. Моллюскам предупреждает изменения слизистой оболочки трахеи при холодовом стрессе у экспериментальных животных.

3. БАД «ДНКаС» у пожилых людей оказывает иммуномодулирующее действие на клеточный (CD3+-, CD4+-,CD8+-,CD16+- лимфоциты) и гуморальный иммунитет (IgG, IgA, IgM), стимулирует пролиферацию В-лимфоцитов и фагоцитарную активность нейтрофилов, увеличивает функционально-метаболические резервы нейтрофилов.

4. БАД «Моллюскам» у пожилых людей оказывает иммуномодулирующее влияние на показатели клеточного (CD3+-, CD4+-,CD8+-,CD16+-,CD20+-лимфоциты) и гуморального иммунитета (IgG, IgA, IgM), стимулирует фагоцитарную активность нейтрофилов.

5. БАД «ДНКаС» у пожилых людей оказывает регулирующее действие на процессы липопероксидации: восстанавливает баланс между процессами перекисного окисления липидов и механизмами антиоксидантной защиты клетки. БАД « Моллюскам» у пожилых людей оказывает антиоксидантное действие, снижая в эритроцитах уровень МДА и повышая АОА плазмы крови.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Со второй половины прошлого века проблема старения занимает существенное место в ряду медико-социальных проблем. Прогрессивное старение общества - объективный процесс, характерный для подавляющего числа стран и регионов, в последнее время становится чрезвычайно актуальным и для нашей страны. Пожилые люди нуждаются в особых медицинских подходах, касающихся всех сторон медицинского обслуживания, включая диагностику, амбулаторное и стационарное лечение, проведение на постоянной основе профилактических мер, направленных на предотвращение заболеваемости и инвалидности, улучшение качества жизни.

Для лиц пожилого возраста характерны разнообразные нарушения функционального статуса и множественность хронических заболеваний (по-лиморбидность), определяющие нужды и потребности в различного вида медицинской и социальной помощи [14]. В пожилом возрасте структура заболеваемости значительно изменяется за счет уменьшения острых и увеличения хронических болезней. Этому способствуют многочисленные факторы различной инфекционной и неинфекционной природы (антропогенные факторы, стрессы, нарушения питания и т.д.). Формирование вторичного иммунодефицита, нарушение соотношения процессов образования и обезвреживания активных форм кислорода усугубляют ситуацию, обусловливая более тяжелое течение заболеваний, развитие осложнений, затяжное течение воспалительных процессов.

Профилактика старения является одним из новых направлений научной и практической деятельности в медицине, наиболее активно и динамично формирующимся в настоящее время. Это направление предполагает разработку и использование принципиально новых подходов и современных высоких технологий, предназначенных для повышения качества жизни людей, снижения реальных темпов старения и увеличения продолжительности активной трудоспособной жизни. К настоящему времени изучены и описаны различные механизмы старения и создается все большее количество средств, способных влиять на эти процессы [2]. Одними из таких средств являются иммуномодуляторы и антиоксиданты, позволяющие обеспечивать профилактику заболеваемости, увеличивать длительность активной жизни, сдерживать темпы старения, длительно сохранять высокий уровень физической и психической активности

Необходимым условием для достижения высокого эффекта при применении таких средств является возможность комплексного воздействия на различные стороны процесса старения.

В последние годы все большее распространение получают биологически активные соединения, выделенные из природных объектов, обладающие, в ряду прочих свойств, иммуномодулирующим и антиоксидантным действием.

Многочисленные исследования показали, что источником уникальных БАВ широкого спектра действия являются морские гидробионты [19, 33, 49, 51, 55, 68]. Эти соединения, выделенные из объектов морской флоры и фауны, зачастую лишены отрицательных свойств и характеризуются широко и успешно воспроизводимой сырьевой базой [22].

В настоящей работе исследовали иммунотропное и антиоксидантное действие БАВ из морских гидробионтов — н-ДНК и моллюскама в эксперименте, а также эффективность применения БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» созданных на основе вышеуказанных БАВ у людей пожилого возраста для коррекции иммунных нарушений и нормализации показателей системы ПОЛ-АОЗ.

На первом этапе работы в экспериментах in vitro была изучена анти-оксидантная активность БАВ - моллюскама и н-ДНК, поскольку известно, что многие аминокислоты и гистидинсодержащие дипептиды сами по себе обладают антиоксидантной активностью [8, 35, 70, 75]. Для определения ан-тиоксидантной активности этих веществ использовали прямые и непрямые методы [74, 87, 244].

При использовании прямого метода, основанного на регистрации хло-раминового комплекса, было установлено, что моллюскам в концентрации 0,2 мг/мл связывал весь свободный гипохлорит в концентрации 5 мМ при равных объемах реагирующих компонентов в течение 15 мин, образуя стабильное соединение (т.н. хлораминовый комплекс).

Для н-ДНК таких исследований не проводили, т.к. образование хло-раминовых комплексов характерно только для некоторых аминокислот и пептидов.

В следующей серии экспериментов мы использовали метод, основанный на ингибировании свободных радикалов ABTS"+ (2,2 азинобис-3-этил-бензотиадолин-6-сульфоновой кислоты). Полученные данные показали, что моллюскам ингибирует свободнорадикальный катион ABTS"+, проявляя при этом умеренное антиоксидантное действие (1000 мг моллюскама обеспечивают антиоксидантную активность эквивалентную 45 мг тролокса), что позволяет использовать его в достаточно больших дозировках, необходимых для обеспечения включения в метаболизм различных тканей и органов. Умеренность антиоксидантного действия предпочтительна с точки зрения предотвращения дальнейшего окисления биологических субстратов, что имеет место при использовании мощных антиоксидантов, которые в высоких концентрациях становятся прооксидантами. н-ДНК прямым антиоксидантным действием, обеспечивающим инактивацию радикала ABTS*+, практически не обладала.

Определение уровня малонового диальдегида (МДА) в модельной системе in vitro позволяет оценить антиоксидантные свойства веществ в условиях, более приближенных к живому организму. МДА является одним из вторичных продуктов перекисного окисления липидов, накапливающихся в сыворотке крови, и является показателем интенсивности процессов перекисного окисления липидов, которое приводит к развитию целого ряда патологий [47].

В результате проведенных экспериментов было установлено, что уровень МДА в сыворотке крови после добавления моллюскама в концентрации 2 мкг/мл значимо снижался в 3,3 раза (р>=0,000). Н-ДНК влияния на уровень МДА в системе in vitro не оказывала.

Известно; что нейтрофилы составляют первую линию неспецифической противомикробной защиты. Они первыми мобилизуются в очаг воспаления или инфекции и от их фагоцитарной активности зависит элиминация; возбудителей. Нейтрофилы обладают всеми функциями фагоцитирующих клеток: адгезивностью, подвижностью, способностью к хемотаксису, способностью захватывать бактерии и другие частицы без участия специфических рецепторов или при участии FcR или GR1, убивать захваченные микроорганизмы с помощью кислородзависимых и кислороднезависимых механизмов цитотоксичности и переваривать захваченные объекты фагоцитоза [76]. Поэтому нейтрофилы являются универсальным индикатором различных нарушений гомеостаза.

В связи с этим следующий раздел экспериментальной работы был выполнен с целью выяснения механизмов действия н-ДНК и моллюскама на фагоцитарную активность нейтрофилов в модельной системе in vitro, поскольку эта модель позволяет оценить прямое действие препаратов на фагоцитирующие клетки.

В результате проведенных экспериментов было установлено, что инкубирование нейтрофилов крови здоровых доноров с н-ДНК в конечной концентрации - 1, 10 и 100 мкг/мл и моллюскамом в концентрациях - 1 и 10 мкг/мл через 30 минут приводило к увеличению количества клеток, участвующих в фагоцитозе, и усилению их способности поглощать S. aureus.

Через 2 часа инкубации нейтрофилов с исследуемыми веществами было выявлено, что н-ДНК в концентрации 1 мкг/мл способствует усилению поглощения микроорганизмов нейтрофилами (ФЧ30 10,75±0,63 и ФЧ120 11,77±0,66; /?=0,004), а в концентрации 10 и 100 мкг/мл способствует снижению значений ФЧ, что может расцениваться как усиление процессов переваривания микроорганизмов (ФЧ30 11,43±1,22 и ФЧ120 9,36±1,29; р=0,001; ФЧ30 10,84±0,42 и ФЧ120 8,04±0,58; />=0,027 соответственно). При инкубации ней-трофилов с моллюскамом в концентрации 1 и 10 мкг/мл наблюдалась аналогичная динамика изменений показателей фагоцитоза (ФЧ30 12,19±0,68 и ФЧ120 10,08±0,41; />=0,020 и ФЧ30 10,69±0,10 и ФЧ120 7,13±0,10; />=0,003 соответственно). Полученные результаты позволяют заключить, что н-ДНК в конечной концентрации 1, 10 и 100 мкг/мл и моллюскам в конечной концентрации 1 и 10 мкг/мл увеличивают количество клеток, участвующих в фагоцитозе, и усиливают их способность поглощать и переваривать S. aureus

Последним разделом экспериментальной работы явилось обоснование применения БАВ - моллюскама и н-ДНК с целью коррекции изменений слизистой оболочки воздухоносного отдела легких, инициированных действием холода.

Выполнение данного фрагмента работы обосновано тем, что значительный удельный вес в структуре заболеваемости людей пожилого возраста занимают болезни органов дыхания, в 7-8 раз превышая показатели у молодых [83]. В стареющем организме в силу развивающихся морфо-функциональных изменений, нарушения обменных процессов, снижения адаптационных возможностей, создаются условия для развития патологии органов дыхания, а факторы окружающей среды, такие как холод и влажность, еще в большей степени усугубляют этот процесс [5, 38, 39, 73, 77, 83, 84]. Адаптация к холоду сопровождается целым рядом функциональных нарушений и морфологических изменений в значительной степени затрагивающих органы дыхания [58]. Морфологические изменения при холодовой адаптации обусловлены нарушением целостности клеточных мембран, активированием перекисного окисления липидов, нарушением антиоксидант-ной защиты, напряжением кислородного режима, изменением реологических свойств крови и др. [58].

В экспериментальной работе на крысах мы изучили морфологическую структуру эпителия слизистой оболочки трахеи.

Полученные результаты показали, что при действии холода слизистая оболочка трахеи крыс подвергалась значительной перестройке. Снижался ре-генерационный потенциал эпителия слизистой оболочки трахеи за счет уменьшения промежуточных и базальных клеток. Происходило увеличение содержания бокаловидных и мигрирующих тучных клеток, что приводило к гиперсекреции слизи. Нарушалось регулярное расположение ресничек. В одних случаях реснички образовывали скопления по 20 - 60 штук, в других -были направлены в различные стороны, в результате чего исчезали поперечные волны движения, хорошо различимые у интактных животных. Вследствие этих процессов происходило нарушение мукоциллиарного транспорта.

Пероральное введение крысам моллюскама оказывало выраженное защитное действие, на эпителий слизистой оболочки трахеи экспериментальных животных, предупреждая изменения, характерные для холодового воздействия, такие как нарушение регулярности расположения ресничек, исчезновение поперечных волн движения ресничек, гиперсекрецию слизи. Реснитчатый покров сохранял характерный волнообразный рельеф. Слизистая оболочка трахеи этих животных, как по морфологическому строению, так и по клеточному составу фактически не отличалась от интактных крыс.

Что касается н-ДНК, то она оказывала слабое защитное действие на эпителий слизистой оболочки трахеи экспериментальных животных, уменьшая лишь выраженность изменений, характерных для холодового воздействия.

У этих же животных были исследованы показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы в плазме крови при действии холода.

В результате мы установили, что длительное охлаждение животных сопровождается повышением содержания вторичного продукта перекисного окисления липидов - малонового диальдегида в плазме крови (К - 4,9± 0,37 нмоль/л, X - 6,06±0,34 нмоль/л; />=0,028) и снижением уровня витамина

Е, являющегося природным антиокидантом, по сравнению с интактными животными (К - 43,38±4,30 мкг/мл, X - 32,48±2,29 мкг/мл, р=0,031).

Введение крысам, подвергнутым охлаждению, моллюскама и н-ДНК» вдозе10мг/кг предупреждало увеличение уровня малонового диальдегида, и снижение уровня витамина Е.

Таким образом, предварительное (перед Холодовым воздействием) и последующее введение крысам моллюскама и н-ДНК предупреждает как изменения слизистой оболочки трахеи, характерные для холодового воздействия, так и усиление процесса липопероксидации, тем самым, снижая расход природных антиоксидантов, в частности, витамина Е. Однако следует отметить, что защитное действие н-ДНК на слизистую оболочку трахеи значительно уступает таковому у моллюскама. и

На основании экспериментальных данных о защитном действии моллюскама можно высказать предположение о целесообразности использования этой БАВ как средства защиты органов дыхания от повреждающего действия холода и с целью профилактики заболеваний органов дыхания.

Следующим этапом работы было изучение влияния БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» на факторы врожденного и приобретенного иммунитета у пожилых людей. Поскольку в пожилом возрасте в результате инволюции тимуса формируется вторичный иммунодефицит, характеризующийся как изменениями самих клеток иммунной системы, так и изменениями клеточного окружения, нейрогуморального равновесия [29, 37, 138, 148, 216]. В процессе старения, не осложненного заболеванием, происходит закономерное изменение рецепторного аппарата и апоптоза клеток иммунной системы и изменение соотношения клеточных популяций [80, 120, 133, 172, 242]. С возрастом в большей степени снижается как абсолютное количество, так и относительное содержание С04+-лимфоцитов в циркулирующей крови, чем С08+-лимфоцитов и уменьшается индекс СБ4+/ СБ8+-лимфоциты [133, 242]. Содержание СБ8+-лимфоцитов с возрастом может, как снижаться [242], так и увеличиваться [80], либо не изменяется [120, 133, 197].

Для интерпретации результатов всех обследованных пожилых людей условно разделили на три группы с учетом исходного уровня показателей: с высокими показателями иммунного статуса, со средне-нормальными значениями, со сниженными показателями иммунного статуса.

В результате проведенных исследований установлено, что после приема Б АД «ДНКаС» и «Моллюскам» у обследуемых пожилых людей с высокими показателями относительное содержание СБЗ+-лимфоцитов снижалось незначительно (с 67,1±0,9% до 62,7±1,6%; р=0,039 и с 66,8±0,7 % до 62,1±1,6 %;/?=0,066 соответственно). В том случае, когда показатели были снижены относительное содержание СБЗ+-лимфоцитов повышалось (с 47,7±1,1% до 61,6±1,3%; /7=0,0001 и с 46,4±1,2 % до 60±1,3 %; />=0,0001 соответственно)

При изучении регуляторных субпопуляций было установлено, что практически у всех пожилых относительное содержание СБ4+-лимфоцитов находилось на уровне нижней границы физиологической нормы, либо было ниже ее. После приема БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» содержание СБ4+-лимфоцитов увеличивалось (с 28,9±0,72% до 34,1±0,58%; />=0,0001и4 с 28,1±0,9% до 34,8±0,9%; /7=0,0001 соответственно). Относительное содержание субпопуляции цитотоксических лимфоцитов/ супрессоров после приема БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» у пожилых людей в группе со средне-нормальными значениями показателей незначительно снижалось или не изменялось. В том случае, когда показатели СБ8+-лимфоцитов были снижены, относительное содержание этих клеток увеличивалось (с19,5±0,84% до 27,6±0,61%;/>=0,0001 и с 18,9±0,9% до 23,8±0,8%;/И),0001 соответственно).

Для пожилого и старческого возраста характерно снижение не только противомикробного иммунитета, но и противовирусной и противоопухолевой защиты, в которой принимают участие натуральные киллеры (№С-клетки). Эти клетки имеют большое значение в неспецифической защите организма и клеточно-опосредованном иммунном ответе, так как способны продуцировать и секретировать иммунорегуляторные цитокины, лизировать

Ill клетки, инфицированные внутриклеточными возбудителями, и ингибировать размножение микроорганизмов. Наибольшую активность NK-клетки проявляют по отношению к опухолевым и пораженным вирусом клеткам [76]. Содержание NK-клеток изменяется при различных патологических процессах: снижается при паразитарных, системных заболеваниях, стрессе, дефиците цинка и повышается при вирусных инфекциях и онкологических заболеваниях. С возрастом также увеличивается содержание в кровотоке NK-клеток [99, 152, 209, 216, 229, 258, 259], но происходит ослабление их функциональной активности [86, 115, 131, 216, 259].

В наших исследованиях после приема БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» у лиц с низкими показателями содержание CD 16+-лимфоцитов увеличивалось (с 8,4±0,35% до 13,9±2,4%; р=0,05 и с 8,4±0,7% до 14,6±3,1%; р-0,065 соответственно). У пожилых людей с высокими показателями CD 16+-лимфоцитов после приема БАД «Моллюскам» наблюдалась нормализация данного показателя до уровня средне-нормальных значений > (с 22,9±1,6% до 11,5±1,7% /я=0,0001).

Известно, что гуморальный иммунный ответ с возрастом изменяется в меньшей степени, чем клеточный [29, 152]. По данным литературы абсолютное количество B-клеток у пожилых людей не изменяется, однако относительное содержание может возрастать с возрастом, как следствие поликло-нальной активации [80] или в результате снижения содержания Т-лимфоцитов [29].

В результате проведенных исследований мы установили, что у большинства пожилых относительное содержание этих клеток находилось на уровне верхней границы физиологической нормы, либо было выше ее. На фоне приема БАД «ДНКаС» у всех обследуемых пожилых людей независимо от исходного уровня показателя относительное содержание В-лимфоцитов увеличивалось (с 21,1±2,3% до 31,2±2,0%; /7=0,001). При этом, чем ниже был исходный уровень B-лимфоцитов, тем более выраженной была стимуляция.

В то же время после приема БАД «Моллюскам» у людей с высокими показателями относительного содержания В-лимфоцитов выявлена тенденция к его снижению (с 25,2±1,5 % до 21,4±1,6 %;¿=0,055).

В процессе старения ослабевает гуморальный иммунный ответ, как на аутологичные, так и на экзогенные антигены, в чем непосредственно принимают участие разные классы иммуноглобулинов. С возрастом часто развивается дисбаланс основных классов иммуноглобулинов. Уменьшается концентрация в крови ^М, а уровень и увеличивается [37]. Такое соотношение иммуноглобулинов приводит к снижению противомикробной защиты и повышению восприимчивости к инфекциям у людей пожилого возраста [60, 66].

В наших исследованиях у большинства пожилых людей выявлена подобная закономерность, а также установлено модулирующее действие БАД «ДНКаС» и «Моллюскам», которое зависело от исходного уровня иммуно-гобулинов, отражающее влияние этих веществ на популяции иммунокомпе-тентных клеток.

При оценке фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови было установлено, что у пожилых людей со сниженными значениями показателей фагоцитарной активности после приема БАД «ДНКаС» наблюдалось увеличение ФП (с 63±1,9% до 79±4,7%; р=0,022), поглотительная способность нейтрофилов при этом не изменялась, после приема БАД «Моллюскам» увеличивался как ФП (с 53,6±2,4% до 67,2±3,6%; ¿=0,031) так и ФЧ (с 2,42±0,23 до 2,76±0,17; ¿=0,01). У обследованных с высокими значениями фагоцитоза (что может быть отражением максимального уровня напряжения резервных способностей) показатели не изменялись.

Основой кислородзависимого механизма цитотоксичности нейтрофилов, ответственного за разрушение бактерий, является способность к продукции активных форм кислорода (т.н. респираторный взрыв) [76]. Сравнительное изучение спонтанного и индуцированного НСТ-теста позволяет судить о функциональной активности и потенциальных ресурсах бактерицидной системы нейтрофилов.

В результате проведенных исследований было установлено, что показатели спонтанного и индуцированного НСТ-теста были значительно снижены. После приема БАД «ДНКаС» показатели спонтанного НСТ-теста снижались (с 37,5±4,51 до 22,1±4,35; р=0,013), а индуцированного НСТ-теста - повышались (с 108,2±14,2 до 188,6±10,5; р=0,0001), что свидетельствует об увеличении резервного потенциала нейтрофилов. Полученные результаты позволяют предположить, что даже сниженные по отношению к лицам среднего возраста показатели спонтанного НСТ-теста, у пожилых людей могут свидетельствовать о напряжении бактерицидной системы, что в свою очередь может быть связано с наличием в органах и тканях у лиц данной возрастной группы персистирующих бактерий и вирусов. Прием БАД «ДНКаС» приводит систему генерации АФК нейтрофилов в спокойное состояние, что соответственно влечет за собой увеличение резервных возможностей фагоцита. После приема БАД «Моллюскам» значимых изменений со стороны бактерицидной системы нейтрофилов выявлено не было.

Анализируя полученные данные после применения БАД «Моллюскам» и «ДНКаС», мы установили, что влияние данных БАД на организм пожилого человека неоднозначно и зависит от исходного уровня показателей иммунной системы: повышает — если показатели были снижены, снижает - если показатели были высокими и не изменяет - если они были в пределах средне-нормальных значений.

Таким образом, мы показали, что БАД «ДНКаС» оказывает модулирующее действие на клеточный и гуморальный иммунитет у пожилых людей, оказывает умеренное стимулирующее влияние на В-лимфоциты и увеличивает функционально-метаболические резервы нейтрофилов по данным спонтанного и индуцированного НСТ-теста. БАД «Моллюскам» оказывает модулирующее влияние на показатели клеточного и гуморального иммунитета, зависящее от исходных значений и не влияет на активность кислородзави-симого метаболизма нейтрофилов.

Согласно P.M. Хаитову и др. [81], установление иммунодефицита еще не является основанием для назначения иммуномодуляторов. Для обоснованного проведения иммунотерапии необходимо провести клинико-иммунологическое исследование. По его результатам авторы выделяют 3 группы людей: в первую входят лица, имеющие клинические признаки нарушения иммунитета и изменения иммунологических показателей; во вторую - лица с клиническими признаками нарушений иммунной системы при отсутствии изменений иммунологических показателей; в третью - лица, имеющие только изменения иммунологических показателей без клинических признаков недостаточности иммунной системы. И, если назначение иммуно-модулирующей терапии однозначно показано в первых 2-х группах, то третьей рекомендован только иммунологический мониторинг. По нашему мнению применение исследованных нами БАД, обладающих мягким иммуномодули-рующим действием, у этой группы лиц представляется возможным, особенно при нарушении клеточного звена иммунитета. Использование этих природных соединений будет способствовать восстановлению нарушенных иммунологических показателей и предотвратит дальнейшее развитие вторичного иммунодефицита.

В последнее время активно обсуждается свободнорадикальная теория старения, согласно которой причиной совокупного окислительного повреждения липидов, белков и нуклеиновых кислот являются АФК, что приводит к преждевременной гибели клеток и ускоренному старению организма [15, 16, 45, 59, 262]. Причиной возрастного окислительного повреждения может быть также снижение потенциальных ресурсов антиоксидантной системы и систем восстановления повреждений. При развитии различного рода патологических состояний возникают сдвиги метаболического гомеостаза и равновесия между процессами свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты. К патологическим изменениям, лежащим в основе развития некоторых заболеваний, относятся повреждение мембран, инактивация ферментов, гибель клеток, избыточное образование свободных радикалов, которые могут накапливаться в результате длительной активации процессов ПОЛ [47].

Этот раздел клинической работы посвящен изучению влияния БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» на параметры системы ПОЛ-АОЗ.

Результаты проведенной работы показали, что у четверти пожилых людей показатели системы ПОЛ-АОЗ находились на уровне нормальных значений. В 20% случаев наблюдалось повышенное содержание МДА, при этом уровень АОА был также повышен. Эти факты свидетельствуют о том, что у этих людей компенсаторные возможности функционирования системы ПОЛ-АОЗ сохранены, что выражается в повышении антиокислительной активности плазмы крови в ответ на высокий уровень МДА. В то же время большая часть обследованных пожилых людей имела сниженные значения МДА, показатель АОА при этом незначительно превышал верхнюю границу нормальных значений. Сниженный уровень МДА является неблагоприятным показателем перекисного гомеостаза и отражает снижение обменных процессов в мембране клетки [4].

После приема БАД «ДНКаС» у лиц с исходными низкими значениями показателя уровень МДА повышался (с 5,6±0,31 до 7,4±0,31 мкмоль/гНв; р=0,001), показатели АОА плазмы значимо не изменялись, соотношение МДА/АОА, свидетельствующее об уровне липопероксидации, нормализовалось. У пожилых людей с исходными высокими и нормальными значениями уровня МДА в эритроцитах значимые изменения после приема БАД «ДНКаС» выявлены не были, интегральный показатель АОА также значимо не изменялся, соотношение МДА/АОА соответствовало нормальным значениям. го продукта липопероксидации МДА (с 6,62±0,16 до 5,56±0,27 мкмоль/гНв; р=0,014).

Таким образом, мы установили, что БАД «ДНКаС» оказывает регулирующее действие на процессы липопероксидации (восстанавливает баланс между процессами перекисного окисления липидов и механизмами антиок-сидантной защиты клетки), а БАД «Моллюскам» обладает антиоксидантным действием, снижая в эритроцитах уровень МДА и повышая АОА плазмы крови, при этом баланс между процессами перекисного окисления липидов и механизмами антиоксидантной защиты клетки смещается в сторону последней.

Полученные результаты позволяют рекомендовать применение БАД «ДНКаС» для коррекции возрастного иммунодефицита и восстановления баланса между процессами перекисного окисления липидов и механизмами антиоксидантной защиты у лиц пожилого возраста. БАД «Моллюскам» также может быть рекомендована для нормализации показателей иммунной системы и профилактики состояний, сопровождающихся интенсификацией свободнора-дикальных процессов.

Результаты исследований БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» показали перспективность их применения у пожилых людей для профилактики вторичного иммунодефицита и состояний, сопровождающихся нарушением в системе ПОЛ-АОЗ. Методы получения данных БАД относительно просты и не требуют больших затрат времени и дорогостоящего оборудования, что обуславливает экономическую выгоду от их производства и доступность по цене для широких слоев населения.

Представленные в настоящей работе данные, являются экспериментальным и клиническим обоснованием возможного создания на основе биологически активных веществ н-ДНК и моллюскама новых эффективных лекарственных препаратов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Шутикова, Анна Леонидовна, 2009 год

1. Абрамченко В.В. Антигипоксанты и антиоксиданты в акушерстве. С-пб.: Деан, 2001.- 295с.

2. Анисимов В.Н. Средства профилактики преждевременного старения (ге-ропротекторы). // Успехи геронтологии. 2000. - вып.4. - С.275-277.(2)

3. Анисимов В.Н. Старение и ассоциированные с возрастом болезни. // Клиническая геронтология. 2005. - №1. - С.42-49.

4. Банкова В.В. Роль малонового диальдегида в регуляции перекисного окисления липидов в норме и патологии. Автореф дис. . д-ра биолог, наук.-М., 1990.

5. Безруков В.В. Об изменении гипоталамической регуляции внешнего дыхания при старении. // Дыхание, газообмен и гипоксические состояния в пожилом и старческом возрасте. Киев, 1975. - С.63-67.

6. Беседнова H.H., Эпштейн JIM. Дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) из молок рыб перспективы клинического применения (в помощь практическому врачу). - Владивосток: ТИНРО-центр, 2002. - 38с.

7. Богач П.Г. и др. Структура и функции биологических мембран. К.: Вища школа, 1981. - 336с.

8. Болдырев A.A. Карнозин. М: МГУ, 1998. - 308с.

9. Бондарь Т.Н, Панкин В.З., Антоновский B.JI. Восстановление органических гидропероксидов глутатионпероксидазой и глутатион-S-трансферазой: влияние структуры субстрата. // Докл. АН СССР. 1989. -Т. 300, № 1. - С.217- 220.

10. Бородин Е.А., Арчаков А.И. Стабилизация и реактивация цитохрома Р-450 фосфатидилхолином при перекисном окислении липидов. // Биол. мембраны. 1987. - N7. - С.719-728.

11. Бурлакова Е.Б., Крашаков С.А., Храпова Н.Г. Роль токоферолов в перок-сидном окислении липидов биомембран. // Биол. мембраны. 1998. — Т. 15, №2. - С.137-167.

12. Воейков В.Л. Активные формы кислорода патогены или целители? // Клиническая геронтология. - 2003. - №3. - С.27-40.

13. Гериатрия: Учебное пособие. / Под ред. Д.Ф. Чеботарева. М.:Медицина, 1990.- 175с.

14. Гусев В.А., Панченко Л.Ф. Проблемы и перспективы свободно-радикальной теории старения. / Под ред. У.К. Ибрагимова, Е.Б. Бурлако-вой // Биоантиоксиданты теоретические и прикладные аспекты. — Ташкент, 1995. Т.2 . - С.16-66.

15. Гусев В.А. Свободнорадикальная теория старения в парадигме геронтологии. //Успехи геронтологии. 2000.- Вып.4. - С.41-49.

16. Гусев В.А., Панченко Л.Ф. Современные концепции свободноради-кальной теории старения. // Нейрохимия. 1997. - Т.14, №1.- С.14-29.

17. Гусев В.А., Панченко Л.Ф. Супероксидный радикал и супероксиддис-мутаза в свободнорадикальной теории старения. // Вопр. мед. хим. 1982. - Т.28, № 4. - С.8-25.

18. Давидович В.В., Пивненко Т.Н. Аминокислоты двустворчатых моллюсков: биологическая роль и применение в качестве Б АД. // Известия ТИНРО. 2001. - Т. 129. - С.146-153.

19. Донцов В .И., Крутько В.Н., Подколзин A.A. Фундаментальные механизмы геропрофилактики. М.:Биоинформсервис, 2002. - 460 с.

20. Зборовская И.А., Банникова М.В. Антиоксидантная система организма, ее значение в метаболизме. Клинические аспекты. // Вестн. РАМН. 1995. -№6. - С.53-59.

21. Земсков В.М. и др. Низкомолекулярная РНК. Получение, гидролиз и применение в медицине. Рига: Зинатне, 1985. - 188с.

22. Зенков Н.К., Кандалинцева Н.В., Панкин В.З. и др. Фенольные биоанти-оксиданты. Новосибирск: СО РАМН, 2003. - 328с.

23. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меньшикова Е.Б. Окислительный стресс. Биохимические и патофизиологические аспекты. М.: МАИК Наука/ Интерпериодика, 2001. - 343с.

24. Зозуля Ю.А., Барабой В.А., Сутковой Д.А. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная защита при патологии головного мозга. М.: «Знание-М», 2000. - 344с.

25. Иванов Е.М. Здоровье населения Приморья, состояние и прогноз. // Мед.-фарм. вести Приморья. 1998. - №5. - С.7-9.

26. Иммунология старения. / Под ред. Т. Макинодана, Э. Юниса. М.: «Мир», 1980. - 277с.

27. Каплина Э.Н. Некоторые итоги клинического применения препарата де-ринат с 1976 по 2000г. // Материалы 1-й Всероссийской конференции «Использование препарата деринат в различных областях медицины». -Москва, 2000. 47с.

28. Касаикина О.Т., Карташева З.С., Лобанова Т.В. и др. Влияние окружения на реакционную способность ß-каротина по отношению к кислороду и свободным радикалам. // Биол. мембраны. 1998. - Т. 15, №2. - С. 168-175.

29. Касьяненко Ю.И., Эпштейн Л.М., Гажа А.К. и др. Биологически активная пищевая добавка дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) из молок лососевых. //Известия ТИНРО. - 1999. - Т.125. - С.139-146.

30. Кветной И.М., Ярилин A.A., Полякова В.О. и др. Нейроиммуноэндо-кринология тимуса. СПб.: ДЕАН, 2005. - 160с.

31. Кения М.В., Лукаш А.И., Гуськов Е.П. Роль низкомолекулярных антиок-сидантов при окислительном стрессе. // Успехи совр. биол. 1993. - Т.113, вып.4. - С.56-471.

32. Кисилевич Р.Ш., Скварко С.И. Об определении витамина Е в крови. // Лаб. дело. 1972. - №8. - С.473-475.

33. Кишов М.Г., Грабовский B.C. Функциональная характеристика лейкоцитов при старении человека. //Иммунология. 1996. - №4. - С.4-9.

34. Коркушко О.В., Фрайфельд В.Э. Состояние малого круга кровообращения у людей пожилого и старческого возраста. // Врачебное дело. -1988.-№Ю.-С.19-21.

35. Коркушко О.В. Неспецифические заболевания легких в гериатрической практике. Киев: Здоров'я, 1984. - 222с.

36. Кучеренко Н.Е., Васильев А.Н. Липиды. Киев: Вища школа, 1985. - 247с.

37. Ланкин В.З., Гордеева Н.Т., Тихазе А.К. и др. Липооксигеназы животных. Природа субстрата и изменение конформации липооксигеназы ретикуло-цитов при взаимодействии с мембранами. // Биохимия. 1985. - Т.50, №11. - С.1894-1900.

38. Ланкин В.З., Тихазе А.К., Беленков Ю.Н. Антиоксиданты в комплексной терапии атеросклероза: pro et contra. // Кардиология. 2004. - №2. - С.72-81.

39. Ланкин В.З. Тихазе А.К., Коновалова Г.Г. и др. Концентрационная инверсия антиоксидантного и прооксидантного действия (З-каротина в тканях in vivo. //Бюлл. эксп. биол. мед. 1999. -Т. 128, №9. - С.314-316.

40. Ланкин В.З. Метаболизм липоперекисей в тканях млекопитающих. / Биохимия липидов и их роль в обмене веществ. М.: Наука, 1981. - С.75-95.

41. Ланкин В.З., Тихазе А.К., Беленков Ю.Н. Свободнорадикальные процессы в норме и при патологических состояниях. М.: РКНПК МЗ РФ, 2001. -78с.

42. Лебедев A.B. Азотистые экстрактивные вещества мышечной ткани беспозвоночных. // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. 1974. - Т.10. -С.232-242.

43. Лебедев К.А., Понякина И.Д. Иммунология в клинической практике. -М.: Наука, 1990. 223с.

44. Левингтон Ж.Б. и др. Медико-биологическое исследование икры морского ежа. // Известия ТИНРО. 1999. - Т. 125. - С.254-259.

45. Мастернак Ю.А., Лусс Л.В. Влияние полиоксидония на показатели иммунного статуса лиц пожилого возраста. // Иммунология. 2002. - №6. -С.343-346.

46. Мид Дж. Свободнорадикальные механизмы повреждения липидов и их значение для клеточных мембран. / Свободные радикалы в биологии. М.: Мир, 1979.-Т. 1.- С.68-87.

47. Новгородцева Т.П., Эндакова Э.А., Янькова В.И. Руководство по методам исследования параметров системы « перекисное окисление липидов ан-тиоксидантная защита» в биологических жидкостях. - Владивосток: Изд-во Дальневосточного университета, 2003. - 79с.

48. Новикова М.В. и др. Пищевая биологически активная добавка из мидий. //Вопр. питания. 1998. -№1. - С. 10-13.

49. Оловников A.M. Принцип маргинотомии в матричном синтезе полинук-леотидов. // Докл. АН СССР. 1971. - Т. 201. - С. 1496 - 1499.

50. Парк Д.В. Биохимия чужеродных соединений. М.: Медицина, 1973. -С.111-116.

51. Пескин А.В Взаимодействие активного кислорода с ДНК. // Биохимия. -1997. Т.62, вып. 12. - С.1571-1578.

52. Петров Р.В. Старение и аутоиммунные болезни. // Иммунология. 1984. -№4. - С.88-92.

53. Петров Р.В. и др. Полиоксидоний иммуномодулятор последнего поколения: итоги трехлетнего клинического применения. // Аллергия, астма и клинич. иммунология. - 1999. - № 3. - С.3-6.

54. Постановление Правительства РФ №70 «О федеральной целевой программе «Старение поколения» на 2002-2004 гг.». М., 2002.

55. Потапова В.В. Иммуномодулирующие и радиозащитные свойства биологически активных веществ из морских гидробионтов. Дис. . канд. мед. наук. Владивосток, 2005. - 158с.

56. Ревнивых И.Ю. Состояние билиарной системы, иммунофизиологические особенности у лиц пожилого возраста. Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Тюмень, 2003.-С. 13-14.

57. Ровенский Ю.А. Растровая электронная микроскопия нормальных и опухолевых клеток. М.: Медицина, 1979. - 150с.

58. Сепиашвили Р.И. Основы физиологии иммунной системы. М.: Медицина-Здоровье, 2003. - 240с.

59. Скулачев В.П. О биохимических механизмах эволюции и роли кислорода. //Биохимия. 1998. - Т.63,№11. - С.1570-1579.

60. Смирнов B.C. и др. Коррекция радиационных иммунодефицитов. СПб.: Наука. - 1992. - 32с.

61. Торкунов П.А., Сапронов Н.С. Кардиопротекторное действие таурина. // Эксперим. и клинич. фармак. 1997. - Т.60, №5. - С.72-77.

62. Уикли Б. Электронная микроскопия для начинающих. М.: Мир, 1975. -310с.

63. Федянина JI.H. и др. Иммунокорригирующее действие ДНК и ДНКаС в эксперименте. Компенсаторно-приспособительные процессы: Фундаментальные, экологические и клинические аспекты. // Материалы Всероссийской конференции. 2004. - С.416-417.

64. Фещенко Ю.И. Проблемы хронических обструктивных заболеваний легких. //Укр. пульмонол. журнал. 2002. - №1. - С.5-10.

65. Формазюк В.Е., Дудина Е.И., Болдырев А.А. Способ определения антиокислительной активности карнозина. Патент SU 1807353 2003.

66. Формазюк В.Е. и др. Характеристика хлораминовых комплексов карнозина с гипохлорит-анионом. // Биохимия. 1992. - Т.57, вып.9. - С. 13241329.

67. Фрейдлин И.С. Иммунная система и ее дефекты: Руководство для врачей. СПб: НТФФ «Полисан», 1998. - 113с.

68. Фролькис В.В. Регуляция дыхания в старости. // Дыхание, газообмен и гипоксические состояния в пожилом и старческом возрасте. Киев, 1975. -С. 17-30.

69. Хавинсон В.Х., Морозов В.Г. Пептиды эпифиза и тимуса в регуляции старения. СПб.: Фолиант, 2001. - 160с.

70. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология. -М.: ВНИРО, 1995.-219с.

71. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Иммуномодуляторы: механизм действия и клиническое применение. // Иммунология. 2003. - №4. - С.196-203.

72. Хансон К.П. Роль апоптоза в старении и возрастной патологии. // Успехи геронтологии. 1999. - Вып. 3. - С. 103-110.

73. Чеботарев Д.Ф. Диффузионная способность легких в пожилом и старческом возрасте. // Физиология человека. 1978. - С.636-640.

74. Чеботарев Д.Ф., Коркушко О.В., Шатило В.Б. Преждевременное (ускоренное) старение: причины, диагностика, профилактика и лечение. // Научно-практический журнал «Медичний Всесвгг». 2001. - №1. - С.24-35.

75. Чекнев С.Б., Саидов М.З., Цветков В.В. и др. Возрастная и половая вариабельность активности естественных киллеров у здоровых доноров. // Иммунология. 1991. - №1. - С.39-42.

76. Чумак А.Д., Миленина Н.И., Слуцкая Т.Н. и др. Влияние различных добавок на окисление липидов и качество соленых лососевых. // Известия ТИНРО. 1992. - Т.114. - С. 167-174.

77. Ярилин А.А. Старение иммунной системы и тимус. // Клиническая геронтология. 2003. - №3. - С.8-17.

78. Ярилин А.А., Пинчук В.Г., Гриневич Ю.А. Структура тимуса и диффе-ренцировка Т-лимфоцитов. Киев.: Наукова думка. - 1991. - 244с.

79. Ярилин А.А., Беляков И.М. Тимус как орган эндокринной системы. // Иммунология. 1996. - №1. - С. 4-10.

80. Adambekov D.A., Morozov V.L. Interaction between heterochronic cells in the formation of delayed type hypersensitivity. // J. Hyg. Microbiol. Immunol. -1992.-Vol.36.-P.217-222.

81. Agarwal S., Sohal R.S. Aging and protein oxidative damage. // Mech. Ageing Dev. 1994. -Vol.75. -P.l 1-19.

82. Agarwal S., Gupta S. Increased activity of caspase 3 and caspase 8 in anti-Fas-induced apoptosis in lymphocytes from ageing humans. // Clin. Exp. Immunol. 1999.-Vol.117.-P.285-290.

83. Agarwal S., Sohal R.S. Relationship between aging and susceptibility to protein oxidative damage. // Biochem. Biophys. res. comm. 1993. - Vol. 194. - P. 1203 - 1206.

84. Allsopp R.S. Models of initiation of replicative senescence by loss of telomeric DNA. //Exp.gerontol. 1996. - Vol.31. - P.235-243.

85. Al-Rayes H. et al. IgE regulation and lymphokine patterns in aging. // J. Allergy Gin. Immunol. 1992. -Vol.90. - P.630-636.

86. Andrew D., Aspinall R. IL-7 and not stem cell factor reverses both the increase in apoptosis and the decline in thymopoesis seen in aged mice. // J. Immunol. -2001. Vol.166. - P. 1524-1530.

87. Araaiz S.L., Travacio M., Llesuy S. et al. Hydrogen peroxide metabolism during peroxisome proliferation by fenofibrate. // Biochim. Biophys. Acta. -1995. -Vol.1272. -P.175-180.

88. Arteel G.D., Briviba K., Sies H. Protection against peroxynitrite. // FEBS Lett.- 1999.-Vol.445.-P.226-230.

89. Aust S.D., Svingen B.A. The role of iron in enzymatic lipid peroxidation. // Free Radic. in Biol. 1982. - Vol.5. - P. 1-28.

90. Awasthi Y.C., Zimniak P., Singhal S.S. et al. Physiological role of glutathione-S-transferase in protection mechanisms against lipid peroxidation: a commentary. // Biochem. Arch. 1995. - Vol.11. - P.47-54.

91. Bandres E. et al. The increase of IFNy production through aging correlates with the expanded CD8hlCD28-CD57+ subpopulation. // Clin. Immunol. 2000.- Vol.96. P.230-235.

92. Bar-Dayan Y. et al. Proliferation, apoptosis and thymic involution. // Tissue Cell. 1999. - Vol.31. - P.391-396.

93. Barnett Y.A., King C.M. An investigation of antioxidant status, DNA repair capacity and mutation as a function of age in humans. // Mutat. Res. 1995. -Vol.338.-P.l 15-128.

94. Bast A., H aenen G .R.M.M., D oelman C. J. A. O xidants and antioxidants. // Am. J. Med. -1991. Vol.91. - P.2S-13S.

95. Boersma W.J., Steinmeir F.A., Haaijman J.J. Age-related change in the relative number of Thy-1 and Lyt-2-bearing peripheral blood lymphocytes in mice: a longitudinal approach. // Cell. Immunol. 1985. - Vol.93. - P.417-430.

96. Bohr V.A. Oxidative DNA damage processing in nuclear and mitochondrial DNA. //Biochimie. 1999. - Vol. 81. - P. 155-160.

97. Bowry V.W., Ingold K.U. Extraordinary kinetic behavior of the a -tocopheroxyl (vitamin E) radical. // J. Org. Chem. 1995. - Vol.60. - P.5456-5467.

98. Briviba K., Kissner R., Koppenol W.H. et al. Kinetic study of the reaction of glutathione peroxidase with peroxynitrite. //Chem. Res. Toxicol. 1998. -Vol.11.-P.1398-1401.

99. Brown O.A. et al. Studies on the gonadotropin releasing activity of thymulin: changes with age. // J.Gerontol. Biol. Sci. Med. Sci. 2000. - Vol.55. - P.B170-B176.

100. Brunk U.T., Jones C.B., Sohal R.S. A novel hypothesis of lipofuscinogenesis and cellular aging based on interactions between oxidative stress and auto-phagocytosis. //Mutat. Res. 1992. - Vol.275. - P.395-403.

101. Bruunsgaard H., Pederson A.N., Schroll M. et al. Decreased NK cell activity is associated with atherosclerosis in elderly humans. // Exp. Gerontol. 2001. -Vol.37.-P.127-136.

102. Cambers S.J., Lambert N., Williamson G. Purification of a citosolic enzyme from human liver with phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase activity. // Int. J. Biochem. 1994. - Vol.26. - P.1279-1286.

103. Castle S., Uyemura W. et al. Age-related impaired proliferation of peripheral blood mononuclear cells is associated with an increase in both IL-10 and IL-12. // Exp. Gerontol. 1999. - Vol.34. - P.243-252.

104. Chen J.J., Yu B.P. Alterations in mitochondrial membrane fluidity by lipid peroxidation products. // Free Radical Biol. Med. 1994. - Vol.17. - P.411-418.

105. Chen J.J., Flurkey K., Harrison D.E. A reduced peripheral blood CD4+ lymphocyte proportion is a consistent ageing phenotype. // Mech. Ageing Dev. -1994.-Vol.18.-P.145-153.

106. Chen Q. et al. Oxidative DNA damage and senescence of human diploid fibroblast cell. // Proc. natl. acad. sei. USA. 1995. - Vol.92. - P.4337-4341.

107. Collins A., Cadet A.J., Epe B. et al. Problems in the measurement of 8-oxoguanine in human DNA. // Carcinogenesis. 1997. - Vol.18. - P. 1833-1836.

108. Conconi M., Szweda L.I., Levin R.L. et al. Age-related decline of rat liver multicatalytic proteinase activity and protection from oxidative inactivation by heat-shock protein 90.//Arch. Biochem. Biophys. 1996.- Vol.331. - P.232-240.

109. Consolini R. et al. Distribution of age-related thymulin titres in normal subject through the course of life. // Clin. Exp. Immunol. 2000. - Vol.121. - P.444-447.

110. Coop D.R. Oxidative and reductive metabolism by cytochrome P450 2E1. // FASEB J. 1992. - Vol.6. - P.724-730.

111. Crabtree D.V., Adler A J. Is ß-carotene an antioxidant? // Med. Hypotheses. -1997.-Vol.48.-P.183-187.

112. Darr D., Fridovich I. Adaptation to oxidative stress in young, but not in mature or old Caenorhabditis elegans. // Free radical biol. med. 1995. - Vol.18. - P. 195-201.

113. Davis R.E. et al. Mutation in mitohondrial cytochrome C oxidase genes segregate with late onset Alzheimer's disease. // Proc. natl. acad. sei. USA. 1997. -Vol.94.-P.4526-4531.

114. De La Paz M.A., Zhang J., Fridovich I. Antioxidant enzymes of the human retina: effect of age on enzyme activity of macula and periphery. // Curr. Eye Res. 1996. - Vol.15. - P.273-278.

115. Di Lorenzo G., Balistreri C R., Candore G. et al. Granulocyte and natural killer activity in the elderly. // Mech. Ageing Dev. 1999. - Vol.108. - P.25-38.

116. Ding A.S., Hwang A., Schwab R. Effect of aging on murine macrophages. Diminished response to IFNy for enhanced oxidative metabolism. // J. Immunol. 1994. - Vol.153. - P.2146-2152.

117. Effros R.B., Boucher N., Porter V. et al. Decline in CD28+ T cells in centerians and long-term T cell cultures: a possible cause for both in vivo and in vitro im-munosenescence. // Exp. Gerontol. 1994. - Vol. 29. - P.601-609.

118. Elgawish A., Glomb M., Friedlander M. et al. Involvement of hydrogen peroxide in collagen cross-linking by high glucose in vitro and in vivo. // J. Biol. Chem. 1996. - Vol.271. - P. 12964-12971.

119. Engwarda C.R., Handwerger B.S., Fox B.S. Aged T cells are hyporesponsive to costimulation mediated by CD28. // J. Immunol. 1994. - Vol.152. - P.3740-3747.

120. Fan A.G., Sidman C.L. Reduced expression of la antigens by thymic epithelial cells of aged mice. // J. Immunol. 1984. - Vol.133. - P.98-103.

121. Fernandez-Gutierrez В., JoverJ. A., De Miguel S. et al. Early lymphocyte activation in elderly humans: impaired T and T-dependent В cell responses. // Exp. Gerontol. 1999. - Vol.34. - P.217-229.

122. Ferrone D. et al. Age-related decrease of somatostatin receptor number in the normal human thymus. // Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 2000. -Vol.279.- P.E791-E798.

123. Flores K.G. et al. Analysis of the human thymic perivascular space during aging. //J. Clin.Invest. 1999. - Vol.104. - P. 1031-1039.

124. Forman H .J., Azzi A. On the virtual existence оf superoxide anion in mitochondria: thoughts regarding its role in pathophysiology. // FASEB J. 1997. -Vol.11.-P.374-375.

125. Frei B. Natural antioxidants in human health and disease. Orlando: FL Academic Press, 1993. - 240p.

126. Fridovich I. Superoxide radical and superoxide dismutases. // Annu. Rev. Bio-chem. 1995. - Vol.64.-P.97-112.

127. Gaziev A.I., Podlutsky A., Panfilov B.M. et al. Dietary supplements of antioxidants reduce hart mutant frequency in splenocytes of aging mice. // Mutat. Res.- 1995. Vol.338. - P.77-86.

128. George A.J.T., Ritter M.A. Thymic involution with ageing: obolescence or good housekeeping. // Immunol. Today. 1996.-Vol.17. - P.267-271.

129. Gerli R., Monti D., Bistoni O. et al. Chemokines, sTNF-Rs and CD30 serum levels in healthy aged people and centerians. // Mech. Ageing Dev. 2000. -Vol.121.-P.37-46.

130. Gilchrest B.A., Bohr V.A. Aging processes, DNA damage, and repair. // FASEB J. 1997.- Vol.11. - P.322-330.

131. Gilman S.C., Rosenberg J.S., Feldman J.D. T lymphocytes in young and aged rats. II. Functional defects and the role of IL-2. // J. Immunol. 1982. - Vol.67.- P.644-650.

132. Ginaldi L., De Martinis M., De Ostilio A. et al. Immunological changes in the elderly. III. Innate immunity. // Immunol. Res. 1999. - Vol.20. - P. 113-126.

133. Ginn-Pease M.E., Whisler RL. Alterations in the expression of IL-2R subunits by activated T cells from elderly humans are uncoupled from aberrancies in G./S progression. // J. Interferon Cytokine Res.- 2001. Vol.21. - P.515-521.

134. Gorges G., Butch EX., Gitan K.L. et al. Diminished activation of the MAP kinase pathway in CD3-stimulated T lymphocytes from old mice. // Mech. Ageing Dev. 1997. -Vol.94. - P.71-83.

135. Goto S., Nakamura A. Age-associated, oxidatively modified proteins: a critical evaluation. // Age. 1997. - Vol.20. - P.81-89.

136. Grisham M.B., Granger D.N., Lefer D.J. Modulation of leukocyte-endothelial interaction by reactive metabolites of oxygen and nitrogen: relevance to ischemic heart disease. // Free Radic. Biol. Med. 1998. - Vol.25. - P.404-433.

137. Grtibeck-Loebenstein B. Changes in the aging immune system. // Biologicals. 1997.-Vol.25.-P.205-208.

138. Guildi L., Antico L., Bartoloni C. et al. Changes in the amount and level of phosphorylation of p561ck in PBL from aging humans. // Mech. Ageing Dev. -1998. -Vol.102. -P.177-186.

139. Gutteridge J.M., Halliwell B.H. The measurement and mechanism of lipid peroxidation in biological systems. // Trends Biochem. Sci. 1990. - Vol.15. -P.129-135.

140. Habig W.H., Keen J.H., Jakoby W.B. Glutathione-S-transferase in the formation of cyanide from organic thiocyanates and as anoranic nitrate reductase. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1975. - Vol.64. - P.501-506.

141. Hadden J.W. e t a 1. T hymic i nvolution i n a geing. P rospects f or c orrection. // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1992. - Vol.673. - P.231-239.

142. Halliwell B.H., Gutteridge J.M. Free Radicals in Biology and Medicine. -Oxford, UK: Oxford Univ. Press, 1989. 235p.

143. Harman D. Aging: a theory based on free radical and radiation chemistry. // J. Gerontol. 1956. - Vol.2. - P.298-300.

144. Harman D. Free radical theory of aging.// Mutat. Res. 1992.- Vol.275. -P.257-266.

145. Haynes B.F., Hale L.P. The human thymus. A chimeric organ comprised of central and peripheral lymphoid components. // Immunol. Res. 1998. - Vol.18. - P.175-192.

146. Haynes LLinton P.J., Eaton S .M. et al. IL-2, but not other c hain-binding cytokines, can reverse the defect in generation of CD44 effector T cells from naive T cells of aged mice. // J. Exp.Med. 1999. - Vol.190. - P. 1013-1024.

147. Hefton J.M., Darlington G.J., Casazza B.A. et al. Immunologic studies of aging: V. Impaired proliferation of PHA responsive human lymphocytes in culture. //J. Immunol. 1980. - Vol.125. - P. 1007-1010.

148. Helbock H.J., Beckman K.B., Shigenaga M.K. et al. DNA oxidation matters: the HPLC-electrochemical detection assay of 8-oxo-deoxyguanosine and 8-oxo-guanine. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. - Vol.95. - P.288-293.

149. He N.G., Zimniak P., Singhal S.S. et al. Purification and characterization of 4-hydroxynonenal metabolizing glutathione-S-transferase isozymes from bovine pulmonary microvessel endothelial cells. II Biochim. Biophys. Acta. 1996. -Vol.1291.-P.182-188.

150. Herndon F.J., Hsu H.C., Mountz J.D. Increased apoptosis of CD45R0" T cells with aging. // Mech. Ageing Dev. 1997. - Vol.94. - P. 123-134.

151. Honda S., Ishii N., Suzuki K. et al. Oxygen-dependent perturbation of life span and aging rate in the nematode. // J. Gerontol. 1993. - Vol.48. - P.57-61.

152. Honda S., MatsuoM. Shortening of the in vitro life span of human diploid fibroblasts exposed to hyperbaric oxygen. // Exp. Gerontol. 1983. - Vol.18. -P.339-345.

153. Ji L.L., Dillon D., Wu E. Alteration of antioxidant enzymes with aging in rat skeletal muscle and liver. // Am. J. Physiol. 1990. - Vol.258. - P.R918-R923.

154. Ji L.L., Dillon D., Wu E. Myocardial aging: antioxidant enzyme systems and related biochemical properties. // Am. J. Physiol. 1991. - Vol.260. - P.R386-R392.

155. Karafilov C.I. et al. Age-related defects in Thl and Th2 cytokine production by human T c ells c an b e d issociated from a ltered f requencies o f C D45RA+ a nd CD45R0+ T cell subsets. // Mech. Ageing Dev. 1999. - Vol.109. - P.97-112.

156. Kasai H. Analysis of a form of oxidative DNA damage, 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine, as a marker of cellular oxidative stress during carcinogenesis. //Mutat. Res. 1997. - Vol.387. - P.147-163.

157. Kellog E.W., Fridovich I. Superoxide dismutase in rat and mouse as function of age and longevity. // J. Gerontol. 1976. - Vol.31. - P.405-408.

158. Khare V., Sodhi A., Singh S.M. Age-dependent alterations in the tumoricidal functions of tumor-associated macrophages. // Tumour Biol. 1999. - Vol.20. -P.30-43.

159. Kirk C.J., Freilich A.M., Miller R.A. Age-related decline in activation of JNK by TCR- and CD28-mediated signals in murine T-lymphocytes. // Cell. Immunol. 1999. - Vol.197. - P.75-82.

160. Kirk C.J., Miller R.A. Age-sensitive and -insensitive pathways leading to JNK activation in mouse CD4+T cells. //Cell. Immunol. 1998. - Vol.190. - P.83-90.

161. Kong F., Chen C.H., Cooper M.D. Thymic function can be accurately monitored by the level of recent T cell emigrants in the circulation. // Immunity. -1998. -Vol.8. -P.97-104.

162. Kroemer G. Mitochondrial implication in apoptosis. Towards an endosymbiont hypothesis of apoptosis evolution. // Cell Death and Differentiation. 1997. -Vol.4. - P.443-456.

163. Kutza J., Murazko D.M. Age-associated decline in IL-2 and IL-12 induction of LAK cell activity of human PBMC samples. // Mech. Ageing Dev. 1996. -Vol.90. - P.209-222.

164. Lake B .G. Mechanisms o f h epatocarcinogenicity o f p eroxisome-proliferating drugs and chemicals. // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1995. - Vol.35. -P.483-507.

165. Levine R.L., Garland D., Oliver C.N. et al. Determination of carbonyl content in oxidatively modified proteins. // Methods Enzymol. 1990. -V.186. - P.464-478.

166. Lilie D. et al. Cytokine production differs in children and adults. // Pediatr. Res.- 1997. Vol.42.-P.237-240.

167. Li M., Walter R., Torres C. et al. Impaired signal transduction in mitogen activated rat splenic lymphocytes during aging. // Mech. Ageing Dev. 2000. -Vol.113.-P.85-99.

168. Linton P.J., Haynes L., Klinman N.R. et al. Antigen-in-dependent changes in naive CD4 T cells with aging. // J. Exp. Med. 1996. - Vol.184. - P. 1891-1900.

169. Loft S., Astrup A., Buemann B. et al. Oxidative DNA damage correlates with oxygen consumption in humans. // FASEB J. 1994. - Vol.8. - P.534-537.

170. Lucas D.T., Szweda L.I. Cardiac reperfiision injury: aging, lipid peroxidation, and mitochondrial dysfunction. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1998. - Vol.95.- P.510-514.

171. Mackall C.L., Gress R.E. Thymic aging and T cell regeneration. // Immunol. Rev. 1997. - Vol.160. - P.91-102.

172. Manchini G., Vaerman J.P., Carbonera A.O. et al. A single radial-diffusion method for the immunological quantization of protein. / Procides of the biological fluids (N. Peeters, ed.). Amsterdam; N.Y.: Elsevier, 1964. - P.370-379.

173. Mannervik B., Danielson U.H. Glutathione transferase structure and catalytic activity. // CRC Crit. Rev. Biochem. - 1988. - Vol.23. - P.283-337.

174. Mariani E., Pulsatelli L., Meneghetti A. et al. Different IL-8 production by T and NK lymphocytes in elder subjects. // Mech.Ageing Dev. 2001. - Vol.122.- P.1383-1395.

175. Marzabadi M.R., Sohal R.S., Brunk U.T. Effect of ferric iron and desferoxamine on lipofuscin accumulation in cultured rat heart myocytes. // Mech. Ageing Dev. 1988. - Vol.46. - P.145-157.

176. Marzabadi M.R., Sohal R.S., Brunk U.T. Effect of alpha-tocopherol and some metal chelators on lipofuscin accumulation in cultured neonatal rat cardiac myocytes. // Ann. Cell Pathol. 1990. - Vol.2. - P.333-346.

177. Mather M.W., Rotternberg H. The inhibition of calcium signaling in T lymphocytes from old mice results from enhanced activation of the mitochondrial permeability transition pore.//Mech. Ageing Dev.-2002. Vol. 123. - P.707-724.

178. McCord J.M., Fridovich I. Superoxide dismutase: an enzymic function for erytrocuprein (hemocuprein). // J. biol. chem. 1969. - Vol.244. - P.6049-6055.

179. McLeod J.D. Apoptotic capability in ageing T cells. // Mech. Ageing Dev. -2000.-Vol.121.-P.151-159.

180. Mendis S., Sobotka P.A., Euler D.E. Pentane and isoprene in expired air from humans: gas-chromatographic analysis of single breath. // Clin. Chem. 1994. -Vol.40.-P.1485-1488.

181. Meydani S.N., Wu D., Santos M.S. et al. Antioxidants and immune response in aged persons: overview of present evidence. // Am. J. Clin. Nutr. 1995. -Vol.62.- P. 1462S-1476S.

182. Meyer K.C., Soergel P. Variation of bronchoalvcolar lymphocyte phenotypes with and in physiologically normal human lung. // Thorax. 1999. - Vol.54. -P.697-700.

183. Mo J.Q., Horn D.G., Andersen J.K. Decreases in protective enzymes correlates with increased oxidative damage in the aging mouse brain. // Mech. Ageing Dev. 1995. - Vol.81. - P.73-82.

184. Mocchegiani E. et al. Zinc, T-cell pathways, aging: role of metallothioneins. // Mech. Ageing Dev. 1998. - Vol.106. - P. 183-204.

185. Monnier V.M., Glomb M., Elgawish A. et al. The mechanism of collagen cross-linking in diabetes: a puzzle nearing resolution. // Diabetes. 1996. -Vol.45. - P.S67-S72.

186. Mortensen A., Skibsted L.H., Willnow A. et al. Re-appraisal of the tocophe-roxil radical reaction with ß-carotene: evidence for oxidation of vitamin E by the ß-carotene radical cation. // Free Rad. Res. 1998. -Vol.28. - P.69-80.

187. Mysliwska J., Bryl E., Foerster J. et al. Increase of IL-6 and decrease of IL-2 production during the ageing process are influenced by the health "status. // Mech. Ageing Dev. 1998. - Vol.100. - P.313-328.

188. Mysliwska J., Bryl E., Tronkowski P. et al. Compensatory effect of TNFa on low natural killer activity in the elderly. // Acta Biochim. Pol. 2000. - Vol.47. -P.301-311.

189. Nakano M., GotohS. Accumulation of c ardiac 1 ipofuscin d epends on metabolic rate of mammal. // J. Gerontol. 1992. - Vol.47. - P. 126-129.

190. Naharra B., Andrianarison I. Ultrastructural study of thymic microenvironment involution in aging mice. // Exp. Gerontol. 1996. - Vol.31. - P.489-506.

191. Nociari M.M., Telford W., Russo C. Postthymic development of CD28"CD8+ T cell subset: age-associated expansion and shift from memory to naive pheno-type. // J. Immunol. 1999. - Vol.162. - P.3327-3335.

192. Nohl H. Involvement of free radicals in ageing: a consequence or cause of senescence. // Br. Med. Bull. 1993. - Vol.49. - P.653-667.

193. Nohl H., Gille L., Schonheit K. et al. Conditions allowing redox-cycling ubi-semiquinone in mitochondria to establish a direct redox couple with molecular oxygen. // Free Radical Biol. Med. 1996. - Vol.20. - P.207-213.

194. Oberley L.W., Oberley T.D., Buettner C.R. Cell differentiation, aging and cancer. The possible role of superoxide and superoxide dismutase. // Med. Hypotheses. 1980. - Vol. 6. - P.249-268.

195. Oh S.H., Kim K. Expression of IL-1 receptors in the later period of fetal thymic culture and during suspension culture of thymocytes from aged mice. // Immunol. Cell. Biol. 1999. - Vol.77. - P.491-498.

196. Ono T., Okada S. Unique increase of superoxide dismutase level in brain of long living mammals. // Exp. gerontol. 1984. - Vol.19. - P.349-354.

197. Paganelli R., Quinti I., Ansotegui I.J. et al. Humoral immunity in aging. // Aging. 1994. - Vol.6. - P. 143-150.

198. Pahlavani M.A., Harris M.D., Richardson A. Activation of p21ras/MAPK signal transduction molecules decreases with age in mitogen-stimulated T cells from rats. // Cell. Immunol. 1998. - Vol.185. - P.39-48.

199. Pahlavani M.A., Vargas D.A. Aging but not dietary restriction alters the activation-induced apoptois in rat T cells.// FEBS Lett. 2001. - Vol.491. - P. 114-118.

200. Pollack M., Leeuwenbuigh C. Apoptosis and aging: role of the mitochondria. // J. Gerontol. Biol. Med. Sci. 2001. - Vol.56. - P.B475-B482.

201. Ponnappan U. Ubiquitin-proteasome pathway is compromised in CD45R0+ and CD45RA+ T lymphocyte subsets during aging. // Exp. Gerontol. 2002. -Vol.37. - P.359-367.

202. Porta E.A. Advances in age pigment research. // Arch. Gerontol. Geriatr. -1991.-Vol.12.-P.303-320.

203. Potestio M., Pawelec G., Di Lorenzo G. et al. Age-related changes in the expression of CD95 (APOl/FAS) on blood lymphocytes. // Mech. Ageing Dev. -1999.-Vol.34.-P.659-673.

204. Proust J., Moulias R., Fumeron F. et al. HLA and longevity. // Tissue Antigens. 1982.-Vol.19.-P.168-173.

205. Quadri R.A., Arbogast A., Phelouzat M.A. Age-associated decline in cdkl activity delays cell cycle progression of human T lymphocytes. // J. Immunol.1998. Vol.161. - P.6203-6309.

206. Rea I.M., Stewart M., Campbell P. et al. Changes in lymphocyte status, IL-2 and soluble IL-2 receptor i n o Id and very old age. // Gerontology. 1996. -Vol.42. - P.69-78.

207. Re R.s Pellegrini N., Proteggente A. et al. Antioxidant activity applying an improved ABTS Radical cation decolorization assay. // Free Radic. Biol. Med.1999. Vol.26 -№ 9/10 - P. 1231-1237.

208. Sastre J., Pallardo F.V., Vina J. Glutathione, oxidative stress, and aging // Age. 1996,- Vol.19. -P.129-139.

209. Schindowski K, Flohlich L„ Mauer K. et al. Age-related impainnent of human T lymphocytes activation: specific differences between CD4+ and CD8+ subsets. // Mech. Ageing Dev. 2002. - Vol.123. - P.375-390.

210. Schmidt A. M„ Hon O, Cao R. et al. RAGE: a novel cellular receptor for advanced glycation end products. // Diabetes. 1996. - Vol.45. - P.S77-S80.

211. Schmidt A. M. et al. Advances glycation and products interacting with theirendothelial receptor induce expression of vascular cell adhesion moleeule-1

212. VCAM-1) ,n cultured human endothelial cell and mice. // J. Clin Invest. -1995,- Vol.96. -P.1395-1403.

213. Sell D.R., Lane M.A., Johnson W.A. et al. Longevity and the genetic determinate of collagen glycoxidation kinetics in mammalian senescence // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - Vol.93. - P.485-490.

214. Shigenaga M.K., Gimeno C.J., Ames B.N. Urinary 8-hydroxy-2--deoxyguanosine as a biological marker of in vivo oxidative DNA damage. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989. - Vol.86. - P.9697-9701.

215. Sies H., Arteel G.D. Interaction of peroxynitrite with selenoproteins and glutathione peroxidase mimics. // Free Radical Biol. Med. 2000. - Vol.28. -P.1451-1455.

216. Singhal S.S., Zimniak P., Awasthi S. et al. Several closely related glutathione-S-transferase isozymes catalyzing conjugation of 4-hydroxynonenal are differentially expressed in human tissues. // Arch. Biochem. Biophys. 1994. -Vol.311. -P.242-250.

217. Sohal R.S., Agarwal S., Dubey A. et al. Protein oxidative damage is associated with life expectancy of houseflies.//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1 993. -Vol.90. - P.7255-7259.

218. Sohal R.S., Agarwal S., Sohal B.H. Oxidative stress and aging in the mongolian gerbil. // Mech. Aging. Dev. 1995. - Vol.81. - P. 15-25.

219. Sohal R.S., Sohal B.H., Orr W.C. Mitochondrial superoxide and hydrogen peroxide generation, protein oxidative damage, and longevity in different species of flies. // Free radical biol. med. 1995 - Vol.19. - P.499-504.

220. Sohal R.S. Metabolic rate and life span. / Cellular Aging: Concepts and Mechanisms (R. Witler, ed.). Basel: Karger, 1976. - P.25-40.

221. Sohal R.S., Sohal B.H., Brunk U.T. Relationship between antioxidant defenses and longevity in different mammalian species. // Mech. Ageing Dev. 1990. -Vol.53.-P.217-227.

222. Sohal R.S. et al. Superoxide anion radical production in different animal species. // Mech. Ageing Dev. 1989. - Vol.49. - P.129-135.

223. Sohal R.S., Weindruch R. Oxidative stress, caloric restriction, and aging. // Science. 1996. - Vol.273. - P.59-63.

224. Solana R, Mariani E. NK and NK/T cells in human senescence. // Vaccine. -2000,- Vol.18. -P.1613-1620.

225. Song L„ Stephens J. M„ Kittur S. et al. Expression of c-fos, c-jun and junB in peripheral blood lymphocytes from young and elderly adults. // Mech Ageing Dev. 1992. - Vol.65. - P.149-156.

226. Stadtman E.R. Protein oxidation and aging. // Science. 1992 - Vol 257 -P.1220-1224.

227. Starke-Reed P.E., Oliver C.N. Protein oxidation and proteolysis during aging and oxidative stress. // Arch. Biochem. Biophys, 1989. Vol.275. - P.559-567.

228. Stocker R, Frei B. Endogenous antioxidant defences in human blood plasma. /

229. Ox.dat.ve stress: oxidants and antioxidants (Sies H. ed.). London: Academic Press, 1991. - P.213-243.

230. Sunderkotter C, Kalden H„ Luger T.A. Aging and the skin immune system. // Arch. Dermatol. 1997. - Vol.133. - P.1256-1262.

231. Swift M.E., Bums A.L., Gray K.L. et al. Age-related alterations in the inflammatory response to dennal injury. // J. Invest. Dermatol. 2001 - Vol 117 -P.1027-1035.

232. Tamura T„ Kunimatsu T, Yee S.T. et al. Molecular mechanism of the impairment m activation signal transduction in CD4+ T cells from old mice. // Int. Immunol. 2000. - Vol. 12. - P.1205-1215.

233. Tanchot c, Rosha B. Peripheral selection of T cell repertoires:role of continuous thymus output. // J. Exp. Med. 1997. - Vol 186 - P 10991106.

234. Tappel A.L. Lipid peroxidation and fluorescent molecular damage to membranes. / Pathobiology of Cell Membranes (B.F. Trump, A.U. Arstila. eds.).

235. New York: Academic, 1975. P.145-170.

236. Thomas J.P., Mariorino M., Ursini F. et al. Protective action of phospholipids hydroperoxid glutathione peroxidase against membrane-damaging lipid peroxidation. // J. Biol. Chem. 1990. - Vol.265 - P.454-461.

237. Tolmasoff J.M., Ono T., Cutler R.G. Superoxide dismutase: correlation with life span and specific metabolic rate in primate species. // Proc. natl. acad. sci. USA. - 1980. - Vol.77. - P.2777-2781.

238. Toyokuni S. Reactive oxygen species-induced molecular damage and its application in pathology. // Pathol. Internation. 1999. - Vol.49. - P.91-102.

239. Tsuchihashi H., Kigoshi M., Iwatsuki M. et al. Action of P-carotine as antioxidant against lipid peroxidation. // Arch. Biochem. Biophys. 1995. - Vol.323. -P.137-147.

240. Ursini F., Mariorino M., Sevanian A. Membrane hydroperoxides. // Oxidative stress: oxidants and antioxidants (H. Sies, ed.). London etc.: Academic Press, 1991. - P.319-336.

241. Vaziri H. et al. ATM dependent telomere loss in human diploid fibroblast and DNA damage lead to the posttranslational activation p 53 protein involving poli (ADP ribose) polymerase. // EMBO. J. - 1997. - Vol.16. - P.6018 - 6033.

242. Vercammen C., Ceuppens J.L. PGE2 inhibits human of the CD3-Ti T cell proliferation after cross-linking of the CD3-Ti complex by directly affecting T cells at an early step of the activation process. // Cell. Immunol. 1987. -Vol.104.-P.24-36.

243. Villanueva J.L., Solana R, Alonso M. C. et al. Changes in expression of HLAclass II antigens on peripheral blood monocytes from aged humans. // Dis. Markers. 1990. - Vol.8. - P.85-91.

244. Von Zg,inicki т., Nilsson T E > DockeW D e( al Lipo&sc.n accumulat.on and ageing of fibroblasts. //Gerontology. 1995. - Vol.41. - P.95-108.

245. Von Zglinicki T. et al. Mild hyperoxia shortens telomeres and inhibits proliferate of fibroblasts: a model for senescence? // Exp. cell res. 1995 - Vol 220 -P.186-193.

246. Wakikawa A., Utsuyama M„ Wakabayayashi A. et al. Age-related alteration of cytokine production profile by T cell subsets in mice: a flow cytometric study. //Exp. Gerontol. 1999. -Vol.34. - P.231-242.

247. Walford R.L. ТЪе immunologic theoiy of aging. Copenhagen: Munsksgard, 1969. - 338p.

248. Warner H.R. Superoxide dismutase, aging, and degenerative disease. // Free Radical Biol. Med. 1994. - Vol.17. - P.249-258.

249. Weksler M.E., Schwab R. The immunogenetics of immune senescence. // Exp. Clin. Immunogenet. 1992. - Vol.9. - P. 182-187.

250. Whisler R.L., Beiqing L„ Chen M. Age-related decreases in IL-2 production by human T cells is associated with impaired activation of nuclear transcriptional factors AP-1 and NF-AT.// Cell. Immunol. 1996. - Vol.169. - P.185-195.

251. Whisler R.L., Chen M„ Liu B. et al. Age-related impairment in TCR/CD3 activation of ZAP-70 is associated with reduced tyrosine phosphorylation of chains and P59<yn/p561ck in human T cells. //Mech. Ageing Dev 19991. V0I.HI.-P.49-66.

252. Yin D. Age Pigments and the Biochemical Basis of Their Formation. -Linkiiping, Sweden: Linkiiping University, 1995.

253. Yen C J., Lin S.L., Huang K.T. et al. Age-related changes in interferon y and IL-4 secretion by purified human CD4+ and CD8+ T cells. // J. Biomed. Sci. -2000.-Vol.7.-P.317-321.

254. Yu B.P. Cellular defenses against damage from reactive oxygen species. // Physiol. Rev. 1994. - Vol.74. - P.139-162.

255. Zaring E.J., Mobarhan S., Bowen P. et al. Pulmonary pentane excretion increases with age in healthy subjects. // Mech. Ageing Dev. 1993. - Vol.67. -P.141-147.

256. Zhang Y., Acuna C.L., Switzer K.C. et al. Corrective effects of IL-12 on age-related deficiencies in IFNy production and 1L- 12R(32 expression in virus-specific CD8+ T cells.//! Interferon Cytokine Res. 2000. - Vol.20. - P.235-245.

257. Zhang J. Parkinson's disease associated with oxidative damage to cytoplasmic DNA and RNA in substation nigra neuron's. // Am. J. Pathol. 1999. - Vol.154. - P.1423-1429.

258. Zorov D.B. Mitochondrial damage as a source of diseases and aging: a strategy of how to fight these. // Biochim. Biophys. Acta. 1996. - Vol.1275. -P.10-15.

259. Zhou D., Chrest F.J., Adler W. et al. Increased production of TGF-(3 and IL-6 by aged spleen cells. // Immunol. Lett. 1993. - Vol.36. - P.7-11.