Биотехнология биологически активной добавки к пище "моллюскам" тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 05.18.07, кандидат технических наук Давидович, Валентина Владимировна

• Давидович, Валентина Владимировна
• кандидат технических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат технических наук Давидович, Валентина Владимировна

Список сокращений.

Введение.

1 Обзор литературы.

1.1 Свободные аминокислоты и дипептиды моллюсков. Содержание и физиологическая роль.

1.2 Основные функции аминокислот и потребности в них животных организмов

1.3 Использование свободных аминокислот в качестве БАД и лекарственных средств.

1.4 Антиоксиданты: возможность применения в качестве БАД.

1.5 Антиоксидантные свойства аминокислот и гистидинсодержащих дипепти-дов.

1.6 Способы получения препаратов, содержащих свободные аминокислоты.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

2 Объекты, материалы и методы исследований.

2.1 Объекты и материалы исследований.

2.2 Методы исследований.

3 Результаты и их обсуждение.

3.1 Разработка методов получения препаратов, содержащих свободные аминокислоты.

3.1.1 Обоснования выбора сырья.

3.1.2 Подбор условий проведения ферментативного гидролиза.

3.1.3 Состав полученных ферментативных гидролизатов.

3.2 Технологическая схема получения БАД «Моллюскам».

3.2.1 Технология получения препарата.

3.2.2 Разработка рецептуры потребительских форм.

3.3 Сравнительная характеристика различных методов получения БАД «Моллюскам».

3.4 Модификация технологии БАД «Моллюскам».

3.5 Оценка антиоксидантной активности БАД «Моллюскам».

3.5.1 Образование хлораминовых комплексов при взаимодействии «Моллю-скама» с гипохлорит-анионом.

Моллюскам» Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биотехнология биологически активной добавки к пище "моллюскам"»

Актуальность работы. Согласно современным литературным данным, морские беспозвоночные (двустворчатые моллюски, голотурии, морские ежи и др.) содержат уникальные биологически активные вещества различной природы, являющиеся основой для создания лечебно-профилактических пищевых продуктов или лекарственных средств (Слуцкая, 1972; Лебедев, 1974; Новикова и др., 1998; Левинтон и др., 1999).

У морских беспозвоночных основную долю азотистых экстрактивных соединений внутренних органов составляют аминокислоты и родственные им соединения. Наиболее высокое содержание свободных аминокислот, в том числе и незаменимых, обнаружено в тканях двустворчатых моллюсков. Для них характерно высокое содержание глицина, аланина, серина, аргинина и циклических аминокислот. Доминирующими аминокислотами мышечных белков являются глутаминовая и аспарагиновая (Кудряшов, Гончаренко, 1999). В тканях моллюсков обнаружены такие вещества, как таурин и бетаин, которые пополняют общее число анионов и вносят определенный вклад в регуляцию осмотического давления. Только у моллюсков найдены метилированные производные гистидина, которые вместе с (3-аланином являются возможными предшественниками анзерина (метилированное производное карно-зина) и офидина ((3-аланил-М3-метилгистидин) (Лебедев, 1974; Болдырев, 1998).

Кроме аминокислот, встречающихся в составе тканей высших животных, у моллюсков обнаружено значительное количество аминокислот необычного строения. К ним относятся саркозин, фосфосерин, триметилгистидин, а-аминобензойная кислота, цитруллин, орнитин и некоторые другие (Аюшин и др., 1999). О биологической роли этих компонентов в настоящее время известно очень мало, они обозначены главным образом как промежуточные продукты метаболизма аминокислот и мочевины. Отсутствуют сведения о потенциальном лекарственном механизме действия этих компонентов.

Большинство из аминокислот, содержащихся в моллюсках, являются непременными участниками белкового обмена в организме человека, оказывают значительное стимулирующее действие на его функции и необходимы в качестве питательных добавок на определенных стадиях его развития.

В настоящее время препараты, содержащие свободные аминокислоты, используются не только как источники аминокислот для лиц, занятых интенсивным физическим или умственным трудом (Тутельян и др., 1999), но и как вспомогательные средства при функциональных нарушениях ЦНС (повышенная возбудимость, снижение физической активности, ухудшение памяти и др.) (Федеральный реестр., 1999). В тоже время способность отдельных аминокислот и пептидов принимать участие в антиоксидантной защите организма не рассматривается. Тем не менее, известно, что многие аминокислоты способны ингибировать различные формы свободных радикалов (Меныцикова, Зенков, 1993; Нечаев, 2003, Лёвочкина, 1993). К ним относятся триптофан, фенилаланин и тирозин, имеющие в ароматическом кольце одну или несколько гидроксильных групп, а также серусодержащие аминокислоты - таурин, цистеин, метионин. Наиболее активными антиоксидантами из компонентов аминокислотной природы являются таурин и гистидин-содержащие дипепти-ды. Таурин представляет собой серусодержащую аминокислоту, не входящую в состав белков и образующуюся в процессе метаболизма метионина. Структурная простота этой небелковой (З-аминокислоты сопровождается сложностью и разнообразием биологических эффектов, что позволяет поставить ее в один ряд с важнейшими биологически активными веществами. Таурин вовлекается в сохранение нормального функционирования различных органов и тканей и, вероятно, занимает одно из центральных мест в реализации тех процессов, которые защищают клетки от разнообразных повреждающих факторов.

Таким образом, особенности химического состава двустворчатых моллюсков позволяют рекомендовать их в качестве источника БАД, обогащенных свободными аминокислотами, и рассматривать такие БАД в качестве антиоксидантов. В числе используемых объектов могут быть привлечены традиционно добываемые виды - гребешок, мидия, а также новые для промысла виды (спизула, анадара, гребешок белорозовый, гребешок Свифта, петушок, модио-лус длиннощетинистый, мерценария Стимпсона, мактра китайская, каллиста короткосифонная, перонидия жилковатая). В качестве еще одного массового источника сырья могут быть рассмотрены мантия и щупальца головоногих моллюсков.

Важнейшим этапом работы по созданию БАД является разработка эффективной технологии, позволяющей обогатить целевые продукты свободными аминокислотами. Наиболее распространенным методом получения подобных препаратов является кислотный гидролиз, обеспечивающий наибольший выход свободных аминокислот, однако при этом наблюдается частичное или полное разрушение отдельных аминокислот. Этот метод требует использования концентрированных кислот при высоких температурах и их последующей утилизацией. Разработанные в ТИНРО-центре методы ферментативного гидролиза (Пивненко и др. 1997), могут быть адаптированы к различным видам морского сырья, в том числе к тканям двустворчатых моллюсков. Модификация этих методов позволит регулировать специфичность ферментов, глубину гидролиза и состав получаемых БАД.

Целью настоящей работы явилась разработка биотехнологии биологически активной добавки к пище «Моллюскам», включая обоснование выбора сырьевых источников и направлений практического применения.

Для достижения целей поставлены следующие задачи:

- исследование химического состава сырьевых источников для получения БАД «Моллюскам»;

- подбор параметров ферментативного гидролиза применительно к различным видам сырья;

- исследование состава полученных препаратов;

- выявление перспективных дополнительных источников для получения БАД, исследование свободных аминокислот (САК) и гигиенической безопасности;

- разработка методов регуляции скорости, глубины и специфичности ферментативного гидролиза;

- оценка антиоксидантной активности препаратов, содержащих свободные аминокислоты с использованием различных методов;

- оценка безопасности, исследование биологической активности и функциональной направленности действия.

Научная новизна: Впервые исследован полный состав свободных аминокислот в тканях двустворчатых и головоногих моллюсков, а также содержание таурина и гистидинсодержащих дипептидов в БАД «Моллюскам» на их основе. Впервые установлено, что соотношение суммарного количества Хал:Хосн:Еар = 2:1:1 является устойчивым для БАД «Моллюскам» из двустворчатых и головоногих моллюсков. В качестве показателей подлинности этого продукта предложено использовать указанное соотношение наряду с нижним пределом содержания таурина. Исследовано влияние липофильности реакционной среды на скорость и глубину ферментативного гидролиза для однокомпонентных белковых субстратов и в условиях сложных многокомпонентных систем (тканей моллюсков) Определены пороговые точки концентраций этанола, в пределах которых сохраняется активность ферментов, дан сравнительный анализ состава свободных аминокислот в препаратах, полученных различными методами. Обоснованы пути и методы регуляции ферментативного катализа при различных условиях реакционной среды применительно к используемым сырьевым источникам.

Показано, что БАД «Моллюскам» обладает антиоксидантными свойствами. Впервые прямыми и косвенными методами проведена сравнительная оценка антиоксидантной активности препаратов, содержащих свободные аминокислоты. Показана способность компонентов БАД «Моллюскам» связывать гипохлорит-анион, ингибировать образование свободнорадикального катиона АВТ8"+, предотвращать накопление МДА.

Впервые установлена безопасность БАД «Моллюскам» и ее эффективность при применении в комплексе лечения ряда заболеваний.

Практическая значимость. Разработан способ получения БАД «Моллюскам», позволяющий наиболее эффективно обогащать целевой продукт свободными аминокислотами и регулировать его состав путем изменения условий реакции. Состав БАД и способ ее получения защищены патентом: №2171066 «Продукт, обогащенный свободными аминокислотами, и способ его получения».

Разработана и утверждена документация на БАД «Моллюскам»: ТУ 9283-247-00472012-04, ТИ № 36-247-2004 и двустворчатые моллюски - сырец: ТУ 9253-146-00472012-2001, ТИ№ 36-191-2001

По результатам экспертной оценки и санитарно-гигиенических исследований в федеральном центре Госсанэпиднадзора РФ «Моллюскам» соответствует требованиям СанПиН и зарегистрирован как БАД: санитарно-эпидемиологическое заключение № 77.99.11.003.Т.001763.10.04 от 08.10.2004.

Препарат внедрен в производство и выпускается в ФГУП «ТИНРО-Центре» и ОАО «Биополимеры».

Апробация работы: основные положения были представлены на научно-практической конференции «Состояние здоровья населения Дальнего Востока. Новые медицинские технологии с использованием биоресурсов» (Владивосток, 1999); Международном симпозиуме «Пищевые биотехнологии: Проблемы и перспективы в XXI веке» (Владивосток, 2000); региональной конференции молодых ученых «Проблемы экологии и рационального природопользования Дальнего Востока» (Владивосток, 2000); Международном симпозиуме «Пищевые биотехнологии: проблемы и перспективы в XXI веке» (Владивосток, 2004).

Положения, выносимые на защиту:

Биотехнология БАД к пище, основанная на рационализации процесса ферментативного гидролиза приводит к получению продуктов с высоким содержанием свободных аминокислот, таурина и гистидинсодержащих дипеп-тидов.

Регулирование специфичности, скорости и глубины ферментативного гидролиза включает изменение липофильности реакционной среды и вызывает активацию протеолитических ферментов.

Антиоксидантная активность БАД «Моллюскам», содержащей свободные аминокислоты, таурин и ГСД, проявляется в прямых реакциях нейтрализации свободных радикалов и в опосредованных реакциях накопления продуктов окисления in vivo и in vitro.

Публикации: по теме диссертации опубликовано 10 работ.

Структура и объем работы. Диссертация включает введение, обзор литературы, экспериментальную часть, заключение, выводы, список литературы, содержащий 137 источников (в том числе 23 зарубежных). Работа изложена на 166 страницах, содержит 27 таблиц, 20 рисунков и 16 приложений.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология пищевых продуктов (по отраслям)», Давидович, Валентина Владимировна

ВЫВОДЫ.

1. Обоснован выбор двустворчатых и головоногих моллюсков как источников биологически активных добавок, содержащих свободные аминокислоты. Показано, что моллюски содержат все незаменимые аминокислоты, таурин, а также гистидинсодержащие дипептиды. Основные сырьевые источники - традиционно добываемые двустворчатые моллюскои (мидия и гребешок), перспективные - новые для промысла виды (спизула, анадара, мерценария и др.). Для расширения сырьевой базы в качестве дополнительных источников получения БАД к пище «Моллюскам» рекомендовано использовать мантию и щупальца кальмаров.

2. Определяющей стадией технологического процесса получения биологически активной добавки «Моллюскам» является ферментативный гидролиз тканей моллюсков. Ферментативный гидролиз в отличие от кислотного, является наиболее щадящим способом получения белковых гидролизатов и позволяет сохранить наиболее ценные компоненты без нарушения их структуры. Эффективность ферментативного гидролиза по предлагаемой технологии обеспечивается как суммарным накоплением свободных аминокислот, так и сохранением отдельных аминокислот.

3. Обоснованы рациональные режимы проведения гидролиза с использованием панкреатических протеиназ: температура - 37±2 °С; рН - 8,0±0,5; время 5±1 час, гидромодуль 1:2, концентрация ферментного препарата 2,25±0,25 Пе/г; и микробиальных: температура - 37±2 °С; рН-6,7±1,3 ; время 4±1 час, гидромодуль 1:2, концентрация ферментного препарата 5,0±0,5 Пе/г.

4. Общее содержание свободных аминокислот в БАД «Моллюскам» достигает 62,5-70,5 %. Наиболее характерными чертами аминокислотного состава, позволяющими установить подлинность, являются, во-первых, наличие и высокое содержание таурина (не менее 3,9 %) и, во-вторых, соотношение суммарного количества алифатических, основных и ароматических аминокислот, составляющее Еал:Хосн:Хар = 2:1:1.

5. Изучено влияние этанола на активность протеолитических ферментов. Определены пороговые точки концентраций, в пределах которых не происходит снижения активности ферментов. Наиболее эффективна 10 %-ная концентрация этанола в реакционной смеси, позволяющая увеличить активность ферментных препаратов (исключение - протамекс); сократить время проведения гидролиза до 2,5±0,5 часов (в зависимости от используемого вида сырья и ферментного препарата); увеличить степень гидролиза (на 9,7±8,6 %), повысить выход свободных аминокислот на 4,3+2,6 %.

6. Предложено модифицировать метод ферментативного гидролиза путем увеличения липофильности реакционной среды, заменив на стадии ферменти-рования водный раствор реакционной смеси на водно-спиртовый. Наблюдающиеся отличия в ходе процесса и качестве конечного продукта соответствовали изменениям субстратной специфичности, скорости и глубины гидролиза.

7. Показано, что Б АД к пище «Моллюскам» обладает выраженным антиок-сидантным действием: нейтрализует действие гипохлорит-аниона, ингибирует образование свободнорадикального катиона ABTS + (2,2 азинобис-3-этил-бензотиадолин-6-сульфоновой кислоты), препятствует накоплению в сыворотке крови малонового диальдегида in vivo и in vitro. «Моллюскам» обладает широким спектром биологической активности: оказывает стимулирующее действие на факторы неспецифической резистентности организма.

8. Технологические решения производства Б АД «Моллюскам» использованы при разработке нормативной документации: ТУ № 9283-283-00472012-05, ТИ № 36-283-2005. Новизна технических решений подтверждена патентом РФ: «Продукт, обогащенный свободными аминокислотами, и способ его получения» №2171066.

9. По результатам исследований безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов (СанПиН 2.3.2.1078-01) и медико-биологической активности БАД «Моллюскам» составлен пакет документации на производство и использование препарата в качестве дополнительного источника аминокислот. Решением экспертного совета Госсанэпиднадзора РФ выдано санитарно-эпидемиологическое заключение № 77.99.11.003.Т.001763.10.04.

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Давидович, Валентина Владимировна, 2005 год

1. A.c. РФ 1827811. Средство, ускоряющее выведение радионуклидов из организма лабораторных животных / Ю.Б. Кудряшов, И.М. Пархоменко, Г.В. Коссова и др. Заявлено 17.03.89.

2. Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И. Человек и противоокислительные вещества. Л.: Наука. - 1985. - 229 с.

3. Абелев Г.И., Андреева Н.Е., Афанасьев В.В и др. Клиническая гематология. М: Медицина. - 2001. - 576 с.

4. Алексеенко Л.П. // Современные методы в биохимии. М.: Медицина. - 1968. -Т.2.-112 с.

5. Анисимов В.Н. Средства профилактики преждевременного старения (ге-ропротекторы) //Успехи геронтологии. 2000. - Вып. 4 . - С. 55-74.

6. Афанасьев Ю.И., Бронихина Т.В. // Успехи соврем, биологии. 1987. -Т. 104.-№3.-С. 400.

7. Аюшин Н.Б. Таурин: фармацевтические свойства и перспективы получения из морских организмов // Изв. ТИНРО. Владивосток. 2001. - Т. 129. -С. 129-146.

8. Аюшин Н.Б., Петрова И.П., Эпштейн Л.М. Азотистые экстрактивные вещества в тканях дальневосточных моллюсков // Изв. ТИНРО. 1999. -Т. 125.-С. 52-56.

9. Аюшин Н.Б., Петрова И.П., Эпштейн Л.М. Таурин и карнозин в тканях тихоокеанских моллюсков // Вопросы питания 1997. - № 6. - С. 6-8.

10. Беляева Е.А., Еремеев Н.Л. Кинетическая демонстрация локальных кон-формационных изменений вблизи активного центра а-химотрипсина в смесяхсмесях вода-диметилсульфоксид // Вестн. Моск. Ун-та. Сер. 2. Химия. 2000. -Т. 4L-№6.-С. 392-394.

11. Бобылев Р.В., Грядунова Г.П., Иванова JI.A., Игнатьева Н.С., Козлова JI.M., Тенцова А.И. Технология лекарственных форм: Учебник в 2-х томах. Том 2/Р. М.: Медицина. - 1991. - С. 451-476.

12. Богатков C.B., Фролова Т.Т., Грачева И.М., Неклюдов А.Д., Логинова Т.А. Оптимизация гидролиза белков щелочной протеиназой Bacillus Sub-tilis // Прикл. Биохим. и микробиол. 1982. - Т. 18, вып. 5. - С. 71-75

13. Бойков Ю.А., Мухленов А.Г., Бичурина М.А., Дергалева Ж.Т. Наука в России. Мидии «лечат» людей и животных. // Изд. Президиума Российской академии наук, Мин. науки и технол. Российской Федерации. 1997. - № 5. -С. 38-41.

14. Быков В.П. Справочник по химическому составу и технологическим свойствам водорослей, беспозвоночных и морских млекопитающих. М.: Изд. ВНИРО.- 1999. -261 с.

15. Воробьев М.М., Левичева И.Ю., Беликов В.М. Исследование начальной кинетики гидролиза белков молока химотрипсином // Прикл. биохим. и микробиол. 1996. - Т. 32. - № 2. - С. 237-241.

16. Воскресенский О.Н., Бобырев В.Н. // Вопр. мед. химии. 1992. - Т. 38.-№4.-с. 21-26.

17. Гигиеническое заключение № 77.99.9.916.П.15411.10.00 от 30.10.00 г.

18. Пищевая добавка ферментный препарат «Протамекс».

19. Гончаренко М.С., Латинова A.M. Метод оценки перекисного окисления липидов // Лабораторное дело. 1985. - № 1. - С. 60-61.

20. ГОСТ Р51495-99. Кальмар и каракатица мороженые.

21. ГОСТ 20414-93. Кальмар мороженый.

22. ГОСТ 2026.2-88. Препараты ферментные. Методы определения протео-литической активности.

23. Государственная фармакопея СССР. М.: Медицина. -1987. - XI издание, вып. 2. - 182 с.

24. Грачева И.М., Грачев Ю.П., Мосичев М.С., Борисенко Е.Г., Богатков C.B., Гернет М.В. Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов. М.: Легкая и пищевая промышленность. - 1982. - 239 с.

25. Гриффит В. Витамины, травы, минералы и пищевые добавки. Справочник. (Пер. с англ. К. Ткаченко). М.: ФАИР-ПРЕСС. - 2000. - 1056 с.

26. Давидович В.В. Пивненко Т.Н. Аминокислоты двустворчатых моллюсков: биологическая роль и применение в качестве БАД // Изв. ТИНРО. -2001. Т. 129. - С. 146-154

27. Докшина Г.А., Силаева Т.Ю., Ярцев Е.И. Некоторые инсулиноподоб-ные эффекты таурина // Вопр. мед. химии. 1976. - Т. 22. - № 4. - С. 503-507.

28. Дэвени Т., Гергей Я. Аминокислоты, пептиды и белки. М.: «Мир». -1976.-С. 165-174.

29. Денисов JI.H., Лобарева Л.С., Якушева Е.О. Антиоксидантные эффекты витаминов. Значение в ревматологии. М.: «Медицина», Терапевтический архив. - 1994. - Т. 66. - № 5. - С. 82-87.

30. Закс М.Г. и Соколова М.М. О механизмах адаптации к опреснению среды у некоторых литоральных организмов // Журн. эвол. биохим. и физиол. 1965.-Т. 1.-№6.-С.538-542.

31. Заявка № 94035039/14. Препарат из тканей морских гидробионтов «Орбитар» и способ его получения. Кудряшов Ю.Б., Лихарев В.А., Перов Ю.Ф. Заявлено 30.09.94.

32. Заявка № 98113555/14. Фармацевтическая композиция для лечения герпеса М.А. Бичурина, Л.Ю. Тарос, Л.Е. Никитина и др. Заявлено 10.07.98.

33. Зенков Н.К., Меньшикова Е.Б. // Успехи совр. биол. 1993. - Т. 113, вып. З.-С. 286-296.

34. Каверзнева Е.Д. Стандартный метод определения протеолитической активности для комплексных препаратов протеаз // Прикладная биохимия и микробиология. 1971. Т. 7. - № 2. - С. 225-228.

35. Кения М.В., Лукаш А.И., Гуськов Е.П. Роль низкомолекулярных анти-оксидантов при окислительном стрессе. М.: «Наука». Успехи современной биологии. - 1993. - Т. 113, вып. 4. - С. 456-471.

36. Кизеветтер И.В. Биохимия сырья водного происхождения. М.: Пищ. Пром-сть. - 1973. - 416 с.

37. Ковалев H.H. Гистидинсодержащие дипептиды. Свойства и перспективы использования // Изв. ТИНРО. Владивосток. 1999. - Т. 125. - С. 159-164.

38. Колесников Ю.А., Шульгина М.А., Ярцев Е.И. и др. Влияние некоторых химических соединений на радиационный гемолиз эритроцитов // Радиобиология. 1975.-Т. 15.- № 15.-С. 671-674.

39. Колодзейская М.В., Пивненко Т.Н. Трипсин-, химотрипсиноподобные протеиназы рыб // Укр. биохим. журн. 1988. - Т. 60. - № 4. - С. 103-117.

40. Костылев Э.Ф., Рябошапко А.П. Биохимия сырья водного происхождения. М.: Пищ. пром. - 1982. - С. 112-124.

41. Кудряшов Ю.Б., Гончаренко E.H. Современные проблемы противолучевой химической защиты организмов // Радиционная биология. Радиоэкология. 1999. - Т. 39. - № 2-3. - С. 197-211.

42. Лазаревский A.A. Техно-химический контроль в рыбообрабатывающей промышленности. М.: «Пищепромиздат». - 1955. - 518 с.

43. Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии. М.: «Мир» 1986. 431 с.

44. Лебедев A.B. Азотистые экстрактивные вещества мышечной ткани беспозвоночных // Журн. эволюц. биохим. и физиол. 1974. - Т. 10. - С. 232242.

45. Леванидов И.П., Захарова В.П. Химический состав промысловых моллюсков и иглокожих Сахалинского района // Известия ТИНРО. 1968. - Т. 65. -С. 221-230.

46. Левинтон Ж.Б.* Химич Т.Л., Ятченко Е.А. и др. Медико-биологические исследования икры морского ежа // Изв. ТИНРО. 1999. — Т. 125. - С. 254-259.

47. Лёвочкина Л.В., Лашук В.Н. Влияние наполнителей котлетной массы из щупалец кальмара на степень окисления липидов // Сб. тезисов международного симпозиума «Проблемы состояния и здоровья населения». М. -1993.-С. 16.

48. Лобарева Л.С., Денисов Л.Н., Якушева O.E. Витамины антиоксидант-ного действия и ревматические заболевания // Вопр. питания. 1995. - №4. -С. 24-29.

49. Машкова Н.Ю., Алексеева E.H., Докшина Г.А. О возможности регуляции таурином внутриклеточного содержания калия в гепатоцитах и эритроцитах крыс при облучении // Радиобиология. — 1983. Т. 23. - № 6. - С. 758-760.

50. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Медицина. 1993. - Т. 2.- 590 с.

51. Меньшикова Е.Б., Зенков Н.К. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов. М.: «Наука». Успехи современной биологии. - 1993. - Т. ИЗ, вып. 4. - С. 442-456.

52. Мухин В.А., Новиков В.Ю., Рыжикова Л.С. Ферментный белковый гидролизат из отходов промысла исландского гребешка Chlamys islandica //Прикл. Биохим. имикробиол.-2001.-Т. 37. -№3.- С. 338-343.

53. Мухин В.А., Новиков В.Ю. Ферментативные белковые гидролизаты тканей морских гидробионтов: получение, свойства и практическое использование. Мурманск: Изд. ПИНРО. - 2001. - 97 с.

54. Неклюдов А.Д., Иванкин А.Н., Бердутина A.B. Получение и очистка белковых гидролизатов // Прикл. Биохим. и микробиол. 2000. - Т. 36. - № 4. -С. 371-379.

55. Неклюдов А.Д., Федорова Н.В., Илюхина В.П., Лисица Е.П. Ферментативный профиль автолизирующих дрожжей рода Saccharomyces // Прикладная биохим. и микробиол. 1993. - Т. 29, вып. 5. - С. 734-743.

56. Неклюдов А.Д., Илюхина В.П., Мосина Г.И., Петракова А.Н., Федорова Н.В., Кузнецов В.Д. Гидролизующая способность дрожжевых протеаз по отношению к белковым субстратам // Прикладная биохимия и микробиология. 1996. - Т. 32. - № 2. - С. 231-236.

57. Нетребенко O.K., Ладодо К.С., Яцык Г.В., Грибакин С.Г. Особенности аминокислотного обмена у недоношенных детей при различных видах вскармливания // Вопросы питания. 1995. -№4. - С. 20-23.

58. Нечаев А.П., Траубенберг С.Е., Кочеткова A.A., Колпакова В.В., Ви-тол И.С., Кобелева И.Б. // Пищевая химия. ГИОРД. 2003. - 640 с.

59. Николаев А.Я. // Биологическая химия. Мед. информ. агенство. 2004. -565 с.

60. Новиков В.М. Справочник технолога рыбной промышленности. М.: «Пищевая промышленность». - 1964. - Т. 2. - 781 с.

61. Новикова М.В. и др. Пищевая биологически активная добавка из мидий // Вопр. питания. 1998. - № 1. - С. 10-13.

62. Новикова М.В., Беседина., Рехина Н.И. Сравнительная характеристика биологически активных добавок из гидробионтов и тходов их разделки // Труды ВНИРО. 2004. - Т.134. - С. 124-133.

63. Номенклатура ферментов. Рекомендации (1972 г) Международного биохимического Союза по номенклатуре и классификации ферментов, а также по единицам ферментов и символам кинетики ферментативных реакций. / Под ред. Браунштейна А.Е. М.: Наука. - 1979.

64. Орехович В.Н. // Современные методы в биохимии. М.: Медицина. -1977. - С. 62-69.

65. Оруджев Я.С., Ростовщиков В.В. Применение медиаторных аминокислот (таурин) во внебольничной геронтологической практике // Социальная и клиническая психиатрия. 1998. - № 3. - С. 78-81.

66. Остерман JI.A. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование. М.: Наука. - 1981. - 286 с.

67. Паркер. С. Фото-люминесценция растворов. М.: «Мир». - 1972. - 497 с.

68. Пархоменко И.М., Граевская Е.Э., Гонсалес Г.М. Влияние мидий но го гидролизата МИГИ-К на адаптивный ответ у стволовых клеток костного мозгамышей // Радиационная биол., Радиоэкол. 1999. - Т. 39. - № 2-3. - С. 310312.

69. Пат. РФ 2001616. Средство для лечения сердечно-сосудистой недостаточности / Н.И. Фетисова, Н.Ю. Титенко, А.П. Сафронова и др. Заявлено 12.05.91; Опубл. 30.10.93.

70. Пат. РФ 2121844. Способ получения углевод-белкового комплекса из приморского гребешка / A.M. Ковалевская. Заявлено 18.03.96; Опубл. 20.11.98.

71. Пат. 2090084. Способ переработки мидий / Кузнецов Ю.Н., Ярочкин А.П. Заявлено 20.09.97.

72. Пат. РФ 2043109. Способ ингибиции вируса гриппа серотипов А и В / М.А. Бичурина, JI.E. Никитина, Ф.Н. Носков и др. Заявлено 17.03.92.

73. Пат« РФ 2134571. Средство для очистки кожи лица «Троя» / A.B. Гордин, Л.А. Николаева, Соха В.И. Заявлено 23.04.98; Опубл. 20.08.99.

74. Пат. РФ 2017439. Продукт из мяса мидий и способ его получения / Л.Л. Лагунов, Н.И. Рехина, Т.В. Беседина и др. Опубл. 12.11.92. i

75. Пат. РФ 2066105. Способ получения белково-углеводного мидийного концентрата / А.Г. Губанова, Л.Ю. Полешук, Ж.Б. Левинтон и др. Заявлено 20.05.92; Опубл. 10.09.96.

76. Пат. РФ 2134523. Способ получения белкового гидролизата из моллюсков / Ю.А. Бойков, А.Г. Мухленов, В.Н. Елагин. Опубл. 26.08.98.

77. Пат. РФ № 2034028. Способ получения протеолитического комплекса / Пивненко Т.Н., Жданюк В.М., Эпштейн Л.М. 1992. - БИ№ 14.

78. Пат. РФ 2090103. Способ приготовления икры рыб / Пивненко Т.Н., Эпштейн Л.М., Шульгина Л.В., Блинов Ю.Г. и др. 1997.- БИ № 26.

79. Пат. SU 1807353. Способ определения антиокислительной активности карнозина / Формазюк В.Е., Дудина Е.И., Болдырев A.A. Опубл. 07.04.93.

80. Пат. РФ 2105504. Пищевая биологически-активная добавка «Тинростим1. С».

81. Пивненко Т.Н. Трипсиноподобные протеазы дальневосточных лососей // Дис. .канд. биол. наук Киев. - Инст. Биохимии им. Палладина. - 1986. -176 с.

82. Пивненко Т.Н., Позднякова Ю.М., Давидович В.В. Получение и характеристика белковых гидролизатов из гидробионтов // Изв. ТИНРО. — 1997. -Т. 120.-С. 23-31.

83. Пивненко Т.Н. Эпштейн Л.М., Колодзейская М.В., Кудинов С.А. Получение и свойства трипсина из пилорических придатков тихоокеанского лосося // Прикладная биохимия и микробиология. 1989. - Т. 25. - № 4. - С. 490497.

84. Пилат Т.Л., Иванов A.A. Биологически активные добавки к пище (теория, производство, применение). М.: Авваллон. - 2002.- 710 с.

85. Платонов А.Г., Ахалая М.Я., Деев Л.И., Кудряшов Ю.Б. Защитные эффекты МИГИ-K при облучении животных // Радиационная биология. Радиоэкология. 1999. - Т. 39. - № 2-3. - С. 313.

86. Позднякова Ю.М. Технология биологически активных добавок к пище на основе ферментативного гидролиза гонад гидробионтов. Дис. .канд. техн. наук Владивосток. - ФГУП «ТИНРО-центр». - 2003. - 126 С.

87. Проссер Л., Браун Ф. Сравнительная физиология животных. М.: Мир, 1967.-751 с.

88. Пяллин P.A. Влияние органических растворителей на взаимодействие а-химотрипсина с фосфорорганическими ингибиторами. Дис. .канд. химич. наук Таллин. - Инст. химии АН Эстонской ССР. - 1979.

89. Рекомендуемые уровни потребления пищевых и биологически активных веществ. Методические рекомендации МР 2.3.1. 1915-04. Минздрав России. М. - 2004. - 35 с.

90. СанПиН 2.3.2.1078-01. Гигиенические требования безопастности и пищевой ценности пищевых продуктов. Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы.

91. Сажинов Г.Ю., Круглик В.И., Соломадина JI.B. Новые технологии в производстве перспективных продуктов детского питания // Вопр. питания. — 1996.-№5.-С. 41-44

92. Сапронов Н.С., Елисеев В.В, Торкунов П.А., Крылова И.Б., Евдокимова Н.Р. Влияние нового фенилалкильного производного таурина на сердечно-сосудистые эффекты аденозина. Научно-исследовательский институт эксп. медицины РАМН, С-Петербург. - 1998. - С. 9-11.

93. Сафронова Т.М. Аминосахара промысловых рыб и беспозвоночных и их роль в формировании качества продукции. М.: «Пищевая промышленность». - 1980. - С. 46-81.

94. Северин С.Е. Биологическая роль природных дипептидов скелетной мускулатуры // Вест. МГУ. 1972. - Т. 1. - С, 187-189.

95. Сейфула Р.Д., Борисова И.Г. Проблемы фармакологии антиоксидантов // Фармакол.и токсикол. 1990. - Т. 53. - № 6. - С. 3-10.

96. Татаркина Н.Д., Жилкова H.H., Пивненко Т.Н., Аюшин Н.Б. Влияние Моллюскама на процессы кроветворения Изв. ТИНРО. 2001. - Т. 129. - С. 68-73.

97. Торкунов П.А., Сапронов Н.С. Кардиопротекторное действие таурина // Экспериментальная и клиническая фармакология. 1997. - Т. 60. - № 5. - С. 72-77.

98. ТУ 00479942-002-94. Протомегатерин (металлопротеиназа). Технические условия на опытную партию.

99. ТУ 15-01 279-97. Мидии-сырец.

100. ТУ 15-01 1720-2001. Спизула-сырец.

101. ТУ 9253-006-33620410-03. Гребешок морской-сырец.

102. ТУ 9253-146-00472012-2001. Моллюски двустворчатые-сырец. ТУ 9253-187-00472012-2000. Анадара-сырец.

103. ТУ 9265-216-00472012-02. Корбикула мороженая. ТУ 9280-1203-00472012-96. Пилорин марки А.

104. ТУ 9289-011-00038155-02. Дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) с витамином С и глюкозой.

105. ТУ 9280-055-02698170-2000. Коллагеназа краба пищевая.

106. Тутельян В.А., Суханов Б.П., Австриевских А.Н., Поздняковский

107. B.Мо Биологически активные добавки в питании человека. Томск. Изд.-во научн.-техн. лит-ры. - 1999. - 296 с.

108. ФГУП «ТИНРО-центр». Прогноз общих допустимых уловов по Тихоокеанскому бассейну на 2004 г. // Гос. Ком. по Рыболовству РФ. 2004. - С.252.

109. Федеральный реестр биологически активных добавок к пище. / Подредакцией Т.Л. Барабанова, Е.И.Максакова М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России. - 1999. - Ч. 3. - 124 с. |

110. Формазюк В.Е., Горшкова Т.Ю., Болдырев A.A., Сергиенко В.И. Характеристика хлораминовых комплексов карнозина с гипохлорит-анионом // Биохимия. 1992. - Т. 57, вып. 9. - С. 1324-1329.

111. Формазюк В.Е., Дудина Е.И. и Болдырев A.A. Способ определения антиокислительной активности карнозина // Бюлл. Экспер. Биол. Мед. (Описание изобретения к авторскому свидетельству. SU 1807353 Al).- 1989. № 12.1. C. 668-670.

112. Христофорова Н.К., Шулькин В.М., Кавун В.Я., Чернова E.H. Тяжелые металлы в промысловых и культивируемых моллюсках залива Петра Великого // Дальнаука. 1993. - 295 с.

113. Черногорцев А.П. Переработка мелкой рыбы на основе ферментирова-ния сырья. М.: «Пищевая промышленность». - 1973. - 141.с.

114. Чумак А.Д., Миленина Н.И., Слуцкая Т.Н., Кротова Т.П., Чибиряк ф JI.M., Синюкова C.B., Павловский A.M. Влияние различных добавок наокисление липидов и качество соленых лососевых // Изв. ТИНРО. 1992. - Т. 114.-С. 167-174.

115. Чумак А.Д., Чибиряк Л.М., Павель К.Г., Андреев НЛГ. Повышение качества слабосоленой рыбной продукции с помощью добавок антиокислительного действия //Изв. ТИНРО. 1999. - Т.125. - С. 315-320»

116. Чумак А.Д. Окисление липидов рыб. Методы определения // Изв. ТИНРО. 1995. - Т. 118. - С. 3-18.

117. Шапиро Д.К. Практикум по биологической химии. Минск: Высшая школа. - 1976.-285 с.

118. Шульгина Л.В., Загородная Г.И., Блинов Ю.Г. и др. Лечебно-профилактический продукт на основе отварных вод из кукумарии // Пищевая промышленность. 2001.-№ 12. - С. 73-75.

119. Якубке Х.Д., Ешкайт X. Аминокислоты. Пептиды. Белки. М: Мир. -1985.- 312 с.

120. Brown С.Е. Interaction among carnosine, anserin, ophidine, and cooper in bio-i chemical adaptation//J. Theoret. Biol.-1981.-P. 245-256.

121. Marino B. Arnao, Antonio Cano and Manuel Acosta // Total antioxidant activity inplant material and its interest in food technology. Recent Res. Devel. in Agricultural I Food Chem., 2. 1998. - P. 893-903.

122. Michizo S., Hirobumi K. Free Amino Acids and Quaternary Ammonium Bases in Mantle Muscle of Squids // Bull, of the Japanese Society of Scientific Fisheries. 1980.-P. 1261-1264.

123. Orr H.T., Cohen A.I., Lowry O.H. The distribution of taurine in the verte-bratr retina // J. Nerochem. 1976. - V. 26. - № 3. - P. 609-611.

124. Pat. US, № 3,655,875. Clam extract effective against sarcoma 180 and krebs-2 carcinoma in mice / Jerome D. Goldberg. Опубл. 11.04.72.

125. Preston R.Lo Transport of amino asids by marine invertebrates // J. Exp. Biol. 1993. - V. 256. - № 4. - P. 410-421.

126. Rc. R., Pellegrini N., Proteggente A., Min Yang et all. Antioxidant activity applying an improved ABTS Radical cation decolorization assay // Free Radical Biology I Medicine. 1999. - V. 26. - № 9/10. - P 1231-1237.

127. Rona Id L. and Gvonva Cao. Oxidative stress status in vivo total antioxidant capacity: comparison of different ANALYTICAL METHODS // Free Radical Biology I Medicine. 1999. - V. 27. - № 11/12. - P. 1173-1181.

128. Schoffeniels E. Cellular aspects of active transport // Сотр. Biochem. 1964. -V. 7. -P. 137.

129. Schoffeniels E., Gilles R. Ionoregulation and osmoregulation in Mollusca // Chemical-Zoology-Volume-7-Mollusca Florkin,-M.-(ed.); Scheer,-B.T.-(ed.). -1972. P. 393-420.

130. Toda S., Kumura M., Ohnishi M. // Planta med. 1991. - V. 57. - P. 8.

131. Vorob'ev M.M., Paskonova E.A., Vitt S.V., Belikov V.M. // Nahrung. -1986.-V. 30.-№10.-P. 995-1001.

132. Wright C.E., Tallan H.H., Lyn Y.Y., Gaull G.E. Taurine: biological update // Annu. Rev. Biochem. Palo Alto, Calif. - 1986. - V. 55. - P. 427-453.

133. Wright S.H. Multiple pathways for amino acid transport in Mytiius gill // J.-COMP.-PHYSIOL.,-B. 1985. - V. 156. - № 2. - P. 259-267.

134. Zachariassen K.E», Olsen A. The transmembrane distribution of free amino acids in the adductor muscle of blue mussels (Mytiius edulis) exposed to organic pollutants: A study on regulatory mechanisms // REP.-BECTOS-PROG. 1993. -P. 49-56.