Формирование поверхностной структуры монодисперсных микросфер на основе полистирола и сополимеров стирола с акролеином тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.06, кандидат химических наук Скуркис, Юлия Олеговна

• Скуркис, Юлия Олеговна
• кандидат химических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат химических наук Скуркис, Юлия Олеговна

Введение

Глава I. Обзор литературы

1.1. Эмульсионная и дисперсионная полимеризация как методы получения полимерных микросфер

1.1.1. Механизм процесса эмульсионной полимеризации

1.1.2. .Монодисперсные латексы

1.1.3. Особенности безэмульгаторной эмульсионной полимеризации

1.1.4. Функциональные группы на поверхности частиц

1.1.5. Поверхностная морфология частиц, полученных методом эмульсионной сополимеризации

1.1.6. Полимерные частицы размером более 1 мкм

1.1.7. Механизм процесса дисперсионной полимеризации в полярных средах

1.1.8. Влияние условий дисперсионной полимеризации на характеристики частиц

1.1.9. Поверхностная морфология частиц, полученных методом дисперсионной полимеризации

1.2. Взаимодействие биолигандов с поверхностью полимерных микросфер

1.2.1. Адсорбция

1.2.2. Ковалентное присоединение биолигандов

1.2.2.1. по карбоксильным поверхностным группам

1.2.2.2. по альдегидным поверхностным группам

1.2.3. Адсорбция и хемосорбция синтетических пептидов

1.3. Преимущества и перспективы метода реакции агглютинации латекса

Глава II. Объекты и методы исследования

II.1. Исходные реагенты

II. 1.1. Мономеры

И. 1.2. Прочие реагенты

II.2. Методы синтеза

11.2.1. Получение микросфер полистирола методом дисперсионной полимеризации в полярных средах

11.2.2. Получение микросфер поли(стирол/акролеин)а методом безэмульгаторной эмульсионной полимеризации

И.З. Методы изучения процесса полимеризации и характеристик образуемых полимерных частиц

11.3.1. Изучение кинетики (со)полимеризации методом газовой хроматографии

11.3.2. Определение молекулярной массы полимеров

11.3.3. Определение содержания гель - фракций в сополимерах поли(стирол/акролеин)а

11.3.4. Определение размеров микросфер методом электронной микроскопии

11.3.5. Определение содержания сухого вещества в латексе

11.3.6. Определение поверхностной концентрации функциональных групп латексов

11.3.6.1. Кондуктометрическое титрование карбоксильных групп

11.3.6.2. Кондуктометрическое титрование альдегидных групп

11.3.7. Определение адсорбционных характеристик латекса методом непрерывного потенциометрического титрования

11.3.8. Анализ полученных полимеров

11.3.8.1. Анализ сополимерной структуры микросфер ПСАК

11.3.8.2. Анализ полимерного состава привитых сополимеров

11.3.9. Анализ полимеров методом ИК-спектроскопии

11.3.10. Изучение электрофоретической подвижности микросфер методом микроэлектрофореза

II.4. Метод связывания белка

11.4.1. на поверхности карбоксилированных латексов ПС

11.4.2. на поверхности частиц ПСАК с альдегидными группами

II.5. Определение концентрации белка на поверхности частиц латексов

11.5.1. методом Лоури-Фолина

11.5.2. методом высокоэффективной монолитной дисковой хроматографии (ВЭМДХ)

Глава III Результаты и их обсуждение

III. 1. Безэмульгаторная эмульсионная сополимеризация стирола с акролеином

111.2. Дисперсионная полимеризация стирола

111.3. Связывание биолигандов с частицами ПСАК и ПС, влияние на их электроповерхностные свойства

111.3.1. Электроповерхностные свойства микросфер поли(стирол/акролеин)а до модификации белком

111.3.2. Связывание белка с частицами ПСАК

111.3.3. Электроповерхностные свойства микросфер поли(стирол/акролеин)а после модификации белком

111.3.4. Электроповерхностные свойства микросфер полистирола до и после модификации белком

111.3.5. Конструирование латексных тест-систем для определения возбудителей легионелеза

111.3.6. Конструирование латексных тест-систем для определения антител к ВИЧ

Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Формирование поверхностной структуры монодисперсных микросфер на основе полистирола и сополимеров стирола с акролеином»

Монодисперсные полимерные микросферы применяются в различных областях науки и техники. Их правильная сферическая форма и монодисперсность позволяют широко использовать полимерные микросферы в качестве модельных коллоидов при изучении реологического поведения, стабильности, седиментации, электрокинетики и агрегации коллоидов. Достаточно крупные монодисперсные полимерные частицы с диаметром более 1 мкм могут быть использованы в качестве сорбентов для анализа и разделения биологически активных веществ (БАВ) методами жидкостной хроматографии. В последние годы монодисперсные полимерные микросферы эффективно применяются в иммуноанализе в качестве носителей иммунореагентов, среди которых главную роль играют белки. Молекулы БАВ содержат в своем составе разнообразные ионогенные группы, поэтому они не только могут вступать в специфические взаимодействия с поверхностью полимерного носителя, но и влиять на распределение поверхностного заряда. Поверхностный заряд полимерных частиц определяет коллоидно-химическое поведение дисперсий, весь комплекс их электроповерхностных свойств. При этом, наряду с величиной заряда, немаловажное значение имеет и химическая природа полимерной поверхности - степень ее гидрофобности, наличие тех или иных функциональных групп, их кислотно-основные свойства и т. д. Микросферы служат для визуализации иммунохимических реакций, в которых образование комплекса антиген-антитело проявляется как агрегация частиц латекса, несущих на поверхности один из взаимодействующих компонентов. На специфичность и чувствительность такой реакции определяющее влияние оказывает конформация макромолекул белка, она меняется в зависимости от структуры поверхности микросфер и их электроповерхностных свойств. Монодисперсные частицы являются хорошей моделью для изучения механизма специфической адсорбции биолигандов на поверхности носителя. В связи с этим проведение комплексного исследования, позволяющего установить взаимосвязь между условиями синтеза полимерных частиц и их поверхностной структурой, а также разработка методов, позволяющих получать частицы с заданными свойствами, с целью эффективного экспонирования на их поверхности биоспецифических лигандов является актуальной задачей.

Целью настоящей работы является: разработка методов направленного формирования в процессе синтеза поверхностной структуры монодисперсных полимерных микросфер с альдегидными и карбоксильными группами, выяснении механизмов образования смешанных структур при встраивании БАВ в поверхностные слои таких частиц, а также в изучении влияния поверхности полимерного носителя на эффективность специфического взаимодействия биолигандов в латексной тест-системе. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

• исследовать безэмульгаторную эмульсионную сополимеризацию (БЭП) стирола и акролеина, инициированную персульфатом калия;

• исследовать дисперсионную полимеризацию (ДП) стирола в спиртовых средах, инициированную карбоксилсодержащим азоинициатором в присутствии стерического стабилизатора поливинилпирролидона (ПВП);

• выявить факторы, влияющие на дисперсность и поверхностную структуру полимерных частиц в процессе их формирования;

• исследовать адсорбционное и ковалентное связывание биолигандов (бычьего сывороточного альбумина (БСА) и синтетических пептидов) с полученными микросферами полистирола (ПС) и поли(стирол/акролеин)а (ПСАК);

• провести сравнительное изучение электрофоретической подвижности полимерных частиц, полученных в разных условиях синтеза, до и после их модификации биолигандами;

• определить эффективность протекания иммунохимических реакций на поверхности образцов микросфер ПС и ПСАК, модифицированных биолигандами.

Научная новизна работы. Впервые проведено комплексное исследование полимерных частиц - носителей иммунореагентов на основе полистирола и сополимеров стирола с акролеином. В результате установлена взаимосвязь между условиями их синтеза, дисперсными характеристиками и поверхностными свойствами (^-потенциал, положение изоэлектрической точки, адсорбционная емкость), а также способностью эффективно экспонировать диагностически значимые биолиганды для их участия в реакциях молекулярного узнавания. В ходе исследования разработаны новые методы направленного регулирования в процессе БЭП и ДП характеристик частиц-носителей на основе ПСАК и ПС; впервые проведено углубленное изучение их поверхностной структуры и ее влияния на адсорбционное и ковалентное связывание биолигандов и их реакционную способность. В частности, получены частицы ПСАК с повышенной концентрацией альдегидных групп и показано влияние соотношения альдегидных и карбоксильных групп в их поверхностном слое, а также рН раствора белка на величину его хемосорбции. Впервые получены частицы ПС с усложненной структурой поверхности, содержащей как карбоксильные группы для ковалентного связывания биолигандов, так и привитые сополимеры полистиро/поливи-нилпирролидон (ПС/ПВП). Определено строение данных сополимеров и их влияние на стабильность поверхности и эффективность экспонирования на ней БСА и синтетических антигенных детерминант вируса иммунодефицита человека (ВИЧ).

Практическая значимость:

Получен широкий спектр монодисперсных микросфер на основе ПС в диапазоне размеров 1-5 мкм и сополимеров стирола с акролеином - 0.4-0.7 мкм. Выявлены факторы, позволяющие регулировать в процессе синтеза диаметр частиц, поверхностную концентрацию функциональных групп и структуру поверхностного слоя. Проведена серия экспериментов, направленных на оптимизацию процессов связывания БАВ частицами ПС и ПСАК. Выявлены условия получения полимерных носителей и связывания с ними биолигандов, обеспечивающие их экспонирование на границе раздела фаз, сохранение биологически активной конформации иммунореагента и, следовательно, высокую чувствительность тест-систем. Показана эффективность применения полученных частиц в качестве носителей синтетических антигенных детерминант поверхностных белков и белков ядра ВИЧ в тест-системах, предназначенных для выявления ВИЧ-инфицированных.

Основные положения, выдвигаемые на защиту:

• Способы регулирования в процессах БЭП стирола с акролеином и ДП стирола в спиртовых средах дисперсности формируемых полимерных микросфер, поверхностной концентрации карбоксильных и альдегидных групп или структуры привитых сополимеров ПС/ПВП.

• Подходы к оптимизации условий связывания биолигандов путем адсорбции и хемосорбции БСА на частицах ПС и ПСАК в зависимости от структуры их поверхностного слоя.

• Метод оценки эффективности экспонирования биолигандов, основанный на комплексном изучении величин ^-потенциалов и положения изоэлекгрических точек поверхности частиц-носителей ПСАК и ПС.

• Методы повышения чувствительности модельных латексных тест-систем для определения антител к ВИЧ на основе антигенных детерминант ВИЧ и монодисперсных частиц ПСАК и ПС.

Структура диссертации:

Заключение диссертации по теме «Высокомолекулярные соединения», Скуркис, Юлия Олеговна

Выводы

1. Впервые проведено комплексное исследование монодисперсных полимерных частиц - носителей иммунореагентов на основе полистирола и сополимера стирола с акролеином, включающее их синтез, изучение дисперсных характеристик, поверхностных свойств и влияния этих свойств на эффективность связывания и участия биолигандов в реакциях молекулярного узнавания.

2. Оптимизированы условия проведения безэмульгаторной эмульсионной сополимеризации стирола и акролеина, инициированной персульфатом калия, на основе чего получены монодисперсные микросферы сополимера стирола с акролеином субмикронного размера с высокой поверхностной концентрацией альдегидных групп (до 6.3 моль/м ). Дисперсионной полимеризацией стирола, инициированной 4,4'-азо-бис-(4-цианизовалериановой кислотой) в спиртовых растворах поливинилпирролидона, получены монодисперсные микросферы полистирола диаметром в диапазоне 1-5 мкм с карбоксильными поверхностными группами (до 4 моль/м2).

3. Разработаны методы направленного формирования в процессе синтеза поверхностной структуры полимерных микросфер и изучено образование смешанных белково-полимерных структур при встраивании БАВ в их поверхностные слои. Обнаружено, что наиболее стабильной поверхностной структурой обладают частицы поли(стирол/акролеин)а с наименьшей степенью карбоксилирования поверхности и микросферы полистирола, которые содержат в поверхностном слое привитые сополимеры ПС/ПВП с длинными боковыми цепями ПС (в среднем, 100 мономерных звеньев).

4. Установлено, что величины хемосорбции белка на частицах сополимера стирола с акролеином в щелочной среде возрастают в случае преобладания в поверхностном слое альдегидных групп над карбоксильными. Показано, что частицы полистирола с усложненной структурой гидрофильного поверхностного слоя, содержащие привитые сополимеры и карбоксильные группы, также демонстрируют высокие предельные величины хемосорбции белка, проведенной методом активированных эфиров в слабо кислой среде (до 3.2 мг/м2).

Показано, что полученные микросферы поли(стирол/акролеин)а и полистирола способны эффективно экспонировать на поверхности диагностически значимые б иолиганды: антитела, выработанные к бактериям легионеллы, или синтетические антигенные детерминанты вируса иммунодефицита человека, причем связывание антигенных детерминант с участием гидрофильных спейсерных слоев привитых сополимеров или белка - блокера (БСА) повышает их реакционную способность в латексных тест-системах.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Скуркис, Юлия Олеговна, 2005 год

1. Мономеры // Под ред. Блаут, Е., Хохенштейн, В., Марк, Г.- М.: Иностранная литература, 1951. 239 с.

2. Сивергин Ю.М., Киреева С.М., Гришина И.Н. Перекиси и гидроперекиси как инициаторы полимеризации мономеров // Пластич. массы.- 2002. № 5. С. 27-32.

3. Елисеева В.И. Полимерные дисперсии М.: Химия, 1980.- 296 с.

4. Arshady R. Suspension, emulsion, and dispersion polymerization: A methodological survey // Coll. Polym. Sci. 1992. V. 270. № 8. P. 717 732.

5. Goodwin J.W., Hearn J., Но C.C., Ottewill R.H. The preparation and characterization of polymer latices formed in the absence of active agents // Brit. Polym. J. 1973. № 5. P. 347-362.

6. Оудиан Д. Основы химии полимеров. Перевод с англ. Выгодского Я.С., Фрунзе Т.М. М.: Мир, 1974. 616 с.

7. Smith W., Ewart R. Kinetics of emulsion polymerization // J. Chem. Phys.- 1948. V. 16. №6. P. 592-601.

8. Павлюченко B.H., Иванчев C.C. Эмульсионная полимеризация неполярных мономеров (развитие представлений о кинетике и топохимии) // Успехи химии. 1981. Т. 50. №4. С. 715-745.

9. Friis N., Hamielec А.Е. Kinetics of styrene emulsion polymerization // J. Polym. Sci., Polym. Chem. Ed. 1973. V. 11. № 12. P. 3321-3325.

10. Ivancev S.S., Pavljucenko V.N. Emulsions Polymerisation von Styren bei Lokalisierung der Radikalbildung im Bereich der Adsorptionsschichten des Emulgators // Acta Polymerica. 1981. V. 32. N 7. P. 407-412.

11. Павлюченко B.H., Иванчев C.C., Бырдина H.A., Алексеева З.М., Лесникова Н.Н. Особенности эмульсионной полимеризации стирола при локализации актов радикалообразования в адсорбционных слоях эмульгатора // ДАН СССР. 1981. Т. 259. №3. С. 641-645.

12. Иванчев С.С. Радикальная полимеризация М.: Химия, 1985. 280 с.

13. Иванчев С.С. Реакции в полимерных системах Л.: Химия, 1987. 304 с.

14. Ryan C.F., Grochowsky R.J. U.S.Patent 3426101. Acrylic modifiers which impart impact resistance and transparency to vinyl chloride polymers. 1969.

15. Deguchi S., Handa R. U.S.Patent 3502604. Impact resistant resin compositions and method of production thereof. 1970.

16. Dickie R., Newman S. U.S.Patent 3787522. Acrylate polymer particles comprising a core,an outer shell,and an intermediate layer in my patents list. 1974.

17. Grancio M.R., Wiliams D.J. The morphology of monomer-polymer particles in styrene emulsion polymerisation // J. Polym. Sci. Polym. Chem. Ed. 1970. V. 8. P. 26172629.

18. Okubo M., Katsuta Y., Matsumoto T. Rupture of anomalous composite particles prepared by seeded emulsion polymerisation in aging period. // J. Polym. Sci., Polym. Lett. Ed. 1980. V. 18. № 7. P. 481-486.

19. Елисеева В.И. Роль полярности и физического состояния композиционного полимера при эмульсионной полимеризации // ДАН СССР. 1983. Т. 270. № 3. С. 625-628.

20. Chainay М., Hearn J., Wilkinson М.С. Preparation of overcoated polymer latexes by "shot growth" technique // Brit. Polym. J.l 981. V. 13. № 9. P. 132-136.

21. Елисеева В.И., Герасимова A.C., Француз 3.C., Титова Н.В., Афанасьева Н.В., Борисова Т.И. Регулирование структуры и морфологии полимера при латексной полимеризации мономерных композиций // Высокомолек. соед. 1984. Т. А26. № 7. С. 1382-1389.

22. Елисеева В.И., Асламазова Т.Р. Эмульсионная полимеризация в отсутствие эмульгатора и латексы на ее основе // Успехи химии. 1991. Т. 60. № 2. С. 398-429.

23. Прокопов Н.И., Грицкова И.А., Черкасов В.Р., Чалых А.Е. Синтез монодисперсных функциональных полимерных микросфер для иммунодиагно-стических исследований // Успехи химии. 1996. Т. 65. № 2. С. 178 192.

24. Bangs L.B. In The Latex Course. Bangs Laboratories Inc.: Carmel. Indianapolis. USA, 1996. Vol.4,p 1-15.

25. Kawaguchi H. Functional polymer microspheres // Prog. Polym. Sci. 2000. V. 25. P. 1171 1210.

26. Fitch R.M. The homogeneous nucleation of polymer colloids // Brit. Polym. J. 1973. V. 5. № 6. P. 467-483.

27. Асламазова T.P., Борейко Jl.B., Елисеева В.И. К механизму безэмульгаторной латексной полимеризации // Высокомол. соед. 1987. Т. 29 Б. № 6. С. 434-437.

28. Лишанский И.С., Меньшикова А.Ю., Евсеева Т.Г., Комаровская Э.Э., Шубин В.Е., Сахарова Н.А. Особенности синтеза безэмульгаторных латексов полистирола в присутствии карбоксилсодержащего инициатора // Высокомол. соед. 1991. Т. 33 Б. №6. С. 413-416.

29. Arai M., Arai K., Sailo S. Polymer particle formation in soapless emulsion polymerization//J. Polym. Sci.: Polym. Chem. Ed. 1976. V. 17. № 11. P. 3655-3665.

30. Goodwin J.W., Ottewill R.H., Pelton R. Studies on the preparation and characterization of monodisperse polystyrene latices // Coll. Polym. Sci. 1979. V. 257. P. 61-69.

31. Goodwin J.W., Ottewill R.H., Pelton R., Vuanello G., Yates D.E. Control of particle size in the formation of polymer latices // Brit. Polym. J. 1978. V. 10. № 9. P. 173-180.

32. Goodwin J.W., Hearn J., Но C.C., Ottewill R.H. Studies on the preparation and characterization of monodisperse polystyrene latices // Coll. Polym. Sci. 1974. V. 252. № 6. P. 464-471.

33. Елисеева В.И., Иванчев C.C., Кучанов С.И., Лебедев А.В. Эмульсионная полимеризация и ее применение в промышленности М.: Химия, 1976. 240 с.

34. Меньшикова А.Ю., Дмитриева И.Б., Кучук В.И., Скуркие Ю.О., Евсеева Т.Г., Шабсельс Б.М. Электроповерхностные свойства латексов сополимеров стирола и акролеина с поверхностью, модифицированной белком // Коллоидн. журн. 1999. Т. 61. № 6. С. 799-808.

35. Kondo A., Kawano Т., Itoh F., Higashtani K. Immunological agglutination kinetics of latex particles with physically adsorbed antigen // J. Immunol. Methods. 1990. V. 135.P. 111-119.

36. Margel S., Wiesel Е. Acrolein polymerization: monodisperse, mono, and hybrido microspheres, synthesis, mechanism, and reactions // J. Polym. Sci.: Polym. Chem. Ed. 1984. V. 22. P. 145-156.

37. Rembaum A., Chang M., Richrads M. Structure and immunological properties of polyacrolein formed by means of ionizing radiation and base catalysis // J. Polym. Sci.: Polym. Chem. Ed. 1984. V. 22. № 3. P. 609-621.

38. Жоров O.B., Прейгерзон B.A., Лукин В. 1995. V. 21. № 4. P. 261-263.

39. Лукин Ю.В., Бахарев В.И., Заиченко А.С., Воронов С.А., Зубов В.П., Грицкова И.А., Праведников А.Н. Полиакролеиновые латексы: синтез, введение наполнителей и механизм формирования // ДАН СССР. 1985. Т. 285. С. 159-161.

40. Лукин Ю.В., Трифонов В.Д., Туркин С.И., Зубов В.П. Полиакролеиновые латексы в качестве иммунореагентов // Труды МХТИ. 1985. Т. 135. С. 137-141.

41. LeDissez С., Wong P.C., Mitchell A.R., Brooks D.E. Analysis of Surface Aldehyde Functions on Surfactant-Free Polystyrene/Polyacrolein Latex // Macromolecules. 1996. V. 29. № 3. P. 953-959.

42. Kowalczyk D., Marsault J.P., Slomkowski S. Atomic force microscopy of human serum albumin (HSA) on poly(styrene/acrolein) microspheres // Colloid and Polymer Science. 1996. V. 274. № 6. P. 513-519.

43. Yan C., Zanhg X., Sun Z. Poly(styrene-co-Acrolein) latex particles: copolymerization and characteristics // J. Appl. Polym. Sci. 1990. V. 40. P. 89-98.

44. Фролов Ю.Г. Курс коллоидной химии. Поверхностные явления , и дисперсные системы. М.: Химия, 1982. 400 с.

45. Неймана Р.Э. Практикум по коллоидной химии. Коллоидная химия латексов и поверхностно-активных веществ. М.: Высшая школа, 1972. 175 с.

46. Григоров О.Н., Карпова И.Ф., Козьмина З.П., Тихомолова К.П., Фридрихсберг Д.А., Чернобережский Ю.М. Руководство к практическим работам по коллоидной химии, изд. 2-е М.: Химия, 1964. 332 с.

47. Фролова Ю.Г., Горского А.С. Лабораторные работы и задачи по коллоидной химии М.: Химия, 1986. 216 с.

48. Hidalgo-Alvarez R., Martin-Rodriguez A., Fernandez A., Bastos D., Martinez F., de las Nieves F J. Electrokinetic properties, colloidal stability and agregation kinetics of polymer colloids // Adv. Colloid Interface Sci. 1996. V. 67. P. 1-118.

49. Нейман Р.Э. Очерки коллоидной химии синтетических латексов В.: Издательство Воронежского университета, 1980. 335 с.

50. Bastos D., de las Nieves F.J. Effect of electrolyte type on the electrokinetic behavior of sulfonated polysterene model colloids // Coll. Polym. Sci. 1993. V. 271. P. 860-867.

51. Gallardo V., Salecedo J., Vera P., Delgado A.V. Electric and adsorption properties of pharmaceutical polymers. Part I: Electrokinetics of aquacoat // Coll. Polym. Sci. 1993. V. 271. P. 967-973.

52. Dittgen M., Zozel B. Influence of valence and concentration of electrolytes on the dzeta potential of polyacrylic lattices // Coll. Polym. Sci. 1991. V. 269. P. 259-263.

53. Peula-Garcia J.M., Hidalgo-Alvarez R., de las Nieves F.J. Colloid stability and electrokinetic characterization of polymer colloids prepared by different methods //

54. Colloid and Surface. A: Physicochem. and Engineer. Aspects. 1997. V. 127. P. 19-24.

55. Kondo A., Kawano Т., Itoh F., Higashitani K. // J. Immunol. Methods. 1990. V. 135.P. 111.

56. Husband J.S., Adams J.M. // Coll. Polym. Sci. 1992. V. 270. № 3. P. 1194.

57. Serra J., Puig J., Martin A., Galisteo-Gonzalez F., Galvez M.J., Hidalgo-Alvarez R. On the adsorption of IgG onto polystyrene particles: electrophoretic mobility and critical coagulation concentration // Coll. Polym. Sci. 1992. V. 270. P. 574-583.

58. Galisteo-Gonzalez F., Martin-Rodriguez A., Hidalgo-Alvarez R. Adsorption of monoclonal IgG on polystyrene microspheres // Coll. Polym. Sci. 1994. V. 272. P. 352358.

59. Prescott J.H., Shiau S., Rowell R.L. Characterization of Polystyrene Latexes by Hydrodynamic and Electrophoretic Fingerprinting // Langmuir. 1993. V. 9. P. 20712076.

60. Marra A., Peuvrel-Disdier E., Wittemann A., Guo X., Ballauff M. Reology of dilute and semidilute suspensions of spherical polyelectrolyte brushes // Coll.Polym. Sci. 2003. V. 281. P. 491-496.

61. Basinska Т., Slomkowski S., Dworak A., Panchev I., Chehimi M.M. Synthesis and characterization of poly(styrene/alpha-t-butoxy- omega-vinylbenzyl-polyglycidol) microspheres // Colloid and Polymer Science. 2001. V. 279. № 9. P. 916-924.

62. Gagnon D.R., McCarthy T.J. Polymer surface reconstruction by diffusion of organic functional groups from and to the surface // J. of Applied Polymer Science. 1984. V. 29. № 12. P. 4335-4340.

63. Ugelstad J., Mork P.C., Kaggerud K.H., Ellingsen Т., Berge A. Swelling of oligomer-polymer particles. New methods of preparation of emulsions and polymer dispersions //Adv. in Colloid and Interface Sci. 1980. V. 13. P. 101 140.

64. Ugelstad J., Mfutakamba H.R., Mork P.C., Ellingsen Т., Berge A., Schmid R., Holm L., Jorgedal A., Hansen F.K., Nustad K. Preparation and application of monodisperse polymer particles // J. Polym. Sci. Polym. Symp. 1985. V. 72. P. 225-240.

65. Dispersion polymerization in organic media; Barrett K.E.J.,Ed.; Wiley: London, New York, 1974. 322 p.

66. Paine A.J. Dispersion polymerization of styrene in polar solvents. 7. A simple mechanistic model to predict particle size // Macromolecules. 1990. V. 23. P. 3109-3117.

67. Kawaguchi S., Winnik M.A., Ito K. Dispersion Copolymerization of N-Butyl Methacrylate with Poly(Ethylene Oxide) Macromonomers in Methanol-Water -Comparison of Experiment with Theory // Macromolecules. 1995. V. 28. № 4. P. 11591166.

68. Deslandes Y., Mitchell D.F., Paine A.J. X-Ray Photoelectron-Spectroscopy And Static Time-Of-Flight Secondary-Ion Mass-Spectrometry Study of Dispersion , Polymerized Polystyrene Latexes // Langmuir. 1993. V. 9. № 6. P. 1468-1472.

69. Shen S., Sudol E.D., El-Aasser M.S. Dispersion Polymerization of Methyl-Methacrylate Mechanism of Particle Formation // J. Polym. Sci., Part A: Polym. Chem. 1994. V. 32. № 6. P. 1087-1100.

70. Lacroix-Desmazes P., Guillot J. Dispersion polymerization of styrene in ethanol-water media: Monomer partitioning behavior and locus of polymerization // J. Polym. Sci., Part B: Polym. Phys. 1998. V. 36. P. 325-335.

71. Lok K.P., Ober C.K. Particle size control in dispersion polymerisation of polystyrene // Can.J.Chem. 1985. V. 63. P. 209-216.

72. Tseng C.M., Lu Y.Y., El Aasser M.S., Vanderhoff J.W. Uniform Polymer Particles by Dispersion Polymerization in Alcohol // J. Polym. Sci.: Part A: Polymer Chem. 1986. V. 24. P. 2995 3007.

73. Saenz J.M., Asua J.M. Dispersion Polymerization in Polar-Solvents // Journal of Polymer Science Part a-Polymer Chemistry. 1995. V. 33. № 9. P. 1511-1521.

74. Lu Y.Y., El Aasser M.S., Vanderhoff J.W. Dispersion Polymerization of Styrene in Ethanol: Monomer Partitioning Behavior and Locus of Polymerization // J. Polym. Sci.: Part B: Polym. Physics. 1988. V. 26. P. 1187- 1203.

75. Liu J., Chew C.H., Wang S.Y. Dispersion polymerization of styrene in aqueous ethanol media using poly(ethylene oxide) macromonomer as a polymerizable stabilizer // Polymer. 1998. V. 39. № 2. P. 283-289.

76. Shen S., Sudol E.D., Elaasser M.S. Control of particle size in dispersion polymerization of methyl methacrylate // J. Polym.Sci., Polym. Chem. 1993. V. 31. № 6. P. 1393-1402.

77. Tuncel A., Kahraman R., Piskin E. Monosize polystyrene microbeads by dispersion polymerization // J.Appl. Polym. Sci. 1993. V. 50. № 2. P. 303-319.

78. Chen Y., Yang H.W. Hydroxypropyl cellulose (HPC)-stabilized dispersion polymerization of styrene in polar solvents: Effect of reaction parameters // J. Polym. Sci., Part A: Polym. Chem. 1992. V. 30. № 13. P. 2765-2772.

79. Ober C.K., Lok K.P. Formation of large monodisperse copolymer particles by dispersion polymerization // Macromolecules. 1987. V. 20. P. 268-273.

80. Tuncel A., Kahraman R., Piskin E. Monosize polystyrene latices carrying functional groups on their surfaces // Journal of Applied Polymer Science. 1994. V. 51. P. 1485-1498.

81. Baines F.L., Dionisio S., Billingam N.C., Armes S.P. Use of Block Copolymer Stabilizers for the Dispersion Polymerization of Styrene in Alcoholic Media // Macromolecules. 1996. V. 29. № 9. P. 3096-3102.

82. Kobayashi S., Uyama H., Choi J.H., Matsumoto Y. Preparation of Micron-Size Monodisperse Poly(Methyl Methacrylate) Particles Using Poly(2-Oxazoline) Macromonomer // Polymer International. 1993. V. 30. № 2. P. 265-270.

83. Dawkins J.V., Neep D.J., Shaw P.L. Non-aqueous polystyrene dispersions: steric stabilization by partially hydrolysed poly(vinyl alcohol) in methanolic media // Polymer. 1994. V. 35. № 24. P. 5366-5368.

84. Lacroix-Desmazes P., Guyot A. Reactive surfactants in heterophase polymerization. Part XXI kinetics of styrene dispersion polymerization stabilized withpoly(ethylene oxide) macromonomers // Polym. Adv. Technol. 1997. V. 8. № 10. P. 601607.

85. Bourgeat-Lami E., Guyot A. Thiol-ended polyethylene oxide as reactive stabilizer for dispersion polymerization of styrene // Colloid Polym. Sci. 1997. V. 275. № 8. P. 716 -729.

86. Laus M., Dinnella L., Lanzarini G. Core-shell functional microspheres by dispersion polymerization: 2. Synthesis and characterization // Polymer. 1996. V. 37. № 2. P. 343-347.

87. Ober C.K., Hair M.L. The effect of temperature and initiator levels on the dispersion polymerization of polystyrene // J. Polym. Sci., Part A: Polym. Chem. 1987. V. 25. №5. P. 1395-1407.

88. Thomson В., Rudin A., Lajoie G. Dispersion copolymerization of styrene and divinylbenzene: Synthesis of monodisperse, uniformly crosslinked particles // J. of Polymer Science Part A: Polymer Chemistry. 1995. V. 33. № 3. P. 345-357.

89. Saenz J., Asua J.M. Dispersion copolymerization of styrene and butyl acrylate in polar solvents // J. Polym. Sci., Part A: Polym. Chem. 1996. V. 34. № Ю. P. 1977-1992.

90. Balmus V., Tuncel A., Piskin E. Production of polymethylmethacrylate particles by dispersion polymerization in aqueous media with eerie ammonium nitrate // J. Appl. Polym. Sci. 1996. V. 60. № 5. P. 697-704.

91. Saenz J., Asua J.M. Kinetics of the Dispersion Copolymerization of Styrene and Butyl Acrylate // Macromolecules. 1998. V. 31. № 16. P. 5215-5222.

92. Shen S., Sudol E.D., Elaasser M.S. // J. Polym.Sci., Polym. Chem. 1993. V. 31. № 6. P. 1393.

93. Ocubo M., Ikegami K., Yamamoto Y. // Colloid. Polym. Sci. 1989. V. 267. P. 193.

94. Takattashi K., Miyamori S., Uyama H., Kobayashi S. Preparation of micron-size monodisperse poly(2-hydroxyethyl methacrylate) particles by dispersion polymerization // J. Polym. Sci., Part A: Polym. Chem. 1996. V. 34. № 2. P. 175-182.

95. Ober C.K. Dispersion copolymerisation in non-aqueous media // Macromol. Chem. Macromol. Symp. 1990. V. 35/36. P. 87-104.

96. Paine A.J. Dispersion polymerization of styrene in polar solvents. A simple mechanistic model to predict particle size // Macromolecules. 1990. V. 23. P. 3109-3117.

97. Paine A.J. Dispersion polymerization of styrene in polar solvents. I. Grafting mechanism of stabilization by hydroxypropyl cellulose // J. Colloid Interface Sci. 1990. V. 138. № 1.Р. 157-169.

98. Winnik F.M., Paine A.J. Dispersion polymerization of styrene in polar solvents. Characterization of stabilizer in ordinary and precipitated particles by fluorescence quenching // Langmuir. 1989. V. 5. P. 903 910.

99. Kawaguchi S., Ito K., Winnik M.A., Ito K.H. NMR Study of Dispersion Copolymerization of n-Butyl Methacrylate with Poly(ethylene oxide) Macromonomer in Deuterated Methanol-Water // Macromolecules. 1996. V. 29. № 13. P. 4465-4472.

100. Paine A.J., Shivers R.R. Non-equilibrium particle morphology in dispersion-polymerized polystyrene particles // Can.J.Chem. 1995. V. 73. P. 1747-1756.

101. Ortega-Vinuesa J.L., Galvez Ruiz M.J., Hidalgo-Alvarez R. F(ab')2-Coated Polymer Carriers: Electrokinetic Behavior and Colloidal Stability // Langmuir. 1996. V. 12. № 13. P. 3211 -3220.

102. Norde W. Driving forces for protein adsorption at solid surfaces // Macromol. Symp. 1996. V. 103. P. 5-18.

103. Furusawa K., Arai T. Eiectrical double layer on a latex surface and protein adsorption // Surfactant Science Series. 1998. V. 76. P. 441-446.

104. Galisteo-Gonzalez F., Puig J., Martin-Rodriguez A., Serra-Domenech J., Hidalgo-Alvarez R. Influence of electrostatic forces on IgG adsorption onto polystyrene beads // Colloids Surface B. 1994. V. 2. P. 435-441.

105. Peula-Garcia J.M., Hidalgo-Alvarez R., de las Nieves F.J. Protein co-adsorption on different polysteren latexes: electrokinetic characterization of polymer colloid stability // Coll. Polym. Sci. 1997. V. 275. P. 198-202.

106. Arai Т., Norde W. The behavior of some model proteins at solid-liquid interfaces // Colloids and Surfaces. 1990. V. 51. P. 1-15.

107. Polymer latexes. Preparation, characterization, and applications; Daniela E.S., Sudol E.D., El-AasserM.S. Eds., Washington, DC. 1992. Vol. 492. 462 p.

108. Shirahama H., Suzawa T. Adsorption of Bovine Serum Albumin onto Styrene/2-Hydroxyethyl Methacrylate copolymer latex // J. Coll. Interface Sci. 1985. V. 104. № 2. P. 416-421.

109. Walker H.W., Grant S.B. The coagulation and stabilization of colloidal particles by adsorbed DNA block copolymers: the role of polymer conformation // Langmuir. 1996. V. 12. N 13. P. 3151-3156.

110. Carter D.C., He X.M., Munson S.H., Twigg P.D., Gernert K.M., Broom M.B., Miller T.Y. Three-Dimensional Structure of Human Serum Albumin. // Science. 1989. V. 244. P. 1195-1198.

111. Carter D.C., He X.M. Structure of human serum albumin. // Science. 1990. V. 249. P. 302-303.

112. Альбумин сыворотки крови в клинической медицине // Под ред. Грызунова, А., Добрецова, Г. Е. М.: Ириус, 1994.Т. 1, 2.

113. Buijs J., Lichtenbelt J.W.T., Norde W., Lyklema J. Adsorption of Monoclonal Iggs and Their F(ab')2 Fragments onto Polymeric Surfaces // Colloids and Surfaces B-Biointerfaces. 1995. V. 5. № 1-2. P. 11-23.

114. Suzawa Т., Shirahama H. Adsorption of plasma proteins onto polymer latices // Adv. Colloid Interface Sci. 1991. V. 35. P. 139-172.

115. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия M.: Просвещение, 1987. 450 с.

116. Basinska Т. Poly(styrene/acrolein) and poly(styrene/a-tetr-butoxy-w-vinilbenzyl-polyglycidol. Similarities and differences // E-Polymers. 2002. № 011. P. 1-13.

117. Horak D., Straka J., Schneider В., Lednicky F. Poly(ethylene dimethacrylate) particles with poly(glycidyl methacrylate) functionalities // Polymer. 1994. V. 35. № 6. P. 1195-1202.

118. Nustad K., Johansen L., Schmid R., Ugelstad J., Ellingsen Т., Berge A. Covalent Coupling of Proteins to Monodisperse Particles. Preparation of Solid Phase Second Antibody // Agent and Actions Suppl. 1982. V. 9. P. 207 212.

119. Microspheres: Medical and Biological Application; Rembaum A., Tokes Z.A. Eds.; CRC, Boca Raton, FL, 1988. 234 p.

120. Ganachaud F., Mouterde G., Delair Т., Elaissari A., Pichot C. Preparation and Characterization of Cationic Polystyrene Latex- Particles of Different Aminated Surface-Charges // Polymers for Advanced Technologies. 1995. V. 6. № 7. P. 480-488.

121. Yen S.P.S., Rembaum A., Molday R.W., Dreyer W. In Emulsion Polymerization: Am. Chem. Soc. Symp. Ser.; Am. Chem. Soc.: Washington, 1976. p 236 244.

122. Ugelstad J., Soderberg L., Berge A., Bergstrom J. Monodisperse polymer particles A step forward for chromatography. //Nature. 1983. V. 303. P. 95-96.

123. Margel S., Rembaum A. Synthesis and Characterization of Poly(glutaraldehyde). A Potential Reagent for Protein Immobilization and Cell Separation // Macromolecules. 1980. V. 13. № l.P. 19-24.

124. Formoso C., Olsen D.A. WO Patent № 90/07119 Synthetic HIV-Like Peptides, Their Compositions And Uses. 1990.

125. Wang C.Y. Patent EP-328403 .- Synthetic peptides related to the HIV-GP 120-env-protein, and their use. 1989.

126. Weiner D.B., Ugen K.E. Patent US 5556744 Methods and compositions for diagnosing and treating certain HIV infected patients. 1996.09.17.

127. Alizon M., Montagnier L. Patent US 5580739 Peptides of human immunodeficiency virus type 2 (HIV-2) and in vitro diagnostic methods and kits employing the peptides for the detection of HIV-2. 1996.12.03.

128. Меньшикова А.Ю., Шабсельс Б.М., Евсеева Т.Г., Красникова Е.Н., Власов Г.П. Моделирование реакций молекулярного узнавания на поверхности полимерных микросфер // В сб. Структура и динамика молекулярных систем. 2003. Т. 3 С. 73-77.

129. Kondo A., Furukawa S., Taira М., Higashitani К. Effect of peptide antigenic determinant properties on adsorption equilibrium of anty-peptide antibodies // J. Ferment. Bioeng. 1991. V. 72. № 6. P. 409-412.

130. Molina-Bolivar J.A., Galisteo-Gonzalez F., Quesada-Perez M., Hidalgo-Alvarez R. Agglutination Kinetics of F(ab')2 coated polymer colloids // Coll. Polym. Sci. 1998. V. 276. P. 1117-1124.

131. Stramer S., Allain J.-P. Patent EP 0445650. Detection of anti-HIV antibodies. 1991.09.11.

132. Новые методы иммуноанализа // Под ред. Коллинза. М.: Мир, 1991. 240 с.

133. Иммунологическая диагностика вирусных инфекций // Под ред. Перадзе, Т. В., Халонена, П. М.: «Медицина», 1985. 302 с.

134. Hadfield S.G., Lane A., Mclllmurray М.В. A novel coloured latex test for the detection and identification of more than one antigen // Journal of Immunological Methods. 1987. V. 97. № 2. P. 153-158.

135. Quinn Т., Riggin C., Kline R., Francis H., Mulanga K., Sension M., Fauci A. Rapid latex agglutination assay using recombinant envelope polypeptide for the detection of antibody to the HIV. // JAMA. 1988. V. 260. № 4. P. 510-513.

136. Аракелов C.A., др. и. Сравнительная характеристика тест-систем для определения антител к ВИЧ. В Кн. Фундаментальные и прикладные вопросы проблемы СПИД. М.: 1988.

137. Лещинская Н.П., Смольская Т.Т. Методы серодиагностики ВИЧ-инфекции М.: Изд-во"Пульс" НПО Союзмединформ, вып.4-12. 1992. 1-36 с.

138. Cavell E.A.S., Meeks А.С. Temperature dependence of rate of initiation of polymerization 4,4'-azo-bis-4-cyanopentanoic acid // Macromolek. Chem. 1967. V. 108. P. 304 306.

139. Brandrup J., Immergut E.H. In Polymer handbook; 3 rd ed.; John Wiley and Sons. 1989. p 397.

140. Goode N.P., Davison A.M., Gowland G., Shires M. Preparation, purification and analysis of BSA-coated latex particles for in vivo studies. Non-ionic adsorbance of unbound protein ligand // J. Immunol. Methods. 1986. V. 92. № 1. P. 31-35.

141. Столяров Б.В., Савинов И.М., Витенберг А.Г. Руководство к практическим работам по газовой хроматографии. Л.: Химия, 1978. 243 с.

142. Labib М.Е., Robertson A.A. The conductometric titration of latices // J. Colloid Interface Sci. 1980. V. 77. № 1. P. 151-161.

143. Staros J. V., Wright R.W., Swingle D.M. Enhancement by N-hydroxysulfosuccinimide of water-soluble carbodiimide-mediated coupling reactions // Anal. Biochem. 1986. V. 156. № 1. p. 220-222.

144. Tennikova Т., Freitag R. An introduction to monolithic disks as stationary phases for high performance biochromatography // J. High Res. Chromatogr. 2000. V. 23. № 1. P. 27-38.

145. Tennikova Т., Reusch J. Short monolithic beds: history and introduction to the field // J. of Chromatogr. A. 2005. V. 1065. P. 13-17.

146. Хэм Д. Сополимеризация. M.: Химия, 1971. 615 с.

147. Абрамзон А.А. Повехностно-активные вещества: свойства и применение. Д.: Химия, 2е изд. 1981. 304 с.

148. Ober С.К., Lok К.Р., Hair M.L. // J. Polym. Sci., Polym. Lett. Ed. 1985. V. 23. № 2. P. 103.

149. Jayachandran K.N., Chatterji P.R. Preparation of Linear and Crosslinked Polymer Microspheres by Dispersion Polymerization // J. Macromol. Sci. Polym. Rev. 2001. V. C41.№ 1-2. P. 79-94.

150. Сидельковская Ф.П. Химия N-винилпирролидона. M.: Наука, 1970. 249 с.

151. Беллами JI. Инфракрасные спектры молекул. М.: Изд-во инстр. лит., 1957. 444 с.

152. Меньшикова А.Ю., Евсеева Т.Г., Чекина Н.А., Иванчев С.С. Монодисперсные микросферы на основе сополимеров акролеина // Журн. прикл. химии. 2001. Т. 72. № 10. С. 1677-1683.

153. Lowry О.Н., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent. // J. Biol. Chem. 1951. V. 193. № 1. P. 265-275.

154. Elgersma F. Competitive adsorption of albumin and monoclonal immuno g-globulin molecules on polystyrene surfaces, Agricultural Univercity, Netherlands, Wageningen, 1990.

155. Shubin V.E., Hunter R.J., О Brien R.W. Electroacoustic and dielectric study of surface conduction // J. Coll. Interface Sci. 1993. V. 159. P. 174-179.

156. Шубин В.Е., Исакова Н.В., Сидорова М.П., Меньшикова А.Ю., Евсеева Т.Г. Электроповерхностные свойства карбоксильного латекса и их анализ на основе моделей ионных пар // Коллоидн. журн. 1990. Т. 52. № 5. С. 535-541.

157. EsserP. Principles in Adsorption to Polystyrene //Nunc Bulletin. 1988. № 6. P. 1-5.

158. Кирш Ю.Э. Поли-Ы-винилпирролидон и другие поли-Ы-виниламиды. М.: Наука, 1998. 252 с.

159. Wu J.Y., Riggin С.Н., Seals J.R., Murphy C.I., Newman M.J. In vitro measurement of antigen-specific cell-mediated immune responses using recombinant HIV-1 proteins adsorbed to latex microspheres // J. Immunol, methods. 1991. V. 143. № l.P. 1-9.

160. Advances in Protein Chemistry; AnfinsenC.B., Edsall J.T., Richards F.M. Eds.; V. 37. 347 p.