Гепатопротекторная активность милиацина при метотрексат-индуцированном повреждении печени (экспериментальное исследование) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.03, кандидат медицинских наук Калинина, Ольга Вячеславовна

• Калинина, Ольга Вячеславовна
• кандидат медицинских наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Калинина, Ольга Вячеславовна

Список основных сокращений.

Введение.

Глава I. Обзор литературы.

1.1. Гепатотоксичность антибластомных химиопрепаратов. Проявления и механизмы гепатотоксичности.

1.2. Метотрексат. Антиметаболическая активность и участие в формировании токсических поражений печени.

1.3. Гепатопротекторы. Основные механизмы защитного действия

1.4. Гепатопротекторная активность тритерпеноидов

Глава II. Материалы и методы исследований.

Глава III. Гепатопротекторная активность милиацина при токсическом поражении печени метотрексатом.

3.1. Защитное влияние милиацина при метотрексат-индуцированном поражении паренхимы печени.

3.2. Защитное влияние милиацина при метотрексат-индуцированном нарушении клиренсной функции макрофагальной системы печени

3.3. Сравнительная оценка эффективности защитного действия милиацина и карсила при метотрексат-индуцированной гепатотоксичности.

3.4. Обсуждение результатов.

Глава IV. Влияние милиацина на фармакокинетику метотрексата и его противоопухолевую активность.

4.1. Влияние милиацина на параметры фармакокинетики метотрексата.

4.2. Влияние милиацина на противоопухолевую эффективность метотрексата на модели перевиваемой карциномы легких Льюис LLC.

4.3. Обсуждение результатов.

Глава V. Антиоксидантная активность милиацина как основа реализации его гепатопротекторного влияния.

5.1. Влияние милиацина на выраженность окислительного стресса и экспрессию генов сур-2е1 и глутатионредуктазы у мышей, подвергнутых воздействию метотрексата.

5.2. Обсуждение результатов.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Гепатопротекторная активность милиацина при метотрексат-индуцированном повреждении печени (экспериментальное исследование)»

Структурно-функциональные поражения печени, наряду с нефротоксич-ностыо и угнетением костно-мозгового кроветворения, являются наиболее распространенным и тяжелым осложнением противоопухолевой терапии [45; 58; 131; 241]. Данное обстоятельство служит серьезным препятствием к достижению должного лечебного эффекта, поскольку определяет необходимость увеличения интервалов между курсами химиотерапии и снижения дозировки препаратов, вплоть до их полной отмены. В связи с этим изучение механизмов медикаментозных поражений печени и разработка на этой основе подходов к предупреждению и (или) ограничению таких поражений является одной из актуальных задач, имеющих отчетливое прикладное значение [40; 72; 126; 227; 246].

Это положение в полной мере относится и к метотрексату, химиотера-певтический эффект которого обусловлен его антиметаболической активностью, тогда как гепатотоксичность цитостатика связывают с интенсификацией процессов свободно-радикального окисления [218; 219; 222]. Исходя из этих представлений, очевидно, что протекция гепатотоксического действия метотрексата может быть эффективной на основе использования средств, обладающих антиоксидантной активностью. В настоящее время арсенал таких средств достаточно широк и представлен как синтетическими, так и природными антиоксидантами [55]. Среди последних все более важное значение преобретают препараты растительного происхождения [7], доступность, безопасность и биологическая активность которых определили их широкое использование в медицинской практике, включая протекцию повреждений печени в условиях применения антибластомных лекарственных средств [39; 52].

Интерес к дальнейшему поиску гепатопротекторов не ослабевает, что связано с необходимостью повышения избирательности защиты печени от ксенобиотиков, оптимизации репаративно-регенераторных процессов в поврежденном органе и сокращения сроков восстановления его функциональной активности.

В последние годы в рамках решения этой проблемы внимание исследователей привлекают тритерпеноиды и их производные, демонстрирующие значительную антиоксидантную активность [63; 123; 151; 193; 194; 247; 248] и способность ограничивать повреждения печени при действии различных токсических факторов [31; 59; 98; 105; 161; 192], в том числе - антибластом-ных лекарственных препаратов [36; 106; 148]. К числу этих веществ относится и милиацин - пентациклический тритерпеноид растительного происхождения, защищающий гепатоциты при отравлении СС14 [99] и проявляющий мембранопротекторную активность [128; 141]. Вместе с тем вопрос о защитном влиянии милиацина в отношении гепатотоксичности метотрексата оставался открытым.

Актуальность данной работы определяется тем, что до начала ее выполнения не была проведена оценка защитного эффекта милиацина при метот-рексат - индуцированном повреждении печени; не было установлено влияние тритерпеноида на фармакокинетику метотрексата и его противоопухолевую активность; не был определен механизм протективного действия милиацина, связанный с его влиянием на интенсивность окислительного стресса и экспрессию генов, контролирующих продукцию про- и антиоксидантных факторов. Отсутствие ясности в этих вопросах не позволяло оценить перспективы использования милиацина в качестве гепатопротектора, что с учетом его доступности, крайне низкой токсичности (ЬО50 > 1000 мг/кг) и отсутствия побочных эффектов в широком диапазоне доз [144] могло бы иметь важное прикладное значение.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы являлась экспериментальная оценка милиаци-на как гепатопротектора при токсическом поражении печени метотрексатом.

В соответствии с поставленной целью были сформулированы следующие задачи:

1. Изучить влияние милиацина на структурно-функциональную реорганизацию печени и динамику восстановления органных нарушений у мышей, подвергшихся воздействию метотрексата.

2. Провести сравнительный анализ эффективности защитного действия милиацина и официального гепатопротектора - карсила.

3. Определить особенности фармакокинетики метотрексата в условиях его сочетанного применения с милиацином.

4. Оценить влияние милиацина на противоопухолевый эффект метотрексата (на модели эпидермоидной карциномы легких Льюис).

5. Установить механизм протективного действия милиацина путем изучения его влияния на интенсивность оксидативного стресса и экспрессию генов {сур 2е1 и glured), контролирующих редокс-баланс клетки, в условиях применения метотрексата.

Научная новизна исследования

Впервые определено протективное влияние милиацина в отношении ге-патотоксичности метотрексата. В экспериментах на мышах (СВА х G^B^Fi установлена способность тритерпеноида ограничивать метотрексат индуцированные дистрофические и некротические изменения гепатоцитов, ослаблять гиперферментемию (АлАТ, АсАТ, у-ГТ), снижать частоту выявления и выраженность нарушений пигментного обмена, отменять депрессию кли-ренсной функции печеночных макрофагов. Показан позитивный эффект милиацина на процесс восстановления структурных повреждений печени и нормализацию показателей пигментного обмена.

Установлено, что гепатопротекторная активность милиацииа не связана с нарушением фармакокинетики метотрексата и с ослаблением его антибла-стомной активности. Впервые показана способность милиацина повышать терапевтическую эффективность метотрексата по показателям торможения роста опухоли и увеличения продолжительности жизни животных с перевиваемой карциномой Лыоиса. Впервые определен механизм протективного влияния милиацина, реализуемый на уровне регуляции экспрессии генов сур 2е1 и фи'ей.

Теоретическое значение работы Полученные данные расширяют представления о диапазоне протективного влияния милиацина и раскрывают новые аспекты его биологического действия. Отсутствие влияния милиацина на фармакокинетику метотрексата исключает возможность рассмотрения данного механизма в реализации протективного действия тритерпеноида. Сведения о способности милиацина отменять метотрексат - индуцированную экспрессию гена прооксидантного белка сур 2е1 и восстанавливать экспрессию гена, кодирующего один из ведущих факторов антиоксидантной защиты glured, существенно углубляют знания о механизмах реализации антиоксидантного эффекта тритерпеноида.

Практическое значение работы Результаты работы определяют новые возможности ограничения побочного действия цитостатической терапии и повышения эффективности реабилитации больных после ее проведения на основе использования милиацина или его аналогов. Установленные в работе способность милиацина повышать противоопухолевую активность метотрекста и отсутствие влияния тритерпеноида на фармакокинетику химиопрепарата позволяют рассматривать три-терпеноид в качестве эффективного гепатопротектора. По материалам работы получен патент на изобретение РФ № 2411947 «Средство, повышающее противоопухолевый эффект метотрексата».

Основные положения, выносимые на защиту

1. Тритерпеноид растительного происхождения милиацин оказывает защитный эффект при метотрексат - индуцированном поражении печени, предотвращая падение массы органа, минимизируя повреждения гепатоцитов, снижая частоту выявления и выраженность нарушений пигментного обмена, отменяя депрессию клиренсной функции печеночных макрофагов и ускоряя восстановление структуры органа.

2. Протективное влияние милиацина не связано с нарушением фармакокине-тики метотрексата и со снижением его противоопухолевой активности

3. Милиацин повышает терапевтическую эффективность метотрексата по показателям торможения роста опухоли и продолжительности жизни животных.

4. Механизм протективного влияния милиацина обусловлен его способностью предотвращать окислительный стресс, индуцируемый метотрексатом, и нормализовать экспрессию генов сур 2е1 и %1игес{ в печени, контролирующих редокс - баланс клетки.

Апробация работы Основные положения диссертации доложены и обсуждены на региональных научно-практических конференциях молодых ученых и специалистов, Оренбург, 2005, 2011; региональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы теоретической, экспериментальной и клинической онкологии», Оренбург, 2006; V и IX конференциях иммунологов Урала, Оренбург, 2006; Челябинск, 2011; IX Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты», Нижний Новгород , 2010; III Международном симпозиуме «Взаимодействие нервной и иммунной систем в норме и патологии», Санкт-Петербург, 2011; XI Международном конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии», Москва, 2011.

Декларация личного участия автора Автором определены цель, задачи и объем исследования, сформирована и использована методическая база проведения запланированных экспериментов, самостоятельно проведен анализ литературы по профилю диссертации. Определяющим является вклад автора в выполнении всех разделов работы, включая экспериментальную реализацию поставленных задач (85%), статистическую обработку и анализ полученных результатов (100%), а также подготовку научных публикаций, в которых доля личного участия автора составляет не менее 80%.

Материалы диссертации обобщены в 14 научных работах, в том числе в 4 статьях, опубликованных в рецензируемых научных журналах. Получен патент на изобретение РФ № 2411947 «Средство, повышающее противоопухолевый эффект метотрексата».

Заключение диссертации по теме «Патологическая физиология», Калинина, Ольга Вячеславовна

121 Выводы

1. Однократное внутрибрюшинное введение метотрексата (10 мг/кг) мышам (СВАхС57В16)Р1 приводит к развитию токсического гепатита, проявляющегося снижением массы органа, формированием в нем дистрофических и некротических процессов, гиперферментемии (АлАТ, АсАТ, у-ГТ) и нарушением пигментного обмена. Токсичность метотрексата в отношении клеток Купфера проявлялась угнетением их клиренсной функции.

2. Динамика токсического поражения печени под влиянием метотрексата характеризуется постепенным нарастанием явлений дистрофии и некроза гепатоцитов с достижением их максимальной выраженности к 14 суткам после введения цитостатика. Регенераторные процессы в органе в виде возрастания числа двуядерных клеток и увеличения плоидности ядер регистрируются к концу 3 недели наблюдения. При этом нормализация активности ферментов (АлАТ, АсАТ) к указанному сроку отсутствует.

3. Милиацин в разовой дозе 2 мг/кг при трехкратном последовательном (на протяжении 3 дней) внутрибрюшинном введении после применении метотрексата ослабляет гепатотоксический эффект, предотвращая падение массы органа, минимизируя морфологические показатели повреждения гепатоцитов, ослабляя гиперферментемию, снижая частоту выявления и выраженность нарушений пигментного обмена, отменяя депрессию клиренсной функции печеночных макрофагов и обеспечивая восстановление структуры печени к концу 3 недели наблюдения.

4. Гепатопротекторная эффективность милиацина (2 мг/кг) превосходит гепатопротекторную эффективность карсила (6 мг/кг) по ограничению гиперферментемии (АлАТ, АсАТ) и соответствует эффективности карсила (б мг/кг) по ограничению нарушений пигментного обмена.

5. Протективное влияние милиацина не сопровождается нарушением скорости всасывания и биораспределения метотрексата в сыворотке крови, ткани печени и селезенки и, таким образом, не связано с нарушением фарма-кокинетики химиопрепарата.

6. Протективное влияние милиацина не сопровождается снижением противоопухолевой активности метотрексата. Милиацин повышает терапевтическую эффективность метотрексата: их сочетанное применение вызывает высокое торможение роста LLC в течение 12 дней после введения цитостатика (ТРО=91-84%), обеспечивает сохранение статистически значимого ТРО в течение длительного срока наблюдения (на 19 сутки ТРС)=60%) и увеличивает продолжительность жизни мышей с LLC на 36%, в то время как метотрексат в монотерапии - на 9%.

7. Механизм протективного влияния милиацина связан с его способностью предотвращать окислительный стресс, индуцированный метотрексатом, и нормализовать экспрессию генов, кодирующих изоформу сур 2е1 цитохро-ма Р - 450 и глутатионредуктазу в печени.

123

Заключение

Главное положение, вытекающее из проведенных исследований, заключается в том, что тритерпеноид растительного происхождения милиацин снижает гепатотоксичность метотрексата, не влияя при этом на фармакоки-нетику последнего и его антибластомную активность. Изучение механизма такого протективного действия милиацина позволило установить, что в его основе лежит ограничение тритерпеноидом выраженности окислительного стресса, индуцированного метотрексатом, который рассматривается как ведущее звено повреждающего действия цитостатика на печень [219; 222].

Как известно, окислительный стресс обусловливает нарушение редокс -баланса клетки, определяемого как соотношение ее прооксидантных и анти-оксидантных систем [56]. Прооксидантные системы (прооксиданты) - системы генерации активных форм кислорода (АФК), представляющих собой продукты неполного восстановления его молекул: свободные радикалы, перекиси и другие метаболиты, обладающие высокой реакционной способностью. Благодаря этой способности АФК выполняют ряд важных физиологических функций [113], включая синтез биологически активных веществ (лейкотрие-ны, простагландины), цитотоксичность в отношении патогенов и опухолевых клеток, репрограммирование процессов клеточной дифференцировки, пролиферации и апоптоза. В настоящее время в клетках млекопитающих установлено более 20 т.н. «редокс-чувствительных» транскрипционных факторов [134; 224], отвечающих на изменение редокс-баланса, в том числе NF-kB, АР-1, р-53, Nrf, служащих ключевыми элементами жизнеобеспечения и клеточной функции.

Необходимость АФК для жизнедеятельности клеток связывают также с образованием при их участии электронно-возбужденных состояний биомолекул - триггеров всех последующих биоэнергетических реакций. Колебательный режим таких реакций способствует ритмичному протеканию биохимических процессов на более высоком уровне [118].

Наконец, АФК обеспечивают обновление и функциональную лабильность мембран клеток и субклеточных структур, определяя такие жизненно важные процессы, как проницаемость, ионный транспорт, энергетику, синтез белка и др. Подобное обеспечение обусловлено способностью АФК инициировать активацию перекисного окисления липидов (ПОЛ) при взаимодействии с входящими в состав клеточных мембран полиненасыщенными жирными кислотами. Представляя собой саморазвивающуюся цепную реакцию, ПОЛ постоянно протекает в клетке, поскольку является нормальным процессом метаболизма и служит необходимым звеном её жизнедеятельности, включая адаптационные реакции. Благодаря ПОЛ, реализуемому в клеточных мембранах, меняется их липидный состав, а тем самым - активность ли-пидзависимых мембранных ферментов. Таким образом, образование АФК и инициируемое ими свободнорадикальное окисление являются естественным физиологическим процессом, постоянно протекающим в организме.

Иная ситуация складывается при избыточном уровне АФК в живой клетке, когда они могут выступать как повреждающий фактор, нарушающий структуру и функционирование внутриклеточных компонентов (липидов, белков, ДНК), что сопровождается развитием патологии [30; 50; 75; 94]. При этом деструктивная роль АФК зачастую связана не столько с их прямым действием на клеточные структуры, сколько с избыточной активацией каскада процессов свободнорадикального окисления, сопровождающихся образованием продуктов (гидроперекиси ненасыщенных жирных кислот, альдегиды, кетоны), повреждающих клеточные структуры [51]. Возможность такого развития событий предполагает необходимость существования в клетке сдерживающих механизмов (антиоксидантной системы, антиоксидантов), лимитирующих образование АФК и защищающих клетку от несвоевременной и бесконтрольной активации свободнорадикальных процессов. Т.е. антиоксидант-ная система (система антиоксидантной защиты) - «многокомпонентная система, которая позволяет поддерживать интенсивность свободнорадикальных процессов на оптимальном уровне, без угрозы их резкой активации и участия в развитии различных патологических состояний» [113]. Очевидно, что атрибутивным условием функционирования такой системы также является ограничение ее избыточности, поскольку в противном случае она будет препятствовать реализации физиологической роли АФК.

Таким образом, сбалансированное (равновесное) соотношение между прооксидантами и антиоксидантами, т.е. редокс-баланс клетки имеет основополагающее значение в ее жизнедеятельности. Изменение этого баланса служит отправной точкой в развитии различных форм патологии. Такое изменение может быть достигнуто избыточным образованием АФК, дефицитом факторов антиоксидантной защиты либо путем сочетанной реализации обоих сдвигов.

Основным источником образования АФК в клетке служат ее ферментные системы: митохондриальная цитохром-С-оксидаза, НАДФН-оксидаза фагоцитов, ксантиноксидаза и микросомальные монооксигеназы [30; 125]. Поскольку ксантиноксидаза принимает непосредственное участие в биотрансформации MTX, ее роль как механизма индукции АФК под влиянием цитостатика представляется достаточно очевидной. Используя молекулярный кислород в качестве акцептора электронов, этот фермент способствует образованию супероксид-анион-радикала (02~), перекиси водорода Н202, а также (в отдельных случаях) - гидроксильного радикала (ОН'). Роль ксантиоокси-дазы в генерации АФК может также быть обусловлена способностью этого фермента повышать уровень свободного железа путем его мобилизации из ферритина печени [195].

Вместе с тем, известно, что для печени главным источником АФК и в частности, 02~, служат микросомы [170]. Однако до проведения настоящего исследования вопрос о роли микросомальных монооксигеназ в формировании окислительного стресса под влиянием MTX оставался открытым. Такое положение в значительной степени было обусловлено хорошо известным фактом о непричастности системы цитохрома Р450 к биотрансформации MTX, а также о незначительной способности последнего модулировать экспрессию и активность различных изоформ этой системы в культуре гепато-цитов. Установленное в нашей работе стимулирующее влияние MTX на экспрессию гена важнейшей прооксидантной Цх Р450-зависимой монооксигена-зы - сур 2е1с большой вероятностью может свидетельствовать о ее вовлеченности в механизм формирования окислительного стресса под действием MTX. Есть основание полагать, что такая активация генной экспрессии носит опосредованный характер и сопряжена с изменением редокс-состояния клетки как следствия генерации АФК при участии ксантиноксидазы, и (или) с прямым действием АФК на фактор транскрипции соответствующего гена.

МТХ-опосредованная индукция прооксидантных систем (ксантиноксидазы и сур 2е1) способна приводить к избыточной генерации АФК и активации свободнорадикального окисления, регистрируемого в наших исследованиях в виде повышения содержания в ткани печени ТБК-реагирующих продуктов на 4 сутки после введения цитостатика. Негативные последствия такой активации в соответствии с существующими представлениями [173; 204; 222; 250] реализуются через окисление тиоловых (сульфгидрильных) групп белков, накопление продуктов липопероксидации и уменьшение стабильности липидного бислоя мембран. В свою очередь окисленные белки легко подвергаются деградации под влиянием протеаз, а окисление фосфолипидов увеличивает их подверженность гидролизу фосфолипазой А2 в результате возрастания сродства к ферменту. Таким образом формируется определенная последовательность включения механизмов повреждения биомембран, при которой активация ПОЛ обеспечивает действие фосфолипаз, после чего нарушения в мембранном бислое происходят уже независимо от уровня ПОЛ и даже при его подавлении [113].

Указанные нарушения определяют утрату функциональной активности клеточных белков (ферментов, встроенных в мембрану), формирование энергетического дефицита, избыточное накопление в клетке ионов Са2+, а в конечном счете - электрический пробой мембраны, цитолиз и гибель клетки. В наших экспериментах показателем деструкции мембран гепатоцитов служило увеличение активности в сыворотке крови индикаторных ферментов (АлАТ, АсАТ, у- ГТ) этого процесса, а также билирубинурия и уробилино-генурия. Повреждение мембран под действием MTX затрагивало как сарколемму, так и, по-видимому, мембраны внутриклеточных структур: эндоплаз-матического ретикулума, митахондрий и микросом. На это указывает возрастание активности АсАТ (являющейся не только цитозольным, но и митохон-дриальным ферментом), обнаружение в моче прямого билирубина (образующегося в гладком эндоплазматическом ретикулуме) и уробилиногена (как проявление несостоятельности микросомального окисления мезобилиноге-на). Выявленные нарушения носили не только выраженный, но и продолжительный характер, о чем свидетельствует сохранение деструктивных изменений в органе и гиперферментемии на протяжении трех недель наблюдения.

В контексте обсуждаемой проблемы важно отметить, что липиды печени легко окисляются и имеют более высокую чувствительность к АФК-индуцированному окислению по сравнению с другими органами [113], хотя именно печень является эндогенном депо витамина Е и, следовательно, должна обладать наибольшей защитой от свободнорадикального окисления. Парадоксальность данной ситуации обусловлена тем, что гепатоциты в отличие от других клеток, хотя и запасают витамин Е в микросомальных мемеб-ранах, не используют его как антиоксидант [214], а поставляют через кровоток в другие органы для предупреждения их АФК-опосредованного повреждения [256]. Такая избирательно высокая чувствительность паренхиматозных клеток печени к липопероксидации по всей видимости определяет возможность более раннего (на 4 сутки) выявления их структурно-функциональных нарушений по сравнению с клетками Купфера, депрессия функциональной активности (поглотительной способности) которых выявлялась нами в более поздний период (на 10-14 сутки) после введения MTX. Не исключено участие в этой депрессии свободных жирных кислот, концентрация которых в условиях катаболизма глицерофосфолипидов должна закономерно возрастать. Правомерность такой оценки обоснована данными о способности жирных кислот не только подавлять хемотаксис и фагоцитарную активность макрофагов [183], но и индуцировать их гибель [176]. При этом строгого соответствия между цитотоксичностыо жирных кислот и числом двойных связей в их молекулах не обнаружено.

Что касается последствий нарушения функциональной активности печеночных макрофагов, то, как отмечалось выше (глава 3), эти нарушения могли иметь непосредственное отношение к замедлению репаративных процессов в органе, в регуляции которых клеткам Купфера отводится центральная роль [81]. Эта роль способна реализоваться в нескольких направлениях, включая продукцию и секрецию различных факторов роста: ТФР Р (трансформирующий фактор роста (3) и ИФР-I (инсулиноподобный фактор роста I); нейтральных протеиназ (эластазы, коллагеназы), отменяющих эффект контактного торможения и повышающих чувствительность клеток-мишеней к факторам роста; фибронектина - центральной адаптерной молекулы самосборки тканей [87]. С репаративной функцией печеночных макрофагов связана их способность к рекрутированию в орган и к активации лимфоцитов, оказывающих стимулирующее воздействие на пролиферацию паренхиматозных клеток печени, в том числе при действии гепатотропных токсинов [15].

Патогенез органных нарушений при избыточной активации ПОЛ мог быть связан и с запуском апоптотического каскада с участием его «митохон-дриального» механизма. Основу этого процесса составляет последовательное развитие внутриклеточных событий, включающих окислительную модификацию кардиолипина под действием продуктов ПОЛ [78], приводящую к утрате его молекулярного взаимодействия с цитохромом С; выход цитохрома С в цитозоль вследствие повышения проницаемости внешней мембраны митохондрий при участии проапоптотических белков (Вах, Bad, Bid и др.); вовлечение цитохорома С в формирование апоптосомы - APAF-1 (апоптотический протеазо-активирующий фактор), активацию каспазы 9 и трансдукцию сигнала на терминальную каспазу 3. Не исключается также развитие апоптоза и при участии Fas/APO-1 механизма, о чем свидетельствует высокая чувствительность гепатоцитов к CD 95-опосредованному сигналу [16]. При этом существенно, что апоптоз клеток печени в ответ на воздействие различных факторов, включая мембраноактивные соединения, не является синхронным процессом. Его продолжительность может составлять до 7 суток [77], внося свой вклад в динамику структурно-функциональных нарушений органа, достигавших своего максимума на 10 - 14 сутки после введения МТХ.

Поражение печени МТХ не носило изолированный характер и реализо-вывалось на фоне системных проявлений токсического действия цитостатика в виде снижения массы тела, редукции органов системы иммуногенеза (тимуса, селезенки), и развития анемии. Представляется, что эти нарушения могли оказывать усугубляющее действие на выраженность поражения печени, в том числе, через развитие вторичного иммунодефицита [54] и гемиче-ской гипоксии.

Как показали результаты нашего исследования, среди механизмов, индукции метотрексатом окислительного стресса и активации свободноради-кальных процессов важное место могло принадлежать способности цитостатика подавлять экспрессию гена глутатиоредуктазы (glured). Этот фермент является одним из компонентов глутатионовой антиоксидантной системы, обеспечивающей (совместно с НАДФН) поддержание в клетке должного уровня восстановленного глутатиона (GSH). Последний, будучи главным водорастворимым антиоксидантом [271], участвует в работе ряда ферментов, в том числе глутатионпероксидазы (локализована в цитозоле и матриксе митохондрий) и многофункциональных белков - глутатионтрансфераз (локализованы преимущественно в цитозоле клеток) в качестве донора протонов, переходя при этом в окисленную форму (GSSG). Коныогаты GSH с токсическими метаболитами, включая и МТХ, облегчают их MRP-1 (multidrug resistance protein - 1) - зависимый транспорт из клетки. Таким образом, в условиях ок-сидативного стресса GSH, обеспечивая инактивацию гидроперекисей и других токсических продуктов окисления путем их восстановления и глутатио-нилирования, защищает клеточные структуры и белки от повреждений [56].

Очевидно, что подавление метотрексатом экспрессии гена глутатионредукта-зы, как возможного проявления гепатотоксичности избыточного образования АФК, формирует дефицит данного фермента, способный привести к истощению внутриклеточного пула GSH и, как следствие - к ослаблению функционирования одной из важнейших внутриклеточных систем антиоксидантной защиты. Подобное развитие событий усугубляется прямым ингибирующим влиянием MTX на активность глутатионредуктазы, равно как и на активность у-глутамилцистеинсинтетазы, участвующей в клеточном синтезе самого глу-татиона [219].

Изучение влияния милиацина на гепатотоксичность MTX позволило установить что тритерпеноид обеспечивал ослабление структурных повреждений гепатоцитов,снижение выраженности гиперферментемии и нарушений пигментного обмена, а также предотвращение депрессии клиренсной функции печеночных макрофагов. Указанные сдвиги имели место на фоне ослабления и системных проявлений токсичности MTX в виде ограничения падения массы тела, гипоплазии лимфоидных органов (тимуса, селезенки) и анемии. Эти результаты могли иметь в своей основе, как минимум, два различных механизма. Во-первых, они могли являться отражением нарушения под влиянием милиацина фармакокинетики метотрексата и (или) непосредственного ингибирующего влияния тритерпеноида на биологическую активность цитостатика. В пользу этого предположения свидетельствуют данные [128; 141] о мембраностабилизирующем действии милиацина, которое могло повлиять на процессы абсорбции, биораспределения и выведения MTX из организма. Второй механизм позитивного действия милиацина мог быть связан с его ограничивающим влиянием на цитотоксичность MTX без воздействия на фармакокинетику и (или) специфическую антиметаболическую активность последнего, определяющих лечебный эффект химиопрепарата.

Как показали наши исследования, милиацин не влиял на фармакокине-тические параметры MTX, и не только не ослаблял, но, напротив, усиливал его противоопухолевую активность. Такое усиление выражалось повышением терапевтической эффективности МТХ при его совместном применении с милиацином в виде высокого торможения роста эпидермоидной карциномы Льюиса и увеличения продолжительности жизни животных. Эти результаты позволили прийти к заключению, что ограничение милиацином структурных, биохимических и функциональных нарушений, индуцируемых МТХ, демонстрирует именно протективный эффект тритерпеноида в отношении локальной (гепатопротекция) и системной токсичности цитостатика.

Оценка механизмов протективного эффекта милиацина позволила установить их связь с антиоксидантными свойствами тритерпеноида. Следует отметить, что антиоксидантная активность является одной из достаточно распространенных биологических характеристик тритерпеноидов [220; 231], которая определена у ряда из них, включая агликон глицирризина: 18р-глицирретиновую кислоту [194], каффеоловую кислоту [268], азиатскую кислоту [216], уросоловую и олеаноловую кислоты [240; 258], дипептид бету-лоновой кислоты [64] и др. Проявлением такого защитного влияния служит уменьшение степени падения внутриклеточного пула восстановленного глу-татиона и лимитирование снижения активности ферментных систем антиок-сидантной защиты: супероксиддисмутазы, каталазы, глутатион-8-трансфера-зы, глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы [215] снижение накопления в клетке вторичных радикалов (липидных перекисей) и диеновых конъюгатов [247], уменьшение генерации и активности супероксид-анион-радикала: Ф [194; 217] и гидроксильного радикала: ОН' [193]. О потенциальной мощности антиоксидантной активности тритерпеноидов свидетельствует возможность проявления их ингибирующего действия даже в отношении АФК (Ф и Н202), индуцированных в лейкоцитах при стимуляции последних форбол-12-миристат-ацетатом [161].

Исходя из полученных в работе данных о способности милиацина восстанавливать экспрессию гена глутатионредуктазы, подавленную МТХ, нам представляется, что антиоксидантный эффект тритерпеноида мог быть связан с его активирующим воздействием на регуляторный сайт - ARE (antioxidant responsive element), под контролем которого находится функционирование этого гена. Основанием для такого предположения служат сведения об индуцирующем влиянии на ARE синтетического аналога олеановой кислоты -CDDO [189; 228; 234; 235; 261]. Как известно, ARE наряду с Nf-kB и АР -1 относится к числу редокс-чувствительных элементов, но в отличие от последних, отвечающих на внешние сигналы, участвующим в поддержании внутриклеточного гомеостаза при апоптозиндуцирующих [185], канцерогенных [196] и стрессорных воздействиях. Регионы ARE выявлены в промотор-ных участках многих генов, продукты которых выполняют или непосредственно защитную роль (микросомальная гемооксигеназа, тиоредоксин, селеновая глутатионпероксидаза-2, глутатионредуктаза), или восполняют уровень расходуемых низкомолекулярных интермедиатов (цистин-глутамат-транспортная система), или обеспечивают репаративную функцию важнейших макромолекул в клетке в ситуациях с нарушением клеточного редокс-баланса. Последнее, в частности, проявляется участием системы Nrf-2 - ARE в регуляции транскрипции митохондриальной ДНК, стабилизации транскрипта и инициации репликации в условиях действия эндогенных и экзогенных повреждающих агентов [35]. Посредством индукции синтеза MRP-1 -ключевого белка АТФ-зависимого транспорта ксенобиотиков из клеток, ARE может участвовать и в регуляции множественной лекарственной резистентности [272]. Именно поэтому контролируемая сеть ARE-регулирующих генов рассматривается как универсальная система клеточной защиты в условиях окислительного стресса.

В связи с изложенным допустимо полагать, что активация ARE под влиянием милиацина могла бы служить существенным звеном в реализации его антиоксидантного эффекта. Что касается конкретных механизмов такой активации, то существующие представления о них прежде всего связаны с мобилизацией фактора транскрипции Nrf-2 (NF-E2 - related factor 2). Последняя обеспечивается индуцибильной или усиливающейся конститутивной деградацией комплекса Nrf-2 - Кеар-1, в котором Кеар-1 (Kelch-like ECH associating protein-1) отводится роль негативного регулятора (супрессора). Такой эффект установлен, в частности, для CDDO [189]. Следует однако отметить, что необходимым условием разрушения комплекса Nrf-2 - Кеар-1 в любом случае служит изменение конформации Кеар-1 в результате окислительной модификации его молекулы. Поскольку милиацин ослабляет выраженность окислительного стресса, такой механизм его влияния на высвобождение Nrf-2 представляется маловероятным. Однако это не исключает возможного индуцирующего действия милиацина на активность трансляции белка Nrf-2, установленного для других антиоксидантов [237]. Это повышает свободный (мобильный) пул данного фактора транскрипции в цитозоле, транслоци-рующегося в ядро для последующего связывания с рецепторным сайтом ARE. Другой механизм активации ARE милиацином мог быть сопряжен с его прямым индуцирующим влиянием на ARE, установленным в отношении многих ароматических или гетероциклических соединений растительного происхождения, включая тритерпеноиды [184].

Отменяя MTX - индуцированную супрессию гена glured, милиацин мог способствовать возрастанию внутриклеточного пула GSH и, соответственно, повышению эффективности всей глутатионзависимой системы антиокси-дантной защиты. При этом может осуществляться еще один механизм активации ARE, определяемый соотношением окисленных и восстановленных тиолов, в поддержании баланса которых глутатиону (наряду с тиоредокси-ном и пероксиредоксином) принадлежит центральная роль [56].

Очевидно, что снижение милиацином выраженности окислительного стресса способно положительно влиять на экспрессию и других факторов ан-тиоксидантной защиты, в том числе - через ослабление генотоксического эффекта АФК с одновременным снижением АФК - индуцируемой активации экспрессии генов проапоптотических факторов, включая ген сур 2е1. Угнетение последнего могло быть обусловлено и прямым действием милиацина, установленным, как отмечалось выше (глава 5), в отношении других тритер-пеноидов.

Наряду с влиянием на экспрессию генов ведущих факторов поддержания редокс-баланса клетки, защитный эффект милиацина при активации окислительного стресса, как было показано ранее [101], опосредуется также повышением устойчивости клеточных мембран к повреждающему действию АФК и продуктов липопероксидации. Такой эффект тритерпеноида связан с его гидрофобностыо, обеспечивающей возможность встраивания в липидный бислой мембраны. Подобное встраивание способно экранировать полиненасыщенные жирные кислоты от атаки радикал-частицами и (или) укреплять прочность упаковки фосфолипидов мембран, противодействуя детергентопо-добным эффектам [141]. В результате ограничиваются нарушения фосфоли-пидного состава мембран в виде уменьшения содержания в них наиболее метаболически активной фракции фосфотидилсерина, снижения доли фосфати-дилхолина и фосфатидилэтаноламина и возрастания метаболически инертного сфингомиелина [87]. Таким образом, оказывая модифицирующее воздействие на липидные компоненты мембран, милиацин выступает и как «структурный мембранопротектор», способный в условиях генерации АФК поддерживать жидкостные характеристики мембран на уровне, обеспечивающем необходимую активность мембраносвязанных процессов.

В рамках данной работы определенный интерес представляет вопрос о влиянии милиацина и на процесс восстановления структурных, биохимических и функциональных параметров клеток печени после воздействия MTX. Полученные результаты свидетельствуют о том, что использование тритерпеноида обусловливало меньшую продолжительность этого процесса. При анализе такой ситуации безусловного внимания заслуживает оценка изначальной выраженности формирующихся нарушений, которые у животных, подвергавшихся воздействию MTX без последующего применения милиацина, были более глубокими, чем в условиях его применения. Соответствующий вывод заключается в том, что меньшая степень депрессии исследуемых показателей определяла в последующем и меньшую продолжительность их восстановления. Вместе с тем не исключается, что интенсивность подобной регенерации» при использовании милиацина обусловливалась и его непосредственным влиянием на восстановление клеточных популяций в органе. В основе такого прямого эффекта милиацина могла лежать известная способность тритерпеноидов к пренилированию белков (путем присоединения с помощью пренилтрансфераз к белковым молекулам пренильной группы фарнезила или геранилгеранильного остатка), обеспечивающая последним приобретение липофильных свойств, встраивание в мембрану и реализацию функциональной активности [103]. Спектр этой активности достаточно широк и включает модуляцию сигнальных систем, в том числе ответственных за рост и диференцировку клеток [157].

Полученные результаты о гепатопротекторном влиянии милиацина и об антиоксидантном механизме этого влияния поставили перед необходимостью оценки эффективности защитного действия тритерпеноида по сравнению с официальными гепатопротекторами растительного происхождения с антиоксидантными свойствами. Выполнение этого раздела работы с использованием карсила, содержащего флавоноиды расторопши, позволило установить что милиацин в используемой разовой дозе (2 мг/кг) при трехкратном внутрибрюшинном введении превосходит карсил по способности ограничивать МТХ-индуцируемую гиперферментемию. В отношении ограничения нарушений пигментного обмена эффективность милиацина соответствовала эффективности карсила в разовой дозе 6 мг/кг.

В целом, результаты работы, отражающие защитное влияние милиацина в отношении гепатотоксичности MTX, раскрывают новый аспект биологического действия тритерпеноида и определяют возможность его использования в комбинации с MTX при химиотерапии опухолей.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Калинина, Ольга Вячеславовна, 2013 год

1. Автандилов, Г. Г. Морфометрия в патологии. М.: Медицина, 1973. -248с.

2. Активность антиоксидантных ферментов крови при хронических поражениях печени / Б. Н. Матюшин, А. С. Логинов, Г. II. Якимчук, В. Д. Ткачев // Вопросы медицинской химии. 1995. - Т. 41, № 4. - С. 54 -56.

3. Амосов, А. С. Тритерпеноиды растений родов Glycyrrhiza L. и Meristo-tropis Fisch, et Mey / А. С. Амосов, В. И. Литвиненко // Химико фармацевтический журнал. - 2003. - Т. 37, № 2. - С. 31 - 42.

4. Андреева, Л. И. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобарбитуровой кислотой / Л. И. Андреева, Л. А. Кожемякин, А. А. Кишкун //Лабораторное дело. 1988. - № 11. - С. 41 - 43.

5. Антиоксидантная активность полифенолов из дальневосточного растения тиса остроконечного / М. В. Веселова, С. А. Федореев, Н. А. Василевская, В. А. Денисенко, А. В. Герасименко // Химико-фармацевтический журнал. 2007. - Т. 41. - С. 29 - 34.

6. Антиоксидантные свойства лекарственных растений / В. Ф. Громовая, Г. С. Шаповал, И. Е. Миронюк, Н. В. Нестюк // Химико-фармацевтический журнал. 2008. - Т. 42, № 1. - С. 26 - 28.

7. Арушанян, Э. Б. Временная организация деятельности иммунной системы и участие в ней эпифиза / Э. Б. Арушанян, Э. В. Бейер // Успехи физиологических наук. 2006. - Т. 37, № 2. - С. 3 - 10.

8. Арушанян, Э. Б. Участие эпифиза в антистрессовой защите мозга // Успехи физиологических наук. 1996. - Т. 27, № 3. - С. 31 - 46.

9. Арчаков, А. И. Микросомальное окисление. М.: Наука, 1975. - 326 с.

10. Ашмарин, И. П. Нейрохимия / И. П. Ашмарин, А. Е. Антипенко, В. В. Ашапкин. М.: Изд-во Института биомедицинской химии РАМН, 1996. - 470 с.

11. Бабаева, А. Г. Единство и противоположность цитогенетической активности лимфоцитов и их антителообразующей функции при восстановительных процессах в органах // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1999а. - Т. 128, № 11. - С. 484 - 490.

12. Бабаева, А. Г. Прошлое, настоящее и будущее проблемы лимфоидной регуляции пролиферации нелимфоидных клеток // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1995. - Т. 124, № 5. - С. 230 - 234.

13. Бабаева, А. Г. Репаративные процессы и иммунитет // Известия АН. Сер. Биология. 1999.6. - № 6. - С. 261 - 269.

14. Бабаева, А. Г. Роль лимфоцитов в оперативном изменении программы развития тканей / А. Г. Бабаева, Н. М. Геворкян, Е. А. Зотиков. М.: Изд-во РАМН, 2009. - 108 с.

15. Барышников, А. Ю. Иммунологические проблемы апоптоза / А. Ю. Барышников, Ю. В. Шишкин. М.: Эдиториал УРСС, 2002. - 320 с.

16. Белушкина, Н. Н. Молекулярные основы патологии апоптоза / Н. Н. Бе-лушкина, С. Е. Северин//Архив патологии. 2001. -№ 1.- С. 51-60.

17. Березов, Т. Т. Фолиевая кислота / Т. Т. Березов, Б. Ф. Коровкин // Биологическая химия. 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1998. -С.230-232.

18. Бескина, О. А. Возможные механизмы антиоксидантной активности глицирризиновой кислоты / О. А. Бескина, А. Ю. Абрамов, А. Г. Габдулханова, А. В. Миллер, В. Г. Сафронова, М. В. Замараева // Биомедицинская химия. 2006. - Т. 52, вып. 1. - С. 60 - 68.

19. Биокинетические параметры показателей токсичности высоких доз ме-тотрексата / Т. В. Плетнева, Н. С. Степанова, В. II. Байкова, К. А. Ко-шечкин // Вестник Российского ун-та дружбы народов. Сер. Медицина. -2008,- № 3. С. 10-13.

20. Богуш, Т. А. Влияние индукции и ингибирования монооксигеназ печени на токсическое и лечебное действие винкристина / Т. А. Богуш, С. М. Сигдикова, А. Б. Сыркин // Антибиотики. 1986. - № 4. - С. 265 - 268.

21. Богуш, Т. А. Монооксигеназы печени и действие противоопухолевых препаратов: автореф. дис. . докт. мед. наук. М., 1985. - 31с.

22. Богуш, Т. А. Скорость метаболизма антипирина у онкологических больных при проведении специфической терапии / Т. А. Богуш, Г. Я. Цейлин, А. Ф. Бухпы // Вопросы онкологии. 1992. - Т. 38, № 4. - С. 1288 - 1293.

23. Богуш, Т. А. Уменьшение токсичности противоопухолевых препаратов путь к повышению эффективности лечения злокачественных опухолей Т. А. Богуш, Е. А. Богуш // Вопросы онкологии. 1995. - Т. 41, № 2. - С. 52-53.

24. Введение в фармакотерапию злокачественных опухолей / М. Л. Герша-нович, В. А. Филов, М. А. Акимов, А. А. Акимов. СПб.: Сатис, 1999. -70 с.

25. Венгеровский, А. И. Гепатопротекторы, содержащие фосфолипиды, ослабляют иммунодепрессивный эффект преднизалона при экспериментальном хроническом гепатите // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2004. - Т. 67, № 4. - С. 50 - 53.

26. Венгеровский, А. И. Механизм гепатопротекции при экспериментальном токсическом гепатите / А. И. Венгеровский, А. С. Саратиков // Фармакология и токсикология. 1988. - Т. 51, № 1. - С. 89 - 93.

27. Ветошкина, Т. В. Ранние и отдаленные последствия токсического действия на печень противоопухолевого препарата платины / Т. В. Ветошкина, Т. 10. Дубская, В. Е. Гольдберг // Экспериментальная и клиническая фармакология. 1997. - Т. 60, № 4. - С. 57 - 59.

28. Владимиров, 10. А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестник РАМН. 1998.-№7.-С. 43-51.

29. Высоцкая, В. В. Препараты, обеспечивающие переносимость цитостати-ков и улучшающие качество жизни больных в процессе химиотерапии / В. В. Высоцкая, Н. О. Попова, И. О. Недавняя // Сибирский онкологический журнал. 2004. - № 1. - С. 51 - 54.

30. Газиев, А. И. Повреждение митохондриального генома и пути его сохранения / А. И. Газиев, Г. О. Шайхаев // Генетика. 2008. - Т. 44, № 4. - С. 437 - 455.

31. Гепатопротекторы / С. В. Оковитый, Н. Н. Безбородкина, С. Г. Улейчик, С. Н. Шуленин. М.: ГЕОТАР - Медиа, 2010. - 112 с.

32. Гепатотоксическое действие лекарственных препаратов некоторых фармакологических групп / Ю. А. Кинзирская, Т. А. Богуш, Н. В. Остапчук, В. Г. Фисенко // Клиническая медицина. 2003. - Т. 66, № 4. - С. 56 - 59.

33. Гепатотоксичность противоопухолевых препаратов / Г. В. Карпова, Т. И. Фомина, Т. В. Ветошкина, Т. Ю. Дубская, Л. А. Ермолаева, А. А. Чурин // Вестник РАМН. 2009. - № 11. - С. 17 - 20.

34. Глицам как средство повышения эффективности химиотерапии и хирургического метода лечения экспериментальных опухолей / Т. Г. Разина, Е. П. Зуева, Е. Н. Амосова, В. В. Жданов // Вопросы онкологии. 1999. -Т. 45, № 5. - С. 554 - 556.

35. Горбаков, В. В. Опыт применения гептрала в лечении диффузных заболеваний печени / В. В. Горбаков, В. П. Галик, С. М. Кириллов // Терапевтический архив. 1998. - Т. 70, №10. - С. 82 - 86.

36. Городецкий, В. М. Осложнения противоопухолевой терапии // Гематология и трансфузиология. 1998. - Т. 43, № 1. - С. 11 - 15.

37. Грек, О. Р. Протективное действие энтеросгеля на лизосомы печени крыс при введении комплекса цитостатических препаратов / О. Р. Грек, С. В.

38. Мишенина, А. Б. Пупышев // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2002. - Т. 134, № 10. - С. 413 - 417.

39. Гублер, Е. В. Применение непараметрических критериев статистики в медико биологических исследованиях / Е. В. Гублер, А. А. Генкин. -Л.: Медицина, 1973.- 141с.

40. Гудвин, Т. Введение в биохимию растений: пер. с англ. / Т. Гудвин, Э. Мерцер. М.: Мир, 1986. - Т. 2. - С. 42 - 106.

41. Гудман, А. Клиническая фармакология. Кн. 3. Антиметоболиты: пер. с англ. / А. Гудман, А. Г. Гилман. М.: ППП, 2006. - Гл. 52, разд. И. - С. 1079- 1083.

42. Данилова, И. Г. Влияние системы фагоцитирующих мононуклеаров на регенерацию тканей с разной восстановительной способностью: авто-реф. дис. . докт. биол. наук. Екатеринбург, 2006. - 50с.

43. Друзья или враги. Активные формы кислорода и азота / Д. Б. Зоров, С. Ю. Банникова, В. В. Белоусов, М. Ю. Высоких, JI. Д. Зорова, Н. К. Исаев, Б. Ф. Красников, Е. Ю. Плотников // Биохимия. 2005. - Т. 70, №2. -С. 265 - 272.

44. Дубинина, Е. Е. 4-гидрокси-транс-2-ноненаль в функциональной активности клеток / Е. Е. Дубинина, В. А. Дадали // Биохимия. 2010. - Т. 75, вып. 9.-С. 1189-1212.

45. Ермолаева, J1. А. Гепатотоксичность противоопухолевых препаратов растительного происхождения паклитаксела и этопозида и ее фармакологическая коррекция: автореф. дис. . канд. мед. наук. Томск, 2008.а -26 с.

46. Железнова, А. Д. Экспериментальное обоснование применения милиацина для коррекции иммуиосупрессии, индуцированной метотрексатом: автореф. дис. . канд. мед. наук. Пермь, 2010. - 22с.

47. Зенков, II. К. Некоторые принципы и механизмы редокс-регуляции / Н. Н. Зенков, Е. Б. Меньшикова, В. О. Ткачев // Кислород и антиоксиданты. -2009.-Вып. 1.-С. 3-64.

48. Золотницкая, Р. П. Методы гематологических исследований // Лабораторные методы исследования в клинике: справочник / В. В. Меньшиков, Л. Н. Делекторская, Р. П. Золотницкая; под ред. В. В. Меньшикова. М.: Медицина. - 1987. - Разд. 3.2 - С. 107-109.

49. Иванова, А. А. Влияние модифицированных витаминов с антиоксидант-ным действием на эффективность и токсичность противоопухолевой терапии в эксперименте: автореф. дис. . канд. мед. наук. Томск, 2010. -25 с.

50. К вопросу о механизме антиоксидантной активности пептидных производных бетулоновой кислоты / И. Н. Цимбал, H. М. Сторожок, Н. И. Петренко, Г. А. Толстиков // Биоантиоксидант: тез. докл. VI междунар. конф. М., 2002. - С. 607 - 609.

51. Казюлин, А. Н. Проблемы гепатотоксичности при проведении химиотерапии онкологических заболеваний и методы ее коррекции / А. Н. Казюлин, Л. 3. Вельмер, И. А. Королева // Фарматека. 2010. - № 17. - С. 82 -90.

52. Kapp, Я. Макрофаги. Обзор ультраструктуры и функции: пер. с англ. -М.: Медицины. 1978. - 188 с.

53. Кириллова, А. В. Иммунотропная активность милиацина: автореф. дис. . канд. мед. наук. Пермь, 2004. - 22 с.

54. Кокряков, В. II. Суперсемейства скавенджер-рецепторов // Очерки о врожденном иммунитете СПб.: Наука, 2006. - Гл. 2.3. - С. 15 - 18.

55. Красиков, С. И. Ограничение алкогольных поражений печени и сердца адаптацией к периодической гипоксии: автореф. дис. . докт. мед. наук. Челябинск, 1995. - 40 с.

56. Кукес, В. Г. Клиническая фармакология цитостатиков / В. Г. Кукес, А. К. Стародубцев // Клиническая фармакология и фармакотерапия: учебник для вузов. М.: ГЭОТАР-МЕДИА, 2003. - С. 441- 442.

57. Кулинский, В. И. Биологическая роль глутатиона / В. И. Кулинский, Л.

58. С. Колесниченко // Успехи современной биологии. 1990. - Т. 110, вып. 1(4).-С. 20-33.

59. Куркумов, И. А. Лекарственное поражение печени при лечении онкоге-матологических заболеваний // Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика. 2010. - Т. 3, № 1. -С. 60 - 67.

60. Куценко, С. А. Основы токсикологии. СПб., 2002. - 342с.

61. Лакин, Г. Ф. Биометрия: учеб. пособие для спец. вузов. 4-е изд., пере-раб. и доп. - М.: Высшая школа, 1990. - 352с.

62. Ланкин, В. 3. Свободнорадикальные процессы в норме и при заболеваниях сердечно-сосудистой системы / В. 3. Ланкин, А. К. Тихадзе, Ю. Н. Беленков. М., 2000. - 69 с.

63. Ларионова, В. Б. Гепатотоксичность лекарственных препаратов у онкологических больных / В. Б. Ларионова, Э. Г. Горожанская, О. А. Коломейцев // Вестник интенсивной терапии. 2004. - № 3. - С. 1 - 10.

64. Лушников, Е. Ф. Морфология клетки (Апоптоз) / Е. Ф. Лушников, А. Ю. Абрамов. М.: Медицина, 2001. - 192 с.

65. Лю, Б. Н. Кислородно-перекисная концепция апоптоза: повышение уровня аргументации и развития / Б. Н. Лю, М. Б. Лю // Успехи современной биологии. 2005. - Т. 125, № 6. - С. 567 - 578.

66. Люльман, X. Наглядная фармакология: пер. с нем. / X. Люльман, К. Мор, Л. Хайн. М.: Мир, 2008. - С. 308 - 310.

67. Машковский, М. Д. Лекарственные средства: пособие по фармакотерапии для врачей. 10 изд. - М.: Медицина, 1987. - Т. 2. - С. 451- 452.

68. Маянский, А. Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А. Н. Маянский, Д. Н. Маянский. Новосибирск: Наука, 1983. - 254 с.

69. Гольдберг, Е. Н. Амосова, Е. П. Зуева, Т. Г. Разина, С. Г. Крылова, П. С. Зориков // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2008 -Т. 145, №2. -С. 213-217.

70. Позднякова, С. В. Морфофункциональное исследование цитопротектор-ного действия аланинамидных производных бетулоновой кислоты на модели цитотоксического повреждения органов: автореф. дис. . докт. биол. наук. Новосибирск, 2007 а. - 39 с.

71. Попов, А. М. Механизмы биологической активности гликозидов женьшеня: сравнение с гликозидами голотурий // Вестник ДВО РАН. 2006. -№6.-С. 92- 104.

72. Предотвращение Ы-ацетил-Ь-цистеином апоптоза тимоцитов, вызванного УФС-облучением / В. А. Долгачев, В. Н. Афанасьев, Н. Н. Долгачева, В. А. Печатников // Иммунология. 2000. - №4. - С. 37-38.

73. Роль цитокинов в патогенезе и терапии опухоли // Цитокины / С. А. Кетлинский, А. С. Симбирцев. СПб.: Фолиант, 2008. - Гл. 20. - С. 534-550.

74. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. чл.-корр. РАМН проф. Р. У. Хаб-риева. М.: Медицина, 2005. - 832 с.

75. Сазонтова, Т. Г. Значение баланса прооксидантов и антиоксидантов -равнозначных участников метаболизма / Т. Г. Сазонтова, Ю. В. Архи-пенко // Патологическая физиология и экспериментальная терапия.2007.- №3. С. 2 - 18.

76. Саратиков, А. С. Новые гепатопротекторы природного происхождения / А. С. Саратиков, А. И. Венгеровский // Экспериментальная и клиническая фармакология. 1995. - Т. 58, № 1. - С. 8 - 11.

77. Саратиков, А. С. Коррекция гепатопротекторами структурно-метаболических нарушений в печени при интоксикации О-галактозамином / А. С. Саратиков, А. И. Венгеровский, И. II. Седых // Фармакология и токсикология. 1990. - Т. 53, № 2. - С. 38 - 40.

78. Северин, Е. С. Биохимия: учебник / под ред. Е. С. Северина. 2-е изд., испр. - М: ГЭОТАР-МЕДИА, 2004. - 784 с.

79. Сейфулла, Р. Д. Антиоксиданты / Р. Д. Сейфулла, Е. А. Рожкова, Е. К. Ким // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2009. - Т. 72, № 3. - С. 60-64.

80. Семейство интерлейкина 12 // Цитокины / С. А. Кетлинский, А. С. Сим-бирцев. СПб.: Фолиант, 2008. - Гл. 8. - С. 234-252.

81. Семичева, Т. В. Эпифиз: современные данные о физиологии и патологии Т. В. Семичева, А. Ю. Гарибашвили // Проблемы эндокринологии. -2000. Т. 46, №4.-С. 38-44.

82. Сибиряк, С. В. Цитохром Р 450 и иммунная система / С. В. Сибиряк, В. А. Вахитов, Н. Н. Курчатова. Уфа: Гилем, 2003. - 211 с.

83. Синтез и фармакологическая активность диникотината бетулина / О. Б. Флехтер, Л. Т. Карачурина, Л. Р. Нигматулина, Т. А. Сапожникова, Л. А.

84. Балтина Ф. С. Зарудий // Биоорганическая химия. 2002. - Т. 28, № 6. -С. 543 - 550.

85. Скакун, Н. П. Экспериментальная фармакотерапия поражений печени, вызванных индометацином / Н. П. Скакун, Е. В. Климшок // Фармакология и токсикология. 1990. - Т. 53, № 6. - С. 52 - 54.

86. Скулачев, В. П. Эволюция, митохондрии и кислород // Соросовский образовательный журнал. 1999. - №9. - С. 4 - 10.

87. Справочник по клинической фармакологии и фармакотерапии / ред.: проф. И. С. Чекман, проф. А. П. Полещук, проф. О. А. Пятак. Киев: Здоров'я, 1986. - С. 482 - 483.

88. Средство, стабилизирующее биологические мембраны: а. с. № 1043860 СССР: А 61 К 35/78 / А. Н. Чернов, М. М. Павлова, Л. Е. Олифсон. -М.: 1983. 5с.

89. Ставровская, А. А. Механизмы лекарственной устойчивости опухолевых клеток // Канцерогенез / под ред. Д. Г. Заридзе. М.: Медицина, 2004.-Гл. 13.-С. 558 -574.

90. Структурная реорганизация печени крыс при цитотоксическом действии доксорубицина / О. П. Молодых, Е. Л. Лушникова, М. Г. Калинникова, Л. М. Непомнящих // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2006. - Т.141, № 5. - С. 579 - 585.

91. Судаков, К. В. Теория функциональных систем: постулаты и принципы построения организма человека в норме и при патологии // Патологичеекая физиология и экспериментальная физиология. 2007. - № 4. - С. 2 -11.

92. Турпаев, К. Т. Активные формы кислорода и регуляция экспрессии генов (обзор) // Биохимия. 2002. - Т. 67, вып. 3. - С. 339 - 353.

93. Урбах, В. Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях. М.: Медицина, 1975. - 295 с.

94. Фаульхабер, Г. Д. Иммуносупрессивные средства // Иммуносупрес-сивная терапия: пер. с нем. / под ред. Д. Нелиуса; ред. пер. чл.-корр. АМН СССР В. А. Насонова. М.: Медицина, 1984. - С. 46 - 52.

95. Филимонова, А. А. Особенности метаболизма разных лекарственных средств с участием изоферментов цитохрома Р 450 / А. А. Филимонова, А. У. Зиганшин, Л. С. Зиганшина // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2007. - Т. 70, № 3. - С. 66 - 77.

96. Форман, Дж. В. Физиология кислотно-щелочного состояния в норме и при патологии // Ранняя диагностика болезней обмена веществ: пер. с англ. / Р. М. Кон, К. С. Рот. М.: Медицина, 1986. - Гл. 3. - С.75 - 105.

97. Фрейдлин, И. С. Система мононуклеарных фагоцитов. М.: Медицина, 1984.-272 с.

98. Фролов, Б. А. Милиацин как мембранопротектор. Защитное действие милиацина при детергент-индуцированной иммуносупрессии / Б. А. Фролов, А. В. Кириллова // Российский аллергологический журнал.2011. № 4, вып. 1. - С. 402 - 403.

99. Функциональная активность сфингомиелинового цикла печени крыс при хроническом токсическом гепатите / В. Ю. Серебров, Д. И. Кузьменко, П. Г. Буров, С. В. Новицкий // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2008. - Т. 146, № 12. - С. 634 - 637.

100. Функциональное состояние печени в процессе регенерации и его иммунологическая регуляция / В. А. Черешнев, И. Г. Данилова, Б. Г. Юшков, М. Т. Абидов // Вестник Уральской академической науки. 2005. - № 3. - С. 85 - 88.

101. Химическая природа и биологическая активность милиацина / JI. Е. Олифсон, Н. Д. Осадчая, Б. Г. Нузов, К. Г. Галкович, М. М. Павлова // Вопросы питания. 1991. - № 2. - С. 57 - 59.

102. Храмцова, Ю. С. Современные представления о роли иммунной системы в регуляции регенераторных процессов: автореф. дис. . канд. биол. наук. Екатеринбург, 2004. - 22 с.

103. Цитокиновая регуляция биотрансформации ксенобиотиков и эндогенных соединений / С. В. Сибиряк, В. А. Черешнев, А. С. Симбирцев, Д. С. Сибиряк, Т. В. Гаврилова. Екатеринбург: УрО РАН, 2006. - 160 с.

104. Цитокины, регулирующие созревание и функции лимфоцитов // Цито-кины / С. А. Кетлинский, А. С. Симбирцев. СПб.: Фолиант, 2008. - Гл. 9. - С. 253-325.

105. Шарапов, И. В. Влияние производных бетулина на антиоксидантный го-меостаз и метаболизм ксенобиотиков в печени при экспериментальной полихимиотерапии: автореф. дис. . канд. мед. наук. Томск, 2009. - 24 с.

106. Шульпекова, Ю. О. Лекарственные поражения печени // Врач. 2010. -Спец. вып. - С. 4 - 8.

107. Энтеросорбенты усиливают гепатозащитное действие эплира при экспериментальном токсичекском гепатите / А. И. Венгеровский, Е. Л. Головина, В. Н. Буркова, А. С. Саратиков // Экспериментальная и клиничеекая фармакология. 2001. - Т. 64, № 1. - С. 46 - 48.

108. Юшков, Б. Г. Влияние иммуномодуляторов на регенерацию печени / Б. Г. Юшков, И. Г. Данилова, Ю. С. Храмцова // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2006. - Т. 69, № 1. - С. 53 - 55.

109. Юшков, В. В. Иммунокорректоры: руководство для врачей и провизоров / В. В. Юшков, Т. А. Юшкова, А. В. Казьянин. Екатеринбург: ИРА УТК, 2002. - 255 с.

110. Яковенко, Э. П. Хронические заболевания печени: диагностика и лечение / Э. П. Яковенко, П. Я. Григорьев // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2002. - № 5. - С. 40 - 44.

111. Ярилин, А. А. Моноциты и макрофаги // Иммунология: учебник. М.: ГЭОТАР-МЕДИА, 2010. - Гл. 2.1.5. - С. 63 - 71.

112. Alam, S. S. Protective role of taurine against genotoxic damage in mice treated with methotrexate and tamoxfine / S. S. Alam, N. A. Hatiz, A. H. Abd

113. EI Rahim // Environ Toxicol Pharmacol. - 2011. - Vol. 31. - P. 143 - 152.

114. Anticancer activity of 2a, 3a, 190, 23P Nentahydroxyurs-12-en-28-oic acid (THA) a novel triterpenoid isolated from Sinojackia sarcocorpa / O. Wand, S. Liu, J. Zou, L. Lu, L. Chen, S. Qiu, H. Li, X. Lu // Plos One. - 2011. - Vol. 6, №6.-P. 21130.

115. Antihistaminic and antieicosanoid effects of oleanolic and ursolic acid fraction from Helichrysum picardii / R. C.Santos, G. M. D. Garcia, R. M. T.Saenz, V. R. de la Puerta // Pharmazie. 2007. - Vol. 62, № 6. - P. 459 - 462.

116. Antioxidant and hepatoprotective actions of medicinal herb, Terminalia ca-tappa L. from Okinawa Island and its tannin corilagin / S. Kinoshita, Y. Inoue, S. Nakama, T. Ichiba, Y. Aniya // Phytomedicine. 2007. - Vol.14, № 11. -P. 755 - 762.

117. Antitumor activity and mechanisms of action of total glucosides from aerial part of Gimicifuga dahurica targeted against hepatoma / Z. Tian, J. Si, Q. Chang, I. Zhou, S. Chen, P. Xiao, E. Wu // BMC Cancer. 2007. - № 7. - P. 237.

118. Anti-tumor and and cancerogenic activities of triterpenoid, beta bos wellic acid / M. T. Huang, V. Badmaev, Y. Ding, Y. Liu, J. G. Xie, C. T. Ho // Bio-factors. - 2000. - Vol. 13. - P. 225 - 230.

119. Apoptotic body engulfment by a human stellate cell line is profibrogenic / A. Canbay, P. Taimr, N. Torok, H. Higuchi, S. Friedman, G. J. Gores // Lab. Invest. 2003. - Vol. 83. - P. 655 - 663.

120. Beta-glucan ameliorates methotrexate-induced oxidative organ injury via its antioxidant and immunomodulatory effects / G. Sener, E. Ek§ioglu-Demiralp, M. Cetiner, F. Ercan, B.C. Yegen // Eur. J. Pharmacol. 20066. - Vol. 542, № 1-3.-P. 170- 178.

121. Biochemical mechanisms in drug-induccd liver injury: certainties and doubts / I. Grattagliano, L. Bonfrate, C. V. Diogo, H. H. Wang, D. Q. Wang, P. Portin-casa // World J. Gastroente rol. 2009. - Vol. 15, № 39. - P. 4865 - 4876.

122. Biswal, B. K. Differential usage of the transport Systems for Folic acid methotrexate in Normal Human T-Lymphocytes and Leukemic Cells / B. K. Biswal, R. S. Verma // J. Biochem. 2009. - Vol. 146, № 5. - P. 690 - 703.

123. Bondy, S. C. Contribution of hepatic cytochrome P450 systems to the generation of reactive oxygen species / S. C. Bondy, S. Naderi // Biochem Pharmacol. 1994. - Vol. 48, № 1. - P. 155 - 159.

124. Cederbaum, A. I. Nrf 2 and antioxidant defense against CYP2 El toxicity // Expert Opin. Drug Metab. Toxicol. 2009. - Vol. 5, № 10. - P. 1223 - 1244.

125. Chan, H. T. Inhibition of glycyrrhizic acid on aflatoxin Bl-induced cytotoxicity in hepatoma cells / H. T. Chan, C. Chan, J. W. Ho // Toxicology. -2003. Vol. 188, № 2 - 3. - P. 211 - 217.

126. Chladek, J. An in vitro stady on methotrexate hydroxyiation in rat and human liver / J. Chladek, J. Martinkova, L. Sispera // Physiol. Res. 1997. - Vol. 46, №5.-P. 371 -379.

127. Comparative toxicity of fatty acids on a macrophage cell line (J774) / T. Martins de Lima, M. F. Cury-Boaventura, G. Giannocco, M. T. Nunes, R. Curi // Clin Sci (Lond). 2006. - Vol. 111, № 5. - P. 307 - 317.

128. Davydov, D. Microsomal monooxygenasis in apoptosis: another target for cytochrome C signaling // Trends Biochem Science. 2001. - Vol. 26. - P. 155 - 160.

129. Doxorubicin: the good, the bad and the ugly effect / C. Carvalho, R. X. Santos, Cardosos, S. Correia, P. J. Oliveira, M. S. Santos, P. I. Moreina // Curr. Med. Chem. 2009. - Vol. 16, № 25. - P. 3267 - 3285.

130. Drug related hepatotoxicity / M. E. Mc. Donnell, L. E. Braverman, K. P. Pa-tel, K. Mc. Lntyre, M. Madoriaga // N. Engl. J. Med. - 2006. - P. 2191 - 2193.

131. Effect of docosahexacnoic acid on macrophage functions of rats / M. Bulbul, R. Tan, B. Gemici, G. Hacioglu, A. Agar, V. N. Izgut-Uysal // Immunobiolo-gy. 2007. - Vol. 212, № 7. - P583 - 587.

132. Natl. Acad. Sci. USA. 2005. - Vol.102, № 12. - P. 4584 - 4589.

133. Finley, J. W. The antioxidant responsive element (ARE) may explain the protective effects of cruciferous vegetables on cancer / Nutr. Rev. 2003. - Vol. 61, №7-C. 250-254.

134. Fotoohi, A. K. Mechanisms of antifolate resistance and methotrexate efficacy in leukemia cells / A. K. Fotoohi, F. Alherxioni / / Leuk. Lymphoma. 2008.- Vol. 49, №3.- P. 410 -426.

135. Garattini, S. Pharmacokinetics in cancerchemotherapy // Europe an Journal of concen. 2007. - Vol. 43. - P. 271 - 282.

136. Glycyrrhizin and Licorice Signiticantly Affect the Pharmacokinetics of Methotrexate in Rats / S-P. Lin, S-Y. Tsai, Y-C. Hou, C.P-P. Lee // J. Agric Food Chem. 2009. - Vol. 57, № 5. - P. 1854 - 1859.

137. Hemeida, R. A. Curcumin attenuates methotrexate-induced hepatic oxidative damage in rats / R. A. Hemeida, O. M. Mohafez // J. Egypt. Natl. Cane. Inst.- 2008. Vol. 2.-P. 141 - 148.

138. Hepatoprotection of oleanolic acid is related to its inhibition on mitochondrial permeability transition / K. H. Tang, J. Cao, F. Fang, J. Chen, L. Z. Xu, X. N. Zhao, O. Xu // Am J. Chin Med. 2005. - Vol. 33, № 4. - P. 627 - 637.

139. Hepatoprotective activity of Terminalia catappa L. leaves and its two triterpe-noids / J. Gao, X. Tang, H. Dou, Y. Fan, X. Zhao, Q. Xu // J. Pharm. Pharmacol. 2004. - Vol. 56, № 11. - P. 1449 - 1455.

140. Hong, S. S. Enharced systemic availability of methotrexate in the presence of morin in rats / S. S. Hong, M. J. Jin, H. K. Han // Biopharm. and Drug Dispos. 2008. - Vol. 29, № 4. - P. 189 - 193.

141. Identification and categorization of liver toxicity markers induced by a related pair of drugs / C. W. Chang, F. A. Beland, T. Hines, J. Chen // Int. Mol. Sci. -2011.-Vol. 12, №7.-P. 4609-4624.

142. Involvement of multidrug resistance-associated protein 1 in intestinal toxicity of methotrexate / S. Kato, K. Ito, Y. Kato, T. Wakayama, Y. Kubo, S. Iseki, A. Tsuji // Pharm. Res. 2009. - Vol. 26, № 6. - P. 1467 - 1476.

143. Jeong, H. G. Suppression of constitutive and inducible cytochrome P-450gene expression by alpha-hederin in mice // Biochem. Mol. Biol. Int. 1998. - Vol. 46, № 5. - P. 1019 - 1026.

144. Jeong, H. G. Inhibition of cytochrome P 450 2Ej expression by oleanolic acid: hcpatoprotective effects against carbon tetrachloride induced hepatic injury // Toxical. Lett. - 1999. - Vol. 105, № 3. - P. 215 - 222.

145. Lack of effect of methotrexate on the expression of constitutive hepatic cytochromes P-450 in the male rale / R. L. Cheung, C. Lee, E. J. Jones, D. S. Riddick // Xenobiotica. 1996. - Vol. 26, № 5. - P. 503 - 514.

146. Lateef, O. Methotrexate pulmonary toxicity / O. Lateef, N. Shakoor, R. A. Balk // Expert. Opin. Drug. Saf. 2005. - Vol. 4, № 4. - P. 723 - 730.

147. Lieber, C. S. Aotiology and pathogenesis of alcoholic liver disease // Bail-lieres. Clin. Cacrtoenterol. 1993. - Vol. 7, № 3. - P. 581 - 608.

148. Lieber, C. S. Herman Award Lecture, 1993: a personal perspective on alcohol, nutrition, and the liver // Am. J. Clin. Nutr. 1993. - Vol. 58, № 3. - P. 430 -442.

149. Lindros, K. D. Zonation of cytochrome P 450 expression. Drug metabolism and toxicity in liver// Gen. Pharmacol. 1997. - Vol. 28, № 2. - P. 191 - 196.

150. Liver function studies in children with acute lymphocytic leukemia after cessation of therapy / F. Bessho, H. Kinumaki, S. Yokota, Y. Hayashi, M. Ko-bayashi, S. Kamoshita // Med. Pediatr. Oncol. 1994. - Vol. 23, № 2. - P. Ill - 115.

151. Lobo, D. Pharmakinetic Pharmacodynamic modeling of methotrexate - induced toxicity in mice / D. Lobo, J. P. Balthasan // Journal of pharmacentical sciences. - 2003. - Vol. 92, № 8. - P. 1654 - 1664.

152. Lymrhocytehcpatic stellate cell proximity suggests a direct interaction / N. Muhanna, A. Horani, S. Doron, R. Safadi // Clin, and Exp. Imminol. 2007. -Vol. 148, № 2. - P. 338 - 347.

153. Manna, P. Protection of arsenic induced hepatic disorder by arjunolic acid / P. Manna, M. Sinha, P. C. Sil // Basic Clin Pharmacol Toxicol. - 2007. - Vol. 101, №5.-P. 333 - 338.

154. Mechanism underlying mitochondrial protection of asiatic acid against hepa-totoxicity in mice / J. Gao, J. Chen, X. Tang, L. Pan, F. Fang, L.Yu, X.Zhao, Q. Xu // J. Pharm. Pharmacol. 2006. - Vol. 58, № 2. - P. 227 - 233.

155. Mechanisms of hepatoprotection of Terminalia catappa L. extract on D-Galactosamine-induced liver damage / X. H. Tang, L. Gao, J. Gao, Y. M. Fan, L. Z. Xu, X. N. Zhao, Q. Xu // Am. J. Chin. Med. 2004. - Vol. 32, №4. - P. 509-519.

156. Melatonin prevents methotrexate-induced hepatorenal oxidative injury in rats / N. Jahovic, H. Cevik, A. O. Sehirli, B. C. Yegen, G. Sener// J. Pineal. Res. -2003. Vol. 34, № 4. - P. 282 - 287.

157. Methotrexate, pentose cycle and oxidative stress / R. M. Babiak, A. P. Cam-pello, E. G. Carnieri, M. B. Oliveira // Cell. Biochem. Funct. 1998. - Vol. 16, № 4. - P. 283 - 293.

158. Monoketocholate can decrease transcellular permeation of methotrexate across Caco-2 cell monolayers and reduce its intestinal absorption in rat / G. Chen, J. P. Fawcett, M. Mikov, I. G. Tucker // J. Pharm. Pharmacol. 2009. -Vol. 61, №7.-P. 953 -959.

159. Moscow, J. A. Methotrexate transport and resistance // Leuk. Lymphoma. -1998. Vol. 30, № 3-4. - P. 215 - 224.

160. N-acetylcysteine ameliorates methotrexate-induced oxidative liver damage in rats / A. Cetinkaya, E. Bulbuloglu, E. B. Kurutas, B. Kantarceken // Medical, science monitor. 2006. - Vol. 12, № 8. - P. 274 - 278.

161. Neves, C. The network of methotrexate toxicity / C. Neves, R. Jorge, A. Bar-celos // Acta. Reumatol. Port. 2009. - Vol. 34, № 1. - P. 11 - 34.

162. Oxidants selectively reverse TGF-P suppression of proinflammatory mediator production / Y. Q. Xiao, C. G. Freire-dc-Lima, W. J. Janssen, K. Morimoto, D. Lyu, D. L. Bratton, P. M. Herson // J. Immunol. 2006. - Vol. 176, № 2. -P. 1209- 1217.

163. Parke, D. The rolt of the cytochrome P 450 in the dctoxication and activation of drugs and other chemicals / D. Parke, C. Ioannides, D. Lewis // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1991. - Vol. 69. - P. 537 - 549.

164. Perry, M. C. Chemotherapeutic agents and hepatotoxicity // Semin. Oncol. -1992.-P. 551 -553.

165. Pessaux, P. Chemotherapy's hepatotoxicity: what is the impact on surgery?. //J. Chir (Paris). 2010. - Vol. 147, № 1.-P.7- 11.

166. Pharmacokinetics of glucarpidase in subjects with normal and impaired renal function / M. Phillips, W. Smith, G. Balan, S. Ward // J. Clin Pharmacol.2008. Vol. 48, № 3. - P. 279 - 284.

167. Pharmacokinetics of intravenous methotrexate in mutant nagase analbumine mic rats / Y. H. Choi, Sk. Bal, J. M. Oh, S. O. Kim, M. G. Lee // Biopharm. and Drug Dispos. 2007. - Vol. 28, № 7. - P. 385 - 392.

168. Pharmacological and toxicological studies of Drimys angustifolia Miers. (Winteraceae) / A. Witaicenis, E. F. Roldao, L. N. Seito, N. P. Rocha, L. C. Di Stasi // J. Ethnopharmacol. 2007. - Vol. 111, № 3. - P. 541 - 546.

169. Prolonged survival of renal allograft in rats by methotrexate-albumin conjugates as immunosuppressive therapy / H. Hickstein, D. Wolff, J.Stange, E.

170. Freí, G. Hartung // Transplant. Proc. 2008. - Vol. 40, № 10. - P. 3725 -3727.

171. Purdom-Dickinson, S. H. Translational control of Nrf2 protein in activation of antioxidant response by oxidants / S. E. Purdom-Dickinson, E. V. Sheveleva, H. Sun, Q. M. Chen // Mol. Pharmacol. 2007. - Vol. 72, №. 4. - P. 1074 -1081.

172. Ramadori, G. Effects of systemic chemotherapy on the liver / G. Ramadori, S. Cameron //Ann. Hepatol. 2010. - Vol. 9, № 2. - P. 133 - 143.

173. Regulation of CYP2 B6 in primary human hepatocytes by prototypical inducens / S. R. Faucette, H. Wang, G. A. Hamilton, D. Gilbert, S. Jolley

174. S., C. Lindley // Drug Metab. Dispos. 2004. - Vol. 32, № 3. - P. 348 - 358.

175. Rodrignez-Frias, E. A. Cancer chemotherapy I: hepatocellular injury / E. A. Rodrignez-Frias, W. M. Lee // Clin Liver Dis. 2007. - Vol. 11, № 3. - P. 641 - 662.

176. Rubbia-Brandt, L. Hepatic lesions induced by systemic chemotherapy for digestive cancer // Ann Pathol. 2010. - Vol. 30, № 6. - P. 421 - 425.

177. Saravanan, R. Impact of ursolic acid on chronic ethanol-induced oxidative stress in the rat heart / R. Saravanan, V. Pugalendi // Pharmacol. Repts. -2006a. Vol. 58, № 1. - P. 41 - 47.

178. Saravanan, R. Protective effect of ursolic acid on ethanol-mediated experimental liver damage in rats / R. Saravanan, P. Viswanathan, K.V. Pugalendi // Life Sci. 20066. - Vol. 78, № 7. - P. 713 - 718.

179. Schmiegelow, K. Advances in individual prediction of methotrexate toxicity: a review // Br. J. Haematol. 2009. - Vol. 146, № 5. - P. 489 - 503.

180. Shihata, S. Chemistry and cancer preventing activities of ginserg saponins and some related triterpenoid compounds // J. Korean Med. Sci. 2001. - Vol. 16.-P. 28-37.

181. Six new triterpenoid saponins from the leaves of Ilex oblonga and their inhibitory activities against TMV replication / Z.-J. Wu, M.-A. Ouyang, C.-Z. Wang, Z.-K. Zhang // Chem. and Pharm. Bull. 2007. - Vol. 55, № 3. - P. 422 - 427.

182. Sporn, M. B., Chemoprevention of cancer / M. B. Sporn, N. Suh // Carcinogenesis. 2000. - Vol. 21. - P. 525 - 530.

183. Stankiewicz, A. Effects of amifostine on liver oxidative stress caused by cyclophosphamide administration to rats / A. Stankiewicz, E. Skrzydlewska, M. Makiela // Drug Metabol Drug Interact. 2002 - Vol. 19, № 2. - P. 67 - 82.

184. Suppression of the hydrazine-induced formation of megamitochondria in the rat liver by alpha-tocopherol / J. Antosiewicz, Y. Nishizawa, X. Liu, J. Usuku-ra, T. Wakabayashi // Exp Mol Pathol. 1994 - Vol. 60, № 3 - P. 173 - 187.

185. The effect of 10 triterpenoid compounds on experimental liver injury in mice / J. Liu, Y. Liu, Q. Mao, S. D. Klaassen // Fundam. Appl. Toxicol. 1994. -Vol. 22, № l.-P. 34-40.

186. The synthetic triterpenoids, CDDO and CDDO-imidazolide, are potent inducers of heme oxygenase-1 and Nrf2/ARE signaling / K. Liby, T. Hock, M. M.

187. Yore, N. Suh, A. E. Place, R. Risingsong, C. R. Williams, D. B. Royce, T. Honda, Y. Honda, G. W. Gribble, N. Hill-Kapturczak, A. Agarwal, M. B. Sporn // Canccr Res. 2005. - Vol. 65, № 11. - P. 4789 - 4798.

188. Toxic liver injuries-a current view on pathogenesis. Part I. / M. Bak, M. Czer-niak, M. Kicinska-Krogulska, A. Michowicz, A. Krakowiak // Med Pr. -2011.-Vol. 62.-P. 47-55.

189. Tree new triterpenoids from Peganum nigellastrum / Z. Z. Ma, Y. Hano, T. Nomura, Y. J. Chen // J. Nat. Prod. 2000. - Vol. 63. - P. 390 - 392.

190. Trinchiery, G. Interleukin-12 and the regulation of innate resistance and adaptive immunity // Nature Rev Immunol. 2003. - Vol. 3. - P. 133 - 148.

191. Triterpenoid saponins from acacia victroriae (Bentham) decrease tumor cell proliferation and induce apoptosis / K. Mujoo, V. Haridas, J. J. Hoffmann, G.

192. A. Wachter, L. K. Hutter, Y. Lu, M. E. Blake, G. S. Jayatilake, D. Bailey, G.

193. B. Mills, J. U. Guhermann // Cancer Res. Port. 2001. - Vol. 61. - P. 5486 -5490.

194. Triterpenoid saponins from Androsace umbellata and their anti-proliferative activities in human hepatoma cells / Y. Wang, D. Zhang, W.Ye, Z. Yin, K. P. Fung, S. Zhao, X. Yao // Planta Med. 2008. - Vol. 74, № 10. - P. 1280 -1284.

195. Trypanocidal activity of triterpenes from Arrabidaea triplinervia and derivatives / J. P. V. Leite, A. B. Oliveira, J. A. Lombardi, J. D. S. Filho, E. Chiari // Biol, and Pharm. Bull. 2006.-Vol. 29, № 11. - P. 2307 - 2308.

196. Two Bioactive Pentacyclic Triterpene Esters from the Root Bark of Hibiscus syriacus / Y. Bong-Sik, R. In-Ja, L. In-Kyoung, P. Kyu-Hwan, C. Dong-Ho, H. Kyou-Hoon, Y. Ick-Dong // J. Nat. Prod. 1999. - Vol. 62, № 5. - P. 764 -766.

197. Vincent, H. K. Oxidative stress and potential interventions to reduce oxidative stress in overweight and obesity / H. K. Vincent, K. E. Innes, K. R. Vincent // Diabetes, Obesity Metab. 2007. - Vol. 9, № 6. - P. 813 - 839.

198. Wu, C.-A. Induction of cell deatch by saponin and antigen delivery purpose / C.-A. Wu, Y.-W. Yang // Pharmaccutinal Res. 2004. - Vol. 21. - P. 271 -277.

199. Xu, C. Induction of phase 1, II and III drug metabolism/transport by xenobio-tics / C. Xu, C. Y Li. , A. N. Kong // Arch. Pharm. Res. 2005. - Vol. 28, №3.- P. 249-268.

200. Yokooji, T. Site-specific contribution of proton-coupled folate transporter / haem carrier protein 1 in the intestinal absorption of methotrexate in rats / T.Yokooji, N. Mori, T. Murakami // J. Pharm. Pharmacology. 2009. - Vol. 61,№7.-P.911 -918.

201. Zimecki, M. Effect of methotrexate on the immune response in selected experimental models / M. Zimecki, J. Artym // Postepy Hig. Med. Dosw. 2004. -№ 58. - P. 226 - 235.