Биологические свойства изолятов возбудителя инфекционного ринита кур, выделенных на территории Российской Федерации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат наук Евграфова Валерия Андреевна

• Евграфова Валерия Андреевна
• кандидат наук
• 2018

Оглавление диссертации кандидат наук Евграфова Валерия Андреевна

СОДЕРЖАНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Роль Лу1Ъа&егтт paragallinarum в патологии птиц

2.2. Характеристика бактерий вида Л. paragallinarum

2.2.1. Классификация и таксономия

2.2.2. Морфология клеток и колоний

2.2.3. Культуральные свойства

2.2.4. Биохимические свойства

2.2.5. Устойчивость к химическим и физическим воздействиям

2.2.6. Антигенная структура

2.3. Эпизоотология инфекционного ринита кур

2.4. Патогенез инфекционного ринита кур

2.5. Клинические признаки

2.6. Патологоанатомические изменения

2.7. Лабораторная диагностика

2.7.1. Бактериологический метод

2.7.2. Серологический метод

2.7.3. Молекулярно-биологический метод

2.7.4 Метод масс-спекторометрии

2.8. Лечение

2.9. Иммунитет

2.10. Профилактика и контроль

2.10.1. Ветеринарно-санитарные меры

2.10.2 Вакцинопрофилактика

2.11. Заключение по обзору литературы

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Материалы

3.1.1. Штаммы и изоляты микроорганизмов

3.1.2. Питательные среды и компоненты питательных сред

3.1.3. Животные

3.1.4. Краски для микроскопических исследований

3.1.5. Растворы и реактивы

3.1.6. Оборудование

3.2. Методы

3.2.1. Отбор патологического материала для бактериологического исследования на инфекционный ринит кур

3.2.2. Выделение чистой культуры A.paragallinarum

3.2.3. Определение культурально-морфологических свойств

3.2.4. Определение биохимических свойств

3.2.5. Определение антибиорезистентности А. paragallinarum

3.2.6. Определение патогенности возбудителя

3.2.7. Получение антигенов для серологических реакций и иммунизации животных

3.2.8. Получение специфических сывороток крови кроликов

3.2.9. Постановка реакции агглютинации

3.2.10. Постановка реакции торможения гемагглютинации микрометодом

3.2.11. Определение антигенного родства штамма и изолятов А .paragal l ^тт

3.2.12. Типирование изолятов А. paragallinarum методом ПЦР

3.2.13. Идентификация А. paragallinarum на масс-спектрометре МЛЬВ1

3.2.14. Определение концентрации микробных клеток

3.2.15. Статистическая обработка результатов

3.3. Результаты собственных исследований

3.3.1. Выделение и идентификация возбудителя инфекционного ринита кур

3.3.2. Чувствительность изолятов А. paragallinarum к антибактериальным препаратам

3.3.3. Патогеные свойства возбудителя инфекционного ринита кур

3.3.4. Влияние некоторых физических и химических факторов на гемагглютинирующие свойства антигенов Л. paragallinarum

3.3.5. Антигенные свойства штамма и изолятов возбудителя инфекционного ринита кур

3.3.6. Иммуногенные свойства изолятов Л. paragallinarum

3.3.7. Получение и сравнительный анализ MALDI-TOF масс-спекторов возбудителя инфекционного ринита кур

3.3.8. Определение способов и сроков хранения штамма Л. paragallinarum

3.4. Обсуждение результатов собственных исследований

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

4.1. Выводы

5. ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

7. ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биологические свойства изолятов возбудителя инфекционного ринита кур, выделенных на территории Российской Федерации»

1 ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Промышленное птицеводство является самой динамично развивающейся отраслью агропромышленного комплекса Российской Федерации. Использование высокопродуктивных кроссов яичной и мясной птицы, внедрение современных технологий кормления и содержания позволили значительно повысить продуктивность поголовья и модернизировать отрасль в целом. За последние десять лет производство мяса птицы выросло почти в три раза, и страна практически полностью стала покрывать внутренний спрос за счёт собственного производства. Несмотря на это, одним из основных факторов, сдерживающих развитие отрасли остаются инфекционные болезни, в том числе и инфекционный ринит кур, проблема которого приобрела глобальный характер за последние несколько лет. Возбудителем заболевания является бактерия семейства Pasteurellaceae, рода Avibacterium, вида Avibacterium paragallinarum. Эта инфекция наносит значительный экономический ущерб птицеводству во всем мире за счет потери яйценоскости кур до 40%, снижения прироста бройлеров и задержки роста цыплят яичных пород. Может наблюдаться падеж молодняка до 10%. Заболевание характеризуется катаральным воспалением слизистых оболочек носовой полости, конъюнктивы и воздухоносных пазух, а также подкожным отеком головы, в редких случаях пневмонией [3, 4, 5, 8, 33, 34, 37, 114, 161].

Инфекционный ринит кур широко распространен в промышленных птицеводческих хозяйствах Австралии, Аргентины, Африки, Бангладеш, Бразилии, Индии, Индонезии, Китае, Малайзии, Мексики, США (Штаты Калифорния и Алабама), Таиланде, Уэльсе, Японии. Многочисленные сообщения о недавних вспышках инфекционного ринита в разных странах мира актуализируют проблему данного заболевания в респираторной патологии птиц. Несмотря на успехи в изучении свойств возбудителя, разработки средств вакцинопрофилактики, ситуация в мировом масштабе остается достаточно сложной, ареал распространения болезни расширяется, что приводит к массовым

экономическим потерям [3, 20, 38, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 65, 68, 83, 84, 85, 86, 93, 94, 137, 148, 158, 159, 161, 162, 164, 166, 173].

В связи с растущей глобализацией торгово-экономических отношений, вступлением нашего государства в различные международные сообщества, увеличением импортно-экспортных операций с животными повышается вероятность распространения заболевания на территории Российской Федерации. Усугубляет положение дел отсутствие нормативно-методических положении по лабораторной диагностике инфекционного ринита кур. Неизвестен масштаб распространения данного заболевания в птицеводческих хозяйствах страны, серотиповое разнообразие возбудителя, что существенно осложняет выбор штаммов для разработки отечественных средств специфической профилактики. В этой связи требуется установление целесообразности подготовки документов по диагностике и профилактике инфекционного ринита кур.

Выбор и применение антибактериальных препаратов для лечения инфекционного ринита на птицефабриках страны происходит без учета чувствительности к ним возбудителя заболевания, что влечет появление и распространение антибиорезистентных штаммов. Поэтому исследования в этом направлении являются актуальными и имеют научное и большое практическое значение.

Антигенная структура возбудителя сложна и разнообразна. По серологической классификации Л. Пэйджа в реакции агглютинации различают 3 серологические группы А, В и С. По классификации К. Кумэ основанной на характеристике гемагглютинина выявляют 9 серотипов. Иммунитет при данном заболевании является серотипспецифическим, хотя между отдельными серотипами могут наблюдаться перекрестные реакции. За рубежом для профилактики инфекционного ринита кур широко используются большой арсенал инактивированных вакцин. Использование средств специфической профилактики инфекционного ринита кур позволяет снизить зависимость от постоянного применения антибактериальных препаратов, что в свою очередь обеспечивает

экономию средств, а также предотвращает проблемы, связанные с антибиорезистентностью микроорганизмов или остаточными количествами антибиотиков в продукции птицеводства [3, 4, 5, 34, 36, 57, 103, 118,148, 161].

В настоящее время на Российском рынке ветеринарных препаратов зарегистрировано несколько зарубежных вакцин против инфекционного ринита кур от ведущих мировых фирм (Boehringer Ingelheim, ABIC, Ceva). По иммуногенным свойствам данные препараты являются универсальными, так как включают в свой состав антигены всех известных серологических групп возбудителя. На сегодняшний день в России отсутствуют отечественные средства специфической профилактики инфекционного ринита кур.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы является изучение биологических свойств изолятов возбудителя инфекционного ринита кур, выделенных на территории Российской Федерации.

Для выполнения данной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Выделить бактерии A.paragallinarum от птиц из хозяйств Российской Федерации;

2. Изучить культурально-морфологические, тинкториальные и биохимические свойства изолятов A. paragallinarum.

3. Определить чувствительность изолятов к антибактериальным препаратам.

4. Определить патогенность изолятов A. paragallinarum для кур.

5. Определить антигенные свойства изолятов возбудителя инфекционного ринита кур.

6. Изучить иммуногенные свойства изолятов бактерий A. paragallinarum.

7. Разработать бактериологический метод диагностики инфекционного ринита кур.

8. Получить репрезентативный набор характеристических масс-спектров штаммов и изолятов Л. paragallinarum для проведения экспресс-идентификации возбудителя методом MALDI-TOF.

9. Подобрать оптимальные условия для хранения штаммов Л. paragallinarum.

Научная новизна работы. В результате проведенных исследований патологического материала выделены 13 изолятов Л. paragallinarum.

Впервые изучены биологические свойства изолятов инфекционного ринита кур, циркулирующих на территории Российской Федерации.

Впервые определено антигенное и иммуногенное родство изолятов Л. paragallinarum, выделенных на территории Российской Федерации.

Впервые получен репрезентативный набор характеристических масс-спектров штаммов и изолятов Л. paragallinarum для проведения экспресс-идентификации возбудителя методом MALDI-TOF.

Впервые получены штаммы Л.paragallinarum №1116, №1818, №5111. Оформлено СТО, получены справки о депонировании.

Практическая значимость работы. В результате проведенных исследований разработаны: «Методические рекомендации по лабораторной диагностике инфекционного ринита кур» (2016 г.), «Методические рекомендации по определению уровня антител к Лvibacterium paragallinarum в реакции торможения гемагглютинации» (2017 г.) одобренные ученым советом ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» и утвержденные директором ФГБУ «ВНИИЗЖ» в установленном порядке.

Основные положения, выносимые на защиту.

- результаты бактериологического исследования патологического материала от кур с респираторным синдромом;

- результаты изучения морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, антигенных и вирулентных свойств, а также чувствительности к антибактериальным препаратам изолятов A.paragallinarum;

- результаты определения антигенного родства штамма и изолятов возбудителя инфекционного ринита кур;

- результаты изучения иммуногенных свойств изолятов бактерий А. paragallinarum;

- результаты анализа масс-спектров клеточных белков штаммов и изолятов А. paragallinarum методом МЛЬЭТ-ТОБ;

- условия хранения штаммов А. paragallinarum;

- штаммы возбудителя инфекционного ринита №5111, №1818, №1116;

- методические рекомендации по лабораторной диагностике инфекционного ринита кур.

Апробация результатов работы.

Основные материалы доложены и опубликованы в материалах научной конференции «Достижения молодых ученых - в ветеринарную практику», посвященной 55-летию аспирантуры ФГБУ «ВНИИЗЖ». Материалы диссертации были доложены на заседаниях ученого совета ФГБУ «ВНИИЗЖ» в 2015-2018 гг.

Публикации научных исследований. По материалам диссертации опубликовано 4 научные работы, в том числе 3 в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ.

Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Молекулярно-биологические исследования штамма и изолятов А. paragallinarum проводили совместно с сотрудниками референтнтной лаборатории диагностики вирусных болезней птиц ФГБУ «ВНИИЗЖ». Идентификацию возбудителя инфекционного ринита кур методом масс-спектрометрии МЛЬЭТ

TOF проводили совместно с сотрудниками лаборатории микробиологических исследований испытательного центра ФГБУ «ВНИИЗЖ».

Исследования по диссертационной работе выполнены в период с 2015 по 2018 гг. в соответствии с планами НИР в ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных».

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 121 страницах компьютерного текста и содержит разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов собственных исследований, выводы, практические предложения и приложения. Список литературы включает 174 источника, в том числе 155 зарубежных. Работа иллюстрирована 12 рисунками и 19 таблицами. В приложении представлены копии титульных листов документов, подтверждающих результаты отдельных этапов работы, их научную новизну и практическую значимость.

Благодарность. Автор выражает искреннюю благодарность научному руководителю Потехину А.В., научному консультанту Русалееву В.С., заведующему референтной лабораторией диагностики вирусных болезней птиц Андрейчуку Д.Б. и заведующей лаборатории микробиологических исследований испытательного центра Шадровой Н.Б. за оказание практической и консультационно-методической помощи.

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Роль АуЬЪаМвгшт paragallinarum в патологии птиц

В современном птицеводстве при интенсивных методах выращивания, высокой плотности посадки, быстрой смене технологических процессов, частой вакцинации, куры подвергаются воздействию различных неблагоприятных факторов. Появляется высокая нагрузка на иммунный статус птицы. На фоне этих факторов повышается вероятность появления многих заболеваний, одним из которых является инфекционный ринит кур [4].

Инфекционный ринит - контагиозное заболевание кур, вызываемое бактериями Лvibacterium paragallinarum. Клинический синдром был впервые описан как круп, простуда и неосложненный ринит. Позже заболевание было названо инфекционным ринитом, потому что имело инфекционный характер и сопровождалось поражением слизистой оболочки носа. Болезнь характеризуется катаральным воспалением слизистых оболочек носовой полости, конъюнктивы и воздухоносных пазух, а также подкожным отеком головы и в редких случаях -пневмонией. Инфекционный ринит может возникать как самостоятельное заболевание, также появляться при ухудшении условий содержания птицы в сочетании с другими патогенными агентами вирусной, микоплазмозной или бактериальной этиологии [3, 4, 5, 8, 21].

Экономический ущерб от заболевания складывается в основном из потери яйценоскости кур до 40% в течение 2-3 недель, особенно на пике яйценоскости и задержки роста цыплят. Может наблюдаться падеж молодняка до 10%. Обычно смертность при данном заболевании незначительная, гибель птицы происходит на фоне истощения и осложнений в органах респираторного тракта. Вовремя одной из вспышек заболевания взрослой птицы в Калифорнии зарегистрирована смертность, достигшая почти 50% и резкое снижение продуктивности несушек до 75% в течение 3 недельного периода. В Алабаме вспышка заболевания среди бройлеров вызвала поражения у 68,9% птицы, что было связано в основном с воспалением воздухоносных мешков. При хроническом течении заболевания

наблюдается повышенный отход птиц в возрасте 300 и более суток, без ярких клинических признаков. У бройлеров сохранность падает до 70-80%, забойный вес снижается на 15-30%. Инфекционный ринит в сочетании с другими патогенными микроорганизмами и стрессовыми факторами может приводить к вспышкам заболеваний, сопровождающимися значительными экономическими потерями [21, 33, 34, 37, 70, 161].

2.2 Характеристика бактерий вида Avibacterium paragallinarum

2.2.1 Классификация и таксономия

Возбудителя впервые выделил Де Блик в 1931 году. Основываясь на исследованиях, проведенных в 30-х годах прошлого века, по определению потребности микроорганизма в таких ростовых факторах как Х-(гемин) и V-(никотинамидадениндинуклеотид), возбудитель инфекционного ринита кур был отнесен к роду Haemophilus, виду H. gallinarum [59, 151].

Однако, в 1962 году, Пэйдж с соавторами проведя более детальные исследования, обнаружили, что истинный возбудитель заболевания нуждался только V-факторе для роста, не исключая персистенции у кур и других гемофильных бактерий, нуждающихся в обоих факторах роста. На основании этого микроорганизму дали новое название - Haemophilus paragallinarum. Как оказалось, позже виды H. gallinarum и H. paragallinarum во многом не идентичны и по культуральным свойствам, и по патогенности для кур. Отождествление возбудителя инфекционного ринита кур с бактериями H. gallinarum было признано ошибочным [118, 174].

Несмотря на это, в литературе имеются сообщения о выделении от цыплят с признаками ринита в Южной Африке штаммов H. paragallinarum, рост которых не зависит от наличия V-фактора. Таким образом, очевидно, что классификация гемофильных бактерий, основанная на определении потребности в ростовых факторах, является источником заблуждений [21, 37, 99, 117, 113].

В соответствии с последней реклассификацией семейства Pasteurellaceae, проведенной в начале XXI века, в настоящее время возбудитель инфекционного ринита кур относится к роду Лvibacterium, виду Л. paragallinarum [93, 143, 156].

1.2.2 Морфология клеток и колоний

Л. paragallinarum - неподвижная грамотрицательная, полиморфная, часто короткая палочка, шириной 0,4-0,7 мкм, длиной 1 -3 мкм с тенденцией к формированию нитей. Вирулентные штаммы имеют капсулу. На питательных средах возбудитель вырастает через 18-24 часа, а спустя 72-96 часов дегенерирует, образуя длинные нити. На свежих питательных средах при субкультивировании бактерии вновь приобретают типичную форму в виде коротких палочек. В мазках-отпечатках из патологического материала и в молодых культурах бактерии окрашиваются биполярно. В мазках из агаровых и бульонных культур клетки располагаются одиночно, парами иногда короткими цепочками [2, 11, 21, 33, 70, 73, 142, 151, 161].

Мелкие, похожие на капельки росы, колонии диаметром 0,3-1,0 мм появляются на плотных питательных средах через 18-24 часа культивирования. По степени флюоресценции в косо проходящем свете колонии Л. paragallinarum могут иметь разные формы: S, SR и R. Установлена корреляция между формой колоний и патогенностью. Штаммы, образующие на агаровых средах гладкие колонии ^-форма) с высокой степенью флюоресценции обладают высокой вирулентностью. Гладкие с не ровными краями колонии (SR-форма) со слабой флюоресценцией образуют штаммы с низкой вирулентностью. Плоские, грубые форма) не флюоресцирующие в косо проходящем свете колонии, характерны для авирулентных штаммов возбудителя [3, 8, 75, 134, 141, 146, 161].

1.2.3 Культуральные свойства

В лабораторных условиях возбудителя обычно выращивают на питательных средах при повышенном содержании углекислого газа в атмосфере. Однако, данный компонент не является существенно необходимым, так как микроорганизм способен расти в атмосфере пониженного содержания кислорода или в анаэробных условиях. Температурный оптимум 37-38оС, допустимый

диапазон температур 25-45оС. Оптимальный показатель рН питательных сред 7,27,6 [3, 69, 118, 139, 148, 156, 161].

Возбудитель относится к НАД-зависимым видам гемофильных бактерий, кроме того он нуждается в сыворотке крови животных. Сыворотка крови кролика и крупного рогатого скота не удовлетворяют ростовым потребностям возбудителя. Лучшие результаты получают при использовании сыворотки крови кур, овец и лошадей. Перед использованием сыворотку предварительно инактивируют прогреванием при 56оС в течение 30 мин и стерилизуют фильтрацией [21, 33].

Для первичной изоляции возбудителя рекомендуется жидкая питательная среда, состоящая из МПБ с добавлением 5% сыворотки крови кур, 25% дрожжевого экстракта и 0,00025% НАД, а также плотная питательная среда, содержащая, помимо перечисленных компонентов, 1,5% бакто-агара и 0,001% гемина. Редуцированная форма НАД в концентрации 1,56-25 мг/см3 или окисленная форма в концентрации 20-100 мг/см3 необходимы для роста in vitro большинства штаммов A. paragallinarum. Исключение составляют штаммы возбудителя, выделенные в Южной Африке, которые являются НАД-независимыми микроорганизмами [31, 44, 67, 73, 124, 117, 156].

Сыворотка крови цыплят, добавленная к питательным средам в количестве от 1,0% до 5,0% существенно стимулирует рост большинства штаммов. Оптимальная концентрация хлорида натрия в питательной среде составляет от 1,0 до 1,5%. Сердечно-мозговой бульон, бульон и агар Колумбия, триптозный агар и среда на основе гидролизата мяса цыпленка являются хорошими основами питательных сред, к которым необходимо добавлять отдельные ростостимулирующие факторы. В работе могут использоваться сложные многокомпонентные питательные среды для получения более высоких урожаев возбудителя. В жидких питательных средах с сывороткой крови и V-фактором рост возбудителя сопровождается их равномерным помутнением [24, 26, 97, 101, 103, 118, 131, 134, 139, 148, 169].

Возбудитель хорошо размножается в желточном мешке 6-7-дневных куриных эмбрионов, полученных из яиц кур-несушек, свободных от возбудителя инфекционного ринита. Гибель эмбрионов наступает через 24-48 часов, в содержимом желточного мешка обнаруживается до 108 КОЕ/см3 бактерий. Культивирование в куриных эмбрионах обычно используют для поддержания стабильности биологических свойств штамма.

1.2.4 Биохимические свойства

Способность редуцировать нитраты в нитриты и ферментировать глюкозу без выделения газа свойственна возбудителю инфекционного ринита кур. Оксидазная активность, наличие фермента щелочной фосфатазы, неспособность образовывать индол и гидролизовать мочевину - также являются видовыми характеристиками A. paragallinarum. Сопоставление данных различных авторов показывает некоторые отличия ферментативной активности возбудителя. Это в определенной степени связано с использованием различных по составу дифференциально-диагностических сред и включением в их состав сыворотки крови. Существенной проблемой являются ложноотрицательные результаты, главным образом связанные со слабым ростом возбудителя. В качестве стандартной питательной среды для определения биохимических свойств гемофильных бактерий предлагается использование МПБ, содержащего 1,0% хлорида натрия, 25 мг/см3 НАД, 1,0% сыворотки крови цыпленка и 1,0% углевода с добавлением индикатора - фенолового красного [2, 12, 21, 24, 33, 35, 40, 161].

При бактериологической диагностике кроме A. paragallinarum из верхних дыхательных путей птиц часто выделяются и другие представители рода Avibacterium, такие как A. avium и A. volantium. Данные виды не патогенны для птиц. Неспособность A. paragallinarum к ферментации галактозы и трегалозы, а также отсутствие каталазы являются основными отличительными признаками возбудителя заболевания. Биохимические свойства штаммов и изолятов A. paragallinarum, выделенных в Аргентине, Австралии, Бразилии, Китае, Германии, Японии и США не имеют существенных различий. Имеются отдельные сообщения о выделении НАД-независимых штаммов A. paragallinarum.

Корреляции между ферментативными свойствами отдельных штаммов и их серотиповой принадлежностью не установлено [21, 31, 46, 49, 50, 101, 117, 114, 134, 161].

1.2.5 Устойчивость к химическим и физическим воздействиям

А. paragallinarum - чувствительный микроорганизм, который быстро погибает вне организма хозяина. Инфекционный экссудат, суспензированный в водопроводной воде, инактивируется через 4 часа при температуре 22°С; однако если он суспензирован в солевом растворе, то остается инфекционным для птиц, по крайней мере, 24 часа. Экссудат и ткани сохраняют инфекционность при выдержке при 37°С в течении 24 часов, в некоторых случаях даже 48 часов; а при 4°С экссудат потенциально опасен в течении нескольких дней. При температуре 45-55°С возбудитель погибает в течении 2-10 мин. Инфекционные эмбриональные жидкости, обработанные 0,25% раствора формалина, инактивируются в течении 24 часов даже при температуре 6°С [169].

В лабораторных условиях микроорганизм может сохраняться на плотных питательных средах, при еженедельных пассажах. Молодые культуры возбудителя, полученные в условиях повышенной концентрации углекислого газа (8-10%), жизнеспособны в течении двух недель при 4°С.

1.2.6 Антигенная структура

Антигенные свойства возбудителя впервые изучил в реакции агглютинации Л. Пэйдж, который установил три серотипа - А, В и С. По результатам типирования большого количества изолятов было установлено, что в Германии преимущественно циркулируют серотипы А и В, в Испании - А, В и С, в Австралии, Южной Африке и Индонезии - А и С [38, 74, 118, 119, 120, 148, 154, 161, 173].

К. Хинц дифференцировал выделенные им культуры на два серотипа - А и В. В перекрестной реакции агглютинации с адсорбированными сыворотками автор выявил в поверхностных структурах бактериальной клетки термолабильный типоспецифический и термостабильный видоспецифический антигены. К. Като

описал три серотипа возбудителя (1, 2 и 3), причем первый серотип соответствовал типу А по классификации Л. Пэйджа [76, 90, 96, 161].

Более детально была изучена антигенная структура серотипов, классифицированных по схеме А. Савата. Автор разделил все капсульные штаммы возбудителя на два серотипа (1 и 2) по гемагглютинирующей активности. Первоначально способность агглютинировать эритроциты кур была установлена у инкапсулированных клеток серотипа 1; позднее, используя специальные методы обработки бактерий, были обнаружены гемагглютинирующие свойства и у культур серотипа 2. Гемагглютинины, по данным электронной микроскопии, локализуются на мембране клеточной стенки, они гетерогенны по серологическим и физико-химическим свойствам. Различают следующие типы гемагглютининов: тип ИБ - термостабильный, трипсинрезистентный; тип ИЬ - термолабильный, трипсинрезистентный; тип Ь -термолабильный, трипсинчувствительный, устойчивый к действию гиалуронидазы, активный в отношении свежих и обработанных глутаровым альдегидом эритроцитов. Гемагглютинины типов ИБ и ИЬ активны в отношении только свежих куриных эритроцитов, но не обработанных глутаровым альдегидом. Гемагглютинины типа Ь индуцируют в организме синтез защитных антител, т.е. обладают иммуногенными (протективными) свойствами [103,142, 160].

Антигенная структура возбудителя тесно связана с типом образуемых на агаре колоний: бактерии из флюоресцирующих колоний содержат типоспецифический антиген типа Ь, гемагглютинин и обладают протективным свойствами, а нефлюоресцирующие колонии состоят из клеток, не имеющих перечисленных свойств.

Серологическая активность возбудителя зависит от наличия в капсуле гиалуроновой кислоты. Обнаружено, что антигены штаммов первого серотипа инагглютинабельны в гомологичной антисыворотке, а также неспособны агглютинировать эритроциты. Серологическая инертность исчезает после

обработки культур гиалуронидазой. Штаммы, имеющие в составе капсулы гиалуроновую кислоту, обладают высокой вирулентностью.

Для серотипирования возбудителя в соответствии со схемой, предложенной Л. Пэйджем, также используют реакцию торможения гемагглютинации (РТГА). По результатам проведения этой реакции, штаммы, выделенные в Китае, относились к серотипам А, а в Аргентине и Бразилии - к серотипам А, В, С [39, 46, 49, 50].

Другой метод серотипирования штаммов Л. paragallinarum, основан на использовании моноклональных антител в ИФА. Большим недостатком данного метода является невозможность идентификации штаммов серотипа В и некоторых штаммов серотипа А, выделенных в Южной Америке [30, 49, 50, 61, 149].

Долгое время существовало предположение, что серотип В по классификации Л. Пэйджа не является истинным серотипом, а представляет собой промежуточное звено между серотипами А и С, которые потеряли типоспецифический антиген. Последние исследования, окончательно показали, что серотип В является самостоятельным и не имеет ничего общего с серотипами А и С [34, 103, 121, 142].

Практическая значимость схемы серотипирования Л. Пэйджа состоит в том, что в ней прослеживается корреляция между серотипами и спецификой иммунотипов. Цыплята, привитые вакциной, приготовленной из одного серотипа, оказались защищенными только против гомологичного серотипа. Однако, последние исследования показали, что перекрестный иммунитет в пределах серотипа В по классификации Л. Пэйджа является лишь частичным [21, 32, 82, 105, 148].

Кумэ и соавторы предложили альтернативную серологическую классификацию, основанную на РТГА с использованием обработанных тиоционатом калия и в дальнейшем обработанных ультразвуком клеток, гипериммунных сывороток кролика и эритроцитов цыпленка, фиксированных глютаровым альдегидом. В сущности, серотипы А, С и В по классификации Л. Пэйджа были подняты на уровень серологических групп, I, II и III и семи

серотипов (от НА-1 до НА-7) внутри этих трех серологических групп: по три штамма из I и II группы и один из III. Интересно, что области распространения этих серотипов уникальны по отношению к географическому происхождению штаммов. Большинство изолятов возбудителя, которые не удалось типировать по схеме Л. Пэйджа в РА, легко типировались по схеме Кумэ в РТГА. Восьмой и девятый серотипы были выделены в Австралии. Терминология, на которой базируется схема Кумэ, недавно была изменена с учетом дополнительных серотипов. Для предотвращения путаницы серологические группы I, II и III были переименованы в А, С и В. Этим подчеркивается, что серологические группы Ките А, В и С соответствуют серотипам Л. Пэйджа А, В и С. В пределах каждой из серологических групп серотипы были последовательно пронумерованы, что позволило учитывать новые серотипы. Таким образом, в настоящее время признано девять серотипов по классификации Кумэ - А-1, А-2, А-3, А-4, В-1, С-1, С-2, С-3 и С-4. Однако, данная схема на практике широко не применяется, из-за технических сложностей воспроизведения [8, 21, 36, 57, 67, 142, 148, 150, 161].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Евграфова Валерия Андреевна, 2018 год

6 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Бакулин, В.А. Болезни птиц / В.А. Бакулин. - СПб: [Издатель В.А. Бакулин]. - 2006. - 688 с.

2. Биологические свойства штаммов АуЛа^егшш рага§аШпагит и GaПybacterшm апа^, выделенных в Российской Федерации В 2015 г. / М.Г. Теймуразов [и др.] // Ветеринария. - 2016. - № 6. - С. 26-29.

3. Болезни домашних и сельскохозяйственных птиц: вет. справочник / под ред. Б.У. Кэлнека. - М.: Аквариум, 2011. - 1232 с.

4. Гемофилез птиц: диагностика и профилактика / Н.А. Толстых [и др.] // Актуальные проблемы сельского хозяйства горных территорий:материалы У1-й Междунар. научно-практ. конф. - Горно-Алтайск, 2017. - С. 247-277.

5. Гемофилез птиц / Т.Н. Рождественская [и др.] // Птица и птицепродукты. - 2016. - № 4 - С. 50-53.

6. Громов, И. Н. Респираторные болезни птиц: патоморфология и диагностика: рекомендации / И. Н. Громов, Д. О. Журов, Е. А. Баршай . -Витебск: ВГАВМ. - 2017. - 40 с.

7. Кириллов, Л.В. Оценка качества производственных штаммов микроорганизмов / Л.В. Кириллов, Н.Т. Татаринцев, Л.М. Первова // Сб. науч. тр. ВГНКИ. - М., 2001. - Т. 62. - С. 97-100.

8. Лизун, Р. Гемофилез кур / Р. Лизун // Белорусское сельское хозяйство. -2016. - № 2. - С. 37-39.

9. Манин, Т.Б. Диагностика и вакцинопрофилактика инфекционного ринита птиц / Т.Б. Манин, А.В. Чернышов //Анализ данных по распространению заболевания на территории Российской Федерации // БИО. - 2013. - № 5. - С. 2527.

10. Манин, Т.Б. Диагностика и специфическая профилактика инфекционного ринита птиц. Анализ чувствительности возбудителя к анти6 микробным препаратам и распространения заболевания на территории Российской Федерации / Т.Б. Манин, А.В. Чернышов // Рацветинформ. - 2013. -№ 7. - С. 36.

11. Методы общей бактериологии: в 3 т. Т. 1 / Ф. Герхард [и др.]. - М.: Мир, 1983. - 536 с.

12. Методы общей бактериологии: в 3 т. Т. 3 / Ф. Герхард [и др.]. - М.: Мир, 1983. - 264 с.

13. Микробиологические и вирусологические методы в ветеринарной медицине: справ. пособие / А.Н. Головко, В.А. [и др.]. - Харьков: ХТМТ, 2007. -512 с.

14. Определение антигенного родства штаммов Pasteurella multocida / О.И. Ручнова [и др.] // Сибирская язва и др. опасные инфекции животных: материалы по теме работы круглого стола, приуроченного к 80-летию академика РАСХН Бакулова И.А. - Покров, 2005. - С. 179-182.

15. Панин, А.Н. Основные требования к производственным и контрольным штаммам микроорганизмов / А.Н. Панин, Н.Т.Татаринцев // Ветеринария. - 1993. - № 4. - С. 28-29.

16. Полуночкина, Т.В. Лечение гемофилеза у кур родительского стада / Т.В. Полуночкина // БИО. - 2015. - № 5. - С. 28-31.

17. Требования к производственным штаммам микроорганизмов и биологическим препаратам / Л.В. Кириллов [и др.] // Сб. науч. тр. ВГНКИ. - М., 1994. - Т. 55. - С. 7-20.

18. Черняев, Ю.А. Определение соответствия эпизоотических штаммов вируса ящура производственным / Ю.А. Черняев, А.И. Собко // Ветеринария. -1973. - № 1. - С. 181-183.

19. Чернышов, А.В. Характеристика культурально-морфологических и биохимических свойств изолятов Avibacterium paragallinarum, выделенных на территории Российской Федерации / А.В. Чернышов, О.И. Ручнова, О.В. Прунтова // Ветеринарная патология. - 2011. - № 3. - С. 101-105.

20. Akthar, A. Clinico-therapeutic observations on an outbreak of infectious coryza in Faisalabad, Pakistan / A. Akthar, A.R. Bhatti, K. Muhammad // Intern. J. Agriculture and Biology. - 2001. - Vol. 3. - P. 531-532.

21. An update on avian infectious coryza: its reemerging trends on epidemiology, etiologic characterization, diagnostics, therapeutic and prophylactic

advancements / Sidhartha Deshmukh [et al.] // J. Dairy Veterinary and Animal Research. - 2015. - Vol. 2, N 3. - P. 86-92.

22. Archetti, I. Persistent antigenic variation of influenza A virus after incomplete neutralization in ovo with heterologous immune serum / I. Archetti, F.L. Horsfall // J. exp. Med. - 1950. - Vol. 92. - P. 441.

23. Baar, B.V. Characterisation of Bacteria by Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionisation and Electrospray Mass Spectrometry / B.V. Baar // FEMS Microbiology Rev. - 2000. - Vol. 24, N 2. - P. 193-219.

24. Blackall, P.J. An evaluation of methods for the detection of carbohydrate fermentation patterns in avian Haemophilus species / P.J. Blackall // J. Microbiology Methods. - 1983. - Vol. 1. - P. 275-281.

25. Blackall, P.J. An evaluation of the cross protection afforded by inactivated infectious coryza vaccines / P.J. Blackall // Austral. Vet. J. - 1991. - Vol. 68. - P. 266267.

26. Blackall, P.J. Antimicrobial drug resistance and the occurrence of plasmids in Haemophilus paragallinarum / P.J. Blackall // Avian Dis. - 1988. - Vol. 32. - P. 742747.

27. Blackall, P.J. Biotiping of Haemophilus paragallinarum by hemagglutination serotyping, carbohydrate fermentation, and antimicrobial drug resistance patterns / P.J. Blackall, L.E. Eaves, D.G. Rogers // Avian Dis. - 1989. - Vol. 33. - P. 491-496.

28. Blackall, P.J. Comparison of Haemophilus paragallinarum isolates by restriction endonuclease analysis of chromosomal DNA / P.J. Blackall, L.E. Eaves, C.J. Morrow // Vet. Microbiology. - 1991. - Vol. 27. - P. 39-47.

29. Blackall, P.J. Development of a vaccine against infectious coryza / P.J. Blackall // Proc. Intern. Union. Immunol. Soc. - 1983. - Vol. 66. - P. 99-104.

30. Evaluation of a panel of monoclonal antibodies in the subtyping of Haemophilus paragallinarum / P.J. Blackall [et al.] // Avian Dis. - 1991. - Vol. 35. - P. 955-959.

31. Blackall, P.J. Further characterization of Haemophilus paragallinarum and Hemophilus avium / P.J. Blackall, G.G. Reid. // Vet. Microbiology. - 1982. - Vol. 7. -P. 359-367.

32. Blackall P.J. Further efficacy studies on inactivated, aluminum-hydroxide-adsorbed vaccines against infectious coryza / P.J. Blackall, G.G. Reid // Avian Dis. -

1987. - Vol. 31. - P. 527-532.

33. Blackall, P.J. Infectious coryza and related bacterial infections / P.J. Blackall, V.E. Soriano // Diseases of Poultry. - Iowa, 2005. - P. 789-803.

34. Blackall, P.J. Infectious Coryza: overview of the disease and new diagnostic options / P.J. Blackall // Clin. Microbiol. Rev. - 1999. - Vol. 12, N 4. - P. 627-632.

35. Blackall, P.J. Infectious coryza / P.J. Blackall, R. Yamamoto // A Laboratory Manual for the Isolation and Identification of Avian Pathogens. - 4th ed. - Philadelphia, 1998. - P. 29-34.

36. Blackall, P.J. Proposal of a new serovar and altered nomenclature for Haemophilus paragallinarum in the Kume hemagglutinin scheme / P.J. Blackall, L. E. Eaves, D.G. Rogers // J. Clin. Microbiology. - 1990. - Vol. 28. - P. 1185-1187.

37. Reclassification of Pasteurella gallinarum, [Haemophilus] paragallinarum, Pasteurella avium and Pasteurella volantium as Avibacterium gallinarum gen. nov., comb. nov., Avibacterium paragallinarum comb. nov., Avibacterium avium comb. nov. and Avibacterium volantium comb. nov / P.J. Blackall [et al.] // Inst. J. Syst. Evol. Microbiology. - 2005. - Vol. 55 - P. 353-362.

38. Blackall, P.J. Serological classification of Australian and South African isolates of Haemophilus paragallinarum / P.J. Blackall, L.E. Eaves // Austral. Vet. J. -

1988. - Vol. 65. - P. 362-363.

39. Blackall, P.J. Serotyping of Haemophilus paragallinarum by the Page scheme: comparison of the use of agglutination and hemagglutination-inhibition tests / P.J. Blackall, L.E. Eaves, G. Aus // Avian Dis. - 1990. - Vol. 34. - P. 643-645.

4Q. Blackall P.J. The avian haemophili / P.J. Blackall // Clin. Microbiology Rev. - 1989. - Vol. 2. - P. 27Q-277.

41. Blackall, P.J. Whole-cell protein profiles of Haemophilus paragallinarum as detected by polyacrylamide gel electrophoresis / P.J. Blackall, R. Yamamoto // Avian Dis. - 1989. - Vol. 33. - P. 168-173.

42. Bragg, R.R. Effects of differences in virulence of different serovars of Haemophilus paragallinarum on perceived vaccine efficacy / R.R. Bragg // Onderstepoort J. Vet. Res. - 2QQ5. - Vol. 72, N 1. - P. 1-6.

43. Bragg, R.R. Isolation of serovar C-3 Haemophilus paragallinarum from Zimbabwe: a further indication of the need for the production of vaccines against infectious coryza containing local isolates of H. paragallinarum / R.R. Bragg // Onderstepoort J. Vet. Res. - 2QQ2. - Vol. 69. - P. 129-132.

44. Bragg R.R. Plasmid encoded NAD independence in some South African isolates of Haemophilus paragallinarum / R.R. Bragg, L. Coetzee, J.A. Verschoor // Onderstepoort J. Vet. Res. - 1993. - Vol. 6Q. - P. 147-152.

45. Buys, S.B. Haemophilus coryza: therapy with selected drugs / S.B. Buys // J. S. Afr. Vet. Assoc. - 1993. - Vol. 43. - P. 383-389.

46. Characterization of Haemophilus paragallinarum isolates from China / X. Chen [et al.] // Avian Dis. - 1993. - 1993. - Vol. 37. - P. 574-576.

47. Characterization of Haemophilus paragallinarum isolates from Mexico / R.P. Fernández [et al.] // Avian Pathology. - 2QQQ. - Vol. 29, N 5. - P. 473-476.

48. Characterization of Haemophilus paragallinarum isolated in the Philippines / K. Nagaoka [et al.] // J. Vet Med. Sci. - 1994. - Vol. 56. - P. 1Q17-1Q19.

49. Characterization of isolates of avian haemophili from Brazil. / P.J. Blackall [et al.] // Avian Dis. - 1994. - Vol. 38. - P. 269-274.

5Q. Characterization of isolates of Haemophilus paragallinarum from Argentina // H. R. Terzolo [et al.] // Avian Dis. - 1993. - Vol. 37. - P. 31Q-314.

51. Characterisation of isolates of Hаemophilus paragallinarum from Indonesia / S. Poernomo [et al.] // Austral. Vet J. - 2QQQ. - Vol. 78, N 11. - P. 759-762.

52. Chukiatsiri, K. An Outbreak of Avibacterium paragallinarum serovar B in a Thai Layer Farm / K. Chukiatsiri, S. Chotinun, N. Chansiripornchai // Thai J. Vet. Med. - 2010. - Vol. 40, N 4. - P. 441-444.

53. Clark, D.S. Studies of an inactivated Hemophilus gallinarum vaccine for immunization of chickens against infectious coryza / D.S. Clark, J.F. Godfrey // Avian Dis. - 1961. - Vol. 5. - P. 37-47.

54. Coetzee, L. The production and evaluation of a Haemophilus paragallinarum (infectious coryza) oil emulsion vaccine in laying birds / L. Coetzee, E. H. Rogers, L. Velthuysen // Proc. No. 66 Post-Grad. Comm. Vet. Sci. Univ. Sydney. - 1983. - P. 277283.

55. Comparison between the Biflex III-Biotyper and the Axima-SARAMIS systems for yeast identification by matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry / C. Lohmann [et al.] // J. Clin. Microbiology. - 2013. - Vol. 51, N 4. - P. 1231-1236.

56. Comparison of the susceptibility of Haemophilus paragallinarum to ofloxacin and other existing antimicrobial agent / I. Takahashi [et al.] // J. Jpn. Vet. Med. Assoc. -1990. - Vol. 43. - P. 187-191.

57. Cross-protection study of the nine serovars of Haemophilus paragallinarum in the Kume haemagglutinin scheme / E.V. Soriano [et al.] // Avian Pathology. - 2004. -Vol. 33, N 5. - P. 506-511.

58. Davis, R.B. Efficacy studies on Haemophilus gallinarum bacterin preparations / R.B. Davis, R.B. Rimler, R.B. Shottsr // Amer. J. Vet. Res. - 1976. -Vol. 37. - P. 219-222.

59. De Blieck, L. A haemoglobinophilic bacterium as the cause of contagious cattarh of the fowl (coryza infectiosa gallinarum) / L. De Blieck // Vet. J. - 1932. -Vol. 88. - P. 9-13.

60. Development and application of DNA probes and PCR tests for Haemophillus paragallinarum / X. Chen [et al.] // Avian Dis. - 1996. -Vol. 40, N 2. - P. 398-407.

61. Development of an enzyme-linked immunosorbent assay for the measurement of antibodies against infectious coryza vaccine / R. Sakamoto [et al.] // Avian Dis. -2012. - Vol. 56, N 1. - P. 65-72.

62. Difference of immune efficacy of infectious coryza vaccine by different site of injection in chickens / Y. Iritani [et al.] // J. Jpn. Soc. Poult. Dis. - 1984. - Vol. 20. -P. 182-185.

63. DNA based tests for the identification of Haemophilus paragallinarum / X. Chen [et al.] // Proc. 44th Western Poultry Dis. Conf. - Sacramento, CA, 1995. - P. 110-111.

64. Droual, R. Infectious coryza in meat chickens in the San Joaquin Valley of California / R. Droual, A.A. Bickford, B.R. Charlton // Avian Dis. - 1990. - Vol. 34. -P. 1009-1016.

65. Drug sensitivity test of Haemophilus paragallinarum isolated in Taiwan / Y.S. Lu [et al.] // Taiwan J. Vet. Med. Anim. Husb. - 1983. - Vol. 41. - P. 73-76.

66. Durairajan, R. Detection of Avibacterium paragallinarumin commercial poultry and their antibiogram / R. Durairajan, M. Sharma, M. Murugan // Tami Nadu J. Vet. and Animal Sci. - 2013. - Vol. 9, N 5. - P. 332-337.

67. Eaves, L.E. Comparison of hemagglutinin and agglutinin schemes for the serological classification of Haemophilus paragallinarum and proposal of a new hemagglutinin serovars / L.E. Eaves, D.G. Rogers, P.J. Blackall // J. Clin. Microbiology. - 1989. - Vol. 27. - P. 1510-1513.

68. Epidemiologic studies on infectious coryza outbreaks in northern New South Wales, Australia, using serotyping, biotyping, and chromosomal DNA restriction endonuclease analysis / P.J. Blackall [et al.] // Avian Dis. - 1990. - Vol. 34. - P. 267276.

69. Eliot, C.P. A hemophilic bacterium as the cause of infectious coryza in the fowl / C.P. Eliot, M.R. Lewis // J. Amer. Vet. Med. Assoc. - 1934. - Vol. 84. - P. 878888.

70. Epidemiological studies on Infectious coryza in chickens in northern India / J. Kaur [et al.] // Indian J. Animal Sci. - 2004. - Vol. 74, N 5. - P. 462-465.

71. Evaluation of a PCR test for the detection of Haemophillus paragallinarum in China / X. Chen [et al.] // Avian Pathology. - 1998. - Vol. 27, N 3. - P. 296-300.

72. Fujiwara, H. Histopathological studies on infectious coryza of chickens. I. Findings in naturally infected cases / H. Fujiwara, S. Konno // Natl. Inst. Anim. Health.

- 1965. - Vol. 5. - P. 36-43.

73. Hinz, K.H. Beitrag zur Differenzierung von Haemophilus stamen aus Huhnem I. Muteilung. Kulturelle und biochemische Untersuchungen / K.H. Hinz // Avian Pathology. - 1973. - Vol. 2. - P. 211-229.

74. Hinz, K.H. Beitrag zur Differenzierung von Haemophilus Stämmen aus Hühnern. 2. Mitteilung. Serologische Untersuchungen im Objekttrger-Agglutinations-Test / K.H. Hinz // Avian Pathology. - 1973. - Vol. 2. - P. 269-278.

75. Hinz, K.H. Beitrag zur Differenzierung von Haemophilus-Stämmen aus Hühnern. 4. Mitteilung.Untersuchungen Uber die Dissoziation von Haemophilus paragallinarum / K.H. Hinz // Avian Pathology. - 1976. - Vol. 5. - P. 51-66.

76. Hinz, K.H. Diferentiation of Haemophilus strains isolated from chickens. 2. Serologic studies on the plate agglutination test / K.H. Hinz // Avian Pathology. - 1973.

- Vol. 2. - P. 211-229.

77. Hinz, K.H. Haemophilus avium, a new species from chickens / K.H. Hinz, C. Kunjara // Intern. J. Syst. Bacteriology. - 1977. - Vol. 27. - P. 324-329.

78. Hinz, K.H. Heat-stable antigenic determinants of Haemophilus paragallinarum / K.H. Hinz // Zbl. Vet. Med. - 1980. - Vol. 27. - P. 668-676.

79. Homer, R.F. An upper respiratory disease of commercial chickens resembling infectious coryza, but caused by a V-factor independent bacterium / R.F. Homer, G.C. Bishop, C. Haw // Avian Pathology. - 1992. - Vol. 21. - P. 421-427.

80. Identification and functional analysis of the cytolethal distending toxin gene from Avibacterium paragallinarum / Y.C. Chen [et al.] //Avian Pathology. - 2014. -Vol. 43, N1. - P. 43-50.

81. Identification of fungal microorganisms by MALDI-TOF mass spectrometry / J. Chalupova [et al.] // Biotechnol. Adv. - 2014. - Vol. 32, N 1. - P. 230-241.

82. Immunogenicity of Haemophilus paragallinarum serovar B strains / T. Yamaguchi [et al.] // Avian Dis. - 1991. - Vol. 35. - P. 965-968.

83. Infectious coryza due to Haemophilus paragallinarum serovar B in China / P.J. Zhang [et al.] //Austral. Vet J. - 2003. - Vol. 81. - P. 96-97.

84. Infectious coryza in broiler chickens in Alabama / F.J. Hoerr [et al.] // Proc. 43rd Western Poultry Dis. Conf. - 1994. -P. 42.

85. Infectious coryza in meat chickens in the San Joaquin Valley of California / R. Droual [et al.] // Avian Dis. - 1990. - Vol. 34. - P. 1009-1016.

86. Infectious coryza to Haemofilus paragallinarum serovar B in China / P.J. Zyang [et al.] // Austral. Vet J. - 2003. - Vol. 81. - P. 96-97.

87. Infectious coryza / R. Yamamoto [et al.] // Diseases of Poultry. - 8th ed. -Iowa, 1984. - P. 178-186.

88. Intranasal inoculation of chickens with encapsulated or non-encapsulated variants of Haemophilus paragallinarum: electron microscopic evaluation of the nasal mucosa / A. Sawata [et al.] // Amer. J. Vet. Res. - 1985. - Vol. 46. - P. 2346-2353.

89. Iritani, Y. Biological activity of crude polysaccharide extracted from two different immunotype strains of Hemophilus gallinarum in chickens / Y. Iritani, S. Iwaki, T. Yamaguchi // Avian Dis. - 1981. - Vol. 25. - P. 29-37.

90. Iritani, Y. Determination of types 1 and 2 hemagglutinins in serotypes of Haemophilus paragallinarum / Y. Iritani [et al.] // Avian Dis. - 1981. - Vol. 25. - P. 479-483.

91. Iritani, Y. Purification and properties of Haemophilus paragallinarum hemagglutinin / Y. Iritani, K. Katagiri, H. Arita // Amer. J. Vet. Res. - 1980. - Vol. 41. - P. 2114-2118.

92. Iritani, Y. Serologic response to Haemophilus gallinarum in artifically infected and vaccinated chickens / Y. Iritani, G. Sugimori, K. Katagiri // Avian Dis. -1977. - Vol. 21. - P. 1-8.

93. Isolation and characterization of Avibacterium paragallinarum from ornamental birds in Thrissur, Kerala / P.M. Priya [et al.] // Intern. J. Life Sci. - 2012. -Vol. 1, N 3. - P. 87-88.

94. Isolation and identification of Avibacterium paragallinarum, the causal agent of infectious coryza from layer chickens in Bangladesh / S. Akter [et al.] // J. Bangladesh Agr. Univ. - 2013. - Vol. 11, N 1. - P. 87-96.

95. Isolation, identification and antibiotic sensitivity of Haemophilus Paragallinarum isolates from commercial layer flocks affected by infectious coryza / M. Banani [et al.] // J. Pajouhesh-Va-Sazandegi. - 2007. - Vol. 19, N 4. - P.128-135.

96. Kato, K. Infectious coryza of chickens. 2. Identification of isolates / K. Kato, H. Tsubahara // Bull Nati. Inst. Anim. Health. - 1962. - Vol. 45. - P. 21-26.

97. Kato, K. Nature of hemagglutination inhibition antibody response and its relationship to protection in infectious coryza / K. Kato // Jpn. J. Vet. Sci. - 1970. -Vol. 32. - P. 263.

98. Kilian, M. Haemophilus / M. Kilian, E.L. Biberstein // Bergey's Manual of Systematic Bacteriology / ed. N. R. Kreig,J. G. Holt. - 1st ed. - Baltimore,1984. - P. 558-569.

99. Kumar, A. Studies on absolute requirement of NAD and reduced oxygen tension for growth of field isolates of Avibacterium paragallinarum of poultry origin / A. Kumar, M. Rawat, R. Verma // Indian J. Poultry Sci. - 2012. - Vol. 47, N 1. - P. 9092.

100. Kume, K. Clearance of the challenge organisms from the upper respiratory tract of chickens injected with an inactivated Haemophilus paragallinarum vaccine / K. Kume, A. Sawata, T. Nakai // Jpn. J. Vet. Sci. - 1984. - Vol. 46. - P. 843-850.

101. Kume, K. Haemophilus infections in chickens. 1. Characterization of Haemophilus paragallinarum isolated from chickens affected with coryza / K. Kume, A. Sawata, Y. Nakase // Jpn. J. Vet. Sci. - 1978. - Vol. 40. - P. 65-73.

102. Kume, K. Haemophilus infections in chickens. 3. Immunogenicity of serotypes 1 and 2 strains of Haemophilus paragallinarum / K. Kume, A. Sawata, Y. Nakase // Jpn. J. Vet. Sci. - 1980. - Vol. 42. - P. 673-680.

103. Kume, K. Immunological relationship between Page's and Sawata's serotype strains of Haemophilus paragallinarum / K. Kume, A. Sawata, Y. Nakase // Amer. J. Vet. Res. - 1980. - Vol. 41. P. 757-760.

104. Kume, K. Immunologic properties of variants dissociated from serotype 1 Haemophilus paragallinarum strains / K. Kume, A. Sawata // Jpn. J. Vet. Sci. - 1984. -Vol. 46. - P. 49-56.

105. Kume, K. Relationship between protective activity and antigen structure of Haemophilus paragallinarum serotypes 1 and 2 / K. Kume, A. Sawata, Y. Nakase // Amer. J. Vet Res. - 1980. - Vol. 41. - P. 97-100.

106. Lau, A.F. Development of a clinically comprehensive database and a simple procedure for identification of molds from solid media by matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry / A.F. Lau, S.K. Drake, L.B. Calhoun // J. Clin. Microbiology. - 2013. - Vol. 51, N 3. - P.828-834.

107. Loss of the capsule increases the adherence activity but decreases the virulence of Avibacterium paragallinarum / Tzu-Yi Tu [et al.] // Avian Dis. - 2015. -Vol. 59, N 1. - P. 87-93.

108. Lublin, A. Efficacy of norfloxacin nicotinate treatment of broiler breeders against Haemophilus paragallinarum / A. Lublin [et al.] // Avian Dis. - 1993. - Vol. 37. - P. 673-679.

109. Matrix-Assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry: a fundamental shift in the routine practice of clinical microbiology / A.E. Clark [et al.] // Clin. Microbiology Rev. - 2013. - Vol. 26, N 3. - P. 547-603.

110. Matrix-assisted ultraviolet laser desorption of non-volatile compounds / M.I. Karas [et al.] // Intern. J. Mass Spectrometry and Ion Processes. - 1987. - Vol. 78. - P. 53-68.

111. Membrane vesicles released by Avibacterium paragallinarum contains putative virulence factors / M.O. Ramon Rocha [et al.] // FEMS Microbiology Lett. -2006. - Vol. 257, N 1. - P. 63-68.

112. Mohammed, H.O. Economic impact of Mycoplasma gallisepticum and M. synoviae in commercial layer flocks / H.O. Mohammed, T.E. Carpenter, R. Yamamoto // Avian Dis. - 1987. - Vol. 31. - P. 477-482.

113. NAD (V-factor)- independent and typical Haemophilus paragallinarum infection in commercial chickens: a five year field study / R.F. Horner [et al.] // Avian Pathology. - 1995. - Vol. 24. - P. 453-463.

114. Narita, N. Studies on infectious coryza. The biochemical and serological characteristics of 17 Haemophilus strains isolated in Brazil / N. Narita, O. Hipólito, J.A. Bottino // Proc. Abstr. XVI World Poulry Congr. - 1978. - Vol. 5. - P. 689-692.

115. Noonkhokhetkong, T. Determination of Antimicrobial Susceptibility, Antimicrobial Resistance Genes and in vivo Testing of Antimicrobial Susceptibility of Avibacterium paragallinarum / T. Noonkhokhetkong, K. Chukiatsiri, J. Sasipreeyajan // Thai J. Vet.Med. - 2013. - Vol. 43, N 4. - P. 525-531.

116. Occurrence of keratoconjunctivitis apparently caused by Mycoplasma gallisepticum in layer chickens / T. Nunoya [et al.] // Vet. Pathology. - 1995. - Vol. 32.

- P. 11-18.

117. Occurrence of V-factor (NAD) independent strains of Haemophilus paragallinarum / M. Mouahid [et al.] // Vet. Microbiology. - 1992. - Vol. 31. - P. 363368.

118. Page, L.A. Haemophilus infections in chickens. I. Characteristics of 12 Haemophilus isolates recovered from diseased chickens / L.A. Page // Amer. J. Vet. Res. - 1962. - Vol. 23. - P. 85-95.

119. Page, L.A. Haemophilus infections in chickens. IV Results of laboratory and field trials of formalinized bacterins for the prevention of disease caused by Haemophilus gallinarum / L.A. Page, A.S. Rosenwald, F.C. Price // Avian Dis. - 1963.

- Vol. 7. - P. 239-256.

120. Pages Mante, A. Efficacy of polyvalent inactivated oil vaccine against avian coryza / A. Pages Mante, L. Costa Quintana // Med. Vet. - 1986. - Vol. 3. - P. 27-36.

121. Pathogenicity and serovar-specific hemagglutinating antigens of Haemophilus paragallinarum serovar B strains / T. Yamaguchi [et al.] // Avian Dis. -

1990. - Vol. 34. - P. 964-968.

122. Performance standards for antimicrobial disc and dilution susceptibility tests for bacteria isolated from animals // Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). - 3 th ed. - 2008. - Vol. 22, N 6.

123. Production, characterization and protective effect of monoclonal antibodies to Haemophilus paragallinarum serotype A / M. Takagi [et al.] // Vet. Microbiology. -

1991. - Vol. 27. - P. 327-338.

124. Protection conferred by bivalent and trivalent infectious coryza bacterins against prevalent serovars of Avibacterium (Haemophilus) paragallinarum in Mexico / R.P. Fernandez [et al.] // Avian Dis. - 2005. - Vol. 49. - P. 585-587.

125. Protective effect of oral administration of killed Haemophilus paragallinarum serotype A on chickens / T. Nakamura [et al.] // Avian Dis. - 1994. -Vol. 38. - P. 289-292.

126. Purification of hemagglutinin from Haemophilus paragallinarum using monoclonal antibody / M. Takagi [et al.] // Vet. Microbiology. - 1993. - Vol. 34. - P. 191-197.

127. Raie, N. Preliminary evaluation of antigens for use in a newly developed ELISA for detection of antibodies to Haemophilus paragallinarum in chickens / N. Raie [et al.] // Proc. 42nd West Poultry Dis. Conf. - Davis, California, 1993. - P. 59.

128. Rajurkar, G. Antimicrobial sensitivity pattern of Haemophillus paragallinarum isolated from suspected cases of infectious coryza in poultry / G. Rajurkar, A. Roy, M.M. Yadav // Vet. World. - 2010. - Vol. 3, N 4. - P.177-181.

129. Rapid and sensitive detection of Avibacterium paragallinarum in the presence of other bacteria using a 5' Taq nuclease assay: a new tool for diagnosing infectious coryza / B.G Corney [et al.] // Avian Pathology. - 2008. - Vol. 37, N 6. - P. 599-604.

130. Reece, R.L. The resistance to antimicrobial agents of bacteria isolated from pathological conditions of birds in Victoria, 1978 to 1983 / R.L. Reece, P.J. Coloe // Austral. Vet. J. - 1985. - Vol. 62. - P. 379-381.

131. Reid, G.G. Comparison of adjuvants for an inactivated infectious coryza vaccine / G.G. Reid, P.J. Blackall // Avian Dis. - 1987. - Vol. 31. - P. 59-63.

132. Rimler, R.B. Infectious coryza: cross-protection studies, using seven strains of Haemophilus gallinarum / R.B. Rimler, R.B. Davis, R.K. Page // Amer. J. Vet. Res. - 1977. - Vol. 38. - P. 1587-1589.

133. Rimler, R.B. Infectious coryza: In vivo growth of Haemophilus gallinarum as a determinant for cross protection / R.B. Rimler, R.B. Davis // Amer. J. Vet. Res. -1977. - Vol. 38. - P. 1591-1593.

134. Rimler, R. B. Studies of the pathogenic avian haemophili / R.B. Rimler // Avian Dis. - 1979. - Vol. 23. - P.1006-1018.

135. Routine identification of medical fungi by the new Vitek MS matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight system with a new time-effective strategy / X. Iriart [et al.] // J. Clin. Microbiology. - 2012. - Vol. 50, N 6. - P. 2107-2110.

136. Sakamoto, R. Development of a Multiplex PCR and PCR-RFLP method for serotyping of Avibacterium paragallinarum / R. Sakamoto, Y. Kino, M. Sakaguchi // J. Vet. Med. Sci. - 2012. - Vol. 74, N 2. - P. 271-273.

137. Sandoval, V.E. Complicated infectious coryza cases in Argentina / V.E. Sandoval, H.R. Terzolo, P.J. Blackall // Avian Dis. - 1994. - Vol. 38. - P. 672-678.

138. Sandrin, T.R. MALDI TOF MS profiling of bacteria at the strain level: a review / T.R. Sandrin, J.E. Goldstein, S. Schumaker // Mass Spectrom. Rev. - 2013. -Vol. 32, N 3. - P. 188-217.

139. Sato, S. Application of the agar gel precipitation test to serologic studies of chickens inoculated with Haemophilus gallinarum / S. Sato, M. Shifrine // Avian Dis. -1965. - Vol. 9. - P. 591-598.

140. Sato, S. Serologic response of chickens to experimental infection with Hemophilus gallinarum, and their immunity to challenge / S. Sato, M. Shifrine // Poultry Sci. - 1964. - Vol. 43. - P. 1199-1204.

141. Sawata, A. Antigenic structure and relationship between serotypes 1 and 2 of Haemophilus paragallinarum / A. Sawata, K. Kume, Y. Nakase // Amer. J. Vet. Res. -1979. - Vol. 40. - P. 1450-1453.

142. Sawata, A. Biologic and serologic relationships between Page's and Sawata's serotypes of Haemophilus paragallinarum / A. Sawata, K. Kume, Y. Nakase // Amer. J. Vet. Res. - 1980. - Vol. 41. - P.1901-1904.

143. Sawata, A. Haemophilus infections in chickens. 2. Types of Haemophilus paragallinarum isolates from chickens with infectious coryza, in relation to Haemophilus gallinarum strain №221 / A. Sawata, K. Kume, Y. Nakase // Jpn. J. Vet. Sci. - 1978. - Vol. 40. - P. 645-652.

144. Sawata, A. Hemagglutinin of Haemophilus paragallinarum serotype 2 organisms: occurrence and immunologic properties of hemagglutinin / A. Sawata, K. Kume, Y. Nakase // Amer. J. Vet Res. - 1982. - Vol. 43. - P. 1311-1314.

145. Sawata , A. Relationship between anticapsular antibody and protective activity of a capsular antigen of Haemophilus paragallinarum / A. Sawata, K. Kume, T. Nakai // Jpn. J. Vet. Sci. - 1984. - Vol. 46. - P. 475-486.

146. Sawata, A. Relationships between virulence and morphological or serological properties of variants dissociated from serotype 1 Haemophilus paragallinarum strains / A. Sawata, K. Kume // J. Clin. Microbiology. - 1983. - P. 4955.

147. Sawata , A. Serologic typing of Haemophilus paragallinarum based on serum bactericidal reactions / A. Sawata, K. Kume, T. Nakai // Jpn. J. Vet. Sci. - 1984. - Vol. 46. - P. 909-912.

148. Serotyping of Haemophilus paragallinarum Isolates from Mexico by the Kume Hemagglutinin Scheme / V.E. Soriano [et al.] // Avian Dis. - 2001. - Vol. 45. -P. 680-683.

149. Serological classification of Japanese isolates of Haemophillus paragallinarum usingtwo serovarspecific monoclonal antibodies/ T. Yamaguchi [et al.] // Avian Dis. - 1990. - Vol. 34, N 2. - P. 364-368.

150. Serological classification of Haemophilus paragallinarum with a hemagglutinin system / K. Kume [et al.] // J. Clin. Microbiology. - 1983. - Vol. 17. - P. 958-964.

151. Schalm, O.W. Studies on infectious coryza of chickens with special reference to its etiology / O.W. Schalm, J.R. Beach // Poultry Sci. - 1936. - Vol. 15. -P. 473-482.

152. Spread of the highly virulent serovar C-3 strains of Avibacterium paragallinarum beyond Southern Africa / R.R. Bragg [et al.] // Proc. 15th World Vet. Poultry Congr. - Beijing China, 2007. - P. 255.

153. Successful identification of clinical dermatophyte and Neoscytalidium species by matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry / K. Alshawa [et al.] // J. Clin. Microbiology. - 2012. - Vol. 50, N 7. - P. 2277-2281.

154. Survey of infectious coryza of chickens in Indonesia / M. Takagi [et al.] // J. Vet. Med. Sci. - 1991. - Vol. 53. - P. 637-642.

155. Thenmozhi, V. Isolation, identification and antibiogram pattern of Avibacterium paragallinarum from Japanese quails / V. Thenmozhi, S. Malmarugan // Tamil Nadu J. Vet. Animal Sci. - 2013. - Vol. 9, N 4. - P. 253-258.

156. The effect of sodium chloride and NADH on the growth of six strains of Haemophilus species pathogenic to chickens / R.B. Rimler [et al.] // J. Gen. Microbiology. - 1977. - Vol. 98. - P. 349-354.

157. The presence of nicotinamide adenine dinucleotide-independent Haemophilus paragallinarum in Mexico / A.J. Garcia [et al.]// Avian Dis. - 2004. - Vol. 48. - P. 425-429.

158. Thenmozhi, V. Isolation, identification and antibiogram pattern ofavibacterium paragallinarum from Japanese quails / V. Thenmozhi, S. Malmarugan // Tamil Nadu J. Vet. Animal Sci. - 2013. - Vol. 9, N 4. - P. 253-258.

159. Tongaonkar, S. Characterization of Indian isolates of Haemophilus paragallinarum / S. Tongaonkar, S. Deshmukh, P.J. Blackall // Proc. 51st Western Poultry Dis. Conf. - Peurto Vallajarta, Mexico, 2002. - P. 58.

160. Typing of Haemophillus paragallinarum strains by using enterobacterial repetitive intergenic consensus - based polymerase chain reaction / V.E. Soriano [et al.] // Avian Dis. - 2004. - Vol. 48, N 4. - P. 890-895.

161. Vargas, E.S. Haemophillus paragallinarum: etiology of infectious coryza / E.S. Vargas, H.R. Terzolo // Veterinaria México. - 2004. -Vol. 35, N 3. - P. 245-259.

162. Virulence characterization of Avibacterium paragallinarum isolates from Uganda / D.K. Byarugaba [et al.] // Avian Pathology. - 2007. - Vol. 36, N 1. - P. 3542.

163. Virulence of the nine serovar reference strains of Haemophilus paragallinarum / V.E. Soriano [et al.] //Avian Dis. - 2004. - Vol. 48, N 4. - P. 886-889.

164. Virulence of South African isolates of Haemophilus paragallinarum / M. Taole [et al.] // Onderstepoort J. Vet. Res. - 2002. - Vol. 69. - P. 189-196.

165. Wichmann, R.W. The cultivation of Haemophilus gallinarum in tissue culture and the use of these cultures in the preparation of a bacterin for the prevention of infectious coryza / R.W. Wichmann, A.C. Wichmann // Western Poultry Dis. Conf. -1983. - Vol. 32. - P. 7-10.

166. Yamaguchi, T. Hemagglutinating activity and immunological properties of Haemophilus paragallinarum field isolates in Japan / T. Yamaguchi, Y. Iritani, Y. Hayashi // Avian Dis. - 1989. - Vol. 33. - P. 511-515.

167. Yamaguchi, T. Latex Agglutination test for measurement of type-specific antybody to Haemophilus paragallinarum in chiekens / T. Yamaguchi, S. Iwaki, Y. Iritani // Avian Dis. - 1981. - Vol. 25. - P. 988-995.

168. Yamamoto, R. Antibody response in chickens to infection with Haemophilus gallinarum / R. Yamamoto, D.T. Somersett // Avian Dis. - 1964. Vol. 8. - P. 441-453.

169. Yamamoto, R. Infectious coryza / R. Yamamoto // Diseases of Poultry. - 7th ed. - Iowa, 1978. - P. 225-232.

170. Yamamoto, R. Infectious coryza / R. Yamamoto // Diseases of Poultry. -9th ed. / M. S. Hofstad [et al.]. - Ames, 1991. - P. 186-195.

171. Yamamoto, K. Myplabin® (miporamicin), a new macrolide antibiotic. 2. Clinical effects of Myplabin® premix against respiratory mycoplasmis and infectiouse coryxa in chickens / K. Yamamoto [et al.] // Proc. 18th World's Poultry Congr. -Nagoya, Japan, 988. - P. 1256-1258.

172. Yoshimura, M. The effectiveness of immunization to Newcastle disease, avian infectious bronchitis, and avian infectious coryza with inactivated combined vaccines / M. Yoshimura [et al.] // Kitasato Arch. Exp Med. - 1972. - Vol. 45. - P. 165179.

173. Zaini, M.Z. Serotyping of Haemophilus paragallinarum in Malaysia / M.Z. Zaini, Y. Iritani // J. Vet. Med. Sci. - 1992. - Vol. 54. - P. 363-365.

174. Zinnemann K. Haemophilus / K. Zinnemann, E.L. Biberstein // Bergey's Manual of Determinative Bacteriology. - 8th ed. - Baltimore, Md., 1974. - P. 364-370.

7 ПРИЛОЖЕНИЯ