Экспрессия бета-интерферона человека в молоке трансгенных животных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Ходарович, Юрий Михайлович

• Ходарович, Юрий Михайлович
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ходарович, Юрий Михайлович

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. КРАТКИЙ ОБЗОР СОВРЕМЕННЫХ СИСТЕМ ПРОИЗВОДСТВА РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ, ИХ ПРЕИМУЩЕСТВ И НЕДОСТАТКОВ

2. СРАВНЕНИЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ТКАНЕЙ ТРАНСГЕННОГО ЖИВОТНОГО ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ

3. ПРОЗВОДСТВО РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ ИЗ МОЛОКА ТРАНСГЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

3.1 Структура типичного эукариотического гена

3.2 Районы прикрепления ДНК к ядерному матриксу (S/MAR элементы)

3.3 Энхансеры

3.4 Регуляторные элементы генов белков молока

3.4.1 Промоторные области генов, экспрессирующихся в молочной железе во время лактации

3.4.2 Сайты гиперчувствительности к нуклеазам

3.4.3 Последовательность milk box

3.4.4 Последовательность KRMTTCYTRGAAYYR 34 3.4.5. Связавание ядерных факторов с промоторными областями генов белков молока

3.5 Экспрессия экзогенов в молочной железе трансгенных животных

3.5.1 а]-антитрипсин человека

3.5.2 Фактор свертываемости крови IX человека

3.5.3 Урокиназа человека

3.5.4 Тканевой плазминогенный активатор человека

3.5.5 Сывороточный альбумин человека

3.5.6 Прохимозин крупного рогатого скота

3.5.7 Белок С человека

3.5.8 Фибриноген человека

3.6 Стабильность рекомбинантных белков в молоке трансгенных животных

3.7 Способы промышленной очистки рекомбинантных белков из молока

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1 ИСПОЛЬЗОВАННОЕ ОБОРУДОВАНИЕ

2 ПЛАЗМИДЫ И ШТАММЫ

3 ПРАЙМЕРЫ

4 СОЗДАНИЕ РЕКОМБИНАНТНЫХ ДНК

5 ПРИГОТОВЛЕНИЕ МИКРОИНСТРУМЕНТОВ ДЛЯ МИКРОМАНИПУЛЯЦИЙ С ЗИГОТАМИ

5.1 Приготовление микроинъекционных пипеток

5.2 Приготовление удерживающих пипеток

5.3 Приготовление пипеток для трансплантации и переноса зигот

6 ПОЛУЧЕНИЕ ТРАНСГЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

6.1 Получение трансгенных мышей

6.1.1 Анестезия мышей

6.1.2 Вазэктомия самцов мышей.

6.1.3 Подготовка реципиентных ложнобеременных самок для трансплантации зигот

6.1.4 Получение беременных самок

6.1.5 Проведение суперовуляции

6.1.6 Получение зигот от донорных мышей

6.1.7 Проведение микроинъекций

6.1.8 Трансплантация зигот

6.2 Получение трансгенных кроликов

6.2.1 Проведение гормональной подготовки кроликов - доноров зигот

6.2.2 Извлечение зигот у кроликов

6.2.3 Проведение микроинъекций

6.2.4 Трансплантация микроинъецированных эмбрионов

7 АНАЛИЗ ТРАНСГЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

7.1 Выделение высокомолекулярной геномной ДНК солевым методом

7.2 Проведение ПЦР

7.3 Доение животных

7.4 Обезжиривание молока

7.5 Электрофоретическое разделение белков молока

7.6 Подготовка образца для масс-спектроскопического анализа

7.7 Обессоливание на микроколонке и снятие масс-спектра

7.8 Определение интерфероновой активности 67 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

1 ПОЛУЧЕНИЕ И АНАЛИЗ ТРАНСГЕННЫХ КРОЛИКОВ,

ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ В МОЛОКЕ БЕТА-ИНТЕРФЕРОН ЧЕЛОВЕКА

1.1 Создание гибридного гена ВЬС-ЫПЧЬ

1.2 Получение трансгенных кроликов, содержащих гибридный ген ВЬО-ЫРМ)

1.3 Анализ наследования и тканеспецифичности экспрессии гибридного гена ВЬО-ЫРКЬ

1.4 Определение биологической активности ИФН-бета в молоке трансгенных крольчих поколений Н и VI

1.5 Изучение изменений в белковом составе молока трансгенной крольчихи

2 ПОЛУЧЕНИЕ И АНАЛИЗ ТРАНСГЕННЫХ МЫШЕЙ, СОДЕРЖАЩИХ КОИНТЕГРИРОВАННЫЕ ГЕНЫ ВГО-ШРШ И БАЯ-ЕШ

2.1 Создание гибридной конструкции, содержащей генетические элементы, повышающие экспрессию генов

2.2 Получение мышей, трансгенных по бета-интерферону и конструкции ЗАПЕЛ

2.3 Анализ наследования трансгенов в поколении И

2.4 Анализ ориентации трансгенов в интегрированном состоянии

2.5 Анализ белкового состава молока мышей

2.6 Изучение тканеспецифичности экспрессии бета-интерферона у трансгенных мышей

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экспрессия бета-интерферона человека в молоке трансгенных животных»

Лекарственные препараты нового поколения, создаваемые на основе рекомбинантных белков, в частности, гормонов и цитокинов, находят всё большее применение в медицинской практике. Один из наиболее интересных белков семейства цитокинов - бета-интерферон (ИФН-бета), является центральным регулятором неспецифического иммунитета. Он обладает сильным антивирусным и антипролиферативным действием и используется в комплексной терапии различных онкологических и аутоиммунных заболеваний, тяжелых вирусных и бактериальных инфекций, сопровождающихся иммунодефицитными состояниями. ИФН-бета является наиболее эффективным из известных препаратов для лечения рассеянного склероза [1].

В настоящее время производятся препараты как гликозилированного ИФН-бета (препараты Avonex, Rebif), так и негликозилированного ИФН-бета (препараты Betaseron, Betaferon). Гликозилированный ИФН-бета (ИФН-бета-1а) получают путём экспрессии в культуре клеток яичника китайского хомячка, а негликозилированный ИФН-бета (ИФН-бета-16) - путём экспрессии в культуре бактериальных клеток (.Escherichia coli). ИФН-бета-16 имеет примерно в 10 раз более низкую удельную активность, чем ИФН-бета-1а, возможно, вследствие олигомеризации белка [2], что вынуждает увеличивать дозировку препарата и частоту его введения [3].

Одним из наиболее эффективных способов получения белков со сложными посттрансляционными модификациями, свойственными клеткам высших эукариот, является создание трансгенных животных, продуцирующих нужные белки в молоке. К настоящему времени созданы трансгенные животные, содержащие в молоке такие рекомбинантные белки как aj -антитрипсин [15], тканевой активатор плазминогена [14], гамма-интерферон человека [4], химозин [19], гранул оцит/макрофаг колониестимулирующий фактор [164] и другие. Некоторые линии трансгенных животных используются для производства рекомбинантных белков, так, например, в 2006 г. Европейской коммисией было дано разрешение фирме GTC Biotherapeutics на производство препарата АТгуп®, созданного на основе синтезирумого в молочной железе коз рекомбинантного антитромбина человека (www.gtcbio.com/pressreleases/pr080206.html), завершается разработка препарата rhClINH (Pharming Group NV) на основе С1-ингибитора, получаемого из молока трансгенных кроликов (www.pharming.com/index.php?act=prod&pg=l). Однако далеко не все попытки экспрессии 6 белков в молоке трансгенных животных оказались успешными. В первую очередь неудачи связаны с недостатком знаний о механизмах регуляции экспрессии гибридных генов. В настоящий момент не существует универсального вектора или подхода для экспрессии рекомбинантных белков в молоке трансгенных животных, а оптимальная стратегия по-прежнему заключается в создании нескольких гибридных генов и тестировании эффективности работы этих генов на трансгенных мышах. Изучение особенностей экспрессии рекомбинантных белков у трансгенных животных не только расширяет наши познания о молекулярных механизмах функционирования клеток животных, но и помогает создавать более эффективные системы производства рекомбинантных белков.

Целью работы было создание трансгенных животных, продуцирующих бета-интерферон человека в молоке, и изучение закономерностей экспрессии введённых генов.

Обзор литературы

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Ходарович, Юрий Михайлович

Выводы

1. Созданы трансгенные кролики, содержащие гибридный ген ВЬО-ЫЛЧЬ. Установлено, что у полученных трансгенных кроликов наблюдается низкая эффективность передачи трансгена первому поколению, и существенно более высокая эффективность наследования трансгена во втором поколении. Этот эффект не наблюдается у мышей, содержащих ген ВЬО-ЫРМЬ.

2. Показано, что молоко трансгенных крольчих содержит биологически активный интерферон. Уровень экспрессии бета-интерферона сохраняется у следующего поколения трансгенных кроликов. Вставка кодирующих последовательностей гена ИФН-бета в первый экзон гена ВЬО приводит к низкому уровню экспрессии гибридного гена. Белковый состав молока трансгенных крольчих отличается от молока нетрансгенных крольчих, предположительно, из-за неабсолютной видоспецифичности бета-интерферона человека.

3. Созданы трансгенные мыши, содержащие гибридный ген ВЬО-ЫРЫЬ и элемент 8А11-епЬ. Показано, что коинтеграция инъецируемых фрагментов ДНК происходит с высокой эффективностью, при этом могут реализовываться два варианта объединения коинъецированных фрагментов: а) по комплементарным липким концам б) по некомплементарным концам

Коинтеграция гена ВЬО-МРЫЬ и элемента БАК-епЬ не привела к повышению уровня экспрессии бета-интерферона.

4. Показано, что ген ВЬО-ЫР№)/8АК-еп11 экспрессируется у трансгенных мышей нетканеспецифично, предположительно, из-за влияния регуляторного элемента БАК-епЬ.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ходарович, Юрий Михайлович, 2009 год

1. Petri Т., and Weber-Diehl F.// J. (1995) Interferon beta-lb for the treatment of multiple sclerosis. Biotechnol.,43, 74-75

2. Lagutin OV, Dobrovolsky VN, Vinogradova TV, Kyndiakov BN, Khodarovich YM, Jenkins N, James D, Markham N, Larionov OA. (1999) Efficient human IFN-gamma expression in the mammary gland of transgenic mice. J Interferon Cytokine Res., 19(2), 137-44

3. Massoud M, Bischoff R, Dalemans W, Pointu H, Attal J, Schultz H, et al., (1991) Expression of active recombinant human alpha 1-antitrypsin in transgenic rabbits. J Biotech., 18, 193-204.

4. Limonta J, Pedraza A, Rodriguez A, Freyre FM, Barral AM, CastroFO, et al., (1995) Production of active anti-CD6 mouse/humanchimeric antibodies in the milk of transgenic mice. Immunotech., 1, 107-113.

5. Kerr DE, Liang F, Bondioli KR, Zhao H, Kreibich G, Wall RJ and Sun T (1998) The bladder as a bioreactor: urothelium production and secretion of growth hormone into urine. Nature Biotech., 1675-79

6. Nagaraju J, Kanda T, Yukuhiro K, Chavancy G, Tamura T and Couble P (1996) Attempt at transgenesis of the silkwormCSom^yx mori L.) by egg-injection of foreign DNA. Appl Entomol Zool., 31, 458-596.

7. Yamao M, Katayama N, Nakazawa H, Yamakaws M, Hayashi Y, Hara S, et al., (1999) Gene targeting in the silkworm by use of a baculovirus. Genes Dev., 13, 511-516.

8. Tamura T, Thibert C, Royer C, Kanda T, Abraham E, Kamba M, et al., (1999) Germline transformation of the silkworm Bombyx mori L. using a piggyBac transposon-derived vector. Nature Biotech., 18, 81-84.

9. Archibald, A.L., McClenaghan, M., Hornsey, V., Simons, J.P. and Clark, A.J. (1990) High-level expression of biologically active human a i-antitrypsin in the milk of transgenic mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 5278-5182.

10. Sharma A, Martin MJ, Okabe JF, Truglio RA, Dhanjal NK, Logan JS and Kumar R (1994) An isologous porcine promoter permithigh level expression of human hemoglobin in transgenic swine Bio/Technol., 12, 55-59.

11. Meade, H., Gates, L., Lacy, E. and Lonberg, N. (1990) Bovine alphasi-casein gene sequences direct high level expression of active human urokinase in mouse milk. Bio/Technology, 8, 443-446.

12. Wright, G., Carver, A., Cottom, D., Reeves, D., Scott, A., Simons, P., Wilmut, I., Garner, I. and Colman, A. (1991) High-level expression of active human alpha-1-antitrypsin in the milk of transgenic sheep. Bio/Technology, 9, 830-834.

13. Shani, M., Barash, I., Nathen, M., Ricca, G., Searfoss, G.H., Dekel, I., Faerman, A., Givol, D. & Hurwitz, D.R. (1992) Expression human serum albumin in the milk of transgenic mice. Transgenic Res., 1, 195-208.

14. Reddy, V.B., Vitale, J.A., Wei, C., Monstoya-Zavala, M., Stice, S.L., Balise, J. and Robl, J.M. (1991) Expression of human growth hormone in the milk of transgenic mice, Anim. Biotechnol., 2,15-29.

15. Wei, Y., Yarns,S., Greenberg, N.M., Whitsett, J. and Rosen, J.M. (1995) Production of human surfactant protein С in milk of transgenic mice. Transgenic Res., 4, 232-240.

16. Эрнст, Л.К., Гольдман, М.Л., Зиновьева, H.A., Бакшеев, Е.Д., Гоголевский, П.А., Кадулин, С.Г., Брем, Г. (1985) Получение овец, трансгенных по конструкции asi- казеин/химозин, Докл.Акад.Наук, 345, 555-558.

17. Pruncard, D., Cottingham, I., Garner, I., Bruce, S., Dalrymple, M., Lasser, G., Bishop, P. and Forster, D. (1996) High-level expression of recombinant human fibrinogen in the milk of transgenic mice, Nature Biotechnology, 14, 867-871.

18. Gordon, J.W., Ruddle, R.H. (1982) Germ line transmission in transgenic mice, in Embrionic Development, Part B: Cellular Aspects, (Burger, M.B., Weber, R., Eds.), 112-124, New York: Liss.

19. Jaenisch, R. and Mintz, B. (1974) Simian virus 40 DNA sequences in DNA of healthy adult mice developed from preimplantation blastocists injected from viral DNA, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 71,1250-1254.

20. Jaenisch, R., Fan, H. and Croker, B. (1975) Infection of preimplantation mouse embrios with leukemia virus: tissue distribution of viral DNA and RNA and leukemogenesis in the adult animal, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 72,4008-4012.

21. Jaenisch, R. (1976), Germ line integration and Mendelian transmission of the exogeneus Moloney leukemia virus, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 73, 1260.

22. Lin, T.P. (1966), Microinjection of mouse eggs, Science, 151, 333-337.

23. Gordon, J.W., Scangos, G.A., Plotkin, D,J., Barbosa, A. and Ruddle, F.H. (1980), Genetic transformation of mouse embryos by microinjection of purified DNA, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 7380-7384.

24. Brinster, R.L., Chen, H.Y., Trumbauer, M.E., Yagle, M.K. and Palmiter, R.D. (1985) Factors affecting the efficiency of introducing foreign DNA into mice by microijecting eggs, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 4438-4442.

25. Hogan, B., Costantini, F., Lacy, E. Manipulating the Mouse Embryo. A Laboratory Manual., (1986) New York, Cold Spring Harbor Laboratory.

26. Risha, J and Lo, C.W. (1989) Introduction of human DNA into mouse eggs by injection of dissected chromosome fragments, Science, 245, 175-177.

27. Palmiter, R.D. and Brinster, R.L. (1986) Germ-line transformation of mice, Ann. Rev. Genet., 465-499.

28. McKnight, R.A., Shamay, A., Sankaran, L., Wall, R.J. and Hennighausen, L. (1992) Matrix-attachment region can impart position-independent regulation of a tissue-specific gene in transgenic mice, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89, 69436947.

29. Pieter, F.R., de-Wit, I.C.M., Pronk, A.C.J., Kooiman, P.M., Strijker, R. and Krimpenford, P. J. A. (1992) Efficient generation of functional transgen by homologous recombination in murine zygotes, Nucleic Asid Res., 20, 1259-1264.

30. Gu, H., Marth, J.D., Orban, P.C., Mossmann, H. and Rajewsky, K. (1994) Deletion of DNA polymerase (beta) gene segment in T cells using cell type-specific gene targeting, Science, 265, 103-106.

31. Rothenberg, B.E. and Voland, J.R. (1996) Beta(2) Knockout mice develop parenchymal iron overload: A putative role for class I genes of the major histocompatibility complex in iron metabolism, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93, 1529-1534.

32. Huang, L.S., Voyiaziakis, E., Chen, H.L., Rubin, E.M. and Gordon, J.W. (1996) A novel functional role for apolipoprotein B in male infertility in heterozygous apolipoprotein B knockout mice, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93, 10903-10907

33. Rottmann, O.J., Stratova, C., Hornstein, M. and Hughes, J. (1985) Tissue specific expression of hepatitis B surface antigen in mice followong liposome mediated gene transfer into blastocists, Zentralbl. Vet. Med., A32, 676-682.

34. Lavitrano, M., Camaioni, A., Fazio, V.M., Dolci, S., Farace, M.G. and Spadafora, C. (1989), Sperm cells as vectors for introducing foreign DNA into eggs: genetic transformation of mice, Cell, 57, 717-723.

35. Al-Shawi, R., Kinnaird, J., Burke, J. and Bishop, J.O. (1990) Expression of a foreign gene in a line of transgenic mice is modulated by a chromosomal position effect, Molecular and Cellular Biology, 10, 1192-1198.

36. Brem, G. (1993) Tansgenic animals. Volume 2 of Biotrchnology, VCH, Weinheim, Federal Republic of Germany, 746-832.

37. Clark, A.J., Harold, G. & Yull, F.E. (1997) Mammalian cDNA and prokaryotic reporter sequences silence adjacent transgenes in transgenic mice., Nucleic Acids Res., 25, 1009-1014.

38. Dynan, W.S. (1986) Promoters for housekeeping genes, Trends in Genet., 2, 196197.

39. Mirkovitch J., Mirault M.E., Laemmli U.K., 1984. Organization of the higherorder chromatin loop: specific DNA attachment sites on nuclear scaffold. Cell, 39, 223-232

40. Jenuwein Т., Forrester W.C., Fernandez-Herrero L.A., Laible G., Dull M., Grosschedl R., 1997. Extension of chromatin accessibility by nuclear matrix attachment regions. Nature, 385(6613), 269-72

41. Чернов И.П., Акопов С.Б., Николаев Л.Г., 2004. Структура и функции участков прикрепления ДНК к ядерному матриксу (S/MARs). Биоорганическая химия, 30(1), 3-14

42. Heng Н. Н. Q., Goetze S., Ye С. J., Liu G., Stevens J. В., Bremer S. W„ Wykes S. M., Bode J. and Krawetz S. A., 2004. Chromatin loops are selectively anchored using scaffold/matrix attachment regions. J. Cell Sci., 117, 999-1008

43. Singh G.B., Kramer J.A., Krawetz S.A., 1997. Mathematical model to predict regions of chromatin attachment to the nuclear matrix. Nucleic Acids Res., 25(7), 1419-25

44. Dietz A., Kay V., Schlake T., Landsmann J. and Bode J., 1994. A plant scaffold attached region detected close to a T-DNA integration site is active in mammalian cells. Nucleic Acids Res., 22(14), 2744-2751

45. Caldovic L., Agalliu D. & Hackett P. B., 1999. Position-independent expression of transgenes in zebrafish. Transgenic Research., 8, 321-334

46. Luderus M.E., de Graaf A., Mattia E., den Blaauwen J.L., Grande M.A., de Jong L., van Driel R., 1992. Binding of matrix attachment regions to lamin Bl. Cell, 70(6), 949-59

47. Luderus M.E., den Blaauwen J.L., de Smit O.J., Compton D.A., van Driel R., 1994. Binding of matrix attachment regions to lamin polymers involves single-stranded regions and the minor groove. Mol Cell Biol. 14(9), 6297-305

48. Sumer H., Saffery R., Wong N., Craig J.M., Choo K.H., 2004. Effects of scaffold/matrix alteration on centromeric function and gene expression. J Biol Chem. 279(36), 37631-9

49. Mielke C., KohwiY., Kohwi-Shigematsu T., Bode J., 1990. Hierarchical binding of DNA fragments derived from scaffold-attached regions: correlation of properties in vitro and function in vivo. Biochem 29, 7475-7485

50. Pemov A., Bavykin S., Hamlin J.L., 1998. Attachment to the nuclear matrix mediates specific alterations in chromatin structure. Proc Natl Acad Sci USA. 95(25), 14757-62

51. McKnight R.A., Shamay A., Sankaran L., Wall R.J., Hennighausen L., 1992. Matrix-attachment regions can impart position-independent regulation of a tissue-specific gene in transgenic mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89, 6943-6947

52. Kalos M., Fournier R.E., 1995. Position-independent transgene expression mediated by boundary elements from the apolipoprotein B chromatin domain. Mol Cell Biol. 15(1), 198-207

53. Burgess-Beusse B., Farrell C., Gaszner M., Litt M., Mutskov V., Recillas-Targa F., Simpson M., West A., Felsenfeld G.,2002. The insulation of genes fromexternal enhancers and silencing chromatin. Proc Natl Acad Sci USA. 99 (4), 16433-16437

54. Allen G.C., Hall G.E. Jr, Childs L.C., Weissinger A.K., Spiker S., Thompson W.F., 1993. Scaffold attachment regions increase reporter gene expression in stably transformed plant cells. Plant Cell, 5, 603-613

55. Allen G.C., Hall G. Jr., Michalowski S., Newman W., Spiker S., Weissinger A.K., Thompson WF., 1996. High-level transgene expression in plant cells: effects of a strong scaffold attachment region from tobacco. Plant Cell. 8(5), 899-913

56. Poljak L., Seum C., Mattioni T., Laemmli U.K., 1994. SARs stimulate but do not confer position independent gene expression. Nucleic Acids Res. 22(21), 4386-94

57. Dijkwel P.A., J.C.Hamlin, 1988. Matrix attachment regions are positioned near replication initiation sites, genes, and an interamplicon junction in the amplified dihydrofolate reductase domain of Chinese hamster ovary cells. Mol.Cel.Biol 8, 5398-5409

58. Takano M., Egawa H., Ikeda J.E., Wakasa K., 1997. The structures of integration sites in transgenic rice. Plant J. 11(3), 353-61

59. Forrester W. C., Fernandez L. A., and Grosschedl R., 1999. Nuclear matrix attachment regions antagonize methylation-dependent repression of long-range enhancer-promoter interactions. Gen Dev. 13, 3003-3014

60. Struhl K., 1998. Histone acetylation and transcriptional regulatory mechanisms. Gen Dev. 12(5), 599-606

61. Norton V.G., Imai B.S., Yau P., Bradbury E.M., 1989. Histone acetylation reduces nucleosome core particle linking number change. Cell. 57(3), 449-57

62. Kries J.P., Buhrmester H., Stratling W.H. 1991. A matrix/scaffold attachment region binding protein: identification, purification, and mode of binding. Cell 64, 123-135

63. Heitmann B., Maurer T., Weitzel J. M.,. Stratling W. H., Kalbitzer H. R. and Brunner E., 2003. Solution structure of the matrix attachment region-binding domain of chicken MeCP2. Eur. J. Biochem. 270, 3263-3270

64. Martens J.H.A., Verlaan M., Kalkhoven E„ Dorsman J.C., Zautema L,A., 2002. Scaffold/matrix attachment region elements interact with a p300-scaffold attachment factor A complex and are bound by acetylated nucleosomes. Mol Cell Biol. 22(8), 2598-2606

65. Liu J., Bramblett D., Zhu Q., Lozano M., Kobayoshi R., Ross S., Dudley J., 1997. The matrix attachment region-binding protein SATB1 participates in negative regulation of tissue-specific gene expression. Mol Cell Biol. 17(9), 5275-5287

66. Dobreva G., Dambacher J., and Grosschedl R., 2003. SUMO modification of a novel MAR-binding protein, SATB2, modulates immunoglobulin p gene expression. Gen Dev. 17, 3048-3061

67. Kas E., Izaurralde E., Laemmli U.K., 1989. Specific inhibition of DNA binding to nuclear scaffolds and histone HI by distamycin. The role of oligo(dA).oligo(dT) tracts. J Mol Biol. 210(3), 587-99

68. Gasser S.M., Laemmli U.K., 1986. Cohabitation of scaffold binding regions with upstream/enhancer elements of three developmentally regulated genes of D. melanogaster. Cell 46, 521-530

69. Blasquez V.C., Xu M., Moses S.C., Garrard W.T., 1989. Immunoglobulin kappa gene expression after stable integration. I. Role of the intronic MAR and enhancer in plasmacytoma cells. J Biol Chem. 264(35), 21183-9

70. Poljak L., Seum C., Mattioni T., Laemmli U.K., 1994. SARs stimulate but do not confer position independent gene expression. Nucleic Acids Res. 22(21), 4386-94

71. Stief A., Winter D.M., Stratling W.H., Sippel A.E., 1989. A nuclear DNA attachment element mediates elevated and position-independent gene activity. Nature. 341, 343-345

72. Kim J.M., Kim J.S., Park D.H., Kang H.S., Yoon J., Baek K., Yoon Y., 2004. Improved recombinant gene expression in CHO cells using matrix attachment regions. J Biotechnol. 107(2), 95-105

73. Gutierrez-Adan A., Pintado B., 2000. Effect of flanking matrix attachment regions on the expression of microinjected transgenes during preimplantation development of mouse embryos. Transgen Res. 9, 81-89

74. Heitmann B., Maurer T., Weitzel J. M.,. Stratling W. H., Kalbitzer H. R. and Brunner E., 2003. Solution structure of the matrix attachment region-binding domain of chicken MeCP2. Eur. J. Biochem. 270, 3263-3270

75. Kong S., Bohl D., Li C., Tuan D., 1997. Transcription of the HS2 enhancer toward a cis-linked gene is independent of the orientation, position, and distance of the enhancer relative to the gene. Mol Cell Biol. 17(7), 3955-65

76. Felsenfeld G., Boyes J., Chung j., Clark D., Studitsky V., 1996. Chromatin structure and gene expression. Proc Natl Acad Sci USA. 93, 9384-9388

77. Ohtsuku S., Levine M., Cai H.N., 1998. Different core promoters possess distinct regulatory activities in the Drosophila embryo. Gen Dev 12, 547

78. Dunaway M., Hwang J. Y., Xiong M. and Yuen H.-L., 1997. The Activity of the scs and scs' insulator elements is not dependent on chromosomal context. Mol Cell Biol. 17(1), 182-189

79. Li Q., Peterson K.R., Fang X., Stamatoyannopoulos G., 2002. Locus control regions. Blood. 100(9), 3077-86

80. Blackwood E.M., Kadonaga J.T., 1998. Going the distance: a current view of enhancer action. Science. 281(5373), 60-3

81. Fiering S., Whitelaw E., Martin D., 2000. To be or not to be active: the stochastic nature of enhancer action. BioEssays. 22, 381-387

82. Walters M.C., Fiering S., Eldemiller J., Magis W., Groudine M., Martin D.I.K., 1995. Enhancers increase the probability but not the level of gene expression. Proc Natl Acad Sci USA. 92, 7125-7129

83. Francastel C., Walters M.C., Groudine M., Martin D.I.K., 1999. A functional enhancer suppresses silencing of a transgene and prevents its localization close to centrometric heterochromatin. Cell 99, 259-269

84. Newlands S., Levitt L.K., Robinson C.S., Karpf A.B., Modgson V.M., 1998. Transcription occurs in pulses in muscle fibers. Gen Dev 12, 2748-2758

85. Arnosti D.N., Kulkarni M.M., 2005. Transcriptional enhancers: Intelligent enhanceosomes or flexible billboards? J Cell Biochem. 94(5), 890-8

86. Kulkarni M.M., Arnosti D.N., 2003. Information display by transcriptional enhancers. Development. 130(26), 6569-75

87. Gunzburg W.H., Salmons B., 1992. Factors controlling the expression of mouse mammary tumour virus. Biochem J. 283 (Pt 3), 625-32

88. Reuss F.U., Coffin J.M., 1995. Stimulation of Mouse Mammary Tumor Virus superantigen expression by an intragenic enhancer. Proc Natl Acad Sci USA. 92(20), 9293-7

89. Henrard D., Ross S.R., 1988. Endogenous mouse mammary tumor virus is expressed in several organs in addition to the lactating mammary gland. J Virol. 62(8), 3046-9

90. Maeda Т., Maeda M., Stewart A.F., 2002. TEF-1 transcription factors regulate activity of the mouse mammary tumor virus LTR. Biochem Biophys Res Commun. 296(5), 1279-85

91. Stewart T.A., Hollingshead P.G., Pitts S.L., 1988. Multiple regulatory domains in the mouse mammary tumor virus long terminal repeat revealed by analysis of fusion genes in transgenic mice. Mol Cell Biol; 8,473-479

92. Мок E., Golovkina T.V., Ross S.R., 1992. A Mouse Mammary Tumor Virus mammary gland enhancer confers tissue-specific but not lactation-dependent expression in transgenic mice. J. Virol. 66, 7529-7532

93. Yanagawa S.I., Tanaka H., Ishimoto A., 1991. Identification of a novel mammary cell line-specific enhancer element in the long terminal repeat of Mouse Mammary Tumor Virus, which interacts with its hormone-responsive element. J.Virol: 65,526-531

94. Mellentin-Michelotti J., John S„ Pennie W.D., Williams Т., Hager G.L., 1994. The 5' enhancer of the mouse mammary tumor virus long terminal repeat contains a functional AP-2 element. J. Biol Chem 269, 31983-31990

95. Lefebvre P., Berard D.S., Cordingley M.G., Hager G.L., 1991. Two regions of the Mouse Mammary Tumor Virus long terminal repeat regulate the activity of its promoter in mammary cell lines. Mol Cell Biol., 11, 2529-2537

96. Grimm S. L. and Nordeen S. K., 1999. A composite enhancer element directing tissue-specific expression of Mouse Mammary Tumor Virus requires both ubiquitous and tissue-restricted factors. J Bio Chem. 274(18), 12790-12796

97. Городецкий, С.И., Сулимова, Т.Е., Иванов, В.Н., Баев, А.А. (1984) Гены казеинов: пример возможного примения в биотехнологии. Тезисы докладов

98. Всесоюзной конференции "Новые направления в билтехнологии", Пущино, 32-33.

99. Clark, A.J., Simons, P., Wilmut, I. and Lathe, R. (1987) Pharmaceutical from transgenic livestock, Tibtech, 5, 20-24.

100. Stewart, T.A., Pattengale, P.K. and Leder, P. (1984), Spontaneous adenocarcenomas in transgenic mice that carry and express MTV/myc fusion genes, Cell, 38, 627-637.

101. Leder, A., Pattengale, P.K., Kuo, A., Stewart, T.A. and Leder, P. (1986) Consequences of widespread deregulation of the c-myc gene in transgenic mice: multiple neoplasms and normal development, Cell, 45, 485-495.

102. Yom, H.C., Heideman, J.K., Bremel, R.D. and First, N.L. (1989) Production of transgenic mice for analysis of mammary specific gene expression. J. Cell. Biochem. Suppl., 13b, 176 (conference abstract).

103. Bleck, G.T., Heideman, J.K., Cullen, D., First, N.L. and Bremel, R.D. (1989) Generation of transgenic mice containing a ligninase gene under control of mouse mammary tumor virus promoter. J. Anim. Sci., 67, Suppl. 1,319 (conference abstract).

104. Yom, H.C., Kessler, M.A. and Bremel, R.D. (1989) Cloning of MMTV LTR-bovine alpha-Si casein gene for the study of mammary-specific gene expression in transgenic mice and cell culture. J. Anim. Sci., 67, Suppl. 1, 319 (conference abstract).

105. Yom, H.C., Bremel, R.D. and First, N.L. (1991) High-level expression of bovine alpha-SI -casein cDNA under the control of MMTV promoter/enhancer in the milk of transgenic mice. J. Cell. Biochem. Suppl., 15 A, 213 (conference abstract).

106. Campbell, S.M., Rosen, J.M., Hennighausen, L.G., Strech-Jurk, U. and Sippel, A.E. (1984) Comparison of the whey acidic protein genes of the rat and mouse. Nucleic Acids Res., 12, 8685-8697.

107. Hall, L„ Emery, D.C., Davies, M.S., Parker, D. and Craig, R.K. (1987) Organization and sequence of the human alfa-lactalbumin gene. Biochem. J., 242, 735-742.

108. Vilotte, J.L., Soulier, S., Mercier, J.-C., Gaye, P., Hue-Delahaie, D. and Furet, J.P. (1987) Complete nucleotide sequence of bovine alfa-lactalbumine gene -comparison with its rat counterpart. Biochimie, 69, 609-620.

109. Laird, J.E., Jack, L., Hall, L., Boulton, A.P., Parker, D. and Craig, R.G (1988) Structure and expression of the guinea-pig alfa-lactalbumin gene. Biochem. J., 254,85-94.

110. Vilotte, J.L., Soulier, S., Printz, C. and Mercier, J.C. (1991) Sequence of the goat alpha-lactalbumin-encoding gene comparisin with the bovine gene and evidance of related sequences in the goat genome. Gene, 98, 271-276.

111. Alexander, L.J., Stewart, A.F., Nackinlay, A.G., Kapelinskaya, T.V., Tkach, T.M. and Gorodetsky, S.I. (1988) Isolation and characterisation of the bovine kappa-casein gene. Eur. J. Biochem., 178, 395-401.

112. Ali, S. and Clark, A.J. (1988) Characterization of the gene encoding ovine beta-lactoglobulin. J. Mol. Biol., 199, 415-426.

113. Harris, S., Ali, S., Anderson, S., Archibald, A.L. and Clark, A.J. (1988) Complete nucleotide sequence of the genomic ovine beta-lactoglonulin gene. Nucleic Acids Res., 16, 10379-10380.

114. Jones, W.K., Yu-Lee, L.Y., Clift, S.M., Brown, T.L. and Rosen, J.M. (1985) The rat casein multigene family. J. Biol. Chem., 260, 7042-7050.

115. Bonsing, J., Ring, J.M., Stewart, A.F. and MacKinlay, A.G. (1988) Complete nucleotide sequence of bovine beta-casein gene. Aust. J. Biol. Sci., 41, 527-537.

116. Yoshimura, M. and Oka, T. (1989) Isolation and structural analysis of the mouse beta-casein gene. Gene, 78, 267-275.

117. Thepot, D., Devinoy, E., Fontaine, M.L. and Houdebine, L.M. (1991) Structure of the gene encoding rabbit beta-casein. Gene, 97, 301-306.

118. Roberts, B., Ditullio, P., Vitale, J., Hehir, K. and Gordon, K. (1992) Cloning of the goat beta-casein-encoding gene and expression in transgenic mice. Gene, 121, 255-262.

119. Rijnkels, M., Kooiman, P.M., Krimpenfort, P.J.A., de Boer, H.A., and Pieper F.R., (1995) Expression analysis of the individual bovine (3-, aS2- and K-casein genes in transgenic mice, Biochem. J., 311, 929-937.

120. Eldin, S.C.R. (1988) The formation and function of DNAse I Hypersensitive site in process of gene activation, J. Biol. Chem., 263,19259-19262.

121. Whitelaw, B.A., Harris, S., Mc Clenaghan, M„ Simons, J.P. and Clark A.J. (1992) Position -independent expression of the ovine p-lactoglobulin gene in transgenic mice, Biochem. J., 286, 31-39.

122. Vilotte, J.L. and Soulier, S. (1992) Isolation and characterization of the mouse alfa-lactalbumib-encoding gene: interspecies comparison, tissue- and stage specific expression. Gene, 119, 287-292.

123. Lubon, H. and Hennighausen, L. (1987) Nuclear proteins from lactating mammary glands bind to the promorer of a milk protein gene. Nucleic Asids Res., 15,2103-2119.

124. Lubon, H. and Hennighausen, L. (1988) Conserved region of the rat alfa-lactalbumin promoter is a target site for protein binding in vitro. Biochem. J., 256, 391-396.

125. Jones, K.A., Kadonaga, J.T., Rosenfeld, P.J., Kelly, T.J. and Tjian, R. (1987) A cellular DNA-binding protein that activates eucariotic transcription and DNA replication. Cell, 48, 79-89.

126. Sontoro, C., Mermod, N., Andrews, P.C. and Tjian, R. (1988) A family of human CCAAT-box-binding proteins active in transcription and DNA replication: cloning and expression of multiple cDNA. Nature, 334,218-224.

127. Cordingly, M.G., Riegel, A.T. and Hager, G.L. (1987) Steroid- dependent interaction of transcription factors with the inducible promoter of mouse mammary tumor virus in vivo. Cell, 48, 261-270.

128. Harris, S., McClenaghan, M., Simons, J.P. Ali, S. and Clark, A.J. (1991) Developmental regulation of sheep P-lactoglobulin gene in the mammary gland of transgenic mice. Dev. Gen., 12, 299-307.

129. Watson, C.J., Gordon, K.E., Robertson, M. and Clark, A.J. (1991) Interaction of DNA-binding proteins with a milk protein gene promoter in vitro: identification of a mammary gland-specific factor. Nucleic Acids Res., 19, 6603-6610.

130. Gouilleux, F., Wakao, H., Mundt, M. and Groner, B. (1994) Prolactin induces phosphorylation of Tyr694 of Stat5 (MGF), a prerequisite for DNA binding and induction of transcription. EMBO J., 13, 4361-4369.

131. Schmitt-Ney, M., Doppler, W., Ball, R.K. and Groner, B. (1991) Beta-casein gene promoter activity is regulated by hormone-mediated relief of transcriptional repression and mammary-gland-specific nuclear factor. Mol. Cell. Biol., 11, 3745-3755.

132. Streuli, C.H., Edwards, G.M., Delcommenne, M.,Whitelaw, C.B.A, Burdon, T.G., Schindler, C., and Watson, C.J. (1995) Stat5 as a target for regulation by extrasellular matrix. J. Biol. Chem., 270, 21639-21644.

133. Li, S. and Rosen, J.M. (1995) Nuclear Factor I and mammary gland factor (STAT5) play a critical role in regulation rat whey acidic protein gene expression in transgenic mice. Mol. Cell. Biology, 15, 2063-2070.

134. Simons, J.P., Wilmut, I., Clark, A.J., Archibald, A.L., Bishopp, J.O and Lathe, R.1988) Gene transfer into sheep. Bio/Technology, 6, 179-183.

135. Gordon, K., Lee, E., Vitale, J.A., Smith, A.E., Westphal, H. and Hennighausen, L. (1987) Production of human tissue plasminogen activator in transgenic mouse milk. Bio/Technology, 5, 1183-1187.

136. Pennica, D., Holmes, W.E., Kohr, W.E., Harkins, R.N., Vehar, G.A., Ward, C.A., et al. (1983) Cloning and expression of human tissue-type plasminogen activator cDNA in E. coli. Nature, 301, 214- 220.

137. Wittwer, A.J., Howard, S.C., Carr, L.S., Harakas, N.K., and Feder, J. (1989) Effects of N-glycosylation on in vitro activity of Bowes melanoma and human colon fibroblast derived tissue plasminogen activator. Biochemistry, 28, 76627669.

138. Peters, Jr.T. (1975) Serum albumin. In: The Plasma Proteins; Structure, Function and Genetic control, edited by Putman, F.W. 133-173. Academic Press, San Diego.

139. Barash, I., Faerman, A., Baruch, A., Nathan, M., Hurwitz, D.R. & Shani, M. (1993) Synthesis and secretion of human serum albumin by mammary gland explants of virgin and lactating transgenic mice. Transgenic Res., 2, 266-276.

140. Hurwitz, D.R., Nathan, M., Barash., Ilan, N. & Shani, M. (1994), Specific combination of human serum albumin introns direct high level expression of albumin in transfected COS cells and in the milk of transgenic mice. Transgenic Res., 3, 365-375.

141. Clark, A.J., Cowper, A., Wallace, R., Wright, G. & Simons,J.P. (1992) Rescuing transgene expression by co-integration. Bio/Technology, 10, 1450-1454.

142. Clark, A.J., Archibald, A.L., McClenaghan, M., Simons, J.P., Wallace, R. & Whitelaw, C.B.A. (1993) Enchancing the efficiency of transgene expression. Philosophical Transactions of the Royal Society of London Seriies B Biological Sciences, 339, 1288.

143. Yull, F., Harold, G., Wallace, R. & Clark, A.J. (1997) Transgene rescue in the mammary gland is associated with transcription but does not require transcription of BLG transgenes. Transgenic Res., 6, 11-17.

144. Esmon, C.T. (1987) The regulation of natural anticoagulant pathway. Sciense, 235,1348-1352.

145. Suk, K„ Jung, D.Y., Kang, S.W., Seo, E.J., Kang, H.A., Yu, M.H. and Seo, J.S. (1995) Human erythropoietin-induced polycythemia in transgenic mice. Molecules and Cells, 5, 634-640.

146. Chang AWS, Homan EJ, Ballou LU, Burns JC, Bremel RD. Transgenic cattle produced by reverse-transcribed gene transfer in oocytes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998, 95, 14028-14033.

147. Chang AWS, Chong KY, Martinovich C, Simerly C, Schatten G. Transgenic monkeys produced by retroviral gene transfer into mature oocytes. Science 2001, 291,309-312.

148. Schnieke AS et al. Human factor IX transgenic sheep produced by transfer of nuclei from transfected fetal fibroblasts. Science 1997, 278, 2130-2133

149. Cibelli JB et al. Cloned transgenic calves produced from nonquiescent fetal fibroblasts. Science 1998, 280, 1256-1258.

150. Brink MF, Bishop MD, Pieper FR. Developing efficient strategies for the generation of transgenic cattle which produce biopharmaceuticals in milk. Theriogenology 2000, 53, 139-148.

151. Palmiter R.D., Wilkie T.M., Chen H.Y., Brinster R.L. Transmission distortion and mosaicism in an unusual transgenic mouse pedigree. Cell 1984, 36, 869-877.

152. Wilkie T.M., Palmiter R.D. Analysis of the integrant in MyK-103 transgenic mice in which males fail to transmit the integrant. Mol. Cell. Biol. 1987, 7, 1646-1655.

153. Wilkie T.M., Braun R.E., Ehrman W.J., Palmiter R.D., Hammer R.E. Germ-line intrachromosomal recombination restores fertility in transgenic MyK-103 male mice. Genes Dev. 1991, 5, 38^18.

154. Gillespie G., Carter W.A. Tex. Rep. Biol. Med. 1981, 41, 37-42.

155. Derynck R., Remaut E., Saman E., Stanssens P., De Clercq E., Content J., Fiers W. Expression of human fibroblast interferon gene in Escherichia coli. Nature. 1980, 287, 193-197.

156. McCullagh K.G., Davies J.A., Sim I.S., Dawson K.M., O'Neill G.J., Doel S.M., Catlin G.H., Houghton M. Biological properties of human interferon beta 1 synthesized in recombinant bacteria. J. Interferon Res. 1983, 3, 97-111.

157. Chen X.Z., Yun J.S., Wagner T.E. Enhanced viral resistance in transgenic mice expressing the human beta 1 interferon. J. Virol. 1988, 62, 3883-3887.

158. Sandgren E.P., Palmiter R.D., Heckel J.L., Brinster R.L., Degen J.L. DNA rearrangement causes hepatocarcinogenesis in albumin-plasminogen activator transgenic mice. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1992, 89, 11523-11527.