Иммунобиологические свойства метапневмовируса птиц штамм "MPV - 07ВТ" тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат ветеринарных наук Роменская, Диана Витальевна

• Роменская, Диана Витальевна
• кандидат ветеринарных наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Роменская, Диана Витальевна

ВВЕДЕНИЕ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Общая характеристика метапневмовирусной инфекции птиц.1 о

1.1.1 История изучения.

1.1.2 Возбудитель.

1.1.3 Эпизоотологические данные.

1.1.4 Клинические признаки.

1.1.5 Патогенез и патологоанатомические данные.

1.1.6 Иммунитет.

1.2 Методы и средства диагностики метапневмовирусной инфекции птиц.

1.2.1 Системы культивирования для диагностики.

1.2.2 Диагностика.

1.3 Меры профилактики и борьбы.

1.4 Критерии подбора штаммов для производства вакцин против МПВИ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммунобиологические свойства метапневмовируса птиц штамм "MPV - 07ВТ"»

Метапневмовирусная инфекция птиц (МПВИ) является одной из актуальных проблем современного птицеводства. Экономический ущерб, причиняемый заболеванием, складывается из падежа птицы, снижения показателей яйценоскости, ухудшения конверсии корма и выбраковки птицы [20, 24, 39, 173]. Возбудитель МПВИ оказывает иммунодепрессивное действие, снижая общую резистентность птицы, и тем самым повышая ее чувствительность к другим болезням [7, 37].

Проведенные исследования показали, что ущерб от МПВИ связан не только с эпизоотологией возбудителя и нарушениями ветеринарно-санитарного режима, но и с несовершенством современных методов диагностики и профилактики болезни [35, 37, 119].

МПВИ была впервые зарегистрирована в Южной Африке в конце 1970-х гг. и за короткий период времени охватила ряд стран с развитой птицеводческой индустрией. Серологические и вирусологические исследования свидетельствуют о повсеместном распространении метапневмовирусной инфекции на территории России: наличие данного заболевания выявляли примерно в 20% исследованных птицеводческих хозяйств РФ [1,9].

На основании различий в аминокислотной последовательности генома вируса существующие штаммы метапневмовируса птиц (МГТВП) классифицированы на 4 подтипа: А, В, С, О. Многообразие подтипов возбудителя создает значительные сложности в диагностике и профилактике болезни [57, 80, 154]. Молекулярный генетический анализ показал, что на территории РФ в 92-95% выявляют полевые изоляты МПВП, принадлежащие к подтипу В, и только в 5-8% случаев - к подтипу А [9]. Имеется крайне мало информации о биологических свойствах возбудителя МПВИ различных подтипов, поэтому проведение работ по выделению и изучению основных иммунобиологических свойств полевых изолятов и, в частности, подтипа В, превалирующих на территории РФ, является актуальной задачей.

Средства специфической профилактики широко применяют для борьбы с данной инфекцией. Программа вакцинации против МПВИ требует наличия живых и инактивированных вакцин [60, 92]. В РФ используют живые вакцины только импортного производства и инактивированные препараты (импортного и отечественного изготовления). В связи с вышеизложенным, актуальность научно-исследовательской работы, направленной на поиск иммуногенных вакцинных штаммов для разработки отечественной живой вакцины, несомненна.

Таким образом, изучение иммунобиологических свойств штамма МПВП с целью определения возможности его использования в качестве вакцинного, является актуальной задачей.

Степень разработанности проблемы

Опубликовано значительное количество работ об успешном применении клеточных культур при изучении биологических свойств МПВП, при изготовлении диагностикумов и вакцин. В то же время, совершенствование вакцин продолжается путем подбора штаммов вируса - кандидатов в вакцинные при изучении полевых изолятов, полученных от птиц в случаях массовой заболеваемости.

Цель и задачи исследования

Главной целью исследований являлось изучение иммунобиологических свойств МПВП штамм «MPV - 07ВТ». Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- изучить молекулярно-генетические свойства изолята МПВП;

- адаптировать штамм «MPV - 07ВТ» к системе культивирования;

- подобрать параметры культивирования штамма «MPV - 07ВТ» в перевиваемой культуре клеток Vero;

- изучить антигенные свойства штамма «MPV - 07ВТ»;

- сравнить штамм «MPV — 07ВТ» с другими штаммами МПВП, используемыми для изготовления вакцин против МПВИ;

- провести процедуру депонирования и разработать нормативную документацию на штамм «MPV - 07ВТ».

Научная новизна результатов исследований

Впервые в РФ предложен новый штамм «MPV - 07ВТ» МПВП, адаптированный к первично-трипсинизированной и перевиваемым культурам клеток: ФЭК, Vero, Marc-145, МА-104. Изучены иммунобиологические свойства штамма «MPV - 07ВТ» и отработаны параметры его культивирования в первичной культуре клеток ФЭК, в перевиваемой культуре клеток Vero.

В ходе изучения иммунобиологических свойств штамма «MPV - 07ВТ» была установлена возможность использования его в качестве кандидата в вакцинные штаммы против МПВИ.

Теоретическая и практическая значимость исследования

По результатам проведенных исследований предложен производственный штамм «MPV - 07ВТ». Проведено депонирование (справка о депонировании № 4 от 30.03.12), разработан и утвержден «Стандарт организации на штамм «MPV - 07ВТ» МПВП (СТО 00495527-0173-2012)».

В рамках выполнения научно-исследовательских работ по теме диссертации разработаны, комиссионно проверены, одобрены и утверждены ученым советом ФГБУ «ВНИИЗЖ» следующие методики:

Методические рекомендации по культивированию и титрованию метапневмовируса птиц в перевиваемой культуре клеток Marc-145»;

- «Методические указания по титрованию метапневмовируса птиц в перевиваемой культуре клеток МА-104».

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

- биологические свойства штамма «MPV - 07ВТ»;

- подбор оптимальных условий культивирования штамма «MPV - 07ВТ»;

- антигенные свойства штамма «MPV - 07ВТ»;

- сравнение штамма «MPV - 07ВТ» с другими штаммами МПВП, используемыми для изготовления вакцин против МПВИ.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

В диссертационной работе приведены результаты исследований по изучению иммунобиологических свойств МПВП штамм «MPV - 07ВТ». Результаты научного исследования соответствуют пунктам паспорта специальности 06.02.02 - 1, 3, 4, 5, 9, 14.

Степень достоверности и апробация результатов исследования

Результаты проведенных исследований получены с использованием большого объема экспериментального материала, данные опытов обработаны статистическими методами, подтверждающими их достоверность. Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на Международной конференции молодых ученых «Клеточные технологии для регенеративной медицины» (г.Санкт-Петербург, 2011г.), Международных научно-практических конференциях молодых ученых «Достижения молодых ученых в ветеринарную практику» (г.Владимир, 2010г. и 2012г.), а также на заседаниях ученого совета ФГБУ «ВНИИЗЖ» в период 2009-2012 гг.

Публикации

По материалам диссертационной работы опубликовано 6 научных работ, в том числе 3 работы в изданиях, рекомендованных по списку ВАК Министерства образования и науки РФ для докторских и кандидатских диссертаций.

Структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 136 листах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов, методов, собственных исследований, обсуждений, выводов и практических предложений, содержит 14 таблиц и 22 рисунков. Список использованной литературы включает 203 наименования, из них 25 отечественных и 178 зарубежных. В приложении представлены копии титульных листов документов, отражающих итоговые результаты научной работы и подтверждающих их достоверность.

Заключение диссертации по теме «Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов», Роменская, Диана Витальевна

Заключение:

1. МПВП адаптировался к перевиваемой культуре клеток МА-104 уже на первом пассаже, проявив свои инфекционные свойства, характерные для вируса данного семейства.

2. Культура клеток МА-104 является альтернативной культуре клеток Vero при титровании МПВП.

Председатель комиссии

Члены комиссии:

Б.Л. Манин

Р.В. Яшин A.A. Нестеров Л.В. Малахова ВДЁЯрШМкая ученей секретарь

-вниязж»

B.c. F YCAJIEEB риложение № 3