Гуморальный и секреторный иммунный ответ к Helicobacter pylori у детей с хроническими воспалительными заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.09, кандидат медицинских наук Ильинцева, Надежда Викторовна

• Ильинцева, Надежда Викторовна
• кандидат медицинских наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Ильинцева, Надежда Викторовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Иммунная система ЖКТ

1.2. Н. pylori, эпидемиология, факторы патогенности и 21 вирулентности

1.3. Взаимодействие Н. pylori с иммунной системой человека

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Исследуемый материал

2.2. Реагенты и тест-системы

2.3. Методы исследования

Глава 3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Клиническая характеристика обследуемого контингента

3.2. Оценка показателей гуморального иммунитета детей 47 в исследуемых группах.

3.2.1. Уровень общего IgE и ИЛ-10 в сыворотке крови 47 обследуемых лиц.

3.2.2. Содержание специфических антител к Н.pylori в 50 сыворотке крови детей.

3.3. Оценка показателей секреторного иммунитета 56 детей с воспалительными заболеваниями желудка и ДПК.

3.3.1. Содержание slgA в экзосекрете ротовой полости и 56 надосадочной жидкости проб фекалий.

3.3.2. Содержание ИЛ-17 в надосадочной жидкости проб 58 фекалий.

3.3.3. Содержание ^Е-АТ к Н.ру1оп в надосадочной 58 жидкости проб фекалий.

3.3.4 Содержание цитотоксина CagA Н.ру1оп в копрофильтратах детей с гастродуоденальной патологией.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Гуморальный и секреторный иммунный ответ к Helicobacter pylori у детей с хроническими воспалительными заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки»

Хронические болезни органов пищеварения относят к числу наиболее распространенной патологии детского возраста, значительную часть которой составляют хронические воспалительные заболевания верхних отделов пищеварительного тракта (эзофагиты, гастриты, дуодениты, язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки) [27, 29].

По данным статистики за последние 20 лет распространенность хронических заболеваний желудочно-кишечного тракта у детей возросла с 99,5 до 159,5, а у подростков - с 90,9 до 157,9 на 1000 детского населения. Наряду с неуклонным ростом заболеваемости хроническим гастритом (ХГ), гастродуоденитом (ХГД), дискинезией желчевыводящих путей (ЖВП) постоянно растет удельный вес язвенно-эрозивных форм заболеваний, отмечается отчетливое омоложение патологии [29].

Большинством исследователей в качестве этиологического > фактора развития ХГ, язвенной болезни (ЯБ) и ассоциированной с лимфоидной тканью опухоли желудка признается бактерия Helicobacter pylori (H.pylori). Инфицирование Н. pylori происходит в раннем детстве, обычно после первого года жизни. Распространенность Н. pylori в человеческой популяции высока и составляет более 50-80%, при этом у большинства людей инфицирование H.pylori протекает бессимптомно [56]. Однако последние десятилетия характеризуются неуклонным ростом Н pylori - ассоциированных заболеваний. С одной стороны, это объясняют высокой генетической изменчивостью бактерии с быстрым формированием высокотоксигенных (CagA+) и патогенных штаммов [50]. С другой стороны, важную роль в развитии хронической гастродуоденальной патологии, ассоциированной с //.¿у/оп'-инфекцией, отводят состоянию иммунной системы в целом и секреторного иммунитета, в частности. [9, 10]. Особый интерес представляет исследование иммунного ответа к H.pylori у детей с неблагоприятным течением гастродуоденальных заболеваний, а также у лиц с аллергопатологией.

Полагают, что у людей с атопической реактивностью иммунный ответ к H.pylori отличается ТЬ2-направленностью и усилением синтеза соответствующих цитокинов. При этом отмечается снижение уровня Н. pylori-обусловленной выработки ИФН-у, ИЛ-10 и ТНФ-а [92].

Известно, что в слизистой ЖКТ содержатся IgE-продуцирующие плазматические клетки, повышенное количество которых отмечается при язвенной болезни и эрозиях слизистой оболочки (СО) желудка и двенадцатиперстной кишки (ДПК) [54], а также у лиц с аллергическими заболеваниями [90]. Однако роль системы IgE в гуморальном и секреторном антихеликобактерном иммунитете не определена окончательно, и это диктует необходимость дальнейших исследований.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Выявить особенности клинического течения и состояние гуморального и секреторного иммунного ответа к H.pylori у детей с хроническими воспалительными заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированными с атопической реактивностью.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Выявить клинические особенности течения хронических воспалительных заболеваний гастродуоденальной зоны у детей, в том числе на фоне атопической реактивности.

2. Определить содержание антител IgM, IgG, IgA, IgE изотипов к H.pylori, общего IgE и ИЛ-10 в сыворотке крови детей с хроническими заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки. г

I / ) А у

3. Исследовать содержание секреторного ^А, ИЛ-17 и цитотоксина Са§А Н.руЬп в надосадочной жидкости проб фекалий у детей с хронической гастродуоденальной патологией.

4. Определить содержание ^Е-АТ к Н.руЬп и его цитотоксину CagA в надосадочной жидкости проб фекалий у детей обследуемых групп.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

1. Показано, что у детей с аллергопатологией и сопутствующими хроническими воспалительными заболеваниями гастродуоденальной зоны антихеликобактерный 1§Е ответ преобладает над (81% и 25% серопозитивных лиц, соответственно), при этом уровень ^Е-АТ к Н.руЬп повышается при обострении аллергического процесса.

2. Выявлено, что у детей с язвенной болезнью и эрозиями слизистой оболочки гастродуоденальной зоны, а также у детей с неэффективной эрадикацией Н.руЬп в анамнезе ^Е-АТ к Н.руЬп в сыворотке крови определяются реже и в более низких концентрациях, чем у здоровых.

3. Впервые показано, что положительная уреазная активность чаще встречается у Я.ру/оп-серопозитивных (73,5%), чем у Н.руЬп-негативных пациентов (33%); при выявлении сывороточных ^Е-АТ к Н.руЬп она регистрируется в 92-94% случаев и ассоциирована с наличием более высоких концентраций цитотоксина CagA Н.руЬп в надосадочной жидкости проб фекалий.

4. Впервые установлена высокая частота выявления ^Е-АТ к Н.ру1оп (89-100%) и ^Е-АТ к CagA Н.руЬп (65%-77%) в надосадочной жидкости проб фекалий у детей с хроническими воспалительными заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки.

5. У детей с аллергопатологией и хроническими заболеваниями гастродуоденальной зоны выявлена прямая корреляция между уровнем цитотоксина CagA Н.ру1оп и ^Е-АТ к Н.ру1оН в надосадочной жидкости проб фекалий (г=+0,5; р<0,05), и отмечена высокая частота обнаружения ИЛ-17 по сравнению с больными без атопии.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Определение ^Е-АТ к Н.руЬп в сыворотке крови детей, наряду с определением ^в-АТ и ^А-АТ (или суммарных АТ), можно рекомендовать для повышения эффективности серодиагностики Н.ру1ог1-инфекции в детской практике. Полученные данные о высокой частоте выявления ^Е-АТ к Н.ру1оп в надосадочной жидкости проб фекалий обосновывают создание новой медицинской технологии неинвазивной диагностики хеликобактерной инфекции.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. В структуре заболеваний гастродуоденальной зоны у детей с аллергопатологией в 91% случаев выявлены хронические гастродуодениты, протекающие со слабо выраженной субъективной симптоматикой и преобладанием диспепсического синдрома. У детей без аллергии выраженность симптомов варьирует от умеренной - при гастродуоденитах, до сильной - у больных с деструктивным поражением желудка и/или двенадцатиперстной кишки. Для последних характерны преобладание и максимальная выраженность болевого синдрома, частое нарушение моторной функции ЖКТ, проявляющееся изжогой, дуодено-гастральным рефлюксом и дискинезией желчевыводящих путей.

2. Гуморальный иммунный ответ к Н.руЬп у детей с заболеваниями гастродуоденальной зоны представлен, помимо ^А- и ^М-антител, антителами 1§Е изотипа. Наличие ^Е-АТ к Н.ру1оп в сыворотке крови в

94% случаев ассоциировано с положительной уреазной активностью в тестах выявления H.pylori. У детей с аллергопатологией при более легком течении заболеваний гастродуоденальной зоны антихеликобактерный IgE ответ преобладает над IgA ответом (81% и 25% серопозитивных лиц, соответственно) и увеличивается при обострении аллергического процесса. У детей с язвенно-эрозивными заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки отмечается низкая частота выявления и концентрация IgE-AT к H.pylori в сыворотке крови на фоне повышенного уровня ИЛ-10 и более высокой частоты выявления IgA-AT к H.pylori, чем у больных с аллергией.

3. Секреторный иммунный ответ к H.pylori у детей с заболеваниями гастродуоденальной зоны отличается высокой частотой выявления IgE-AT к H.pylori и его цитотоксину CagA в надосадочной жидкости проб фекалий, а также зависимостью концентрации slgA в экзосекрете ротовой полости и в надосадочной жидкости проб фекалий от характера поражения слизистой оболочки ЖКТ. При сочетании с аллергопатологией заболевания желудка и двенадцатиперстной кишки характеризуются более легким клиническим течением на фоне низкого уровня slgA в экзосекрете ротовой полости и надосадочной жидкости проб фекалий, но более частым обнаружением ИЛ-17 в копрофильтратах и прямой корреляционной связью уровня IgE-AT к H.pylori с концентрацией цитотоксина CagA (г=+0,5; р<0,05).

Таким образом, совокупность результатов исследования гуморального и секреторного иммунного ответа к H.pylori может свидетельствовать о защитной роли IgE системы иммунитета при хронических воспалительных заболеваниях желудка и двенадцатиперстной кишки у детей.

Заключение диссертации по теме «Клиническая иммунология, аллергология», Ильинцева, Надежда Викторовна

ВЫВОДЫ

1. В структуре заболеваний гастродуоденальной зоны у детей с аллергопатологией превалируют хронические гастродуодениты (в 91% случаев), которые протекают со слабо выраженной субъективной симптоматикой и преобладанием диспепсического синдрома над болевым. У детей без атопии выраженность гастродуоденальных симптомов варьирует от умеренной - у лиц с хроническим гастродуоденитом, до сильной - у больных с деструктивным поражением желудка и/или двенадцатиперстной кишки. Для последних характерны максимальная выраженность болевого синдрома и частое нарушение моторной функции желудочно-кишечного тракта, проявляющееся изжогой, дуодено-гастральным рефлюксом, дискинезией желчевыводящих путей.

2. У детей с аллергопатологией и заболеваниями гастродуоденальной зоны на фоне повышенного уровня общего 1^Е антихеликобактерный ^Е-ответ в сыворотке крови преобладает над ^А-(81% и 25% серопозитиных лиц, соответственно), при этом уровень 1§Е-АТ к Н.ру1оН увеличивается при обострении аллергического процесса.

3. У детей с язвенной болезнью и эрозиями слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки, а также у детей с неэффективной эрадикацией Н.ру1оН в анамнезе ^Е-АТ к Н.ру1оп в сыворотке крови выявляются реже, а их концентрация ниже, чем у здоровых (р<0,05).

4. Концентрация ИЛ-10 в сыворотке крови у детей с язвенной болезнью и эрозиями слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки выше, чем у больных хроническим гастродуоденитом с аллергией и без нее (р<0,05).

5. У больных хроническим гастродуоденитом на фоне атопической реактивности уровень э^А в экзосекрете ротовой полости и в надосадочной жидкости проб фекалий ниже, чем у больных без атопии.

6. Выявление сывороточных ^Е-АТ к Н.ру1оп в комплексе с антителами других изотипов у детей с гастропатологией в 92-94% случаев сочетается с положительной уреазной активностью, которая ассоциирована с наличием высоких концентраций цитотоксина CagA Н.ру1оп в надосадочной жидкости проб фекалий.

7. У детей с заболеваниями гастродуоденальной зоны в надосадочной жидкости проб фекалий с высокой частотой определяются ^Е-АТ к Н.ру1оп (89-100%) и его цитотоксину CagA (65%-77%), при этом у детей с атопической реактивностью отмечается прямая корреляция между уровнем CagA Н.ру1ог1 и ^Е-АТ к Н.ру1оп (г=+0,5; р<0,5), а ИЛ-17 у них определяется чаще, чем у лиц без атопии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

ЖКТ здорового человека представляет собой уникальную экологическую нишу, в которой обитает более 400 видов микробов, метаболизм которых тесно связан с организмом хозяина [13, 38] Именно иммунной системе отводится критическая роль в поддержании баланса между механизмами толерантности и эффективным ответом на эпизодические угрозы патогенов [26].

Н. pylori - бактерия, признаваемая большинством исследователей в качестве этиологического фактора развития хронического гастрита, язвенной болезни и ассоциированной с лимфоидной тканью опухоли мальтомы [5, 41]. Инфицирование Н. pylori происходит в раннем детстве, обычно после первого года жизни [56].

Следует отметить, что Н. pylori - штамм хеликобактерий, колонизирующий СО желудка человека в течение не менее пятидесяти тысяч лет [56], и на сегодняшний день инфицирует до 50% населения во всем мире, а в России эта цифра достигает 80%. Показано, что у большинства людей инфицирование H.pylori протекает бессимптомно [41,56].

Тем не менее, последние десятилетия характеризуются неуклонным ростом H.pylori - ассоциированных заболеваний. Отчетливо проявляется омоложение патологии, в том числе рост заболеваемости язвенной болезнью желудка й ДПК среди детей и подростков [3]. С одной стороны это явление может быть объяснено высокой генетической изменчивостью бактерии с быстрым формированием высоко токсигенных и патогенных штаммов [50]. С другой стороны, состояние иммунной системы в целом и мукозального иммунитета, в частности, рассматривают как важное звено в развитии хронической гастродуоденальной патологии, ассоциированной с

Я./ту/оп'-инфекцией [9, 10, 11].

Выявлению особенностей параметров гуморального и секреторного иммунитета у детей с хроническими- воспалительными заболеваниями желудка и ДНК, в том числе на фоне атопической реактивности, посвящено настоящее исследование.

Работа выполнена на основании обследования 83 детей в возрасте от 7 до 17 лет. У 69 человек на момент обследования диагностированы хронические воспалительные заболевания желудка и/или ДГЖ в стадии обострения. Из них 22 ребенка (32%) помимо гастродуоденальной патологии имели подтвержденные аллергические заболевания: бронихиальную астму (9 чел.), атопический дерматит (11 чел.), аллергический риноконъюнктивит (2 чел.). 14 практически здоровых детей того же возраста, не имеющих в анамнезе указаний на аллергические и гастроэнтерологические заболевания и не предъявляющих соответствующих жалоб, составили группу контроля.

В ходе работы нами было отмечено, что в структуре заболеваний гастродуоденальной зоны у детей с аллергией превалировали ХГ/ХГД (в 91% случаев), клиническая картина которых характеризовалось слабо выраженной субъективной симптоматикой и преобладанием диспепсического синдрома над болевым, а также более редким выявлением нарушений моторной функции ЖКТ по сравнению с больными без аллергопатологии. Стертость клинической картины гастроэнтерологических заболеваний у взрослых больных с аллергией была описана ранее другими, авторами [14, 31, 39]. В то . же время, распространенность деструктивных поражений гастродуоденальной зоны (ЯБ, эрозии) у больных с аллергией по данным литературных источников широко - варьирует от 5-15% [2, 37] до 50-66% [14, 36], что свидетельствует о необходимости дальнейших исследований.

Инфицирование Н. pylori удалось подтвердить у 38 {56,5%) больных детей. Отдельного внимания зслуживала группа больных (19 человек), в анамнезе которых повторные курсы медикаментозной антихеликобактерной терапии не обеспечивали стойкий терапевтический эффект. По данным амбулаторных карт наиболее часто применяемой схемой, эрадикации Н. pylori у данного контингента была схема с фуразолидоном, плохая переносимость которого могла явиться причиной снижения комплаентности схемы лечения и тем самым -эффективности проводимой эрадикации [42, 43]. Предстояло также выявить особенности иммунного реагирования детей, в анамнезе которых " повторные курсы антихеликобактерного лечения были малоэффективны.

В рамках поставленных нами задач в сыворотке крови детей определяли содержание общего IgE. Его уровень превышал нормальные возрастные значения у детей с аллергическими заболеваниями, что является подтверждением их атопической природы. Кроме того, отмечена тенденция более частого выявления повышенного уровня общего IgE в сыворотке крови детей с деструктивным поражением СО гастродуоденальной зоны (III группа) - в 26% случаев. При этом концентрация общего IgE у этих больных была достоверно выше, чем у здоровых.

Повышенное содержание общего IgE в сыворотке больных с деструктивными, изменениями СО желудка и ДПК, не имеющих

63 аллергических заболеваний, отмечали и другие авторы [39, 83, 118], иногда - в том же проценте случаев [83]. По данным исследователей, высокий уровень IgE определялся в период обострения ЯБ и снижался в период ремиссии [37]. С целью выявления причины повышения IgE у таких больных были проанализированы особенности течения ЯБ, ее длительность, наличие осложнений, а также образ жизни и вредные привычки пациентов. Однако никаких различий среди больных ЯБ с высокими и нормальными значениями общего IgE выявлено не было. Частота инфицирования Н. pylori была одинаково высокой среди всех пациентов, но рецидивы ЯБ после эрадикационной терапии чаще наблюдались у больных с более высокими значениями IgE [83]. По мнению Saito Н. (2009), конститутивное повышение уровня общего IgE в отсутствии симптомов аллергии определяется иммунным отклонением в дифференцировке С04+Т-лимфоцитов в пользу Th2/Treg [110]. Количество Treg при ЯБ часто снижено, чем, вероятно, и объясняется высокий уровень общего IgE [50].

Далее в сыворотках крови детей определяли содержание ИЛ-10 -основного фактора роста всех популяций регуляторных Т-клеток. Показано, что ИЛ-10 требуется для развития всех популяций регуляторных Т-лимфоцитов, его супрессивная функция была зарегестрирована при аллергии и аутоиммунитете [110]. ИЛ-10 снижает активность макрофагов, оказывая влияние и на их АГ-представляющие свойства, что ведет к ингибированию Т-клеточных реакций [34]. Этот интерлейкин участвует в развитии гуморального иммунного ответа [71]. Показано, что Н. pylori опосредованно способствует повышению уровня ИЛ-10 путем воздействия на CDllc(+) дендритные клетки [79]. Однако роль ИЛ-10, как и самих Treg, при //./ту/оп-ассоциированных заболеваниях до сих пор неясна и широко обсуждается в литературе.

В нашем исследовании ИЛ-10 в сыворотке крови детей определялся в 100% случаев во всех группах. В крови больных его концентрация была значительно выше при язвенно-эрозивных заболеваниях желудка и ДИК, что согласуется с данными Гуреева А. Н., в работе которого кроме того отмечено, что повышению уровня ИЛ-10 у детей с ЯБДПК сопутствует увеличение концентрации TGF-ß - фактора роста Treg [9].

Таким образом, ЯБ и эрозии СО гастродуоденальной зоны сопровождаются повышением уровня ИЛ-10. Возможно, усиление синтеза ИЛ-10 является в данном случае компенсаторным механизмом, направленным на подавление избыточных реакций иммунного воспаления в СО желудка и ДПК.

Для характеристики гуморального иммунного ответа к Н. pylori у больных и здоровых детей нами были определены сывороточные антихеликобактерные антитела IgM-, IgA-, IgG- и IgE-изотипов.

Сывороточные IgM-AT к Hpylori были обнаружены лишь у нескольуих пациентов, что объясняется быстрым переключением В-лимфоцитов с синтеза антихеликобактерных IgM-AT в начальной; стадии; болезни на синтез ÄT других изотипов [41]. Антихеликобактерные IgG-АТ, напротив, обнаруживали довольно часто как, в крови больных, так и здоровых лиц, что косвенно, свидетельствует о широком распространении инфекции Hpylori среди детей школьного возраста: IgA-AT к Hpylori с высокой частотой обнаруживали в сыворотке крови детей с заболеваниями гастродуоденальной зоны без аллергии, в то время как у. детей с аллергией IgA-AT к Н. pylori выявляли в. 3-4 раза реже. Слабо выраженный IgA ответ к Н. pylori у большинства детей с аллергопатологией отражает, ' по-видимому, низкую способность к выработке IgA в- целом, что; характерно для лиц с аллергическими заболеваниями [120].

Особый интерес представляло выявление IgE-AT к H.pylori в сыворотке крови детей, поскольку ранее их определяли только у взрослого контингента больных [37, 89].

По нашим данным частота выявления IgE-AT к H.pylori в сыворотке крови была наиболее высокой у здоровых лиц (86%) и снижалась у детей с ХГ/ХГД до 75% и 65% во II и I группах, соответственно. У детей с язвенно-эрозивным поражением СО гастродуоденальной зоны (III группа) частота выявления IgE-AT к Н. pylori составила 54%, что было достоверно ниже, чем у здоровых детей, а их концентрация [Ме=0,87 (0,71; 1,48) ME/мл] - достоверно ниже, чем у здоровых лиц и у детей с аллергическими заболеваниями.

Мы исследовали также содержание сывороточных IgE-AT к H.pylori у больных, в анамнезе которых имелись повторные курсы эрадикации H.pylori без должной эффективности. Оказалось, что IgE-AT к H.pylori в сыворотке крови этих детей выявлялись значительно реже (30,7% против 86%, р=0,005) и в более низкой концентрации ([Ме=0,71 (0,6; 0,98) ME/мл] против [2,8 (1,6; 3,4) ME/мл], р=0,004), чем у здоровых.

Следует отметить, что IgE-ответ к H.pylori у детей с аллергопатологией имел некоторые особенности. В частности, обострение аллергического процесса сопровождалось увеличением концентрации IgE-AT к H.pylori в сыворотке крови до [Ме=2,99 (1,12; 3,53) ME/мл], что было достоверно выше, чем в ремиссии, а также выше, чем у больных без аллергической патологии (II и III группы). Кроме того, при сравнении частоты выявления антихеликобактерных IgM-, IgG-, IgA-, IgE-AT в сыворотке крови H.pylori - серопозитивных лиц было обнаружено, что у больных аллергическими заболеваниями IgE-ответ к H.pylori преобладал над IgA-ответом (81% и 25% серопозитивных лиц, соответственно). Результаты нашего исследования согласуются с данными, полученными при обследовании взрослых пациентов с гастродуоденальными заболеваниями, когда частота обнаружения IgE-AT к H.pylori у лиц с аллергией была выше, чем у больных без аллергии [37]. Интересно, что у 2-х детей с атопией, имеющих язвенно-эрозивные изменения СО ДПК, IgE-AT к H.pylori в сыворотке крови выявлены не были.

Таким образом можно заключить, что содержание сывороточных IgE-AT к H.pylori зависит от характера поражения СО желудка/ДПК и наличия атопии. У детей с аллергопатологией синтез IgE-AT к H.pylori, вероятно, облегчен в силу атопической направленности иммунного ответа, что проявляется в высокой частоте обнаружения IgE-AT к H.pylori на фоне снижения частоты выявления IgA-AT к H.pylori и в повышении уровня IgE-AT к H.pylori при обострении аллергического процесса. У детей без атопии обнаружение IgE-AT к H.pylori можно объяснить переключением иммунного ответа на ТЬ2-тип при длительной персистенции микроба в ЖКТ. Продукция IgE-AT к H.pylori может расцениваться как защитная реакция организма в условиях хронического воспаления. Защитный эффект IgE-AT к H.pylori подтверждается также их наличием в высоком проценте случаев в крови здоровых лиц.

Ранее при обследовании взрослого контингента больных с гастродуоденальной патологией было отмечено, что морфологическое выявление хеликобактерной инфекции во всех случаях сочетается с обнаружением AT к H.pylori тех или иных классов [15]. Однако у детей, инфицированных H.pylori, не всегда удается выявить AT к нему, особенно это касается антител IgM и IgA классов. В результате увеличивается вероятность получения ложноотрицательных результатов при диагностике //./ту/оп-инфицирования у детей серологическим методом [29]. В нашем исследовании, доля детей, серопозитивных по суммарным антителам к H.pylori (IgM-, IgG-, IgA-, IgE-AT), составила: в

I группе - 80% (16), во II - 100% (12), в III - 86% (30), в IV - 86% (12). У 24% Я./?у/огг-серопозитивных лиц антихеликобактерные AT были представлены только IgE-изотипом: в I группе - у 6 человек, во II - у 2, в III - у 5, в IV - у 4 человек. Представляло интерес, подтверждается ли выявление антихеликобактерных IgE-AT при серологическом исследовании больных положительными результатами других методов диагностики Я./ту/оп-инфицирования, например, - биохимических, основанных на уреазной активности H.pylori.

Мы показали, что у H.pylori — серонегативных лиц положительная уреазная активность отмечалась лишь в 33% случаев, в то время как у H.pylori-{IgM-, IgG-, IgA-) серопозитивных лиц - в 73,5%). При обнаружении IgE-AT к H.pylori совпадение с положительной уреазной активностью достигло 92%. При этом наличие в сыворотке крови только IgE-AT к H.pylori при отсутствии антихеликобактерных AT других изотипов также было ассоциировано с высокой частотой положительных уреазных тестов (94%).

Учитывая, что в детском возрасте пороговые значения AT к H.pylori ниже, чем у взрослых, а IgM- и IgA-AT не являются чувствительным индикатором Н. pylori — инфицирования [29], определение IgE-AT к H.pylori можно рекомендовать при серодиагностике H.pylori в детской практике, особенно у детей с аллергопатологией, у которых IgE-AT к H.pylori обнаруживаются чаще, чем все другие изотипы антихеликобактерных AT. В нашем исследовании определение IgE-AT к H.pylori позволило увеличить частоту диагностики случаев хеликобактериоза у больных детей в целом на 27%), причем в группе детей с аллергическими заболеваниями прирост составил 67%.

Для характеристики секреторного иммунитета больных детей в надосадочной жидкости проб фекалий и в экзосекрете ротовой полости

68 мы определяли содержание секреторного ^А (б^А). б^А является важнейшим фактором защиты СО ЖКТ от патогенов: он обеспечивает иммунное исключение микроорганизмов, длительно сохраняет свою структуру и не расщепляется микробными протеазами [11, 95]. Показано, что э^А замедляет адгезию Н.ру1оп к ЭК СО желудка [8, 41]. Особого внимания заслуживают результаты исследований, в которых показана зависимость эффективности проводимой антихеликобактерной терапии от исходной концентрации б^А в желудочном соке [11].

В нашем исследовании у больных без атопии уровень б1^А в экзосекрете ротовой полости превышал нормальные показатели (57-260 мкг/мл) в 50%-66% случаев, в то время как у детей с аллергопатологией повышение уровня б^А по сравнению с нормой отмечалось существенно реже (в 15% случаев, р<0,05), а концентрация б^А была ниже, чем у больных без аллергии. При сравнении уровня б^А в надосадочной жидкости проб фекалий у детей с хронической гастродуоденальной патологией оказалось, что у лиц с ХГ/ХГД без аллергии содержание б1^А выше, чем у больных ХГ/ХГД на фоне атопии и у детей с деструктивным поражением СО гастродуоденальной зоны.

Так как обычно при длительном и/или рецидивирующем повреждении СО ЖКТ реагирует усилением продукции слизи синхронно с увеличением синтеза б^А покровным эпителием [11], обнаруженный нами высокий уровень б1§А в экзосекрете ротовой полости и в надосадочной жидкости проб фекалий у больных ХГ/ХГД, по-видимому, связан с защитной реакцией организма. Более низкая концентрация б1§А у детей с аллергопатологией отражает снижение системного синтеза [120]. По нашим данным, у детей с ЯБ и эрозиями СО желудка и ДНК содержание б^А в надосадочной жидкости проб фекалий сопоставимо с таковым у аллергических больных и достоверно ниже, чем у детей с ХГ/ХГД. По мнению ряда авторов, при нарушении целостности эпителиального покрова желудка и ДНК

69 мономерный 1§А попадает в просвет пищеварительного тракта в обход секреторной транспортной системы, чем и объясняется возникновение дефицита э^А у больных с деструктивными изменениями СО желудка и ДПК [10, 11]. Вторичное снижение концентрации б^А, в сою очередь, может способствовать дальнейшему прогрессированию деструктивно-воспалительного процесса в СО.

В надосадочной жидкости проб фекалий детей с гастропатологией мы, кроме того, определили содержание ИЛ-17 -основного цитокина ТЫ7. Известно, что в норме ТЫ 7 участвуют в защите от бактериальных и грибковых инфекций, дополняя ТЫ-и ТИ2-эффекты [103]. Но если роль ТЫ и ТЬ2 при хеликобактериозе подробно изучена, то значение ТК17 и продуцируемого ими ИЛ-17 остается не вполне ясным. В настоящее время влияние ИЛ-17 активно изучается не только при //.ру/оп-ассоциированных заболеваниях, но и при многих других патологических состояниях (аллергия, аутоиммунитет).

В нашем исследовании частота выявления ИЛ-17 в надосадочной жидкости проб фекалий у больных I группы с аллергопатологией была выше чем у детей II и III группы без атопии (53% и 32%, соответственно; р<0,05). Это подтверждает данные литературы о более высоком содержании ИЛ-17 у пациентов с аллергическими заболеваниями, в частности, больных бронхиальной астмой, у которых ИЛ-17 вносит вклад в развитие аллерген-индуцированной гиперреактивности респираторного тракта [110]. Защитная роль ИЛ-17 при хеликобактериозе была показана в исследованиях на мышиных моделях, в которых ИЛ-17-дефицитные мыши имели более высокую плотность колонизации СО желудка Н.ру1оН и более выраженное хроническое воспаление с моноядерной инфильтрацией, чем мыши дикой линии [47]. В нашей работе высокая частота выявления ИЛ-17 у детей с аллергическими заболеваниями была ассоциирована с благоприятным клиническим течением хронической гастродуоденальной патологии: у большинства больных (91%) она была представлена ХГ/ХГД, и только у двух детей выявлены язвенно-эрозивные изменения СО ДПК.

Учитывая, что более 99% всего IgE секретируется через эпителий ЖКТ в просвет кишки, где ему отводится роль защиты от паразитов, простейших и некоторых патогенных бактерий (Хаитов P.M., 2000), особый интерес представляло выявление IgE-AT к H.pylori в содержимом кишечника. Оказалось, что в надосадочной жидкости проб фекалий у детей с хроническими воспалительными заболеваниями желудка и ДПК IgE-AT к H.pylori и его цитотоксину CagA определяются с высокой частотой (соответственно, в I группе - в 89% и 65% случаев, во II - в 100% и 58%, в III группе - в 97% и 77% случаев). Полученные нами данные согласуются с результатами морфологических исследований, в которых отмечено увеличение доли IgE-содержащих плазматических клеток в СО ЖКТ при хеликобактериозе [54, 65]. Увеличение количества IgE-плазмоцитов регистрировали вокруг язвенных дефектов СО желудка и ДПК, в краевой зоне эрозий [54]. Показано, что численность IgE-содержащих клеток увеличивается при обострении гастрита, особенно при эрозивных его формах [65]. Интересно, что увеличение IgE-производства при инфицировании Н. pylori, по-видимому не зависит от наличия сопутствующей аллергии. Так, количество IgE-клеток в СО ЖКТ было одинаково повышено как у пациентов с хеликобактерной инфекцией, так и у больных хронической крапивницей по сравнению с Н. jDy/оп'-негативными лицами без аллергии [90]. По-видимому, обнаружение специфических антихеликобактерных IgE-AT в копрофильтратах детей с гастродуоденальной патологией отражает защитную реакцию организма, опосредуемую иммунной системой слизистой ЖКТ.

Для характеристики патогенных свойств возбудителя в надосадочной жидкости проб фекалий больных хроническими воспалительными заболеваниями желудка и ДПК мы определили содержание CagA H.pylori. Известно, что белковый цитотоксин CagA вызывает альтерацию клеток покровного эпителия, а CagA+ штаммы H.pylori ассоциированы с деструктивным поражением СО желудка/ДПК [7, 22]. Однако в нашем исследовании не удалось выявить различий по содержанию и уровню CagA H.pylori в копрофильтратах больных ХГ/ХГД и ЯБ/эрозиями желудка и ДПК.

Следует отметить, что в литературе последних лет появились указания на отностительную ценность маркера CagA для оценки риска развития ЯБ желудка и ДПК. Так, установлено, что у детей и жителей Азии, инфицированных CagA+ штаммами, язвообразование встречается редко. Все чаще клинические проявления хеликобактериоза объясняют генетически детерминированным ответом организма хозяина на бактериальную контаминацию [40] и особенностями функционирования иммунной системы [9, 10, 11, 50]. Так, нами была выявлена особенность иммунного ответа к цитотоксину CagA H.pylori у детей с аллергопатологией: повышение концентрации CagA H.pylori в копрофильтратах сопровождалось увеличением уровня IgE-AT к H.pylori в надосадочной жидкости проб фекалий (г=0,5; р=0,03).

Иммунология последних лет наглядно демонстрирует, что в норме многие органы, в том числе СО желудка, находятся в состоянии контролируемого воспаления [56]. Утрата контроля реализуется через различные механизмы, такие как нарушение регулируемого баланса про- и антивоспалительных цитокинов, изменения клеточного состава инфильтрата, функционально-морфологических свойств лейкоцитов и др.

40]. Таким образом, состояние и особенности иммунной системы человека оказывают существенное влияние на характер течения H.pyloriассоциированных заболеваний. В нашем исследовании мы показали роль

72 системы IgE в защите от H.pylori у детей. Защитный эффект IgE-AT к H.pylori подтверждается высокой частотой их выявления в крови практически здоровых лиц и больных неэрозивным гастритом. В то же время, у детей с ЯБ и эрозиями СО гастродуоденальной зоны и у пациентов с низким эффектом от проведенной ранее антихеликобактерной терапии отмечается низкая частота выявления антихеликобактерных IgE-AT.

Мы полагаем, что у лиц с аллергией синтез IgE-AT к H.pylori облегчен в силу атопической направленности иммунного ответа, и это проявляется в высокой частоте их обнаружения на фоне снижения частоты выявления IgA-AT к H.pylori в сыворотке крови, а также в повышении уровня IgE-AT к H.pylori в крови при обострении аллергического процесса. Специфичность антихеликобактерного IgE ответа подтверждается прямой зависимостью концентрации IgE-AT к H.pylori в копрофильтратах от уровня CagA H.pylori (r=0,5; рЮ,03).

На- течение H.pylori - ассоциированных заболеваний оказывают влияние не только IgE-AT, но и другие факторы, зависящие от типа иммунного реагирования, который, согласно гигиенической гипотезе, формируется в раннем детстве. Так, ИЛ-17 в нашем исследовании чаще выявляли у больных с аллергопатологией, для которых также было характерно наличие высоких концентраций общего IgE и IgE-AT к H.pylori в сыворотке крови, что отражает Th2/Th 17-направлепность иммунного ответа [110]. При этом у детей с аллергическими заболеваниями отмечалась стертая клиническая симптоматика гастродуоденальной патологии, в структуре которой превалировали ХГ/ХГД. Высокая частота выявления1 различных изотипов антихеликобактерных AT, в частности IgE- и IgA-AT, а также высокие уровни slgA были характерны для лиц с ХГ/ХГД без атопии. В то же время у детей с ЯБ и эрозиями СО была установлена низкая частота выявления IgE-AT к H.pylori и низкий уровень slgA в копрофильтратах.

73

При этом уровень ИЛ-10 в сыворотке крови у них был выше, чем у больных ХГ/ХГД, что, с одной стороны, может являться компенсаторным механизмом, а с другой — способствовать изменению активности эффекторных Т-лимфоцитов (ТЫ, ТИ2, ТЫ7) и приводить, в частности, к снижению синтеза антихеликобактерных 1§£-АТ. В этих условиях возможно проявление агрессивных свойств бактерии.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Ильинцева, Надежда Викторовна, 2011 год

1. Аруин Л. И, Григорьев П.Я., Исаков В.А., Яковенко Э.П. Хронический гастрит. // Амстердам: 1993. 362 с.

2. Балаболкин И. И., Чистова Л. В., Шавров А. А. и др. Гастродуоденит у детей с атопическим дерматитом и дермореспираторным синдромом. // Вопросы современной педиатрии: научно-практический журнал Союзов педиатров России. 2003. №2 .С. 1-10.

3. Детская гастроэнтерология (избранные главы). Под ред. A.A. Баранова, Е.В. Климанской, Г.В. Римарчук. М., 2002. 592 с.

4. Белая Ю.А., Вахрамеева М.С., Петрухин В.Г. и др. Частота встречаемости специфических антигенов Helicobacter pylori при заболеваниях желудочно-кишечного тракта. // Журн. Микробиол. 2004. № 6. С.63-69.

5. Бельмер С. В., Гасилина Т. В. и др. Helicobacter pylori и аллергия. // Лечащий Врач. 2004. №4. С. 56-58.

6. Вахрушев Я.М., Белова Е. В., Ефремова Л. И. Эрозия гастродуоденальной зоны: самостоятельная нозологическая форма или фаза язвенной болезни. // Экспер. клин, гастроэнтерология. 2003. №2. С. 19-21.

7. Говорун В.М., Момыналиев К.Т., Смирнова О.В. и др. Современные подходы к молекулярной диагностике и типированию клинических изолятов Helicobacter pylori в России. // РЖГГК. 2002. №3. С. 57-65.

8. Горячкина Л.А., Борзова Е.Ю. Роль хеликобактерной инфекции в развитии хронической крапивницы. // Лечащий Врач. 2004. №1. С. 31-39.

9. Гуреев А.Н., Цветкова JI.H., Хромова С.С, Ванеева Н.П. Иммунорегуляция в развитии язвенной болезни двенадцатиперстной кишки у детей. // Педиатрия. 2008. №6. С. 3437.

10. Денисов H.JL, Ивашкин В.Т., Лобзин Ю.В., Голофеевский В.Ю. Хронический гастрит с позиций взаимодействия иммунного, инфекционного и морфологического факторов. // РЖГГК. 2008. №6.С. 22-26.

11. Ивашкин В.Т. Основные понятия и положения фундаментальной иммунологии. // РЖГГК. 2008. №4. С. 4-13.

12. Клинические рекомендации. Гастроэнтнрология. / Под ред. Ивашкина В. Т. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. 208 с.

13. Калимолдаева С.Б. Хроническая крапивница: этиопатогенетическая роль инфекции Helicobacter pylori и разработка методов лечебно-профиллактической коррекции. / Автореф. дисс. докт. -Алмааты. 2008. 50с.

14. Канарейцева Т.Д., Чернуцкая С.П., Гервазиева В.Б., Сухарева Г.В. Морфоиммунологические критерии диагностики гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori. // Экспер. Клин. Гастроэнтерология. 2010. №2. с.22-26.

15. Карельская И. А., Игнатьев В. К. Инфекция Helicobacter pylori у больных с хронической крапивницей и бронхиальной астмой. // Клин. Медицина. 2005. №3. С. 58-61.

16. Кирнус Н.И., Артамонов Р.Г., Смирнов И.Е. и др. Клиническое значение оксида азота и цитокинов при хронических болезнях верхних отделов пищеварительного тракта у детей. // Педиатрия. 2008. №6. С. 14-18.

17. Климович A.B., Грязева И.В., Самойлович М.П. и др. Разработка панели моноклональных антител для выявления цитотоксина CagA Helicobacter pylori.// Журн. микробиол.2010. №3, С.62-67.

18. Климович A.B., Самойлович М.П., Суворов А.Н. Получение и характеристика рекомбинантных фрагментов белка CagA Helicobacter pylori. //Журн. микробиол. 2010. №2. С. 74-79.

19. Корниенко Е.А. Внежелудочные проявления инфекции Helicobacter pylori у детей. //Consillium Medicum (Педиатрия).2009, №1 С. 4-7.

20. Корсунский A.A. Особенности хронических болезней желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированных с Helicobacter pylori у детей. // Дисс. докт. Москва, 2000. 38 с.

21. Кудрявцева JI. В., Щербаков П. JL, Иваников И. О., Говорун В. М. Helicobacter pylori инфекция: современные аспекты диагностики и терапии (пособие для врачей). / Москва, 2004.

22. Лазебник Л.Б., Чернуцкая С.П., Гервазиева В.,Б., Сухарева Г.,В. Роль Н. pylori в развитии аллергических заболеваний у больных с поражением желудка и двенадцатиперстной кишки. // Тер. Архив. 2008. №12. С,63-66.

23. Маев И.В. Эрозивный гастрит: отдельная нозологическая форма или универсальная реакция слизистой оболочки на повреждение? // РЖГГК. 2005. №6. С. 53-59.

24. Маев И.В., Момыналиев К.Т., Говорун В.М. и др. Эффективность эрадикации Helicobacter pylori у больных язвенной болезнью в зависимости от полиморфизма гена 11-1бета-511. // РЖГГК. 2008. №6. С. 27-32.

25. Нестерова И. В., Швыдченко H.H. Особенности строения и функционирования иммунной системы желудочно-кишечного тракта. // Аллергология и иммунология. 2002. Том 3. №2. С.282-292.

26. Новикова В.П. Этиопатогенетические и клинико-морфологические особенности хронического гастрита в разном возрасте. // Автореф. дисс. докт. СПб, 2009. 36 с

27. Паролова H.H., Корниенко Е.А., Дмитриенко М.А. Сравнительная оценка эффективности современных методов диагностики инфекции Helicobacter pylori. // Consilium medicum (Педиатрия). 2008. №1. С. 4-8.

28. Подусенко B.B. Распространенность и особенности течения хеликобактериоза у школьников Приморского края. // Автореф. дисс. Москва, 2006. 24 с.

29. Сарсенбаева A.C. Особенности Helicobacter pylori инфекции и иммунного ответа при тяжелом течении язвенной болезни двенадцатиперстной кишки. // Журн. Микробиол. 2005. №6. С. 7375.

30. Соколова Т. В., Ахметов И. И., Тарарак Т. Я., Пащенко И. Г. Влияние на течение атопического дерматита у взрослых инфекции Helicobacter pylori и схемы ее эрадикации. // Гастроэнтерология. 2004. Т. 6. №2. С. 3-6."

31. Страшок JI.A., Сорокина И. В., Павлова Г. Б. Иммуногистохимические параллели при гастродуоденальной патологии у подростков. // Сучасна гастроентеролопя. 2006. №2. С. 7-11.

32. Фадеенко Г.Д. Инфекция Helicobacter pylori: итоги 20-летнего изучения ее патогенности // BicH. Харк. нац. ун-ту. 2004. №614. СЛ 15-118.и *

33. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. //М.:«Медицина», 2000. 429 с.

34. Циммерман Я. С. Helicobacter pylori-инфекция: внежелудочные эффекты и заболевания (Крит, анализ). // Клин. Медицина. 2006. №4. С.63-65.

35. Чамсутдинов Н. У. Морфофункциональная оценка состояния ЖКТ у больных бронхиальной астмой. // Вестник СПб государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова. 2004. №4 С. 162-166.

36. Чернуцкая С.П. Особенности иммунного ответа к Helicobacter pylori у больных с аллергическими заболеваниями и поражением желудка и двенадцатиперстной кишки. // Автореф. дисс. Москва, 2009. 25с.

37. Чернуцкая С.П., Гервазиева В.Б. Роль иммунной системы организма в персистенции Helicobacter pylori. // Инфекционные болезни. 2008. Том 6. №2. С. 69-67.

38. Чернуцкая С.П., Гервазиева В.Б., Сухарева Г.В. Роль Helicobacter pylori в развитии аллергических заболеваний. // Эксперементальная и клиническая гастроэнтерология. 2008. №4. С. 17-20.

39. Шкитин В.А., Шпирна А.И., Старовойтов Т.Н. Роль Helicobacter pylori в патологии человека. // Кмах. Болезни и возбудители. 2002. 2: С.128-145.