Экспериментальное обоснование применения милиацина для коррекции иммуносупрессии,индуцированной метотрексатом тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.09, кандидат медицинских наук Железнова, Алла Дмитриевна

• Железнова, Алла Дмитриевна
• кандидат медицинских наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Железнова, Алла Дмитриевна

Список основных сокращений.

Введение.

Глава I Обзор литературы

1.1. Метотрексат. Механизм действия и иммуносупрессивные эффекты.

1.2. Цитотоксичность метотрексата и подходы к ее ограничению

1.3. Тритерпеноиды. Иммунотропная активность и ее реализация при иммуносупрессивных воздействиях.

Глава II Материалы и методы исследований.

Глава III Протективное действие милиацина при метотрексат-индуци-рованных нарушениях клеточных популяций периферической крови и органов системы иммунитета

3.1. Влияние милиацина на содержание и популяционный состав лейкоцитов периферической крови мышей (СВА х C57Bl6)Fb подвергнутых воздействию метотрексата.

3.2. Милиацин и метотрексат-индуцированные нарушения кинетики костномозговых клеток нейтрофильного ряда.

3.3. Милиацин и МТХ-индуцированные нарушения содержания лимфоцитов в красном костном мозге животных.

3.4. Проявления защитного действия милиацина на лимфотоксический эффект метотрексата в тимусе и в селезенке.

3.5. Обсуждение результатов.

Глава IV Протективное действие милиацина при метотрексат-индуцированных нарушениях функциональной активности иммунной системы

4.1. Влияние милиацина на выраженность дисфункции иммунной системы и динамику восстановления нормальных параметров иммунореактивности у животных, подвергнутых воздействию метотрексата.

4.2. Влияние милиацина на депрессию иммунитета к столбнячному анатоксину, индуцированную метотрексатом.

4.3. Обсуждение результатов.

Глава V Влияние милиацина на фармакокинетические параметры метотрексата в селезенке мышей (СВА х С57В16)р1.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экспериментальное обоснование применения милиацина для коррекции иммуносупрессии,индуцированной метотрексатом»

Метотрексат, будучи классическим иммунодепрессантом, подавляющим практически все звенья иммунной системы [81; 122; 249; 287], широко применяется в клинической практике для лечения аутоиммунных и онкологических заболеваний. Он является золотым стандартом при лечении ревматоидного артрита. Одним из главных негативных последствий применения метот-рексата являются инфекционные осложнения, возникающие вследствие подавления функциональной активности иммунной системы. В связи с этим разработка подходов, направленных на предупреждение и (или) ограничение иммунодепрессивного влияния метотрексата [153; 183; 188; 265] является актуальной задачей, имеющей важное прикладное значение. Однако возможность ее реализации не исследована.

Сформировавшиеся к настоящему времени представления об основных группах иммуномодуляторов, механизмах их действия и принципах использования [84; 85; 87; 117; 118; 119; 131; 132; 133] не ослабили интереса к дальнейшему поиску веществ, обладающих иммунокорригирующей активностью. В сфере этого интереса существенное место занимают естественные метаболиты, включая продукты микробного [7; 98; 106; 187] и растительного происхождения [10; 71; 246; 264], эндогенные пептиды [24; 25; 30; 134] и цито-кины [42; 102]. Необходимость в подобных исследованиях определяется потребностью повышения эффективности иммунокоррекции на основе снижения побочных эффектов, повышения специфичности и точной адресной доставки иммунокорректоров.

Перспективным классом среди таких веществ представляются тритерпе-ноиды и тритерпеноидные сапонины, обладающие широким спектром имму-нотропной активности [147; 252; 267; 305]. Проявляя низкую токсичность, они оказывают модифицирующее влияние на структуру биологических мембран лимфоцитов, обеспечивая усиление их пролиферативного потенциала и функции [94]. Данное положение в полной мере относится к милиацину -тритерпеноиду растительного происхождения, обладающему способностью стимулировать лимфопоэз, проявлять адъювантную активность и оказывать мембранопротекторный эффект [47; 77; 115]. Вместе с тем вопрос о защитном влиянии милиацина: в отношении лимфотоксического и иммунодепрес-сивного влияния метотрексата остается открытым.

Актуальность настоящего исследования определяется тем, что до начала его выполнения не было проведено оценки защитного действия милиацина при меторексат-индуцированных нарушениях клеточных популяций центральных и периферических органов системы иммунитета; не был определен его протективный эффект в отношении подавления метотрексатом гуморального и клеточного; иммунного ответа^ а также сформировавшегося вакцинального иммунитета; не было установлено; влияние милиацина на состояние цитокиновой регуляции в условиях действия метотрексата; не было выяснено влияние милиацина. на фармакокинетику метотрексата в лимфоидных органах, как фактора; способного обусловить проявление защитного действия тритерпеноида.

Ц е ль и задачи и с с л е д о в а н и я Целью настоящей работы являлась оценка влияния милиацина на нарушения морфофункциональных параметров иммунной системы и эффективность их восстановления при вторичном; иммунодефиците, индуцированном метотрексатом.

В соответствии? с поставленной целью были сформулированы следующие задачи:

1. Изучить, влияние милиацина на клеточные популяции центральных (костный: мозг, тимус) и периферических органов (селезенка) системы иммунитета у экспериментальных животных на разных сроках после воздействия; метотрексата.:'/' ^ V •' ■'/.

2. Выяснить интенсивность и продолжительность нарушений гуморального и клеточного иммунитета в условиях применения метотрексата и оценить возможность коррекции этих нарушений милиацином.

3. Исследовать особенности продукции цитокинов после воздействия метотрексата и влияние на эту продукцию милиацина.

4. Определить протективное влияние милиацина в отношении депрессии ме-тотрексат-индуцированного поствакцинального иммунитета.

5. Оценить влияние милиацина на фармакокинетику метотрексата в лимфо-идных органах (селезенке) животных.

Научная новизна исследования Впервые определено протективное влияние милиацина в отношении лимфотоксичности метотрексата и его ингибирующего эффекта на функциональную активность иммунной системы. В экспериментах на мышах (СВА х С57В16)Р ] установлена способность тритерпеноида ограничивать метотрексат-индуцированные нарушения клеточных популяций циркулирующей крови, центральных (тимус, костный, мозг) и периферических (селезенка) органов иммунной системы. Показано, что милиацин уменьшает супрессивное влияние метотрексата на формирование гуморального и клеточного иммунного ответа. Установлено защитное влияние тритерпеноида в отношении продукции цитокинов (ИЛ-4, ИЛ-12 и у-ИФН), ингибируемой метотрексатом. Показан позитивный эффект милиацина на процесс восстановления клеточных и функциональных параметров иммунной системы в виде сокращения сроков этого восстановления при стимуляции костномозгового кроветворения и усилении продукции цитокинов (ИЛ-4). Обнаружена способность милиацина повышать устойчивость вакцинального иммунитета при действии на организм иммунодепрессанта. Впервые показано, что протективное влияние милиацина на, иммунную систему в условиях применения метотрексата не связано* с нарушением, фармакокинетики препарата в лимфоидных органах (селезенке):

Т е о р е т и ч е с.к о е значение работы Полученные данные расширяют представление о диапазоне протектив-ного влияния милиацина при действии на организм дестабилизирующих факторов. Обнаружение защитного эффекта тритерпеноида в отношении метот-рексат-индуцированных нарушений; клеточных популяций в органах иммунной системы и ее функциональной активности раскрывает новые аспекты его биологического действия. Отсутствие влияния милиацина на фармакокине-тику метотрексата в селезенке исключает рассмотрение такого эффекта в качестве возможного механизма в реализации протективного действия тритерпеноида в отношении клеточных популяций данного органа и их участия в формировании иммунного ответа.

Практическос з н а ч с н и е р а б о ты Результаты работы определяют новые возможности; ограничения побочного действия цитостатичсской терапии; и повышения эффективности имму-нореабилитации после ее проведения на основе использования' милиацина-или его аналогов: Установленная в работе защита милиацином вакцинального иммунитета при действии на организм иммунодепрессанта, обусловливает перспективность дальнейшей^ разработки тритерпеноида как средства для-поддержания; иммунологической- и эпидемиологической эффективности вак-цинопрофилактики в условиях экстремальных воздействий.

Результаты диссертационной работы включены в учебный курс для. студентов Оренбургской государственной медицинскот академии. По материалам работы получены: патент на изобретение РФ № 2337693' «Средство, ограничивающее лимфотоксический эффект метотрексата» и положительное решение о выдаче патента на изобретение по заявке № 2008151816/14 (068110) от 08.02.2010г. «Способ защиты поствакцинального иммунитета к столбнячному анатоксину от депрессии, индуцированной метотрексатом».

Основные положения, выносимые на защиту

1. Тритерпеноид растительного происхождения милиацин оказывает протек-тивный эффект в отношении лимфотоксического действия метотрексата, что проявляется снижением клеточного опустошения костного мозга, тимуса, селезенки, ослаблением депрессии миелопоэза, лимитированием выраженности лейкоцитопении, лимфопении и нейтропении.

2. Милиацин ослабляет индуцированную метотрексатом дисфункцию иммунной системы, уменьшая угнетение гуморального и клеточного (ОУН) иммунного ответа, предотвращая депрессию вакцинального иммунитета, а также отменяя (ИЛ-4) и ограничивая (ИЛ-12; у-ИФН) подавление продукции цитокинов.

3. Милиацин обеспечивает более эффективный процесс восстановления клеточных и функциональных параметров иммунной системы после воздействия метотрексата, сокращая сроки их нормализации и повышая выраженность экспрессии в виде стимуляции нейтрофилопоэза, лимфопоэза и усиления продукции ИЛ-4.

4. Протективное влияние милиацина не связано с нарушением фармакокинетики метотрексата в лимфоидных органах (селезенке) животных.

Апробация работы Основные положения диссертации доложены и обсуждены на Региональной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов, Оренбург, 2005; IV и V конференциях иммунологов Урала, Уфа, 2005; Оренбург, 2006; Объединенном иммунологическом форуме, Санкт-Петербург, 2008; X Международном конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии», Казань, 2009; II Международном симпозиуме «Взаимодействие нервной и иммунной систем в норме и патологии», Санкт-Петербург, 2009.

Материалы диссертации обобщены в 16 научных работах, в том числе в 5 статьях, опубликованных в рецензируемых научных журналах. Получены патент на изобретение РФ № 2337693 и положительное решение о выдаче патента на изобретение по заявке № 2008151816/14 (068110) от 08.02.2010г.

Заключение диссертации по теме «Клиническая иммунология, аллергология», Железнова, Алла Дмитриевна

141 Выводы

1 .Установлено, что однократное внутрибрюшинное введение метотрексата (10 мг/кг) мышам (СВА х С57В16)Р] приводит на 4 сутки к угнетению миело-и лимфопоэза, клеточному опустошению костного мозга, тимуса, селезенки, развитию лейкопении, снижению способности к формированию гуморального и клеточного (вУН) иммунного ответа, подавлению продукции цитокинов (ИЛ-4, ИЛ-12, у-ИФН) и депрессии вакцинального иммунитета.

2. Восстановление клеточных популяций органов иммунной системы и ее функциональной активности реализуется в течение 3 недель после введения цитостатика. При этом нормализация ряда параметров: продукция уИФН, способность к развитию ОУН, содержание в крови лимфоцитов и сегментоя-дерных нейтрофилов к концу указанного периода отсутствует.

3. Установлено, что милиацин в разовой дозе 2 мг/кг при трехкратном последовательном (на протяжении 3 дней) внутрибрюшинном введении после применения метотрексата ослабляет лимфотоксический эффект цитостатика. Протективное действие милиацина на 4 сутки проявлялось уменьшением, убыли миелокариоцитов и костномозговых клеток миелоидного ряда, снижением редукции площадей и плотности клеточного инфильтрата мозгового и коркового вещества тимуса, Т- и В-зависимых зон селезенки, ограничением выраженности лейкоцитопении за счет уменьшения падения содержания в крови сегментоядерных нейтрофилов и лимфоцитов.

4. Показано, что милиацин обеспечивает ускорение процесса восстановления клеточных популяций, нарушенных под влиянием метотрексата. Нормализация клеточных параметров тимуса, селезенки и периферической крови происходит на фоне усиления костномозгового кроветворения, сопровождающе-госяг увеличением абсолютного содержания в костном мозге клеток нейтро-фильного ряда (7, 10, 14 сутки) и лимфоцитов (14 сутки).

5. Обнаружено, что милиацин ослабляет индуцированную метотрексатом супрессию гуморального и клеточного иммунного ответа. Определено, что три-терпеноид ускоряет нормализацию уровня гуморального ответа (9, а не 16 сутки) и обеспечивает восстановление способности к формированию клеточной иммунной реакции к 21 суткам.

6. Выявлена способность милиацина отменять (ИЛ-4) и ослаблять (ИЛ-12, у-ИФН) подавление метотрексатом продукции цитокинов на 4 сутки после применения цитостатика и обеспечивать стимуляцию (ИЛ-4), а также полное (ИЛ-12) или частичное (у-ИФН) восстановление этой продукции в более отдаленном периоде (21 сутки).

7. Показано, что милиацин предотвращает депрессию вакцинального иммунитета к столбнячному анатоксину как в раннем (4 сутки), так и в отдаленном периоде (21 сутки) после применения метотрексата.

8. Протективное влияние милиацина в отношении метотрексат-индуциро-ванных нарушений клеточных популяций селезенки и их функциональных-параметров не связано с нарушением фармакокинетики цитостатика в этом лимфоидном органе.

143

Заключение

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о протективном действии милиацина в отношении метотрексат-индуцированных нарушений клеточных популяций в органах системы иммунитета и ее функциональной активности. В связи с этим принципиальное значение приобретает вопрос о механизме (ах) такой протекции. Выполненный в работе сравнительный анализ динамики содержания MTX в лимфоидном органе (селезенке) в условиях применения и без применения милиацина, не позволяет связать протективное действие тритерпеноида с его влиянием на' фармакокинетику MTX. Наряду с этим особенности химической структуры милиацина (фитостероида) делают маловероятной возможность его оппозитной к MTX роли в отношении активности дигидрофолатредуктазьъ и образования тетрагидрофолиевой кислоты. Данные положения обосновывают представления о том, что защитное действие милиацина на проявление цитотоксического и иммунодепрессивно-го влияния MTX определяется не ограничением антиметаболических эффектов последнего, но другими механизмами. При анализе этих механизмов заслуживают внимания данные о способности MTX индуцировать оксидатив-ный стресс и активацию свободнорадикального окисления [144; 154].

Как известно [20; 38; 110; 172] в основе оксидативного стресса лежит генерация в клетке активных форм кислорода (АФК), представляющих собой продукты неполного восстановления его молекул: свободные радикалы, перекиси И! другие метаболиты, обладающие высокой реакционной способностью.

Следует отметить, что в настоящее время АФК рассматриваются не только как побочный продукт клеточного метаболизма, но и как необходимые биомолекулы в регуляции клеточных функций. Прежде всего,,речь идет об участии некоторых АФК в, роли медиаторов в, клеточных сигнальных путях. Такое участие определяется, в.частности, способностью АФК изменять фосфорилирование по тирозину целого спектра белков [66], что может опосредовать действие АФК на различные сигналопередающие системы, включая MAP (mitogen activating protein)-KHHa3Hbm каскад и факторы транскрипции [110; 299]. Такая возможность подтверждается усилением продукции ци-токинов в присутствии АФК [244] и снижением этой продукции [172], равно как и клеточной пролиферации [48] под действием антиоксидантов. По мнению F. Obata et al. (2006) регуляторный эффект АФК в большей степени затрагивает Тх2 - субпопуляцию лимфоцитов, что проявлялось in vivo продукцией ассоциированных с Тх2 — ответом антител классов IgE и IgGb a in vitro - увеличением уровня секреции ИЛ-4 (но не уИФН). Интенсивное изучение сигнальной функции АФК на примере цитокинов и факторов роста [282] тем не менее пока не внесло ясность в понимание специфичности действия АФК и их последующего дистанцирования от молекул-мишеней.

Необходимость АФК для» жизнедеятельности клеток связывают также с образованием при их участии электронно-возбужденных состояний биомолекул - триггеров всех последующих биоэнергетических реакций. Колебательный режим таких реакций способствует ритмичному протеканию биохимических процессов на более высоком уровне [96].

Наконец, АФК обеспечивают функциональную лабильность мембран клеток и субклеточных структур, определяющую такие жизненно важные процессы, как проницаемость, ионный транспорт, энергетику, синтез белка и др. Подобное обеспечение обусловлено способностью АФК инициировать активацию перекисного окисления липидов (ПОЛ) при взаимодействии с входящими в состав клеточных мембран полиненасыщенными жирными кислотами. Представляя собой саморазвивающуюся цепную реакцию, ПОЛ постоянно протекает в клетке, поскольку является нормальным процессом метаболизма и служит необходимым звеном её жизнедеятельности, включая адаптационные реакции. Благодаря ПОЛ, реализуемому в клеточных мембранах, меняется их липидный состав, а тем самым - активность липидзависимых мембранных ферментов, к которым по-существу относятся все ферментные системы организма [63].

Отмечая роль АФК в обеспечении жизнедеятельности клеток, следует подчеркнуть, что они в тоже время представляют собой потенциально опасные продукты метаболизма. Их отличительной особенностью является высокая окислительная способность, создающая существенную угрозу для ре-докс-чувствительных компонентов; клетки; прежде всего — белков, липидов и нуклеиновых кислот [38]. В нормальных условиях содержание АФК лимитируется механизмами антиоксидантной защиты (редокс-буферными системами); включающими ферментативные и неферментативные системы инактивации АФК [96]. Нарушение этого динамического баланса про- и антиокси-дантных механизмов в сторону преобладанияшервых из них, способно вызвать ряд структурно-функциональных нарушений в клетке вплоть до её гибели [6].

В этой связи принципиально важно, что подобный сдвиг генерируется под воздействием MTX. Вопрос о том;, какой именно: механизм определяет индуцирующее влияние MTX, на развитие окислительного стресса остается открытым. Однако можно»предполагать, что такая индукция происходит не просто на фоне снижения механизмов антиоксидантной защиты, но именно снижение некоторых ключевых механизмов это№ защиты под влиянием MTX служит пусковым моментом для накопления АФК в клетке, подвергшейся воздействию цитостатика. В первую очередь это предположение касается редукции, под влиянием MTX. внутриклеточного пула восстановленного* глута-тиона — GSH [144], истощение которого может обусловливаться участием этого небелкового тиола в работе транспортных белков систем множественной^ лекарственной резистентности.

Как. отмечалось выше; (глава 1), GSH взаимодействует своей сульфгид-рйльнош. группой; с. реактивной группой лекарственного: препарата; Такое взаимодействие приводит к образованию конъюгатов, необходимых для peaлизации активности MRP-1 (multidrug resistance protein-1) - транспортера ксенобиотиков, значимо присутствующего и в лимфоцитах [104]. Будучи главным водорастворимым антиоксидантом, концентрация которого в клетке достигает миллимолярных значений [60], восстановленный глутатион играет центральную роль в поддержании в ней окислительно-восстановительного баланса. В связи с этим, снижение содержания GSH и рост удельного содержания его окисленной формы (GSSH), на долю-которой в норме приходится —10% от общего количества данного тиола, существенно влияют на нарушение этого баланса. Подобный вариант развития событий представляется тем более вероятным, что среди ферментов, активность которых ингибируется MTX (глюкоза-6-фосфатдегидрогеназа, фосфоглюконатдегидрогеназа) присутствуют глутатионредуктаза и у-глютамилцистеинсинтетаза [144]. Первый из них принимает участие в регенерации восстановленного глутатиона из его окисленной формы, тогда как второй необходим для эндогенного синтеза глутатиона. Причем, образование именно у-глутамилцистеина является- лимитирующим звеном этого синтеза- [60]. Очевидно, что блокирование MTX обоих процессов может выступатьжак достаточное условие нарушения, анти-оксидантного статуса клетки. Тем более, с учетом плохой проницаемости клеточных мембран для глутатиона, исключающей (ограничивающей) возможность восполнения его внутриклеточного пула за счет внешних источников.

Негативные результаты нарушения окислительно-восстановительного баланса клетки реализуются прежде всего через усиление процесса перокси-дации липидов (ПОЛ), в который вовлекаются полиненасыщенные жирные кислоты в составе клеточных мембран. Сегодня наиболее изучены три прямых следствия такого усиления [17; ,18; 19; 20]. Во-первых, окисление тио-ловых (сульфгидрильных групп) мембранных белков; приводящее к появлению дефектов в мембране клеток, и митохондрий, увеличению внутриклеточной концентрации Са2+ и к повреждению клетки. Во-вторых, накопление продуктов липопероксидации, повышающих проницаемость липидной фазы мембран, что обусловливает, в частности, утрату способности митохондрий к синтезу АТФ и, соответственно, приводит к развитию энергетического дефицита. Третьим (и возможно самым важным результатом избыточной активации ПОЛ) является уменьшение стабильности липидного слоя, что может привести к электрическому пробою мембраны под действием разницы потенциалов, создаваемой самой мембраной.

Очевидно, что несостоятельность в обеспечении матричной- (для белковых молекул, ферментов, ионных каналов, и рецепторов) и барьерной (для ионов и гидрофильных молекул) роли липидным; бислоем мембраны, служит важным звеном нарушений различных клеточных функций. Для клеток иммунной системы подобные нарушения могут реализовываться путем ограничения пространственного-перемещения Т-клеточного рецептора (TCR) в процессе формирования иммунного синапса [235],. или через изменение структуры, липидных микродоменных рафт на плазматической мембране - своеобразных кластеров, отвечающих за сборку сигнальных комплексов-и передачу сигналов с поверхности внутрь клетки [112]. В этой связи обращают на себя внимание данные о важной роли полиненасыщенных жирных кислот - субстрата ПОЛ в пролиферативном ответе лимфоцитов на митогенный стимул [151; 286]; а также о значении уровня содержания этих кислот (арахидоновой или линоленовой) в экспрессии рецепторов хомминга, обеспечивающих распределение лимфоцитов в лимфоидных органах при сингенном переносе [241]. Негативное влияние на функциональную активность лимфоцитов установлено и для продуктов ПОЛ: Так, M.G. Goodman, W.O. Weigie (1980) было продемонстрировано полное подавление пролиферации В-лимфоцитов и их способности к продукции Ig в присутствии гидроперекиси арахидоновой кислоты. По данным Г.Б. Афониной (1989)-повышение уровня конъюгиро: ванных диенов в, мембране лимфоцитовшри'активации ПОЛ-снижало« экспрессию рецепторов на. поверхности Т- и В1- лимфоцитов, что проявлялось снижением их чувствительности к ацетилхолину и способности к розеткооб-разованию.

Влияние АФК и продуктов липопероксидации на функциональную активность лимфоцитов может опосредоваться их участием в сигнальных путях, исходящих не только от рецепторов к гормонам и нейромедиаторам, но и непосредственно от антигенраспознающих рецепторов [186]. В этом случае механизм влияния связан с воздействием на пути трансдукции сигнала от этих рецепторов, осуществляемый при участии белка Src, выполняющего адаптерную. функцию между концевыми цитоплазматическими доменами TCR и BCR - молекулами ITAM' (immunoreceptor thyrosine-based activation motif) и MAP- киназным модулем [121]. Негативное влияние на формирование иммунного ответа под влиянием гидроперекисей ненасыщенных жирных кислот может обусловливаться-подавлением последними экспрессии молекул адгезии: VCAM, ELAM [64], что- снижает возможность клеточной- кооперации.

Продукты ПОЛ; в' частности биологически активные альдегиды (алкена-ли) способны также модулировать хемотаксис и метаболическую активность гранулоцитов, усиливая эти процессы в низких и ослабляя — в высоких концентрациях [64].

Еще одним следствием избыточной активации ПОЛ является запуск апоптотического каскада с участием его «митохондриального» механизма, который-реализуется и в лимфоцитах, в частности, под действием глюкокор-тикоидов [22]. Начальная стадия развертывания этого процесса связана с отделением цитохрома С от внутренней мембраны митохондрий в связи с утратой молекулярного взаимодействия с кардиолипином, подвергшимся в условиях активации ПОЛ окислительной модификации [59]. Последующее повышение проницаемости внешней мембраны-митохондрий при участии про-апоптотических белков семейства* Bcl-2 (Вах, Bad, Bäk и т.д.), вступающими в соединение с ANT (adenin-nucleotid-translocator), встроенным во внутреннюю мембрану, приводит к выходу цитохрома С в цитозоль и его участию в формировании апоптосомы — APAF-1 (апоптотический протеазоактивирую-щий: фактор). Дальнейшее развитие событий связано с активацией каспазы 9 и трансдукцией сигнала на терминальную каспазу 3. Наряду с цитохром G — обусловленным апоптозом, увеличение проницаемости митохондрий включает еще один механизм апоптоза, осуществляемый при участии AIF-1 (арор-tosis induciry factor 1),. представляющего собой самостоятельный киллерный фактор, дублирующий действие цитохрома С т каспаз при их блокировании [21].

Как известно^ [139; 140; 142] наибольшую чувствительность к апоптозу проявляют незрелые Т- и B-клетки, локализующиеся? преимущественно в центральных органах системы иммуногенеза. Тем не менее, высокая чувствительность» обнаружена и у отдельных субпопуляций периферических лимфоцитов. Так, Е. Marinova et al. (2006) показано, что GD44 С0451Ю+С057' Т-лимфоциты, составляющие основную субпопуляцию Т-хелперов зародышевых центров; подвергаются ¡in vivo апоптозу, который по ответу на апоп-тоз-индуцирующие сигналы, и чувствительность, к. ингибиторам каспаз схо-< ден с апоптозом незрелых тимоцитов. Это означает, что роль апоптотическо-го механизма, индуцируемого MTX вчслеточном опустошении системы иммуногенеза может реализовываться не только на уровне: ее центральных, но и периферических органов.

Такимг образом, продемонстрированная- в ряде исследований способность MTX инициировать оксидативный стресс можно расценивать как значимый механизм цитотоксичности химиопрепарата, определяющий установленные в работе структурные и функциональные, нарушения иммунной системы при его применении. Данный механизм, в частности, мог существенно дополнить антипролиферативный эффект MTX, реализуясь,, однако, не. на уровне блокады путей синтеза ДНК, а через ее прямое оксидативное повреждение в лимфоцитах [251], или ингибирование- основных, сигнальных путей, регулирующих процесс их пролиферации. Последний эффект в первую очередь имеет отношение к МАР-киназному каскаду. Его мобилизация, закономерно наблюдающаяся в присутствии АФК, может быть нивелирована окислительной инактивацией факторов транскрипции (АР-1 и NF-kB), находящихся под контролем этих киназ. Такая инактивация возникает, когда окислительный стресс сопровождается более высоким уровнем подъема АФК, чем тот, который требуется для мобилизации регуляторных систем [110]. Тем более, что в этих условиях возможно формирование своеобразного «порочного круга», обусловливающего нарастание оксидативного стресса, через лимитирование участия АР-1 в. активации механизмов антиоксидантной защиты.

Таким образом, начиная с определенного порогового уровня АФК, мобилизация защитных систем клетки ослабевает, тогда как стимуляция апоп-тоза продолжает нарастать. Очевидно, что реализация этих разнонаправленных процессов играет значимую роль в клеточном опустошении органов сисг • темы иммуногенеза и в развитии иммуносупрессии в условиях применения MTX.

Несостоятельность регуляторных механизмов при действии MTX могла иметь определяющее значение и в установленной в работе депрессии продукции цитокинов (ИЛ-4, ИЛ-12, уИФН), обусловленной нарушением транс-дукции сигналов при участии факторов транскрипции STAT (ИЛ-4, ИЛ-12), а также STAT и Nf-kB (уИФР). То обстоятельство, что более выраженное и продолжительное снижение цитокинового ответа на митогенную стимуляцию затрагивало ИЛ-12 и уИФН по сравнению с продукцией ИЛ-4, свидетельствует о различной чувствительности клеток-продуцентов этих цитокинов, к действию MTX. В свою очередь, различия в такой чувствительности могли быть обусловлены особенностями экспрессии'фолатных рецепторов на поверхности данных клеток: макрофагах и ДК (для ИЛ-12), ТхГ (для уИФН) и Тх2 (для ИЛ-4). Правомочность подобного предположения подтверждается сведениями [291] о неравномерном распределении одного из подтипов фо-латных рецепторов (FR-4) на мембранах регуляторных Т-лимфоцитов, позволяющим идентифицировать по этому признаку их различные субпопуляции. Результаты наших исследований свидетельствуют о том, что наибольшую чувствительность к действию MTX проявляет Тх1-субпопуляция лимфоцитов. Существенно, что это заключение, основывающееся на данных о продукции цитокинов, находится в полном соответствии с результатами оценки влияния MTX на способность донорских спленоцитов к индукции РТПХ.

Разумеется, МТХ-индуцированная иммуносупрессия in vivo не ограничивается прямым воздействием цитостатика лишь на систему иммунитета. В условиях целостного организма основу такой супрессии составляют и другие механизмы, связанные, в частности, с общетоксическим эффектом MTX при использованной дозе (10 мг/кг) и способе его применения. Мы полагаем, что следствием общетоксического влияния явилось нарушение сформировавшегося вакцинального иммунитета ввиде снижения уровня антител к столбнячному анатоксину у иммунизированных животных после воздействия MTX. Очевидно, что при таком воздействии реализуются и другие факторы, способные оказать супрессивный эффект на систему иммуногенеза. В этом отношении несомненного внимания заслуживает оценка состояния гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы (ГГАКС) и ее участия в развитии «химического стресса». Тем более, что глюкокортикоиды способны не только индуцировать апоптоз, но и повышать конститутивную продукцию су-прессорного цитокина (ИЛ-10) моноцитами [236].

Возвращаясь к вопросу о механизме (ах) протективного влияния милиацина, мы полагаем, что это влияние обусловлено его антиоксидантными свойствами. В этой связи важно отметить, что антиоксидантная активность является одним из достаточно распространенных проявлений биологических свойств тритерпеноидов [158; 295], которая?определена у ряда из них, включая агликон глицирризина: 18р-глицирретиновую кислоту [195], каффеоловую кислоту [150], азиатскую кислоту [179], уросоловую и олеаноловую кислоты [220; 251], дипептид бетулоновой кислоты [124] и др. Проявлением такого защитного влияния служит уменьшение редукции внутриклеточного пула восстановленного глутатиона и лимитирование падения активности ферментных систем антиоксидантной защиты: супероксиддисмутазы, катала-зы, глутатион-Б-трансферазы, глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы [225; 229]; снижение накопления в клетке вторичных радикалов (липидных перекисей) и диеновых конъюгатов [259]; уменьшение генерации и активности супероксид-анион-радикала: Ог [195; 279] и гидроксильного радикала: ОН" [178]. О потенциальной мощности антиоксидантной активности тритер-пеноидов свидетельствует возможность проявления их ингибирующего действия даже в отношении АФК (Ог и Н2О2), индуцированных в лейкоцитах при стимуляции последних форбол-12-миристат-ацетатом [204].

Исследование механизмов антиоксидантного действия тритерпеноидов показало, что они могут быть связаны с индукцией в клетке ARE (antioxidant responsive-element). Такая способность установлена, в частности, для синтетического аналога олеановой кислоты — CDDO [216; 283; 300; 301; 302], активирующего редокс-чувствительный фактор транскрипции Nrf-2 (nuclear respiratory factor). В основе этой активации лежит снижение под влиянием CDDO ингибирующего действия негативного регулятора ARE - Кеар 1 [302], ассоциированного с Nrf-2 в редокс-чувствительный комплекс, функционирование которого зависит от соотношения окисленных и восстановленных тио-лов. Диссоциация данного комплекса служит необходимым условием для транслокации молекул Nrf-2 в ядро и последующего связывания с рецептор-ным сайтом (ARE) в ДНК, усиливающим транскрипцию соответствующих генов. Сегодня ARE рассматривают как важный регулятор редокс-баланса в клетках и индуктора защитных механизмов при окислительном стрессе [60]. Белки многих, контролируемых ARE генов относятся, к числу выполняющих или непосредственно защитную роль (микросомальная- гемооксигеназа, тиоредоксин, селеновая глутатионпероксидаза-2, глутатионредуктаза), или восполняющих уровень расходуемых низкомолекулярных интермедиатов (цис-тин-глутамат-транспортная система), или обеспечивающих репаративную функцию важнейших макромолекул в клетке в ситуациях с нарушением клеточного редокс-баланса. Последнее, в частности, проявляется участием системы Nrf-2 - ARE в регуляции транскрипции митохондриальной ДНК, её стабилизации и инициации репликации в условиях действия эндогенных и экзогенных повреждающих агентов [26]. Именно поэтому фактор Nrf-2 и контролируемая им сеть ARE-регулирующих генов рассматривается как универсальная система клеточной защиты в условиях оксидативного стресса.

Таким образом, важнейшей особенностью антиоксидантной защиты при участии системы Nrf-2 — ARE является её комплексный характер, не ограничивающийся повышением уровня антиоксидантных механизмов или нейтрализацией возникающих в ходе свободнорадикального окисления» токсичных соединений. Эта защита осуществляется на разных уровнях, с включением-разных структур, в том числе не связанных с прямым антиоксидантным действием [60].

Что касается антиоксидантной активности милиацина, то она выражается в его способности ограничивать выраженность перекисного окисления ли-пидов (в условиях стресса) и, соответственно, обеспечивать менее значимое накопление в крови продуктов липопероксидации, способных вовлекаться в дальнейшие реакции окисления in vitro при использовании двухвалентного железа [75; 76; 115]. Однако этот эффект не был связан с отменой или с ослаблением генерации АФК, индуцированной в модельных экспериментах перекисью водорода [76; 77]. Это означает, что в отличие от CDDO антиокси-дантное действие милиацина не связано напрямую с системой-Nrf-2 - ARE, а реализуется при участии других механизмов. Одним из таких механизмов может служить повышение устойчивости клеточных мембран к повреждающему действию АФК и продуктам липопероксидации за счет встраивания милиацина (в силу его гидрофобности) в липидный бислой мембраны. Очевидно, что такое встраивание способно экранировать полиненасыщенные жирные кислоты от атаки радикал-частицами и (или) укреплять прочность упаковки фосфолипидов мембран, противодействуя детергентоподобным эффектам. Последнее было продемонстрировано A.B. Кирилловой (2004), установившей защитное влияние милиацина на развитие гуморального иммунного ответа в условиях действия на организм детергента (твина 21; 1,6 х 10"6 моль/кг). Мембранотропное действие милиацина способно определять его протекцию и в отношении дексаметазониндуцированного апоптоза лимфоцитов [74], поскольку апоптогенное влияние глюкокортикоидов также связано с реализацией оксидативного стресса [34; 268].

Таким образом, оказывая модифицирующее воздействие на липидные компоненты мембран, милиацин выступает как «структурный мембранопро-тектор», способный в условиях генерации АФК предупреждать (ограничивать) развитие апоптоза иммунокомпетентных клеток и поддерживать жидкостные характеристики их мембран на уровне, обеспечивающем необходимую активность мембраносвязанных процессов.

В рамках данной работы определенный интерес представляет вопрос о влиянии милиацина и на процесс восстановления клеточных и функциональных параметров иммунной системы после воздействия MTX. Полученные результаты свидетельствуют о том, что использование тритерпеноида обусловливало не только меньшую продолжительность этого процесса, но и проводило к повышению некоторых показателей: гиперцеллюлярность костного мозга, усиление нейтрофилопоэза, лимфопоэза, продукции ИЛ-4. При анализе такой ситуации безусловного внимания заслуживает оценка изначальной выраженности формирующихся нарушений, которые у животных, подвергавшихся* воздействию MTX без последующего применения милиацина, были более глубокими, чем в условиях его применения. Соответствующий вывод заключается в том, что меньшая степень депрессии исследуемых показателей определяла в последующем и меньшую продолжительность их восстановления. Вместе с тем интенсивность подобной «регенерации» при использовании милиацина могла обусловливаться и непосредственным влиянием тритерпеноида на восстановление клеточных популяций в органах системы иммунитета и ее функциональную активность. В пользу этого свидетельствуют данные о способности милиацина стимулировать лимфопоэз, увеличивать целлюлярность лимфоидных органов (тимуса и селезенки у крыс и селезенки у мышей), повышать уровень гуморального и клеточного (ГЗТ) иммунного ответа [43; 44; 46; 50; 72; 73]. Исследование механизмов, посредством которых милиацин вызывает эти сдвиги, позволило связать их с его способностью ослаблять антигениндуцированную супрессию и усиливать продукцию цитокинов — ИЛ-1 [113]. Существенно, что реализация этих механизмов могла быть также обусловлена мембранотропными свойствами тритерпеноида. Такое заключение находится в русле современных представлений при оценке влияния- тритерпеноидов, на систему иммунитета [57; 93; 94; 297], исходящих из их способности вызывать изменения структурно-функциональных свойств клеточных мембран. Модифицирующее действие тритерпеноидов на клеточные мембраны приводит к изменению ионного го-меостаза, к увеличению транспорта, в первую очередь ионов и малых молекул, к изменению вязкости мембран, что, очевидно, индуцирует трансмембранные сигналы, модулирует активность клеточных сигнальных систем (JNK, ERK, Nf-kB), ответственных за деление, дифференцировку и апоптоз иммунокомпетентных клеток [292; 305]. Вопрос о проявлении таких эффектов при использовании милиацина остается открытым и может быть предметом дальнейших исследований.

В целом, полученные в работе данные о протективном влиянии милиацина в отношении:лимфотоксичности МТХ и его ингибирующего влияния на I функциональную активность иммунной системы определяет новые возможности ограничения иммунодепрессивного эффекта цитостатической'терапии, повышение эффективности иммунореабилитации после ее проведения, а также поддержание иммунологической и эпидемиологической эффективности вакцинопрофилактики при экологическом неблагополучии, обусловленном заражением среды химическими факторами.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Железнова, Алла Дмитриевна, 2010 год

1. Автандилов Г.Г. Морфометрия в патологии. М.: Медицина. 1973. - 248с.

2. Алмазов В.А. Клиническая патофизиология / В.А. Алмазов, H.H. Петрищев, Е.В. Шляхто, Н.В. Леонтьева. Гл. 6. Патофизиология системы крови. М.: ВУНМЦ. - 1999. - С. 363 - 368.

3. Амосов A.C., Литвиненко В.И. Тритерпеноиды растений родов Glycyrrhiza L. и Meristotropis Fisch, et Mey. // Химико фармацевтический журнал. -* 2003.-Т. 37.- №2.-С. 31-42.

4. Амченкова A.M. Способность фузикокцина индуцировать выработку раннего интерферона / A.M. Амченкова, А.Н. Наровлянский, С.Б. Чекнев, Л.М. Бартова, H.H. Кулагина // Журнал микробиологии, эпидемиологии и, иммунобиологии. — 2005. № 4. — С.80 - 82.

5. Андреева Л.И. Биохимические механизмы' апоптоза / Л.И. Андреева, Л.И.Иванова, М.В. Титова, B.C. Петрова. Глава 3 // В кн.: Программированная клеточная гибель / Под ред. проф. B.C. Новикова. С-Пб.: Наука, 1996.-С. 51-71.

6. Андронова Т.М., Пинегин Б.В. Мурамилдипептиды иммунотропные лекарственные средства нового поколения // Венерология. — 2006. - № 6. — С.11 -15.

7. Арушанян Э.Б. Участие эпифиза в антистрессовой защите мозга // Успехи физиологических наук. — 1996. Т. 27. - № 3. - С. 31 - 46.

8. Арушанян Э.Б., Бейер Э.В. Временная организация деятельности иммунной системы и участие в ней эпифиза // Успехи физиологических наук. -2006. Т. 37. - № 2. - С. 3 - 10.

9. Атауллаханов Р.И. Повышение иммуногенности белковых антигенов путем конъюгации с иммуномаксом / Р.И. Атауллаханов, A.B. Пичугин, Т.М.Меленилова, P.M. Хаитов // Иммунология. 2008. - Т. 29. - № 6. -С.334-337.

10. Афонина Г.Б. Влияние «окислительного стресса» на рецепторы лимфоцитов // Всесоюзная конференция «Стресс и иммунитет (психонейроимму-нология)»: Тез. докл. Ростов н/Д, 31 августа - 1 сентября 1989г. - 1989. -С. 104-105.

11. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Фолиевая кислота // В кн.: Биологическая химия. Издание третье, перераб. и доп. М.: Медицина. 1998. - С.230-232.

12. Биохимия. Учебник для вузов / Под ред. Чл. Корр. РАН проф. Е.С. Северина. Изд-е 3-е. Глава 8.Б. Обмен серосодержащих аминокислот. М.: ГЭОТАР - МЕДИА. - 2005. - С. 499 - 504.

13. Борсук О.С. Механизмы иммунотропного влияния экстракта^корней алтея / O.G. Борсук, Н.В. Масная, Е.Ю. Шерстобоев, Н.В: Исайкина, Г.И. Калинкина // Вестник Уральской медицинской академической науки. — 2009. -№2/1. -С. 199-200.

14. ВеличковскийБ.Т. Экологическая пульмонология (роль свободноради-кальных процессов). Екатеринбург. — 2001. - 86с.

15. Владимиров Ю.А. Свободнорадикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран // Биофизика. — 1987. — Т. XXXII. № 5. - С. 830 - 844.

16. Владимиров Ю.А. Роль нарушений свойств липидного слоя мембран в развитии патологических процессов // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1989. - № 4. — С. 7 — 19.

17. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестник РАМН. 1998. - № 7. - С. 43-51.

18. Владимирская Е.Б. Механизмы апоптотической смерти клеток // Гематология и трансфузиология 2002. — Т. 47. - № 2. - С. 35 - 40.

19. Владимирская Е.Б. Апоптоз в регуляции клеточного равновесия-и формировании опухолевого роста // Вопросы гематологии, онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2003. — Т. 2. - № 7. — С. 5 — 11.

20. Воронцов И.Н. О математическом описании и исследовании закономерностей функционирования цикла фолиевой кислоты / И.Н.Воронцов, М.М.Грешилов, А.К. Белоусова, Г.К. Герасимова // Биохимия. 1980. — Т. 45.-№ 1.-С. 83 -97.

21. Гаврилова Т.В. Иммунокоррекция нарушений функций иммунной системы при проникающем ранении глаза (экспериментальные исследования): Автореф. дис. . д ра мед. наук. - Екатеринбург, 2006. - 68с.

22. Газиев А.И., Шайхаев Г.О. Повреждение митохондриального генома и пути его сохранения // Генетика. 2008. — Т. 44. - № 4. - С. 437 - 455.

23. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Карпова Г.В. Роль лимфоцитов в регуляции гемопоэза. Томск: Изд-во Томского ун-та. — 1983. — 158с.

24. Гольдберг Е.Д. Справочник по гематологии. Томск: Изд-во Томского унта.- 1989.-С. 337-343.

25. Гольдберг Е.Д. Динамическая теория регуляции кроветворения / Е.Д. Гольдберг, A.M. Дыгай, В.В. Жданов, И.А. Хлусов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1999. - Т. 127. - № 5.-С.484-494.

26. Гординская H.A. Влияние иммунопрепаратов на течение инфекции при экспериментальной термической травме // Иммунология. 2008. - № 4. -С. 212-213.31 .Горизонтов П.Д., Белоусова О.И., Федотова М.И. Стресс и система крови. : М.: Медицина. 1983. - 240с.

27. Долгушин И.И., Бухарин О.В. Нейтрофилы и гомеостаз. — Екатеринбург: Уро РАН.-2001.-278с.

28. Зимин Ю.И., Хаитов P.M. Миграция Т-лимфоцитов в костный мозг в начальный^ период стресс-реакции // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1975. - Т.80. - № 12'. - С. 68 - 70.

29. Игнатьева Г.А. Иммунная система и патология // В кн.: «Актуальные проблемы патофизиологии» (избранные лекции) / Под ред. академика РАМН Б.Б. Мороза. -М.: Медицина, 2001. С. 57 - 121.

30. Ильичева Т.Н. Иммуностимулирующая активность тритерпеноидов растительного происхождения и их производных / Т.Н. Ильичева, Т.Р.Проняе-ва, Э.Э. Шульц, Г.А. Толстиков, А.Г. Покровский // ЖМЭИ. 2001. - № 2. -С. 53 -56.

31. Каральник Б.В., Маркова С.Г. Экологические аспекты АКДС-вакцинации // ЖМЭИ. 1991. - № 12. - С. 34 - 38.

32. Кетлинский С.А., Симбирцев A.C. Цитокины. С-Пб.: Фолиант. - 2008. -552с.

33. Кириллова A.B. Стимуляция иммунитета к столбнячному анатоксину ми-лиацином / A.B. Кириллова, М.В. Скачков, Т.В. Панфилова, С.Д. Борисов, И.П. Медведева, Б.А. Фролов // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. -2003.-№6.-С. 36-38.

34. Кириллова A.B., Корнеев Г.И. Влияние милиацина на морфофункцио-нальные особенности клеточных популяций периферической крови и лимфоидных органов // Морфология. — 2003. — Т. 124. № 5. - С. 54.

35. Кириллова A.B. Иммунотропная активность милиацина. Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Пермь, 2004. — 22с.

36. Клепикова С.Ю. Изучение иммунотропности полифункциональных водорастворимых антиоксидантов in vitro / С.Ю. Клепикова, О.П. Колесникова, А.Е. Просенко, Н.В. Кандалинцева // Медицинская- иммунология. — 2008. Т. 10. - № 2-3. - С. 269 - 272.

37. Ковальчук JI.B. Система цитокинов, комплемента и современные методы иммунного анализа / JI.B. Ковальчук, JI.B. Ганковская, М:В. Хорева, Е.В.4 Соколова. М.: Изд-во РГМУ. - 2001. - 158с.

38. Кузнецов В.П. Иммунокорригирующая терапия препараты и перспективы / В.П: Кузнецов, Д.И. Беляев, A.A. Бабаянц, Е.В. Маркелова, Г.А.Смирнов, С.Ю. Кузнецова // Российский журнал иммунологии. — 2000. - Т. 5. -№2.-С. 165- 176.

39. Кукес В.Г., Стародубцев А.К. Клиническая фармакология цитостатиков // Bf кн.: Клиническая фармакология, ш фармакотерапия: Учебник для,вузов. Ml: Изд-во ГЭОТАР-Медиа. 2003. - С. 441 - 442.

40. Лакин Г.Ф. Биометрия: учеб. пособие для спец. вузов. 4-е изд., перераб. и доп. - М.: Высшая школа. — 1990. — 352с.

41. Лебедева С.Н., Хребтовский М.А. Экспериментальная оценка состоянияиммунной системы организма в условиях иммунодефицита и коррекциирастительным экстрактом // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). -2006. № 5. - С. 69 - 72.

42. Лихацкая Г.Н. Механизмы взаимодействия тритерпеновых и стероидных: гликозидов с липидными мембранами. Автореф. дисс. . канд. физ.-мат. наук. Владивосток, 2006. — 24с.

43. Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю. Гибель клетки (апоптоз). М.: Медицина.-2001.-С. 87-109.

44. Лю Б.Н., Лю М.Б. Кислородно-перекисная концепция апоптоза: повышение уровня аргументации и развития*// Успехи современной биологии. — 2005. Т. 125. - № 6. - С. 567 - 578.

45. Ляхович В.В. Активная защита при окислительном стрессе. Антиоксидант респонсивный элемент / В.В. Ляхович, В.А. Вавилин, Н.К. Зенков,

46. Е.Б. Меныцикова // Биохимия. 2006. - Т. 71. - № 9. - С. 1183 -1197.

47. Машковский М.Д. Лекарственные средства (пособие по фармакотерапии для врачей). Издание десятое. М.: Медицина. 1987. - Т. 2. - С. 451 - 452.

48. Меерсон Ф.З. Адаптация, стресс и профилактика. — М.: Наука, 1981.-280с.

49. Меньшикова Е.Б. Окислительный стресс при воспалении / Е.Б. Меньшикова, Н.К. Зенков, В.З. Ланкин, И.А. Бондарь, В.А. Труфакин // Окислительный стресс. Патологические состояния и заболевания. Новосибирск: АРТА.-2008 — С. 13 36.

50. Молочков В.А. Псориаз и псориатический артрит / В.А. Молочков, В.В. Бадокин, В.И. Альбанова, В.А. Волнухин. М.: Изд-во: Товарищество научных изданий КМК. - 2007. - 332с.

51. Новиков B.C. Молекулярные механизмы инициации клеточной гибели /• B.C. Новиков, Д.В. Булавин, В.Н. Цыган. Глава 2 // В кн.: «Программированная клеточная гибель» / Под ред. проф. B.C. Новикова. С-Пб.: Наука, -1996.-С. 30-55.

52. Павлова М.М. Изучение влияний адаптивного стероида проса (3-(31Я• метокси-А 0000) при токсическом поражении печени CCI4 в эксперименте. Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Оренбург, 1984. - 21с.

53. Павлова С.И. Флавоноиды корня солодки- подавляют индуцированную in vitro и in*vivo-пролиферацию лимфоцитов / С.И. Павлова, И.В. Гладков,

54. A.A. Кягова, И.Г. Козлов // Российский иммунологический журнал. -2007. Т. 1 (10). - № 3-4. - С. 279 - 282.

55. Павлова С.И. Флавоноиды корня солодки и функции фагоцитов / С.И. Павлова, P.C. Насибов, М.А. Тимаков, П.Ю. Малышев, И.Г. Козлов // Вестник Уральской медицинской академической науки. 2009. - № 2/1. -С. 50 - 52.

56. Панфилова Т.В. Милиацин и клеточный иммунный ответ / Т.В. Панфилова, A.B. Кириллова, Б.А. Фролов // Матер. II Российского конгресса по патофизиологии, 9 12 октября 2000г. -М. - 2000. - С. 152 - 153.

57. Панфилова Т.В. Тритерпеноид милиацин снижает индуцированное стрессом ПОЛ / Т.В. Панфилова, A.A. Штиль, Б.А. Фролов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2006. — Т. 141. - № 6. — С. 633-635.

58. Першин Б.Б. Изучение механизма феномена исчезающих иммуноглобулинов при стрессе в эксперименте / Б.Б. Першин, Б.А. Емельянов, Я.А. Соколов, С.Н. Кузьмин // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1987.-№ 5. С. 41 -44.

59. Першин- Б.Б. Реакции иммунной системы на физические нагрузки / Б.Б.Першин, А.Б. Гелиев, Д.В. Толстов, JI.B. Ковальчук, В.Я: Медведев // Русский журнал иммунологии. — 2002. Т. 7. -№ 1. — С. 1 - 24:.

60. Петров Р.В., Манько В.М. Иммунодепрессоры (Справочник). М.: Медицина. 1971.-300с.

61. Петров Р.В. Иммунология и иммуногенетика.- Глава XI: Реакция «трансплантат против хозяина». М.: Медицина. 1976. - С. 190 - 2031

62. Петров Р.В. Миграция Т- и В-лимфоцитов / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, В.М. Манько, A.A. Михайлова. Глава 6 // В кн.: Контроль и регуляция иммунного ответа. М;: Медицина. 1981. - С. 93 - 102.

63. Мазуров, C.B. Домбаева // Иммунология. 2000. - № 5. - С. 24 - 28.

64. Петров P.M. Нановакцины и аллерготропины / P.M. Петров, P.M. Хаитов, А.И. Мартынов // Международный форум по нанотехнологиям «Rusnatech 2008». Сб. тезисов докладов научно-технологических секций; — М:, 2008. -С. 97.

65. Пинегин Б.В., Карсонова М.И. Макрофаги: свойства и функции // Иммунология. 2009. - № 4. - С. 241 - 249:

66. Пичугина JI.B., Пинегин Б.В. Диагностика нарушений в Thl-цитокиновой системе // Физиология и патология * иммунной системы. — 2005. — Т. 9. -№8.-С. 11-18.

67. Плетнева Т.В. Биокинетические параметры, показателей токсичности высоких доз метотрексата / Т.В. Плетнева, Н.С. Степанова, В1Н. Байкова, К.А. Кошечкин // Вестник Российского ун-та дружбы народов. Сер. Мед. —2008. -№3.- С. 10- 13.

68. Плиев Б.К. Хемотаксически активные белки нейтрофилов (обзор) // Биохимия. 2008. - Т. 73. -№ 9: - С. 1206 - 1223.93;Попов A.M. Изучение иммуномодулирующей активности* тетрацикличе-ских тритерпеновых гликозидов даммаранового и голостанового ряда /

69. A.M. Попов, JI.H. Атопкина, Н.Ф. Самошина, Н.И. Уварова // Антибиотики и химиотерапия. 1994. - Т. 39. - № 9-10. - С. 19 - 25.

70. Попов A.M. Механизмы биологической активности гликозидов женьшеня: сравнение с гликозидами голотурий // Вестник ДВО РАН. — 2006. № 6. — С. 92-104.

71. Савилов Е.Д. Теоретические аспекты управления инфекционной заболеваемостью в условиях техногенного загрязнения окружающей среды // Бюлл. СО РАМН. 2008. - № 1. - С. 43 - 46.

72. Сейфулла Р.Д. Антиоксиданты / Р.Д. Сейфулла, Е.А. Рожкова, Е.К. Ким // Экспериментальная и клиническая фармакология. — 2009. Т. 72. - № 3. — С. 60 - 64.

73. Семичева Т.В., Гарибашвили А.Ю. Эпифиз: современные данные о физиологии и патологии // Проблемы эндокринологии. Т. 46. - № 4. - 2000. -С. 38-44.

74. Сенцова Т.Б. Иммуномодуляторы в общеврачебной практике // Consil. med. 2006. - V. 8. - № 10. - P. 25 - 26.

75. Сидорова Е.В. Субпопуляции B-лимфоцитов и их функциональная роль // Успехи современной биологии. 2002. - Т. 122. - № 5. - С. 467 - 479.

76. Сидорова Е.В. Что нам известно сегодня о В-клетках // Успехи современной биологии. 2006. - Т. 126. - № 3. - С. 227 - 241.

77. Симбирцев A.C. Клиническое применение препаратов цитокинов (обзор) //Иммунология. -2004.-Т. 25. -№4.-С. 247-251.

78. Ставровская A.A. Механизмы лекарственной устойчивости опухолевых клеток. Глава 13 // В кн.: Канцерогенез / Под ред. Д.Г. Закаридзе. М.: Медицина. - 2004. - С. 558 - 574.

79. Ткаченко И.В. Аллергенные и иммунотропные свойства молекулярного-' комплекса: дрожжевая- РНК тилорон гидрохлорид / И:В. Ткаченко, Е.Г.Гаркавая, A.B. Карпов // ЖМЭИ. - 2006. - № 2. - С. 70 - 74.

80. Трахтенберг И.М. Проблемы нормы в токсикологии (Современные представления и методические подходы, основные параметры и константы) / И:М. Трахтенберг, P.E. Сова, В.Д. Шефтель, Ф:А. Оникиенко / Под ред. И.М. Трахтенберга. М.: Медицина. - 1991. - 208с.

81. Третьяк Е.Б. Традиционные схемы терапии аутоиммунных увеитов с использованием препаратов широкого спектра действия / Е.Б. Третьяк, И.Н. Ефремов, A.A. Рябцева, C.B. Сучков // РМЖ. 2002. - Т. 3. - № 4. - С. 169 -173.

82. Труфакин В.А. Пространственно-временная организация лимфоидной системы / В.А. Труфакин, А.Ю. Летягин, A.B. Шурлыгина // Бюллетень СО РАМН. 1993. - № 2. - С. 12 - 20.

83. Турпаев-К.Т. Активные формы кислорода и регуляция экспрессии генов // Биохимия. 2002. - Т. 67. - № 3. - С. 339 - 352:

84. Урбах В;Ю: Статистический анализ в биологических и медицинскихисследованиях. М.: Медицина. 1975.

85. Фролов Б.А., Панфилова Т.В. Иммунопротекторные эффекты милиацина // Материалы объединенного иммунологического форума. — Екатеринбург. •— 2004. — Русский иммунологический журнал. — 2004. № 9 (1). — С. 42.

86. Хаитов P.M. Экологическая иммунология / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин,- Х.И. Истамов М.: Изд-во ВНИРО. 1995. - 219с.

87. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Основные представления об иммунотропных лекарственных средствах // Иммунология. — 1996. № 6. — С. 4 — 9.

88. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В. Основные принципы иммуномодулирующей терапии // Аллергия, астма и клиническая* иммунология. — 2000а: №1. -С.,44 - 45.

89. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Современные иммуномодуляторы: основные принципы их применения // Иммунология. 20006. - № 5. — С. 4—7.

90. Хаитов P.M. Иммунология (учебник для студентов мед. вузов) / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович. М.: Медицина. - 2000в. - 432с.

91. Хаитов P.M. Иммунология: учебник для студентов мед. вузов. М.: ГЭО-ТАР Медиа. - 2006. - 320с.

92. Хобракова В.Б., Нагаслаева О.В. Иммуномодулирующие свойства сухого экстракта «Иммунополифит» // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). 2006. - № 5. - С. 72 - 74.

93. Чайникова И.Н., Смолягин А.И: Цитокины в инфекционном процессе, вызванном сальмонеллами // Вестник ОГУ. 2006. - № 12. - С. 35 - 42.

94. Чекман И.С. Справочник по клинической фармакологии.и»фармакотерапии / Подфед. проф. И.С. Чекмана, проф: А.П: Полещука, проф: O.A. Пятака. Киев: «Здоров'я». 1986. - С. 482 - 483.

95. Черешнев В.А. Экология и иммунитет патофизиологические аспекты /

96. B.А. Черешнев, H.H. Кеворков; Б.А. Бахметьев, М.Б. Раев, Ю.И.Шилов,

97. C.Ширшев // Второй Российский симпозиум по патофизиологии с международным участием, 9—12 октября 2000г. М., 2000. — G. 158.

98. Черешнев В.А., Гусев Е.Ю. Системное воспаление как иммунопатобио-логический феномен // Цитокины и воспаление. — 2002. — Т. 1. № 2.-С.17.

99. Черешнев В.А. Иммунные механизмы воспаления // Материалы международного конгресса «Иммунитет и болезни: от теории к терапии». М., 3-8 октября 2005. АДАИР. - 2005. - Т. 6. - № 5(приложение). - С. 154 - 155.

100. Черешнев В.А. Влияние препарата «Профеталь» на функциональную активность мононуклеарных лейкоцитов и дендритных клеток человека /

101. B.А. Черешнев, О.В. Лебединская, С.Ю: Родионов, Н.К. Ахматова, И.Ж. Шубина,, Е.А. Лебединская, Т.В. Гаврилова, М.В. Киселевский // Медицинская иммунология. 2005: - Т. 7. - № 5-6. — С. 525 — 534.

102. Черешнев В.А. Иммуномодулирующее действие препарата «Профеталь» -на мононуклеарные лейкоциты периферической крови- человека и генерированные из них дендритные клетки / В.А. Черешнев, О.В. Лебединская,

103. C.Ю. Родионов, Н.К. Ахматова, И.Ж. Шубина, Е.А. Лебединская, Т.В .Гаврилова, М.В. Киселевский // Иммунология. 2006. - Т. 27. ■ № 3: -С. 132-140.

104. Штиль A.A. Эпигенетическая регуляция множественной лекарственной• устойчивости в опухолевых клетках: передача сигналов, транскрипционная активация и возможности профилактики // Успехи современной биологии. 2001. - Т. 121. - № 6. - С. 563 - 575.

105. Юшков В.В. Иммунокорректоры: руководство для врачей и провизоров / В.В. Юшков, Т.А. Юшкова, A.B. Казьянин. Екатеринбург: ООО «ИРА УТК».-2002.-255с.

106. Ярилин A.A., Пинчук В.Г., Гриневич Ю.А. Структура тимуса и диффе-ренцировка лимфоцитов / A.A. Ярилин, В.Г. Пинчук, Ю.А. Гриневич. -Киев: Наукова Думка. 1991. -248с.

107. Ярилин A.A. Апоптоз и его место в иммунных процессах // Иммунология. 1996. -№ 6. - С. 10-23.

108. Ярилин A.A. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1998. -№ 2.-С. 38-48.

109. Ярилин A.A. Основы иммунологии. М.: Медицина. 1999. - 608с.

110. Эшман Р.Ф. Активация лимфоцитов (R.F. Ashman). Глава 12 // В кн.: Иммунология / Под ред. У. Пола.: Пер.с англ. в 3 томах. М.: Мир. 1987. -Т. 1.-С. 414-468.

111. Babiak R.M. Methotrexate, pentose cycle and oxidative stress / R.M.Babiak, A.P. Campello, E.G. Carnieri, M.B. Oliveira // Cell. Biochem. Funct. 1998. -V. 16.-№4.-P. 283 -293.

112. Barsig J. Methotrexate treatment suppresses local cytokine and chemokine production in rat adjuvant arthritis / J. Barsig, G. Yam, M.D. Lehner, R.Beume // Drugs Exp. and Clin. Res. 2005. - V. 31. - № 1. - P. 7 - 11.

113. Baughman R.P., Lower E.E. Steroid-sparing alternative treatments for sarcoidosis // Clinics in Chest Medicine. 1997. - V. 18. - № 4. - P. 853-864.

114. Behboudi S. In vitro activation of antigen-presenting cells (APC) by defined composition of Quillaja,saponaria Molina triterpenoids / S. Behboudi, B. Mo-rein, M. Villacres-Eriksson // Clin. Exp. Immunol. 1996. - V. 105. - № 1. - P. 26 - 30.

115. Biswal B.K., Verma R. S. Differential, Usage of the Transport Systems for Folic acid and Methotrexate in Normal Human T-Lymphocytes and Leukemic Cells // J. Biochem. 2009. - V. 146. - № 5. - P. 693 - 703.

116. Bong-Sik Y. Two Bioactive Pentacyclic Triterpene Esters from the Root Bark of Hibiscus syriacus / Y. Bong-Sik, R. In-Ja, L. In-Kyoung, P. Kyu-Hwan, C. Dong-Ho, H. Kyou-Hoon, Y. Ick-Dong // J. Nat. Prod. 1999. - V. 62. - № 5.-P. 764-766.

117. Brennecke M., Resch K. Initial changes in* the turnover of fatty acids of individual phospholipids in*plasma-membranes of mitogen-stimulated'lymphocytes //Agents and Actions. 1984.-V. 15. -№ 1-2. -P. 30 -31.

118. Батчер Э.С., Вайссман И.Л. Лимфоидные органы и ткани (Е.С. Butcher, I.L. Weissman). Глава 6 // В кн.: Иммунология / Под ред.У. Пола.: Пер. с англ. В 3 т. М.:Мир.-1987.-Т. 1.-С. 173-203.

119. Cetinkaya A. N-acetylcysteine ameliorates methotrexate-induced oxidative liver damage in rats / A. Cetinkaya, E. Bulbuloglu, E.B: Kurutas, B. Kantarce-ken // Medical, science monitor. 2006. - V. 12. - № 8. - P. 274 - 278.

120. Chavali S.R., Campbell J.B. Adjuvant effects of orally administered saponins on humoral and cellular immune responses in mice // Immunology. — 1987a. —1. V. 174.-№3.-P. 343 -359.

121. Chavali S.R., Campbell J.B. Immunomodulatory effects of orally administered saponins and nonspecific resistanse against rabies infection // Inf. Arch. Allergy Appl. Immunol. 1987b. - V. 84. - № 2. - P. 129 - 134.

122. Chavali S.R. Immunopotentiation by orally administered Quillaja saponins: effect in mice vaccinated intraperitoneally against rabies / S.R. Chavali, L.D. Barton, J.B. Campbell // Clin. Exp. Immunol. 1988. - V. 74. - № 3. - P. 339 - 343.

123. Choi Y.H. Pharmacokinetics of intravenous methotrexate in mutant nagase analbuminemic rats / Y.H. Choi, S.K. Bae, J.M. Oh, S.O. Kim, M.G. Lee // Bio-pharm. and Drug. Dispos. -2007. V. 28. - № 7. - P. 385-392.

124. Cronkite E.P., Fleidner T.M. Granulocytopoiesis // N. Engl. J. Med. 1964. -V. 270.-P. 1347-1451.

125. Deng W. Immunomodulatory activity of 3beta,6beta-dihydroxyolean-12-en-. 27-oic acid in tumor-bearing mice / W. Deng, H.X. Sun, F.Y. Chen, M.L.Yao // Chem. Biodivers. 2009. - V. 6. - № 8. - P. 1243 - 1253.

126. Dobrzanski M.J. Ag-specific type 1 CD8 effector cells enhance metho-trexate-mediated antitumor, responses by modulating endogenous CD49b-expressing CD41 and CD8 T effector cell subpopulations producing IL-10 /

127. M.J.Dobrzanski, J.B. Reome, J.C. Hylind, K.A. Rewers-Felkins, K. Abdul-samad, S.L. Adams // Immunol. Invest. 2008a.- V. 37. - № 4. -P.315-338.

128. Фаульхабер Г.Д. Иммуносупрессивные средства (H.D. Faulhaber) // В кн.: Иммуносупрессивная терапия / Под ред. Д. Нелиуса: Пер. с нем. Под ред. чл-корр. АМН СССР В .А. Насонова. М.: Медицина, 1984. С. 46 - 52.

129. Fotoohi AK, Albertioni F. Mechanisms of antifolate resistance and methotrexate efficacy kbleukemia cells // Leuk. Lymphoma. — 2008. V. 49. - № 3. -P. 410-426.

130. Gao J'. Hepatoprotective activity of Terminalia catappa L. leaves and its two. triterpenoids / J. Gao, X. Tang, H. Dou, Y. Fan, X. Zhao, Q: Xu // J. Pharm. Pharmacol.-2004.-V. 56. -№ 11.-P. 1449-1455.

131. Gao J. Mechanism underlying mitochondrial protection of asiatic acid against hepatotoxicity in mice / J. Gao, J. Chen, X. Tang, L. Pan, F. Fang, L.Yu, X.Zhao, Q. Xu // J. Pharm. Pharmacol. 2006. - V. 58. - № 2. - P. 227 - 233.

132. Гудвин Т., Мерцер Э. Введение в биохимию растений (Т. Geodwin, Е. Merzer). М.: Мир, 1988: Т.2. - С. 42 - 106.

133. Getman K.E., Balthasar J.P. Pharmacokinetic effects of 4C9, an anti-FcRn antibody, in rats: implications for the use of FcRn inhibitors for the treatment of humoral autoimmune and alloimmune'conditions // J. Pharm. Sei. 2005. -V.94.-№4.-P. 718-729.

134. Goodman M.G., Weigie W.O. Inhibition of lymphocyte mitogenesist by an arachidonic acid hydroperoxide // J. Supramol. Struct. — 1980. — V. 13. № 3. -P. 373-383.

135. Griffits H.R. ROS as T cells-evidence for abnormal redox signaling in the autoimmune disease, rheumatoid arthritis // Redox. Rep. 2005. - V. 10. - № 6. -P. 273-280.

136. Hickstein H. Prolonged survival of renal allograft in rats by methotrexate-albumin conjugates as immunosuppressive therapy / H. Hickstein, D. Wolff, J.Stange, E. Frei, G. Hartung // Transplant. Proc. 2008. - V. 40. - № 10. -P. 3725 - 3727.

137. Hong S.S. Enhanced systemic availability of methotrexate in the presence of morin in rats /S.S. Hong, M.J. Jin, H.K. Han // Biopharm. Drug. Dispos.2008.- V. 29.-№4.-P. 189- 193.

138. Jahovic N. Melatonin prevents methotrexate-induced hepatorenal oxidative injury in rats / N. Jahovic, H. Cevik, A.O. Sehirli, B.C. Yegen, G. Sener // J. Pineal. Res. 2003. - V. 34. - № 4. - p. 282 - 287.

139. Jerne N.K., Nordin A.A. Plaque Formation in Agar by Single Antibody-Producing- Cells // Science. 1963. - V. 140. - № 3565. - P. 405 - 407.

140. Kato S. Involvement of multidrug resistance-associated protein 1 in intestinal toxicity of methotrexate / S. Kato, K. Ito, Y. Kato, T. Wakayama, Y. Kubo, S.Iseki, A. Tsuji // Pharm. Res. 2009. - V. 26. - № 6. - P. 1467 - 1476.

141. Kelchtermans H. How interferon-gamma keeps autoimmune diseases in check / H. Kelchtermans, A. Billiau, P. Matthys // Trends in Immunology. 2008. -V. 29.-№ 10.-P.'479-486.

142. Khajuria A. Immunomodulatory effects of two sapogenins 1 and'2 isolated from Luffa cylindrica in Balb/C mice / A. Khajuria, A. Gupta, S. Garai, B.P.• Wakhloo // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2007. - V 17. - № 6. - P. 1608 - 1612.

143. Kinoshita S. Antioxidant and hepatoprotective actions of medicinal herb, Terminalia catappa L. from» Okinawa Island and its tannin corilagin / S. Kinoshita, Y. Inoue, S. Nakama, T. Ichiba, Y. Aniya // Phytomedicine. 2007. -V.14. - № 11.-P. 755-762.

144. Lateef O. Methotrexate pulmonary toxicity / O. Lateef, N. Shakoor, R.A.Balk // Expert. Opin. Drug. Saf. 2005. - V. 4. - № 4. - P. 723 - 730.

145. Лолор Г.-мл., Тэшкин Д. Бронхиальная астма (G.J. Lawior, D.P. Tashkin). Глава 7 // В'кн.: Клиническая иммунология и аллергология / Под ред. Г. Лолора-мл., Г. Фишера, Д.Адельмана. М.: Практика, 2000. С. 173 - 252.

146. Lee H.S. Morin protects acute liver damage by carbon tetrachloride (CC1(4)) in rat / H.S. Lee, K.H. Jung, S.W. Hong, I.S. Park, C. Lee, H.K.Han, D.H. Lee, S.S. Hong // Arch. Pharm. Res. 2008. - V. 31. - № 9. - P. 1160 - 1165.

147. Leite J.P.V. Trypanocidal activity of triterpenes from Arrabidaea triplinervia and derivatives / J.P.V. Leite, A.B. Oliveira, J.A. Lombardi, J.D.S. Filho, E.Chiari // Biol, and Pharm. Bull. 2006.-V. 29. - № 11. - P. 2307 - 2308.

148. Li J.P. Triterpenoid saponins and anti-inflammatory activity of Codonopsis lanceolata / J.P. Li, Z.M. Liang, Z. Yuan // Pharmazie. 2007. - V. 62. - № 6. -P. 463-466.

149. Liby K.T. Triterpenoids and rexinoids as multifunctional agents for the prevention and treatment of cancer / K.T. Liby, M.M. Yore, M.B. Sporn // Nat. Rev. Cancer. 2007. - V. 7. - № 5. - P. 357 - 369.

150. Lin C.M. Effect of dietary glutamate on chemotherapy-induced immunosuppression / C.M. Lin, S.F. Abcouwer, W.W. Souba // Nutrition. 1999. - V. 15. - № 9. - P. 687-696.

151. Lin S-P. Glycyrrhizin and Licorice Significantly Affect the Pharmacokineticsof Methotrexate in Rats / S-P. Lin, S-Y. Tsai, Y-C. Hou, C. P-D. Lee // J. Agric. Food Chem. 2009. - V. 57. - № 5. - P. 1854-1859.

152. Liu J. The effect of 10 triterpenoid compounds on experimental liver injury in mice / J. Liu, Y. Liu, Q. Mao, S.D. Klaassen // Fundam. Appl. Toxicol. 1994. -V. 22.-№ i.p. 34-40.

153. Logambal S.M., Michael R.D. Immunostimulatory effect of azadirachtin in Oreochromis mossambicus (Peters) // Indian. J. Exp. Biol. — 2000. — V. 38. — P. 1092 1096.

154. Lull Cr. Antiinflammatory and Immunomodulating Properties of Fungal Metabolites / Cr. Lull, HJ. Wichers, H.F.J. Savelkoul // Mediators of Inflammation. 2005. - № 2. - P. 63 - 80.

155. Люльман X. Наглядная фармакология / X. Люльман, К. Мор, Л. Хайн (Н. Lullmann, К. Mohr, L. Hein): Пер. с нем. М.: Мир, 2008. - С. 308 - 310.

156. Manna P. Protection of arsenic-induced hepatic disorder by arjunolic acid / P. Manna, M. Sinha, P.C. Sil // Basic. Clin. Pharmacol. Toxicol. 2007. - V. 101. - № 5. - P. 333-338.

157. Marinova E. Human germinal center T cells are unique Th cells with high propensity for apoptosis induction / E. Marinova, S. Han, B. Zheng // Int. Immunol. 2006. - V. 18.-№8.-P. 1337 — 1345.

158. Maroof A. Interleukin-4 can induce interleukin-4 production in dendritic cells / A. Maroof, M. Penny, R. Kingston, C. Murray, S. Islam, P.A. Bedford, S.C. Knight // Immunology. 2006. - V. 117. - № 2. - P. 271 - 279.

159. Mima T., Nishimoto N. Clinical value of blocking IL-6 receptor // Curr. Opin. Rheumatol. 2009. - V. 21. - № 3. - P. 224 - 230.

160. Moradali M.F. Immunomodulating and anticancer agents in the realm of mac-romycetes fungi (macrofungi) / M.F. Moradali, H. Mostafavi, S. Ghods, G.A. Hedjaroude // Int. Immunopharmacol. 2007. - V. 7. - № 6. - P. 701 -724.

161. Morein B. Iscom, a delivery system for parenteral and mucosal vaccination / B. Morein, M. Villacres-Eriksson, K. Lovgren-Bengtsson// Dev. Biol. Stand: -1998.-№92.-P. 33 39.

162. Morris E.S., Hill G.R. Advances in the understanding of acute graft-versus-host disease // Brit. J. Haematol. 2007. - V. 137. - № 1. - P. 3 - 19.

163. Moscow J.A. Methotrexate transport and resistance // Leuk. Lymphoma. -1998. V. 30. - № 3 - 4. - P. 215 - 224.

164. Mossman K.D. Altered TCR signaling from geometrically repatterned immunological synapses / K.D. Mossman, G. Campi, J.T. Groves, M.L. Dustin // Science.-2005.-V. 310. -№ 5751.-P. 1191-1193.

165. Mozo L. Glucocorticoids up-regulate constitutive interleukin-10 production by human monocytes / L. Mozo, A. Suarez, C. Gutierrez // Clin, and Exp. Allergy. 2004. - V. 34. - № 3. - P. 406 - 412.

166. Murphy W.J. Effects of growth hormone and prolactin immune development and function / W.J. Murphy, H. Rui , D.L. Longo // Life Sciences. 1995. -V. 57.-№ l.-P. 1 - 14.

167. Neto C.C. Cranberry and blueberry: evidence for protective effects against cancer and vascular diseases // Mol. Nutr. Food. Res. 2007. - V. 51. - № 6. -P. 652 - 664.

168. Neves C. The network of methotrexate toxicity / C. Neves, R. Jorge, A.Bar-celos // Acta. Reumatol. Port. 2009. - V. 34. - № 1. - P. 11 - 34.

169. Novo C. Altered fatty acid membrane composition modifies lymphocyte localization in vivo / C. Novo, E. Fonseca, A.A. Freitas // Cell. Immunol. 1987. -V. 106.-№2.-P. 387-396.

170. Obata F. Hydrogen peroxide increases interleukin-12 p40/p70 molecular ratio and induces Th2-predominant responses in mice / F. Obata, A. Hoshino, A. To-yama // Scand. J. Immunol. 2006. - V. 63. - № 2. - P. 125 - 130i

171. Ojewole J.A. Analgesic, anti-inflammatory and hypoglycaemic effects of Rhus chirindensis (Baker F.) Anacardiaceae. stem-bark aqueous extract in• mice and rats // J. Ethnopharmacol. 2007. - V. 113. - № 2. - P. 338 - 345.

172. Phillips M. Pharmacokinetics of glucarpidase in subjects with normal and impaired renal function / M. Phillips, W. Smith, G. Balan, S. Ward // J: Glin. Pharmacol. 2008. - V. 48. - № 3. - P. 279 - 284.

173. Pillans P. Immunosuppressants — mechanisms of action and monitoring // Austral. Prescriber. 2006. - V. 29. - № 4. - P. 99 - 101.

174. Rajput Z.I. Adjuvant effects of saponins on animal immune responses / Z.I. Rajput, S.H. Hu, C.W Xiao., A.G. Arijo // J. Zhejiang. Univ. Sci. B. -2007. -V. 8. № 3. - P. 153- 161.

175. Raphael T.J., Kuttan G. Effect of naturally occurring triterpenoids glycyr-rhizic acid, ursolic acid and nomilin on the immune system // Phytomedicine. -2003.-V. 10.-№6-7.-P. 483 -489.

176. Raphael T.J., Kuttan G. Effect of naturally occurring triterpenoids ursolic acid and glycyrrhizic acid on the cell-mediated immune responses of metastatic tumor-bearing animals // Immunopharmacology Immunotoxicology 2008. -V.30:-№^2.-P. 243 -255.

177. Reddy L.H., Murthy R.R. Influence of polymerization technique and experimental variables on the particle properties and release kinetics of methotrexate from poly (butylcyanoacrylate) nanoparticles // Acta pharmacie. — 2004. -V.54. № 2. - P. 103-118.

178. Ruiz M.R. Acute immobilization stress induces clinical and neuroimmu-nological alterations in experimental murine cutaneosus leishmaniasis / M.R.Ruiz, A.G. Quinones, N.L. Diaz, F.J. Tapia // Br. Dermatology 2003. -V. 149.-№4.-P. 731-738.

179. Santos R.C. Antihistaminic and antieicosanoid effects of oleanolic and ursolic acid fraction from Helichrysum picardii /R.C.Santos, G.M.D.Garcia, R.M.T.Sa-enz, V.R. de la Puerta // Pharmazie. 2007. - V. 62. - № 6. - P.459 -462.

180. Saravanan R., Pugalendi V. Impact of ursolic acid on chronic ethanol-induced oxidative stress in the rat heart // Pharmacol. Repts. 2006. - V. 58. - № 1. -P. 41 -47.

181. Sarid O. Epstein-Barr virus specific salivary antibodies as related to stress caused by examinations / O. Sarid, O. Anson, A. Yaari, M. Margalith // J. Med. Virul. 2001. - V. 64. - № 2. — P. 149-156.

182. Sathe A. In vitro methotrexate as a practical approach to selective allodeple-tion / A. Sathe, S.B. Ortega, D.I. Mundy, R.Hi Collins, N.J. Karandikar // Biol. Blood Marrow Transplant. 2007. - V. 13. - № 6. - Pi 644 - 654.

183. Schmiegelow K. Advances in individual prediction of methotrexate toxicity: a review // Br. J. Haematol. 2009. - V. 146. - № 5. - P. 489 - 503.

184. Scholz D. Synthesis of dammarane-type triterpenoids with anti-inflammatory activity in vivo / D. Scholz, K. Baumann, M. Grassberger, B. Wolff-Winiski, G.Rihs, H. Walter, J.G. Meingassner // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2004. -V.14. - № 11.-P. 2983-2986.

185. Seeram N.P. Berry fruits for cancer prevention: current status and future prospects // J. Agric. Food. Chem. 2008. - V. 13. - № 56(3). - P. 630 - 635.

186. Shi J. Saponins from edible legumes: chemistry, processing, and health benefits / J. Shi, K. Arunasalam, D: Yeung, Y. Kakuda, G. Mittal, Y. Jiang // J. Med. Food. 2004. - V. 7. - № 1. - P. 67 - 78.

187. Slater A.F. Nitrone spin traps and a nitroxide antioxidant inhibit a common patwcy of thymocyte apoptosis / A.F. Slater, C.S. Nobel, E. Maellaro, J.Bus-tamante, M. Kimland, S. Orrenius // Biochem. J. 1995. - V. 306. - № 3. -P. 771-778.

188. Smidt M. Glucocorticoids induce apoptosis in human monocytes: potential role of IL-lp / M. Smidt, H.G. Pauels, N. Lugering, A. Lugering, W. Domsch-ke, T. Kucharzik // J. Immunol. 1999. - V. 163. - P. 3484 - 3490.

189. Spinu M. Vegetal adjuvants: Where to? //Bui. Univ. sti. agr. si med. vet., Cluj Napoca Ser. Med. vet. - 2006. - № 63. - P. 399 - 404.

190. Sun H. Structure and biological activity of protopanaxatriol-type saponins from the roots of Panax notoginseng / H. Sun, Z. Yang, Y. Ye // Int. Immuno-pharmacol. 2006. - V. 6. - № l.-P. 14-25.

191. Sun H.X. Iskom u Iscommatrix / H.X. Sun, Y. Xie, Y.P. Ye // Vaccine.2009.-V. 27.-№33.-P. 4388-4401.

192. Sun X.Y. Therapeutic effect and impact on cytokine production by methotrexate in rheumatoid arthritis / X.Y. Sun, Y. Su, L.M. Ren, L. Han, Z.G. Li // Beijing Da Xue Xue Bao. 2006. - V. 38. - №4. - P. 356 - 359.

193. Talukder R., Fassihi R. Gastroretentive delivery systems: Hollow beads // Drug Dev. and> Ind. Pharm. 2004: - V. 30. - № 4. - P. 405 - 412\

194. Tang X.H. Mechanisms of hepatoprotection of Terminalia catappa L. extract on D-Galactosamine-induced liver damage / X.H. Tang, L. Gao, J. Gao, Y.M. Fan, L.Z. Xu, X.N. Zhao, Q. Xu // Am. J. Chin. Med. 2004. - V. 32. - №4. -P. 509-519.

195. Teloni R. Interleukin-4 inhibits cyclo-oxygenase-2 expression and prostaglandin E2 production by human mature dendritic cells / R. Teloni, F. Gian-noni, P. Rossi, R. Nisini, M.C. Gagliardi // Immunology. 2007. - V. 120. -№ l.-P. 83 -89.

196. Tewari K. Role of direct effects of IFN-y on T cells in the regulation of CD8 T cell homeostasis / K. Tewari, Y. Nakayama, M. Suresh // J. Immunol. 2007. - V. 179. - № 4. - P. 2115 - 2125.

197. Thannickal V.J., Fanburg B.L. Reactive oxygen species in cell signaling // Am. J. Physiol. Lung. Cell. Mol. Physiol. 2000. - V. 279. - № 6. - P. 10051028.

198. Tian Z. Review of bioactivities of natural cycloartane triterpenoids / Z. Tian, P.G. Xiao, J. Wen, F. Huang, M.S. Yang, S.L. Chen // Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 2006. - V. 31. - № 8. - P. 625 - 629.

199. Tomkins P.T. Effect of pharmacological agents on the productions of interleu-kin-10 by the murine D10.G4.1 TH2 cell line in vitro / P.T. Tomkins, K.L.Cooper, P. Appleby, D.G. Webber // Int. J. Immunopharmacol. 1995. -V. 17.-№7.-P. 619-625.

200. Traill K.N. Lymphocyte membrane lipid composition and mitogen resoon-siveness in chickens: role of membrane «fluidity» / K.N. Trail., K. Ratheiser, R. Pfeilschifter, G. Wick // Eur J. Immunol. 1986. - № 1. - P. 75 - 82.

201. Trevillian P., Nunter J. Immunesuppressants clinical applications // Austral. Prescriber. - 2006. - V. 29. - № 4. - P. 102 - 107.

202. Tu J. Immunomodulatory and antitumor activity of triterpenoid fractions from the rhizomes of Astilbe chinensis / J. Tu, H.X. Sun, Y.P. Ye // J. Ethnopharma-col. 2008. - V. 119. - № 2. - P. 266 - 271.

203. Walker L.S.K. Folate receptor 4: A new handle on regulation and memo-ry? // Immunol, and Cell. Biol. 2007. - V. 85. - № 7. - P. 506 - 507.

204. Wang Y. Triterpenoid saponins from Androsace umbellata and their antiproliferative activities in human hepatoma cells / Y. Wang, D. Zhang, W.Ye, Z.Yin, K.P. Fung, S. Zhao, X. Yao // Planta Med. 2008'. - V. 74. - № 10. -P. 1280 - 1284.

205. Witaicenis A. Pharmacological and toxicological studies of Drimys angustifo-lia Miers. (Winteraceae) / A. Witaicenis, E.F. Roldao, L.N. Seito, N.P. Rocha, L.C. Di Stasi // J. Ethnopharmacol. 2007. - V. 111. - № 3. - P. 541 - 546.

206. Woodland R.T., Wilson D.B. The induction of specific resistance in Fr hybrid rats to local graft-versus-host reaction: natura of the eliciting cell // Eur. J. Immunol. 1977. -V. 7. - P. 136 - 142.

207. Wu C.-A., Yang Y.-W. Induction of cell deatch by saponin1 and antigen delivery purpose // Pharmaccutinal"Res. 2004. - V. 2!. - P. 271 - 277.

208. Wu Z-J. Six new triterpenoid" saponins from the leaves of Ilex oblonga and their inhibitory activities against TMV replication / Z-J. Wu, M-A. Ouyang, C-Z. Wang, Z-K. Zhang // Chem. and Pharm. Bull: 2007. - V. 55. - № 3. -P. 422 - 427.

209. Xiao Y.Q. Oxidants selectively reverse TGF-J3suppression» of proinflammatory mediator production / Y.Q. Xiao, O.G. Freire-de-Lima, W.J. Janssen, K.Morimoto, D. Lyu, D.L. Bratton, P.M: Herson // J. Immunol. 2006. -V. 176.-№2.-P. 1209-1217.

210. Yates M.S. Pharmacodynamic characterization of chemopreventive triterpenoids as exceptionally potent inducers of Nrf2-regulated-genes / M.S. Yates, M." Tauchi, F. Katsuoka, K.C. Flanders, K.T. Liby, T. Honda, G.W. Gribble, D.A.

211. Johnson, J.A. Johnson, N.C. Burton, T.R. Guilarte, M. Yamamoto, M.B.Sporn, T.W. Kensler //Mol. Cancer Ther. 2007. - V.6. - № l.-P.154-162.

212. Yokooji T. Site-specific contribution of proton-coupled folate transporter / haem carrier protein 1 in the intestinal * absorption of methotrexate in rats / T.Yokooji, N. Mori, T. Murakami // J. Pharm. Pharmacology. 2009. - V. 61. -№7.-P. 911 -918.

213. Yoshikawa M. Bioactive saponins and glycosides. XXVII. Structures of nee cucurbitane-type triterpene glycosides and antiallergic constituents from Citrul-lus colocynthis / M. Yoshikawa, T. Morikawa, H. Kobayashi, A. Nakamura, K.

214. Matsuhira, S. Nakamura, H. Matsuoda // Chem. and Pharm. Bull. 2007. -V.55. - № 3. - P. 428 - 434.

215. Zeng Y. Baicalin reduces the severity of experimental autoimmune encephalomyelitis / Y. Zeng, C. Song, X. Ding, X. Ji, L. Yi, K. Zhu // Braz. J. Med. and Biol. Res. 2007. - V. 40. - № 7.-P. 1003 - 1010.

216. Zimecki M., Artym J. Effect of methotrexate on the immune response in selected experimental models // Postepy Hig. Med. Dosw. (Online). 2004.58.-P. 226-235.1. Qm) Г

217. Zhang Q. Ursane triterpenoids inhibit atherosclerosis and xanthoma in LDL receptor knockout mice / Q. Zhang, Z. Chang, Q. Wang // Cardiovasc. Drugs Ther. 2006. - V. 20. - № 5. - P. 349 - 357.

218. Zhou S. Predominant donor CD103+CD8+ T cell infiltration into the gut epithelium during acute GvHD: A role of gut lymph nodes / S. Zhou, H. Ueta, X.D. Xu, C. Shi, K. Matsuno // Int. Immunol. 2008.-V.20.- № 3.-P.385-394.

219. Цинкернагель P. Основы иммунологии (R.M. Zinkernagel): Пер. с нем. д-ра мед. наук JI.A. Певницкого / Под ред. акад. РАН В.А. Черешнева и д-ра физ-мат. наук Г.А. Бочарова. М.: Мир, 2008. 135с.