Экспериментальное обоснование использования липосомальной формы эмоксипина (производного 3-оксипиридина)для коррекции ишемических и реперфузионных повреждений миокарда тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.03, кандидат наук Торопова, Яна Геннадьевна

• Торопова, Яна Геннадьевна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Торопова, Яна Геннадьевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Общие механизмы ишемического и реперфузионного повреждения сердца

1.2 Роль свободно-радикальных процессов в ишемическом и реперфузионном повреждении миокарда

1.3Механизмы гибели кардиомиоцитов при ишемии и реперфузии

1.4Современный взгляд на использование антиоксидантов для коррекции окислительного стресса

1.5Фармакологические эффекты эмоксипина

1 .бВозможность использования липосомальных препаратов при ишемических и реперфузионных повреждениях миокарда

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.Эксперименты на изолированном сердце

2.1.1 Схема эксперимента

2.1.2Методика подготовки препарата изолированного сердца

2.1.3Методика перфузии изолированного сердца методом Ьап£епс1огйГ

2.1.4Методика перфузии изолированного сердца методом №е1у

2.1.5Моделирование тотальной нормотермической ишемии

2.1.6Методика оценки сократительной функции изолированного сердца

2.1.7Характеристика регистрируемых параметров сократительной функции изолированного сердца

2.1.8Методика оценки насосной функции изолированного сердца

2.1.9Методика измерения коронарного протока изолированного сердца

2.2Фармакологические агенты, используемые при выполнении исследования

2.2.1 Приготовление липосом

2.2.2Распределение животных по сериям экспериментов

2.3Биохимические методы исследования

2.3.1 Определение активности ферментов-маркеров повреждения миокарда

2.3.20пределение уровня свободнорадикальных процессов в миокарде

2.4Морфологический анализ кардиомиоцитов методом TUNEL

2.5Иммуноферментный анализ содержания оксида азота

2.6Статистическая обработка результатов

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Влияние введения «пустых» липосом 50 и 100 нм на ишемизированный и реперфузируемый миокард

3.2Влияние введения липосом, содержащих 0,1 мг/мл и 0,25 мг/мл эмоксипина, на толерантность сердца к воздействию ишемии и реперфузии

3.2.1 Степень повреждения миокарда при реперфузии в условиях кардиопротекции 0,1 мг/мл и 0,25 мг/мл липосомальной формой эмоксипина

3.2.2Антиоксидантные системы миокарда при тотальной ишемии и реперфузии при введении липосом, содержащих 0,1 мг/мл и 0,25 мг/мл эмоксипина

3.2.3Коронарный кровоток ишемизированного миокарда в период реперфузии при введении 0,1 мг/мл и 0,25 мг/мл липосомальной формы эмоксипина

3.2.3.1 Активность эндотелиальной ИО-синтазы (по уровню стабильных метаболитов N0) после введения 0,1 мг/мл и 0,25 мг/мл липосомальной формы эмоксипина при тотальной нормотермической ишемии и реперфузии

3.2.3.2Взаимосвязь выраженности свободнорадикальных процессов в миокарде, уровня N0 и уровня коронарного протока реперфузируемого миокарда при введении липосомальной формы эмоксипина

3.2.4Сократительная функция миокарда в условиях тотальной нормотермической ишемии и реперфузии после введения 0,1 мг/мл и 0,25 мг/мл липосомальной формы эмоксипина

3.2.5Насосная функция миокарда крыс в условиях тотальной нормотермической ишемии и реперфузии после введения 0,1 мг/мл и 0,25 мг/мл липосомальной формы эмоксипина

ГЛАВА 4 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

95

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экспериментальное обоснование использования липосомальной формы эмоксипина (производного 3-оксипиридина)для коррекции ишемических и реперфузионных повреждений миокарда»

ВВЕДЕНИЕ АКТУАЛЬНОСТЬ

Ишемическая болезнь сердца является одной из главных причин инвалидизации и смертности населения развитых стран (Cheng J. W. et al., 2009). Одним из основных методов лечения ишемической болезни сердца является проведение шунтирующих операций на сердце в условиях искусственного кровообращения. Однако тотальная ишемия и реоксигенация (реперфузия), сопровождающие исскуственное кровообращение, провоцируют повреждения эндотелия коронарных сосудов и клеток миокарда, что может приводить к таким взаимосвязанным и клинически значимым изменениям, как гибель кардиомиоцитов, неполное восстановление коронарного кровотока, «станнирование» миокарда и в конечном счете нарушение сократимости (сократительной дисфункции) (Turer А. Т. et al., 2010). В связи с этим особое значение приобретает эффективность интраоперационной защиты миокарда.

К сожалению, в настоящее время не существует лекарственных средств, радикально повышающих устойчивость миокардиальных клеток к патогенному воздействию - ишемии и реперфузии.

Максимальный протективный эффект обеспечивают лекарственные средства, которые оказывают не заместительный или симптоматический эффекты, а нивелируют влияние одного или большего количества элементов, участвующих в патогенезе реперфузионного повреждения (т.е. обладающие патогенетическим действием).

Поскольку в развит™ ишемического и реперфузионного повреждения миокарда особую роль играет активация процессов перекисного окисления липидов на фоне снижения активности защитных антиоксидантных ферментных систем (окислительный стресс) (Меньшикова Е. Б. и др., 2008; Schulz R. et al.,

2004), нивелирование дисбаланса антиоксидантной системы является одним из направлений возможного терапевтического воздействия. Патогенетически обоснованным в данном случае представляется использование средств фармакологической коррекции окислительного стресса - экзогенных анти-оксидантов (Вввве Б. е1 а1., 2006).

Многочисленные исследования в области антиоксидантной защиты не позволяют сделать однозначные выводы о целесообразности применения антиоксидантов при заболеваниях, сопровождающихся окислительным стрессом (Но^ег К. Е. е1 а1., 2004; Ро^ак В. & а1., 2012; 8ео М. У. & а1., 2002). Во многих экспериментальных исследованиях была продемонстрирована эффективность использования антиоксидантных препаратов при заболеваниях, в которых окислительный стресс играет значительную патогенетическую роль (Неверов И. В., 2001; КаУскопеп 3. е1 а1., 2001). Однако в ряде исследований была установлена не только неэффективность применяемых антиоксидантов, но и их способность оказывать негативный прооксидантный эффект (Панкин В. 3. и др., 1999; БуаНоу V. А. е1 а1., 1998; ОЬвЬкпа Н. е1 а1., 1998). Поскольку определяющим фактором проявления антиоксидантами прооксидантного эффекта является концентрация самого антиоксиданта (Воиауеё I. е1 а1., 2010), одной из возможных причин неоднозначности полученных результатов может являться неправильный выбор величин вводимых доз антиоксиданта.

Такая ситуация диктует необходимость проведения дальнейших исследований, направленных на изучение механизмов реализации кардио-протективного эффекта антиоксидантов и разработку их новых лекарственных форм, обеспечивающих возможность снижения терапевтически активных доз с параллельным нивелированием побочных эффектов.

В ряде отечественных экспериментальных и клинических исследований продемонстрирована высокая эффективность препаратов производных 3-окси-пиридинов для снижения выраженности окислительного стресса (в том числе при ишемии-реперфузии миокарда) (Сыренский А. В. и др., 2008; Голиков А. П. и др.,

2005; Поллумиксов В. Ю. и др., 2004; Танашян М. М. и др., 2006). Классическим представителем производных 3-оксипиридина является препарат эмоксипин, разрешенный к использованию в кардиологической практике при остром инфаркте миокарда для профилактики синдрома реперфузии и при нестабильной стенокардии (Государственный реестр лекарственных средств, 2004; Машковский М. Д., 2005; Приказ Минздравмедпрома РФ от 06.06.94 № 108, 2007). Эмоксипин обладает широким спектром биологического действия и выраженной анти-оксидантной активностью, подтвержденной рядом научных работ (Голиков А. П. и др., 1990; Мезен Н. И., 2006; Афанасьев С. А. и др., 1994).

В качестве возможного способа его использования можно рассматривать целенаправленную доставку эмоксипина в виде липосомальной формы к очагам, пораженным в результате ишемии-реперфузии (Сейфулла Р. Д., 2010; Юлиш Е. И. и др., 2008; Landi-Librandi А. Р. et al., 2011; Zacharias Е. Suntres., 2011).

Липосомы (от греч. lipos - жир и soma - тело) - это микроскопические сферические полые частицы, оболочка которых состоит из молекул тех же природных фосфолипидов, что и клеточные мембраны. Пустующее пространство внутри липосом может быть заполнено практически любыми веществами без ограничения их свойств и химической природы.

Липосомальная форма лекарственных препаратов обладает рядом фармакологических преимуществ перед свободными формами лекарств. Доказано, что включение лекарственного вещества в состав липосом позволяет увеличить его биодоступность (за счет направленного транспорта к участкам, нуждающимся в фармакологической коррекции и внутриклеточной доставке), что позволяет снижать дозу препарата с сохранением его терапевтического эффекта (Жигальцев И. В. и др., 1999; Song Н. et al., 2006; Zacharias Е. Suntres., 2011). Кроме того, известно, что липиды, входящие в состав липосом, могут замещать поврежденные в результате ишемии и реперфузии эссенциальные фосфолипиды мембран, оказывая тем самым протективный эффект (Ипатова О. М., 2005).

В связи с вышесказанным представляется целесообразным изучить влияние и выяснить механизмы реализации кардиопротективного эффекта липосомальной формы эмоксипина на ишемизированный и реперфузируемый миокард.

Цель исследования: изучить эффективность применения липосомальной формы эмоксипина (производного 3-оксипиридина) в экспериментальной терапии ишемии и реперфузии миокарда.

Задачи исследования:

1. Определить оптимальный размер «пустых» липосом для направленного транспорта производных 3-оксипиридина (на примере эмоксипина) и реализации кардиопротективного эффекта при тотальной нормотермической ишемии и реперфузии миокарда на модели изолированного сердца крысы.

2. Оценить степень повреждения миокарда в реперфузионном периоде тотальной нормотермической ишемии на фоне интракоронарного введения липосомальной формы эмоксипина.

3. Оценить активность антиоксидантной системы миокарда в реперфузионном периоде тотальной нормотермической ишемии в условиях кардиопротекции липосомальной формой эмоксипина.

4. Изучить влияние липосомальной формы эмоксипина на восстановление коронарного кровотока в реперфузионном периоде тотальной нормотермической ишемии.

5. Изучить влияние липосомальной формы эмоксипина на восстановление сократительной и насосной функций миокарда в условиях тотальной нормотермической ишемии и реперфузии.

Научная новизна

Установлены основные механизмы формирования толерантности миокарда к повреждающему воздействию ишемии и реперфузии в условиях кардиопротекции липосомальной формой эмоксипина.

Оценена зависимость кардиопротективного эффекта от дозы антиоксиданта в составе липосом на модели изолированного сердца крысы в условиях ишемии и реперфузии.

Доказана возможность использования липосомальной формы эмоксипина для коррекции ишемического и реперфузионного повреждения миокарда на модели изолированного сердца крысы.

Практическая значимость

Определен оптимальный размер «пустых» липосом (не более 50 нм) для оказания кардиопротективного эффекта и обеспечения направленного транспорта эмоксипина в миокард, находящийся в условиях тотальной нормотермической ишемии и реперфузии.

Установлено положительное влияние липосомальной формы эмоксипина в отношении ишемических и реперфузионных повреждений миокарда.

В результате исследования определена оптимальная лекарственная форма эмоксипина для оказания кардиопротективного эффекта в отношении ишемизированного и реперфузируемого миокарда.

Полученные результаты могут явиться основой для разработки протоколов применения липосомальной формы эмоксипина, направленных на коррекцию ишемических и реперфузионных повреждений миокарда.

Положения, выносимые на защиту:

1. Интракоронарное введение липосомальной формы эмоксипина в период ишемии приводит к повышению резистентности миокарда к повреждающему действию ишемии и реперфузии. Наиболее эффективно использование липосом размером не более 50 нм.

2. Липосомальная форма эмоксипина в низкой концентрации (0,1 мг/мл) обладает антиоксидантным эффектом, в то время как более высокая (0,25 мг/мл) предположительно оказывает незначительное прооксидантное действие. При применении препарата в концентрации 0,25 мг/мл гибель кардиомиоцитов в период реперфузии происходит преимущественно за счет некроза. Введение

меньших концентраций липоеомальной формы эмоксипина (0,1 мг/мл) способствует переключению механизма гибели кардиомиоцитов с некроза на апоптоз.

3. В основе кардиопротективного эффекта 0,1 мг/мл липоеомальной формы эмоксипина лежит снижение интенсивности процессов перекисного окисления липидов. Восстановление функционирования миокарда на фоне введения липоеомальной формы 0,1 мг/мл эмоксипина происходит за счет снижения влияния свободных радикалов на мембраны кардиомиоцитов, что обеспечивает их структурную целостность, и эндотелиальной NO-синтазы, что обеспечивает восстановление коронарного кровотока в периоде реперфузии.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Второй научной сессии молодых ученых «Наука - практике» (Кемерово, 2012 г.); на VIII Международной крымской конференции «Окислительный стресс и свободнорадикальные патологии» (Судак, Крым, Украина, 2012 г.); на IV съезде кардиологов Сибирского федерального округа «Сердечно-сосудистые заболевания: от первичной профилактики до высоких технологий в повседневной практике» (Кемерово, 2011 г.); на II Международном конгрессе «Кардиология на перекрестке наук» (Тюмень, 2011 г.); на III Международной научно-практической конференции «Достижения, инновационные направления, перспективы развития и проблемы современной медицинской науки, генетики и биотехнологий» (Екатеринбург, 2012 г.).

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, главы результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов. Диссертация изложена на 116 страницах машинописного текста. Диссертация содержит 9 таблиц, 11 рисунков. Указатель литературы включает 174 работы (из них 103 - зарубежные).

Публикации. По результатам диссертационного исследования опубликовано 15 работ в журналах, материалах научных съездов и конференций (из них 5 статей в журналах, рецензируемых ВАК).

Личный вклад автора. Автор непосредственно принимал участие в планировании исследования, выполнял эксперименты на изолированном сердце. Автором лично выполнены анализ, интерпретация, статистическая обработка полученных результатов и написание диссертации.

Внедрение результатов работы в практику. Основные положения диссертационной работы и практические рекомендации, сформулированные в диссертации, внедрены в учебный процесс кафедры патологической физиологии ГОУ ВПО КемГМА и научно-образовательного центра «Молекулярная и клиническая медицина при сердечно-сосудистой патологии» НИИ комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний СО РАМН.

Работа выполнена в ФГБУ «Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний» СО РАМН (директор -д-р мед. наук, профессор О. Л. Барбараш).

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Общие механизмы ишемического и реперфузионного повреждения сердца

Ишемия — это ограничение или полное прекращение притока крови к тканям, приводящее к снижению поступления в клетки кислорода и питательных субстратов с нарушением оттока из тканей продуктов метаболизма (Биленко М. В., 1989; Литвицкий П. Ф., 2002).

При ишемии на фоне снижения снабжения кислородом и поступления субстрата в кардиомиоцитах активизируется анаэробный гликолиз, что приводит к снижению выработки энергии и быстрому истощению запасов высокоэнергетических фосфатов (аденозинтрифосфата (АТФ) и креатинфосфата) М. ег а1., 2003). В результате появляются множественные нарушения ионного равновесия, прекращается работа трансмембранных ионообменных каналов (в первую очередь АТФ-зависимых) с сохранением лишь пассивного передвижения ионов. Это приводит к накоплению недоокисленных продуктов и катионов, развитию метаболического ацидоза, повышению внутриклеточного осмотического давления, активации фосфолипаз и протеаз, образованию активных форм кислорода, что, в свою очередь, приводит к деструкции мембран и нарушению их барьерной функции (Мойбенко А. А. и др., 2008; Zmgg М. е1 а1., 2003).

Реперфузия (восстановление перфузии ишемизированного миокарда), являясь одним из эффективных путей восстановления жизнедеятельности клеток (Иоселиани Д. Г. и др., 2006), одновремено инициирует целый ряд метаболических изменений, усугубляющих нарушение структуры и функции кардиомиоцитов. Таким образом, развитие реперфузионных повреждений

миокарда обусловлено совокупным следствием пролонгирования ишемического повреждения миокарда и его дополнительной альтерации факторами реперфузии и реоксигенации (Литвицкий П. Ф., 2002; Levraut J. et al., 2003). Крайняя стадия этих повреждений - гибель кардиомиоцитов, что является основной причиной сократительной дисфункции ишемизированного сердца (Литвицкий П. Ф., 2002; Bulte J. W. et al., 2002; Levraut J. et al., 2003; Di Lisa F., 2001).

Восстановление кровотока сопровождается активацией реакций Р-окисления жирных кислот, что влечет за собой уменьшение аэробного окисления глюкозы и способствует дальнейшей активации анаэробного пути ее превращения и, соответственно, накоплению молочной кислоты и ионов водорода. Это приводит к внутриклеточному ацидозу и перегрузке клеток кальцием для поддержания сокращения миофибрилл в условиях ацидоза (Murphy Е. et al., 2008; Kumar S. et al., 2009; Moens A. L. et al., 2005). Избыток кальция инициирует активацию кальцийзависимых протеаз и фосфолипаз, что влечет за собой дальнейшее повреждение клеточных мембран. Повышение содержания ионов кальция в цитоплазме обусловливает нарушение функции митохондрий, разобщение окислительного фосфорилирования, что уменьшает продукцию АТФ и приводит к постепенному исчерпанию энергообразования. Кроме того, перегрузка ионами кальция также способствует развитию контрактур миофибрилл кардиомиоцитов и возникновению реперфузионных аритмий (Lakireddy V. et al., 2005; Moens A. L. et al., 2005).

В условиях реперфузии также развивается воспалительная реакция. Высокое содержание кальция в клетке инициирует активацию фосфолипазы А2, под действием которой из мембранных фосфолипидов высвобождается арахидоновая кислота, в процессе метаболизма которой образуются медиаторы воспаления (лейкотриены, простагландины, тромбоксан). Это приводит к миграции в зону повреждения нейтрофилов и развитию воспалительного ответа. Активированные нейтрофилы генерируют большое количество активных форм кислорода и способствуют высвобождению биологически активных веществ,

вызывающих повреждение эндотелия, вазоконстрикцию, активацию и агрегацию тромбоцитов, что приводит в результате к нарушению микроциркуляции в миокарде (РгапавсЬеШ I. й а1., 2010).

Таким образом, в развитии ишемических и реперфузионных повреждений миокарда принимают участие различные процессы, которые действуют синергически, дополняя друг друга и приводя в конечном счете к нарушению сократительной функции сердца. Наряду с такими факторами, как энергодефицит, кальциевая перегрузка, воспаление и ацидоз, принципиально значимым и ведущим звеном патогенеза реперфузионного повреждения является интенсификация свободнорадикального окисления липидов на фоне притока кислорода при возобновлении перфузии в ранее ишемизированную зону миокарда.

1.2 Роль свободно-радикальных процессов в ишемическом и реперфузионном повреждении миокарда

Процессы свободнорадикального окисления липидов являются физиологическим процессом, постоянно протекающим в сердечной мышце в условиях ее нормального функционирования (Droge W., 2002; Valko М. et al., 2007).

В нормальных физиологических условиях протекание свободнорадикальных процессов в кардиомиоцитах регулируется многокомпонентной системой антиоксидантной защиты, при этом образующиеся небольшие количества активных форм кислорода нейтрализуются эндогенными антиоксидантами клеток (Ланкин В. 3. и др., 2000; Droge W., 2002).

В нормально функционирующих клетках содержание продуктов перекисного окисления липидов находится на очень низком уровне, что свидетельствует об эффективной работе системы антиоксидантной защиты. Соотношение интенсивности процессов свободнорадикального окисления и антиоксидантной активности определяет антиоксидантный статус клетки и ткани (Зборовская И. А. и др., 1995).

При реперфузии имеет место чрезмерная активация процессов перекисного окисления липидов с одновременным снижением способности клеток к антиоксидантной защите. Митохондрии, которые в условиях гипоксии уже перестроились на другой путь производства энергии, при возобновлении подачи кислорода начинают генерировать его активные формы. Кроме того, реперфузия, как и ишемия, характеризуется низкой эффективностью ферментного звена антиоксидантной защиты (супероксиддисмутазы, каталазы, глутатионперо-ксидазы), что также обусловливает избыток свободных радикалов. Дисбаланс между интенсивностью свободнорадикальных процессов и функциональной активностью антиоксидантной системы характеризует такое патологическое состояние, как «окислительный стресс» (Журавлева И. Ю. и др., 1995; Hopps Е. et al., 2010; Aller M. A. et al., 2008; Aruoma О. I., 1998; Azzi A., 2007; Hess M. L. et al., 1984; Papa S. et al., 1997; Basini G. et al., 2008), значение которого определено как решающее в патогенезе реперфузионного повреждения миокарда.

Оксидативному стрессу принадлежит ключевая роль в «инициации повреждения эндотелия», ведущего к эндотелиальной дисфункции (Барбараш JI. С. и др., 2007; Марков X. М., 2001; Heitzer T. et al., 2001; Taniyama Y. et al., 2003), - одного из ведущих факторов патогенеза ишемических и реперфузионных повреждений миокарда. В условиях избыточного образования активных форм кислорода сдвиг физиологического равновесия между NO и О2 в сторону последнего нередко приводит к образованию высокотоксичного соединения п ерокс и нитрита (ONOO), вызывающего повреждение мембран и ДНК клетки,

мутации, апоптоз, способствующего развитию воспалительных процессов и других нарушений (Alvarez S. et al., 2004; Dispersyn G. et al., 2001; Touys R. M., 2000). Пероксинитрит, являясь сильным окислителем, активирует рианодиновые рецепторы, что приводит к увеличению выброса Са2+ из саркоплазматического ретикулума кардиомиоцитов, росту уровня Са2+ в цитоплазме и нарушению дыхательной функции митохондрий, что в итоге приводит к угнетению сократительной функции миокарда (Xie Y. et al., 1998).

Гиперпродукция активных форм кислорода на фоне избытка кальция в митохондриях обусловливает открытие митохондриальной поры, что, в свою очередь, вызывает истощение пула АТФ и активацию апоптоза (Мойбенко А. А. и др., 2008; Murphy Е. et al., 2008).

Таким образом, интенсификация свободнорадикальных процессов является одним из основных патогенетических аспектов повреждения миокарда в условиях ишемии и реперфузии, что позволяет рассматривать данный процесс как потенциальную терапевтическую мишень.

1.3 Механизмы гибели кардиомиоцитов при ишемии и реперфузии

Согласно современным представлениям, на сегодняшний день выделяют два основных механизма клеточной гибели - запрограммированная клеточная гибель (апоптоз) и некроз.

Некроз (от греч. уекро<; - мертвый) - это патологический процесс, выражающийся в местной гибели ткани в живом организме в результате какого-

либо экзо- или эндогенного ее повреждения. Данный процесс вызывается значительными повреждающими факторами и является неуправляемым процессом, как правило, не поддающимся фармакологической коррекции (Оа11ш21 Ь. е1 а1., 2007; ОоЫет Р. е1 а1., 2006). При этом критическим моментом, определяющим необратимость утраты жизнедеятельности клетки, является утрата целостности плазматической мембраны (ОаПиги Ь. е1 а1., 2007). В патогенезе некроза особое значение принадлежит таким факторам, как осмотический лизис, нарушение кальциевого гомеостаза и активные формы кислорода (Зенков Н. К. и др., 2001; ОоЫет Р. е1 а1., 2006). При этом последние являются одной из важнейших причин разрушения плазматической мембраны и органелл клетки с ее последующей гибелью (Бережное А. В. и др., 2009; ОоЫет Р. й а1., 2006; Рговкигуакоу Б. У. (Л а1., 2003).

В целом некроз проявляется в набухании, денатурации и коагуляции цитоплазматических белков, разрушении клеточных органелл и в конечном счете всей клетки (Со^ет Р. е1 а1., 2006; Рговкигуакоу Б. У. е1 а1., 2003).

Апоптоз (греч. атсолгссостц - опадание листьев) - программируемая клеточная смерть, регулируемый процесс самоликвидации, в результате которого клетка фрагментируется на отдельные апоптотические тельца, ограниченные плазматической мембраной. Важной особенностью апоптоза является его регулируемость (Владимирская Е. Б., 2002).

Апоптотические процессы энергозависимы, нуждаются в АТФ, ионах Са2+ и синтезе некоторых белков. Для реализации данного механизма гибели необходим не только достаточный уровень АТФ, но и целостность плазматической мембраны.

Выделяются два основных пути индукции апоптоза: рецептор-зависимый сигнальный путь с участием рецепторов гибели клетки и митохондриальный путь.

• Рецепторный путь активации апоптоза

Процесс апоптоза осуществляется с взаимодействием специфических внеклеточных лигандов с рецепторами клеточной табели, экспрессированными на поверхности клеточной мембраны. Рецепторы, воспринимающие сигнал апоптоза, относятся к суперсемейству TNF-рецепторов (англ. tumor necrosis factor receptor или кратко TNFR - «рецептор фактора некроза опухолей»). Адаптер, ассоциированный с рецептором смерти, вступает во взаимодействие с эффекторами - пока еще неактивными предшественниками протеаз из семейства инициирующих каспаз - с прокаспазами. В результате цепочки взаимодействия «лиганд - рецептор - адаптер - эффектор» формируются агрегаты, в которых происходит активация каспаз. Ключевая роль в дальнейшем каскаде отводится эффекторной каспазе 3, что в результате приводит к активации эндонуклеаз, фрагментриующих ДНК и дальнейшему лизису клетки.

• Митохондриальный путь активации апоптоза

Митохондриальный путь апоптоза реализуется в результате выхода апоптогенных белков из межмембранного пространства митохондрий в цитоплазму клетки (Javadov S. et al., 2007). Высвобождение апоптогенных белков, предположительно, может осуществляться двумя путями: за счет разрыва митохондриальной мембраны или же путем открытия высокопроницаемых каналов на внешней мембране митохондрий. Разрыв внешней мембраны митохондрий объясняется увеличением объема митохондриального матрикса. Данный процесс связывают с раскрытием пор митохондриальной мембраны, приводящим к снижению мембранного потенциала (Kroemer G., 2002; Foster D. В. et al., 2009). Раскрытие пор обусловлено истощением клеток восстановленным глутатионом; образованием активных форм кислорода; разобщением окислительного фосфорилирования протонофорными соединениями; увеличением содержания Са2+ в цитоплазме; истощением митохондриального пула АТФ и др. При этом собственно повышение уровня кальция в цитозоле является сильным

индуктором апоптоза (Головкин А. С. и др., 2010; Hausenloy D. J. et al., 2003; Perrelli M.-G. et al., 2011).

Итогом программируемой клеточной гибели вне зависимости от изначального инициирующего воздействия является деградация клетки путем фрагментации на отдельные апоптотические тельца, ограниченные плазматической мембраной.

Определенный вклад в активацию апоптоза в миокарде могут вносить активные формы кислорода (Залесский В. Н. и др., 2006; Бра М. и др., 2005; Li W. G. et al., 1998; Oskarsson H. J. et al., 2000; Perrelli M.-G. et al., 2011; Viatour P. et al., 2005; Han H. et al., 2004). При этом их влияние на про- и антиапоптотические мишени и механизмы осуществляется как непосредственно, так и через внутриклеточные редокс-зависимые сигналпередающие системы (Бра М. и др., 2005).

Основной механизм гибели кардиомиоцитов в периоде острой ишемии -некроз (из-за энергодефицита), в то время как в реперфузионном периоде превалирует энергозатратный процесс апоптотической гибели (при ресинтезе АТФ) (Kroemer G., 2002; Gottlieb R. A. et al., 1994; Ho F. Y. et al., 2006). Это связано с тем, что восстановление кровотока приводит к повышению энергетического потенциала кардиомиоцитов, вследствие чего некоторые клетки получают возможность претерпевать апоптоз вместо некроза, что более выгодно с точки зрения минимизации повреждения для органа в целом.

Таким образом, уровень АТФ и целостность мембраны являются решающими факторами, переключающими программы клеточной смерти. При повреждении мембраны и (или) низком уровне АТФ клетки погибают путем некроза, в противном случае вероятен апоптоз (Leist М. et al., 1997).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Торопова, Яна Геннадьевна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Антиоксидантная терапия при цереброваскулярных заболеваниях на фоне сахарного диабета и метаболического синдрома / М. М. Танашян, М. Ю. Максимова, И. Н. Смирнова и др. // Трудный пациент. - 2013. - № 1. - С. 26-31.

2. Биленко, М. В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов и тканей / М. В. Биленко. - М.: Медицина, 1989. - 368 с.

3. Биологическая роль свободных радикалов в развитии патологических состояний / А. О. Сыровая, Ф. С. Леонтьева, И. В. Новикова и др. // Международ, мед. журн. - 2012. - № 3. - С. 98-104.

4. Включение и субклеточное распределение липосом в изолированном ишемизированном миокарде / И. Ю. Журавлева, Р. А. Мухамадияров, Н. Е. Мар-цияш и др. // Биосовместимость (Biomaterial-living system interactions). - 1995. -№ 1-2.-С. 11-19.

5. Владимирская, Е. Б. Механизмы апоптотической смерти клеток / Е. Б. Владимирская // Гематология и трансфузиология. - 2002. - № 2. - С. 35-40.

6. Влияние изменения метаболического и антиоксидантного статуса миокарда на выраженность его ишемического и реперфузионного повреждения / А. В. Сыренский, М. М. Галагудза, В. А. Егорова и др. // Рос. физиолог, журн. им. И. М. Сеченова.-2008.-Т. 94,№ 10.-С. 1171-1180.

7. Волчегорский, И. А. Антигипоксическое действие производных 3-окси-пиридина и янтарной кислоты и их ноотропный эффект при аллоксановом диабете / И. А. Волчегорский, Л. М. Рассохина, И. Ю. Мирошниченко // Эксперим. и клин, фармакология. - 2011. - № 12. - С. 27-32.

8. Голиков, А. П. Аитиоксидант эмоксипии: влияние на формирование очага некроза и репаративные процессы при инфаркте миокарда / А. П. Голиков,

A. Л. Овчинников, А. Ю. Поллумиксов // Кардиология. - 1990. - № 7. - С. 50-53.

9. Голиков, А. П. Влияние Мексикора на окислительный стресс при остром инфаркте миокарда / А. П. Голиков, Б. В. Давыдов, Д. В. Руднев // Кардиология. -2005.-№7.-С. 21-26.

10. Головкин, А. С. Факторы регуляции апоптоза кардиомиоцитов при ишемии и реперфузии / А. С. Головкин, В. Г. Матвеева // Клин, физиология кровообращения. - 2010. - № 4. - С. 24-29.

11. Государственный реестр лекарственных средств : (по состоянию на 1 сентября 2004 г.) : официальное издание : в 2 т. / Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения и соц. развития, Науч. центр экспертизы средств мед. применения. - М.: Медицина, 2004. - 1791 с.

12. Залесский, В. Н. Апоптоз кардиомиоцитов при ишемическом стрессе : цитотоксические и регуляторные влияния активных форм кислорода на миокард /

B. Н. Залесский, О. Б. Дынник // Соврем, пробл. токсикологии. - 2006. - № 2. -

C. 34-36.

13. Заславская, Р. М. Эффективность эмоксипина в комплексной терапии пожилых больных постинфарктным кардиосклерозом и сердечной недостаточностью / Р. М. Заславская, Е. В. Калинина, Г. В. Лилица // Клин, медицина. - 2004. - № 12. - С. 19-21.

14. Зборовская, И. А. Антиоксидантная система организма, ее значение в метаболизме. Клинические аспекты / И. А. Зборовская, М. В. Банникова // Вестн. Рос. АМН. - 1995. - № 6. - С. 53-59.

15. Зенков, Н. К. Окислительный стресс / Н. К. Зенков, В. 3. Ланкин, Е. Б. Меныцикова. - М. : МАИК «Наука/Интерпериодика», 2001. - 343 с.

16. Зубаренко, А. В. Гипоксический синдром при бронхо легочных заболеваниях у детей и его коррекция с применением фосфатидилхолиновых липосом.: автореф. дис.... д-ра мед. наук / А. В. Зубаренко. - Киев, 1992. - 39 с.

17. Иоселиани, Д. Г. Возможно ли ограничение реперфузионного повреждения кардиомиоцитов при эндоваскулярном восстановлении кровотока в инфарктответственной артерии путем внутрикоронарного введения метаболических цитопротекторов? / Д. Г. Иоселиани, А. Г. Колединский, Н. В. Кучкина // Международ, журн. интервенц. кардиоангиологии. - 2006. - № 11. - С. 11-15.

18. Ипатова, О. М. Фосфоглив: механизм действия и применение в клинике / О. М. Ипатова. - М.: Изд. ГУ НИИ биомедицинской химии РАМН, 2005. - 318 с.

19. Кардиопротекторы мексикор и эмоксипин при лечении ИБС и гипертонического криза / В. Ю. Поллумиксов, А. П. Голиков, В. П. Михин и др. // Рязанский мед. вестн. - 2004. - Т. 161, № 21. - С. 14-18.

20. Кинетические закономерности окисления лецитина и его стабилизация / Р. Л. Варданян, Л. Р. Варданян, Р. С. Арутюнян и др. // Химия раст. сырья. -2009.-№ 1.-С. 125-130.

21. Клебанов, Г. И. Антиоксиданты. Антиоксидантная активность. Методы исследования / Г. И. Клебанов // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2001. - Т. XI, № 4. - С. 109-118.

22. Клиническая значимость показателей эндотелиальной дисфункции, оксидативного стресса и гемостаза у больных инфарктом миокарда / Л. С. Бар-бараш, О. Л. Барбараш, В. Н. Каретникова и др. // Патология кровообращения и кардиохирургия. - 2007. - № 2. - С. 28-33.

23. Клиническая эффективность и антиоксидантная активность Мексидола при хронических церебоваскулярных заболеваниях / И. Н. Смирнова, Т. Н. Фе-

дорова, М. М. Танашян и др. // Атмосфера. Нервные болезни. - 2006. - № 1. -С. 33-36.

24. Козловский, В. И. Механизмы регуляции коронарного кровотока, опосредованной эндотелиальными сосудорасширяющими факторами : монография / В. И. Козловский. - Гродно, 2011. - 215 с.

25. Концентрационная инверсия антиоксидантного действия ß-каротина /

B. 3. Панкин, А. К. Тихазе, Г. Г. Коновалова и др. // Свободные радикалы и болезни человека : сб. тр. науч.-практ. конф., 19-22 сент. - Смоленск, 1999. -

C. 66-67.

26. Концентрирование дофамина в липосомах с помощью трансмембранного градиента концентрации сульфата аммония / И. В. Жигальцев, С. Н. Коломейчук, А. П. Каплун и др. // Биоорган, химия. - 1999. - Т. 25, № 5. - С. 404-408.

27. Котляров, А. А. Влияние оксиметилэтилпиридина сукцината на электрофизиологические параметры сердца при торакотомии и при острой ишемии миокарда в эксперименте / А. А. Котляров, JI. Д. Смирнов / Эксперим. и клин, фармакология. - 2004. - Т. 67, № 3. - С. 14-17.

28. Панкин, В. 3. Свободнорадикальные процессы при заболеваниях сердечно-сосудистой системы / В. 3. Панкин, А. К. Тихазе, Ю. Н. Беленков // Кардиология. - 2000. - № 7. - С. 48-61.

29. Липосомы и другие наночастицы как средство доставки лекарственных веществ / А. П. Каплун, III. Jle Банг, Ю. М. Краснопольский и др. // Вопр. мед. химии. - 1999. - № 4 (1). - С. 3-12.

30. Литвицкий, П. Ф. Патогенные и адаптивные изменения в сердце при его регионарной ишемии и последующем возобновлении коронарного кровотока /

П. Ф. Литвицкий // Патолог, физиология и эксперим. терапия. - 2002. - № 2. -С. 2-12.

31. Мазур, Н. А. Дисфункция эндотелия, монооксид азота и ишемическая болезнь сердца / Н. А. Мазур // Терапевт, арх. - 2003. - Т. 75, № 3. - С. 84-86.

32. Марков, X. М. Оксид азота и сердечно-сосудистая система // Успехи физиолог, наук. - 2001. - Т. 32, № 3. - С. 49-65.

33. Марков, X. М. Сосудистые эффекты липопротеинов и оксида азота: клеточные и молекулярные механизмы // Патолог, физиология и эксперим. терапия. - 2006. - № 3. - С. 2-7.

34. Машковский, М. Д. Лекарственные средства / М. Д. Машковский. - М. : ООО «Издательство «Новая волна», 2005. - 1206 с.

35. Мезен, Н. И. Влияние эмоксипина и полидисульфида галловой кислоты на процессы перекисного окисления липидов в мозге крыс при черепно-мозговой травме / Н. И. Мезен // Мед. журн. (Белорус, гос. мед. ун-т). - 2006. - № 3. -С. 63-65.

36. Метаболическая терапия эмоксипином и предукталом у пациентов с желудочковыми нарушениями ритма сердца / А. А. Котляров, С. М. Чибисов, Л. М. Мосина и др. // Фундамент, исслед. - 2009. - № 4. - С. 49-56.

37. Механизмы участия митохондрий в развитии патологических процессов, сопровождающихся ишемией и реперфузией / Н. П. Судаков, С. Б. Никифоров, Ю. М. Константинов и др. // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. - 2006. - Т. 51, № 5. - С. 332336.

38. Митохондрии в программированной гибели клетки : различные механизмы гибели / М. Бра, Б. Квинан, С. А. Сузин и др. // Биохимия. - 2005. - Т. 70, вып. 2.-С. 284-293.

39. Мойбенко, А. А. Эндогенные механизмы кардиопротекции как основа патогенетической терапии заболеваний сердца / А. А. Мойбенко, В. Е. Досенко, А. Н. Пархоменко. - Киев : Наукова думка, 2008. - 520 с.

40. Мухамадияров, Р. А. Интракоронарное введение липосомальных препаратов в условиях гипотермической ишемии как способ интраоперационной защиты миокарда / Р. А. Мухамадияров, А. В. Веремеев, И. Ю. Журавлева // Фундамент, исслед. - 2012. - № 10. - С. 266-270.

41. Мухамадияров, Р. А. Применение липосомальных форм антиоксидантов для лечения хронического панкреатита в эксперименте / Р. А. Мухамадияров, И. А. Радионов, Г. Н. Чернобай // Мед. вестн. Башкортостана. - 2006. - Т. 4, № 1. -Спец. вып. - С. 263-264.

42. Мухамадияров, Р. А. Характеристика липосом, полученных методами ультразвуковой сонификации и экструзии / Р. А. Мухамадияров, А. В. Веремеев // Разработка, исслед. и маркетинг новой фармацевт, продукции. - 2007. - № 62. -С. 187-190.

43. Неверов, И. В. Место антиоксидантов в комплексной терапии пожилых больных ИБС / И. В. Неверов // Рус. мед. журн. - 2001. - Т. 9, № 18. - С. 767.

44. Необходимость и достаточность использования антиоксидантов в терапии больных сахарным диабетом 2-го типа / О. В. Занозина, Н. Н. Боровков, М. И. Ба-лаболкин и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 2006. - Прил. 1. -С. 112-118.

45. Окислительный стресс. Патологические состояния и заболевания : рук. / Е. Б. Меньшикова, Н. К. Зенков, В. 3. Панкин и др. - Новосибирск : APTA, 2008. -284 с.

46. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты / Е. Б. Меньшиков, В. 3. Панкин, Н. К. Зенков и др. - М. : Слово, 2006. - 553 с.

47. Опыт применения эмокеипина в комплексном лечении полиорганной недостаточности у новорожденных детей / П. И. Миночкин, И. А. Волчегорский, Д. К. Волосников и др. // Педиатрия. - 2011. - № 4. - С. 98-103.

48. От липосом семидесятых к нанобиотехнологии XXI века / В. И. Швец, А. П. Каплун, Ю. М. Краснопольский и др. // Рос. нанотехнологии. - 2008. - Т. 3, № 11-12.-С. 52-66.

49. Оценка фармакологических эффектов антиоксиданта мексидола у больных с сосудистыми заболеваниями головного мозга / 3. А. Суслина, И. Н. Смирнова, Т. Н. Федорова и др. // Сборник тезисов 2-го Съезда Российского научного общества фармакологов - М., 2003. - С. 209.

50. Пасечник, И. Н. Механизмы повреждающего действия активированных форм кислорода на биологические структуры у больных в критических состояниях / И. Н. Пасечник // Вестн. интенсив, терапии. - 2001. - № 4. - С. 3-9.

51. Погорелый, В. Е. Изучение действия эмокеипина, лития оксибутирата и пикамилона на кровообращение ишемизированного мозга / В. Е. Погорелый, М. Д. Гаевый // Эксперим. и клин, фармакология. - 1999. - № 6. - С. 26-28.

52. Приготовление липосом сложного состава методами ультразвуковой сонификации и экструзии и их сравнительные характеристики / Р. А. Муха-мадияров, А. В. Веремеев, И. Ю. Журавлева и др. // Мед. вестн. Башкортостана. -

2006.-№ 1.-С. 259-263.

53. Приказ Минздравмедпрома РФ от 06.06.94 № 108 «О разрешении к медицинскому применению» по состоянию на ноябрь 2007 года : [Электронный ресурс] / Министерство здравоохранения и медицинской промышленности. -

2007. - URL : http: //www.lawrussia.ru/texts/legal_689/doc689a708x620.htm (дата обращения 01.02.2013).

54. Промыслов, М. Ш. Модификация метода определения суммарной анти-оксидантной активности сыворотки крови / М. Ш. Промыслов, М. Д. Демчук // Вопр. мед. химии. - 1990. - № 4. - С. 90-92.

55. Радионов, И. А. Оценка эффективности антиоксидантов в липосомальной форме в коррекции окислительного стресса при экспериментальном первичном хроническом панкреатите / И. А. Радионов // Вестн. новых мед. технологий. -2008. - Т. 15, № 2. - С. 219-221.

56. Сейфулла, Р. Д. Фармакология липосомальных препаратов (в эксперименте и клинике) / Р. Д. Сейфулла. - М. : Глобус Континенталь, 2010. -241 с.

57. Смирнов, А. В. Антигипоксанты в неотложной медицине / А. В. Смирнов, Б. И. Криворучко // Анестезиология и реаниматология. - 1998. - № 2. - С. 50-55.

58. Смирнов, JI. Д. Антиоксиданты гетероароматического ряда. Структура, активность, медицинское применение / JI. Д. Смирнов // Сборник тезисов 2-го Съезда Российского научного общества фармакологов. - М., 2003. - С. 171.

59. Смирнов, Л. Д. Модуляция иммунного ответа антиоксидантами / Л. Д. Смирнов, И. Н. Смирнова, В. С. Сускова // Химико-фармацевт. журн. - 1989. -№ 7. - С. 773-784.

60. Сравнительная эффективность эмоксипина и оксибутирата натрия при экспериментальной ишемии миокарда / С. А. Афанасьев, Е. Д. Алексеева, И. Б. Варламова и др. // Эксперим. и клин, фармакология. - 1994. - Т. 57, № (4). -С.26-29.

61. Стальная, И. Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты / И. Д. Стальная, Т. Г. Гаришвили // Современные методы в биохимии. - М., 1977. - 393 с.

62. Танашян, М. М. Клиническая эффективность и антиоксидантная активность Мексидола при хронических церебоваскулярных заболеваниях / М. М. Танашян, 3. А. Суслина // Атмосфера. Нервные болезни. 2006. - № 1. - С. 33-36.

63. Токсические эффекты жирных кислот. Роль фосфолипаз / А. В. Бережное, Е. И. Федотова, М. Н. Ненов и др. // Рецепция и внутриклеточная сигнализация : сб. ст. междунар. конф., 2-4 июня. - Пущино, 2009. - Т. 1. - С. 15-19.

64. Третьякова, О. С. Кардиопротекторные возможности липосом в терапии гипоксически поврежденного миокарда новорожденных / О. С. Третьякова, И. В. Заднипрядный // Перинатология и педиатрия. - 2011. - Т. 46, № 2. - С. 122126.

65. Узденский, А. Б. Управляемый некроз / А. Б. Узденский // Биолог, мембраны. - 2010. - Т. 27, № 1. - С. 7-17.

66. Федорова, Т. Н. Применение хемшпоминесцентного анализа для сравнительной оценки антиоксидантной активности некоторых фармакологических веществ / Т. Н. Федорова // Эксперим. и клин, фармакология. - 2003. -Т. 66, № 5. - С. 56-58.

67. Экспериментальное обоснование применения мексидола и 3-оксипи-ридина фумарата при хроническом повреждении миокарда / М. Н. Замотаева, И. Н. Чаиркин, В. И. Инчина и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 2013. -№2.-С. 176-178.

68. Эмоксипин при реперфузии ишемического миокарда у собак : влияние на размер инфаркта и креатинкиназную активность плазмы крови / Е. А. Конорев, В. Ю. Полумиксов, О. А. Авилова и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. -1990. - Т. 110, № 9. - С. 252-254.

69. Эндотелиопротективные, кардиопротективные и коронаролитические

эффекты производных 3-оксипиридина / М. В. Корокин, Е. Н. Пашин, К. Е. Боб-раков и др. // Курский науч.-практ. вест. «Человек и его здоровье». - 2009. - № 4. -

C. 11-20.

70. Юлиш, Е. И. Липосомальная терапия: настоящее и будущее / Е. И. Юлиш, А. Е. Абатуров // Здоровье ребенка. - 2008. - № 1. - С. 87-90.

71. Ярилин, А. А. Апоптоз : природа феномена и его роль в норме и при патологии / А. А. Ярилин // Актуальные проблемы патофизиологии. - М. : Медицина, 2001. - С. 13-56.

72. A novel component of the metabolic syndrome: the oxidative stress / E. Hopps,

D. Noto, G. Caimi et al. // Nutrition, Metabolism and Cardiovascular Diseases. - 2010. -Vol. 20, №1.-P. 72-77.

73. Activation of JNK in the remote myocardium after large myocardial infarction in rats / W. G. Li, A. Zaheer, L. Coppey et al. // Biochem. Biophys. Res. Comm. -1998. - Vol. 246, № 3. - P. 816-820.

74. Aller, M. A. Plasma redox status is impaired in the portacaval shunted rat - the risk of the reduced antioxidant ability / M. A. Aller, M. I. Garsia-Fernandes, A. Sánchez-Patán // П Comp Hepatol. - 2008. - Vol. 5, № 7. - P. 1.

75. Alvarez, S. Mitochondrial nitric oxide metabolism in rat muscle during endotoxemia / S. Alvarez, A. Boveris // Free Radie. Bio. Med. - 2004. - Vol. 37, № 9. -P. 1472-1478.

76. Antioxidant and pro-oxidant actions of flavonoids : Effects on DNA damage induced by nitric oxide, peroxynitrite and nitroxyl anion / H. Ohshima, Y. Yoshie, S. Auriol et al. // Free Radical Biol. Med. - 1998. - Vol. 25. - № 9. - P. 1057-1065.

77. Antioxidant treatment prevents cardiac protein oxidation after ischemia-

reperfusion and improves myocardial function and coronary perfusion in senescent hearts. / S. Besse, A. L. Bulteau, F. Boucher et al. // J Physiol Pharmacol. - 2006. -Vol. 57, №4.-P. 541-552.

78. Antioxidants attenuate myocyte apoptosis in the remote non-infarcted myocardium following large myocardial infarction / H. J. Oskarsson, L. Coppey, R. M. Weiss et al. // Cardiovasc. Res. - 2000. - Vol. 45, № 3. - P. 679-687.

79. Aruoma, O. I. Free radicals, oxidative stress, and antioxidants in human health and disease / O. I. Aruoma // J. Amer. Oil Chem. Soc. - 1998. - Vol. 75. - P. 199-212.

80. Azzi, A. Oxidative stress : a dead end or laboratory hypothesis? / A. Azzi // Biochemical and Biophysical Research Communications. - 2007. - Vol. 362, № 2. -P. 230-232.

81. Barenholz, Y. Doxil (R)-the first FDA-approved nano-drug : lessons learned / Y. Barenholz // J Control Release. - 2012. - Vol. 160, № 2. - P. 117-134.

82. Bell, R. M. Retrograde heart perfusion : The Langendorff technique of isolated heart perfusion / R. M. Bell, M. M. Mocanu, D. M. Yellon // Journal of Molecular and Cellular Cardiology. - 2011. - Vol. 50, № 6. - P. 940-950.

83. Bouayed, J. Exogenous antioxidants-Double-edged swords in cellular redox state.Health beneficial effects at physiologic doses versus deleterious effects at high doses / J. Bouayed, Bohn, T. // Oxidative Medicine and Cellular Longevity. - 2010. -Vol. 3, № 4. - P. 228-237.

84. Bowey, K. Liposome technology for cardiovascular disease treatment and diagnosis / K. Bowey, J.-F. Tanguay, M.Tabrizian // Expert Opin Drug Deliv. - 2012. -Vol. 9, №2.-P. 249-265.

85. Bulte, J. W. In vivo MR tracking of magnetically labeled cells / J. W. Bulte,

I. D. Duncan, J. A. Frank // J. Cerebr. Blood Flow Metabol. - 2002. - Vol. 22, № 8. -P. 899-907.

86. Ca2+ Signaling, Mitochondria and Cell Death / C. Giorgi, A. Romagnoli, P. Pintón et al. // Current Molecular Medicine. - 2008. - Vol. 8, № 2. - P. 119-130.

87. Ca2+-induced reactive oxygen species production promotes cytochrome c release from rat liver mitochondria via mitochondrial permeability transition (MPT)-dependent and MPT-independent mechanisms: role of cardiolipin / G. Petrosillo, F. M. Ruggiero, M. Pistolese et al. // J Biol Chem. - 2004. - Vol. 279, № 51. -P. 53103-53108.

88. Caride, V. J. Liposome accumulation in regions of experimental myocardial infarction / V. J. Caride, B. L. Zaret // Science. - 1977. - Vol. 198, № 4318. - P. 735738.

89. Cell death during ischemia:relationship to mitochondrial depolarization and ROS generation / J. Levraut, H. Iwase, Z.-H. Shao et al. // Am. Physiol. Heart Circ. Physiol. - 2003. - Vol. 284, № 2. - P. 549-558.

90. Cell death modalities: classification and pathophysiological implications / L. Galluzzi, M. C. Maiuri, I. Vitale et al. // Cell Death Differ. - 2007. - Vol. 14, № 7. -P. 1237-1243.

91. Cheng, J. W. A review of heart failure management in the elderly population / J. W. Cheng, M. Nayar // Am J Geriatr Pharmacother. - 2009. - Vol. 7, № 5. - P. 233249.

92. Choi, E. J. Anti- and prooxidant effects of chronic quercetin administration in rats / E. J. Choi, K.-M. Chee, B. H. Lee // European Journal of Pharmacology. - 2003. -Vol. 482, № 1-3. - P. 281-285.

93. Contrasting effects of ischemia on the kinetics of membrane voltage and intracellular calcium transient underlie electrical alternans / V. Lakireddy, P. Baweja, A. Syed et al. // Amer. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. - 2005. - Vol. 288, № 1. -P. 400-407.

94. Di Lisa, F. Mitochondrial contribution in the progression of cardiac ischemic injury / F. Di Lisa // JUBMB Life. - 2001. - Vol. 5, № 3-5. - P. 255-261.

95. Dispersyn, G. Apoptosis in the heart: About programmed cell death and survival / G. Dispersyn, M. Borgers // News Phisiol. Sci. - 2001. - № 16. - P. 41-47.

96. Droge, W. Free radicals in the Physiological control of cells function / W. Droge // PhysioLRev. - 2002. - Vol. 82, № 1. - P. 47-95.

97. Effect of pressure development on oxygen consumption by isolated rat hearts / J. R. Neely, H. Liebermeister, E. J. Battersby et al. // Am. J. Physiol. - 1967. -Vol. 212, №4.-P. 804-814.

98. Effect of vitamin E and b-carotene on the incidence of angina pectoris. A randomized, double-blind, controlled trial / J. M. Rapola, J. Virtamo, J. K. Haukka et al. // JAMA. - 1996. - Vol. 275, № 9. - P. 693-698.

99. Elmore, S. Apoptosis : A Review of Programmed Cell Death / S. Elmore // Toxicol Pathol. - 2007. - Vol. 35, № 4. - P. 495-516.

100. Endotelial dysfunction, oxidative stress, and risk of cardiovascular events in patients with coronary artery disease / T. Heitzer, T. Schlinzig, K. Krohn et al. // Circulation. - 2001. - Vol. 104, № 22. - P. 2673-2678.

101. Faraci, F. M. Physiol Regulation of the cerebral circulation : role of endothelium and potassium channels / F. M. Faraci, D. D. Heistad // Rev. - 1998. -Vol. 78, № l.-P. 53-97.

102. Feletou, M. Endothelial dysfunction: a multifaceted disorder (The Wiggers Award Lecture) / M. Feletou, P. M. Vanhoutte // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. -2006. - Vol. 291, № 3. - P. 985-1002.

103. Fink, S. L. Apoptosis, pyroptosis, and necrosis : mechanistic description of dead and dying eukaryotic cells / S. L. Fink, B. T. Cookson // Infect Immun. - 2005. -Vol. 73, №4.-P. 1907-1916.

104. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease / M. Valko, D. Leibfritz, J. Moncol et al. // Int. J. Biochem. Cell Biol. - 2007. -Vol. 39, № l.-P. 44-84.

105. Global ischemic duration and reperfusion function in the isolated perfused rat heart / B. S. Palmer, M. Hadziahmetovic, T. Veci et al. // Resuscitation. - 2004. -Vol. 62,№ l.-P. 97-106.

106. Golstein, P. Cell death by necrosis : towards a molecular definition / P. Golstein, G. Kroemer // TiBS. - 2006. - Vol. 32, № 1. - P. 37^13.

107. Gregoriadis, G. The; physiology of the liposome / G. Gregoriadis // Physiology. - 1989. - Vol. 4. - P. 146.

108. Hausenloy, D. J. The mitochondrial permeability transition pore : its fundamental role in mediating cell death during ischaemia and reperfusion / D. J. Hausenloy, D. M. Yellon // J. Mol. Cell. Cardiol. - 2003. - Vol. 35 № 4. - P. 339-341.

109. Hess, M. L. Molecular oxygen :fried and foe. The role of oxygen free radical system in the calcium paradox, the oxygen paradox and ischemia/reperfusion injury / M. L. Hess, N. M. Manson // J. Mol. Cel. Cardiol. - 1984. - Vol. 16, № 11. - P. 969985.

110. Holger, K. E. Collard Vascular ischaemia and reperfusion injury / K. E. Holger, D. Charles // British Medical Bulletin. - 2004. - Vol. 70. - P. 71-86.

111. In vitro evaluation of the antioxidant activity of liposomal flavonols by the HRP-H202-luminol system / A. P. Landi-Librandi, C. A. de Oliveira, A. E. Azzolini et al. // J Microencapsul. - 2011. - Vol. 28, № 4. - P. 258-267.

112. Intracellular adenosine triphosphate (ATP) concentration : A switch in the descision between apoptosis and necrosis / M. Leist, B. Single, A. F. Castoldi et al. // J. Exp. Med.- 1997.-Vol. 185, 8.-P. 1481-1486.

113. Ischemia/reperfusion injury and cardioprotective mechanisms : Role of mitochondria and reactive oxygen species / M.-G. Perrelli, P. Pagliaro, C. Penna // World J. Cardiol. - 2011. - Vol. 3, № 6. - P. 186-200.

114. Isolated heart perfusion according to Langendorff - Still viable in the new millennium / M. Skrzypiec-Spring, B. Grotthus, A. Szel^g et al. // J. Pharmacol. Toxicol. Methods. - 2006. - Vol. 55, № 2. - P. 113-126.

115. James, A. M. Antioxidant and prooxidant properties of mitochondrial Coenzyme Q / A. M. James, R. A. J. Smith, M. P. Murphy // Arch. Biochem Biophys. -2004. - Vol. 423, № 1. - p. 47-56.

116. Javadov, S. Mitochondrial permeability transition pore opening as an endpoint to initiate cell death and as a putative target for cardioprotection / S. Javadov, M. Karmazyn // Cell Physiol Biochem. - 2007. - Vol. 20, № 1^1. - P. 1-22.

117. Kloner, R. A. No-reflow Phenomenon : Maintaining Vascular Integry // Jornal of Cardiovascular Pharmacology and Therapeutics. - 2011. - Vol. 16, № 3-4. -P. 244-250.

118. Nanoparticles for targeting the infarcted heart / T. Dvir, M. Bauer, A. Schroeder et al. // Nano Lett. - 2011. - Vol. 11, № 10. - P. 4411^414.

119. Kroemer, G. Introduction : mitochondrial control of apoptosis / G. Kroemer // Biochimie. - 2002. - Vol. 84, № 2-3. - P. 103-104.

120. Lasic, D. D. Liposomes revisited / D. D. Lasic, D. Papahadjopoulos // Science. -1995. - Vol. 267, № 5202. - P. 1275-1276.

121. Leukocytes and the inflammatory response in ischemia-reperfusion injury / I. Francischetti, J. B. Moreno, M. Scholz et al. // Rev. Bras. Cir. Cardiovasc. - 2010. -Vol. 25, № 4. - P. 575-584.

122. Levonen, A.-L. Antioxidant Gene Therapy for Cardiovascular Disease Current Status and Future / A.-L. Levonen, E. Vahakangas, J. K. Koponen // Perspectives Circulation. - 2008. - Vol. 117, № 16. - P. 2142-2150.

123. Lin, P. J. Endothelium dysfunction in cardiovascular diseases / P. J. Lin,

C. H. Chang // Chang Keng I Hsueh. - 1994. - Vol. 17, № 3. - P. 198-210.

124. Liposomal simvastatin attenuates neointimal hyperplasia in rats / E. Afergan,

D. M. Ben, H. Epstein et al. // Aaps J. - 2010. - Vol. 2, № 12. - P. 181-187.

125. Liposome concentration in canine ischemic myocardium and depolarized myocardial cells / T. M. Mueller, M. L. Marcus, H. E. Mayer et al. // Circ. Res. — 1981. — Vol. 49, №2.-P. 405—415.

126. Loo, D. T. In situ detection of apoptosis by the TUNEL assay : an overview of techniquesc / D. T. Loo // Methods Mol. Biol. - 2011. - Vol. 682. - P. 3-13.

127. Madamanchi, N. R. Oxidative stress and vascular disease / N. R. Mada-manchi, A. Vendrov, M. S. Runge // Arterioscler Thromb Vase. Biol. - 2005. - Vol. 25, № 1. - P. 29-150.

128. Margaill, I. Lerouet Antioxidant strategies in the treatment of stroke / I. Margaill, M. Plotkine, D. Lerouet // Free Radical Biology & Medicine 39. - 2005. -P.429-443.

129. Maulik, N. Oxidative stress developed during open heart surgery induces apoptosis: reduction of apoptotic cell death by ebselen, a glutathione peroxidase mimic / N. Maulik, T. Yoshida // J. Cardiovasc. Pharmacol. - 2000. - Vol. 36, № 5. - P. 601608.

130. Moncada, S. XIV Inernational union of pharmacology nomenclature in nitric oxide research / S. Moncada, A. Higgs, R. E. Furchott // Phatmacol. Rev. - 1997. -Vol. 49,№2.-P. 137-142.

131. Mukhamadiyarov, R. A. Nanotechnology and nanomaterials : use of vesicular nanosystems for ischemic heart injury repair / R. A. Mukhamadiyarov, A. V. Veremeev, I. Yu. Zhuravleva // Journal of international scientific publications : Materials, methods, technologies. - 2012. - Vol. 6. - Pt. 2. - P. 392^00.

132. Murphy, E. Mechanisms underlying acute protection from cardiac ischemia-reperfusion injury / E. Murphy, C. Steenbergen // Physiol. Rev. - 2008. - Vol. 88, №2.-P. 581-609.

133. Myocardial stunning is associated with impaired calcium uptake by sarcoplasmic reticulum / S. Kumar, R. J. Hall, A. R. Mani et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2009. - Vol. 387, № 1. - P. 77-82.

134. Nanotheranostics and image-guided drug delivery: current concepts and future directions. / T. Lammers, F. Kiessling, W. E. Hennink et al. // Mol. Pharm. -2010.-№7.-P. 1899-1912.

135. Otsuki, Y. Apoptotic detection methods - from morphology to gene / Y. Otsuki, Z. Li, M. A. Shibata. // Progr. Histochem. Cytochem. - 2003. - Vol. 38, № 3. - P. 275-340.

136. Oxidative stress during myocardial ischaemia and heart failure / R. Ferrari, L. Agnoletti, L. Comini et al. // Eur. Heart J. - 1998. - Vol. 19, suppl B. - P. B2-11.

137. Oxidative stress-induced risk factors associated with the metabolic syndrome : a unifying hypothesis /1. Grattagliano, V. O. Palmieri, P. Portincasa et al. // The Journal of nutritional biochemistry. - 2008. - Vol. 19, № 8. - P. 491-504.

138. Pacher, P. Nitric Oxide and Peroxynitrite in Health and Disease / P. Pacher, J. Beckman, L. Liaudet. // Physiol Rev. - 2007. - Vol. 87, № 1. - P. 315^24.

139. Papa, S. Reactive oxygen species, mitochondria, apoptosis and aging / S. Papa, V. P. Skulachev // Mol. Cell. Biochem. - 1997. - Vol. 174. - P. 305-319.

140. Pharmacokinetic and cytotoxic studies of pegylated liposomal daunorubicin /

H. Song, J. Zhang, Z. Han et al. // Cancer Chemother. Pharmacol. - 2006. - Vol. 57, №5. -P. 591-598.

141. Phosphorylation of NF-kB and IkB proteins: implications in cancer and inflammation / P. Viatour, M. P. Merville, V. Bours et al. // Trends Biochem. Sci. -2005. - Vol. 30, № 1. - P. 43-52.

142. Plasma malondialdehyde as biomarker of oxidative stress : reference interval and effects of life-style factors / F. Nielsen, B. B. Mikkelsen, J. B. Nielsen et al. // Clinical Chemistry. - 1997. - Vol. 43, № 7. - P. 1209-1214.

143. Poljsak, B. The Neglected Significance of «Antioxidative Stress» / B. Poljsak,

I. Milisav // Oxidative Medicine and Cellular Longevity. - 2012. - Vol. 2012. - Art. ID 480895,12 pag.

144. Possibility of targeting treatment for ischemic heart disease with liposome (I) / C. S. Tang, J. Y. Su, Z. P. Li et al. // Sci. China B. - 1993. - Vol. 36, № 5. -P. 590-598.

145. Progressive apoptotic cell death triggered by transient oxidative insult in H9c2 rat ventricular cells: a novel pattern of apoptosis and the mechanisms / H. Han,

H. Long, H. Wang et al. // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. - 2004. - Vol. 286, № 6. -P. H2169-H2182.

146. Proskuryakov, S. Y. Necrosis : a specific form of programmed cell death? / S. Y. Proskuryakov, A. G. Konoplyannikov, V. L. Gabai // Exp. Cell. Res. - 2003. -Vol. 283, № l.-P. 1-16.

147. Reactive oxygen species and anti-oxidant defences in swine follicular fluids / G. Basini, B. Simona, S. E. Santini et al. // Reprod. Fértil Dev. - 2008. - Vol. 20, №2.-P. 269-274.

148. Redox signaling and protein phosphorylation in mitochondria : progress and prospects / D. B. Foster, J. E. van Eyk, E. Marban et al. // Bioenerg. Biomembr. - 2009. -Vol. 41, №2.-P. 159-168.

149. Reffelmann, T. The «no-reflow» phenomenon : basic science and clinical correlates / T. Reffelmann, R. Kloner // Heart. - 2002. - Vol. 87, № 2. - P. 162-168.

150. Reperfusion injury induces apoptosis in rabbit cardiomyocytes / R. A. Gottlieb, K. O. Burleson, R. A. Kloner et al. // J. Clin. Invest. - 1994. - Vol. 94, № 4. -P.1621-1628.

151. Sargent, C. A. The effect of a2-adrenoreceptor antagonists in isolated globally ischemic rat hearts / C. A. Sargent, W. M. Wilde, S. Dzonczyk // Eur. J. Pharmacol. -1994. - Vol. 261, № 1-2. - P. 25-32.

152. Schulz, R. Nitric oxide in myocardial ischemia/reperfusion injury / R. Schulz, M. Kelm, G. Heusch // Cardiovasc. Research. - 2004. - Vol. 61, № 3. - P. 402^13.

153. Seo, M. Y. Protective effect of low dose of ascorbic acid on hepatobiliary function in hepatic ischemia/reperfusion in rats / M. Y. Seo, S. M. Lee // J. Hepatol. -2002. - Vol. 36, № 1. - P. 72-77.

154. Supplementation with vitamin C lowers lipid peroxidation in vivo in mildly hypercholesterolemic men / J. Kaikkonen, E. Porkkala-Saratano, J. D. Morrow et al. // Free Radie. Res. - 2001. - Vol. 35, № 6. - P. 967-978.

155. Sutherland, F. J. Mouse isolated perfused heart: characteristics and cautions / F. J. Sutherland // Clin. Exp.Pharmacol. Physiol. - 2003. - Vol. 30, № 11. - P. 867878.

156. Taniyama, Y. Complex multiplication of abelian varieties and applications to number theory / Y. Taniyama, K. K. Griendling // Hypertension. - 2003. - Vol. 42, №6.-P. 1075-1081.

157. Thassu, D. Pharmaceutical applicatiom of nanoparticulate drug-delivery system // Nanoparticulate drug delivery systems. - 2007. - Vol. 166. - P. 185-212.

158. The cargo of CRPPR-conjugated liposomes crosses the intact murine cardiac endothelium / H. Zhang, N. Li, P Sirish et al. // J. Control Release. - 2012. - Vol. 163, № l.-P. 10-17.

159. The critical role of caspases activation in hypoxia / reoxygenation induced apoptosis / F. Y. Ho, W. P. Tsang, S. K. Kong et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2006. - Vol. 345. - P. 1131-1137.

160. The physiology of cardiovascular disease and innovative liposomal platforms for therapy / G. U Ruiz-Esparza , J. H. Flores-Arredondo, V. Segura-Ibarra et al. // Int. J. Nanomedicine. - 2013. -№ 8. - P. 629-640.

161. Timmermans Myocardial ischemia/reperfusion-injury, a clinical view on a complex pathophysiological process / A. L. Moens, M. J. Claeys, J. P. Timmermans et al. // Int. J. Cardiology. - 2005. - Vol. 100, № 2. - P. 179-190.

162. Torchilin, V. P. Recent advances with liposomes as pharmaceutical carriers / V. P. Torchilin // Nature Reviews Drug Discovery. - 2005. - Vol. 4, № 2. - P. 145-160.

163. Touys, R. M. Oxidative stress and vascular damage in hypertension / R. M. Touys // Curr. Hypertens. Rep. - 2000. - Vol. 2, № 1. - P. 98-105.

164. Turer, A. T. Pathogenesis of myocardial ischemiareperfusion injury and rationale for therapy / A. T. Turer, J. A. Hill // Am. J. Cardiol. - 2010. - Vol. 106, № 3. -P.360-368.

165. Use of vitamins C and E as a prophylactic therapy to prevent postoperative atrial fibrillation / R. Rodrigoa, J. Vinaya, R. Castillo et al. // International Journal of Cardiology. - 2010. - Vol. 138. - P. 221-228.

166. Vane, J. The Croonian Lecture, 1993. The endothelium : maestro of the blood circulation / J. Vane // Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. - 1994. - Vol. 343, № 1304.-P. 225-246.

167. Vitamin E enhances Ca2+-mediated vulnerability of immature cerebellar granule cells to ischemia / V. A. Dyatlov, V. V. Makovetskaia, R. Leonhardt et al. // Free Radical Biol. Med. - 1998. - Vol. 25, № 7. - P. 793-802.

168. Walke, M. Interaction of UV light-induced alpha-tocopherol radicals with lipids detected by an electron spin resonance prooxidation effect / M. Walke, D. Bec-kert, J. Lasch // Photochem. Photobiol. - 1998. - Vol. 68, № 4. - P. 502-510.

169. Wei-Xing, Z. Thompson Necrotic death as a cell fate / Z. Wei-Xing, B. Craig // Genes & Dev. - 2006. - Vol. 20, № 1. - P. 1-15.

170. Xie, Y. Inhibition of rat cardiac muscle contraction and mitochondrial respiration by endogenous peroxinitrite formation during posthypoxic reoxygenation / Y. Xie, P. Kaminski, M. Wolin // Circ. Res. - 1998. - Vol. 82, № 8. - P. 891-897.

171. Xu, C. Endoplasmic reticulum stress : cell life and death decisions / C. Xu, B. B. Maitre, J. C. Reed // J. Clin. Invest. - 2005. - Vol. 115, № 10. - P. 2656-2664.

172. Yih, T. C. AI-M Fandi. Engineered nanoparticles as precise drug delivery systems / T. C. Yih // J. Cell. Biochem. - 2006. - Vol. 97, № 6. - P. 1184-1190.

173. Zacharias, E. Suntres. Liposomal Antioxidants for Protection against Oxidant -Induced Damage / E. Zacharias // J. Toxicol. - 2011. - Vol. 2011. - 152474.

174. Zaugg, M. Signaling and cellular mechanisms in cardiac protection by ischemic and pharmacological preconditioning / M. Zaugg, M. C. Schaub // J. Muscle Res. Cell. Motil. - 2003. - Vol. 24, № 2-3 - P. 219-249.-