Генетическая нестабильность и аллельный полиморфизм у больных с дисплазиями и раком шейки матки, вызванными персистенцией ДНК вируса папилломы человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат медицинских наук Биджиева, Белла Азановна

• Биджиева, Белла Азановна
• кандидат медицинских наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Биджиева, Белла Азановна

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Молекулярно-генетические аспекты развития рака шейки матки.

1.1. Эпидемиология и этиология рака шейки матки.

1.2. Вирус папилломы человека.

1.3. Механизмы канцерогенеза шейки матки.

1.4. Стадии прогрессии рака шейки матки. Предрак.

1.5. Роль генетических нарушений в прогрессии рака шейки матки.

1.6. Иммунологический контроль развития рака шейки матки.

1.7. Генетический полиморфизм.

1.7.1. Полиморфизм генов HLA.

1.7.2 Точечный полиморфизм генов цитокинов.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Клинические материалы и выделение ДНК.

2.2. Определение типа вируса папиллом человека.

2.3. Метод выявления потери гетерозиготности, как способ определения генетических нарушений.

2.4. Электрофорез продуктов амплификации в денатурирующем полиакриламидном геле.

2.5. Выявление продуктов амплификации после электрофоретического разделения методом серебрения.

2.6. Выявление продуктов амплификации после электрофоретического разделения методом гибридизации с радиоактивно-меченным олигонуклеотидным зондом.

2.7. Методы изучении микросателлитного и точечного полиморфизмов.

2.7.1. ПЦР с использованием аллель специфических праймеров (PCR-SSP methodology).

2.7.2. Анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов после проведения ПЦР с использованием специфических праймеров.

2.8. Статистическая обработка данных.

Список использованных растоворов.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.1. Характеристика клинических материалов.

3.2. Определение и типированне вирусов папиллом в клинических материалах.

3.3. Изучение ранних генетических изменений в прогрессии рака шейки матки.

3.4. Изучение генетической гетерогенности дисплазий и рака шейки матки.

3.5. Изучение микросателлитного полиморфизма в области генов НЬАIII класса.

3.6. Изучение точечных полиморфизмов, связанных с продукцией цитокинов.

3.6.1. Полиморфизм в промоторе гена ГЛ^а.

3.6.2. Полиморфизм в промоторе гена 1Ь-10.

3.6.3. Полиморфизм в промоторе гена 1Ь-6.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ГЛАВА 5. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Генетическая нестабильность и аллельный полиморфизм у больных с дисплазиями и раком шейки матки, вызванными персистенцией ДНК вируса папилломы человека»

Рак шейки матки (РШМ) занимает третье место в мире по заболеваемости (500 тыс.жен./год) и смертности (233 тыс.жен./год) от онкологических заболеваний [Parkin et al., 2000; Мазуренко, 2003]. Несмотря на успехи в изучении механизмов канцерогенеза шейки матки и усилия по разработке методов ранней диагностики, РШМ остается одной из важнейших проблем современной онкологии. Известно, что вирусы папиллом человека (HPV) высокого риска, в первую очередь HPV 16 и 18 типов, являются наиболее значимыми факторами риска возникновения дисплазий различной степени тяжести (CIN I-III) и рака шейки матки. В подавляющем большинстве случаев инфекция HPV проходит транзиторно, однако примерно у одной десятой части инфицированных женщин возникают дисплазии шейки матки и лишь 1% легких дисплазий переходит в РШМ.

Персистенция вируса с длительной активной экспрессией вирусных онкобелков инициирует многостадийный процесс, в результате которого клетки эпителия шейки матки приобретают генетические и эпигенетические нарушения, способствующие опухолевой прогрессии. Эти нарушения могут затрагивать гены, ответственные за злокачественную трансформацию. В связи с этим особое значение приобретает изучение ранних генетических изменений с целью выявления маркеров, позволяющих прогнозировать развитие дисплазий. Метод анализа потери гетерозиготности (LOH, loss of heterozygosity) - это распространенный способ выявления участков хромосом, повреждающихся в процессе канцерогенеза. Наиболее высокая частота LOH была показана для хромосом 3, 4, 6 и 11 [Kisseljov et al., 1996; Larson et al., 1997; Wistuba et al., 1997; Rader et al., 1998; Evans et al., 1998; Kersemaekers et al., 1999; Mazurenko et al., 1999; Chatterjee et al., 2001; Мазуренко с соавт., 2003]. При этом отдельный интерес вызывает короткое плечо хромосомы 6, где располагаются гены главного комплекса гистосовместимости (HLA).

Гистологическая верификация послойных срезов операционного или биопсийного материала, выявляет множественность фокусов патологически измененного эпителия шейки матки в ряде случаев CIN и РШМ, Подробный молекулярный анализ всех таких фокусов дисплазий различной степени тяжести и/или РШМ у больных с использованием микродиссекционной техники, делает возможным выявление генетической и вирусной гетерогенности неоплазий.

Особенности иммунной системы организма хозяина, способствующие выживаемости HPV-инфицированных, а также неопластических клеток эпителия шейки матки, могут влиять на развитие РШМ. Активная роль иммунной системы в канцерогенезе РШМ подтверждается тем, что больные с иммуносупрессивными состояниями, в частности, ВИЧ инфицированные, часто имеют HPV-ассоциированные дисплазии и рак шейки матки [Tindle et al., 1994; BouwesBavinck et al., 1997; Frisch et al., 2000]. Поскольку гены, отвечающие за иммунный ответ (группа генов HLA, гены цитокинов) являются высокополиморфными, представлялось актуальным изучить генетический полиморфизм этих генов у больных с дисплазиями и РШМ.

Целью настоящей диссертационной работы является сравнительное изучение генетической нестабильности и генетического полиморфизма в локусе 6р21.3 хромосомы 6, а также в промоторных областях генов цитокинов при дисплазиях и раке шейки матки, связанных с персистенцией ДНК HPV.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

1) создание банка препаратов ДНК, полученных из всех доступных фокусов патологически измененного и нормального эпителия, а также стромы методом множественной микродиссекции биопсий больных дисплазиями и раком шейки матки;

2) определение типа вируса папилломы человека в образцах ДНК из каждого фокуса патологически измененной ткани;

3) исследование потери гетерозиготности в локусе 6р21.3, содержащем микросателлитные маркеры D6S273, D6S291 и TNFa в образцах ДНК дисплазий и плоскоклеточного рака шейки матки;

4) выявление возможной ассоциации аллелей и генотипов микросателлитных маркеров D6S273, TNFa и содержащих функциональные однонуклеотидные замены последовательностей в промоторной области генов цитокинов TNFa, IL-10 и IL-6 с развитием дисплазий и РШМ.

Научная новизна. Впервые проведен детальный анализ препаратов ДНК, выделенных из каждого фокуса патологически измененной и нормальной ткани шейки матки от больных CIN I-III. При помощи метода потери гетерозиготности была показана высокая частота аллельных делеций в области генов HLA класса III в локусах D6S273 и TNFa (33,3%-42,9%) на стадии CIN I. Постепенное увеличение частоты потери гетерозиготности с маркером D6S291 при прогрессии CIN II в РШМ указывает на то, что LOH в локусе D6S291 может служить маркером плохого прогноза дисплазий.

Сопоставление данных типирования HPV и анализа потери гетерозиготности во всех фокусах патологически измененной ткани выявило случаи независимых клонов дисплазий и РШМ.

Впервые проведено исследование полиморфизма микросателлитных маркеров D6S273 и TNFa и точечных полиморфизмов в промоторах генов цитокинов TNFa, IL-10 и IL-6 у женщин больных дисплазиями и РШМ. Выявлены аллели и генотипы, ассоциированные как с низким, так и с повышенным риском развития дисплазий и РШМ.

Практическое значение исследования состоит в выявлении аллельных делеций, сопровождающих прогрессию дисплазий в рак, что создает возможности для выявления прогностических маркеров развития РШМ. Таким маркером прогрессии дисплазий может быть потеря гетерозиготности в локусе D6S291. Изучение функционального полиморфизма в промоторных областях генов цитокинов ТОТа, 1Ь-10 и 1Ь-6 позволяет предполагать роль и степень их вовлеченности в противовирусный и противоопухолевый иммунный ответ.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Биджиева, Белла Азановна

Рис. 9 Результаты исследования потери гетерозиготности в образцах рака и дисплазий шейки матки с использованием микросателлитных маркеров D6S273, D6S291 и TNFa . Сверху указаны номера случаев, буквенные обозначения: S - ДНК из стромы, N -пробы нормального эпителия, Са„ - ДИК из очагов РШМ, Dm<„ - ДНК из очагов дисплазий шейки матки, где т - стадия заболевания и п — номер фокуса. Пунктиром и черными стрелками обозначены случаи аллельных делеций. Детекция ПЦР продуктов методом гибридизации с радиоактивно-меченным зондом (9а) и методом серебрения (96, в).

MapicepD6S291) и № 210 (маркер TNFa). Утраченные аллели обозначены черными стрелками. Зачастую при визуализации ПЦР-продуктов в 6% ПААГе ниже исследуемого аллеля мы наблюдали небольшой фронт из сателлитных полос, уменьшающихся в длине с шагом в 2 нуклеотида. Это явление связывают с так называемым «недочитыванием» Taq-полимеразы.

Все данные по исследованию потери гетерозиготности с маркером D6S273 и маркером D6S291 представлены в Табл.8, где даны результаты анализа потери гетерозиготности по маркерам D6S273 и D6S291, полученные для каждого имеющегося препарата микродисекциированной ДНК из дисплазий и рака от 61 пациентки. Как видно, все случаи дисплазий и РШМ, за исключением одного (№ 49) удалось протестировать на наличие LOH с маркером D6S273. В исследуемой выборке 12 случаев были гомозиготны по этому маркеру и являлись неинформативными. Информативные по D6S273 препараты ДНК принадлежали 27 женщинам с диагнозом дисплазии различной степени тяжести и 21 женщине с РШМ. Поскольку проводилась множественная микродиссекция, в препаратах ДНК из отдельных участков опухоли и/или фокусов дисплазии от одной и той же больной, нередко наблюдалась различная картина LOH, как например в случаях под №№ 7, 27, 43, 44, 54, 55 и др. Поскольку среди материалов, полученных от пациенток с РШМ, было много случаев, где удавалось получить только ДНК из фокусов дисплазий, а опухолевая ДНК была недоступна, мы считали РШМ LOH-позитивным при обнаружении потери в препарате ДНК из любого фокуса патологической ткани от одной больной, тем более что в нашей выборке не было ни одного случая, где бы мы наблюдали LOH в сопутствующих дисплазиях при отсутствии LOH в раке.

Потеря гетерозиготности в локусе D6S273 хотя бы в одном участке патологически измененной ткани наблюдалась у 37,5% (18/48) женщин. При этом процент аллельных потерь в CIN примерно сходен с таковым в РШМ, 37% (10/27) и 38,1% (8/21) соответственно. Среди информативных случаев рака шейки матки был только один (№ 32),

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Биджиева, Белла Азановна, 2008 год

1. Блиев А.Ю. Потеря гетерозиготности как маркер ранних генетических нарушенийпри раке шейки матки. Автореферат (2005).

2. Давыдов М.И., Аксель Е.М. Заболеваемость и смертность от злокачественныхновообразований населения России и стран СНГ в 2004г. Устные доклады: 48-51 (2004).

3. Киселев Ф. Л., Мазуренко Н. Н., Волгарева Г. М., Киселева Н. П. Взаимодействиевирусных и клеточных генов в опухолях шейки матки. Молекулярная биология 38(2): 1-9 (2004).

4. Киселев Ф.Л., Мазуренко Н.Н., Киселева Н.П. и др. Молекулярные маркеры РШМ.Вестник РАМН 1: 8-14(2002).

5. Лихтенштейн АВ, Киселева НП Метилирование ДНК и канцерогенез. Биохимия. 66(3): 293-317 (2001).

6. Мазуренко Н.Н. Роль вирусов папиллом в канцерогенезе рака шейки матки.Современная онкология 5(1): 7-10 (2003).

7. Турецкая Р.Л. Молекулярная генетика системы факторов некроза опухолей (ФНО)человека: генетический полиморфизм и ассоциация с наследственными из заболеваниями. Автореферат (2001).

8. Турецкая Р.Л. Полиморфизм генов факторов некроза опухолей: ассоциация сзаболеваниями. Молекулярная биология 33: 408-412 (1999).

9. Aaronson DS, Horvath СМ. A road map for those who don't know JAK-STAT. Science296(5573): 1653-5 (2002).

10. Akdis CA, Blaser K. Mechanisms of interleukin-10-mediated immune suppression.1.munology 103(2): 131-6 (2001).

11. Albert ML, Darnell JC, Bender A, Francisco LM, Bhardwaj N, Darnell RB. Tumorspecific killer cells in paraneoplastic cerebellar degeneration. Nat. Med. 4(11): 1321-4 (1998).

12. Alloub MI, Barr BB, McLaren KM, Smith IW, Bunney MH, Smart GE. Humanpapillomavirus infection and cervical intraepithelial neoplasia in women with renal allografts. BMJ. 298(6667): 153-6 (1989).

13. Anceschi MM, Falcinelli M, Pieretti M and Cosmi EV. Multiply primer pairs polymerasechain reaction for the detection of human papillomavirus types. J. Virol. Methods 28: 5966 (1990).

14. Asadullah K, Sterry W, Volk HD. Interleukin-10 therapy—review of a new approach.Pharmacol. Rev. 55(2): 241-69 (2003).

15. Azmy IA, Balasubramanian SP, Wilson AG, Stephenson TJ, Cox A, Brown NJ, ReedMW. Role of tumour necrosis factor gene polymorphisms (-308 and -238) in breast cancer susceptibility and severity. Breast Cancer Res. 6(4): R395-400 (2004).

16. Bais A.G., Beckmann I., Lindemans J. et al. A shift to a peripheral Th2-type cytokinepattern during the carcinogenesis of cervical cancer becomes manifest in CIN III lesions. J. Clin. Pathol. 58: 1096-1100 (2005).

17. Ban Y, Davies TF, Greenberg DA, Concepcion ES, Tomer Y. The influence of humanleucocyte antigen (HLA) genes on autoimmune thyroid disease (AITD): results of studies in HLA-DR3 positive AITD families. Clin. Endocrinol. (Oxf). 57(1): 81-8 (2002).

18. Basttirk B, Yavascaoglu I, Vuruskan H, Goral G, Oktay B, Oral HB. Cytokine genepolymorphisms as potential risk and protective factors in renal cell carcinoma. Cytokine 30(1): 41-5 (2005).

19. Beg AA, Baltimore D. An essential role for NF-kappaB in preventing TNF-alpha-inducedcell death. Science 274: 782-784 (1996).

20. Beutler BA. The role of tumor necrosis factor in health and disease. J. Rheumatol. Suppl.57: 16-21 (1999).

21. Bidwell J, Keen L, Gallagher G, Kimberly R, Huizinga T, McDermott MF, Oksenberg J,McNicholl J, Pociot F, Hardt C, D1 Alfonso S. Cytokine gene polymorphism in human disease: on-line databases. Genes Immun. 1(1): 3-19 (1999).

22. Bontkes HJ, Walboomers JM, Meijer CJ, Helmerhorst TJ, Stern PL. Specific HLA class Idown-regulation is an early event in cervical dysplasia associated with clinical progression. Lancet 351: 187-188 (1998).

23. Bosch FX, Lorincz A, Munoz N, Meijer С J, Shah KV. The causal relation between humanpapillomavirus and cervical cancer. J. Clin. Pathol. 55(4): 244-65 (2002).

24. Botstein D, White RL, Skolnick M, Davis RW. Construction of a genetic linkage map inman using restriction fragment length polymorphisms. Am. J. Hum. Genet. 32: 314331(1980).

25. Bouwes Bavinck JN, Berkhout RJ. HPV infections and immunosuppression. Clin.Dermatol. 15:42-37(1997).

26. Boyuer S, Wazer D, Band V. E7 protein papillomavirus-16 induces degradation ofretinoblastoma protein through the ubiquitin-proteasome pathway. Cancer Res. 56: 46204624 (1996).

27. Braga EA, Kashuba VI, Maliukova AV, Loginov VI, Senchenko VN, Bazov IV, Kiselev1., Zabarovskii ER. New tumor suppressor genes in hot spots of human chromosome 3: new methods of identification. Mol. Biol. (Mosk). 37(2): 194-211 (2003).

28. Brookes AJ. The essence of SNPs. Gene 234(2): 177-86 (1999).

29. Browning MJ, Krausa P, Rowan A, Hill AB, Bicknell DC, Bodmer JG et al. Loss ofhuman leukocyte antigen expression on colorectal tumor cell lines: implications for antitumor immunity and immunotherapy. J. Immunother. 14: 163-8 (1993).

30. Calhoun ES, McGovern RM, Janney CA, Cerhan JR, Iturria SJ, Smith DI, Gostout BS,Persing DH. Host genetic polymorphism analysis in cervical cancer. Clin. Chem. 48(8): 1218-24(2002).

31. Carmody MW, Jones M, Tarraza H, Vary CP. Use of the polymerase chain reaction tospecifically amplify integrated HPV-16 DNA by virtue of its linkage to interspersed repetitive DNA. Mol. Cell. Probes 10: 107-16 (1996).

32. Carswell EA, Old LJ, Kassel RL, Green S, Fiore N, Williamson B. An endotoxin-inducedserum factor that causes necrosis of tumors. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 72(9): 3666-70 (1975).

33. Chang C.L., Wang S.Y., Wu C.C., Su Т.Н., Wang K.L., Chen H.S., Yang Y.C.Microsatellite alterations in exfoliated cervical epithelia deoxyribonucleic acid as a marker for high-grade dysplasia. Am. J. Obstet. Gynecol. 185: 108-115 (2001).

34. Cunningham LM, Chapman C, Dunstan R, Bell MC, Joske DJ. Polymorphisms in theinterleukin 10 gene promoter are associated with susceptibility to aggressive nonHodgkin's lymphoma. Leuk. Lymphoma 44(2): 251-5 (2003).

35. Deshpande A, Nolan JP, White PS, Valdez YE, Hunt WC, Peyton CL, Wheeler CM.TNF-alpha promoter polymorphisms and susceptibility to human papillomavirus 16associated cervical cancer. J. Infect. Dis. 191(6): 969-76 (2005).

36. Diez-Ruiz A, Tilz GP, Zangerle R, Baier-Bitterlich G, Wachter H, Fuchs D. Solublereceptors for tumour necrosis factor in clinical laboratory diagnosis. Eur. J. Haematol. 54(1): 1-8 (1995).

37. Dillner J, Geijersstam K, Elfgren J, Konya J, Sanjeevi CB, Wng Z, Wllin KL. Naturalhistory of cervical cancer. EACR XV Proceedings Book, 75 (1998).

38. Dyson N, Howley PM, Munger К and Harlow E. The human papillomavirus-16 E7oncoprotein is able to bind to the retinoblastoma gene product. Science 243: 34-937 (1989).

39. Eder C, Chaganti R.S., Murty V.V., Greskotter K.R., Giesing M. Laser microdissectionand molecular typing of dysplastic cells from Pap smears: a new approach to early detection of cervical cancer. Pathology 25: 209-216 (2004).

40. Elhamidi A., Hamoudi R., Kocjan G., Du M. Cervical intraepithelial neoplasia: prognosisby combined LOH analysis of multiple loci. Gynecol. Oncol. 94: 671-679 (2004).

41. Enomoto T, Haba T, Fujita M, Hamada T, Yoshino K, Nakashima R, Wada H, Kurachi H,Wakasa K, Sakurai M, Murata Y and Shroyer KR. Clonal analysys of high-grade squamous intra-epithelial lesions of the uterine cervix. Int. J. Cancer 74: 339-344 (1997).

42. Espinoza-Delgado I. Cancer vaccines. Oncologist 7 (Suppl. 3): 20-33 (2002).

43. Evans MF, Koreth J, Bakkenist CJ, Herrington CS, McGee JO. Allelic deletion at1.q23.3-q25 is an early event in cervical neoplasia. Oncogene 16(19): 2557-64 (1998).

44. Farzaneh F, Roberts S, Mandal D, Oilier B, Winters U, Kitchener HC, Brabin L. The IL10 -1082G polymorphism is associated with clearance of HPV infection. BJOG 113(8): 961-4 (2006).

45. Fernandez-Real JM, Broch M, Vendrell J, Gutierrez C, Casamitjana R, Pugeat M, RichartC, Ricart W. Interleukin-6 gene polymorphism and insulin sensitivity. Diabetes 49(3): 517-20(2000).

46. Ferrari SL, Garnero P, Emond S, Montgomery H, Humphries SE, Greenspan SL. Afunctional polymorphic variant in the interleukin-6 gene promoter associated with low bone resorption in postmenopausal women. Arthritis Rheum. 44(1): 196-201 (2001).

47. Frisch M, Biggar RJ, Goedert JJ. Human papillomavirus-associated cancers in patientswith human immunodeficiency virus infection and acquired immunodeficiency syndrome. J. Natl. Cancer Inst. 92(18): 1500-10 (2000).

48. Fung Yk, Murphree AL, T'Ang A, Qian J, Hhinrichs SH and Benedict WF. Structuralevidence for the authenticity of the human retinoblastoma gene. Science 236: 16571661(1987).

49. Gallo G, Bibbo M, Bagella L, Zamparelli A, Sanseverino F, Giovagnoli MR, VecchioneA, Giordano A. Study of viral integration of HPV-16 in young patients with LSIL. J. Clin. Pathol. 56: 532-536 (2003).

50. Garrido F, Ruiz-Cabello F, Cabrera T, Perez-Villar JJ, Lopez-Botet M, Duggan-Keen Met al. Implications for immunosurveillance of altered HLA class I phenotypes in human tumors. Immunol. Today 18: 89-95 (1997).

51. Giannone R, Piacezzi C, Panizzardi G, Bernorio R. Pap-smear test today. MinervaGinecol. 46(12): 687-9 (1994).

52. Giordani L, Bruzzi P, Lasalandra C, Quaranta M, SchittuUi F, Delia Ragione F, lolasconA. Association of breast cancer and polymorphisms of interleukin-10 and tumor necrosis factor-alpha genes. Clin. Chem. 49(10): 1664-7 (2003).

53. Griep AE, Nguyen MN, Rivera С The interaction of HPV 16 E6 with PDZ domaincontaining proteins disrupts cell growth, junctional complexes and differentiation in vivo. "IGGEB DNA Tumor Virus Meetings" Proceedings book: 88 (2003).

54. Govan VA, Constant D, Hoffman M, Williamson AL. The allelic distribution of -308Tumor Necrosis Factor-alpha gene polymorphism in South African women with cervical cancer and control women.BMC Cancer 6: 24 (2006).

55. Gruis NA, Abeln EC, Bardoel AF, Devilee P, Frants RR, Cornelisse CJ. PCR-basedmicrosatellite polymorphisms in the detection of loss of heterozygosity in fresh and archival tumour tissue. Br. J. Cancer 68(2): 308-13 (1993).

56. Guo Z, Wu F, Asplund A, Hu X, Mazurenko N, Kisseljov F, Ponten J, Wilander E.Analysis of intratumoral heterogeneity of chromosome 3p deletions and genetic evidence of polyclonal origin of cervical squamous carcinoma. Mod. Pathol. 14: 54-61 (2001).

57. Hajeer AH, Hutchinson IV. Influence of TNFalpha gene polymorphisms on TNFalphaproduction and disease. Hum. Immunol. 62(11): 1191-9 (2001).

58. Hallermalm K, Seki K, Wei CH, et al. Tumor necrosis factor-a inducescoordinated changes in major histocompatibility class I presentation pathway, resulting in increased stability of class I complexes at the cell surface. Blood 98: 1108-15(2001).

59. Hamoudi R., Elhamidi A., Du M. Identification of novel prognostic markers in cervicalintraepithelial neoplasia using LDMAS (LOH data management and analysis software). BMC Bioinformatics 6: 1-6 (2005).

60. Hicklin DJ, Wang Z, Arienti F, Rivoltini L, Parmiani G, Ferrone S. Рг-niicrpglobulinmutations, HLA class I antigen loss, and tumor progression in melanoma. J. Clin. Invest. 101:2720-2729(1998).

61. Hilders CG, Munoz IM, Nooyen Y, Fleuren GJ. Altered HLA expression by metastaticcervical carcinoma cells as a factor in impaired immune surveillance. Gynecol. Oncol. 57: 366-375(1995).

62. Hildesheim A, Wang SS. Host and viral genetics and risk of cervical cancer: a review.Virus Res. 89(2): 229-40 (2002).

63. Hoffmann SC, Stanley EM, Cox ED, DiMercurio BS, Koziol DE, Harlan DM, Kirk AD,Blair PJ. Ethnicity greatly influences cytokine gene polymorphism distribution. Am. J. Transplant. 2(6): 560-7 (2002).

64. Howell WM, Turner SJ, Bateman AC, Theaker JM. IL-10 promoter polymorphismsinfluence tumour development in cutaneous malignant melanoma. Genes Immun. 2(1): 25-31 (2001).

65. Jackson S, Harwood C, Thomas M, Banks L and Storey A. Role of Bak in UV-inducedapoptosis in skin cancer and abrogation by HPV E6 proteins. Genes Dev. 14: 3065-3073 (2000).

66. Jahromi MM, Millward BA, Demaine AG. A polymorphism in the promoter region of thegene for interleukin-6 is associated with susceptibility to type 1 diabetes mellitus. J. 1.terferon Cytokine Res. 20(10): 885-8 (2000).

67. Janeway CA Jr, Travers P. Immunobiology: the immune system in health and disease. 3rded. London: Garland, Churchill & Livingstone (1997).

68. Jang WH, Yang YI, Yea SS, Lee YJ, Chun JH, Kim HI, Kim MS, Paik KH. The -238tumor necrosis factor-alpha promoter polymorphism is associated with decreased susceptibility to cancers. Cancer Lett. 166(1): 41-6 (2001).

69. Keating PJ, Cromme FV, Duggan-Keen M, Snijders PJ, Walboomers JM, Hunter RD,Dyer PA, Stern PL. Frequency of down-regulation of individual HLA-A and -B alleles in cervical carcinomas in relation to TAP-1 expression. Br. J. Cancer 72: 405-411 (1995).

70. Kersemaekers AMF, Hermans J, Fleuren GJ, van de Vijver MJ.1.ss of heterozygosity for defined regions on chromosomes 3, 11 and 17 in carcinomas of the uterine cervix. Br. J. Cancer 77(2): 192-200 (1998b).

71. Kersemaekers AMF, Kenter G, Hermans J, Fleuren GJ and van de Vijver MJ. Allelic lossand prognosis in carcinoma of the uterine cervix. Int. J. Cancer 79: 411-417 (1998a).

72. Kersemaekers AMF, van de Vijver MJ, Kenter GG and Fleuren GJ. Genetic alterationsduring the progression of squamous cell carcinomas of the uterine cervix. Genes Chromosom. Cancer 26: 346-354 (1999).

73. Kim JM, Brannan CI, Copeland NG, Jenkins NA, Khan ТА, Moore KW. Structure of themouse IL-10 gene and chromosomal localization of the mouse and human genes. J. 1.munol. 148(11): 3618-23 (1992).

74. Kirkpatrick A, Bidwell J, van den Brule AJ, Meijer CJ, Pawade J, Glew S. TNFalphapolymorphism frequencies in HPV-associated cervical dysplasia. Gynecol. Oncol. 92(2): 675-9 (2004).

75. Kishimoto T. The biology of interleukin-6. Blood 74(1): 1-10 (1989).

76. Kiviat N. Natural history of cervical neoplasia: overview and update. Am. J. Obstet.Gynecol. 175:1099-1104(1996).

77. Kiyono T, Foster SA, Koop JI, McDougall JK, Galloway DA and Klingelhutz AJ. BothRb/pl6INK4a inactivation and telomerase activity are required to immortalize human epithelial cells. Nature 396: 84-88 (1998).

78. Klimov E, Vinokourova S, Moisjak E, Rakhmanaliev E, Kobseva V, Laimins L, KisseljovF and Sulimova G. Human papilloma viruses and cervical tumours: mapping of integration sites and analysis of adjacent cellular sequences. BMC Cancer 2: 24 (2002).

79. Koopman LA, Corver WE, van der Slik AR, Cornelisse CJ, Fleuren GJ. Multiple geneticalterations cause frequent and heterogenous human histocompatability leukocyte antigen class I loss in cervical cancer. J. Exp. Med. 191 (6): 961-76 (2000).

80. Kroeger KM, Carville KS, Abraham LJ. The -308 tumor necrosis factor-alpha promoterpolymorphism effects transcription. Mol. Immunol. 34(5): 391-9 (1997).

81. Kube D, Platzer C, von Knethen A, Straub H, Bohlen H, Hafher M, Tesch H. Isolation ofthe human interleukin 10 promoter. Characterization of the promoter activity in Burkitt's lymphoma cell lines. Cytokine. 7(1): 1-7 (1995).

82. LaCasse EC, Baird S, Korneluk RG, MacKenzie AE. Oncogene 17: 3247-3259 (1998).

83. Laga M, Icenogle JP, Marsella R, Manoka AT, Nzila N, Ryder RW, Vermund SH,Heyward WL, Nelson A, Reeves WC. Genital papillomavirus infection and cervical dysplasia—opportunistic complications of HIV infection. Int. J. Cancer 50(1): 45-8 (1992).

84. Langsenlehner U, KrippI P, Renner W, Yazdani-Biuki B, Eder T, K6ppel H, Wascher TC,Paulweber B, Samonigg H. Interleukin-10 promoter polymorphism is associated with decreased breast cancer risk. Breast Cancer Res. Treat. 90(2): 113-5 (2005).

85. Larrick JW, Wright SC. Cytotoxic mechanism of tumor necrosis factor-alpha. FASEB J.4(14): 3215-23 (1990).

86. Larson AA, Liao SY, Stanbridge EJ, Cavenee WK and Hampton GM. Genetic alterationsaccumulate during cervical tumorogenesis and indicate a common origin for multifocal lesions. Cancer Res. 57: 4171-6 (1997).

87. Lee JY, Kim HY, Kim KH, Kim SM, Jang MK, Park JY, Lee JH, Kim JH, Yoo JY.Association of polymorphism of IL-10 and TNF-A genes with gastric cancer in Korea. Cancer Lett. 225(2): 207-14 (2005).

88. Lejeune FJ, Rtiegg C, Lienard D. Clinical applications of TNF-alpha in cancer. Curr.Opin. Immunol. 10(5): 573-80 (1998).

89. Levine AJ. p53, the cellular gatekeeper for growth and division.Cell 88(3): 323-31 (1997).

90. Lokich J. Spontaneous regression of metastatic renal cancer. Case report and literaturereview. Am. J. Clin. Oncol. 20(4): 416-8 (1997).

91. Lowy DR and Howley PM: Papillomaviruses. In: Virology. Eds: Knipe DM and HowleyPM. Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia 2: 2231-2264 (2001).

92. Magnusson PK, Sparen P and Gyllenstein UB. Genetic link to cervical tumours. Nature400:29-30(1999).

93. Mazurenko N, Attaleb M, Gritsko T, Semjonova L, Pavlova L, Sakharova O, Kisseljov F.High resolution mapping of chromosome 6 deletions in cervical cancer. Oncol. Rep. 6(4): 859-63 (1999).

94. Mainou-Fowler T, Dickinson AM, Taylor PR, Mounter P, Jack F, Proctor SJ, Nordon J,Middleton PG. Tumour necrosis factor gene polymorphisms in lymphoproliferative disease. Leuk. Lymphoma 38(5-6): 547-52 (2000).

95. Malinin NL, Boldin MP, Kovalenko AV and Wallach D. МАРЗК-related kinase involvedinNF-kB induction by TNF, CD95 and IL-1. Nature 385: 540-544 (1997).

96. McCarron SL, Edwards S, Evans PR, Gibbs R, Dearnaley DP, Dowe A, Southgate C,Easton DF, Eeles RA, Howell WM. Influence of cytokine gene polymorphisms on the development of prostate cancer. Cancer Res. 62(12): 3369-72 (2002).

97. Meisels A, Fortin R. Condylomatous lesions of the cervix and vagina. I. Cytologicpatterns. ActaCytol. 20(6): 505-9 (1976).

98. Minden A, Karin M. Regulation and function of the JNK subgroup of MAP kinases.Biochim. Biophys. Acta 7333: F85-F104 (1997).

99. Moodley M, Sewart S, Herrington CS, Chetty R, Pegoraro R, Moodley J. The interactionbetween steroid hormones, human papillomavirus type 16, E6 oncogene expression, and cervical cancer. Int. J. Gynecol. Cancer. 13(6): 834-42 (2003).

100. Moore KW, de Waal Malefyt R, Coffinan RL, O'Garra A. Interleukin-10 and theinterleukin-10 receptor. Annu. Rev. Immunol. 19: 683-765 (2001).

101. Moretta A, Biassoni R, Bottino C, Pende D, Vitale M, Poggi A, Mingari MC, Moretta L.Major histocompatability complex class I - specific receptors on human natural killer and T lymphocytes. Immunol. Rev. 155: 105-117 (1997).

102. Mullokandov MR, Kholodilov NG, AAtkin NB, Burk RD, Johnson AB and Klinger HP.Genomic alterations in cervical carcinoma: losses of chromosome heterozygosity and human papilloma virus tumor status. Cancer. Res. 56: 197-205 (1996).

103. Nishitoh H, Saitoh M, Mochida Y, Takeda K, Nakano H, Rothe M, Miyazono К and1.hijo H. ASK1 is essential for JNK/ SAPK activation by TRAF2. Mol. Cell 2: 389-395 (1998).

104. Nogueira de Souza NC, Brenna SM, Campos F, Syrjanen KJ, Baracat EC, Silva ID.1.terleukin-6 polymorphisms and the risk of cervical cancer. Int. J. Gynecol. Cancer 16(3): 1278-82 (2006).

105. Nordan RP, Pumphrey JG, Rudikoff S. Purification and NH2-terminal sequence of aplasmacytoma growth factor derived from the murine macrophage cell line P388D1. J. 1.munol. 139(3): 813-7 (1987).

106. Oda H, Kumar S and Howley PM. Regulation of the Src family tyrosine kinase Blkthrough E6AP - mediated ubiquitination. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96: 9557-9562 (1999).

107. Ooi E.E., Ren E.C., Chan S.H. Association between microsatellites within the humanMHC and nasopharyngeal carcinoma. Int. J. Cancer 74: 229-232 (1997).

108. Ordemann J, Jacobi CA, Braumann C, Schwenk W, Volk HD, Muller JM.mmunomodulatory changes in patients with colorectal cancer. Int. J. Colorectal Dis. 17(1): 37-41 (2002).

109. Ostor AG. Natural history of cervical intraepithelial neoplasia: a critical review. Int. J.Gynecol. Pathol. 12(2): 186-92 (1993).

110. Park TW, Richart RM, Sun XW, Wright TC Jr. Association between humanpapillomavirus type and clonal status of cervical squamous intraepithelial lesions. J. Natl. Cancer Inst. 88(6): 317-8 (1996).

111. Park YS, Sanjeevi CB, Robles D, Yu L, Rewers M, Gottlieb PA, Fain P, Eisenbarth GS.Additional association of intra-MHC genes, MICA and D6S273, with Addison's disease. Tissue Antigens 60(2): 155-63 (2002).

112. Parkin DM, Bray FI, Devesa SS. Cancer burden in the year. The global picture. Eur. J.Cancer 37(8): 4-66 (2000).

113. Paul NL, Ruddle NH. Lymphotoxin. Annu. Rev. Immunol. 6: 407-38 (1988).

114. Peitsaro P, Johanson В and Syrjanen S. Integrated human papillomavirus type 16 isfrequently found in cervical cancer precursors as demonstrated by a novel quantitative real-time PCR technique. J. Clin. Microbiol. 40(3): 886-891 (2002).

115. Peyton CL, Gravitt PE, Hunt WC, Hundley RS, Zhao M, Apple RJ, Wheeler CM.Determinants of genital human papillomavirus detection in a US population. J. Infect. Dis. 183(11): 1554-64(2001).

116. Pirisi L, Yasumoto S, Fellery M, Doninger JK and Funk JO et al. Inhibition of CDKactivity and PCNA dependent DNA replication by p21 is blocked by interaction with the HPV-16 E7 protein. Genes Dev. 11: 2090-2100 (1997).

117. Pisani P, Bray F, Parkin DM. Estimates of the world-wide prevalence of cancer for 25sites in the adult population. Int. J. Cancer. 97(1): 72-81 (2002).

118. Poli F, Nocco A, Berra S, Scalamogna M, Taioli E, Longhi E, Sirchia G. Allelefrequencies of polymorphisms of TNF A, IL-6, IL-10 and IFNG in an Italian Caucasian population. Eur. J. Immunogenet. 29(3): 237-40 (2002).

119. Powell CB, Scott JH, Collins JL. Characterization of the protein synthesis independentTNF-alpha lytic mechanism in human ovarian and cervical carcinoma cell line. Gynecol. Oncol. 62:42-8 (1996).

120. Powell CB, Scott JH, Collins JL. Comparison of TNFalpha and TNF-beta cytolyticmechanisms in human ovarian and cervical carcinoma cell lines. Gynecol. Oncol. 71: 25865 (1998).

121. Rader JS, Gerhard DS, O'Sullivan MJ, Li Y, Li L, Liapis H and Huettner PC. Cervicalintraepithelial neoplasia III shows frequent allelic loss in 3p and 6p. Genes Chromosom. Cancer 22: 57-65 (1998).

122. Rader JS, Kamarasova T, Huettner PC, Li L, Li Y and Gerhard DS. AUelotyping of allchromosomal arms in invasive cervical cancer. Oncogene 13: 2737-2741 (1996).

123. Ray A, LaForge KS, Sehgal PB. On the mechanism for efficient repression of theinterleukin-6 promoter by glucocorticoids: enhancer, TATA box, and RNA start site (Inr motif) occlusion. Mol. Cell. Biol. 10: 5736-46 (1990).

124. Rees LE, Wood NA, Gillespie KM, Lai KN, Gaston K, Mathieson PW. The interleukin10-1082G/A polymorphism: allele frequency in different populations and functional significance. Cell. Mol. Life Sci. 59(3): 560-9 (2002).

125. Reviron D, Dussol B, Andre M, Brunet P, Mercier P, Berland Y. TNF-alpha and IL-6gene polymorphism and rejection in kidney transplantation recipients. Transplant. Proc. 33(1-2): 350-1 (2001).

126. Rha SH, Dong SM, Jen J, Nicol T, Sidransky D. Molecular detection of cervicalintraepithelial neoplasia and cervical carcinoma by microsatellite analysis of Papanicolaou smears. Int. J. Cancer 93: 424-429 (2001).

127. Roh JW, Kim MH, Seo SS, Kim SH, Kim JW, Park NH, Song YS, Park SY, Kang SB,1.e HP Interleukin-10 promoter polymorphisms and cervical cancer risk in Korean women. Cancer Lett. 184(1): 57-63 (2002).

128. Roman A, Toussaint-Smith E. Expression of Human Papillomavirus type 16 E6 and E7oncoproteins affects the profile of angiogenic factors secreted from human foreskin kerationcytes. "IGGEB DNA Tumor Virus Meetings" Proceedings book: 50 (2003).

129. Samoylova EV, Shaikhaiev GO, Petrov SV, Kisseljova NP, Kisseljov FL. HPV infectionin cervical-cancer cases in Russia. Int. J. Cancer 61(3): 337-41 (1995).

130. Scheffner M, Werness B, Huibregste J, Levine A J, Howley PM. The E6 oncoproteinencoded by human papillomavirus types 16 and 18 promotes the degradation of p53. Cell 63: 1129-1136(1990).

131. Schreiber S, Heinig T, Thiele HG, Raedler A. Immunoregulatory role of interleukin 10 inpatients with inflammatory bowel disease. Gastroenterology 108(5): 1434-44 (1995).

132. Schroeder HW Jr, Zhu ZB, March RE, Campbell RD, Berney SM, Nedospasov SA,Turetskaya RL, Atkinson TP, Go RC, Cooper MD, Volanakis JE. Susceptibility locus for

133. A deficiency and common variable immunodeficiency in the HLA-DR3, -B8, -Alhaplotypes. Mol. Med. 4(2): 72-86 (1998).

134. Schwartz SM, Daling JR, Shera KA, Madeleine MM, McKnight B, Galloway DA, PorterPL, McDougall JK. Human papillomavirus and prognosis of invasive cervical cancer: a population-based study. J. Clin. Oncol. 19(7): 1906-15 (2001).

135. Simoes R.T., Goncalves M.A., Donadi E.A. et al. Association of tumor necrosis factor a-2and a-8 microsatellite alleles with human papillomavirus and squamous intraepithelial lesions among women in Brazil. J. Clin. Microbiol. 43: 3932-7 (2005).

136. Smith КС, Bateman AC, Fussell HM, Howell WM. Cytokine gene polymorphisms andbreast cancer susceptibility and prognosis. Eur. J. Immunogenet. 31(4): 167-73 (2004).

137. Spies T, Blanck G, Bresnahan M, Sands J, Strominger JL. A new cluster of genes withinthe human major histocompatibility complex. Science 243(4888): 214-7 (1989).

138. Srivani R, Nagarajan B. A prognostic insight on in vivo expression of interleukin-6 inuterine cervical cancer. Int. J. Gynecol. Cancer 13(3): 331-9 (2003).

139. Stanczuk GA, Sibanda EN, Perrey C, Chirara M, Pravica V, Hutchinson IV, Tswana SA.Cancer of the uterine cervix may be significantly associated with a gene polymorphism coding for increased IL-10 production. Int. J. Cancer 94(6): 792-4 (2001).

140. Stanczuk GA, Sibanda EN, Tswana SA. et al. Polymorphism at the -308 promoterposition of the tumor necrosis factor-alpha (TNF-a) gene and cervical cancer. Int. J. Gynecol. Cancer. 13: 148-153 (2003).

141. Stanley MA. Human papillomavirus vaccines. Curr. Opin. Mol. Ther. 4(1): 15-22 (2002).

142. Suk K, Chang I, Kim YH, et al. Interferon g (IFNg) and tumor necrosisfactor a synergism in ME-180 cervical cancer cell apoptosis and necrosis. J. Biol. Chem. 276:13153-9(2001).

143. Tartaglia LA, Goeddel DV. Two TNF receptors. Immunol. Today 13(5): 151-3 (1992).

144. Thorland EC, Myers SL, Persing DH, et al. Human papillomavirus type 16 integrations incervical tumors frequently occur in common fragile sites. Cancer Res. 60: 5916-21 (2000).

145. Tindle RW, Frazer IH. Immune response to human papillomaviruses and the prospects forhuman papillomavirus-specific immunization. Curr .Top. Microbiol. Immunol.186: 21753 (1994).

146. Tjiong MY, Out ТА, Ter Schegget J, Burger MP, Van Der Vange N. Epidemiologic andmucosal immunologic aspects of HPV infection and HPV-related cervical neoplasia in the lower female genital tract: a review. Int. J. Gynecol. Cancer 11(1): 9-17 (2001).

147. Trowsdale J. "Both man & bird & beast": comparative organization of MHC genes.1.munogenetics41: 1-17(1995).

148. Turner DM, Williams DM, Sankaran D, Lazarus M, Sinnott PJ, Hutchinson IV. Aninvestigation of polymorphism in the interleukin-10 gene promoter. Eur. J. Immunogenet. 24(1): 1-8 (1997).

149. Veldman T, Horikawa I, Barrett JC and Schlegel R. Transcriptional activation of thetelomerase hTERT gene by human papillomavirus type 16 E6 oncoprotein. J. Virol. 75: 4467-4472 (2001).

150. Veldman T, Liu x, Yan h, Schlegel R. The HPV E6 and Мус proteins form a complex invivo and cooperatively activate the hTERT promoter. "IGGEB DNA Tumor Virus Meetings" Proceedings book: 91 (2003).

151. Verma VN, Shenoy CN, Nadkarai JJ. Augmentation of cisplatin cytotoxicity usingcytokines on cervical carcinoma cell lines. Cancer Biotherapy Radiopharmaceuticals 11: 349-54(1996).

152. Wilson AG, Symons JA, McDowell TL, McDevitt HO, Duff GW. Effects of apolymorphism in the human tumor necrosis factor a promoter in transcriptional activation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 3195-9 (1997).

153. Wu MS, Wu CY, Chen С J, Lin MT, Shun CT, Lin JT. Interleukin-10 genotypes associatewith the risk of gastric carcinoma in Taiwanese Chinese. Int. J. Cancer 104(5): 617-23 (2003).

154. Yamada T, Manos MM, Peto J, Greer CE, Munoz N, Bosch FX, Wheeler CM. Humanpapillomavirus type 16 sequence variation in cervical cancers: a worldwide perspective. J. Virol. 71(3): 2463-72 (1997).

155. Yin M-J, Yamamoto Y, Gaynor RB. The anti-inflammatory agents aspirin and salicylateinhibit the activity of I(kappa)B kinase-beta. Nature 396: 77-80 (1998).

156. Young LS, Bevan IS, Johnson MA, Blomfied PI, Bromidge T, Maitiand NJ andWoodman CBJ. The polymerase chain reaction: a new epidemiological tool for investigating cervical human papillomavirus infection. Br. J. Med. 298: 14-18 (1988).

157. Zerfass-Thome K, Zwuschke W, Mannhardt B, Tindle R, Botz J and Jansen-Durr P.1.activation of the CDK inhibitor p27KIPl by the human papillomavirus type 16 E7 oncoprotein. Oncogene 13: 2323-2330 (1996).