Полимерные микросферы для получения биотест-систем на С-реактивный белок тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Марков, Александр Григорьевич

• Марков, Александр Григорьевич
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Марков, Александр Григорьевич

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 СИНТЕЗ ПОЛИМЕРНЫХ МИКРОСФЕР

ДЛЯ ИММУНОХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

1.2. РЕАКЦИЯ ЛАТЕКСНОЙ АГГЛЮТИНАЦИИ.

1.3. ИММОБИЛИЗАЦИЯ БИОЛИГАНДОВ

НА ПОВЕРХНОСТЬ ПОЛИМЕРНЫХ МИКРОСФЕР

ГЛАВА 2.0БЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1.ИСХОДНЫЕ ВЕЩЕСТВА.

2.2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. 37 2.2.1 .ПОЛУЧЕНИЕ ПОЛИМЕРНЫХ СУСПЕНЗИЙ И ОЦЕНКА ИХ СВОЙСТВ. 37 2.2.2. ИММОБИЛИЗАЦИЯ БИОЛИГАНДОВ

НА ПОВЕРХНОСТЬ ПОЛИМЕРНЫХ МИКРОСФЕР.

2.2.3 РЕАКЦИЯ ЛАТЕКСНОЙ АГГЛЮТИНАЦИИ (РЛА).

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1.СОПОЛИМЕРИЗАЦИЯ СТИРОЛА С МЕТАКРИЛОВОЙ КИСЛОТОЙ.

3.2. ПОЛИМЕРИЗАЦИЯ СТИРОЛА В ПРИСУТСТВИИ

КАРБОКСИЛСОДЕРЖАЩЕГО КРЕМНИЙОРГАНИЧЕСКОГО ПАВ.

3.3. КОЛЛОИДНО-ХИМИЧЕСКИЕ

СВОЙСТВА ЛИПИДОВ РАЗЛИЧНОЙ ПРИРОДЫ.

3.4. ПОЛИМЕРИЗАЦИЯ СТИРОЛА

В ПРИСУТСТВИИ ЛИПИДОВ РАЗЛИЧНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ.

3.5. ПОЛУЧЕНИЕ ТЕСТ-СИСТЕМ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ

В КАЧЕСТВЕ НОСИТЕЛЕЙ БИОЛИГАНДОВ ПОЛИМЕРНЫХ

МИКРОСФЕР С КАРБОКСИЛЬНЫМИ ГРУППАМИ НА ПОВЕРХНОСТИ.

3.6. ПОЛУЧЕНИЕ ТЕСТ-СИСТЕМ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СРБ

С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПОЛИМЕРНЫХ МИКРОСФЕР, СОДЕРЖАЩИХ НА ПОВЕРХНОСТИ ФОСФОЛИПИДЫ РАЗЛИЧНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ. 90 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Полимерные микросферы для получения биотест-систем на С-реактивный белок»

В настоящее время в клинической практике широкое применение находят методы иммунохимического анализа с использованием тест-систем, работающих на основе реакции латексной агглютинации. Это прежде всего связано с возможностью быстрого определения биологически активных молекул, играющих значимую роль в патогенезе различных заболеваний и контроле эффективности проводимой терапии.

Биотест-системы, представляющие собой конъюгат полимерная макросфера-биолиганд, просты в исполнении, не требуют специального оборудования и обладают высокой чувствительностью.

Преимущества полимерных микросфер в качестве носителей биолигандов перед частицами биологического происхождения (бактерии, эритроциты и др.) к настоящему времени очевидны. Они состоят в возможности получения полимерных суспензий с определенным диаметром частиц, узким распределением их по размерам, функциональными группами на поверхности, способных ковалентно связываться с функциональными группами биолиганда, в сохранении устойчивости и свойств в растворе электролита, на всех стадиях получения тест-систем и при хранении.

Их практическое применение намного опередило научные исследования в области синтеза полимерных микросфер, пригодных для использования в этом качестве, что и до сих пор, к сожалению, является причиной их выбора методом эмпирического поиска, то есть методом проб и ошибок. Кажущаяся на первый взгляд простота перехода от биологических носителей к синтетическим в реальности не подтвердилась. В первую очередь не подтвердилось мнение об универсальности полимерных бионосителей, то есть возможности их использования для различных назначений. Многочисленные исследования как в области синтеза полимерных микросфер, так и их использования в качестве носителей биолигандов, позволяют думать, что очень важную роль в их применении в этом качестве играет строение межфазного слоя частиц. Поэтому актуальны новые исследования в области синтеза полимерных суспензий с определенным строением межфазного слоя частиц, включающих функциональные группы на поверхности полимерных частиц или специфические лиганды для взаимодействия с биолигандом.

Данная работа является частью фундаментальных исследований, проводимых в этом направлении, и ставит своей целью создать полимерные суспензии, частицы которых могут быть использованы в качестве носителей биолигандов для определения С-реактивного белка методом реакции латексной агглютинации.

С-реактивный белок (СРБ) - это полифункциональное соединение, выполняющее в организме функцию белка-переносчика, иммуномодулятора [1], является надежным индикатором ряда заболеваний, сопровождающихся острофазным ответом. Это - бактериальная инфекция, воспалительные заболевания (ревматоидный артрит, системный васкулит и.т.д.), инфаркт миокарда, травмы и другие заболевания. Как правило, в начале возникновения патологического процесса концентрация СРБ в сыворотке крови резко повышается. В этом случае важно использовать методы экспресс-определения белка. В клинической практике СРБ выявляют с помощью иммуноферментного [2], иммунофлюоресцентного [3], нефелометрического или турбидиметрического [4] методов. Все перечисленные методы, используемые для определения СРБ, требуют наличия дорогостоящего оборудования, специальных химических реагентов, в ряде случаев для выполнения анализа необходимо провести предварительную обработку исследуемых образцов. Указанные недостатки затрудняют использование перечисленных методов для скрининговой клинической практики. В этом плане перспективны биотест-системы, представляющие собой полимерные микросферы с иммобилизованными на их поверхности биолигандами.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Марков, Александр Григорьевич

выводы

1. Созданы биотест-системы для определения СРВ в широком диапазоне концентраций в биологических жидкостях (1:64-1:1042). Биотест-ситемы обладают высокой чувствительностью, нижний предел определения СРВ составляет менее 1мкг/мл. Это дает возможность использовать в микроколичествах анализируемую биологическую жидкость и применять высокое разведение, уменьшая неспецифичность реакции.

2. Определены условия синтеза полимерных суспензий с заданным комплексом свойств (узкое распределение по размерам, устойчивость в буферных растворах, в процессе иммобилизации биолиганда и при хранении) с различным диаметром частиц, содержащих в межфазном слое карбоксильные группы и полярные фосфолипиды - для ковалентного связывания и специфического взаимодействия с С-реактивным белком.

3. Показано, что полистирольные микросферы, полученные в присутствии карбоксилсодержащего кремнийорганического ПАВ, характеризуются более высокой устойчивостью в процессе синтеза, при иммобилизации биолиганда и при хранении, чем синтезированные сополимеризацией стирола и метакриловой кислоты.

4. Изучение коллоидно-химических свойств липидов различного происхождения показало, что наиболее высокой поверхностной активностью характеризуется яичный фосфатидилхолин, прочность межфазных слоев липидов существенно возрастает с повышением их концентрации и в присутствии полимера.

5. Выбраны оптимальные концентрации у-гл°булина и фосфолипида, иммобилизированных на поверхности полимерных микросфер, обеспечивающие высокую чувствительность биотест-систем. Показана эффективность фосфолипидов в качестве биолигандов при создании тест-систем на С-реактивный белок.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

По способу синтеза полимерные суспензии, используемые для получения тест-систем, принципиально отличались друг от друга. Первая, ПСТ-МАК полимерная суспензия, была получена сополимеризацией стирола с метакриловой кислотой. Фрагменты сополимерных цепей, содержащие звенья метакриловой кислоты, диффундировали к границе раздела фаз и ориентировались карбоксильными группами в сторону водной фазы. Из-за высокой молекулярной массы сополимера (Мг|=500000) диффузия сополимерных цепей к границе раздела фаз протекала во времени. Частицы имели сферическую форму, средний диаметр 0,65 мкм, узкое распределение по размерам и содержали на поверхности карбоксильные группы.

Вторая полимерная суспензия, ПСТ-ПДС, была получена полимеризацией стирола в присутствии карбоксилсодержащего кремнийорганического ПАВ. ПДС нерастворим в воде и несовместим с образующимся в процессе полимеризации полистиролом, поэтому с ранних конверсий мономера он вытесняется в поверхностный слой частиц, образуя "оболочку". Устойчивость частиц в процессе полимеризации и их узкое распределение по размерам свидетельствуют о формировании в их межфазных слоях факторов стабильности (электростатического и структурно-механического) на ранних стадиях процесса. Средний диаметр частиц при концентрации ПДС, равной 1 и 3 % масс в расчете на стирол, составлял 0,45 и 0,64 мкм соответственно.

Полимерные микросферы третей полимерной суспензии, ПСТ-ССН, были получены затравочной полимеризацией стирола и стиролсульфоната натрия, на затравочных полистирольных частицах со среднем диаметром 1,56 мкм. На поверхность полимерных микросфер адсорбировали биолиганд.

Все синтезированные полимерные микросферы отвечали требованиям, предъявляемым к полимерным носителям биолигандов:

• узкое распределение по размерам (РЧР), что делает возможным определять площадь поверхности носителя и устанавливать степень иммобилизации биолигандом;

• содержание функциональных групп на поверхности полимерных частиц для ковалентного связывания с функциональными группами биолига нда;

• индивидуальность частиц в буферных растворах (отсутствие спонтанной агрегации частиц).

Оптимальную концентрацию 1дв определяли по чувствительности РЛА при использовании тест-систем с разной концентрацией биолиганда на поверхности полимерных микросфер и во всех случаях составляла 1 мг/мл.

Результаты определения СРВ с использованием всех полученных конъюгатов приведены в табл.1.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Марков, Александр Григорьевич, 2005 год

1. Yen S.P.S.,Rembaum A., Molday R.W., Dreyer W. Polymer particles for immunological assay // In: Emulsion polymerization; ACS Sumposium Series.-ACS, Washington.- 1976.-p.236-257.

2. The method for preparation of functional polymer lattices and their using for immunological assay: US Pat. 4 060 597, МКИ С 08 F 116/34, 2/22, L 89/00 / Sato Y„ Weda 5.-заявл.9.03.1977, опубл. 14.11.1977.

3. Margel S., Rembaum A. Synthesis and characterization of poly(glutaraldehyde), a potentol reagent for protein immobilization and cell separation // Macromol -1980. -N13-p. 19-24.

4. Margel S., Polyaldehyds microspheres as probes for cell membrane //J.Eng.Chem.Prod.Res. -1982.-v.21.-N3.-p.343-348.

5. Nustad K. Johansen L., Schmid R., Ugelstad J., Ellingsen Т., Berge A. Preparation of polymer latex particles carriers of a biochemicals and enzymes // A. Agents Actions Suppl.-1982.-v.9.-p.207-212.

6. Rembaum A., Chang M., Richards J., Li M. Synthesis and characterization hydrophilic microsoheres//J. Polym.Sci., Polym.Chem.Ed.-1984- Vol. 22-pp.609-619.

7. Bang L.B.Uniform latex particles.-lndianapolis:Seradyn lnc.,1984-68 p.

8. Margel S. Characterization and chemistry of polyaldehyde mi его spheres// J. of Polym.Sci.,Polym.Chem.Ed.-1984.-v.22.-p.3521-3533.

9. Ugelstad J., Mfutakamba H.R., Mork P.C., Ellingsen Т., Berge R., Holm L., Schinid R., Jorgedal A., Hansen F.K., Nustad K. Preparation and characterization of monodisperse polymer particles // J.Polym.Sci.,Polym.Symp.-1985.-v.72.-p.225-240.

10. Ober S.K., Lok K.P., Hair M.L. Monodispersed, micron-sized polystyrene particles by dispersion polymerization // J.of Polym.Sci., Polym.Letters Ed.-1985.-v.23.-p.103-108.

11. Upson D.A. Reactive functional latex polymers // J.of Polym.Sci.,Polym.Symposium.-1985.-N72.-p.45-54.

12. Лукин Ю.В., Грицкова И.А.,Праведников А.Н.,Бахарев В.И. Полиак -ролеиновые латексы: синтез, введение наполнителей и механизм формирования //ДАН СССР. -1985.-T.285.-N1.-C.159-161.

13. Tseng C.M.,Lu Y.Y.,E1-Aasser M.S.,Vanderhoff J.W. Uniform polymer particles by dispersion polymerization in alkohol // J.Polym.Sci.,Polym.Chem.Ed.-1986.v.24.-p.2995-3007.

14. Shahar M.,Meshylam H.,Margel S. Synthesis and characteristics of microspheres of polystyrene derivatives // J.of Polym. Sci.,Polym.Chem.Ed.-1986.-v.24.-p.203-213.

15. Ferrabochi P.,Azandi M.N.,Santaniella E.,Trave S. Preparation of aldehyde containing latex particles by oxydation of chloromethyl-containing latices // Synth. Commun. -1986.- v.l6.-p.43-45.

16. Van der Hoven T.J.J., Bijeterboch B.H. Some peculiarities in the surface charge of monodisperse polysteren particles: the effect of preparation, cleaning and handing //J.Coll.lnteface Sci.-1987.-v.115.-N 2.-p.559-560.

17. Brouwer W.M. The preparation of small polystyrene particles // J.of Appl.Polym.Sci.-1989.-v.38.-p.l335-1346.

18. Бахарев B.H., Буряков A.H., Лукин Ю.В., Грицкова И.А., Зубов В.П. Способ получения полиакролеиновых латексов: А.с. 1 565 845, 1990г.

19. Бахарев В.Н., Буряков А.Н., Дукин Ю.В., Грицкова И.А., Зубов В.П., Клявиньш М.К., Роска А.С., Зицманис А.Х. Способ получения полиакролеиновых латексов: А.с. 1 565 846, 1990г.

20. Okubo M.,Shiozaki M.,Tsujihiro M.,Tsukuda Y. Preparation of micron-size monodisperse polymer particles by seeded polymerization utilizing the dynamic monomer swelling method // Coll.Polym. Sci.-1991.-v.269.-p.222-226.

21. Дорохова E.A. Полимерные микросферы для реакции латекс-агглюти нации: Дис. канд.хим.наук.-М.,1991.-108 с.

22. Бакеева И.В., Грицкова И.А., Басырева Л.Ю., Повалий Т.М. Синтез полистирольных латексов в присутствии углеводов в качестве поверхностно-активных веществ // VIII Всесоюзная научно-техническая конференция "Латекс-90":Тез.докл.-М.,1991 .-с.20.

23. Черкасов В.P. Полимерные суспензии, модифицированные серусодержащими аминокислотами, для иммунохимических исследований. Дис. канд.хим.наук.М., 1992.

24. Okubo М., Kondo Y., Takahashi М. Studies on Suspension and Emulsion .136.

25. Production of Submicron-Size Monodisperse Polymer Particles Having Aldehyde Groups by Seeded Aldol Condensation Polymerization// Coll.Polym.Sci.-1993- Vol 271-Iss 2-pp. 109-113.

26. Okubo M., Shiozaki M. Production of Micron-Size Monodisperse Polymer Particles by Seeded Polymerization Utilizing Dynamic Swelling Method with Cooling Process// Polym. Int. -1993, -v.30. -Iss 4. -p.469-474.

27. Hosaka S., Murao Y., Tamaki H., Masuko S., Miura K., Kawabata Y. Monodisperse Microspheres of Copolymers of Glycidyl Methacrylate and Its Derivatives as Materials for Biomedical Application//Polym. Int. -1993. -v.30. -Iss 4. -p.505-511.

28. Tuncel A., Kahraman R., Piskin E. Monosize Polystyrene Microbeads by Dispersion Polymerization// J. Appl. Polym. Sci. -1993. -v.50. -Iss 2. -p.303-319.

29. Грицкова И.А., Гжива Э. Способ получения полимерных суспензий с узким РЧР в присутствии диптолилкарбалкоксифенилкарбинола: Пат. 163091, Республика Польша. -1994

30. Грицкова И.А., Чирикова О.В., Щеголихина О.И., Жданов А.А. Необычный эффект стабилизации полимерных суспензий в присутствии карбоксилсодержащих поливинилсилоксанов // Докл.PAH-1994-т.334 -N1-с. 57-61.

31. Шиков А.А., Прокопов Н.И., Грицкова И.А. Синтез полимерных суспензий для иммунохимических исследований. Биомедицинские технологии М, 1994, вып.2, стр. 15.

32. Грицкова И.А., Крашенинникова И.Г., Аль-Хаварин Д.И., Нусс П.В., Дорохова Е.А. Гжива Никсиньска И. Устойчивые полистирол-метакриловые суспензии с узким распределением частиц по размерам //Коллоидн. ж.1995, -т.57. -N2. -с.182-185.

33. Прокопов H.И.Грицкова И.А.,'Черкасов В.Р., Чалых А.Е7/ Успехи химии.1996,t.65,N2,c. 178-192.

34. Okubo М., Izumi J., Hosotani Т., Yamashita T.Production of Micron-Sized Monodispersed Core/Shell PolymethylMethacrylate Polystyrene Particles by Seeded Dispersion Polymerization// COLLOID AND POLYMER SCIENCE-1997-Vol.275-lss.8-pp.797-801

35. Polymeric Dispersions : Principles and Applications (NATO Asi Series. Series E, Applied Sciences, Vol 335.)// Ed.by Asua L.M.-N.-Y.: Kluwer Academic Pub.-1997-349 p.37.

36. Polymer Latexes : Preparation, Characterization, and Applications (ACS Symposium, №492) // Ed.by Daniels E.S., Sudol E.D., El-Aasser M.S.- .-N.-Y.: Kluwer Academic Pub-1998-437 p.

37. Киселев E.M. Полимерные материалы на основе гидропероксидного мономера 2- гидроперокси 2-метилгексен-5-ин-3 : Дисс. докт. хим. наук. М, 1998.

38. Прокопов Н.И. Синтез полимерных суспензий с узким распределением частиц по размерам методом гетерофазной полимеризации : Дисс. докт. хим. наук. -М., 1999.

39. Генералова А.Н. Получение биоаналитических реагентов на основе полимерных дисперсий. Дисс. канд. хим.наук.М.,2000.

40. Крашенинникова И.Г. Синтез полистирольных суспензий для иммунохимических реакций. Диссертация канд. хим. наук. М. 1991

41. Лобанов А.Н. Синтез полистирольных суспензий медико-биологического назначения. Диссертация канд. хим. наук. М. 2003

42. Ишков А.А. Синтез полиглицидилметакрилатных суспензий с узким распределением частиц по размерам. Диссертация канд. хим. наук. М. 1999

43. Лукин Ю.В. Синтез и исследование полимерных дисперсных систем для иммуноанализа. Диссертация канд. хим. наук. М. 1986

44. Шуманский С.М. Синтез и свойства полимерных микросфер сфункциональными группами на поверхности. Диссертация канд. хим. наук. М. 1992.

45. Буряков А.Н. Синтез магнитвосприимчивых полимерных дисперсий биомедицинского назначения. Диссертация канд. хим. наук. М. 2000

46. Григорьевская И.И. Антительтные тест-системы на основе полимерных суспензий для мониторинга биополлютантов и биологически важных соединений. Диссертация канд. хим. наук. М. 2005

47. Станишевский Я.М. Полимерные дисперсные системы медико-биологического назначения. Диссертация канд. биолог, наук. М. 2001

48. Иванчев С.С. Полифункциональные компоненты при радикальной полимеризации и получении полимерных композиций//Успехи химии.- 1991.-т.60.-вып.7.-с.1368-1390.

49. Елисеева В.И.,Асламазова Т.Р., Эмульсионная полимеризация в отсутствие эмульгатора и латексы на ее основе//Успехи химии,- 1991.-т.60.-вып.2.-с.398-428.

50. Bon S.A-F., Vanbeek Н., Piet P., German A.L.Emulsifier-Free Synthesis of Monodisperse Core-Shell Polymer Colloids Containing Chloromethyl Groups//J.OF APPLIED POLYMER SCIENCE-1995-Vol.58-lss.l-pp. 19-29

51. Милицкова E.A. К вопросу стабилизации размеров гранул суспензионных полимеров//Пластические массы.-1961.-М.8.-с.6-8.

52. Reinhardt H.I., Thiele R. Untersuchungin zur dishontinuirlichen suspensions polymerisations von styrol // Plaste b Kautsch.-1972.- Bd.l9.-N.9.-s.645-648.

53. Munzer M., Trommsdorff E. Polymerizations in suspension // In : Polymer Processes. -New York.-p. 106-142.

54. Суспензионная полимеризация винилхлорида. Стабилизаторы полимеризующейся эмульсии. Сб. обзорной информации.-М.; НИИТЭХИМ, 1975.-е. 63.

55. Суспензионная полимеризация метилметакрилата. Сб. обзорной информации. -М.: НИИТЭХИМ, 1975.-c.59.

56. Митюк Д.Ю.Роль структуры и свойств межфазных адсорбционных слоев в процессе регулирования дисперсности систем типа вода/масло,стабилизированных алюминиевыми мылами синтетических жирных кислот//Диссертация канд.хим.наук- М, 1985-122 с.

57. Шалыт С .Я. Условия формирования межфазных адсорбционныхслоев олеорастворимых мыл синтетичеческих жирных кислот и пути регулирования их стабилизирующего действия.//Дисс. докт.хим.наук-Москва, 1987-264 с.

58. Борт Д.Н. Физико-химические аспекты гетерофазной рдикальной полимеризации виниловых мономеров. Автореферат диссертации док. хим. наук М. 1976.

59. Dinnella C.,Doria M.,Laus M., Lanzarini G.Reversible Adsorption of Endopectin-Lyase to Tailor-Made Core-Shell Microspheres Prepared by Dispersion Polymerization//BIOTECHNOLOGY AND APPLIED BIOCHEMISTRY-1996-Vol.23 -Iss.APR-pp. 133-140

60. Capek I.On the Kinetics of Heterogeneous Free-Radical Cross- Linking Polymerization//J OF DISPERSION SCIENCE AND TECHNOLOGY- 1996-Vol.17-lss.2-pp. 139-244

61. К. E. J. Barrett. Dispersion Polymerization in Organic Media// Wiley, London-1975-456 p.

62. Ahmed S.F., Poehlein G.W. Kinetics of Dispersion Polymerization of Styrene in Ethanol .1. Model Development// INDUSTRIAL & ENGINEERING CHEMISTRY RESEARCH. -1997. -v.36. -Iss 7. -p.2597-2604.

63. Ahmed S.F., Poehlein G.W. Kinetics of Dispersion Polymerization of Styrene in Ethanol .2. Model Validation// INDUSTRIAL & ENGINEERING CHEMISTRY RESEARCH. -1997, -v.36. -Iss 7.-p.2605-2615.

64. Li W.-H., Li K., Stasver H.D.H Monodisperse poly(chloromethy!styrene-co-divinylbenzene) microspheres by precipitation polymerization//J of Polymer Science Part A: Polymer Chemistry-1999-Vol.37-lss. 14-pp.2295-2303

65. Грицкова И.А., Крючков С.Б. Способ получения дисперсии полипарааминостирола. А.с. 1616927 1990г.

66. Имнадзе Е.Г. Модификация водной дисперсии синтетического цис-1,4- полиизопрена серусодержащими аминокислотами: Дис. канд.хим.наук.-М., 1987.-175C.

67. Лукин Ю.В., Буряков А.Н., Егоров В.В., Туркин СИ., Зубов В.П., Грицкова И.А., Заиченко А.С., Воронов С.А., Пучин В.А. и Праведников А.Н. Способполучения магнитных латексов. А.с.СССР N1290690,-1986.

68. Подойницин С.Н., Бахарев В.Н., Лукин Ю.В., Туркин СИ., Грицкова И. А., Зубов В.П., Буряков А.Н. Высокоградиентная магнитная сепарация клеток, меченных магнитными латексными частицами. 1. Осаждение меченых клеток. Биотехнология,-1989.-т.5.-с.371-375.

69. Елисеева В.И., Титова Н.В., Чалых А.Е., Слонимский Г. Д. Структурно-морфологические превращения латексных частиц в процессе двухстадийной эмульсионной полимеризации. //ДАН СССР,-1981.-Т.261 .-N.2.-C.402-405.

70. Елисеева В.И. Морфология и фазовая структура частиц, ее влияние на свойства латексов и пленок. Получение синтетических латексов, их модифицирование. //М, 1985, ЦНИИТЭ нефтехим,-с.7.

71. Murai S., Hosoi К., Hashimoto M. The Morphology of Core Shell Latex Particles. // j.Polym. Sei. : Polym. Chem. Ed.,-1984.-v.22.-N.6.-p. 1365-1372.

72. Muroi S., Hosoi К. Внутренняя структура латексных частиц, полученных полимеризацией с двухстадийной нагрузкой мономера. Н\. Chem. Soc. Jap. Chem. Ind. Chem.,-1984.- N.6.-p.954-958, РЖХ,-1985,1С-235.

73. Гаевой В.H. Эмульсионная полимеризация стирола и хлоропрена. // Дисс. канд.хим. наук., М.-1984.

74. Takahashi K.,Naga¡ K.Preparation of Reactive Polymeric Microspheres by Seeded Copolymerization Using a Polymerizable Surfactant Bearing an Active Ester Group//POLYMER-1996-Vol.37-lss. 7-pp. 1257-1266

75. Гринфельд E.A. Эмульсионная сополимеризация диеновых и виниловых мономеров при пониженном содержании эмульгаторов. Дисс. канд.хим. наук., М.-1985.

76. Стрелец Р.В. Синтез малоэмульгаторных латексов методом затравочной полимеризации на карбоксил содержащих частицах. Дисс. канд.хим. наук., М.-1990.

77. Саков Э.М. разработка технологии двухстадийного синтезамолоэмульгаторного бутадиен метил метакрилаткарбоксилатного латекса. Дисс. канд.тех. наук., М.-1989.

78. Muroi S. Some physicochemical properties of poly(ethyl acrylate)emulsion containing carboxyl groups// J.Appl.Polym.Sci. -1966.-N 10.-p.713-715.

79. Muroi S.,Hosoi K.,lshikawa T. Characterization of carboxyl groups containing polymer latices // J.Appl.Polym.Scl.-1967.-N 11 .-p. 1963-1966.

80. Huang Y.-H.,Li Z.-M.,MoravetzH.The kinetics of the attachment of reactive latex particlesand the resulting latex stabilization//J.of Polym.Sci.,Polym.Chem.Ed.-1985.-v.23.- N 3.-p.795-799.

81. Suen C.-H.,Moravetz H. The kinetics and retention of enzymatic activity in the covalent protein bonding to a polymer latex // Macromol.Chem.-1985.-N 186.-p.255-260.

82. Maehara Т., Eda Y., Mitani K., Matsuzawa S. Glycidyl Methacrylate Styrene Copolymer Latex-Particles for Immunological Agglutination Tests //Biomater.-1990-Vol 11- Iss 2- pp. 122-126.

83. Changhong Y.,Zhang X.,Sun Z.,Kitano H.,lse N. Poly(styren-co-acrolein) latex particles: copolymerization and characteristics // J.of Appl.Polym.Sci.-1990.-v.40.-p.89-98.

84. Verweij P.D., Sherrington D.C. High-Surface-Area Resins Derived from 2,3-Epoxypropyl Methacrylate Cross-Linked with Trimethylolpropane Trimethacrylate// J.of Mater.Chem.-1991-Vol 1-lss3-pp.371-374.

85. Arshady R. Beaded Polymer Supports and Gels .2. Physicochemical Criteria and Functionalization// J.of Chromat-1991-Vol 586-lss 2-pp.l99-219.

86. Margel S., Nov E., Fisher I. Polychloromethylstyrene Microspheres Synthesis and Characterization//J.Polym.Sci., Polym.Chem.Ed.-1991-Vol 29- Iss 3-pp.347-355.

87. Magnet S., Guillot J., Guyot A., Pichot C. Cross-Linking Ability of Styrene Butyl Acrylate Copolymer Lattices Functional ized with Glycidyl Methacrylate// Prog.organ.coating-1992-Vol 20-lss 1-pp.73-80.

88. Moberg C., Rakos L. Functionalization of Polystyrene Particles with Monochiral Epoxy Groups Potent Precursors for Chiral Polyfunctional Polymers //React.Pol.-1992-Vol 16-lss 2-pp.171-179.

89. Walenius M., Kulin L.I., Flodin P. Synthesis and Characterization of Copolymers Trimethylolpropane Trimethacrylate and Glycidyl Methacrylate in Toluene ЛИ React.Pol.-1992- Vol 17-155 3-pp.309-323.

90. Tuncel A., Kahraman R., Piskin E. Monosize Polystyrene Latices Carrying

91. Functional-Groups on Their Surfaces// J.Appl.Polym.Sci.-1994- Vol 51- Iss 8- pp. 1485-1498.

92. Horak D., Straka J., Schneider B., Lednicky F.Pilar J. Poly(Ethylene Dimethacrylate) Particles with Poly(Glycidyl Methacrylate) Functionalities //Polymer-1994- Vol 35- Iss 6-pp.1195-1202.

93. Kling J.A., Ploehn H.J. Synthesis and Characterization of Epoxy-Functional Polystyrene Particles//J. OF POLYMER SCIENCE PART A-POLYMER CHEMISTRY-1995-Vol.33-lss.7-pp.1107-1118

94. Hoshino M., Arishima K. Survey of Preparation Techniques of Monodispersed Microspheres of Glycidyl Methacrylate and Its Derivatives//J.OF APPLIED POLYMER SCIENCE-1995-Vol.57-lss.8-pp. 921-930.

95. Sarobe J., Forcada J.Synthesis of Core-Shell Type Polystyrene Monodisperse Particles with Chloromethyl Groups//COLLOID AND POLYMER SCIENCE-1996-Vol.274-lss.1-pp.8-13

96. Gauthier M., Frank P.C.Submicron Pellicular Resins as Polymer Supports// REACTIVE&FUNCTIONAL POLYMERS-1996-Vol.31-lss.1-pp.67-79

97. Miraballesmartinez I., Martinrodriguez A., Hidalgoalvarez R.Chloroactivated Latex-Particles for Covalent Coupling of Antibodies Application to lmmunoassays//J.OF BIOMATERIALS SCIENCE-POLYMER EDITION-1997-Vol.8-lss.10-pp.765-777

98. Saito R., Ni X., Ichimura A., Ishizu K. Synthesis of core-shell type microsphere with reactiveseed microspheres//J.of Applied Polymer Science-1999-Vol.69-lss.2-pp.211-216

99. Petro M., Svec F., Frechet J.M-J. Monodisperse Hydrolyzed Poly(Glycidyl Methacrylate-Co-Ethylene Dimethacrylate) Beads as a Stationary-Phase for Normal-Phase HPLC//ANALYTICAL CHEMISTRY- 1997-Vol.69-lss.160-pp.3131-3139

100. Patel R.P.Price S. The preparation of latex particles for covalent bounding of biochemicals//Biopolymers.-1967.-v.5.-p.583-587.

101. Cuatrecasas P. Using of hydroxyl-containing latex particles for IgG bounding //J.Biol. Chem. -1970.-v.245.-p.3059-3063.108109110,111112113114115116117118119120121

102. Bethell G.S.,Ayers J.S., Hancock W.S.,Hearn M.T.W. Using of imydazole derivatives for covalent coupling of antibody onto polymer particles surface // J.Biol.Chem.-1979.-v.254.-p.2572-2574.

103. Nilsson K.,Mosbach K. Hydroxyl-containing latices: using for proteins immobilization // Eur.J.Biochem.-1980.-v.12.- p.397-402.

104. Nilsson K.,Mosbach K. Preparation of hydroxyl-containing polymer particles and their using for enzyme fixation //Biochem. Biophis.Res.Commun.-1981.-v.102-p.449-457.

105. Kawaguchi H., Amagasa H., Hagiya Т., Kimura N., Ohtsuka Y. Interaction between proteins and latex particles having different surface structures // Colloids and Surfaces.-1985.-v.l3.-p.295-311.

106. Pichot C. Latex structures et fimctionnalises // Bulletin de la Societe Chimique de France.-1987.-N 4.-p. 725-733.

107. Kitano H.,Yan C.,Maeda Y.,lse N. Covalent bounding of bioligands onto polymer latices: a direct and undirect methods //Biopolymers.-1989.-v.28.- p.693-699.

108. Kasuya Y., Fujimoto K., Miyamoto M., Jujit T.,Otala A. Preparation of Peptide-Carrying Microspheres with bioactivity on Platelets // j. Biomater Sci-Polym. Ed.-1993. -v. 4. -N.4. -p.369-380.

109. Fair B.D., Jamieson A.M. Studies protein adsorption on polystyrene latex surfaces //j.Colloid and Interfaces Sci.-1980.-v.77.N.2.-p.525-534.

110. Камышный А.Л. Адсорбция глобулярных белков на твердых носителях: некоторые физико-химические характеристики// ж. физ. химии.-1981.т.55.-Вып.З.с.562-580.

111. Bagchi P. Birnbaum S.M. Effect of рН on the adsorption of immunoglobulin G on anionic polyvinyltoluene model latex particles //j.Colloid and Interface Sci.-1981.-v.83.-N.2.-p.460-478.

112. De Baillcu N., Voegel J.C., Sohmitt A. Adsorption of human albumin and fibrinogen onto heparin-like materials.1. Adsorption isoterms // Colloids and Surfaces.-1985.-v.l6.-p.271-288.

113. Shirahama H.,Suzava T. Adsorption of bovine serum albumin onto styrene-2-hydroxyethyl methacrylate copolymer latex //J.Coll.and Interface. Sci.-1985 -V.104.-N 2.-p.416-421.

114. Norde W., Mac Ritchie F., Nowicka G., Lyklema J. Protein adsorption at solid-liquid interfacts: reversibility and conformation aspects // j. Colloid and Interfaces Sci.-1986.-v.N.2.N.2.-p.447-456.

115. Norde W. Adsorption of proteins from solution at the solidiquid interface // Advan.135136137138139140141142143144145146147148149

116. Colloid and Interface Sci.-1986.-v.25.-N.4.-p.267-340.

117. Bale M.D., Danielson S.J.,Goppert R.E., Sutton R.C. Influence of copolymer composition on protein adsorption and structure rearragements at the polymer surface // Coll.lnterface Sci. 1989.-v.132.-N 1 .-p. 176-187.

118. Грицкова И.А., Нусс П.В., Дорохова E.A., Гусев C.A., Крашенинникова И.Г., Аль-Хаварин Д.И. Адсорбция белков на полистирольных микросферах и постановка реакции латекс-агглютинации.// Коллоидный журн.,1994.-т.56.-N.4.-C.491-495.

119. Грицкова И.А., Крашенинникова И.Г., Дорохова Е.А., Нусс П.В., Гусев С.А., Аль-Хаварин Д.И. Адсорбция белков на поверхности частиц полистиролметакрилатных суспензий. //Коллоидный >KypH.,1994.-T.56.-N.4.-с.487-490.

120. Басырева Л.Ю. Создание диагностических тест-систем на основе полимерных суспензий и факторы, определяющие их чувствительность и специфичность: Дис.канд. хим. наук. -М.,1994.

121. Препаративная органическая химия под ред. Вульфсона Н.С. М. Химическая литература, 1959.

122. Вейганд-Хильгетаг. Методы эксперимента в органической химии. М. Химия, 1968.

123. Kawaguchi H.,Hochino H.,Ohtsuka Y. The reactional polymer latexes preparation // J.Appl.Polym.Sci.-1981 .-v.26.-p.2015-2019. Петров P.В. Иммунология.- M: Медицина.- 1983.

124. Martin F.J., Kung T.V. Enhanced agglutination method and kit. US Pat 4,636,479 1987.

125. Bamgi L.B.Immunological agglutination assay with dyed or colored latex and kits: US Pat.4 419 543, 1984.

126. Johansen L.,Nustad K.,Orstavik T.B.,Ugelstad J.,Berge A.,EllengsenT. The new latex agglutination test kit for immunological assay//J.Immunol.Methods.-1983.-N 59.-p.255 -264.

127. Ganju L. et. al. A rapid latex agglutination test for detection of antibodies in tuberculosis and hansen's disease // J. Immunoassay -1991.-v.12.-iss.4-p.579-596.

128. Mongkolsirichaikul D. et. al. Development of a latex agglutination inhibition reaction test for amphetamines in urine // j.lmmonol. Methods. -1993.-v.l57.-N 1-2.-p.l89-196.

129. Brikley J., Haugland R., Singler V. Fluorescent microparticles with controllable stokes shifts: US Pat 7,882,299,1992.

130. Takeuchi K. Scintillation proximity assay // Anal. Letters.- 1992- v.23.- p. 13421345.

131. Horak D.Uniform Polymer Beads of Micrometer Size//ACTA POLYMERICA-1996-Vol.47-lss. 1 -pp.20-28

132. Иммунология. Практикум.-К.: Высшая школа.-1989.-с.302.164.165.166.167,168.169.170,171,172,173,174175176177178

133. Grundy M.A., Bolek W.E., Coakly W.T., Benes E. Rapid agglutination In ultrasonicstanding wave//j. of Immunol. Methods.-1993.-v.l65.-p.47-57.

134. Particle agglutination immunoassay apparatus: US Pat 4,913,883 MKN С 08 F 2

135. Imai К., Tokinaga D., YoukogawaK.-ony6n.-3.09.1990.

136. Christensen H., Thyssen H.H., Schebye O., Berget A. Three highly sensitive

137. Bedside" serum and urine tests for pregnancy compared //Clin. Chem.-1990.v.36.-p.1686-1688.

138. Tsuda S., Kamayak-lwaki M., Hanada K.p Kouda Y., Hikata M. A novel detection and identification technique for plant viruses: rapid immunofilter paper assay //Plant Disease.-1992-v.76.-p.466-469.

139. Gibbs J., Brown C., Root D. ELIZA optimization //J. Immunol. Methods.-1994.-v.175.-p.97-103.

140. Drugs of abuse by immunoassay //Clin. Lab. Prod.-1992.-v.21 .-N.3.-p.8-9. Analytical test devices for assay for drugs of non-protein antigens using immunochromatographic techniques. US Pat 5,238,652 MKN G 01 N33/54 / Sun M., Pfeifer F.R.-опубл. 1993.

141. Yamada T., Muzamatsu N.,Kondo T. Phagocytosis of monosac coharide-Binding latex particles by buinea-Pig polimor-phonuclear leucocytes // j. Biomater Su-Polym. Ed.-l993.-v.4-N.4.-p.347-355.

142. Станишевский Я.М., Грицкова И.А., Измайлова В.Я., Быков В.А., Кравцов Э.Г.,

143. Прокопов H.И., Харлов А.Е., Лобанов А.Н. Полимерные суспензии для диагностической тест-системы на фибронектин // Биотехнология теоретический и научно-практический журнал.-Москва-2001 Вып.З.-С.71-84.

144. Лобанов А.Н., Прокопов Н.И., Грицкова И.А., Селищева Е.Д., Станишевский Я.М.-Синтез полимерных суспензий для иммунохимических исследований // Тезисы научно-технической конференции "Молодые ученые и аспиранты МГТУ".- Мурманск-2001. -С.323-324.

145. A.M. Королюк, В.Б. Сбойчаков Медицинская микробиология. Уч. пособие С-Пб 1999г.

146. Чирикова О.В. Дис. канд. хим. Наук. М.: МИТХТ им. М.В. Ломоносова, 1994.

147. Герасимов В.К., Чалых А.Е., Алиев А.Д., Травкина Е.С., Грицкова И.А. Высокомолекулярные соед. А.2001.Т43.№11.С.1887

148. Елисеева В.И. Полимерные суспензии М.: Химия, 1980, 295с.

149. Иванчев С.С. Полифункциональные компоненты при радикальной полимеризации и получении полимерных композиций. Успех и химии, 1991, т.60, вып. 7. с. 1368-1390.

150. М. Джейкок, Дж. Парфит Химия поверхностей раздела фаз. М., «Мир», 1984, 266с.

151. Грицкова И.А., Чирикова О.В., Жданов A.A. Необычный эффект стабилизации полимерных суспензий в присутствии карбоксил содержащихполисилоксанов. ДАН РАН 1994, т.344, с.57-61.

152. Каминский В.А., Грицкова И.А. Межфазные явления и формирование частиц эмульсионной полимеризации. Ж. Ф. X. РАН, 1996, 70, 8 1516-1520.

153. Гжиева-Никсиньска И. Синтез полимерных суспензий для иммунохимических исследовании. Автореф. . канд. Хим. Наук. Варшава, 1982.

154. Януль Ю.Б. Синтез функциональных полимерных суспензий в присутствии олигомерных пироксиэфиров. Дисс.канд. хим. наук. МИТХТ, М., 1992

155. Dorota Wilson-Polit Autoreferat Bezemulgatowa polimeri3acia styrene. Warsawa, 2001.

156. Апь-Хаварин Джибриль Ибрагим Синтез функциональных полимерных суспензий для иммунологических исследований. Автореф. канд. хим. наук. МИТХТ, М„ 19940

157. Крашенинникова И.Г., Апь-Хаварин Д.И., Грицкова И.А., Дорохова Е.К. Устойчивые полистиролметакриловые суспензии с узким распределением по размерам. Коллоиды, 1995 т.57 №2 182-185

158. Воробьева Н.И. Синтез полистирольных суспензий с узким распределением частиц по размерам. Автореферат Дис. канд.химнаук М., МИТХТ, 1982

159. Басырева Л.Ю. Создание диагностических тест-систем на основе полимерных суспензий и факторы, определяющие их чувствительность и специфичность. Автореф. Дис. Канд.хим.наук М., МИТХТ, 1994

160. Грицкова И.А. Эмульсионная полимеризация малорастворимых в воде мономеров Автореф. Дис. Док. Хим. Н. М. МИТХТ, 1978.

161. В.К. Герасимов, А.Е. Чалых, А.Д. Алиев, Е.С. Транкина, И.А. Грицкова. Фазовое равновесие и морфология системы полистирол-полидиметилсилоксан-стирол. Высокомолек.соед. А, т.43, №11 с 1941-1949.

162. В.Г. Ивков, Г.Н. Берестовский. Динамическая структура липидного бислоя. М., Наука, 1981, с.80-84.

163. Yamaguchi, S. Watanabe, S. Nakahama. Emulsion polymerization of styrene using phospholipids as emulsifier. Immobilization of phospholipids on the latex surface. Macromol.Chem. №196, 1989, p.1195-1205.

164. Черкасов В.Р. Полимерные суспензии, модифицированные серосодержащими аминокислотами, для иммунохимических исследований. Дис. Канд.хим.наук М., 1992

165. Bang L.B. Uniform latex particles.-lndianapolis:Seradyn Inc.,1984.-68 p.

166. Mold C, Gewürz H. Inhibitory effect of C-reactive protein on alternative С pathway activation by liposomes and Streptococcus pneumoniae. // J Immunol. 1981 Nov; 127(5): 2089-92.

167. Volanakis JE, Narkates AJ. Interaction of C-reactive protein with artificial phosphatidylcholine bilayers and complement. // J Immunol. 1981 May; 126(5): 1820-5.