Биологическое разнообразие видов рода Trichoderma (Fungi, Ascomycetes, Hypocreales) и их роль в функционировании микробиоты и защите растений в агроценозах различных почвенно-климатических зон на территории Республики Татарстан тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, доктор биологических наук Алимова, Фарида Кашифовна

• Алимова, Фарида Кашифовна
• доктор биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации доктор биологических наук Алимова, Фарида Кашифовна

Введение

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Климат и почвы Республики Татарстан

2. Общая характеристика Trichoderma/Hypocrea

2.1. Положение Trichoderma/Hypocrea в системе Ascomycota

2.2. Морфологическая характеристика Trichoderma/Hypocrea

2.3. Современная система Trichoderma/Hypocrea

2.4. Генетическая вариабельность Trichoderma

2.5. Методы в систематике Trichoderma

2.6. Внутривидовая изменчивость Trichoderma

2.6.1. Гетерогенность Trichoderma

2.6.2. Культурально-морфологические типы

2.6.3. Типы взаимодействия грибных гиф

2.6.4. Исследование популяционной структуры грибов

2.6.5. Вегетативная совместимость

2.7. Литические ферменты Trichoderma

2.7.1. Характеристика целлюлаз Trichoderma

2.7.2. Характеристика ксиланазного комплекса Trichoderma

2.13. Характеристика протеаз Trichoderma

3. Экология Trichoderma

3.1. Распространение Trichoderma в природе

3.2. Влияние внешних факторов на Trichoderma

3.2.1. Влияние температуры на Trichoderma

3.2.2. Влияние водного потенциала на Trichoderma

3.2.3. Влияние рН-фактора на Trichoderma

3.2.4. Влияние ионов металлов на Trichoderma

3.2.5. Влияние доступного кислорода на Trichoderma

3.2.6. Влияние субстрата и других необходимых элементов на

Trichoderma

3.2.7. Влияние почвы на Trichoderma

3.2.8. Влияние антропогенных факторов на Trichoderma

3.3. Влияние Trichoderma на окружающую среду

3.3.1. Роль Trichoderma в круговороте веществ и преобразовании антропогенных загрязнений окружающей среды

3.3.2. Влияние Trichoderma на почву

3.3.3. Влияние Trichoderma на микробиоценоз

3.3.4. Взаимодействие Trichoderma с растениями

3.3.4.1. Отрицательные взаимодействия

3.3.4.2. Положительные взаимодействия

3.3.4.3. Индукция резистентности растений к патогенам

4. Применение Trichoderma в сельском хозяйстве

4.1. Производство и применение биофунгицидов на основе

Trichoderma

4.2. Применение ферментов Trichoderma

4.3. Применение Trichoderma для производства кормов

4.4. Применение Trichoderma для переработки отходов 4.4.1. Получение биокомпостов с применением Trichoderma

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 1. Материалы

1.2. Характристика почв агроклиматических зон РТ

1.3. Схема отбора проб для выделения изолятов Trichoderma 3.Методы

3.1. Выделение Trichoderma из почвы

3.2. Получение моноспоровых культур

3.3. Среды для культивирования Trichoderma

3.4. Определение кинетических параметров, размеров объектов

3.5. Определение цвета

3.6. Идентификация

3.7. Вегетативная совместимость

3.8. Культурально-морфологические типы колоний

3.9. Определение физиологических параметров

3.10. Антагонистическая активность

3.11. Ферментативная активность изолятов Trichoderma

3.12. Определение фитотоксичности почвы и культуральной жидкости Trichoderma

3.13. Определение токсичности к микроорганизмам и мутагенного потенциала почвенных вытяжек и культуральной жидкости Trichoderma

3.14. Определение фунгистатического действия почвы

3.15. Молекулярно-генетический анализ Trichoderma

3.16. Наблюдение и учет микроорганизмов почвы

3.17. Определение «потенциальной» активности азотфиксации

3.18. Определение активности почвенного дыхания

3.19. Определение общей микробной биомассы в почве

3.20. Определение ферментативной активности почвы

3.21. Расчет коэффициента микробиологической активности

3.22. Фитоэкспертиза семенного материала

3.23. Получение культуры Trichoderma, устойчивой к антибиотикам и пестицидам

3.24. Получение биопрепарата триходермин (фитотрикс) на основе Trichoderma

3.25. Определение биологической эффективности биопрепаратов

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Распространение Trichoderma на территории Республики Татарстан

2. Морфологические и молекулярно-генетические характеристики изолятов, выделенных на территории РТ

2.1 .Морфологическая характеристика видов Trichoderma, выделенных на территории Республики Татарстан

2.2. Молекулярно - генетическая характеристика аборигенных изолятов Trichoderma

3. Популяционная гетерогенность изолятов Trichoderma, выделенных на территории РТ

4. Гетерогенность природных популяций Trichoderma: вегетативная совместимость клонов в популяциях и культурально-морфологические типы колоний

5. Гетерокариоз изолятов Trichoderma, выделенных из почв РТ

6. Интенсивность спороношения

7. Внутривидовая конкурентоспособность и взаимоотношения с фитопатогенными микроорганизмами в опытах in vitro

8. Стратегии жизни изолятов Trichoderma в экосистемах

9. Ферментативная активность автохтонных изолятов грибов Trichoderma

10. Кинетика изолятов Trichoderma

11. Влияние экологической ниши и вида адсорбента на жизнеспособность T.harzianum

12. Взаимоотношение изолятов Trichoderma с растениями (фитотоксичность)

13.Токсичность, генотоксичность и мутагенный потенциал изолятов Trichoderma

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биологическое разнообразие видов рода Trichoderma (Fungi, Ascomycetes, Hypocreales) и их роль в функционировании микробиоты и защите растений в агроценозах различных почвенно-климатических зон на территории Республики Татарстан»

Актуальность работы. В современных условиях ведения земледелия особую актуальность приобретают две проблемы. Это постоянно растущие затраты на производственную продукцию, вызванные применением традиционных многооперационных технологий возделывания сельскохозяйственных культур, постоянным и значительным повышением цен на энергоносители, сельскохозяйственную технику, минеральные удобрения, средства защиты растений и другие виды промышленной продукции. Вторая проблема связана с потерей плодородных почвенных ресурсов, снижением видового разнообразия микроорганизмов и ухудшением экологической и фитосанитарной обстановки окружающей среды. В настоящее время идет быстрое и повсеместное сокращение площадей с естественной растительностью. В то же время известно, что только природные комплексы с условно коренной растительностью способны поддерживать состояние среды на приемлемом для жизни уровне. В связи с этим особый интерес при экологических исследованиях представляют ненарушенные леса, расположенные на территории заповедников, которые могут служить эталоном природных ландшафтов со всем видовым разнообразием, населяющих их организмов, а также почвы, не затронутые деятельностью человека.

Территория Республики Татарстан в настоящее время имеет около 19% территории, покрытой сильно нарушенными лесными природными системами. Исключение составляют отдельные хорошо сохранившиеся хвойные участки леса Раифского лесничества Волжско-Камского заповедника Национального парка «Нижняя Кама». Лесопитомники, используемые для восстановления лесов, характеризуются резким ухудшением агрохимических характеристик. В результате этого почти пятая часть всходов и сеянцев ежегодно погибает от болезней, а в отдельные годы отмечалась даже стопроцентная гибель сеянцев.

Современные технологии обеспечивают последовательную замену энергоемких минеральных удобрений и пестицидов биопрепаратами нового поколения, разработанными отечественными микробиологами, и препаратами, производимыми отечественными биологическими фабриками. В современных процессах используется микробиологический мониторинг почвенных угодий с целью своевременной оценки ухудшения экологической ситуации, безопасных технологий для сельскохозяйственной промышленности.

Одним из наиболее перспективных видов микроорганизмов для внедрения ресурсосберегающих технологий в сельское хозяйство являются грибы рода Trichoderma, которые представляют собой наиболее изучаемые грибы в настоящее время. Представителей рода Trichoderma можно найти практически во всех почвах. Их считают, по крайней мере, частично ответственными за эффект биологического контроля фитопатогенов в супрессивных почвах, на которых зерновые и деревья не подвергаются действию патогенов и микотоксинов, выделяющихся в окружающую среду. б

Возможно, что Trichoderma - это единственный род грибов, для которого каждый вид представлен в GeneBank NCBI, по крайней мере, одним геном, и многие виды представлены последовательностью двух или более генов. В целом в Банке генов хранится информация о 427 видах Нуросгеа (телеоморф) и о 110 видах Trichoderma. Согласно последним данным, более 40% видов, представленных в GeneBank NCBI, (44 названия) являются синонимами или идентифицированы неверно.

Причиной возрастающего интереса к Trichoderma является большая практическая и экологическая значимость рода. Виды Trichoderma являются продуцентами ферментов (целлюлаз, хитиназ, пектиназ, ксиланаз, серинзависимых протеиназ и др.), используемых в целлюлозно-бумажной и пищевой промышленностях, в производстве моющих средств, в получении спирта, преобразовании отходов, содержащих целлюлозу и глюкозу, для получения кормовых добавок и в текстильной промышленности. На основе антибиотиков, токсинов и ферментов грибов этого рода получают препараты для биологического контроля болезней и стимуляции роста растений и получения трансгенных растений. Trichoderma также используется для биологической очистки почвы и для получения биокомпостов.

В рамках данного вопроса исследования биоразнообразия определяются как зондирование перспективности использования определенных природных источников с коммерческой целью. Именно такой подход определил разработку международной «Конвенции по биологическому разнообразию» в качестве законодательства по использованию ценных генетических ресурсов.

В настоящее время перед микологами, изучающими Trichoderma, стоит ряд вопросов: по систематическому положению вида, адекватным методам идентификации, по построению естественного филогенетического древа, географической распространенности, разнообразию и выявлению способности к антагонистической активности к фитопатогенам среди всех видов данного рода, по наличию в природе новых видов, в том числе промышленно значимых.

В связи с вышесказанным представляет большой практический интерес анализ распространенности и сохранения видового разнообразия грибов рода Trichoderma на территории Республики Татарстан и их роли в биогеоценозе и антропогенных ландшафтах, а также возможности использования в сельскохозяйственной промышленности.

Целью настоящего исследования явилась оценка биоразнообразия, динамики численности и характеристик структуры популяций Trichoderma в современных почвенных и антропогенных ландшафтах, в эталонных зонах (погребенных и заповедных) на территории РТ, а также выявление основных закономерностей изменения микробиологической активности агроценозов под влиянием антропогенных факторов и роль в этих процессах интродукции штаммов Trichoderma.

Задачи исследования

1. Исследование распространения грибов рода Trichoderma и идентификация аборигенных штаммов Trichoderma, выделенных на территории Республики Татарстан, с использованием морфологических, кинетических и молекулярно-генетических методов.

2. Исследование стратегии жизни, внутривидовой и популяционной гетерогенности местных штаммов Trichoderma, выделенных из различных почвенно-климатических зон Республики Татарстан.

3. Исследование биохимических свойств штаммов видов Trichoderma: фитотоксичности культуральных жидкостей и некоторых ферментов гидролазного комплекса.

4. Оценка степени влияния различных экологических параметров на выживаемость штаммов Trichoderma.

5. Изучение взаимоотношения штаммов Trichoderma с растениями, фитопатогенными и сапротрофными почвенными микроорганизмами.

6. Отбор стабильных штаммов - продуцентов биопрепаратов по культурально - морфологическим признакам, антибиотической активности, вегетативной совместимости, устойчивости к фунгицидам, взаимодействию с регуляторами роста и бактериями.

7. Оценка биологической активности различных почвенно-климатических зон Республики Татарстан по данным микробиологического мониторинга. Изучение влияния антропогенных факторов и биоудобрений с активными штаммами Trichoderma на микробиологическую активность почв Республики Татарстан.

8. Разработка способов применения местных штаммов Trichoderma в промышленности Республики Татарстан с целью получения кормовых добавок (ксиланазы Trichoderma) для животноводства, переработки растительных, животноводческих, а также городских отходов с целью получения биоудобрений, и для получения биопрепаратов для защиты растений от фитопатогенных микроорганизмов.

Научная новизна. Впервые определен видовой состав и географическое распространение грибов рода Trichoderma на территории РТ. Выделены типичные и случайные виды Trichoderma в современных, погребенных и затопляемых почвах. По данным молекулярно-генетического анализа выделены новые виды Trichoderma из погребенных почв и могильников на территории РТ. Установлена гетерогенность природных популяций Trichoderma и их структура. В области биотехнологии и защиты растений данное исследование дает исходный материал для инвентаризации ресурсов микромицетного населения по данным одного рода Trichoderma и теоретического обоснования методов направленного поиска и выделения промышленно важных микроорганизмов (например, из погребенных почв выделены виды, перспективные для получения биофунгицидов, биогербицидов и продуцентов ксиланаз). Установлены механизмы регуляции численности интродуцированных изолятов Trichoderma в микрокосмах, защищенных грунтах, в полевых условиях и прикорневой зоне растений.

Показана принципиальная возможность управления численностью микробных популяций, моделирования отдельных стадий сукцессии. Полученные при этом результаты могут способствовать решению вопросов, связанных с организацией контроля применения биофунгицидов и биоудобрений. Впервые изучена эколого-биологическая значимость видов рода Trichoderma в почвенной биоте. Выявлена роль Trichoderma в регуляции супрессивности почв на территории Республики Татарстан. Описана структура популяций Trichoderma при взаимоотношении с растениями. Установлено, что доля фитотоксических видов зависит от типа стадии сукцессии и типа экологической ниши. Описан комплекс видов фитопатогенных микромицетов, вызывающих поражение сеянцев хвойных, овощных и зерновых культур. Впервые выявлены местные изоляты Trichoderma с высокой антагонистической активностью в отношении почво-обитающих патогенных микромицетов и семенных инфекций. Разработаны оптимальные условия культивирования активных штаммов в различных биотехнологических системах, и получен биопрепарат новой формы на основе микромицетно - бактериального сообщества с использованием природных регуляторов и промышленных и сельскохозяйственных отходов. Впервые показана целесообразность использования биопестицида на основе Trichoderma для ограничения численности возбудителей инфекционных заболеваний яровых и озимых зерновых культур, а также сеянцев сосны на территории Республики Татарстан. Впервые с позиций системного подхода исследован широкий спектр разнонаправленных микробиологических и биохимических параметров различных природных - климатических зон на территории Республики Татарстан. Показано, что введение в агроэкосистему определенных видов и различных сочетаний удобрений, известкования и сочетания удобрений с известкованием, а также биоудобрений оказывает положительное фитотерапевтическое действие на растения и влияет на уровень супрессивности и плодородие почв. Установлены закономерности биосинтеза ксиланаз у представителей рода Trichoderma. Впервые проведено исследование влияния рН .и температуры, соответствующих параметрам желудка моногастричных сельскохозяйственных животных, а также воздействия гидротермической обработки на активность ксиланаз, синтезированных представителями рода Trichoderma.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Запасы жизнеспособных пропагул Trichoderma изменяются в зависимости от расположения в почвенном профиле, от затопляемости почв, антропогенной нагрузки.

2. Распространение, морфологические, молекулярно-генетические, кинетические характеристики и экологические стратегии штаммов рода Trichoderma зависят от типа экологических ниш и почв.

3. Смена популяций штаммов Trichoderma с различной стратегией жизни зависит от стадий сукцессии экологической ниши.

4. Микробиологическая активность, биотический потенциал фитопатогенных грибов в агроценозах изменяются в широком диапазоне в зависимости от типа почвы, биологической активности, окультуренности, внесения удобрений, мелиорантов и фитосанитарного состояния культур в севообороте.

5. Минеральные, органические удобрения и известкование почвы оказывают разнонаправленное действие на биологическую активность и супрессивность агроценозов.

6. Отдельные изоляты рода Trichoderma могут использоваться для восстановления плодородия почв в виде биокомпостов на основе осадков сточных вод крупного промышленного города, отходов пищевых предприятий и сельскохозяйственных производств, а также для получения биопестицидов, биогербицидов для защиты растений от заболеваний, с целью восстановления супрессивности и регуляции биологической активности почв.

7. Стабильность культурально - морфологических признаков Trichoderma является критерием отбора антагонистов.

Практическая значимость работы. В области биотехнологии и защиты растений данное исследование дает исходный материал для инвентаризации ресурсов микромицетного населения по данным одного рода Trichoderma, теоретического обоснования методов направленного поиска и выделения промышленно важных микроорганизмов. Например, из погребенных почв выделены виды, перспективные для получения биофунгицидов, биогербицидов и продуцентов ксиланаз. Установлены механизмы регуляции численности интродуцированных изолятов Trichoderma в микрокосмах, защищенных грунтах, в полевых условиях и прикорневой зоне растений. Показана принципиальная возможность управления численностью микробных популяций, моделирования отдельных стадий сукцессии. Полученные при этом результаты могут способствовать решению вопросов, связанных с организацией контроля и применения биофунгицидов и биоудобрений. Предложен комплекс методов для проведения микробиологического мониторинга, адекватно отражающего состояние биоты и позволяющего прогнозировать возможные эпифитотии. Предложены способы получения биокомпостов на основе осадков сточных вод, отходов пищевых и сельскохозяйственных производств, с использованием штаммов Trichoderma с-высокой гидролазной, фунгицидной и гербицидной активностями с целью внедрения препаратов в практику лесного и сельского хозяйств Республики Татарстан для восстановления плодородия и супрессивности почв. Разработана технология получения биопестицида на основе отходов пищевых предприятий, которая была внедрена в практику производства биопрепаратов на базе биозавода на территории совхоза «Казанский тепличный». Показана возможность использования гидролазного комплекса Trichoderma для переработки отходов спиртовой промышленности в РТ. Разработаны методики снижения антипитательного действия пентозанов при помощи ксиланаз Trichoderma, что позволило правильно подбирать дозировки препаратов ксиланаз в зерновые рационы, содержащие пентозаны. Результаты исследований используются для подготовки лекций на биолого - почвенном факультете КГУ по курсам «Биология почв», «Сельскохозяйственная микробиология», «Экология микроорганизмов», «Микология», «Почвенная микробиология». Монография «Микробная биотехнология» Изд-во Казань УНИПРЕСС 2006г. рекомендована для обучения студентов и аспирантов биолого - почвенного факультета КГУ.

Апробация работы. Материалы работы докладывались и обсуждались на Всесоюзн. Конф. «Микроорганизмы стимуляторы и ингибиторы роста растений и животных». - Ташкент. - 1989, Всесоюзн. Совещ.: Нуклеазы микроорганизмов и их практическое применение // Рига. - 1989, Всесоюзн. Конф.: Методы получения, анализа и применения ферментов. - Рига. -1990. -, 5 Междунар. Симп. Молодых Ученых. - Болгария, Варна. - 1990., Научн. Конфер. // Днепропетровск. - 1991. , Всесоюз. Симпозиуме: Микробиология охраны биосферы в регионах Урала и Сев. Прикаспия. - Оренбург. - 1991, Всесоюзной Конфер. «Экологические проблемы фармакологии и токсикологии». - Москва. - 1991, Раб. Совещ.: Регуляторы роста и развития растений. - Москва. -1991,.5-ой Всероссийск. Конфер.: Новые направления в биотехнологии. - Пущино. - 1990, Всесоюз. Конфер.: Ферменты микроорганизмов. - Казань. - 1991, Всесоюзн. Конфер.: Микроорганизмы в сельском хозяйстве. - Пущино. - 1992., Научн. Конфер.: Эволюция почв и почвенного покрова в связи с изменением природной среды // Пущино. -1992, 6-ой Всероссийской Конфер.: Новые направления биотехнологии. -Пущино. - 1994, Конф.: Физиология и биохимия мицелиальных грибов в связи с проблемами биотехнологии. - М. - 1994., Конфер.: Генетика -народному хозяйству. - Москва. - 1994, Всесоюзная конфер.: Интродукция микроорганизмов в окружающую среду. - М. - 1994, Forum for applied biotechnology. - Brugge. - 1995, Advanced Biotechnologies and Agriculture. -Ferrary-Itali. - 1995, 7th international symposium. - Santos-Brazil. - 1995, III Международн. Конфер.: Регуляторы роста и развития растений. - М. - 1995, Intern. Co-Conf. On ICEP95-ICONE95. - St.Peterburg, Russia. - 1995, Материалы 3-й международной конференции по химии нефти. - Томск. -1997, 3-й Республ. Научн. Конфер.: Актуальные экологические проблемы районов Татарстана. - Казань. - 1997, 3-й Научно-практич. Конфер.: Достижения и перспективы развития селекции семеноводства сельскохозяйственных культур. - Пенза. - 1999, Всероссийской Научной Конфер.: Экологические проблемы и пути их решения в зоне Среднего Поволжья. - Саранск. -1999, 9-th International Congress of Mycology. - Sydney. - 1999, Yl-th International Simposium: In suti and onside bioremedition. - San-Diego, California. - 1999, Междунар. Научн. Конфер. Изучение и охрана биологического разнообразия ландшафтов русской равнины: - Пенза. - 1999, X-th International Soil Conservation Organisation Conferens. - 1999, Научной конфер.: - Новочеркасск. - 2000, Всероссийской научно-практич. Конфер.: Актуальные вопросы мониторинга экосистем антропогенно-нарушенных территорий. - Ульяновск. - 2000, Всероссийской конференции «сельскохозяйственная микробиология в 19-21 веках» 14-19 июня 2001 г, 1ом Съезде микологов России «Современная микология в России» М., 2002, Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана. 7-ая международная конференция Санкт- Петербург 15-18 сент 2003, «8-ой, 9-ой Пущинской школах-конференциях молодых ученых. Биология - наука XXI века. 17-21 мая 2004, 2005,2006». - Пущино, 7-ой международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана»,Санкт-Петербург - Репино, 15-18 сентября 2003г.,Научно-практическая конференции * «Биотехнологии - на поля Татарстана». ОАО "Казанская ярмарка", Казань-2004, Международной научной конференции авг. 25 - сент. 5, 2003, 13-ая международная конференция «Ферменты микроорганизмов: структура, функция, применение». - Казань: КГУ, 2005, Международной научно- практической конференции «Перспективы и проблемы развития битехнологии в рамках единого экологического пространства стран содружества» 25-28мая, 2005, Минск-Нарочь, Республика Белорусь, Научной конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии», Казань, 17-18 июня 2004, Втором съезде Общества биотехнологов: Москва, 13-15 октября 2004, Межд. научно-практ. конф. по развитию сотрудничества между Республикой Татарстан и Германией в рамках Президентской программы "Дни Германии в Татарстане и перспективы развития экологического сельского хозяйства и природопользования в Республике Татарстан", 5-6 ноября 2004, Международном симпозиуме «Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклеидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний» 28 - 29 ноября, 2005, XX Congreso National Microbiologia Caceres, Espana. 19-22 septiembre 2005 Ponencias у Comunicaciones "Universidad de Extremadura" Sociedad Espanola de Microbiologia, Symposium of Biology Students in Europe" Finland 2005 University of Helsinki Department of Biology July 29th to August 7th 2005, Межд. Конф «Грибы и водоросли в биогеоценозах- Москва МГУ., 31янв. - 3 февраля 2006, 9th International Workshop on Trichoderma and Gliocladium. Vienna, Austria, 5-8 April 2006.

Личный вклад автора. Основная работа по получению экспериментального материала, обобщению результатов и формулированию выводов выполнена лично автором. В выделении отдельных изолятов из тепличного грунта совхоза «Майский», фитоэкспертизе семян зерновых, испытаниях в тепличных грунтах принимали участие доцент кафедры микробиологии Захарова Н.Г. и старший инженер кафедры микробиологии Мочалова Н.К. В организации полевых исследований на базе ТатНИИСХ и ГУ «Татарский НИИ агрохимии и почвоведения РАСХН», принимали участие д.с.х. наук Шакиров Р.С., д.с.х.н. Яппаров А.Х. , зав. лаб. к.с.х.н. Ломако Е.И. Молекулярно-генетические исследования проводились при активной помощи доц. кафедры биохимии Аскаровой А.Н. и сотрудника Института химической инженерии в Вене д.б.н. Дружининой И.А., хроматографические исследования по азотфиксации и респираторной активности почв проводилось с помощью вед.н.с Гарусова А.В., консультации по методам анализа видов Trichoderma и гетерогенности популяций получены на кафедре микологии и альгологии МГУ у зав.каф. д.б.н. Дьякова Ю.Т., д.б.н. Лихачева А.В., к.б.н. Александровой А.В., микрофотосъемки конидий были сделаны с помощью д.б.н. Камзолкиной О.В., консультации по методам микологического анализа антропогенных ландшафтов были получены у д.б.н. проф. Марфениной О.Е., участие микроорганизмов в силосовании кормов исследовалось при участии к.б.н. Вершининой В.И., полевые испытания биоудобрений на основе компостов на основе отходов очистных сооружений г. Казани и Trichoderma для применения под сеянцы сосны проводили на базе лесопитомника Матюшинский при участии д.с.х.н. проф. Ведерникова Н.М., д.б.н. проф. Селивановской С.Ю., пробы из зон контакта площадей питания Pinus sylvectris L. Раифского заповедника получены от нач. отдела Росприроднадзора России к.б.н. Морозкина А.И., к.б.н. Каримуллиной С.Н., почвенные образцы из древних поселений получены с помощью доц. каф. почвоведения и агрохимии КГУ Мельникова Л.В., образцы черепов из древних захоронений и описания к ним получены с помощью сотрудников ин-та истории им. Марджани АНРТ Газимзянова И.Р., Чижевского А.А., к.б.н., конструирование праймеров и программные модели для морфологической и молекулярно - генетической идентификации Trichoderma сделаны при участии с.н.с. каф. биохимии к.б.н. Акберовой Н.И. и аспиранта каф. генетики Тарасова Д.С.

Публикации. По теме диссертации в отечественной и зарубежной печати опубликовано 90 научных работ, в том числе 1 коллективная и 2 авторские монографии, 68 научных статей, 15 учебных пособий и методических руководств. Получено 4 патента.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 436 стр. компьютерного текста, состоит из введения, 3 глав, включающих 8разделов, обсуждения, выводов, списка цитируемой литературы, включающей 159 наименований (из них 112 на иностранных языках), и приложения.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Алимова, Фарида Кашифовна

выводы

1. Грибы рода Trichoderma являются типичными представителями почв на территории РТ. Выявлено 11 аборигенных видов, в том числе ранее неописанных. Природными резервуарами сохранения численности и видового разнообразия видов рода Trichoderma являются погребенные почвы древних поселений, могильники и почвы Раифского заповедника, где частота встречаемости составляет более 60%, а видовое разнообразие более 20 видов. Современные антропогенные ландшафты характеризуются резким снижением частоты встречаемости (0-7%) и видового разнообразия (менее 45 видов).

2. Высокий уровень полиморфизма и генетического разнообразия природных популяций и клонов Trichoderma поддерживается действием комплекса внешних факторов. Тяжелые металлы вызывают генные мутации у грибов рода Trichoderma. Природные популяции Trichoderma характеризуются высокой гетерогенностью. В состав аборигенных изолятов Trichoderma, выделенных на территории республики Татарстан, входят гетерогенные и моноспоровые клоны, представленные двумя культурально -морфологическими типами (II, IV).

3. Видовое разнообразие микромицетов снижается в ряду от эталонных почв (могильники, древние поселения, Раифский заповедник) к современным антропогенным ландшафтам, от поверхности корней к почве. Максимальным разнообразием характеризуются комплексы эталонных почв.

4. С помощью молекулярно-генетических, морфологических, кинетических и физиологических критериев в популяционной структуре местных изолятов выявлены культурально-морфологические клоны, отличающиеся типом жизненных стратегий. Положение выделенных изолятов в системе стратегии жизни характеризуется тенденцией к расположению в области гК- континуума эталонных почв, а из современных горизонтов, подверженных антропогенному воздействию - на противоположном r-полюсе с распространением в сторону rL-континуума.

5. Качественная популяционная структура видов Trichoderma представляет собой мозаику клонов с различным типом совместимости, скорости роста, интенсивности спороношения, отношения к субстрату и конкурентоспособности.

6. Тип взаимоотношения с растением изолятов Trichoderma -антагонистов к фитопатогенным грибам - определяется типом организма-эдификатора, инфицированностью эндогенными возбудителями заболеваний и физико-химическими характеристиками почв.

7. Преобладающим типом взаимоотношения местных изолятов Trichoderma является отрицательное воздействие на растения, связанное с активацией эндогенных фитопатогенных грибов при интродукции микромицетов-антагонистов. Роль природных изолятов Trichoderma заключается в сукцессионных изменениях структуры растительного сообщества. Определены экологические группы изолятов Trichoderma -сапротрофов, эккрисотрофов и биотрофов, определяемые растениемэдификатором. В почве преобладают LK-стратеги, а в ризосфере растений отмечены сукцессионные изменения в составе гетерогенной популяции в зависимости от стадии вегетации от г к гК- и L-.

8. Тип экологической ниши определяет морфометрические и кинетические параметры изолятов Trichoderma. Обнаружена взаимосвязь между уровнем азотфиксирующей активности бактерий, интенсивностью эмиссии СО2 в почве и интродуцированным видом Trichoderma. Наибольшее достоверное воздействие на азотфиксирующие бактерии показано для видов Т. atroviride и Т. citrinoviride.

9. Разработана концепция использования природных изолятов, 1 основанная на экологических стратегиях и консортивном подходе.

Грибы рода Trichoderma являются индикаторами супрессивности почв и могут быть использованы для диагностики уровня инфекционного фона агроценозов. Использование в практике сельского хозяйства при интродукции в почву должно быть основано на получении биоудобрения с использованием отходов бытового, промышленного и сельскохозяйственного производства с LK-стратегиями жизни изолятов рода Trichoderma в ассоциации с диазотрофами. Дана характеристика флуктуаций интродуцируемых популяций Trichoderma в различных типах почв. с

10. Разработаны молекулярно-генетические маркеры для контроля жизнеспособности интродуцированных изолятов Trichoderma. С целью регуляции жизнедеятельности популяций Trichoderma и защиты растений от фитопатогенных микроорганизмов разработана технология компостирования «под открытым небом» с использованием no-till технологий и применения холодостойких изолятов. С помощью совокупности избирательных характеристик определена безопасность интродукции микромицетов-антагонистов рода Trichoderma.

11. Интродукция Trichoderma на фоне компостов на основе осадков сточных вод с высоким содержанием тяжелых металлов, животноводческих комплексов, растительных остатков способствует снижению инфекционного фона отпада всходов Pinus sylvestris в антропогенных ландшафтах и повышению всхожести семян.

12. Максимальным гидролитическим комплексом обладают изоляты Trichoderma, выделенные из эталонных почв, что позволило использовать их для повышения гидролизуемости фуражных культур.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время в РФ выделяют 500 климатических зон, требующих специальных подходов для восстановления плодородия почв. Однако существует практика разработки рекомендаций только для 3 зон: дерново-подзолистых, черноземных и каштановых почв.

Оценка биоразнообразия рода Trichoderma проводилась в 4 агроклиматических зонах: прохладном, умеренно-прохладном, умеренно-теплом и теплом, в 11 районах в 4 типах почв и тепличном грунте РТ. Нами было выделено свыше 700 изолятов Trichoderma из образцов почв и подстилок археологических раскопок, государственного Раифского ' заповедника, почв и агроценозов, антропогенных ландшафтов и затопляемых почв. В результате исследований была отмечена высокая частота встречаемости (КОЕ/г почвы) изолятов Trichoderma в эталонных почвах и защищенных грунтах. Нами было впервые показано, что антропогенные ландшафты характеризовались снижением популяционного уровня более, чем в 100 раз, снижением частоты встречаемости и видового разнообразия Trichoderma. Из комплекса исследованных антропогенных ландшафтов исключение составляли защищенные грунты в теплицах, что связано с ежегодной интродукцией популяций Trichoderma в составе биофунгицидов, с изготавливаемых на основе штаммов - антагонистов фитопатогенов.

При исследовании структуры микромицетного сообщества почв выявлено в 4 климатических зонах на территории Республики Татарстан 700 изолятов Trichoderma, среди которых идентифицировано более 11 видов с помощью морфологических и молекулярно-генетических методов. Для отдельных изолятов не обнаружено гомологичных сиквенсов, которые бы позволили их отнести хотя бы к одному из известных видов. Идентификация проводилась с помощью альфа - ,бета - и с помощью молекулярно-генетических подходов. Наиболее распространенным и часто встречающимся ( оказался вид Т. koningii (161 изолят). На втором месте по распространенности стоит T.hamatum (100 изолятов), а на третьем -T.longibrachiatum (92 изолята). Далее следуют Т. harzianum (87 изолятов), Т. asperellum (80 изолятов) и Т. citrinoviride (69 изолятов), Т. atroviride (22 изолята), T.viride (12 изолятов) и T.oblongisporum (10 изолятов). Последний вид встречается немного реже, но все-таки его также можно считать обычным видом. Редко встречались виды Т. saturnisporum (8 изолятов) и Т. spirale (2 изолята. Виды T.hamatum, T.asperellum, Т. harzianum и Т. citrinoviride имеют широкий диапазон распространения. Т. longibrachiatum и Т. atroviride чаще выделялись в умеренно-теплой и теплой зонах. Можно проследить некоторые закономерности распределения видов рода Trichoderma в зонах лесопосадок разных климатических областей на территории РТ. Виды группы Т. koningii чаще встречаются в прохладной климатической зоне, а в более южных областях количество пропагул (КОЕ/1 г почвы) этого вида сокращаются. Распространение видов Trichoderma зависело от типа почвы.

Все выделенные виды по типу колоний относятся к 2 и 4 типу из 4 описанных. Качественная популяционная структура видов Trichoderma представляет собой мозаику клонов с различным типом совместимости, скорости роста, интенсивности спороношения, отношения к субстрату и конкурентоспособности. Изучение гетерогенности популяций Trichoderma позволило предложить модель выщепления клонов внутри каждого вида. При исследовании взаимодействия между гетероспоровыми популяциями и моноспоровыми клонами нами были обнаружены различные реакции вегетативной совместимости: конкурентоспособность и ключевые кинетические и морфологические параметры. Интенсивность конидиогенеза выделенных клонов достоверно отличалась от свойств родительского изолята( во всех типах почв. Положение выделенных изолятов в системе стратегии жизни характеризовалось тенденцией к расположению в области гК-континуума для эталонных почв, а для современных горизонтов, подверженных антропогенному воздействию - на противоположном г-полюсе с распространением в сторону rL-континуума, что подтверждает явление когерентной эволюции, протекающей в стабильных экосистемах (палеопочвы и фоновые почвы), и не когерентной эволюции, протекающей в неустойчивых, нарушенных агроценозах. В результате не когерентной эволюции происходит вымирание доминантов (KL стратеги) за счет возрастании численности r-стратегов. о

В настоящее время в сельскохозяйственной биотехнологии биопрепараты на основе Trichoderma разрешены и используются только в тепличных грунтах с целью биозащиты и для улучшения питательных свойств кормов. Максимальным гидролитическим комплексом обладали изоляты Trichoderma, выделенные нами из эталонных почв, что позволило снизить вязкость ржаных экстрактов под воздействием ксиланаз грибов.

В нашу задачу входило расширение спектра использования этого вида для улучшения физико-химических свойств почвы, повышения плодородия и < супрессивности почв и защиты растений за счет использования биопрепаратов на основе Trichoderma. Скрининг видов по антагонистической активности, выживаемости в полевых условия в различных типах почв на фоне антропогенного воздействия позволил выделить виды и изоляты, способные регулировать численность фитопатогенных микроорганизмов, эндогенных для РТ. Выделенные изоляты Trichoderma из погребенных почв обладали более высокой антагонистической активностью по сравнению с изолятами, выделенными из современных почв. Впервые нами разработан способ регуляции численности и активности психротрофного вида Fusariumi с помощью нового изолята Trichoderma, функционирующего в общей с фитопатогеном экологической нише в условиях минимальной обработки почв («Ноу-тилл технология»). Недостатком ноу-тилл технологии является возрастание численности сорняков. Нами выделены новые штаммы Trichoderma, обладающие гербицидными свойствами против ширицы и подмаренника. Использование таких штаммов, в виде пропагул, адсорбированных на соломе, оставленной на стерне, позволит восстанавливать супрессивность почвй понижать всхожесть семян сорняков. Разработана модель регуляции уровня антагонистической активности изолятов Trichoderma на основе культивирования гриба на отходах пищевой промышленности.

Тип взаимоотношения с растением изолятов Trichoderma -антагонистов к фитопатогенным грибам - определяется типом организма -эдификатора, инфицированностью эндогенными возбудителями заболеваний и физико-химическими характеристиками почв. Для изучения взаимоотношений с зерновыми, зернобобовыми и овощными культурами были использованы местные районированные сорта, инфицированные эндогенными возбудителями заболеваний. Преобладающим типом взаимоотношения местных изолятов Trichoderma является отрицательное воздействие на растения, связанное с активацией эндогенных фитопатогенных грибов при интродукции микромицетов-антагонистов. Тип взаимоотношений с растением определяется стадией жизненного цикла, концентрацией фитотоксичных метаболитов, индукторами синтеза метаболитов и условиями взаимоотношений, в зависимости от сорбента, внешним антропогенным фактором (минеральное удобрение или известкование) и гетерогенностью популяции.

Разработана концепция регуляции типов взаимоотношений Trichoderma с растениями с целью (а) стимуляции сельскохозяйственный культур (б) снижения почвоутомления и, (в) подавления развития сорняков в почвах разного типа. Роль выделенных природных изолятов Trichoderma заключается в сукцессионных изменениях структуры растительного сообщества.

Для разработки биопрепарата необходимо соблюдение условия стабильности культурально-морфологических признаков Trichoderma. Установлено, что тип экологической ниши определяет морфометрические и кинетические параметры изолятов Trichoderma. Сравнительный анализ ( размеров конидий изолятов, выделенных из эталонных почв, антропогенных ландшафтов и современных горизонтов почв показал, что тенденция уменьшения размеров конидий изолятов является адаптационным механизмом Trichoderma. Предлагается методология регуляции популяционной кинетики интродуцированных видов Trichoderma в различных типах экологических ниш: тепличных грунтах, выщелоченном черноземе и серой истощенной лесной почве.

Использование биоудобрений на основе разных видов и изолятов Trichoderma в различных типах почв приводит к изменению биологической активности почвы. Уровень азотфиксации в почве зависел от вида и типа клонального расщепления Trichoderma. Аналогическая зависимость показана для респираторной активности почв.

Мониторинг общей биологической активности почвы на фоне биоудобрения на основе Trichoderma показал, что биологическая активность зависела от стадии сукцессии, типа антропогенного воздействия и типа почвы. Последействие биоудобрения зависело от типа севооборота и типа компостов на основе ООС города Казани, отходов животноводческих комплексов. Созданный нами комплексный препарат, представляющий собой микромицетное-бактериальное сообщество из изолята Trichoderma и бактерий рода Rhizobium, снижал инфекционный фон почвы и снижал поражённость семенными инфекциями. Препарат индуцировал резистентность растений к листово-стебельным инфекциям.

Разработан молекулярно-генетический протокол для регистрации и контроля интродуцированного вида Trichoderma в составе биокомпоста. Использование данного протокола позволило доказать стабильность интродуцированного изолята Trichoderma в различных условиях экологической ниши под давлением различных доз тяжелых металлов. Автор выражает признательность за участие в выполнении ряда разделов работы аспирантам КГУ Тухбатовой Р.И., Халлилуллиной А.К., Тазетдиновой Д.И., Тарасову Д.В., доцентам кафедры биохимии КГУ Аскаровой А.Н. и Фаттаховой А.Н., заведующей лабораторией Института микробиологии РАН им. С.Н.Виноградского, заслуженному деятелю науки РФ Феофиловой Е.П.; заведующему кафедрой микологии и альгологии д.б.н. Дьякову Ю.Т., д.б.н. Лихачеву А.В., к.б.н. Александровой А.В., д.б.н. Марфениной О.Е., сотруднику Института химической инженерии в Вене д.б.н. Дружининой И.А. и д.с.-х. н. Ведерникову Н.М. и сотруднику лаборатории ботаники и микологии Научного Центра сельскохозяйственный исследований, Мэриленд (США) доктору Самуэльсу Г. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР КГУ (№ гос. регистрации 01.2.00 1.04.98 «Биосинтез, биогенез, классификации, физиологических функций новых микробных ферментов и возможные области их практического применения и при поддержке АН РТ в рамках грантов: «Возможности получения экологически чистого корма для животноводства Республики Татарстан на фоне техногенного загрязнения агроландшафтов» ( 2000-2001 гг., № 04-4, 5-83/2000-2002(ф)); «Разработка ( микробиологических методов снижения содержания токсинов в кормовых культурах, культивируемых в РТ» (2002 г., № 04-4, 4-195/2003(ф)); «Экологически безопасные препараты - регуляторы роста микроорганизмов и растений» (№ Е02-6, 0-140); Издание книги «Trichoderma (Fungi, Ascomycetes, Hypocreales): таксономия и распространение» (2004 г., № 03-3, 7-250/2004(ф)); «Микробиологический мониторинг заповедных и антропогенных ландшафтов РТ и определение эффективной, экологически безопасной нормы биопестицида для восстановления бедных, нарушенных почв» , (2005 г., №09-9.3-231 / 2004 (ф); и в рамках Программы развитие приоритетных направлений науки РТ на 2001-2005 годы № 8470 - 22-19 «Система почвенно-экологического мониторинга лесных питомников РТ» № 187. Выделены и задепонированы во Всероссийской коллекции микроорганизмов РАН штаммы, обладающие рост стимулирующей активностью по отношению к растениям и антагонистической активностью к возбудителям заболеваний огурца: Trichoderma harzianum F-437, Trichoderma harzianum F-438, Trichoderma harzianum F-432.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Алимова, Фарида Кашифовна, 2006 год

1. Александрова А.В. Грибы рода Trichoderma Автореф. дис.канд.биол.наук. - М.: МГУ, 2000. - 20с.

2. Александрова А.В. Первая находка Trichoderma saturnisporum в России / А.В. Александрова, JI.JI. Великанов // Микол. и фитопатол. -1999. Т. 33, вып. 5.-С. 304-306.

3. Александрова А.А. Исторический обзор и современная система рода Trichoderma!к А. Александрова, Л.Л.Великанов И.И. Сидоров // ,, Микология и фитопатология. — 2004. — Том 38, вып.1.— С. 3-23.

4. Алимова Ф.К. Промышленное применение грибов рода Trichoderma. -Казань: Унипресс:ДАС, 2006. С.268.

5. Борисов А.В. Развитие почв пустынно-степной зоны Волго-Донского междуречья за последние 5000 лет. Автореф. Дисс. . канд.биол.наук. -М., 2002.-23 с.

6. Великанов Л.Л. Роль грибов в формировании мико- и микробиоты почвестественных и нарушенных биоценозов и агроценозов. Дисс. д.б.н.-М., 1997.-547 с.

7. Галстян А.Ш. Ферментативная активность почв Армении. Ереван: Айастан, 1974. - 275 с.

8. Глушко Е.В. Историко-географические исследования ландшафтов Западного Ирака по космическим снимкам // Известия ВГО. 1990. - Т. 122.-Вып.З.-С. 255-262.

9. Ю.Горленко М.В. Все о грибах / Л.В. Гарибова, И.М. Сидорова, Г.Л. Сизова, ГД. Успенская М.: Лесная промышленность, 1985. - С.280.

10. П.Гринько Н.Н. Биотехнологические аспекты культивирования штамма Thrichoderma harzianum. Rifai ВКМ Б-2477Д // Вестник Российской Академии сельскохозяйственных наук. 2004. - №1. - С. 57-61.

11. Гринько Н.Н. Влияние фунгицидов на филлоплану огурца / Н.Н. Гринько, Г.Д. Успенская // Защита растений. -1987. №8. - С. 37.

12. Гришкан И.Б. Почвенные микромицеты ольховников в бассейнео верховий Колымы // Микология и фитопатология, 1995. -Т.29. Вып.2. -С.1-6.

13. Громовых Т.Н. Фитопатогенные микромицеты сеянцев хвойных в Средней Сибири: видовой состав, экология, биологический контроль // Автореф. диссертации. доктора биологических наук. Москва, 2002.

14. Демкин В.А. Палеопочвоведение и археология: интеграция в изучении истории природы и общества. Пущино: НТИ ПНЦ РАН. -1997. 213 с.

15. Демкина ТС. Микробные сообщества палеопочв археологических памятников пустынно-степной зоны / ТС. Демкина, А.В. Борисов, В.А. Демкин // Почвоведение. 2000. - № 9. - С. 1117-1126.

16. Демкина ТС. Палеопочвы и природная среда Северных Ергеней в эпохи энеодита и бронзы (IV-II тыс. до н.э.) / ТС. Демкина, А.В.Борисов, В .А. Демкин // Почвоведение. 2003. - № 6. - С. 655-669

17. Добровольская Т.Г. Бактериальное разнообразие почв: оценка методов и возможностей, перспектив / Т.Г. Добровольская, JI.B. Лысак, Г.М. Зенова, Д.Г. Звягинцев // Микробиология. 2001. - Т. 40. - №2. - С. 149-167.

18. Добровольский Г.В. Почва, микробы и азот в биосфере / Г.В. Добровольский, М.М. Умаров // Природа. 2004. - № 6. - С. 15-22.

19. Дунаевский Я.Е. Секретируемые ферменты мицелиальных грибов: регуляция секреции и очистка внеклеточной протеиназы Trichoderma harzianum / Я.Е. Дунаевский, Т.Н. Грубань, Г.А. Белякова, М.А. Белозерский // Биохимия. -2000. Т. 65. - Вып. 6. - С. 848-853.

20. Дьяков Ю.Т. Вегетативная несовместимость у фитопатогенных грибов / Ю.Т. Дьяков, А.В. Долгова. М.: МГУ, 1995. - С.5 - 14.

21. Звягинцев Д.Г. (ред.) Методы почвенной микробиологии и биохимии. М.: Из-во МГУ, 1980.

22. Каверзнева Е.Д. Стандартный метод определения протеолитической активности для комплексных препаратов протеиназ. Прикладная биохимия и микробиология. -1971. Т. 7. - №2. - С.225-228.

23. Квасенков О.И. Способ приготовления углеводсодержащего 0 желирующего концентрата для кондитерских изделий / О.И. Квасенков, Р.И. Шаззо. 2001. Патент РФ (19) RU(ll) 2 254 026 (13) С2 (51) МПК 7

24. А 23 L 1/0524,1/06, А 21 D 2/36, С 12 Р 1/02 СПб.: ГИОРД. С. 204-205.

25. Коломбет Л.Б. Биологическая эффективность Trichoderma asperellum GJS 03-35 и дрожжей Criptococcus nadoensis ОН 182.9 // Микология и фитопатология. 2005. - Т. 39. - Вып.5. - С. 80-88.

26. Коломбет Л.В. Микофунгицид препарат на основе Т. viride для борьбы с болезнями растений / Л.В. Коломбет, С.К. Жиглецова, В.В. Дербышев, Д.В. Ежов, Н.И. Косарева, Е.В. Быстрова // Прикладная биохимия ио микробиология. - 2001. - Т.37. - №1. - С. 110-114.

27. Коломникова В.И. Влияние триходермина на численность возбудителей корневых гнилей в почве / В.И. Коломникова, М.М.Трушко, Н.И. Рыжова // Защита раст. -1995. №3. - С.19.

28. Курини С. Грибы рода Trichoderma, их биотические связи и проблемы интродукции в почвы. Автореф. дис. .канд. биол. наук. -М., 1991. 26 с.

29. Курицина Д.С. Новые виды грибов из рода Sporotrichum Fr. и Trichoderma Fr., изолированных с произведений изобразительногоискусства / Д.С. Курицина, Т.П. Сизова // Микология и фитопатология. -1967. Т.1. - № 4. - С.342-344.

30. Лугаускас А.Ю. Почвенные грибы в микробных сообществах в разных экологических условиях // Микробные сообщества и их функционирование в почве. Киев: Наукова думка, 1981. - С.187-191.

31. Маркович Н.А. Литические ферменты Trichoderma и их роль при защите растений от грибных болезней (обзор) / Н.А. Маркович, Г.Л. Кононова // Прикладная биохимия и микробиология. 2003. - Т. 39. - № 4. - С. 389400.

32. Марфенина О.Е. Антропогенная экология почвенных грибов. М.: Медицина для всех, 2005. - 196 с.

33. Марьин Г.С. Защита растений и сохранение экологического равновесия в экосистемах / Г.С. Марьин, Г.В. Глазырина// АПК: пробл., поиски, решения. Йошкар-Ола: Map. гос. ун-т, 1996. - С.79-81. о

34. Методы почвенной микробиологии и биохимии: Учебное пособие / Под ред.Д.Г.Звягинцева. М.: Изд-во МГУ, 1991. - 312 с.

35. Мирчинк Т.Г. Почвенная микология. М.: Изд-во МГУ, 1988. - 220 с.

36. Мирчинк Т.Г. Характеристика комплексов грибов некоторых почвенных типов Советского Союза / Т.Г. Мирчинк, Л.Н.Степанова, О.Е.Марфенина, С.М.Озерская//Вест. МГУ. Почвоведение.- 1981.-№1 -С.19-41.

37. Мишустин Е.Н. Микрофлора почв Севера СССР / Е.Н. Мишустин, Мирзуева В.А. // В кн.: Микрофлора почв северной части СССР. М., 0 1966.-С.55-65.

38. Мишустин Е.Н. Эколого-географические закономерности в распространении почвенных микроскопических грибов / Е.Н. Мишустин, Пушкинская О.П. // Изв. АН СССР, сер.биол. -1960. № 5 - С.87-92.

39. Новикова И.И. Влияние новых биопрепаратов, созданных на основе штаммов микробов-антагонистов, на комплекс возбудителей корневых гнилей огурца / И.И. Новикова, А.И.Литвиненко, Г.В. Калько // Микол. и фитопатол. -1995. № 5-6. - С. 46-53.

40. Панников Н.С. Кинетика роста микроорганизмов: общие закономерности^, и экологические приложения. М.: Наука, 1991. - 311 с.

41. Перельман В.И. Краткий справочник химика М.: Изд-во химич. литер., 1963.-620 с.

42. Пивкин М.В. Микобиота тиса остроконечного (Taxus cuspidata Siebold et Zucc.) в Приморском крае / М.В. Пивкин, Л.Н. Егорова// Микология и фитопатология, 1998. Т.32. Вып.2. - С.34-39.

43. Сазонов С.Н. Оценка микробиологического сотояния дерново-подзолистой почвы, выведенной из сельскохозяйственного использования

44. С.Н. Сазонов, Н.А. Манучарова, М.В. Горленко, А.В. Терехов, М.М. Умаров // Почвоведение. 2004. - № 3. - С. 373-377.

45. Салина О.А. Виды грибов рода Trichoderma в почвах Литовской ССР // Микология и фитопатология, 1981. Т.15. -Вып.2. - С. 101-105.

46. Салина О.А. Грибы рода Trichoderma Pers.:Fr. в окультуренных почвах Литовской ССР. Дис. .канд. биол. наук, М., 1988. -С.269.

47. Сейкетов Г. Ш. Грибы рода Trichoderma и их использование в практике. Алма-Ата: Наука, 1982. - 248 с.

48. Селивановская СЛО. Микробная биомасса и и биологическая активность серых лесных почв при внесении осадков городских сточных вод / С.Ю. Селивановская, В.З.Латыпова, Ф.К. Алимова // Почвоведение. 2001.-№2.-С. 227-233.

49. Сидорова И.И. Биологические методы борьбы с фитопатогенными грибами // Итоги науки и техники. Сер. Защита раст. М.: ВИНИТИ, о 1980.-Т. 2.-С. 116-157.

50. Сизова Т.П. Некоторые закономерности распространения почвенных грибов // Микология и фитопатология, 1977. Т.Н. - №5. - С.377-381.

51. Скворцов Е.В. Биосинтез ксиланаз аборигенными изолятами Trichoderma / Е.В. Скворцов, Ф.К. Алимова, Д.М. Абузярова // Вестник казанского технологического университета. Казань: Отечество. - №1. - 2005. - С. 251-255.

52. Сорокин Н.Д. Количественная оценка микробиологической активности почв // Почвоведение.-1993.- №8. -С.99-102.

53. Ташпулатов Ж. Грибы рода Trichoderma Pers.: Fr. и их использование при переработке отходов растениеводства // Автореферат дис. д.б.н. М.,0 1987.-С.45.

54. Титова Ю.А. Двухэтапная биоконверсия отходов с помощью Pleurotus ostreatus и Trichoderma harzianum / Ю.А. Титова, Л.Б. Хлопунова,

55. Д.В. Коршунов // Микология и фитопатология. 2002. -Т. 36. - Вып.5. - С. 64-70.

56. Филипчук О.Д. Использование супрессивности почвы в защите растений от возбудителей инфекций / О.Д. Филипчук, М.С. Соколов, Т.В. Павлова //Агрохимия. -1997. № 8.- С. 81 -92.

57. Шишлина Н.И. Потенциальный сезонно-хозяйственный цикл носителей катакомбной культуры северо-западного Прикаспия: проблема реконструкции // Труды Государственного Исторического музея. 2000. -Вып.120.-С.54-71.

58. Штерниш М.В. Грибные препараты / М.В. Штерниш, Ф.С. Джалилов, И.В. Андреева, О.Г. Томилова // Биологическая защита растений. М: Колос, 2004.-С. 195-198.

59. Яблоков В.Н. Ядовитая приправа. М.: Мысль, 1990. - 125с.

60. Agut М. Keratinophilic Fungi from Soil of Brittany, France / M. Agut, M. Bayo, J. Larrondo, M.A. Calvo // Mycopathologia. 1995. - Vol. 129. -№2.- P. 81-82.

61. Ahmad I. Interaction of Soil Microflora with the Bioherbicide Phosphinothricin / I. Ahmad, D. Malloch // Agriculture Ecosystems and Environment. -1995. Vol. 54. - № 3. - P. 165-174. о

62. Ahmed S. Molecular Cloning of Cellulase Genes from Trichoderma harzianum / S. Ahmed, N. Aslam, F. Latif, M.I. Rajoka, A. Jamil // Frontiers in Natural Product Chemistry. 2005. - Vol. 1. - № 1, January. - P. 73-75.

63. Ait-Lahsen H. An antifungal Exo-a-l,3-glucanase (AGN13.1) from the biocontrol fungus Trichoderma harzianum / H. Ait-Lahsen, A. Soler, M. Rey, J. De La Cruz, E. Monte, A. Llobell I I Appl. Environ. Microbiol. 2001. -Vol. 67.-P. 5833-5869.

64. AntaI Z. Complete DNA Sequence and analysis of a mitochondrial plasmid in the mycoparasitic strain Trichoderma harzianum T95 / Z. Antal, L.0 Manczinger, L. Kredics, F. Kevei, E. Nagy // Plasmid. 2002. - Vol. 47. - P. 148-152.

65. Anusuya D. Solubilization of Phosphorus by Trichoderma-Viride / D. Anusuya, R. Jayarajan // Current Science 1998. - Vol. 74, № 5. - P. 464466.

66. Aranguren M. Evaluation in vitro de tres aislados de Trichodema spp. Como antagonistas de patogenos post-cosecha de los frutos citricas / M. Aranguren, A. Gracia, H.Grillo // Cent. Agr: Rev. Min educ. Super. Rep. Cuba. -1994. -Vol.1. -P.42-46.

67. Arst J.H.N. pH regulation in Aspergillus and parallels with higher eukaryotic regulatory systems / J.H.N. Arst, M.A. Penalva // Trends Genet. 2003. - № 19.-P. 224-231.

68. Baker E.N. Crystals of family 11 xylanase II from Trichoderma longibrachiatum that diffract to atomic resolution / E.N. Baker, Z. Dauter I I Acta Cryst. 2004. -Vol. D60.-P. 1275-1277.

69. Benftez T. Biocontrol mechanisms of Trichoderma strains / T. Benitez, AM. Rincon, M.C. Limon, A.C. Codon // International Microbiology. 2004. - № 7. -P. 249-260.

70. Biely P. Enzymology of hemicellulose degradation / P. Biely, M. Tenkanen // Harman G.E., Kubicek C.P. (eds.). Trichoderma and Gliocladium, Vol. 2. Enzymes, biological control and commercial application. London: Taylor and Francis Ltd., 1998. P. 25-47.

71. Bissett J. Trichoderma atroviride // Can. J. Bot. -1992. №70. - P. 639-641.

72. Bissett J. Seven new taxa of Trichoderma from Asia / J.Bissett, G.Szakacs, C.A.Nolan, I.S.Druzhinina, C.M.Kullnig-Gradinger, C.P.Kubicek // Can. J. Bot. 2003.- № 81. - P. 570 -586.

73. Bissett J. A revision of the genus Trichoderma. II. Infrageneric classification. I I Can. J. Bot. 1991a - № 69. - P. 2357-2372.

74. Brownold E. The effect of Trichoderma harzianum on honey bee survival / E. Brownold, S.Flanders //http://www.nysipm.comell.edu/ publications/trich/trich.html

75. Castle A. Morphological and molecular identification of Trichoderma isolates0 on North American mushroom farms / A. Castle, D. Speranzini, N. Rghei, G. Aim, D. Rinker // Appl. Environ. Microbiol. -1998. Vol. 64. - № 1. - P. 133137.

76. Chaverri P. Hypocrea / Trichoderma (Ascomycota, Hypocreales, Hypocreaceae): Species with green ascospores / P. Chaverri, G.J. Samuels // Stud. Mycol. 2004. - V. 48. - P. 1-116.

77. Chaverri P. Hypocrea phyllostachydis and its Trichoderma anamorph, a new bambusicolous species from France / P. Chaverri, F. Candoussau, G.J. Samuels // Mycol. Progr.- 2004.- No 3. P. 29 -35.

78. Chaverri P. Hypocrea/Trichoderma (Ascomycota, Hypocreales, Hypocreaceae): Species with green ascospores / P. Chaverri, G.J. Samuels // Stud. Mycol. -2004. V. 48. - P. 1-116.

79. Chaverri P. Hypocrea/Trichoderma: species with conidiophore elongations and green conidia / P. Chaverri, L.A. Castlebury, B.E. Overton, G.J. Samuels // Mycologia. 2003. -№ 95. - P. 1100-1140.

80. Chet F. Ecology and Management Soilborne plant pathogens / F. Chet, Y.Henis.-1985.-P. 110-112.

81. Cobos A. Effect of polyhydroxylic cosolvents on the thermostability and activity of xylanase from Trichoderma reesei QM9414 / A. Cobos, P. Estrada // Enzyme and Microbial Technology. 2003. - V. 33. - P. 810-818.

82. Cotxarrera L. Use of sewage sluge compost and Trichoderma asperellum isolates to supress Fusarium wilt of tomato / L. Cotxarrera, M.I. Trillas-Gay, C. Steinberg, C. Alabouvette // Soil Biol, and Biochem. 2002. - № 34. - P. 467-476.

83. Сидорова И.И. Макросистема грибов: методология и изменения последнего десятилетия. В сб.: Новое в систематике и номенклатуре грибов / Под ред. Ю.Т.Дьякова, Ю.В. Сергеева М.: Изд-во «Национальная академия микологии. Медицина для всех», 2003. - С.3-15. о

84. Danielson R.M. Carbon and nitrogen nutrition of Trichoderma / R.M. Danielson, C.B. Daney // Soil Biol. Biochem. 1973c. - Vol. 5. -№ 5. P. 505-515.

85. Danielson R.M. The abundance of Trichoderma propagules and the distribution of species in forest soils / R.M. Danielson, C.B. Daney // Soil Biol. Biochem. -1973 a. Vol. 5. - № 5. - P. 485 - 494.

86. Danielson R.M. Effects of nutrients and activity on phialospore germination Trichoderma. / R.M. Danielson, C.B. Daney // Soil Biol. a.Biochem., 1973 d. - Vol.5.-№ 5.-P. 517-524.

87. Danielson R.M. Non nutritional factors affecting the growth of Trichoderma in culture / R.M. Danielson, C.B. Daney // Soil Biol. a.Biochem. -1973 b. Vol. 5.-№5.-P. 495-504.

88. Delgado-Jarana J. Glucose uptake in Trichoderma harzianum: role of gttl / J. Delgado-Jarana, M.A. Moreno-Mateos, T. Benitez // Euk Cell. 2003. -№2.-P. 708-717.

89. Dingley J.M. Life history studies in the genus Hypocrea Fr. // Transactions and Proceedings of the Royal Sociandy of New Zealan 1957. - № 84. -0 P. 689-693.

90. Dodd S.L. Examination of Trichoderma phylogenies derived from ribosomal DNA sequence data / S.L. Dodd, R.N. Crowhurst, A.G. Rodrigo, G.J. Samuels, R.A. Hill, A. Stewart // Mycol. Res. 2000. - Vol. 104. - P. 23-34.

91. Dodd S.L. Taxonomy and phylogenetic relationships of two species of Hypocrea with Trichoderma anamorphs / S.L. Dodd, L.Sarah, E.Lieckfeldt, P. Chaverri, B.E.Overton, G.J. Samuels // Mycol. Progr. 2002. - № 1. - P. 409428.

92. Doi N. Note on Trichoderma and its allies 1. A list of teleomorphic species with Trichoderma or its allied anamorphs hitherto known / N. Doi, Y. Doi // Bull. Natl. Sci. Mus. Tokyo, Ser. B, (Bot.). 1979. - Vol. 5, -№ 4. - P. 117123.

93. Doi N. Note on Trichoderma and its allies 4. A list of species names proposed for the genus Trichoderma / N. Doi, Y. Doi // II Bull. Natl. Sci. Mus. Tokyo, Ser. B, (Bot.). -1986. Vol. 12. - № 1. - P. 1-15.

94. Doi Y. Notes on Trichoderma and its allies 3. Comparison of three strains of Trichoderma viride aggr. and their teleomorphs / Y. Doi, N. Doi, K. Toyozawa// Bull. Natl. Sci. Mus. Tokyo, Ser. B, (Bot.). 1984. - Vol. 10.-P. 73-85.

95. Druzhinina I. Нуросгеа flavoconidia, a new species with yellow conidia from Costa Rica / I. Druzhinina, P.Chaverri, P.Fallah, C.P.Kubicek, G.J. Samuels // Stud. Mycol 2004. - № 50. - P. 401- 407.

96. Druzhinina I. A DNA-barcode for strain identification in Trichoderma 1° I. Druzhinina, A. Koptchinski, M. Komon, J. Bisset, G. Szakacs, C.P. Kubicek // J. Zhejiang Univ. SCI 2005. - V. 6B. - № 2. - P.100-112.

97. Elad Y. Biological control of grape grey mould by Trichoderma harzianum // Crop. Protec. -1994.- № 13. P.35-38.

98. Elad Y. Mechanisms involved in the biological control of Botrytis cinerea incited diseases. Eur J Plant Pathol. -1996. № 102. - P.719-732.

99. Elmholt S. Fungi in Danish soils organic and conventional farming / S. Elmholt, R. Labouriau//Agriculture, Ecosystem and Environment. 2005.- 0 Vol. 107.-P. 65-73.

100. Ezzi M.I. Biodegradation of cyanide by Trichoderma spp. and Fusarium spp. / M.I. Ezzi, J.M. Lynch // Enzyme and Microbial Technology. 2005. - Vol. 36.-P. 849-854.

101. Franco P.F. Production and characterization of hemicellulase activities from Trichoderma harzianum Strain T4. / P.F. Franco, H.M. Ferreira, E.X. Filho // Biotechnol Appl Biochem. 2004 - V. 6. - P. 32-40.

102. Gams W. Morphology and identification of Trichoderma / W. Gams, J. Bissett // Trichoderma and Gliocladium. Vol. 1. Basic Biology, Taxonomy and Genetics (C. P. Kubicek and G. E. Harman eds). London: Taylor and Francis. 1998.-P. 3-34.

103. Gams W. What exactly is Trichoderma harzianum / W. Gams, J. Bissett // Mycologia. -1998. Vol. 90. - № 5. - P. 901-913.

104. Ghisalberti E.L. Antifungal Antibiotics Produced by Trichoderma spp. / E.L. Ghisalberti, K. Sivasithamparam //Soil Biol. Biochem. 1991. - Vol. 23. - № 11.-P. 1011-1020.

105. Gomez I. Genetic diversity and vegetative compatibility among Trichoderma harzianum isolates / I. Gomez, I. Chet, A. Herreraestrela // Molecular and General Genetics. -1997. Vol. 256. - P. 127-135.

106. Harman G.E. Combination of fungul cell degrading enzyme and fungul cell membrane affecting compound / G.E. Harman, M. Lorito, A. Di Pietro, C.K. Hayes, F. Scala, C.P. Kubicek // US Patent 6,512,166, issued Jan.28,2003.

107. Harman G.E. Myths and dogmas of biocontrol. Changes in perceptions derived from research on Trichoderma harzianum T22 // Plant Dis. 2000. -Vol. 84.-P. 377-393.

108. Harman G.E. Trichoderma species-opportunistic, avirulent plant symbionts j / G.E. Harman, C.R. Howell, A. Viterbo, I. Chet, M. Lorito // Nature Reviews. -2004.-Vol. 2.-P. 43-56.

109. Heraux F.M.G. Combining Trichoderma v/raw-inoculated compost and a rye cover crop for weed control in transplanted vegetables / F.M.G. Heraux , S.G. Hallett, S.C. Weller // Biological Control. 2005. - Vol. 34. - P. 21-26.

110. Hofmann K. Oxidation of triphenylarsine to triphenylarsineoxide by Trichoderma harzianum and other fungi // K. Hofmann, E. Hammer, M. Kohler, V. Bruser I I Chemosphere. 2001. - Vol. 44. - P. 697-700.

111. Howell C.R. Induction of terpenoid synthesis in cotton roots and control of Rhizoctonia solani by seed treatment with Trichoderma virens / C.R. Howell, L.E. Hanson, R.D. Stipanovic, L.S. Puckhaber // Phytopathology. 2000. -Vol. 90.-P. 248-151.

112. Iyengar S.R. In-vessel composting of household wastes / S.R. Iyengar, P.P. Bhave // Waste Management. 2005.

113. Kindermann J. Phylogeny of the genus Trichoderma based on sequence analysis of the internal transcribed / J. Kindermann, Y.El-Ayouti, G.J. Samuels,

114. C.P. Kubicek // Fungal Genet. Biol. -1998. Vol.24. - P.298-309.

115. Knudsen G.R. Potential for biocontrol of Sclerotinia Sclerotiorum Through colonization of sclerotinia by Trichoderma harzianum / G.R. Knudsen,

116. D.I.Eschen, L.M.Danduranol // Plant. Disease. 1991. - V.75, No5. - P.446-470.

117. Konig J. Determination of xylanase, glucanase, and cellulase activity / R.Grasser, H.Pikor, K.Vogel // Anal Bioanal Chem. 2002.- 374.-P.80-87.

118. Krantzrulcker C. Adsorption of lib-Metals by 3 Common Soil Fungi-Comparison and Assessment of Importance for Metal Distribution in Natural о Soil Systems / C. Krantzrulcker, B.Allard, J.Schnurer // Soil Biol Biochem 1996. Vol. 28. - № 7. - P. 967-975.

119. Krantzrulcker C. Interactions Between a Soil Fungus, Trichoderma-Harzianum, and lib Metals Adsorption to Mycelium and Production of Complexing Metabolites / C. Krantzrulcker, B.Allard, J.Schnurer // Biometals 1993. - Vol. 6. - №4. - P. 223-230.

120. Kredics L. Trichoderma Strains with Biocontrol Potential / L. Kredics, Z. Anta, L. Manczinger, A. Szekeres, F. Kevei, E. Nagy // Food Technol. Biotechnol. 2003. -№ 1. - Vol. 41. - P. 37-42.

121. Krishna S.H. Studies on the production and application of cellulose from Trichoderma reesei QM-9414 / S.H. Krishna, K.C.S. Rao, J.S. Babu, D.S. Reddy // Bioprocess Engineering. 2000. - № 22. - P. 467-470.

122. Kubicek C.P. Trichoderma: from genes to biocontrol / C.P. Kubicek, R.L. Mach, C.K. Peterbauer, M. Lorito // J. of Plant Pathology. 2001. - Vol. 83. - № 2.-P. 11-23.

123. Kubota Terumasa, Hokkaido Green Kosan Inc. Trichoderma harzianum SK-55 fungus, fungicide containin it, and method of manufacture of the same and its use // Пат. 5422107 США, МКИ A01N 63/00, A01N 1/00 № 172273; Заявл. 23.12.93; Опубл. 06.06.95.

124. KuIInig C.C. Molecular identification of Trichoderma species from Russia, Siberia and the Himalaya / C.Kulling, G.Szakacs, C.P.Kubicek // Mycol. Res. -2000.-V. 104.-P. 1117-1125.

125. Kullnig-Gradinger G.M. Phylogeny and evolution of the genus Trichoderma a multisene approach / G.M. Kullnig-Gradinger, G.Szakacs, C.P. Kubicek //Mycol Res. 2002. - № 106. - P.757-767.

126. Lieckfeldt E. A morphological and molecular perspective of Trichoderma о viride: is it one or two species / E. Lieckfeldt, G.J.Samuels, H.I. Nirenberg, O.Petrini //. Appl Environ Microbiol. -1999, № 65. - P.2418-2428.

127. Lieckfeldt E. An evaluation of the use of ITS sequences in the taxonomy of the Hypocreales / E. Lieckfeldt, K.A. Seifert // Stud Mycol. 2000. - № 45. -P.35-44.

128. Limon M.C. Increased antifungal and chitinase specific activities of Trichoderma harzianum CECT 2413 by addition of a cellulose binding-domain

129. M.C. Limon, M.R. Chacon, R. Mejias, J. Delgado-Jarana, A.M. Rincon, A.C. 0 Codon, T. Benitez// Appl. Microbiol. Biotechnol. 2004. - № 64. - P. 675-685.

130. Lynd L.R. Microbial cellulose utilization: fundamentals and biotechnology / L.R. Lynd, P.J. Weimer, W.H. van Zyl, I.S. Pretorius // Microbiol. Mol. Biol. Rev.-2002.-Vol. 66. P. 506-577.

131. Mach R.L. Regulation of gene expression in industrial fungi: Trichoderma / R.L. Mach, S. Zeilinger I I Appl. Microbiol. Biotechnol. 2003. - Vol.60. - P. 515-522.

132. Mantyla A. Industrial mutants and recombinant strains of Trichoderma reesei

133. A. Mantyla, M. Paloheimo, P. Suominen // Harman G.E., Kubicek C.P. (eds.). ^ Trichoderma and Gliocladium, Vol. 2. Enzymes, biological control and commercial application. Taylor and Francis Ltd., London, 1998. P. 291-309.

134. MoIIa A.H. Evaluation of solid-state bioconversion of domestic wastewater sludge as a promising environmental-friendly disposal technique / A.H. Molla, A.FakhruT-Razi, Md.Z. Alam // Water Res. 2004. - Vol. 38. - P. 4143-4152.

135. Muthumeenakshi S. Intraspecific molecular variation among Trichoderma harzianum isolates colonizing mushroom compost in British Isles / S. Muthumeenakshi, P.R. Mills, A.E.Brown, D.A. Seaby // Microbiology. -1994. -№140.- P. 769-777.

136. Ordaz-Ortiz J.J. Structural variability of arabinoxylans from wheat flour. Comparison of water-extractable and xylanase-extractable arabinoxylans / J.J. Ordaz-Ortiz, L. Saulnier // Journal of Cereal Science. 2005. № 42. - P. 119-125.

137. Papavizas G.C. Trichoderma and Gliocladium: biology, ecology and potential for biocontrol. Annu Rev Phytopathol. -1985. № 23. - P.23-54. G

138. Parshikov I.A. Formation of conjugates from ciprofloxacin and norfloxacin in cultures of Trichoderma viride / I.A. Parshikov, J.D. Moody, J.P. Freeman, J.O. Lay Jr., A.J. Williams, T.M. Heinze, J.B. Sutherland // Mycologia. 2002. -Vol. 94.-P. 1-5.

139. Rehner S.A. Molecular sytematics of the Hypocreales: a teleomorph gene phylogeny and the status of their anamorphs / S.A. Rehner, GJ.Samuels // Canadia J. of Botany -1995. V.73, № l. p. 816-823.

140. Rifai M.A. A revision of the genus Trichoderma // Mycol. Pap. 1969. -Vol. 116.-P. 1-56.

141. Rossman A.Y. Genera of Bionectriaceae, Hypocreaceae and Nectriaceae (Hypocreales, Ascomycandes) / A.Y. Rossman, GJ.Samuels, C.T. Rogerson, R.Lowen // Studies in Mycolog. -1999. №42. - P. 1-248.

142. Samuels G.J. The Hypocrea schweinitzii complex and Trichoderma sect. Longibrachiatum. / GJ. Samuels, O. Petrini, K. Kuhls, E. Lieckfeldt,

143. C.P. Kubicek I I Studies in Mycology -1998. -№ 41. P.l-54.

144. Samuels G.J. Trichoderma ovalisporum: a new endophytic species with potential to control frosty pod rot of cocoa // Mycol. Prog. 2004. - V.3, №3. -P. 257-263.

145. Samuels G.J. Trichoderma species associated with the green mold epidemic о of commercially grown Agaricus bisporus / G.J. Samuels, S.L. Dodd, W. Gams, L.A. Castlebury, 0. Petrini // Mycologia. 2002. - № 94. - P.146-170.

146. Samuels G.J. Trichoderma: a review of biology and systematics of the genus // Mycol. Res. -1996. Vol. 100. - P. 923-935.

147. Singh A. Composting of a crop residue through treatment with microorganisms and subsequent vermicomposting / A. Singh, S. Sharma // Bioresource Technology. 2002. - Vol. 85. - P. 107411.

148. Smith W.H. Forest occurrence of Trichoderma species emphasis on potential organochlori-ne (xenobiotic) degradation// Ecotoxicol. Environ. Safety. -1995. - Vol. 32. - № 2. - P. 179-183.

149. Strieker A.R. The cellulolytic and xylanolytic enzyme system of Trichoderma reesei is governed by Xyrl / A.R. Strieker, K. Grobtebner-Hain,0 R.L. Mach // 9th International Workshop on Trichoderma and Gliocladium, Vienna, Austria. 2006.

150. Taylor J.W. Phylogenandic species recognition and species concepts in fungi / J.W. Taylor, DJ.Jacobson, S.Kroken, T.Kasuga, D.M.Geiser,

151. D.S.Hibbandt, M.C.Fisher //Fungal Genand. Biol. 2002-№ 31. - P. 21-32.

152. Thrane С. A tool for monitoring Trichoderma harzianum. I. Transformation with the GUS gene by protoplast technology / C. Thrane, M. Lubeck, H. Green, Y. Degefu, S. Allerup, U. Thrane, D.F. Jensen // Phytopathology. -1995. Vol. 85. - P.1428-1435.

153. Tiedje J.M. Opening the black box of soil microbal diversity / J.M. Tiedje, S. Asuming-Brempong, K. Nuesslein. T.L. Marsh, S.J. Flynn // Appl. Soil Ecol. -1999.-Vol. 13.-P. 109-133.

154. Torsvik V. Cell extraction method // Molecular Ecol. Manual. 1995. -Vol. 1.- №31. -P. 1-15.

155. Vargas-Garcfa M.C. Laboratory study of inocula production for composting processes / M.C. Vargas-Garcia, M.J. Lopez, F. Suarez, J. Moreno // Bioresource Technology. 2005. - Vol.- 96. - P. 797-803.

156. Veerkamp J. Los Hongos de Colombia. VIII. Some new species of soil fungi from Colombia / J. Veerkamp, W.Gams // Caldasia. 1983. - Vol. 13. -P. 709-717.

157. Vikineswary S. Growth of Trichoderma harzianum and Myceliophthora thermophila in palm oil sludge / S. Vikineswary, A.J. Kuthubutheen, A.A. Ravoof // W. J. of Microbiol. Biotechnol. 1997. - Vol. 13. - № 2. - P. 189-194. о

158. Viterbo A. Antifungal activity of a novel endochitinase gene (chit36) from Trichoderma harzianum Rifai TM / A. Viterbo, S. Haran, D. Friesem, O. Ramot,I. Chet // FEMS Microbiol. Lett. 2001. - Vol. 200. - P. 169-174.

159. Viterbo A. Significance of lytic enzymes from Trichoderma spp. in the biocontrol of fungal plant pathogens / A. Viterbo, O. Ramot, L. Chemin, I. Chet // Ant. van Leeuw. 2002. - Vol. 81. - P. 549-556.

160. Weaver M. Fitness, persistence, and responsiveness of a genetically engineered strain of Trichoderma virens in soil mesocosms / M. Weaver, ^

161. E. Vedenyapina, C.M. Kenerley // Applied Soil Ecology. 2005.

162. Weber J. Microbubble fermentation of Trichoderma reesei for cellulase production / J. Weber, F.A. Agblevor / Process Biochemistry. 2005. - Vol. 40.-P. 669-676.

163. Weiss T.J. The genesis and collapse of third millennium North Mesopotamia civilization / T.J. Weiss, M.-A. Courty // Science. 1993. - Vol.261. - P.995-1004.

164. Widden P. Fungal populations from forest soils in Southern Quebeck // Can. J. Bot, -1979. Vol.57. P.1324-1331. 0

165. Widden P. Seasonality of Trichoderma species in spruce forest soil / P. Widden, J.J. Abitbol // Mycologia. -1980. Vol. 72. - P.775-784.

166. Wildman H.G. Lithium-Chloride as a Selective Inhibitor of Trichoderma Species on Soil J Isolation Plates // Mycol. Res. 1991. - Vol. 95, DEC. - P. 1364-1368.

167. Woo S.L. Disruption of the ech42 (endochitinase-encoding) gene affects biocontrol activity in Trichoderma harzianum PI / S.L. Woo, B. Donzelli,

168. F. Scala, R. Mach, G.E. Harman, C.P. Kubicek, G. Del Sorbo, M. Lorito // Plant-Microb Interact. -1999. Vol. 12. - P. 419-429.

169. Xi В. Process kinetics of inoculation composting of municipal solid waste / B. Xi, G. Zhang, H. Liu // J. of Hazardous Materials. 2005. - V. B124. - P. 165172.

170. Xiong H. Xylanase production by Trichoderma reesei Rut C-30 grown on L-arabinose-rich plant hydrolysates / H. Xiong, N. von Weymarn, 0. Turunen, M. Leisola, 0. Pastinen // Bioresource Technology. 2005. - Vol. 96. - P. 753-759.

171. Yedidia I. Effect of Trichoderma harzianum on microelement concentrations and increased growth of cucumber plants / I. Yedidia, A.K. Srivastva, Y. Kapulnik, I. Chet // Plant Soil. 2001. - Vol. 235. - P. 235-242.

172. Zayed G. Bio-active composts from rice straw enriched with rock phosphate and their effect on the phosphorous nutrition and microbial community in rhizosphere of cowpea / G. Zayed, H. Abdel-Motaal // Bioresource Technology. -2005.-Vol. 96.-P. 929-935.

173. Zimand G. Use of -the RAPD Procedure for the Identification of Trichoderma Strains / G. Zimand, L.Valinsky, Y.Elad, I. Chet, S.M anu 1 i s // Mycol. Res. 1994. - Vol. 98. - P. 531-534.j

174. R141G158BI32 Q RI69G178B155 UR126G156BI22 i1. Ж Ш L j 12 R73G84B103

175. JMi ^ ШТ bw и I? ® 15 ^BfflW^ 4 i й 1 ' V<2 4 Я

176. Q v щШ&р КШ RM2GI55BI23 Jilongibrachiatutt Шш 21 R63G63B27 <jfli> J ,T. 1 o»ibrach iajpra \ 23 R66G59B2J

177. Изолят выделен на территории РТ)

178. Фото 5. Trichoderma asperellum FKAXT60. 1. Колония на PDA при T=28UC. 2. Конидиофоры на SNA. 3. Пустулы на семенах. 4. Конидиофора. 5. Фиалиды. 6. Конидии. (Изолят выделен на территории РТ).t